CN207123536U - 一种快速定量检测脂蛋白相关磷脂酶a2的化学发光免疫试剂盒 - Google Patents
一种快速定量检测脂蛋白相关磷脂酶a2的化学发光免疫试剂盒 Download PDFInfo
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Abstract
本实用新型涉及一种快速定量检测脂蛋白相关磷脂酶A2的化学发光免疫试剂盒，试剂盒包括检测卡、发光启动试剂和化学发光免疫分析仪，检测卡包括上样垫、化学发光结合垫、具有检测线和质控线的承载膜、吸样垫、底板以及滤血膜，化学发光结合垫包括结合垫本体和涂覆在结合垫本体上的化学发光试剂标记抗体涂层，化学发光试剂标记抗体涂层中的抗体为脂蛋白相关磷脂酶A2的抗体，检测线为能够与脂蛋白相关磷脂酶A2的抗体特异性结合的配对抗体或抗原形成的涂层，本实用新型提供高灵敏度Lp‑PLA2化学发光免疫层析定量检测试剂盒，结合了免疫层析的快速检测和化学发光法高灵敏度的优点，具有灵敏度高、特异性强、稳定性好、操作简便及成本低廉等显著优点,大大提高了诊断效率。
Description
技术领域
本实用新型涉及生物技术诊断领域，具体涉及一种快速定量检测脂蛋白相关磷脂酶A2的化学发光免疫试剂盒。
背景技术
心脑血管疾病一直被公认为是危害人类健康的最大杀手之一，也是全球范围内造成死亡的最主要原因。心脑血管疾病的病理基础是动脉粥样硬化。近些年的研究表明，炎症反应在动脉粥样硬化的发生、发展过程中起着至关重要的作用，炎症反应与动脉粥样硬化息息相关。多种危险因素导致内皮功能紊乱是炎症的启动因子，而泡沫细胞形成的关键环节是脂质氧化，尤其是LDL 的氧化修饰，而OX-LDL诱导产生的各种细胞因子、炎症介质、生物酶、受体功能紊乱是导致炎症进一步加重发生的直接原因，对动脉粥样硬化炎症的认识促使我们去寻找潜在的炎症标志物，如今许多的炎症标志物已被我们发现，如 C 反应蛋白（CRP），白介素-6（IL-6），肿瘤坏死因子α（TNF-α）等。循环系统中的多种炎症标志物可能给冠心病的诊断提供重要的信息，也能够为冠脉事件风险的评估及冠心病的治疗提供更多的帮助。最近发现的炎症标志物脂蛋白相关磷脂酶A2（Lp-PLA2），又称血小板活化因子乙酰水解酶（PAF-AH），属于Ca2+离子依赖性磷脂酶 A2超家族，主要由单核细胞、巨噬细胞、T淋巴细胞分泌。循环中80%的Lp-PLA2主要与带负电的、小而密的 LDL 结合，当循环中的 LDL-Lp-PLA2复合物进入血管内膜，在内膜上 LDL 被氧化，而 Lp-PLA2能够水解 LDL 上的卵磷脂氧化卵磷脂，生成溶血卵磷脂和氧化型游离脂肪酸（lysophosphatidylchoine,Lyso-PCand oxidized free fatty acids,ox-FFA），这两者都为促炎介质，能够聚集及激活单核细胞、淋巴细胞，诱导内皮细胞的凋亡，削弱坏死细胞的清除能力，能够促进动脉粥样硬化斑块的发展、脂质核心的坏死、斑块的不稳定，上述作用体现出了 Lp-PLA2明显的促炎及促细胞凋亡的作用，即起到了 LDL 致动脉粥样硬化及粥样斑块破裂的催化剂作用。国外4个较大的前瞻性研究发现 LP-PLA2水平与将来患冠心病的风险有着明显的独立相关性。然而由于炎症标志物较多，而且炎症标志物通常特异性不高且变异性较大，因此在运用到临床检测之前，确定任何检测物的生物学变异是一个关键点，若其稳定性好、特异性高、持续性强则是一个较好的指标。国外研究表明Lp-PLA2则具备上述的特点，其相比于其他的炎症标志物如有着较高的特异性以及较小的变异性，稳定性较好，可重复性高，是一个特异、可靠、稳定的炎症标志物。通过检测血液中的Lp-PLA2,可以有效的了解动脉粥样硬化斑块的炎症程度及其稳定性，可以预警心肌梗死和脑血栓的发生，对预防心脑血管突发事件具有相当重要的意义。
