CN203985779U - 细胞组织玻璃化冷冻载体套件 - Google Patents

Abstract

本实用新型属于生物材料保存技术领域，提供了一种细胞组织玻璃化冷冻载体套件，其包括用于承载细胞组织的网状载体以及用于夹持网状载体的夹持件，网状载体包括用于承载细胞组织的承载部以及用于与夹持件夹接的夹持部，夹持部与承载部连接，夹持件夹持于夹持部上。网状载体为金属筛网。夹持件包括套筒、芯杆及活塞，套筒具有筒腔且其两端分别设有容芯杆插入筒腔的入口以及容夹持部插入的插孔，插孔的孔径小于筒腔的内径，芯杆插设于筒腔内，活塞的侧壁与筒腔适配，活塞设于筒腔内且其一端与芯杆连接；夹持部插设于插孔内，活塞挤压夹持部。本实用新型在冷冻和苏醒细胞组织时具有升降温速度快的特点，且其结构简单、操作方便、制作成本低。

Description

细胞组织玻璃化冷冻载体套件

技术领域

本实用新型属于生物材料保存技术领域，尤其涉及一种细胞组织玻璃化冷冻载体套件。

背景技术

在生物医学领域通常需要采用低温冷冻技术对生物材料进行保存，其中，玻璃化冷冻技术在辅助生殖技术领域的应用尤为广泛和重要。

玻璃化冷冻技术的基本原理是使高浓度的玻璃化冷冻液/冷冻保护剂在超低温环境下迅速降温凝固，形成非晶体的玻璃状固体，保存其液态时分子和离子的分布状态。玻璃化冷冻细胞/组织通常是先对细胞/组织进行玻璃化冷冻液/冷冻保护剂处理，然后将其放入液氮中进行快速降温，使其内部液体由液态迅速转化为玻璃化固态，该方法除了能够达到冷冻保护的效果外，还能够避免细胞内冰晶的形成，可显著提高细胞/组织冷冻后的存活力和发育能力。玻璃化冷冻技术具有简单、高效、省时、安全、费用低等优点。

近年来，卵巢组织的玻璃化冷冻已成为了研究的焦点。卵巢是雌性哺乳动物生殖系统的重要组成部分。卵巢或卵巢组织的冷冻保存在物种保存、人类医学、畜禽育种与繁殖等方面具有重要意义。人类卵巢组织的冷冻保存是随着癌症治疗技术和生殖医学的发展而发展起来的。众所周知，随着社会的进步和癌症治疗技术的日趋完善，年轻女性肿瘤患者的生存率得到了很大提高，但是放疗以及多数的抗肿瘤药物治疗会导致女性患者卵巢功能早衰及不孕。因此，在治疗前进行卵巢组织冷冻保存，待疾病缓解后再行自体移植，可以有效地保存患者的生育能力及内分泌功能。这样，既不耽误癌症治疗，又可恢复患者自然生育力，而且无伦理问题。可见，在生殖医学领域，冷冻卵巢组织将成为解决癌症患者保存生育力最有希望的方案，同时，在保存女性内分泌功能方面也具有巨大潜力。

经研究发现，影响卵巢组织玻璃化冷冻效果的主要因素有：卵巢组织切片大小、玻璃化冷冻液/冷冻保护剂(CPA)浓度、渗透平衡时间和温度、冷冻载体等。其中，增加冷冻保护剂(CPA)浓度可提高冷冻效率，但受生理因素限制，CPA浓度不能太高，否则会产生较大毒性。冷冻载体是冷冻保存时承载细胞/组织的工具，玻璃化冷冻成功的关键之一就是选择合适的冷冻载体，提高冷冻速率，因此，为了提高冷冻效果，减少冷冻损伤，可以从改进冷冻载体方面入手，以获得较高的冷冻速率。但是，目前细胞/组织(例如卵巢组织)玻璃化冷冻承载工具还较少见，而且，在现有技术中，已有的细胞组织玻璃化冷冻载体存在升降温速度慢、结构复杂、操作不便、制作成本高等缺点。

