CN206438118U

CN206438118U - 快速诊断鸡肉品质基因试剂盒

Info

Publication number: CN206438118U
Application number: CN201621385894.1U
Authority: CN
Inventors: 单艳菊; 束婧婷; 章明; 屠云洁; 姬改革; 龚建森; 张迪
Original assignee: Jiangsu Institute Poultry Sciences
Current assignee: Jiangsu Institute Poultry Sciences
Priority date: 2016-12-16
Filing date: 2016-12-16
Publication date: 2017-08-25
Anticipated expiration: 2026-12-16

Abstract

本实用新型公开了一种快速诊断鸡肉品质基因试剂盒，包括盒体和连接在盒体上的盒盖，盒体内设有隔板，隔板将盒体内部分隔成左、右两个空间，右部空间内分别架设上安装板a、上安装板b、下安装板a和下安装板b；上安装板a和上安装板b通过右部空间内壁上开设的插槽固定，插槽中嵌有安装件；上安装板a、下安装板a对应开通孔形成试管槽a，上安装板b和下安装板b上分别开设试管槽b，试管槽a和试管槽b内均嵌装试管，左部空间设有上下层叠的上衬垫和下衬垫，两衬垫上开设有容器槽，容器槽内装有试剂瓶。本实用新型在有限的空间内可容纳多种试剂，方便实验的操作，空间利用率高。

Description

快速诊断鸡肉品质基因试剂盒

技术领域

本实用新型涉及生物技术检测用具领域，尤其涉及一种快速诊断鸡肉品质基因试剂盒。

背景技术

随着生活水平的不断提高和消费观念的转变，人们对于鸡肉的质量和口味的要求越来越高，对优质鸡的需求日渐扩大。优质鸡主要强调的是肉质，而肌纤维是构成肌肉组织的基本单位，大量的研究表明肌纤维类型是直接影响肌肉品质的重要因素，慢肌纤维含量较多的肉品质相对较好，选育慢肌纤维比例高的肌纤维类型形状是优质鸡育种中的主要目标之一，从分子水平上鉴定影响肌纤维类型的基因或标记是目前鸡功能基因研究的热点之一，但前提是要找到与该形状紧密联系的标记，以及适用于此研究的试剂盒。

过氧化物体增殖物激活受体γ辅激活因子1-α(PGC-1α)对肌肉中的能量代谢产生着非常重要的作用，其在肌肉纤维细胞中表达丰富，慢肌纤维的表达要高于快肌纤维，研究表明，PGC-1α可能是调控肌纤维的关键因子并可以组合肌纤维转化过程中的多条信号通路，但关于PGC-1α基因的试剂盒却很少，并且常见的试剂盒结构都较为简单，空间利用率低，在有限的空间内不能盛放多种试剂，实验人员需要另行购买或配置所需试剂，从而影响实验效率。

实用新型内容

为了解决上述问题，本实用新型提供一种快速诊断鸡肉品质基因试剂盒来满足所有用户需求，该试剂盒结构简单、使用方便，检测过程不易受污染，诊断过程敏感性高、特异性强、耗时短，密封安全，方便运输。

本实用新型是通过以下技术方案实现的：一种快速诊断鸡肉品质基因试剂盒，包括盒体和连接在盒体上的盒盖，盒体内设有隔板，隔板将盒体内部分隔成左、右两个空间，右部空间内分别架设上安装板a、上安装板b、下安装板a和下安装板b；上安装板a和上安装板b通过右部空间内壁上开设的插槽固定，插槽中嵌有安装件；上安装板a、下安装板a对应开通孔形成试管槽a，上安装板b和下安装板b上分别开设试管槽b，试管槽a和试管槽b内均嵌装试管，左部空间设有上下层叠的上衬垫和下衬垫，两衬垫上开设有容器槽，容器槽内装有试剂瓶。

进一步地，PCR扩增引物为：

上游引物序列为：5’-GGAGCAATAAAGCGAAGAGC-3’，

下游引物序列为：5’-CTGTGCTCCCACACCTACCT-3’。

进一步地，LDR检测反应探针为：

A探针PGC-1α_modify序列：

5’-P-GTTCGTAGTCAGATATTTGAGAAGTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT-FAM-3’，

B探针PGC-1α_G序列：

5’-TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTCTGGTTTGGTCTGAGGAGGGTCATC-3’，

C探针PGC-1α_A序列：

5’-TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTCTGGTTTGGTCTGAGGAGGGTCATT-3’。

进一步地，试管包括含PGC-1α基因PCR扩增引物的试管、含LDR检测反应探针的试管、含Taq酶的试管、含DNA连接酶的试管、含DNA模板的试管和含Mg²⁺的试管。