目前，检测Lp-PLA2的方法主要有酶联免疫法、胶乳免疫比浊法、胶体金法和免疫荧光法等。ELISA法存在灵敏度低、线性范围窄、不易实现全自动化等缺陷；胶乳增强免疫比浊法存在检测线性范围窄、阳性率低等缺点；而胶体金法也存在灵敏度弱、无法准确定量的缺陷，从而限制了推广使用，无法广泛地应用于临床诊断和科研工作。
此外，现有技术中的试剂盒的检测卡通常由上样垫、结合垫、具有检测线和质控线的承载膜及吸样垫组成，该种检测卡只适于血清样品，而血浆和全血样品不能来检测，必须经离心处理后方能检测，如此限制了试剂盒在家庭、养老院、条件简陋的社区卫生所等场合的应用。
发明内容
本实用新型所要解决的技术问题是提供一种快速定量检测脂蛋白相关磷脂酶A2的化学发光免疫试剂盒。
为解决以上技术问题，本实用新型采用如下技术方案：
一种快速定量检测脂蛋白相关磷脂酶A2的化学发光免疫试剂盒，试剂盒包括检测卡、发光启动试剂和化学发光免疫分析仪，检测卡包括上样垫、化学发光结合垫、具有检测线和质控线的承载膜、吸样垫、底板以及滤血膜，化学发光结合垫包括结合垫本体和涂覆在结合垫本体上的化学发光试剂标记抗体涂层，化学发光试剂标记抗体涂层中的抗体为脂蛋白相关磷脂酶A2的抗体，检测线为能够与脂蛋白相关磷脂酶A2的抗体特异性结合的配对抗体或抗原形成的涂层。
根据本实用新型的一个优选方面，滤血膜覆设在上样垫上，上样垫、化学发光结合垫、承载膜及吸样垫依次相互交错粘贴在底板上。
根据本实用新型的又一优选方面，检测卡还包括助推垫，滤血膜覆设在上样垫上，上样垫、化学发光结合垫、助推垫、承载膜及吸样垫依次相互交错粘贴在底板上。
优选地，助推垫的材质为玻璃纤维膜或无纺布。
优选地，检测线、质控线相互平行，检测线位于承载膜的靠近化学发光结合垫的一侧,质控线位于承载膜的靠近吸样垫的一侧。
优选地，脂蛋白相关磷脂酶A2的抗体为单克隆抗体。
优选地，质控线通过包被包括但不限于羊抗鼠IgG、羊抗鸡IGY或羊抗兔IgG等形成。
优选地，承载膜为硝酸纤维素膜且为孔径5～12um的多孔样结构膜。
优选地，上样垫、结合垫本体的材质分别为玻璃纤维膜或无纺布，吸样垫的材质为吸水滤纸。
优选地，本实用新型的化学发光免疫分析采用吖啶酯/H2O2系统(Acridiniumester/ H2O2系统)，化学发光试剂标记抗体涂层为吖啶酯标记抗体涂层。发光启动试剂对应为HNO3+ H2O2 和NaOH。
化学发光免疫分析技术和免疫层析检测技术是已知的。本实用新型所述的化学发光试剂标记抗体可采用本领域熟知的方法制备。
由于以上技术方案的实施，本实用新型与现有技术相比具有如下优点：本实用新型的化学发光免疫试剂盒，提供了一种高灵敏度的Lp-PLA2免疫层析定量检测卡。结合了免疫层析的快速检测和化学发光法高灵敏度的优点，具有准确度高、特异性强、稳定性好、操作简便及成本低廉等显著优点,大大提高了诊断效率。
进一步地，本实用新型检测卡将原本只能应用于医院检验科的试剂盒，经过技术创新，通过增加滤血膜，使其可以方便、简易、准确的应用于Lp-PLA2的检测，适用于家庭、养老院、条件简陋的社区卫生所，其使用方法也仅是由病人或家属针刺一滴血来实现对心肌梗死和脑血栓的监测预防，减轻去医院挂号、排队、化验、取报告等繁琐过程，减轻公共医疗机构的压力，更有益于患者的日常治疗。