实用新型内容

本实用新型的目的在于克服现有技术之缺陷，提供了一种升降温速度快、结构简单、操作方便、制作成本低的细胞组织玻璃化冷冻载体套件。

本实用新型是这样实现的，一种细胞组织玻璃化冷冻载体套件，其包括用于承载细胞组织的网状载体以及用于夹持所述网状载体的夹持件，所述网状载体包括用于承载细胞组织的承载部以及用于与所述夹持件夹接的夹持部，所述夹持部与所述承载部连接，所述夹持件夹持于所述夹持部上。

进一步地，所述网状载体的夹持部与承载部一体成型。

更进一步地，所述夹持部连接于所述承载部的边缘。

具体地，所述网状载体包括一个所述承载部及一个所述夹持部，所述承载部及所述夹持部均呈矩形，所述夹持部连接于所述承载部的一边上，所述网状载体呈“凸”形。

优选地，所述网状载体为金属筛网。

进一步地，所述夹持件包括套筒、芯杆及活塞，所述套筒具有筒腔且其两端分别设有容所述芯杆插入所述筒腔的入口以及容所述夹持部插入的插孔，所述插孔的孔径小于所述筒腔的内径，所述芯杆插设于所述筒腔内，所述活塞的侧壁与所述筒腔适配，所述活塞设于所述筒腔内且其一端与所述芯杆连接；所述夹持部插设于所述插孔内，所述活塞挤压所述夹持部。

更进一步地，所述活塞的另一端设有侧壁与所述插孔的孔壁适配的凸起，所述凸起插设于所述插孔内且挤压所述夹持部，所述夹持部夹设于所述凸起与所述插孔的孔壁之间。

优选地，所述活塞的侧面设有环壁沟槽。

特别地，所述套筒设有所述插孔的一端呈漏斗状，所述活塞设有所述凸起的一端呈与所述漏斗状适配的锥台状。

具体地，所述网状载体为金属筛网。

本实用新型具有以下技术效果：

本实用新型通过选用网状载体，使得细胞组织在投入液氮进行玻璃化冷冻前，能够使用纱布在网状载体的底部网格及其周边迅速吸走附在细胞组织上的液体(冷冻液/冷冻保护剂)，保证细胞组织在投入液氮后能够迅速有效地降温，达到玻璃化冷冻的效果。另外，本实用新型采用夹持件对网状载体进行夹持，使得操作人员可以通过夹持件间接操作网状载体，避免人手直接接触网状载体而使细胞组织受污染。同时，由于网状载体专门设置了夹持部，从而保证夹持件能够准确稳固地夹持和轻易地松放网状载体。

附图说明

图1为本实用新实施例中夹持件的结构示意图；

图2为本实用新实施例中网状载体的结构示意图；

图3为本实用新实施例中细胞组织玻璃化冷冻载体套件的示意图，其中，夹持件未夹持网状载体；

图4为本实用新实施例中细胞组织玻璃化冷冻载体套件的另一状态示意图，其中，夹持件已夹持网状载体。

具体实施方式

为了使本实用新型的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本实用新型进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本实用新型，并不用于限定本实用新型。

参见图3与图4，本实用新型实施例提供了一种细胞组织玻璃化冷冻载体套件，其包括用于承载细胞组织的网状载体1以及用于夹持所述网状载体1的夹持件2，参见图2，所述网状载体1包括用于承载细胞组织的承载部11以及用于与所述夹持件2夹接的夹持部12，所述夹持部12与所述承载部11连接，所述夹持件2夹持于所述夹持部12上。

对细胞/组织进行玻璃化冷冻的过程中，需要先对细胞/组织进行清洗和浸泡，清洗和浸泡完毕的细胞/组织放置于网状载体1的承载部11上，然后使用无菌纱布吸走细胞/组织周边的液体(冷冻液/冷冻保护剂)，接着立即将该承载有细胞/组织的网状载体1置入液氮中，使其迅速降温进行玻璃化冷冻，再将网状载体1及细胞组织一并移入保存容器(例如离心管)中，最后将保存容器放入液氮罐中，进行长期保存。需要指出的是，本实用新型所称“细胞组织”实际上包括细胞、组织、器官等生物材料，而不仅限于细胞或者组织。在本具体实施方式中为了更清楚明了地说明“细胞组织”不仅限于细胞或者组织，还出现若干“细胞/组织”一词，该词的含义实际与“细胞组织”等同，其同样包括细胞、组织、器官等生物材料。

