CN202133666U

CN202133666U - 瘦肉精多残留联检试纸卡

Info

Publication number: CN202133666U
Application number: CN 201120205560
Authority: CN
Inventors: 职爱民; 胡骁飞; 张改平; 邓瑞广; 李孟顺; 杨继飞; 刘庆堂; 赵东; 邢广旭; 柴书军; 杨艳艳; 李青梅; 滕蔓
Original assignee: Henan Academy of Agricultural Sciences
Current assignee: Henan Academy of Agricultural Sciences
Priority date: 2011-06-17
Filing date: 2011-06-17
Publication date: 2012-02-01
Anticipated expiration: 2021-06-17

Abstract

本实用新型公开一种“瘦肉精”多残留分析的金标层析检测试纸卡，包括塑料支撑物和试纸芯，试纸芯由样品垫、金标物结合垫、层析膜和吸水垫依次粘贴到衬板上制成，金标物结合垫为吸附有二～五种混合金标抗体的玻璃纤维棉，金标抗体为胶体金标记的抗瘦肉精的单克隆抗体或多克隆抗体，检测线为二～五条相应的瘦肉精-载体蛋白结合抗原，对照线为羊抗或兔抗小鼠IgG、羊抗兔IgG或兔抗载体蛋白IgG抗体印制而成，检测线和对照线沿层析膜横向平行排列。本实用新型特异性强，敏感性高，最低检出限可达到1ppb，实现了“瘦肉精”多残留金标层析的快速检测，用同一试纸卡一次加样，可同时检测多种“瘦肉精”残留物，大大节省了检测时间，在提高工作效率的同时节省了检测成本。

Description

瘦肉精多残留联检试纸卡

技术领域

本实用新型涉及一种快速检测微量“瘦肉精”的器具，特别是涉及一种“瘦肉精”多残留分析的金标层析检测试纸卡。

背景技术

“瘦肉精”是指一类药物，任何能够促进瘦肉生长、减少脂肪沉积的物质都可以叫做“瘦肉精”，包括“克伦特罗”（Clenbuterol，CL），盐酸克伦特罗是其盐酸盐，“莱克多巴胺”（Ractopamine，RAC，也译为雷托巴胺）、“沙丁胺醇”(Salbutamol，SAL)、“特布他林”(Terbutaline，TBL)和“西马特罗”(Cimaterol，CIM)等。“瘦肉精”在肉用动物生产中剂量为治疗量的5-10倍时，具有促进肌肉发育和脂肪分解作用，可以提高肉用动物胴体瘦肉率。因为消费者对瘦肉的特殊偏好，瘦肉产出率高的猪可以卖个好价钱，添加“瘦肉精”给养殖户带来了额外收益。因此，受不法利益的驱使，养殖户常在养殖环节添加“瘦肉精”到动物饲料中去。

但是“瘦肉精”是一种选择性β₂-肾上腺素受体激动剂，副作用极大，当摄入量较大时会造成心血管系统的损害和出现严重的神经症状。当人们食用了含“瘦肉精”残留的动物内脏和肉品后，会造成急性或慢性食肉中毒，危害消费者的健康安全。目前为止没有一个国家批准“盐酸克伦特罗”可用于动物生产中，但长期以来一直存在着非法使用，在世界各地造成严重食物中毒的事件并不鲜见。在我国北京、香港、上海、浙江、广东、山东、河北、广西、黑龙江和安徽等地也出现了“瘦肉精”的中毒事件，极大地威胁着消费者的身心健康。因国家对盐酸克伦特罗的严格管控，现在出现了“莱克多巴胺”、“沙丁胺醇”等所谓的“新型瘦肉精”产品。

用于“瘦肉精”残留检测的方法较多，（1）理化分析方法，如高压液相色谱仪 (High performance liquid chromatography，HPLC)、气相色谱 (Gas chromatography，GC)、薄层层析 (Thin-layer chromatography，TLC)、毛细管区域电泳法（Capillary zone electrophoresis，CE）等；（2）免疫分析法，如放射免疫法 (Radio-immunoassay，RIA)、酶联免疫吸附实验（Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）等；（3）生物测定法，如微生物学测定法（microbiological assays，MA）、放射受体测定法（redioreceptor assays，RA）等。但这些方法有的需要昂贵的仪器设备，需要熟练的专业人员操作，操作过程复杂，需要时间较长，限制了其应用范围，难以在生产实际中推广应用。免疫试纸法具有半定量和一定的定量能力，可以提供待测物的初步信息，该法灵敏度高，分析过程简单，用作“瘦肉精”的筛查有独特的优势，是需要优先发展的检测技术，但目前“瘦肉精”多残留试纸检测技术在国内尚属空白，急待研究解决。