进一步地，本实用新型在结构上增加了助推垫，可以有效的去除背景干扰，从而进一步提高诊断灵敏度和准确度，此外助推垫还有助于加快检测样品流动，提高检测效率，缩短检测时间。
附图说明
图1为根据本实用新型的检测卡的结构示意图；
其中：1、上样垫；2、化学发光结合垫；20、结合垫本体；21、化学发光试剂标记抗体涂层；3、承载膜；4、吸样垫；5、底板；6、滤血膜；7、助推垫；T1、检测线；C、质控线。
具体实施方式
如图1所示，一种快速定量检测脂蛋白相关磷脂酶A2的化学发光免疫试剂盒，试剂盒包括检测卡、发光启动试剂和化学发光免疫分析仪，检测卡包括上样垫1、化学发光结合垫2、具有检测线和质控线C的承载膜3、吸样垫4、底板5、滤血膜6以及助推垫7，滤血膜6覆设在上样垫1上，上样垫1、化学发光结合垫2、助推垫7、承载膜3及吸样垫4依次相互交错粘贴在底板5上。助推垫7的材质为玻璃纤维膜或无纺布。承载膜3为硝酸纤维素膜且为孔径5～12um的多孔样结构膜。上样垫1、结合垫本体20的材质分别为玻璃纤维膜或无纺布，吸样垫4的材质为吸水滤纸。
进一步地，化学发光结合垫2包括结合垫本体20和涂覆在结合垫本体20上的化学发光试剂标记抗体涂层21，化学发光试剂标记抗体涂层21中的抗体为脂蛋白相关磷脂酶A2的抗体，检测线T1为能够与脂蛋白相关磷脂酶A2的抗体特异性结合的配对抗体或抗原形成的涂层。检测线T1、质控线C相互平行，检测线T1位于承载膜3的靠近化学发光结合垫2的一侧,质控线C位于承载膜3的靠近吸样垫4的一侧。脂蛋白相关磷脂酶A2的抗体为单克隆抗体。质控线C通过包被包括但不限于羊抗鼠IgG、羊抗鸡IGY或羊抗兔IgG等形成。化学发光试剂标记抗体涂层为吖啶酯标记抗体涂层。发光启动试剂对应为HNO3+ H2O2 和NaOH。
本实用新型的各部件是这样的组装到一起的，在底板5上顺次粘结上样垫1、化学发光结合垫2、助推垫7、承载膜3和吸样垫4，各部分依次与且仅与相邻部位相接触且部分重叠，其中滤血膜6覆设在的上样垫1上，然后切割成条，装入塑料卡内即形成所述检测卡。
本实用新型在使用时的检测方法如下：
（1）将检测试剂及样本平衡至室温，取出检测卡，平放；
（2）吸取血清、血浆或全血样本，加入洁净的离心管中，用样本稀释液(PBS)进行稀释，充分混匀；
（3）用移液枪吸取稀释后的样本加入到样本孔中，15～20分钟后，喷涂发光启动试剂，通过化学发光免疫分析仪，根据已预先设置在检测仪内的标准曲线对LP-PLA2的浓度进行计算并显示结果。
本实用新型检测原理如下：
当样本加入到上样垫1的样品孔后，样本中含有的LP-PLA2抗原与吖啶酯标记的LP-PLA2抗体结合，借助毛细管作用，所形成的抗体-抗原免疫复合物沿硝酸纤维素膜层析至检测线，然后与固化在检测线上的LP-PLA2抗体结合。未结合的免疫复合物则继续层析至质控线被羊抗鼠IgG抗体捕获。
通过化学发光免疫分析仪收集捕捉并检测质控线和检测线的光量子进行分析，然后根据已预先设置在检测仪内的标准曲线对LP-PLA2的浓度进行计算并显示结果。
综上，本实用新型的化学发光免疫试剂盒，结合了免疫层析的快速检测和化学发光法高灵敏度的优点，具有准确度高、特异性强、稳定性好、操作简便及成本低廉等显著优点,大大提高了诊断效率。
本实用新型检测卡将原本只能应用于医院检验科的试剂盒，经过技术创新，通过增加滤血膜，使其可以方便、简易、准确的应用于Lp-PLA2的检测，适用于家庭、养老院、条件简陋的社区卫生所，其使用方法也仅是由病人或家属针刺一滴血来实现对心肌梗死和脑血栓的监测预防，减轻去医院挂号、排队、化验、取报告等繁琐过程，减轻公共医疗机构的压力，更有益于患者的日常治疗。
