CN201096782Y - 用于免疫血清学渗滤法检测动物疾病抗体、抗原的反应盒 - Google Patents

Abstract

本实用新型公开了用于免疫血清学渗滤法检测动物疾病抗体、抗原的反应盒，属于动物疾病的检测装置技术领域。该反应盒包括盒盖(1)和盒体(2)，在盒盖(1)的正面上设有单排至三排，每排有5至10个圆角长条曲面形点样孔(3)和序号(4)，盒盖(1)的底面上设有榫头(6)、短圆柱状突起(7)及条状突起(8)，在盒体(2)内设有凹槽(5)、卯座(9)等部件。该盒一次可检测10～120个样品，使用方便，平均每个样品所需反应盒成本仅为传统单孔反应盒的1/7至1/5，硝酸纤维素膜、试剂及吸水填料等耗材也节省1/2以上。该盒可在动物疾病大规模检测中推广应用。

Description

用于免疫血清学渗滤法检测动物疾病抗体、抗原的反应盒

技术领域

本实用新型涉及动物疾病的检测装置技术领域，尤其涉及用于免疫血清学渗滤法检测动物疾病抗体、抗原的反应盒。

背景技术

应用免疫血清学渗滤法，例如金标免疫渗滤法诊断动物疾病以其快捷、简便、直观、敏感性和特异性优良而得到越来越广泛的应用。其检测装置以往都是由一装有硝酸纤维素膜和吸水垫的盒体，与一设有点样及观察用孔的盒盖组合而成的塑料反应盒。例如，沈丽英，干小仙等金标免疫渗滤法(DIGFA)快速检测血吸虫循环抗原的研究.中国人兽共患病杂志，2000，16(1)：12-14，报道的测定装置由三部分组成：(1)为4.0cm×3.0cm×0.6cm的塑料小盒，分盒体与盒盖两部分，盖上有一直径为1.0cm的圆孔，(2)吸水填料，(3)硝酸维生素膜。王发锁，陈双红等。复合金标法同步检测HBsAg、抗-HBc的研究。海军医学杂志，2002，23(4)：334-335；所用反应盒的外观为4.7cm×3.1cm×0.6cm，分盒体与盒盖两部份，在盒盖上有一个直径0.9cm的圆孔。此外，张素娥等(2000)、虞蔚岩等(2002)、刘玉冰等(2001)报道的反应盒外观均为4.0cm×3.0cm×0.6cm的塑料小盒，在盒盖上有一直径为0.5cm的圆孔。而卢福庄、张雪娟等斑点金标免疫渗滤法诊断家畜血吸虫病的敏感性和特异性.浙江农业学报，2006，18(6)：453-457；采用的反应盒为3cm×2.5cm×0.6cm的塑料小盒，在盒盖中央有一直径为0.8cm的小孔，盒内也装有吸水填料和硝酸纤维素膜，与其他报道有所不同的是该孔可同时检测4个样品。

上述国内的测定装置多为仿照国外同类产品而设计，所以与国外的样品外观大同小异，通常一块3-4.7cm×2.5-3.1cm×0.6cm的反应盒只有一个直径为0.5-1.0cm的点样孔，大多仅可检测一个样品，仅个别可检测1-4个样品。这在大规模疾病普查时，使用很不方便，也易出差错，限制了检测的效率，并明显增大了检测成本。

发明内容

本实用新型目的是，针对现有用于免疫血清学渗滤法检测动物疾病抗体、抗原反应盒所存在的一盒基本仅能检测一个样品，导致检测效率低、成本高与使用不便等的缺陷，对反应盒所设点样、观察用孔的数量，形状及其面积进行改进，实现每盒设多孔，每孔可点多个样品，从而达到显著提高检测效率、降低检测成本及使用方便的目的。

本实用新型目的通过以下技术方案来实现。

用于免疫血清学渗滤法检测动物疾病抗体、抗原的反应盒，包括设有点样孔的盒盖和装置吸水填料与硝酸纤维素膜的盒体，其特征在于：所述盒盖上设有单排至三排，每排有5至10个点样孔；所述的点样孔为圆角长条曲面形孔；所述盒盖与盒体的长度、宽度及盒体的高度随反应盒所设点样孔的增加而加长。