实用新型内容

本实用新型要解决的技术问题：提供一种适用于现场检测的特异、敏感、快速和简便的瘦肉精多残留联检试纸卡。

本实用新型的技术方案：

一种瘦肉精多残留联检试纸卡，包括塑料支撑物和试纸芯，塑料支撑物包括底座和面板，其中底座上设有安装试纸芯的固定槽，面板上设有加样孔和结果显示窗，试纸芯由样品垫、金标物结合垫、层析膜和吸水垫依次粘贴到衬板上制成，层析膜上设有检测线和对照线，所述金标物结合垫为吸附有二～五种混合金标抗体的玻璃纤维棉，金标抗体为胶体金标记的抗瘦肉精的单克隆抗体或多克隆抗体，检测线为二～五条相应的瘦肉精-载体蛋白结合抗原或人工合成的模拟结合抗原，对照线为羊抗或兔抗小鼠IgG、羊抗兔IgG或兔抗载体蛋白IgG抗体印制而成，检测线和对照线沿层析膜横向平行排列。

所述金标抗体和相应的瘦肉精-载体蛋白结合抗原或人工合成的模拟结合抗原为：第一组：金标抗盐酸克伦特罗CL抗体，检测线为CL-载体蛋白结合抗原；第二组：金标抗莱克多巴胺RAC抗体，检测线为RAC -载体蛋白结合抗原；第三组：金标抗沙丁胺醇SAL抗体，检测线为SAL-载体蛋白结合抗原；第四组：金标特步特林TBL抗体，检测线为TBL-载体蛋白结合抗原；第五组：金标抗西马特罗CIM抗体，检测线为CIM-载体蛋白结合抗原；采用其中的二组、三组、四组或五组，分别组成二联检试纸卡、三联检试纸卡、四联检试纸卡或五联检试纸卡。

所述吸水垫采用滤纸、海绵或无纺布制作，所述衬板用不吸水的硬质塑胶条制作。

所述样品垫采用玻璃纤维棉、尼龙膜、聚偏二氟乙烯膜或聚酯膜制作；层析膜采用尼龙膜、聚偏二氟乙烯膜、硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜制成，对照线采用硝酸纤维素膜、纯纤维素膜或羧化纤维素膜制成。

所述载体蛋白为牛血清白蛋白、鸡卵清白蛋白、人血清白蛋白或钥孔血蓝蛋白。

本实用新型的积极有益效果：

Figure 2011202055602100002DEST_PATH_IMAGE002

试纸卡特异性强，敏感性高，最低检出限可达到1ppb，符合我国瘦肉精的限量检测要求。

Figure 2011202055602100002DEST_PATH_IMAGE004

试纸卡实现了“瘦肉精”多残留金标层析的快速检测，用同一试纸卡一次加样，可同时检测多种“瘦肉精”残留物，克服了常规单项检测试纸卡一次只能检测一种药物的不足，实现了较高通量的检测，大大节省了检测时间，在提高工作效率的同时节省了检测成本。

使用该试纸卡时，无需其它额外试剂和仪器，用于现场检测在5min内即可判定检测结果，简便、快速。

使用该试纸卡以棕红色线条“︱”显示检测结果，判定依据形象、直观，简单明了，不易出现人为误判。

⑤本实用新型的试纸卡可节省检测费用，适用范围广。使用该试纸卡比用仪器分析和常规单项检测试纸条的费用大幅下降；同时该试纸卡适用范围广，可满足不同层次人员的需要，包括专业检验、海关检疫、卫生检疫、质量监测、加工企业和养殖场户等，可保持对非法添加瘦肉精的威慑，保障食品安全，便于推广应用。

附图说明

图1、试纸芯侧视结构示意图。

图2、试纸芯俯视结构示意图。

图3、二项联检试纸卡面板构造俯视图。

图4、试纸卡底座构造示意图。

图5、三项联检试纸芯俯视结构示意图。

图6、三项联检试纸卡面板构造俯视图。

图7、五项联检试纸芯俯视结构示意图。

图8、五项联检试纸卡面板构造俯视图。

图中，1：衬板； 2：样品垫； 3：金标物结合垫； 4：层析膜； 5：吸水垫；6：对照线； 7：检测线； 8：加样孔； 9：显示窗； 10：面板；11：底座； 12：固定槽。