本实用新型实施例通过选用网状载体1，使得细胞组织在投入液氮进行玻璃化冷冻前，能够使用纱布在网状载体1的底部网格及其周边迅速吸走附在细胞组织上的液体(冷冻液/冷冻保护剂)，保证细胞组织在投入液氮后能够迅速有效地降温，达到玻璃化冷冻的效果。另外，本实用新型采用夹持件2对网状载体1进行夹持，使得操作人员可以通过夹持件2间接操作网状载体1，避免人手直接接触网状载体1而使细胞组织受污染。同时，由于网状载体1专门设置了夹持部12，从而保证夹持件2能够准确稳固地夹持和轻易地松放网状载体1。

参见图2，为了便于网状载体1的制作，本实用新型实施例中的所述网状载体1的夹持部12与承载部11可以一体成型。一体成型的网状载体1，还可保证夹持部12与承载部11之间能够稳固连接。

具体地，所述夹持部12连接于所述承载部11的边缘，这样的结构不但能够便于网状载体1的制作，而且还便于夹持件2对其的操作。

继续参见图2，作为本实用新型关于所述网状载体1的一种实施方式，所述网状载体1包括一个所述承载部11及一个所述夹持部12，所述承载部11及所述夹持部12均呈矩形，所述夹持部12连接于所述承载部11的一边上，所述网状载体1呈“凸”形。上述形状的网状载体1，结构形状简单，便于制作，而且还便于多块网状载体1的叠置。具体地，在本实施例中，承载部11的长度可为1cm-5cm，宽度可为0.5cm-2cm；夹持部12的长度可为0.5cm-1.5cm，宽度可为0.1cm-0.2cm；夹持部12位于承载部11宽边的1/2处。当然，承载部11及夹持部12的大小还可根据细胞/组织切块的大小具体而定。

作为本实用新型关于所述网状载体1的一种优选实施方式，所述网状载体1为金属筛网。在本实用新型实施例中，网状载体1由金属筛网剪切而成，其制作非常简易，而且，经过相同模型下不同材质的冷冻速率测试，得出如下不同材质的冷冻速率排序：金>铜>铁>玻璃>石英>聚氯乙烯，可见，本实施例选用金属筛网制作网状载体1，在相同条件下，可显著提高细胞/组织的玻璃化冷冻速率。在解冻复苏细胞/组织的过程中，由于金属筛网具有柔韧性，其可加快细胞/组织的复苏。另外，金属筛网还具有取材方便、价格便宜(每平方米约为1.0元)、可灭菌、可重复使用等优点。

参见图1，所述夹持件2包括套筒21、芯杆22及活塞23，所述套筒21具有筒腔211且其两端分别设有容所述芯杆22插入所述筒腔211的入口212以及容所述夹持部12插入的插孔213，所述插孔213的孔径小于所述筒腔211的内径，所述芯杆22插设于所述筒腔211内，所述活塞23的侧壁与所述筒腔211适配，所述活塞23设于所述筒腔211内且其一端与所述芯杆22连接；所述夹持部12插设于所述插孔213内，所述活塞23挤压所述夹持部12。夹持件2在夹持网状载体1前，先稍微往入口212外拉拔芯杆22，使活塞23前端留有一定间隙，接着将网状载体1的夹持部12插入插孔213中，然后再往套筒21的筒腔211内推压芯杆22，使活塞23挤压夹持部12，夹持部12被夹置于活塞23与套筒21内壁之间，实现夹持件2对网状载体1的夹持。该夹持件2不但便于夹持网状载体1，而且还便于松放网状载体1，有效提高本实用新型的操作效率，降低操作难度。在本实施例中，夹持件2可为塑料材料，其成本低廉(约为0.2元)。另外，套筒21的侧壁还可用于贴附标记和标签，用于识别不同夹持件2。

具体地，所述活塞23的另一端设有侧壁与所述插孔213的孔壁适配的凸起231，所述凸起231插设于所述插孔213内且挤压所述夹持部12，所述夹持部12夹设于所述凸起231与所述插孔213的孔壁之间。凸起231的设置，可将夹持部12夹置于凸起231与插孔213的孔壁之间，进一步稳固夹持网状载体1。