进一步地，本实用新型在结构上增加了助推垫，可以有效的去除背景干扰，从而进一步提高诊断灵敏度和准确度，此外助推垫还有助于加快检测样品流动，提高检测效率，缩短检测时间。
进一步地，吖啶酯试剂（Acridinium C2 NSH Ester）用于标记抗体，优点主要有：①背景发光低，信噪比高；②发光反应干扰因素少，化学反应简单、快速、无须催化剂；③光释放快速集中、发光效率高、发光强度大；④易于与蛋白质联结且联结后光子产率不减少；⑤标记物稳定，试剂有效期大大延长。
以上对本实用新型做了详尽的描述，其目的在于让熟悉此领域技术的人士能够了解本实用新型的内容并加以实施，并不能以此限制本实用新型的保护范围，凡根据本实用新型的精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本实用新型的保护范围内。
Claims (10)
1.一种快速定量检测脂蛋白相关磷脂酶A2的化学发光免疫试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括检测卡、发光启动试剂和化学发光免疫分析仪，所述检测卡包括上样垫（1）、化学发光结合垫（2）、具有检测线和质控线（C）的承载膜（3）、吸样垫（4）、底板（5）以及滤血膜（6），所述化学发光结合垫（2）包括结合垫本体（20）和涂覆在所述结合垫本体（20）上的化学发光试剂标记抗体涂层（21），所述化学发光试剂标记抗体涂层（21）中的抗体为所述脂蛋白相关磷脂酶A2的抗体， 所述检测线（T1）为能够与所述脂蛋白相关磷脂酶A2的抗体特异性结合的配对抗体或抗原形成的涂层。
2.根据权利要求1所述的化学发光免疫试剂盒，其特征在于：所述滤血膜（6）覆设在所述的上样垫（1）上，所述上样垫（1）、化学发光结合垫（2）、承载膜（3）及吸样垫（4）依次相互交错粘贴在底板（5）上。
3.根据权利要求1所述的化学发光免疫试剂盒，其特征在于：所述检测卡还包括助推垫（7），所述滤血膜（6）覆设在所述的上样垫（1）上，上样垫（1）、化学发光结合垫（2）、助推垫（7）、承载膜（3）及吸样垫（4）依次相互交错粘贴在所述底板（5）上。
4.根据权利要求3所述的化学发光免疫试剂盒，其特征在于：所述助推垫（7）的材质为玻璃纤维膜或无纺布。
5.根据权利要求1所述的化学发光免疫试剂盒，其特征在于：所述检测线（T1）、质控线（C）相互平行，所述检测线（T1）位于所述承载膜（3）的靠近所述化学发光结合垫（2）的一侧,所述质控线（C）位于所述承载膜（3）的靠近所述吸样垫（4）的一侧。
6.根据权利要求1所述的化学发光免疫试剂盒，其特征在于：所述脂蛋白相关磷脂酶A2的抗体为单克隆抗体。
7.根据权利要求1所述的化学发光免疫试剂盒，其特征在于：所述质控线（C）通过包被羊抗鼠IgG、羊抗鸡IGY或羊抗兔IgG形成。
8.根据权利要求1所述的化学发光免疫试剂盒，其特征在于：所述承载膜（3）为硝酸纤维素膜且为孔径5～12um的多孔样结构膜。
9.根据权利要求1所述的化学发光免疫试剂盒，其特征在于：所述上样垫（1）、结合垫本体（20）的材质分别为玻璃纤维膜或无纺布，所述吸样垫（4）的材质为吸水滤纸。
10.根据权利要求1所述的化学发光免疫试剂盒，其特征在于：所述化学发光试剂标记抗体涂层为吖啶酯标记抗体涂层。
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