具体实施方式

在制备“瘦肉精”多残留联检层析试纸卡时，需要先制备某种“瘦肉精”-载体蛋白结合抗原、“瘦肉精”金标物，制备羊抗或兔抗小鼠IgG抗体或羊抗兔IgG抗体，或兔抗载体蛋白IgG抗体，进而制备成试纸芯，并安装在塑料壳底座的固定槽中，最后和面板嵌合在一起。

实施例一: “瘦肉精”二项联检金标层析试纸卡。

在得到瘦肉精-载体蛋白结合抗原、瘦肉精金标物和IgG抗体的基础上，组装得到本发明的试纸卡（以盐酸克伦特罗和莱克多巴胺二联检为例）。

试纸卡塑料壳包括底座11和面板10，底座上设有安装试纸芯的固定槽12，面板上设有加样孔8和显示窗9，显示窗旁边设有T₁、T₂和C标识，参见图1-4。

试纸芯的构造：衬板1用硬质塑胶条制成；样品垫2用玻璃纤维棉制成；金标物结合垫3为吸附有胶体金标记的抗CL和抗RAC单克隆抗体的玻璃纤维棉；层析膜4用硝酸纤维素膜，其上分别用偶联CL-载体蛋白和RAC-载体蛋白的结合抗原制备两条检测线7（隐形），载体蛋白为牛血清白蛋白。两条检测线由样品端依次排列，用羊抗小鼠IgG抗体制备对照线6（隐形），对照线6采用硝酸纤维素膜；检测线和对照线平行排列成“︱︱︱”；吸水垫5用吸水滤纸制成。将样品垫、金标物结合垫、层析膜、吸水垫依次相互搭接并粘贴固定在衬板上，组装成CL和RAC联检试纸芯。

将试纸芯安装在底座11上的固定槽12内，样品垫和层析膜分别与面板上的加样孔和显示窗相对应，两条隐形检测线和隐形对照线分别与显示窗旁边的T₁、T₂和C相对应，嵌合面板后即制成试纸卡。

检测样品：检测样品可为尿样。

检测样品制备：尿样无需特殊处理，如过于浑浊，静置后离心取上清即可。

操作方法：检测时，将试纸卡平放，从加样孔滴加待测样品，1～5min内从显示窗判定检测结果。

结果判定：如只有C位置隐形对照线处显示一条棕红色线“︱”，表示CL和RAC检测结果均为阳性，说明在待测样品中含有这两种待测药物；如在T₁和C位置显示两条棕红色线“︱︱”时，表示CL检测结果为阳性，RAC检测结果为阴性，说明在待测样品中含CL而不含RAC；如在T₂和C位置显示两条棕红色线 “︱︱”，表示CL检测结果为阳性，RAC检测结果为阴性，说明在待测样品中含CL而不含RAC；如在T₁、T₂和C位置显示三条棕红色线“︱︱︱”，表示CL和RAC检测结果均为阴性，说明在待测样品中不含CL和RAC；如在层析膜上没有棕红色线显示，则表明试纸卡已失效。

实施例二：“瘦肉精”二项联检金标层析试纸卡（以盐酸克伦特罗和莱克多巴胺二联检为例）

试纸卡结构和实施例一基本相同，不同之处在于：样品垫采用尼龙膜制成；用抗CL和抗RAC的多克隆抗体替代抗CL和抗RAC的单克隆抗体，制备金标结合垫；层析膜用尼龙膜制成，用羊抗兔IgG抗体替代羊抗鼠IgG抗体在层析膜上制备隐形对照线“︱”，对照线采用纯纤维素膜制成；其它如检测样品制备、操作方法和结果判定等均同实施例一，不再赘述。

实施例三：“瘦肉精”二项联检金标层析试纸卡（以盐酸克伦特罗和莱克多巴胺二联检为例）。

试纸卡结构和实施例一基本相同，不同之处在于：样品垫采用聚偏二氟乙烯膜制成；用CL-载体蛋白和RAC-载体蛋白结合抗原替代抗CL和抗RAC的单克隆抗体，制备金标结合垫；层析膜用聚偏二氟乙烯膜，用兔抗载体蛋白IgG抗体替代羊抗鼠IgG抗体在层析膜上制备隐形对照线“︱”，对照线采用羧化纤维素膜制成；其它如检测样品制备、操作方法和结果判定等均同实施例一，不再赘述。