进一步地，试剂瓶包括PCR缓冲液试剂瓶、含dNTP的试剂瓶、含Q-solution的试剂瓶和含去离子水的试剂瓶。

进一步地，上衬垫底部设有凸起，下衬垫顶部设有凹槽，凸起和凹槽相配合，实现贴合连接，保持两者的稳定。

进一步地，试管槽a和试管槽b的深度为试管高度的1/3-2/3。

进一步地，盒盖和盒体通过锁扣扣合。

进一步地，盒体上设有视窗，方便实验员观测盒体内部的情况。

进一步地，上衬垫和下衬垫上均设有扣手，方便两衬垫的取放。

本实用新型结构简单、使用方便，检测过程不易受污染，能有效防止试剂交叉引起的污染，特异性强、耗时短，密封安全，方便运输，在有限的空间内可以容纳多种试剂，方便实验的操作，本实用新型自带的含PCR扩增引物的试管、含LDR检测反应探针的试管、PCR缓冲液试剂瓶、含Taq酶的试管等设备使得实验人员能够快速诊断出不同个体肉鸡上有利于标记的基因以及适合育种的情况。

附图说明

图1为本实用新型的结构示意图；

图2为盒体和盒盖的结构示意图；

图3为安装板的结构示意图；

图4为上衬垫和下衬垫的结构示意图；

图中，1、盒体；2、盒盖；3、隔板；4-1、上安装板a；4-2、上安装板b；4-3、下安装板a；4-4、下安装板b；5-1、试管槽a；5-2、试管槽b；6、试管；7、含PGC-1α基因PCR扩增引物的试管；8、含LDR检测反应探针的试管；9、插槽；10、安装件；11、海绵垫；12、上衬垫；13、下衬垫；14、凸起；15、凹槽；16、容器槽；17、试剂瓶；18、含Taq酶的试管；19、含DNA连接酶的试管；20、含DNA模板的试管；21、含Mg²⁺的试管；22、PCR缓冲液试剂瓶；23、含dNTP的试剂瓶；24、含Q-solution的试剂瓶；25、含去离子水的试剂瓶；26、锁扣；27、视窗；28、扣手。

具体实施方式

下面结合附图对本实用新型做进一步的说明。

如图1-4所示的快速诊断鸡肉品质基因试剂盒，包括盒体1和连接在盒体1上的盒盖2，盒体1和盒盖2通过锁扣26扣合，盒盖2内侧设有海绵垫11，起保护试管和试剂瓶的作用，盒体上设有视窗27，透过视窗可以判断盒体1内的试管和试剂瓶有无损坏情况，盒体1内设有隔板3，隔板3将盒体1内部分隔成左、右两个空间，右部空间内分别架设上安装板a4-1、上安装板b4-2、下安装板a4-3和下安装板b4-4；上安装板a4-1和上安装板b4-2通过右部空间内壁上开设的插槽9固定，插槽9中嵌有安装件10；上安装板a4-1、下安装板a4-3对应开通孔形成试管槽a5-1，上安装板b4-2和下安装板b4-4分别开设试管槽b5-2，试管槽a5-1和试管槽b5-2内均嵌装试管6，试管槽a5-1和试管槽b5-2的深度为试管6高度的1/3-2/3；左部空间设有上下层叠的上衬垫12和下衬垫13，上衬垫12底部设有凸起14，下衬垫13顶部设有凹槽15，凸起14和凹槽15相配合，实现贴合连接，上衬垫12和下衬垫13上均设有扣手28，两衬垫上均开设有容器槽16，容器槽16内装有试剂瓶17。

安装件10使得下层试管距上层安装板有一定间距，保证下层试管不会因为上层安装板的挤压而破碎。

上衬垫12上开设的容器槽小于下衬垫13上开设的容器槽，由此可以将不同大小的试剂瓶分层排放，提高盒体的空间利用率，上衬垫12的底部可开设凹槽，与下衬垫13上的试剂瓶形成卡扣结构。

PCR扩增引物为：

上游引物序列为：5’-GGAGCAATAAAGCGAAGAGC-3’，

下游引物序列为：5’-CTGTGCTCCCACACCTACCT-3’；

含PCR扩增引物的试管包括含PCR扩增上游引物的试管和含PCR扩增下游引物的试管。

LDR检测反应探针为：

A探针PGC-1α_modify序列：

5’-P-GTTCGTAGTCAGATATTTGAGAAGTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT-FAM-3’，

B探针PGC-1α_G序列：

5’-TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTCTGGTTTGGTCTGAGGAGGGTCATC-3’，

C探针PGC-1α_A序列：

5’-TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTCTGGTTTGGTCTGAGGAGGGTCATT-3’；

含LDR检测反应探针的试管为含三种探针混合物的试管。

如图3所示，上安装板a4-1和下安装板a4-3上的试管槽a5-1内插装含PGC-1α基因PCR扩增引物的试管7和含LDR检测反应探针的试管8,上安装板b4-2的试管槽b5-2内插装含Taq酶的试管18和含DNA连接酶的试管19，下安装板b4-4的试管槽b5-2内插装含DNA模板的试管20和含Mg²⁺的试管21。

