CN206725583U - 用于自身抗体联合检测的试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本实用新型提供了一种用于自身抗体联合检测的试剂盒，包括盒体及与所述盒体连接的盒盖，所述盒体内设有自身抗原膜条、反应槽、酶结合物试剂瓶、样本稀释液试剂瓶、显色底物试剂瓶和浓缩洗涤液试剂瓶；所述自身抗原膜条上设有检测区和质控区，所述检测区分别设有包被双链DNA抗原等26项抗原的26条检测线。本实用新型提供的自身抗体联合检测的试剂盒，可半定量检测人血清中的双链DNA等自身疾病相关抗原的特异性IgG抗体，达到自身疾病26项联合检测、检测快速且易于自动化的效果。
Description
技术领域
本实用新型涉及生物医学技术领域，具体涉及一种用于自身抗体联合检测的试剂盒。
背景技术
自身免疫性疾病(autoimmune diseases)是指机体对自身抗原发生免疫反应而导致自身组织损害所引起的疾病，自身免疫性疾病好发于女性和中老年人，其特点是起病缓慢，病程长且反复发作，疾病的中晚期对健康危害很大，早期诊断有助于自身免疫性疾病的临床控制。
许多自身抗体在相关疾病的发病前一段时间就可从血清中检测到。几十年来，免疫学研究已经发现多数自身免疫性疾病患者血清中存在着特异性自身抗体。目前，临床实验室经常使用的检测样本中自身抗体的方法包括间接免疫荧光分析法、酶联免疫吸附法或免疫印迹法，但各有其不足。其中，间接免疫荧光分析法因其是通过细胞核或细胞浆内形成的荧光结合物(称为“核型”)来推测可能的自身抗体种类，故不能对自身抗体进行具体客观的评价。酶联免疫吸附法一次试验只能检测单一指标，通量低，检测成本较高，在自身免疫性疾病的辅助诊断应用推广方面存在着局限性。虽然国内外临床检验领域已有少数用于多种自身抗体检测的免疫印迹产品，但尚无用于检测26种自身抗体的免疫印迹产品，且现有产品质控体系不完善，不便于操作者对显色结果进行快速、直观、准确的判断。
基于此，有必要设计一种用于多种自身抗体联合检测的试剂盒。
实用新型内容
为解决上述问题，本实用新型提供了一种用于自身抗体联合检测的试剂盒。所述自身抗体联合检测的试剂盒中的自身抗原膜条包被有26种自身抗原，可实现自身疾病26项联合检测，检测快速且易于自动化。
本实用新型提供了一种用于自身抗体联合检测的试剂盒，包括盒体及与所述盒体连接的盒盖，所述盒体内设有自身抗原膜条、反应槽、酶结合物试剂瓶、样本稀释液试剂瓶、显色底物试剂瓶和浓缩洗涤液试剂瓶；所述自身抗原膜条上设有检测区和质控区，所述检测区分别设有包被双链DNA抗原的检测线、包被U1核糖核蛋白抗原的检测线、包被小核糖体核蛋白抗原的检测线、包被干燥综合征抗原A 60的检测线、包被干燥综合征抗原A52的检测线、包被干燥综合征抗原B的检测线、包被DNA拓扑异构酶Ⅰ抗原的检测线、包被着丝点蛋白抗原的检测线、包被组氨酰-tRNA合成酶抗原的检测线、包被核糖体P蛋白抗原的检测线、包被组蛋白抗原的检测线、包被环瓜氨酸肽抗原的检测线、包被蛋白酶3抗原的检测线、包被髓过氧化物酶抗原的检测线、包被肾小球基底膜抗原的检测线、包被甲状腺过氧化物酶抗原的检测线、包被甲状腺球蛋白抗原的检测线、包被线粒体M2型抗原的检测线、包被肝肾微粒体抗原的检测线、包被肝细胞浆I型抗原的检测线、包被可溶性肝抗原/肝胰抗原的检测线、包被核膜糖蛋白210抗原的检测线、包被可溶性酸性核蛋白抗原的检测线、包被胰岛素抗原的检测线、包被胰岛细胞抗原的检测线和包被谷氨酸脱羧酶抗原的检测线。
其中，所述各检测线相互平行且各相邻检测线之间的间隔等宽。
其中，所述质控区设有包被抗人IgG抗体的质控线。