所述盒盖的面上各点样孔的侧面标有序号，使各样品可按序号点样，避免差错，并节省了对反应盒的排列时间。

所述盒体四边上口沿的中间处设有凹槽，以便于撬开盒盖，重新装填吸水填料和硝酸纤维素膜；另外也有利于排出空气，使试剂容易被吸水填料吸附，形成渗滤反应。

在所述盒盖的底面和盒体内，设置有相匹配的榫头与卯座，以使盒盖与盒体紧密结合组成反应盒。

所述盒盖所设圆角长条曲面形点样孔的底部四周呈凸起状，使其能紧压在盒体中的硝酸纤维素膜面上，以防止所加试剂从它们之间因紧压不够所形成的缝隙中流失，起不到渗滤作用。

所述盒盖的底面周边内沿设置有条状突起，以防止盒盖与盒体结合后在外力作用下发生水平位移而折断细小的榫头。

所述盒盖的底面点样孔眼的四周设置有短圆柱状突起，以压紧固定硝酸纤维素膜，防止该膜在操作或搬运过程中发生位移。

本实用新型的有益效果是：

(1)在一块长条形反应盒上设置了单排至三排，每排有5～10个圆角长条曲面形点样孔，每块反应盒上有5～30个点样孔，按每孔点2～4个样品，可检测10～120个样品，平均每个样品所需反应盒成本仅为传统单孔反应盒的1/7至1/5；在每个点样孔的上侧标有序号后，既节省了成批检测时按序排布反应盒的时间，又避免了差错。

(2)把以往圆形的点样孔改成圆角长条曲面形孔后，缩小了孔的截面积，在滴加同样量的试剂时截面积越小，渗滤时间越长，胶体金试剂与点在硝酸纤维素膜上之抗原或抗体间的反应时间则越长，抗原与抗体结合越充分，可以提高阳性检出率与灵敏度。

(3)本实用新型适当增加了盒体的高度(由一般的0.6cm增加到0.8、0.9或1.0cm)，可以填充较多的吸水填料，以使随点样数的增加而增加的试剂，在与样品反应固定后，所剩余的试剂能充分被吸附在吸水垫料上；与以往的单孔反应盒相比，本实用新型平均每个样品所消耗的吸水填料，硝酸纤维素膜和诊断试剂等原材料用量至少减少1/2。

(4)本实用新型设计合理，在盒盖与盒体上分别设置了凹槽、榫头、卯座、点样孔的底面四周呈凸起状、点样孔的底面四周设置短圆柱状突起及条状突起等辅助部件后，使盒盖与盒体结合牢固，内置的硝酸纤维素膜及吸水垫固定性好，便于携带与操作，实用性强。

附图说明

图1单排五孔反应盒整体示意图。

图2单排五孔反应盒盒盖正面俯视图。

图3单排五孔反应盒盒盖反面俯视图。

图4单排五孔反应盒盒盖反面侧视图。

图5单排五孔反应盒盒盖反面横端侧视图。

图6单排五孔反应盒盒体正面俯视图。

图7单排五孔反应盒盒体侧面透视图。

图8单排五孔反应盒盒体横端侧面透视图。

图9双排十孔反应盒盒盖正面俯视图。

图10三排三十孔反应盒盒盖正面俯视图。

上述图中：1为盒盖，2为盒体，3为点样孔，4为序号，5为凹槽，6为榫头，7为条状突起，8为圆柱状突起，9为卯座。

具体实施方式

以下通过实施例结合附图对本实用新型作进一步的详细说明，但这并不是对本实用新型的具体限定。

实施例1：(单排5孔反应盒)

