CN204330772U - 一种心肌梗塞胶体金检测试剂盒 - Google Patents

Abstract

本实用新型涉及一种心肌梗塞胶体金检测试剂盒，其包括检测试纸、比色卡和/或胶体金定量读数仪，检测试纸包括上样垫、胶体金结合垫、具有检测线和质控线的层析膜及吸样垫，特别是，所述检测试纸能够同时检测人髓过氧化物酶、心肌型脂肪酸结合蛋白和脂蛋白相关磷脂酶A2三种标志物，胶体金结合垫为标记有所述三种标志物的抗体的胶体金垫，层析膜的检测线有三条，这三条检测线相互分离且分别通过包被所述三种标志物的配对抗体形成，所述三种标志物的配对抗体分别能够与所述三种标志物的抗体特异性结合。本实用新型试剂盒能够快速、准确进行心肌梗塞早期预警及病情风险判断，操作简便、反应快速、适合现场检测、经济实用。

Description

一种心肌梗塞胶体金检测试剂盒

技术领域

本实用新型涉及一种心肌梗塞胶体金检测试剂盒。

背景技术

急性心肌梗塞(AMI)严重威胁人类健康，是全球范围内致死和致残的主要疾病之一，快速诊断早期急性心肌梗塞并及时治疗是降低病人死亡率的关键。对于无典型胸痛和心电图改变不明显的心肌梗死患者，仅依靠心电图、超声心动图和心脏核磁共振，难以准确诊断。因此，检测血清心肌标志物是诊断AMI的必要依据。

心肌标志物是指在血液中可测定出的一系列生物化学物质，它们具有心肌特异性，当心肌组织损伤时，可大量释放至循环血液中，通过检测其血浓度变化，可诊断心肌损伤的物质，因此可用作心肌损伤的筛查、诊断、评定预后和治疗效果的监测标志。临床实践中已陆续发现多种反映心肌组织损伤的标志物，包括反映心肌缺血损伤的标志物，如缺血修饰白蛋白、髓过氧化物酶等；心肌组织损伤坏死的确定标志物，如心肌肌钙蛋白等。心肌标志物为临床提供了方便，使鉴别诊断、诊断预后的能力大大提高。

急性心肌梗死发生在一瞬间，具有无特异性前兆症状的特点。心肌梗死的及时诊断通常是很困难的，特别是梗死前的心肌缺血阶段更是不易诊断。因此，在心肌发生缺血时就能高度表达的标志物才能作为急性心肌梗死的预警信号，使患者及时得到救助，避免心肌梗死的发生。近年来的临床研究资料提示心肌脂肪酸结合蛋白、髓过氧化酶等标志物变化与急性冠脉综合征患者的诊断和预后相关。它们是新一代早期预警心脏生物标示物。

髓过氧化物酶(MPO)是冠状动脉粥样硬化病灶不稳定和中性白细胞应激的标志物，也是早期预警信号。MPO是一种过氧化物酶，主要存在于嗜中性粒细胞或单核细胞的嗜天青颗粒中。炎症时激活的嗜中性粒细胞发生脱颗粒并释放髓过氧化物酶，它能导致冠状动脉粥样硬化病灶不稳定甚至是破裂，使血管内皮下胶原组织暴露，随之发生血小板粘附聚集和血栓形成，造成冠状动脉阻塞，发生急性冠状动脉综合症，甚至是严重的心肌不可逆缺血损伤。因此，髓过氧化物酶可以反映心血管局部激活的嗜中性粒细胞激活、浸润和脱颗粒这个急性心肌缺血或再灌注损伤的共同发病通路。大量临床研究资料表明，急性冠状动脉综合症的病人血清中髓过氧化物酶水平显著地升高，是预测ACS患者发生不良心血管事件的一个新的预测因子。MPO水平在没有发生心肌梗死和肌钙蛋白检测不到的心肌缺血的早期2小时之内就已经升高，可在无心肌坏死的情况下预测和预警发生心脏事件的危险患者，显示了MPO对胸痛患者进行危险分层的潜在作用。因此，血清髓过氧化物酶水平检测可以作为动态实时观测冠心病治疗和预后的预警信号。