实施例四：“瘦肉精”三项联检金标层析试纸卡（以盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇三联检为例）。

试纸卡塑料壳的构造包括底座和面板，底座设有安装试纸芯的固定槽，面板上设有加样孔和显示窗，显示窗旁边设有T₁、T₂、T₃和C标识。参见图5-6。

试纸芯的构造：衬板用硬质塑胶条制成；样品垫采用聚酯膜制成；金标物结合垫为吸附有胶体金标记的抗CL、抗RAC和抗SAL单克隆抗体的玻璃纤维棉；层析膜用醋酸纤维素膜，其上分别用偶联CL-载体蛋白、RAC-载体蛋白和SAL-载体蛋白结合抗原制备的三条隐形检测线“︱”，所述载体蛋白为鸡卵清白蛋白。三条隐形检测线由样品端依次排列，用兔抗小鼠IgG抗体制备隐形对照线“︱”，对照线采用纯纤维素膜，三条检测线和对照线平行排列组合成“︱︱︱︱”；吸水垫用吸水滤纸制成。将样品垫、金标物结合垫、层析膜、吸水垫依次相互搭接粘贴固定在衬板上，组装成CL、RAC和SAL联检试纸芯。将试纸芯安装在底座的固定槽内，试纸芯的样品垫和层析膜分别与面板上的加样孔和显示窗相对应，层析膜上的三条检测线和对照线分别与显示窗旁边的T₁、T₂、T₃和C相对应，嵌合面板后制成试纸卡。

其它包括检测样品制备和操作方法均同实施例一，不再赘述。

结果判定：如只有C位置显示1条棕红色线“︱”时，表示CL、RAC和SAL检测结果均为阳性，说明在待测样品中含这3种待测药物；如显示1条棕红色T线和1条棕红色C 线“︱︱”时，表示2种药物检测结果为阳性，另外1种药物检测结果为阴性，说明在待测样品中含对应的2种药物而不含另外1种药物；如显示2条棕红色T线和1条棕红色C线“︱︱︱”时，表示1种药物检测结果为阳性，另外2种药物检测结果为阴性，说明在待测样品中含1种药物而不含另外2种药物；如显示3条棕红色T线和1条棕红色C线“︱︱︱︱”时，表示3种药物检测结果均为阴性；如在层析膜上没有棕红色线显示，则表明试纸卡已失效。

实施例五：“瘦肉精”三项联检金标层析试纸卡（以克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇三联检试纸为例）

试纸卡构造和实施例四基本相同，不同之处在于：样品垫采用玻璃纤维棉制成；用抗CL、抗RAC和抗SAL的多克隆抗体替代抗CL、抗RAC和抗SAL的单克隆抗体，制备金标结合垫；用羊抗兔IgG抗体替代兔抗鼠IgG抗体在层析膜上制备隐形对照线“︱”。

其它包括检测样品制备、操作方法和结果判定等均同实施例四，不再重述。

实施例六：“瘦肉精”三项联检金标层析试纸卡（以克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇三联检试纸为例）。

试纸卡构造和实施例四基本相同，不同之处在于：用 CL-载体蛋白、RAC-载体蛋白和SAL-载体蛋白结合抗原替代抗CL、抗RAC和抗SAL的单克隆抗体，制备金标结合垫；用兔抗载体蛋白IgG抗体替代兔抗鼠IgG抗体在层析膜上制备隐形对照线“︱”。

实施例七：“瘦肉精”五项联检金标层析试纸卡

试纸卡塑料壳的构造包括底座和面板，底座上设有安装试纸芯的固定槽，面板上设有加样孔和显示窗，显示窗旁设有T₁、T₂、T₃、T₄、T₅和C标识。参见图7-8。

试纸芯的构造：衬板用硬质塑胶条制成；样品垫用玻璃纤维棉制成；金标物结合垫为吸附有胶体金标记的抗CL、抗RAC、抗SAL、抗CML和抗TBL单克隆抗体的玻璃纤维棉；层析膜用硝酸纤维素膜，其上分别用偶联CL-载体蛋白、RAC-载体蛋白、SAL-载体蛋白、CML-载体蛋白和TBL-载体蛋白结合抗原制备的隐形检测线“︱”，载体蛋白为人血清白蛋白或钥孔血蓝蛋白。