根据图1至图8所示，制成9cm×1.8cm×0.8cm的塑料反应盒，该盒由盒盖1和盒体2两大部分组成；在盒盖1的中央设有5个0.7cm×0.4cm圆角长条曲面形点样孔3；在各点样孔3的上侧盒盖1面上标有序号4；点样孔3的底部四周呈凸起状；盒体2四边上口沿的中间处各设一个小凹槽5；盒盖1的底面和盒体2内，设置有相匹配的榫头6与卯座9结构；盒盖1的底面周边内沿共设置有6根条状突起7；盒盖1的底面点样孔3眼的四周共设置有12个短圆柱状突起8；安装时，先在盒体2内装上8.5cm×1.0cm×0.7cm的以吸水海棉为材料的吸水垫料，紧贴吸水垫料上面放置一张8cm×0.8cm硝酸纤维素膜后，再将盒盖1盖上，即成用于免疫血清学渗滤法检测动、植物疾病抗体的塑料反应盒。在使用时，每个点样孔3内可点2个样品，该盒共可点10个样品。

实施例2：(双排10孔反应盒)

根据图9所示，制成13.0cm×3.5cm×1.0cm的塑料反应盒，分盒盖1和盒体2两部分，在盒盖1的中央设2排各5个1.6cm×0.4cm圆角长条曲面形点样孔3；与单排5个孔反应盒相比，盒盖1除了多一排点样孔3之外，在其底面两排孔的中间加一条加强筋和6个榫头6，相应地在盒体2中间也增加了一排6个卯座9，其高度与盒体周边高度相同；因此，该盒的凹槽5为6个，榫头6与卯座9各为18个，条状突起7为8根，短圆柱状突起8为24个；以上增加榫头、卯座的目的是使盒盖与盒体结合更牢固，不会因吸水垫料的增加而使盒盖盖不紧；另外点样孔3的长度加大为1.6cm×0.4cm，使每个点样孔3中可点4个样品，每块长条形反应盒共可检测40个样品，进一步降低检测成本。由于反应孔的加长，使反应盒的总长度也变长，达到了13cm，宽度为3.5cm。其余结构、部件与实施例1单排5孔反应盒相同。

安装时，盒体2内先装上2条12.5cm×1.0cm×0.9cm吸水垫料，在每条吸水垫上面各放置一张12.0cm×0.8cm硝酸纤维素膜，合上盒盖1后，即成双排10孔塑料反应盒。

双排10孔长条形反应盒在疾病的大规模普查时使用起来比较方便，反应盒的成本比单排5个孔长条形反应盒更低廉。

实施例3：(三排30孔反应盒)

根据图10所示，制成19.5cm×5.3cm×0.9cm的塑料反应盒，分盒盖1和盒体2两部分，在盒盖1的中央设3排各有10个1.1cm×0.5cm圆角长条曲面形点样孔3，该反应盒的特点是，除了盒盖1有三排点样孔3之外，在其底面每两排点样孔3的中间多了一条加强筋和6个榫头6；在盒体2中间设有二排各6个卯座9，其高度与盒体2周边高度相同；因此，该盒的凹槽5为6个，榫头6与卯座9各为44个，条状突起7为12根，短圆柱状突起8为66个，其余结构、部件与实施例1反应盒相同。

安装时，盒体2内先装上3条19.0cm×1.0cm×0.8cm吸水垫料，再在每条吸水垫料上面放置一张18.5cm×0.9cm硝酸纤维素膜，合上盒盖1，即成三排30孔塑料反应盒。该盒点样孔3的长度为1.1cm×0.5cm，每个点样孔3可以点3个样品；每排有10个点样孔3，每块反应盒共可检测90个样品，在成批样品待检时比单排5个孔反应盒的使用更方便，成本也更低廉。

对下述试验例所述试液的说明：

甲液：pH为6.47，由PBS+0.5％BSA制备而成的洗涤液；

乙液：血吸虫抗原胶体金试剂，经胶体金的制备；血吸虫可溶性抗原与纯化抗原的制备；胶体金pH值的调整及血吸虫抗原包被胶体金等步骤制备而成。

具体制备方法详见专利申请号200510050188.1说明书；

试验例1：(一排5孔反应盒应用于牛血吸虫病抗体检测)