心肌型脂肪酸结合蛋白(FABP3)是一种重要的细胞内脂肪酸结合蛋白的小分子蛋白质，大量地存在于心肌组织中，具有高度的心肌特异性。急性心肌缺血时心肌细胞膜通透性显著改变，细胞膜破裂的早期，心肌细胞内的心肌型脂肪酸结合蛋白漏出到细胞外液或血液循环中。FABP3可以早在胸痛发作后1-3小时在血液中被发现，6-8小时达到峰值而且血浆水平在24-30小时内恢复正常。有研究表明，胸痛发作3h以内FABP3的敏感性和阳性预测值显著高于LP-PLA2，对于早期排除AMI非常有利。FABP3作为心肌标志物早期诊断AMI的代表，能更早的预测心脏事件的相对危险。

脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)主要发生在AMI早期。脂蛋白相关磷脂酶A2是磷酸脂酶A2超家族中的非钙离子依赖型磷酸脂酶，最初发现其可以降解血小板活化因子，曾被称为血小板活化因子乙酰水解酶。Lp-PLA2经成熟的巨噬细胞和淋巴细胞合成和分泌，并受炎性介质的调节，主要与低密度脂蛋白LDL结合，能水解血小板活化因子使之失去活性，又能水解低密度脂蛋白上的氧化卵磷脂，生成促炎物质溶血卵磷脂和氧化游离脂肪酸，因此具有促炎症和促动脉粥样硬化的作用。众多研究显示，动脉粥样硬化斑块的炎症发展到严重程度，并将要或者已经出现血管内腔破裂时，Lp-PLA2将会被大量释放入使其血液内的水平会大幅提高，因此Lp-PLA2的血液浓度与粥样斑块的严重程度呈正相关性，而独立于疾病相关的任何其他危险因子，因而成为不可被取代的，直接监测疾病的演变过程和危险性的最佳的动态检测指标，尤其对于心肌梗塞的发生，具有相当关键意义的预警提示作用。

目前检测MPO、FABP3的方法主要有酶联免疫法、化学发光法、免疫比浊法、金标免疫法等。金标免疫法需要标本量少，简便快速，适合于AMI的快速检测，不受时间、地点的限制。不过目前上市的多为单一指标的胶体金试纸、试剂盒等，得到的数据单一、不全面，检测灵敏度和特异性都比较低，不能全面反映病患心梗早期的情况，容易出现误诊或漏诊。MPO可以预警心肌梗塞发生前3小时的风险，但其他炎症也可导致MPO指标的升高。FABP3仅能表示发生心肌梗塞后1-3小时的情况，不能在心肌梗塞发生前预警。

目前临床使用的检测试剂盒多为检测肌钙蛋白、肌酸激酶MB同工酶为主，而这些陈旧的指标出现在心肌梗塞发生后，只能显示已发生心梗，不能预警心肌梗塞。心电图虽然也可反映病人的病情，但在刚发生胸痛的病人中，虽然有已经开始了急性心梗的进程，却有半数以上的心电图表现为正常，从而造成很多病人因延误救治而死亡。

纵观已有产品和文献报道，它们均是针对单一指标进行控制，只能检测或预警心肌梗塞的某个阶段，而不能全面地、特异性地预警心肌梗塞的发生、发展全程。由于目前MPO、FABP3均以不同的产品形式在临床上应用，制作原理及操作程序不同，兼容性比较差，很难在短时间内同时、快速地检测出两者的结果，故极大的影响了对急性ACS患者进行心梗风险的合理综合判定。

发明内容

本实用新型所要解决的技术问题是提供一种全面地、特异性地预警心肌梗塞的发生、发展的胶体金检测试剂盒，该试剂盒能够快速、准确进行心肌梗塞早期预警及病情风险判断。

为解决以上技术问题，本实用新型采用如下技术方案：

一种心肌梗塞快速胶体金检测试剂盒，其包括检测试纸、比色卡和/或胶体金定量读数仪，检测试纸包括上样垫、胶体金结合垫、具有检测线和质控线的层析膜及吸样垫，特别是，所述检测试纸能够同时检测人髓过氧化物酶(MPO)、心肌型脂肪酸结合蛋白(FABP3)和脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)三种标志物，胶体金结合垫为标记有所述三种标志物的抗体的胶体金垫，层析膜的检测线有三条，这三条检测线相互分离且分别通过包被所述三种标志物的配对抗体形成，所述三种标志物的配对抗体分别能够与所述三种标志物的抗体特异性结合。

进一步地，所述检测试纸由上样垫、胶体金结合垫、层析膜及吸样垫依次相互交错粘贴在底板上构成。

进一步地，所述三条检测线、质控线相互平行且沿着层析膜的长度方向依次设置。

优选地，所述三条检测线中靠近胶体金结合垫的检测线通过包被人髓过氧化物酶的配对抗体形成，靠近吸样垫的检测线通过包被脂蛋白相关磷脂酶A2的配对抗体形成，中间的检测线通过包被心肌型脂肪酸结合蛋白的配对抗体形成。