继续参见图1，所述活塞23的侧面设有环壁沟槽232。可以理解，活塞23实际上呈两头大、中间小的哑铃状，这样，可以减小活塞23侧壁与筒腔211内壁之间的接触面积，减小其相对摩擦力，使得活塞23能够在筒腔211内更灵活地滑动，另外，该结构还可以保证活塞23及芯杆22能够沿套筒21的轴向准确平稳滑动。

具体地，所述套筒21设有所述插孔213的一端呈漏斗状，所述活塞23设有所述凸起231的一端呈与所述漏斗状适配的锥台状。漏斗状与锥台状能够紧密配合，加大活塞23前端与筒腔211内壁之间的接触面积，可更完全地挤出筒腔211内的气体，可更稳固地加压夹持网状载体1。

可以理解，本实施例中的夹持件2实际上是一个类似注射器的构件，在实施本实用新型时，实际上可以选用注射器作为夹持件2，在本实施例中推荐使用1ml、2ml及5ml的注射器。选用一次性注射器作为夹持件2具有无菌卫生等优点。

本实用新型实施例所提供的细胞组织玻璃化冷冻载体套件是由以下步骤制作而成的：

选用一次性无菌注射器(1ml)，打开包装，去掉注射器针头及筒帽(管帽)，作为夹持件2；

选用不锈钢细胞筛网(100目)，将其剪切为图2所示的形状，作为网状载体1；

稍微拉动注射器的芯杆22，使活塞23的前端留出一定间隙；

将网状载体1的夹持部12插入注射器的乳头(即插孔213)内，并使其紧贴内壁；

推压芯杆22，使活塞23将夹持部12挤压在内壁上，形成细胞组织玻璃化冷冻载体套件。

可选地，若欲使夹持件2与网状载体1之间永久连接，在上述步骤的基础上，可增加以下步骤：

将注射器的乳头(即插孔213)在火焰上熔融，再用钳子压封，形成熔合连接模式的载体套件。

需要说明的是，上述制作方法仅为细胞组织玻璃化冷冻载体套件的一种具体制作方式而已，该方法并不是制作本实用新型的唯一方法，该方法更不用于限制本实用新型。

本实用新型实施例还提供了细胞/组织玻璃化冷冻的方法，该方法使用了上述细胞组织玻璃化冷冻载体套件。本领域技术人员通过阅读本方法，可更清楚明白地理解细胞组织玻璃化冷冻载体套件的使用方法及其技术效果。