人工感染血吸虫尾蚴201～325条的牛5头，在感染后0、21、28、35、42、49和56天分别采血制备血纸及血清各35份。用打孔机(直径0.55cm)裁取0.24cm²血纸圆片一片，加0.5mL生理盐水浸泡30分钟；血清0.01mL加0.79mL生理盐水，则为80倍血清稀液释。利用实施例1制备的单排5孔反应盒和圆孔直径0.8cm的传统单孔反应盒，用内径1mm的玻璃毛细管吸取血纸浸出液或血清稀释液，在反应盒的点样孔中点样，单排5孔反应盒的每个孔可点2个样品，传统的单孔反应盒按常规仅点1个样品，3分钟后，往单排5孔反应盒的每个点样孔中加甲液1滴，往传统单孔反应盒的点样孔中滴加2滴甲液，待甲液渗滤过硝酸纤维素膜而被吸入吸水垫料后，再往单排5孔反应盒的每个点样孔中加1滴血吸虫抗原胶体金试剂(乙液)，往单孔反应盒的点样孔中加2滴乙液，待乙液渗入后再分别加1滴或2滴蒸馏水，待蒸馏水渗入后即可观察检测结果，若出现红色斑点可判为血吸虫病阳性，粉红色判为可凝，黄色或不显色的为阴性。结果，上述两种反应盒均可以检测出全部感染血吸虫尾蚴28～56天的血纸或血清中的血吸虫抗体。单排5个点样孔反应盒的同一点样孔中的2个样品和不同孔之间没有发生交叉污染，不影响检测结果。

传统4.0cm×3.0cm×0.6cm的单孔塑料小盒(圆孔直径1.0cm)空盒的重量为3.742g，3cm×2.5cm×0.6cm的单孔塑料小盒(圆孔直径0.8cm)空盒的重量为2.506g，而本实用新型9cm×1.8cm×0.8cm的塑料单排5孔反应盒空盒的重量为5.265g，共可检测10个样品，平均检测一个样品所耗用塑料原料仅为上述两种传统塑料小盒的1/7与1/5多一点。假如采用多排多孔反应盒，可节省的原料将更加可观。

单排5孔反应盒每个点样孔的面积为0.2456cm²左右，而直径0.8cm单孔反应盒(圆孔中等大小)圆孔的面积为0.5024cm²，差不多是多孔反应盒小孔面积的2倍。所以其每个孔所加各种试剂的用量刚好是多孔反应盒每个小孔的2倍，而多孔反应盒一个孔可点2个样品，所以后者检测一个样品实际试剂耗用量仅为传统单孔反应盒的1/4。另外吸水垫料的用量也相应减少了。这样就进一步降低了采用多孔反应盒的检测成本。

试验例2：(双排10孔反应盒应用于兔血吸虫病抗体检测)

人工感染50～500条血吸虫尾蚴的兔5只，在0、21、28、35、42和49天分别采血制备血纸及血清各30份；健康兔10只，分别采制血纸和血清。用打孔机裁取0.24cm²血纸圆片1片，加0.5mL生理盐水浸泡30分钟；血清0.01mL加0.79mL生理盐水，则为80倍血清稀液释。利用实施例2制备的双排10孔反应盒和传统的单孔反应盒，用内径1mm的玻璃毛细管吸取血纸浸出液或血清稀释液，在双排10孔反应盒的点样孔中点样(毛细管与反应盒小孔中的硝纤维素膜轻触0.5秒，约1μl血样被硝酸纤维素膜吸附呈圆点状斑点)，每个点样孔点4个样品，在单孔反应盒的小孔中点1个样品，3分钟后，往每个点样孔中滴加2滴甲液，待甲液渗入吸水垫料后，再往每个孔中加2滴乙液，待乙液渗入后加2滴蒸馏水，待蒸馏水渗入后观察检测结果，出现红色斑点的样品为血吸虫病阳性，粉红色判为可凝，黄色或不显色的为阴性。结果两种反应盒之间的检测结果完全相同，均可以检测出全部感染血吸虫尾蚴28～56天的兔血纸或兔血清中的血吸虫抗体，人工感染血吸虫尾蚴前及感染后21天前为阴性反应，10只健康兔血样也均为阴性反应。试验证明，在双排10孔反应盒的同一孔中4个样品之间，同一块反应盒中不同样品之间没有发生交叉污染，不会影响检测结果。

试验例3：(三排30孔反应盒应用于猪囊虫病抗体的检测)