进一步地，所述质控线通过包被羊抗鼠IgG抗体形成。

进一步地，所述质控线位于所述层析膜的靠近所述吸样垫的端部。

进一步地，所述层析膜为硝酸纤维素膜且为孔径5～12um的多孔样结构膜。

进一步地，所述上样垫为玻璃纤维膜或无纺布，吸样垫为吸水滤纸。

优选地，所述的试剂盒还包括用于容置检测试纸的塑料卡，将检测试纸装入塑料卡内形成试纸卡。

优选地，所述比色卡是白色背景上印有三排系列不同深浅红色线条的纸板，每排不同深浅红色线条共有7条，分别对应400、200、100、50、25、12.5、6.25ng/ml的人髓过氧化物酶浓度，200、100、50、25、12.5、6.25、3.125ng/ml的心肌型脂肪酸结合蛋白浓度及300、275、250、225、200、175、150ng/ml的脂蛋白相关磷脂酶A2浓度。

优选地，所述抗体均为高敏抗体。

由于以上技术方案的实施，本实用新型与现有技术相比具有如下优点：

本实用新型试剂盒将特定的三个心肌梗塞标志物组合在同一试纸中进行检测，能够预测病人从心梗发生前3小时至心梗发生后6小时的状况，可快速、准确进行心肌梗塞早期预警和病情风险判断，从而降低心梗病人的致残率和死亡率。该试剂盒不仅适合临床检测，也适合现场检测，经济实用。

附图说明

图1为根据本实用新型的检测试纸的结构示意图；

其中：1、上样垫；2、胶体金结合垫；3、层析膜；4、吸样垫；5、底板；T1,T2,T3、检测线；C、质控线。

具体实施方式

虽然现有技术中有关于心肌梗塞检测试剂盒、MPO检测试剂盒和FABP3检测试剂盒的报道，但相应地存在预警时间滞后、检测时间长、指标不全面以及操作复杂等缺点。本申请发明人惊喜地发现，以MPO和FABP3抗体为基础，搭配脂蛋白相关磷脂酶A2抗体，可更加特异性的、灵敏的、全面的判断心肌梗塞早期的风险，起到了意想不到的临床诊断效果，在心肌梗塞诊断领域具有极大的创造性和技术进步。在现有检测技术判定为阴性的胸痛病人中，检测出了漏诊病人，填补了现有临床诊断的不足。以下结合附图和具体的实施例对本实用新型进行详细的说明。

本例提供一种心肌梗塞快速胶体金检测试剂盒，其包括检测试纸、比色卡和/或胶体金定量读数仪。如图1所示，检测试纸由上样垫1、胶体金结合垫2、层析膜3及吸样垫4依次相互交错粘贴在塑料底板5上构成。胶体金结合垫2为同时标记有MPO、FABP3和LP-PLA2这三种标记物的抗体的胶体金垫。层析膜3为硝酸纤维素膜，是孔径5～12um的多孔样结构膜，在层析膜3上形成有相互平行的三条检测线T1,T2和T3和质控线C。其中靠近胶体金结合垫2的检测线T1为MPO检测线，通过包被MPO的配对抗体形成；靠近吸样垫4的检测线T3为LP-PLA2检测线，通过包被LP-PLA2的配对抗体形成；位于中间的检测线T2为FABP3检测线，通过包被FABP3的配对抗体形成。所述MPO的配对抗体、FABP3的配对抗体、LP-PLA2的配对抗体为分别能够与胶体金结合垫2上结合的MPO、FABP3和LP-PLA2的抗体特异性结合。质控线C通过包被羊抗鼠IgG抗体形成，其位于层析膜3的靠近吸样垫4的端部。

本例中，上样垫1为玻璃纤维膜或无纺布，吸样垫4为吸水滤纸。

进一步地，所述的试剂盒还包括用于容置检测试纸的塑料卡，将检测试纸装入塑料卡内形成试纸卡。

进一步地，所述比色卡是白色背景上印有三排系列不同深浅红色线条的纸板，每排不同深浅红色线条共有7条，分别对应400、200、100、50、25、12.5、6.25ng/ml的人髓过氧化物酶浓度，200、100、50、25、12.5、6.25、3.125ng/ml的心肌型脂肪酸结合蛋白浓度及300、275、250、225、200、175、150ng/ml的脂蛋白相关磷脂酶A2浓度。