上述方法需要准备以下化学液体：

组织润洗液：DPBS+双抗；

冷冻平衡液(ES)：10％乙二醇+10％二甲基亚砜+20％血清替代物+M199+Hepes；

玻璃化冷冻液(VS)：20％乙二醇+20％二甲基亚砜+0.5M蔗糖+20％血清替代物+M199+Hepes；

复苏液(T1溶液)：1.0M蔗糖+20％血清替代物+M199+Hepes；

复苏液(T2溶液)：0.5M蔗糖+20％血清替代物+M199+Hepes；

复苏液(T3溶液)：0.25M蔗糖+20％血清替代物+M199+Hepes；

复苏液(T4溶液)：20％血清替代物+M199+Hepes。

作为上述方法的一种实施方式，该方法中选用雌性C57小鼠卵巢组织作为玻璃化冷冻的对象。

上述细胞/组织玻璃化冷冻的方法包括以下步骤：

用环氧乙烷熏蒸法对细胞组织玻璃化冷冻载体套件进行消毒灭菌；

将小鼠卵巢组织在组织润洗液中清洗3-4遍；

将小鼠卵巢组织对半切块，随机分为A、B两组，其中，A组作为组织学鉴定对象，B组作为玻璃化冷冻对象；

将A组放入4％多聚甲醛中，浸泡48h，做组织学鉴定；

在室温下，将B组卵巢组织块在冷冻平衡液(ES)中浸泡15min；

将B组卵巢组织块移入玻璃化冷冻液(VS)中浸泡10min；

将B组卵巢组织块移到网状载体1的承载部11上；

用一次性无菌纱布沿网状载体1下端吸走多余的玻璃化冷冻液(VS)；

将B组卵巢组织块及网状载体1置入液氮中；

在液氮中通过细胞组织玻璃化冷冻载体套件的夹持件2将网状载体1及B组卵巢组织块移入保存容器(例如离心管)中；

将保存容器移入液氮罐中进行长期保存。

值得注意的是，细胞/组织玻璃化冷冻的方法同样是仅用于说明细胞组织玻璃化冷冻载体套件的使用方法及其技术效果，并不用于限定细胞组织玻璃化冷冻载体套件。

本实施例还提供细胞/组织解冻复苏的方法，该方法对上述已玻璃化冷冻的B组卵巢组织块进行解冻苏醒，其包括以下步骤：

通过细胞组织玻璃化冷冻载体套件的夹持件2从液氮中取出承载有B组卵巢组织块的网状载体1，并迅速将之移入T1溶液(37℃)中，浸泡1min；

依次将承载有B组卵巢组织块的网状载体1移入T2、T3和T4溶液中，各浸泡5min；

用组织润洗液清洗2-3遍，完成细胞/组织的解冻苏醒。

同样道理，上述细胞/组织解冻苏醒的方法同样是仅用于说明细胞组织玻璃化冷冻载体套件的使用方法及其技术效果，并不用于限定细胞组织玻璃化冷冻载体套件。

解冻苏醒后的B组卵巢组织块移入4％多聚甲醛中浸泡48h，做组织学鉴定，经对比，B组卵巢组织块与A组卵巢组织块并无差异，其冷冻组织存活率较好。

本实施例中的玻璃化冷冻方法和解冻复苏方法不但适用于小鼠卵巢组织，而且还适用于女性卵巢组织及其他细胞、组织和器官等生物材料。同理，细胞组织玻璃化冷冻载体套件不但适用于小鼠卵巢组织，而且还适用于女性卵巢组织及其他细胞、组织和器官等生物材料。

以上所述仅为本实用新型的较佳实施例而已，并不用以限制本实用新型，凡在本实用新型的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换或改进等，均应包含在本实用新型的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种细胞组织玻璃化冷冻载体套件，其特征在于：包括用于承载细胞组织的网状载体以及用于夹持所述网状载体的夹持件，所述网状载体包括用于承载细胞组织的承载部以及用于与所述夹持件夹接的夹持部，所述夹持部与所述承载部连接，所述夹持件夹持于所述夹持部上。

2.如权利要求1所述的细胞组织玻璃化冷冻载体套件，其特征在于：所述网状载体的夹持部与承载部一体成型。

3.如权利要求2所述的细胞组织玻璃化冷冻载体套件，其特征在于：所述夹持部连接于所述承载部的边缘。

4.如权利要求3所述的细胞组织玻璃化冷冻载体套件，其特征在于：所述网状载体包括一个所述承载部及一个所述夹持部，所述承载部及所述夹持部均呈矩形，所述夹持部连接于所述承载部的一边上，所述网状载体呈“凸”形。

5.如权利要求1-4任一项所述的细胞组织玻璃化冷冻载体套件，其特征在于：所述网状载体为金属筛网。

6.如权利要求1-4任一项所述的细胞组织玻璃化冷冻载体套件，其特征在于：所述夹持件包括套筒、芯杆及活塞，所述套筒具有筒腔且其两端分别设有容所述芯杆插入所述筒腔的入口以及容所述夹持部插入的插孔，所述插孔的孔径小于所述筒腔的内径，所述芯杆插设于所述筒腔内，所述活塞的侧壁与所述筒腔适配，所述活塞设于所述筒腔内且其一端与所述芯杆连接；所述夹持部插设于所述插孔内，所述活塞挤压所述夹持部。

7.如权利要求6所述的细胞组织玻璃化冷冻载体套件，其特征在于：所述活塞的另一端设有侧壁与所述插孔的孔壁适配的凸起，所述凸起插设于所述插孔内且挤压所述夹持部，所述夹持部夹设于所述凸起与所述插孔的孔壁之间。

8.如权利要求7所述的细胞组织玻璃化冷冻载体套件，其特征在于：所述活塞的侧面设有环壁沟槽。

9.如权利要求8所述的细胞组织玻璃化冷冻载体套件，其特征在于：所述套筒设有所述插孔的一端呈漏斗状，所述活塞设有所述凸起的一端呈与所述漏斗状适配的锥台状。

10.如权利要求6所述的细胞组织玻璃化冷冻载体套件，其特征在于：所述网状载体为金属筛网。