其中，沿所述自身抗原膜条长度方向依次设有包被抗人IgG抗体的质控线、包被双链DNA抗原的检测线、包被U1核糖核蛋白抗原的检测线、包被小核糖体核蛋白抗原的检测线、包被干燥综合征抗原A 60的检测线、包被干燥综合征抗原A52的检测线、包被干燥综合征抗原B的检测线、包被DNA拓扑异构酶Ⅰ抗原的检测线、包被着丝点蛋白抗原的检测线、包被组氨酰-tRNA合成酶抗原的检测线、包被核糖体P蛋白抗原的检测线、包被组蛋白抗原的检测线、包被环瓜氨酸肽抗原的检测线、包被蛋白酶3抗原的检测线、包被髓过氧化物酶抗原的检测线、包被肾小球基底膜抗原的检测线、包被甲状腺过氧化物酶抗原的检测线、包被甲状腺球蛋白抗原的检测线、包被线粒体M2型抗原的检测线、包被肝肾微粒体抗原的检测线、包被肝细胞浆I型抗原的检测线、包被可溶性肝抗原/肝胰抗原的检测线、包被核膜糖蛋白210抗原的检测线、包被可溶性酸性核蛋白抗原的检测线、包被胰岛素抗原的检测线、包被胰岛细胞抗原的检测线、包被谷氨酸脱羧酶抗原的检测线。
其中，所述包被抗人IgG抗体的质控线与各检测线相互平行，所述包被抗人IgG抗体的质控线与所述包被双链DNA抗原的检测线之间的间隔为2.0mm，所述各相邻检测线之间的间隔为2.0mm。
其中，所述自身抗原膜条的长度为80mm，宽度为2.0mm-5.0mm。
其中，所述自身抗原膜条为孔径大小为0.22μm的多孔硝酸纤维素膜。
其中，所述自身抗原膜条沿其长度方向设有相对设置的第一端和第二端，所述质控线与所述第一端的距离为11mm。
其中，所述酶结合物试剂瓶中装有碱性磷酸酶标记的抗人IgG抗体；所述样本稀释液试剂瓶中装有含质量浓度为3％的牛血清白蛋白的Tris缓冲液；所述显色底物试剂瓶中装有5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸盐与氯化硝基四氮唑蓝的混合物；所述浓缩洗涤液试剂瓶中装有20倍浓缩的Tris缓冲液。
其中，所述试剂盒在检测过程中的反应温度为37℃恒温。
本实用新型提供了一种自身抗体联合检测的试剂盒，可半定量检测人血清中的双链DNA、U1核糖核蛋白、小核糖体核蛋白、干燥综合征抗原A60、干燥综合征抗原A 52、干燥综合征抗原B、DNA拓扑异构酶Ⅰ、着丝点蛋白、组氨酰-tRNA合成酶、核糖体P蛋白、组蛋白、环瓜氨酸肽、蛋白酶3、髓过氧化物酶、肾小球基底膜、甲状腺过氧化物酶、甲状腺球蛋白、线粒体M2型、肝肾微粒体、肝细胞浆I型、可溶性肝抗原/肝胰、核膜糖蛋白210、可溶性酸性核蛋白、胰岛素、胰岛细胞及谷氨酸脱羧酶等自身疾病相关抗原的特异性IgG抗体，达到自身疾病26项联合检测、检测快速且易于自动化的效果。
附图说明
图1为本实用新型一实施方式提供的用于自身抗体联合检测的试剂盒的示意图；
图2为本实用新型一实施方式提供的自身抗原膜条的示意图。
具体实施方式
以下所述是本实用新型的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本实用新型原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也视为本实用新型的保护范围。
如图1所示，本实用新型提供了一种用于自身抗体联合检测的试剂盒，包括盒体1及与所述盒体连接的盒盖2，所述盒体1内设有自身抗原膜条11、反应槽12、酶结合物试剂瓶13、样本稀释液试剂瓶14、显色底物试剂瓶15和浓缩洗涤液试剂瓶16；所述自身抗原膜条上设有检测区和质控区，所述检测区分别设有包被双链DNA(dsDNA)抗原的检测线、包被U1核糖核蛋白(U1snRNP)抗原的检测线、包被小核糖体核蛋白(sm)抗原的检测线、包被干燥综合征抗原A60(SSA/RO 60kD)的检测线、包被干燥综合征抗原A52(SSA/RO 52kD)的检测线、包被干燥综合征抗原B(SSB/La)的检测线、包被DNA拓扑异构酶Ⅰ(Scl-70)抗原的检测线、包被着丝点蛋白(CENP)抗原的检测线、包被组氨酰-tRNA合成酶(Jo-1)抗原的检测线、包被核糖体P蛋白(Rib-P)抗原的检测线、包被组蛋白(His)抗原的检测线、包被环瓜氨酸肽(CCP)抗原的检测线、包被蛋白酶3(PR 3)抗原的检测线、包被髓过氧化物酶(MPO)抗原的检测线、包被肾小球基底膜(GBM)抗原的检测线、包被甲状腺过氧化物酶(TPO)抗原的检测线、包被甲状腺球蛋白(TG)抗原的检测线、包被线粒体M2型(AMA/M2)抗原的检测线、包被肝肾微粒体(LKM-1)抗原的检测线、包被肝细胞浆I型抗原(LC-1)的检测线、包被可溶性肝抗原/肝胰抗原(SLA/LP)的检测线、包被核膜糖蛋白210(gp210)抗原的检测线、包被可溶性酸性核蛋白(SP100)抗原的检测线、包被胰岛素(IAA)抗原的检测线、包被胰岛细胞(ICA)抗原的检测线、包被谷氨酸脱羧酶(GAD)抗原的检测线。
