CN201378217Y - 易贴壁激光扫描共聚焦显微镜用观察皿 - Google Patents

易贴壁激光扫描共聚焦显微镜用观察皿 Download PDF

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Abstract

一种易贴壁激光扫描共聚焦显微镜用观察皿，它涉及一种观察皿。本实用新型的目的是为了解决现有的激光扫描共聚焦显微镜专用培养皿存在的实验精度低、易产生虹吸现象、细胞贴壁所需时间长，且无法使血液原代细胞和悬浮细胞贴壁的问题。本实用新型的皿底板的上端面上开有观察腔，皿底板的上端面上还开有两个灌流腔，两个灌流腔沿观察腔的轴线对称设置，两个灌流腔均与观察腔连通，且两个灌流腔的深度h均小于观察腔的深度H，观察腔的底面到皿底板的下端面的距离为0.1mm～1mm，观察腔的底面上涂有细胞生长基质涂层。本实用新型避免了细胞培养液的流失，从而保证了预先计算好的药物浓度恒定，提高了实验精度；另外本实用新型还有效避免了虹吸现象的发生。

Description

易贴壁激光扫描共聚焦显微镜用观察皿
技术领域
本实用新型涉及一种观察皿。
背景技术
目前，医学界普遍采用的激光扫描共聚焦显微镜专用培养皿是在底板1上开一个直径为10mm左右的圆孔1-1，再用胶粘上一个0.13mm～0.17mm厚盖玻片2，圆孔1-1的壁与盖玻片2之间形成圆柱形空腔用于培养细胞，荧光探针标记也在圆柱形空腔中进行(如图1所示)。上述培养皿存在如下缺点：一、培养皿的深度较浅，定量加入的培养液极易流出来，而后向培养液中加入药物，因培养液流出使预先计算好的药物浓度发生改变，从而降低了实验精度；二、培养皿的深度较浅还会在灌流时产生虹吸现象；三、细胞贴壁所需时间长，且无法使血液原代细胞和悬浮细胞贴壁。
实用新型内容
本实用新型的目的是为了解决现有的激光扫描共聚焦显微镜专用培养皿存在的实验精度低、易产生虹吸现象、细胞贴壁所需时间长，且无法使血液原代细胞和悬浮细胞贴壁的问题，进而提供一种易贴壁激光扫描共聚焦显微镜用观察皿。
本实用新型的技术方案是：易贴壁激光扫描共聚焦显微镜用观察皿包括皿体，所述皿体由皿壁板、皿底板和细胞生长基质涂层组成，所述皿壁板和皿底板由上至下制成一体，所述皿底板的上端面上沿皿体的轴向开有观察腔，所述皿底板的上端面上沿皿体的轴向还开有两个灌流腔，所述两个灌流腔沿观察腔的轴线对称设置，所述两个灌流腔均与观察腔连通，且两个灌流腔的深度h均小于观察腔的深度H，所述观察腔的底面到皿底板的下端面的距离δ为0.1mm～1mm，所述观察腔的底面上涂有细胞生长基质涂层。
本实用新型与现有技术相比具有以下有益效果：本实用新型的观察腔与两个灌流腔连通，可定时或随时对观察皿进行灌流更换培养液，控制培养液量，避免了培养液的流失，给细胞生长提供一个良好环境，从而保证了预先计算好的药物浓度恒定，提高了实验精度；本实用新型的观察腔与两个灌流腔连通还有效避免了虹吸现象的发生；本实用新型的观察腔的底面上的细胞生长基质涂层，缩短了细胞贴壁所需的时间，促使血液原代细胞和悬浮细胞贴壁。
附图说明
图1是现有的激光扫描共聚焦显微镜专用培养皿的结构示意图，图2是本实用新型的主视剖视图，图3是图2的俯视图。
具体实施方式
具体实施方式一：(参见图2和图3)本实施方式的易贴壁激光扫描共聚焦显微镜用观察皿包括皿体3，所述皿体3由皿壁板4、皿底板5和细胞生长基质涂层7组成，所述皿壁板4和皿底板5由上至下制成一体，所述皿底板5的上端面上沿皿体3的轴向开有观察腔5-1，所述皿底板5的上端面上沿皿体3的轴向还开有两个灌流腔5-2，所述两个灌流腔5-2沿观察腔5-1的轴线对称设置，所述两个灌流腔5-2均与观察腔5-1连通，且两个灌流腔5-2的深度h均小于观察腔5-1的深度H，所述观察腔5-1的底面到皿底板5的下端面的距离δ为0.1mm～1mm，所述观察腔5-1的底面上涂有细胞生长基质涂层7。
具体实施方式二：(参见图2)本实施方式的观察腔5-1的底面到皿底板5的下端面的距离δ为0.13mm。如此设置，实验精度更高，激光扫描共聚焦显微镜下的观察图清晰。其它组成和连接关系与具体实施方式一相同。
具体实施方式三：(参见图2)本实施方式的观察腔5-1的底面到皿底板5的下端面的距离δ为0.17mm。如此设置，实验精度更高，激光扫描共聚焦显微镜下的观察图清晰。其它组成和连接关系与具体实施方式一相同。
具体实施方式四：(参见图2)本实施方式的观察腔5-1的底面上的细胞生长基质涂层7为多聚赖氨酸涂层。分子量为7～30ku多聚赖氨酸(poly-lysine)可以使细胞贴壁时间缩短至1小时，急性分离细胞贴壁时间缩短至30分钟；并促使血液原代细胞、悬浮细胞完全贴壁，血液原代细胞及悬浮细胞的贴壁时间在10小时以内。其它组成和连接关系与具体实施方式一相同。
具体实施方式五：(参见图2)本实施方式的观察腔5-1的底面上的细胞生长基质涂层7为纤维连接蛋白涂层。纤维连接蛋白(fibronectin)可以使贴壁细胞贴壁时间缩短至4小时，急性分离细胞贴壁时间缩短至30分钟；并促使血液原代细胞、悬浮细胞完全贴壁，悬浮细胞的贴壁时间在12小时以内，血液原代细胞贴壁时间在11小时以内。其它组成和连接关系与具体实施方式一相同。
具体实施方式六：(参见图2)本实施方式的观察腔5-1的底面上的细胞生长基质涂层7为层黏蛋白涂层。层黏蛋白(1aminin)可以使贴壁细胞贴壁时间缩短至3.5小时，急性分离细胞贴壁时间缩短至1小时；并促使血液原代细胞、悬浮细胞完全贴壁，悬浮细胞的贴壁时间在7小时以内，血液原代细胞贴壁时间在8小时以内。其它组成和连接关系与具体实施方式一相同。
具体实施方式七：(参见图2)本实施方式的观察腔5-1的底面上的细胞生长基质涂层7为胶原涂层。胶原可以使贴壁细胞贴壁时间缩短至3.5小时，急性分离细胞贴壁时间缩短至25分钟；并促使血液原代细胞、悬浮细胞完全贴壁，悬浮细胞的贴壁时间在8小时以内，血液原代细胞贴壁时间在9小时以内。其它组成和连接关系与具体实施方式一相同。
具体实施方式八：(参见图2)本实施方式的观察腔5-1的底面上的细胞生长基质涂层7为韧黏素涂层。韧黏素(tenascins)可以使贴壁细胞贴壁时间缩短至5小时，急性分离细胞贴壁时间缩短至30分钟；并促使血液原代细胞、悬浮细胞完全贴壁，悬浮细胞的贴壁时间在9小时以内，血液原代细胞贴壁时间在12小时以内。其它组成和连接关系与具体实施方式一相同。
具体实施方式九：(参见图2)本实施方式的观察腔5-1的底面上的细胞生长基质涂层7为层粘蛋白涂层。层粘蛋白(vitronectin)可以使贴壁细胞贴壁时间缩短至4.5小时，急性分离细胞贴壁时间缩短至30分钟；并促使血液原代细胞、悬浮细胞完全贴壁，悬浮细胞的贴壁时间在8小时以内，血液原代细胞贴壁时间在9小时以内。其它组成和连接关系与具体实施方式一相同。
具体实施方式十：(参见图2)本实施方式的激光扫描共聚焦显微镜用培养池还增加有皿盖6，所述皿盖6盖装在池体3的上端面上。如此设置，有效的防止了药物的挥发，避免了预先计算好的药物浓度因药物因挥发而发生改变，使得实验精度更精准。其它组成和连接关系与具体实施方式一、二、三、四、五、六、七、八或九相同。
采用现有的培养皿及本实用新型在相同的条件下对急性早幼粒细胞白血病NB4细胞，用台氏液洗涤两次，然后用5μmol/L的Fluo-3/AM染色，再加入0.03％PluronicF-127在37℃恒温水浴中孵育45min，然后用台氏液再洗涤两次去除细胞外残留的Fluo-3/AM，最后在激光扫描共聚焦显微镜下观察。所述激光扫描共聚焦显微镜由日本奥林巴斯株会社(Olympus)生产，其型号为Fluoview-FV300。采用现有的培养皿得到的图像模糊，而且其中的细胞移动明显；采用本实用新型得到的图像清晰，细胞移动不明显，可见细胞已经完全贴在培养皿壁上。