如图4所示，试剂瓶17可为PCR缓冲液试剂瓶22、含dNTP的试剂瓶23、含Q-solution的试剂瓶24和含去离子水的试剂瓶25。

由于本实用新型中的安装板、上衬垫12或下衬垫13均可活动的放置在盒体内，根据不同试剂的保存条件，可将安装板从盒体1内取出，或将上衬垫12或下衬垫13取出，放置在对应的保存条件下，由此，增加了本实用新型的实用性。

利用本实用新型诊断鸡肉品质的操作步骤如下：

1.DNA提取：

对随机选取的鸡进行采血，放入含有抗凝剂的EP管中，然后进行DNA提取；

2.PCR扩增：

PCR扩增包含PGC-1α基因外显子G646A突变位点的核苷酸序列，长度为210bp，在该序列的第87bp处有一个G87-A87的碱基突变，所用的引物信息即为上述内容中的上游引物和下游引物。

PCR扩增SNP位点所在片段，PCR扩增体系为：50ng/μL DNA模板1μL、20mMdNTP2μL、100mM Mg2⁺0.6μL、10×PCR反应缓冲液2μL、10μM上下游引物各0.4μL、5U/μLTaq酶0.2μL、5×Q-solution 4μL、加ddH2O至总体积20μL。

PCR扩增反应程序为：94℃预变性5min、94℃变性30s、56℃退火30s、72℃延伸30s、35个循环，最后72℃延伸8min。

用2％琼脂糖凝胶检测PCR产物，判定PCR扩增片段是否正确。

3.LDR分型：

剩余PCR产物用于LDR分型，LDR三根探针信息同上述内容中的A、B、C探针。

LDR体系为：PCR产物1μL、10×PCR反应缓冲液1μL、0.5μM探针混合物1μL、40U/μLDNA连接酶0.05μL、加ddH2O至总体积10μL。

LDR检测反应程序为：94℃预变性2min、94℃变性30s、60℃退火2mi，30个循环。

最后，对试验鸡的基因进行分析，并判断何种基因更利于标记和育种。

由于在上述实验中，需要多种试剂，且实验次数较多，需要大量的实验，因此需要的每种试剂也较多，每种试剂的试管或试剂瓶至少为2个，可为不同体积，根据需要取用,能有效防止试剂交叉引起的污染，可以保证在某种试剂污染后，不影响后续实验的进行。

以上所述实施方式仅表达了本实用新型的一种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本实用新型专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本实用新型构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本实用新型的保护范围。

Claims

1.一种快速诊断鸡肉品质基因试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括盒体(1)和连接在盒体上的盒盖(2)，盒体内设有隔板(3)，隔板将盒体内部分隔成左、右两个空间，右部空间内分别架设上安装板a(4-1)、上安装板b(4-2)、下安装板a(4-3)和下安装板b(4-4)；上安装板a和上安装板b通过右部空间内壁上开设的插槽(9)固定，插槽中嵌有安装件(10)；上安装板a、下安装板a对应开通孔形成试管槽a(5-1)，上安装板b和下安装板b上分别开设试管槽b(5-2)，试管槽a和试管槽b内均嵌装试管(6)，左部空间设有上下层叠的上衬垫(12)和下衬垫(13)，两衬垫上开设有容器槽(16)，容器槽内装有试剂瓶(17)。

2.根据权利要求1所述的快速诊断鸡肉品质基因试剂盒，其特征在于，试管包括含PGC-1α基因PCR扩增引物的试管(7)、含LDR检测反应探针的试管(8)、含Taq酶的试管(18)、含DNA连接酶的试管(19)、含DNA模板的试管(20)和含Mg²⁺的试管(21)。

3.根据权利要求1所述的快速诊断鸡肉品质基因试剂盒，其特征在于，试剂瓶包括PCR缓冲液试剂瓶(22)、含dNTP的试剂瓶(23)、含Q-solution的试剂瓶(24)和含去离子水的试剂瓶(25)。

4.根据权利要求1所述的快速诊断鸡肉品质基因试剂盒，其特征在于，上衬垫底部设有凸起(14)，下衬垫顶部设有凹槽(15)，凸起和凹槽相配合，实现贴合连接。

5.根据权利要求1所述的快速诊断鸡肉品质基因试剂盒，其特征在于，试管槽a和试管槽b的深度为试管高度的1/3-2/3。

6.根据权利要求1所述的快速诊断鸡肉品质基因试剂盒，其特征在于，盒盖和盒体通过锁扣(26)扣合。

7.根据权利要求1所述的快速诊断鸡肉品质基因试剂盒，其特征在于，盒体上设有视窗(27)。

8.根据权利要求1所述的快速诊断鸡肉品质基因试剂盒，其特征在于，上衬垫和下衬垫上均设有扣手(28)。