本实用新型实施方式中，所述试剂盒中，所述自身抗原膜条可以存储在一存储瓶中，所述自身抗原膜条以存储瓶的形式内设在所述试剂盒的盒体中。可选地，所述盒体内还设有用于固定所述试剂瓶、反应膜条和反应槽的固定件。所述固定件可以为纸板、塑料板或海绵。可选地，所述反应槽用于检测时放置自身抗原膜条，所述反应槽的结构为常规技术，在此不再赘述。
本实用新型实施方式中，所述各检测线相互平行且各相邻检测线之间的间隔等宽。可选地，所述质控区设有包被抗人IgG抗体的质控线。可选地，如图2所示，沿所述自身抗原膜条长度方向依次设有包被抗人IgG抗体的质控线0、包被双链DNA抗原的检测线1、包被U1核糖核蛋白抗原的检测线2、包被小核糖体核蛋白抗原的检测线3、包被干燥综合征抗原A60的检测线4、包被干燥综合征抗原A 52的检测线5、包被干燥综合征抗原B的检测线6、包被DNA拓扑异构酶Ⅰ抗原的检测线7、包被着丝点蛋白抗原的检测线8、包被组氨酰-tRNA合成酶抗原的检测线9、包被核糖体P蛋白抗原的检测线10、包被组蛋白抗原的检测线11、包被环瓜氨酸肽抗原的检测线12、包被蛋白酶3抗原的检测线13、包被髓过氧化物酶抗原的检测线14、包被肾小球基底膜抗原的检测线15、包被甲状腺过氧化物酶抗原的检测线16、包被甲状腺球蛋白抗原的检测线17、包被线粒体M2型抗原的检测线18、包被肝肾微粒体抗原的检测线19、包被肝细胞浆I型抗原的检测线20、包被可溶性肝抗原/肝胰抗原的检测线21、包被核膜糖蛋白210抗原的检测线22、包被可溶性酸性核蛋白抗原的检测线23、包被胰岛素抗原的检测线24、包被胰岛细胞抗原的检测线25和包被谷氨酸脱羧酶抗原的检测线26。可选地，所述包被抗人IgG抗体的质控线与各检测线相互平行，所述包被抗人IgG抗体的质控线与所述包被双链DNA抗原的检测线之间的间隔为2.0mm，所述各相邻检测线之间的间隔为2.0mm。可选地，所述质控线与所述检测线相互平行且与所述自身抗原膜条长度方向垂直。具体地，所述质控线与所述检测线的长度等于所述自身抗原膜条的宽度。可选地，所述质控线与所述各检测线的宽度相等。进一步可选地，所述质控线与所述各检测线的宽度均为0.5mm-0.7mm。具体地，所述质控线与所述各检测线的宽度均为0.6mm。可选地，所述自身抗原膜条沿其长度方向设有相对设置的第一端和第二端，所述质控线与所述第一端的距离为11mm。
本实用新型实施方式中，所述自身抗原膜条的长度为80mm，宽度为2.0mm-5.0mm。进一步可选地，所述自身抗原膜条的宽度为3mm。可选地，所述自身抗原膜条为孔径大小为0.22μm的多孔硝酸纤维素膜。
本实用新型实施方式中，所述酶结合物试剂瓶中装有碱性磷酸酶标记的抗人IgG抗体。
本实用新型实施方式中，所所述样本稀释液试剂瓶中装有含质量浓度为3％的牛血清白蛋白的Tris缓冲液。
本实用新型实施方式中，所述显色底物试剂瓶中装有5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸盐与氯化硝基四氮唑蓝的混合物，两者质量比为2:1。
本实用新型实施方式中，所述浓缩洗涤液试剂瓶中装有20倍浓缩的Tris缓冲液。
本实用新型实施方式中，所述试剂盒在检测过程中的反应温度为37℃恒温。本实用新型所述试剂盒在检测过程中的反应温度为37℃恒温，可加速抗原抗体的结合反应，试剂盒的检测过程更加迅速。