Claims (4)

1、一种易贴壁激光扫描共聚焦显微镜用观察皿，它包括皿体(3)，所述皿体(3)由皿壁板(4)、皿底板(5)和细胞生长基质涂层(7)组成，所述皿壁板(4)和皿底板(5)由上至下制成一体，其特征在于：所述皿底板(5)的上端面上沿皿体(3)的轴向开有观察腔(5-1)，所述皿底板(5)的上端面上沿皿体(3)的轴向还开有两个灌流腔(5-2)，所述两个灌流腔(5-2)沿观察腔(5-1)的轴线对称设置，所述两个灌流腔(5-2)均与观察腔(5-1)连通，且两个灌流腔(5-2)的深度h均小于观察腔(5-1)的深度H，所述观察腔(5-1)的底面到皿底板(5)的下端面的距离δ为0.1mm～1mm，所述观察腔(5-1)的底面上涂有细胞生长基质涂层(7)。
2、根据权利要求1所述易贴壁激光扫描共聚焦显微镜用观察皿，其特征在于：所述观察腔(5-1)的底面到皿底板(5)的下端面的距离δ为0.13mm。
3、根据权利要求1所述易贴壁激光扫描共聚焦显微镜用观察皿，其特征在于：所述观察腔(5-1)的底面到皿底板(5)的下端面的距离δ为0.17mm。
4、根据权利要求1、2或3所述易贴壁激光扫描共聚焦显微镜用观察皿，其特征在于：所述观察皿还包括皿盖(6)，所述皿盖(6)盖装在皿体(3)的上端面上。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103589639A (zh) * 2013-11-21 2014-02-19 重庆科技学院 一种活动式玻璃底细胞培养皿
CN114689403A (zh) * 2022-03-29 2022-07-01 重庆大学 一种过滤共聚焦皿

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