人工感染囊虫21天、35天病猪血清20份，自然感染囊虫病阳性猪血清8份，囊虫病阴性猪血清62份，囊虫病猪血纸5份，来自健康猪群猪血纸85份。血清用无菌生理盐水作1∶128倍稀释备用，血纸用打孔机裁取0.24cm²血纸圆片一片，加0.3mL生理盐水浸泡，每隔10分钟摇动一次，30分钟后即成血纸浸出液。用实施例3的三排30孔反应盒，以玻璃毛细管吸取血清稀释液或血纸浸出液点样，每孔点3个样品，2分钟后，每孔滴加洗涤液2滴，待洗涤液渗入吸水垫料后，滴加囊虫抗原胶体金试剂2滴，待渗入后再加蒸馏水2滴，观察反应结果，结果表明，自然感染囊虫病阳性猪血清稀释液、人工感染21天、35天囊虫病猪血纸浸出液或血清稀释液点样处均显现红色斑点，而健康猪和囊虫病阴性猪血纸浸液或血清稀释液点样处显示淡粉色斑点、黄色斑点或不显示斑点。说明该反应盒也能应用于家畜囊虫病抗体的检测。

试验例4：(单排5孔反应盒应用于猪弓形体病抗体的检测)

从兰州兽医研究所购进猪弓形体病阳性猪血清8份，阴性血清2份，查病原体法确诊为弓形体病猪血清6份，健康猪血清34份，用无菌生理盐水稀释160倍。用毛细管取血样在实施例1的单排5孔反应盒上点样，3分钟后用洗涤液往每个点样孔中滴加洗涤液1滴，待洗涤液渗入硝酸纤维素膜下的垫料后，滴加猪弓形体抗原胶体金试剂1滴，待试剂渗入后，每孔加蒸馏水1滴，待蒸馏水渗入后观察反应结果，显示红色斑点判为阳性，粉红色判为可凝，黄色斑点或不显示斑点判为阴性。结果8份弓形体阳性血清和6份自然感染弓形体病猪血清均为阳性反应，36份弓形体阴性猪和健康猪血清显示阴性反应。说明本外观新型反应盒也可用于弓形体抗体的检测。

试验例5多孔反应盒用于牛血吸虫病抗原的检测

人工感染血吸虫尾蚴前健康牛血清5份，人工感染血吸虫尾蚴后42天牛血清5份，血清用生理盐水作40倍稀释，用内径1mm的玻璃毛细管吸取血清稀释液，点在实施例1制备的单排多孔反应盒上，在同一个孔内点同一头牛感染前后的2个样品，3分钟后每孔加1滴洗涤液，待洗涤液渗入后，加1滴血吸虫抗体胶体金试剂，待试剂渗入后加1滴蒸馏水，蒸馏水渗入后观察斑点颜色。结果只有感染42天的样品点样处显示红色斑点可判定为阳性。

Claims (6)

1. 用于免疫血清学渗滤法检测动物疾病抗体、抗原的反应盒，包括设有点样孔(3)的盒盖(1)和装置吸水填料与硝酸纤维素膜的盒体(2)，其特征在于：所述盒盖(1)上设有单排至三排，每排有5至10个点样孔(3)；所述的点样孔(3)为圆角长条曲面形孔；所述盒盖(1)与盒体(2)的长度、宽度及盒体(2)的高度随反应盒所设点样孔(3)的增加而加长。

2. 根据权利要求1所述的反应盒，其特征在于所述盒体(2)四边上口沿的中间处设有凹槽(5)。

3. 根据权利要求1所述的反应盒，其特征在于所述盒盖(1)的底面和盒体(2)内，设置有相匹配的榫头(6)与卯座(9)。

4. 根据权利要求1所述的反应盒，其特征在于所述盒盖(1)所设圆角长条曲面形点样孔(3)的底部四周呈凸起状。

5. 根据权利要求1所述的反应盒，其特征在于所述盒盖(1)的底面周边内沿设置有条状突起(7)。

6. 根据权利要求1所述的反应盒，其特征在于所述盒盖(1)的底面点样孔(3)眼的四周设置有短圆柱状突起(8)。

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