胶体金定量读数仪是一种已知的光学检测系统。

本实用新型上述的试剂盒可采用常规的试剂盒制备方法来制备和采用常规的检测方法来检测。

一个具体的检测方法如下：

1)将检测试剂及样本平衡至室温，取出试纸卡，平放；

2)精确吸取10μl血清、血浆样本，样本为全血时吸取20μl，加入洁净的离心管中，用样本稀释液(PBS)进行10倍稀释，充分混匀；

3)用移液枪吸取10μl稀释后的样本加入到样本孔中，15～20分钟内进行定性分析和/或用胶体金定量读数仪或比色卡(半)定量判定结果；

4)仪器判定时，设置好仪器相关参数后将试纸卡放入仓内进行检测，仪器将显示出样品浓度的定量测定结果；

5)用比色卡判定结果时，将试纸卡T线的颜色和比色卡上标准线的颜色深浅进行对比，半定量判定样品的浓度区间。

采用本实用新型对200份临床定值样本检测，用仪器定量判定结果时，在检测范围内的198份样品平均偏差值均小15％，最大偏差小于20％，R2>0.97，一致性系数>0.90。用比色卡判定结果时，区间判定结果和样本值的符合率为97％，一致性系数>0.89。检测结果表明制备的检测试剂盒性能良好，适合用于临床检测，满足不同客户不同检测场合的差异化需要。

以上对本实用新型做了详尽的描述，其目的在于让熟悉此领域技术的人士能够了解本实用新型的内容并加以实施，并不能以此限制本实用新型的保护范围，凡根据本实用新型的精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本实用新型的保护范围内。

Claims (10)

1.一种心肌梗塞胶体金检测试剂盒，其包括检测试纸、比色卡和/或胶体金定量读数仪，所述检测试纸包括上样垫、胶体金结合垫、具有检测线和质控线的层析膜及吸样垫，其特征在于：所述检测试纸能够同时检测人髓过氧化物酶、心肌型脂肪酸结合蛋白和脂蛋白相关磷脂酶A2三种标志物，所述胶体金结合垫为标记有所述三种标志物的抗体的胶体金垫，所述层析膜的检测线有三条，这三条检测线相互分离且分别通过包被所述三种标志物的配对抗体形成，所述三种标志物的配对抗体分别能够与所述三种标志物的抗体特异性结合。

2.根据权利要求1所述的胶体金检测试剂盒，其特征在于：所述检测试纸由所述上样垫、胶体金结合垫、层析膜及吸样垫依次相互交错粘贴在底板上构成。

3.根据权利要求1所述的胶体金检测试剂盒，其特征在于：所述三条检测线、质控线相互平行且沿着所述层析膜的长度方向依次设置。

4.根据权利要求3所述的胶体金检测试剂盒，其特征在于：所述三条检测线中靠近胶体金结合垫的检测线通过包被人髓过氧化物酶的配对抗体形成，靠近吸样垫的检测线通过包被脂蛋白相关磷脂酶A2的配对抗体形成，中间的检测线通过包被心肌型脂肪酸结合蛋白的配对抗体形成。

5.根据权利要求1所述的胶体金检测试剂盒，其特征在于：所述质控线通过包被羊抗鼠IgG抗体形成。

6.根据权利要求1至5中任一项权利要求所述的胶体金检测试剂盒，其特征在于：所述质控线位于所述层析膜的靠近所述吸样垫的端部。

7.根据权利要求1所述的胶体金检测试剂盒，其特征在于：所述层析膜为硝酸纤维素膜且为孔径5～12um的多孔样结构膜。

8.根据权利要求1所述的胶体金检测试剂盒，其特征在于：所述上样垫为玻璃纤维膜或无纺布，所述吸样垫为吸水滤纸。

9.根据权利要求1所述的胶体金检测试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒还包括用于容置所述检测试纸的塑料卡，将所述检测试纸装入所述塑料卡内形成试纸卡。

10.根据权利要求1所述的胶体金检测试剂盒，其特征在于：所述比色卡是白色背景上印有三排系列不同深浅红色线条的纸板，每排不同深浅红色线条共有7条，分别对应400、200、100、50、25、12.5、6.25ng/ml的人髓过氧化物酶浓度，200、100、50、25、12.5、6.25、3.125ng/ml的心肌型脂肪酸结合蛋白浓度及300、275、250、225、200、175、150ng/ml的脂蛋白相关磷脂酶A2浓度。