本实用新型试剂盒适用于人血清样本检测，优选新鲜的人血清，避免使用严重溶血的血清或脂血血清；所述人血清样本优选2-8℃保藏。使用所述人血清样本进行检测前，必须将所有的人血清样本平衡至室温(22-28℃)。
本实用新型试剂盒中自身抗原膜条的制备方法为按照常规的制备膜条的方法进行制备，其中，配制点样溶液中是将本实用新型的二十八种自身抗原配制成相应的包被浓度，然后将配制好的点样溶液以一定的排列次序固定在膜片上，形成独立的检测线，后续再进行干燥、贴膜、切膜、组装、切条等操作以制备得到自身抗原膜条。
本实用新型提供了一种自身抗体联合检测的试剂盒，可半定量检测人血清中的双链DNA、U1核糖核蛋白、小核糖体核蛋白、干燥综合征抗原A60、干燥综合征抗原A 52、干燥综合征抗原B、DNA拓扑异构酶Ⅰ、着丝点蛋白、组氨酰-tRNA合成酶、核糖体P蛋白、组蛋白、环瓜氨酸肽、蛋白酶3、髓过氧化物酶、肾小球基底膜、甲状腺过氧化物酶、甲状腺球蛋白、线粒体M2型、肝肾微粒体、肝细胞浆I型、可溶性肝抗原/肝胰、核膜糖蛋白210、可溶性酸性核蛋白、胰岛素、胰岛细胞及谷氨酸脱羧酶等自身疾病相关抗原的特异性IgG抗体，达到自身疾病26项联合检测、检测快速且易于自动化的效果。
本实用新型还提供了用于自身抗体联合检测的试剂盒的检测方法：
1、检验前准备：将用于自身抗体联合检测的试剂盒和人血清样本平衡至室温；将自身抗原膜条放入反应槽中；将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水，按1:20稀释成工作浓度洗涤液(如25ml浓缩洗涤液加入475ml蒸馏水或去离子水)。
2、检测步骤
1)样本孵育：将人血清样本按1:10稀释(10倍稀释)；具体如下：用移液器将900μl样本稀释液加入到反应槽中，再加入100μl人血清样本。将反应槽置于摇床或自动蛋白印迹仪上，37℃恒温孵育10min。
2)洗涤：倒掉或吸干反应槽内液体，加入2ml工作浓度洗涤液冲洗检测膜条1min，倒掉或吸干反应槽内液体，再加入2ml工作浓度洗涤液冲洗检测膜条，反复冲洗3次。
3)二抗孵育：在反应槽中加入1ml酶结合物，将反应槽置于摇床或自动蛋白印迹仪上，37℃恒温孵育10min。
4)重复步骤2。
5)显色反应：在反应槽中加入1ml显色底物，将反应槽置于摇床或自动印迹仪上，37℃恒温孵育10min。倒掉或吸干反应槽内液体，加入2ml蒸馏水冲洗检测膜条1min，倒掉或吸干反应槽内液体，终止显色底物反应。电吹风吹干或自然干燥检测膜条。
3、判读结果
将干燥的检测膜条放入免疫印迹分析仪膜条固定架中，借助免疫印迹分析仪对检测膜条进行判读，结果可判断划分为阴性、临界值、临界值的2倍值、4倍值、8倍值5个等级，输出为量化的数值。
以上所述实施例仅表达了本实用新型的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本实用新型专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本实用新型构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本实用新型的保护范围。因此，本实用新型专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (10)
1.一种用于自身抗体联合检测的试剂盒，其特征在于，包括盒体及与所述盒体连接的盒盖，所述盒体内设有自身抗原膜条、反应槽、酶结合物试剂瓶、样本稀释液试剂瓶、显色底物试剂瓶和浓缩洗涤液试剂瓶；所述自身抗原膜条上设有检测区和质控区，所述检测区分别设有包被双链DNA抗原的检测线、包被U1核糖核蛋白抗原的检测线、包被小核糖体核蛋白抗原的检测线、包被干燥综合征抗原A 60的检测线、包被干燥综合征抗原A 