五条检测线由样品端依次排列，用羊抗兔IgG抗体制备隐形对照线“︱”，对照线采用羧化纤维素膜，六条线平行排列组合成“︱︱︱︱︱︱”；吸水垫用吸水滤纸制成。将样品垫、金标物结合垫、层析膜、吸水垫依次相互搭接粘贴固定在衬板上，组装成CL、RAC、SAL、CML和TBL联检试纸芯。将试纸芯安装在底座的固定槽内，试纸芯的样品垫和层析膜分别与面板上加样孔和显示窗相对应，层析膜上的五条检测线和对照线分别与显示窗旁边的T₁、T₂、T₃、T₄、T₅和C相对应，嵌合面板后制成试纸卡。

结果判定：若C位置不显示1条棕红色线“︱”时，表示本次检测无效；C位置显示1条棕红色线“︱”时，表示本次检测有效，并且T₁、T₂、T₃、T₄、T₅哪一条显色即表示对应的那种待测物在本次检测中未检出，不显色的即表示对应的那种待测物在本次检测中被检出，结果为阳性。如此可在一次测定中判断五种被检物的阴阳性，即五联检试纸卡。

实施例八：瘦肉精五项联检金标层析试纸卡

试纸卡构造和实施例七基本相同，不同之处在于：用抗CL、抗RAC、抗SAL、抗CML和抗TBL的多克隆抗体替代抗抗CL、抗RAC、抗SAL、抗CML和抗TBL的单克隆抗体，制备金标结合垫；用兔抗鼠IgG抗体替代羊抗兔IgG抗体在层析膜上制备隐形对照线“︱”。

其它包括检测样品制备、操作方法和结果判定等均同实施例七，不再赘述。

实施例九：瘦肉精五项联检金标层析试纸卡

试纸卡构造和实施例七基本相同，不同之处在于：用CL-载体蛋白、RAC-载体蛋白、SAL-载体蛋白、CML-载体蛋白和TBL-载体蛋白结合抗原替代抗CL、抗RAC、抗SAL、抗CML和抗TBL的单克隆抗体，制备金标结合垫；用兔抗载体蛋白IgG抗体替代羊抗兔IgG抗体在层析膜上制备隐形对照线“︱”。

Claims

1.一种瘦肉精多残留联检试纸卡，包括塑料支撑物和试纸芯，塑料支撑物包括底座和面板，其中底座上设有安装试纸芯的固定槽，面板上设有加样孔和结果显示窗，试纸芯由样品垫、金标物结合垫、层析膜和吸水垫依次粘贴到衬板上制成，层析膜上设有检测线和对照线，其特征是：所述金标物结合垫为吸附有二～五种混合金标抗体的玻璃纤维棉，金标抗体为胶体金标记的抗瘦肉精的单克隆抗体或多克隆抗体，检测线为二～五条相应的瘦肉精-载体蛋白结合抗原或人工合成的模拟结合抗原，对照线为羊抗或兔抗小鼠IgG、羊抗兔IgG或兔抗载体蛋白IgG抗体印制而成，检测线和对照线沿层析膜横向平行排列。

2.根据权利要求1所述的试纸卡，其特征是：所述金标抗体和相应的瘦肉精-载体蛋白结合抗原或人工合成的模拟结合抗原为：第一组：金标抗盐酸克伦特罗CL抗体，检测线为CL-载体蛋白结合抗原；第二组：金标抗莱克多巴胺RAC抗体，检测线为RAC -载体蛋白结合抗原；第三组：金标抗沙丁胺醇SAL抗体，检测线为SAL-载体蛋白结合抗原；第四组：金标特步特林TBL抗体，检测线为TBL-载体蛋白结合抗原；第五组：金标抗西马特罗CIM抗体，检测线为CIM-载体蛋白结合抗原；采用其中的二组、三组、四组或五组，分别组成二联检试纸卡、三联检试纸卡、四联检试纸卡或五联检试纸卡。

3.根据权利要求1所述的试纸卡，其特征是：所述吸水垫采用滤纸、海绵或无纺布制作，所述衬板用不吸水的硬质塑胶条制作。

4.根据权利要求1所述的试纸卡，其特征是：所述样品垫采用玻璃纤维棉、尼龙膜、聚偏二氟乙烯膜或聚酯膜制作；层析膜采用尼龙膜、聚偏二氟乙烯膜、硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜制成，对照线采用硝酸纤维素膜、纯纤维素膜或羧化纤维素膜制成。

5.根据权利要求1所述的试纸卡，其特征是：所述载体蛋白为牛血清白蛋白、鸡卵清白蛋白、人血清白蛋白或钥孔血蓝蛋白。