52的检测线、包被干燥综合征抗原B的检测线、包被DNA拓扑异构酶Ⅰ抗原的检测线、包被着丝点蛋白抗原的检测线、包被组氨酰-tRNA合成酶抗原的检测线、包被核糖体P蛋白抗原的检测线、包被组蛋白抗原的检测线、包被环瓜氨酸肽抗原的检测线、包被蛋白酶3抗原的检测线、包被髓过氧化物酶抗原的检测线、包被肾小球基底膜抗原的检测线、包被甲状腺过氧化物酶抗原的检测线、包被甲状腺球蛋白抗原的检测线、包被线粒体M2型抗原的检测线、包被肝肾微粒体抗原的检测线、包被肝细胞浆I型抗原的检测线、包被可溶性肝抗原/肝胰抗原的检测线、包被核膜糖蛋白210抗原的检测线、包被可溶性酸性核蛋白抗原的检测线、包被胰岛素抗原的检测线、包被胰岛细胞抗原的检测线和包被谷氨酸脱羧酶抗原的检测线。
2.如权利要求1所述的用于自身抗体联合检测的试剂盒，其特征在于，所述各检测线相互平行且各相邻检测线之间的间隔等宽。
3.如权利要求1所述的用于自身抗体联合检测的试剂盒，其特征在于，所述质控区设有包被抗人IgG抗体的质控线。
4.如权利要求3所述的用于自身抗体联合检测的试剂盒，其特征在于，沿所述自身抗原膜条长度方向依次设有包被抗人IgG抗体的质控线、包被双链DNA抗原的检测线、包被U1核糖核蛋白抗原的检测线、包被小核糖体核蛋白抗原的检测线、包被干燥综合征抗原A 60的检测线、包被干燥综合征抗原A52的检测线、包被干燥综合征抗原B的检测线、包被DNA拓扑异构酶Ⅰ抗原的检测线、包被着丝点蛋白抗原的检测线、包被组氨酰-tRNA合成酶抗原的检测线、包被核糖体P蛋白抗原的检测线、包被组蛋白抗原的检测线、包被环瓜氨酸肽抗原的检测线、包被蛋白酶3抗原的检测线、包被髓过氧化物酶抗原的检测线、包被肾小球基底膜抗原的检测线、包被甲状腺过氧化物酶抗原的检测线、包被甲状腺球蛋白抗原的检测线、包被线粒体M2型抗原的检测线、包被肝肾微粒体抗原的检测线、包被肝细胞浆I型抗原的检测线、包被可溶性肝抗原/肝胰抗原的检测线、包被核膜糖蛋白210抗原的检测线、包被可溶性酸性核蛋白抗原的检测线、包被胰岛素抗原的检测线、包被胰岛细胞抗原的检测线、包被谷氨酸脱羧酶抗原的检测线。
5.如权利要求4所述的用于自身抗体联合检测的试剂盒，其特征在于，所述包被抗人IgG抗体的质控线与各检测线相互平行，所述包被抗人IgG抗体的质控线与所述包被双链DNA抗原的检测线之间的间隔为2.0mm，所述各相邻检测线之间的间隔为2.0mm。
6.如权利要求1所述的用于自身抗体联合检测的试剂盒，其特征在于，所述自身抗原膜条的长度为80mm，宽度为2.0mm-5.0mm。
7.如权利要求1所述的用于自身抗体联合检测的试剂盒，其特征在于，所述自身抗原膜条为孔径大小为0.22μm的多孔硝酸纤维素膜。
8.如权利要求4所述的用于自身抗体联合检测的试剂盒，其特征在于，所述自身抗原膜条沿其长度方向设有相对设置的第一端和第二端，所述质控线与所述第一端的距离为11mm。
9.如权利要求1所述的用于自身抗体联合检测的试剂盒，其特征在于，所述酶结合物试剂瓶中装有碱性磷酸酶标记的抗人IgG抗体；所述样本稀释液试剂瓶中装有含质量浓度为3％的牛血清白蛋白的Tris缓冲液；所述显色底物试剂瓶中装有5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸盐与氯化硝基四氮唑蓝的混合物；所述浓缩洗涤液试剂瓶中装有20倍浓缩的Tris缓冲液。
10.如权利要求1所述的用于自身抗体联合检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒在检测过程中的反应温度为37℃恒温。
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|---|---|---|---|---|
| CN108828234A (zh) * | 2018-08-21 | 2018-11-16 | 江苏三联生物工程有限公司 | 一种用于自身免疫病标志物检测的蛋白芯片及其制备方法 |
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