CN1993480A - Il－17表达预测皮肤炎症的用途；治疗方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了诊断个体出现皮肤炎症、尤其是牛皮癣的倾向性的方法。本发明还提供了以IL－17和/或IL－23的拮抗剂进行治疗的方法。

Description

IL-17表达预测皮肤炎症的用途；治疗方法

本申请要求2004年5月3日提交的第60/567747号美国临时专利申请的权益，出于所有目的通过引用将其并入本文。

                      技术领域

本发明涉及分析皮肤炎症性病症(尤其是牛皮癣)出现的倾向性的方法。本发明还提供了利用IL-17A、IL-17F和/或IL-23的拮抗剂预防此类皮肤炎症性病症的治疗方法。

                      发明背景

皮肤作为内外环境之间的重要屏障，防止与可能的有害抗原接触。在抗原/病原体渗入时，炎症性应答被诱导以去除抗原。该应答导致主要由T细胞、多形核细胞和巨嗜细胞构成的皮肤渗透(参见，例如Williams and Kupper(1996)Life Sci.，58：1485-1507.)。通常，病原体触发的该炎症性应答处于严格控制下，随着病原体的清除而停止。

在某些情况下，这种应答反应在无外源刺激和无适当控制下发生，导致皮肤性(cutaneous)炎症。作为上述细胞渗透以及从这些细胞分泌的细胞因子的结果，皮肤性炎症包括数种炎症性病症，例如瘢痕性类天疱疮、硬皮病、化脓性汗腺炎、中毒性表皮坏死溶解、痤疮、骨炎、移植物抗宿主病(GvHD)、坏疽性脓皮病和白塞氏病(参见，例如Williams and Griffiths(2002)Clin.Exp.Dermatol.，27：585-590)。最常见形式的皮肤性炎症为牛皮癣。

牛皮癣以T细胞介导的与炎症性渗透结合的角质化细胞过度增殖为特征。这种疾病具有确定的特殊性，其涵盖包括慢性斑损伤、斑疹和脓疱损伤在内的临床表型(参见，例如Gudjonsson，et al.(2004)ClinExp.Immunol.135：1-8)。大约10％的牛皮癣患者出现关节炎。这种疾病具有强烈而复杂的遗传倾向性，在同卵双胞胎中有60％的一致性。

典型的牛皮癣损伤为边缘明确的、由厚的银色鳞片覆盖的红斑(erthematous plaque)。牛皮癣组织的炎症和过度增殖与不同于正常皮肤的组织学、抗原性和细胞因子状况有关。与牛皮癣有关的细胞因子包括：TNFα、IL-18、IL-15、IL-12、IL-7、IFNγ、IL-17A和IL-23(参见前述Gudjonsson等人)。IL-17A已在牛皮癣皮肤中被探测到，现已知其介导角质化细胞的增殖。

至今，由于缺乏对未损伤和损伤的牛皮癣组织之间细胞因子变化的了解妨碍了对牛皮癣发作的预测。本发明提供了相对于正常皮肤比较IL-17A和IL-17F在未损伤的牛皮癣皮肤中表达的方法，从而使评估形成损伤性牛皮癣的可能性成为可能，满足了这种还未达到的要求。

                      发明内容

本发明部分地基于这样的发现，即与正常或非牛皮癣皮肤组织相比，IL-17A和IL-17F(合起来，“IL-17”)mRNA水平在未损伤的牛皮癣组织中有相当大的升高。

本发明提供了评价个体出现炎症性皮肤病症的倾向性的方法，包括：a)获得所述个体的皮肤样品；b)对样品中IL-17表达的水平定量。在一个实施方案中，IL-17的表达是mRNA表达，并且IL-17的表达水平通过实时PCR来定量。

本发明还指出IL-17的表达水平的平均值介于正常皮肤的5倍高至20倍高之间。该炎症性皮肤病症为皮肤性炎症，尤其是牛皮癣。

在另一实施方案中，所述皮肤样品来自未损伤的牛皮癣皮肤。也包括在内的是，所述未损伤的牛皮癣皮肤样品来自这样的个体，其具有：a)牛皮癣家族史；或b)之前表现出牛皮癣症状。在另一实施方案中，个体是人。

本发明还提供了防止皮肤炎症的方法，包括对展示出出现皮肤炎症的倾向性的个体给予a)IL-17的拮抗剂；b)IL-23的拮抗剂；或IL-17的拮抗剂和IL-23的拮抗剂。在一个实施方案中，所述皮肤炎症为皮肤性炎症(cutaneous inflammation)，尤其是牛皮癣。在防止皮肤炎症的这种方法中，根据实时PCR定量，个体表现出在未损伤的牛皮癣皮肤样品中IL-17的表达较之正常皮肤至少5倍高。

本发明还提供了IL-17和/或IL-23的拮抗剂：a)抗体或其片段；b)siRNA；c)小分子抑制剂。在另一实施方案中，所述抗体是a)多克隆抗体；b)单克隆抗体；c)人源化抗体；d)双特异性抗体。

                      详细说明

当用在本文中，包括用在所附的权利要求中，单数形式的词，如一(“a”)、一(“an”)和这、那(“the”)包括它们相应的复数含义，除非在上下文中有明确说明。本文引用的所有参考文献都通过引用并入本文，并入程度如同单独或特定指出通过引用将每一单独的出版物、专利申请或专利并入本文一样。

I.定义

分子的“活性”可描述或指分子与配体或受体的结合、催化活性、刺激基因表达的能力、抗原活性、调节其它分子的活性等等。分子的“活性”还可指调节或维持细胞之间相互作用(例如粘附)的活性或维持细胞的结构(例如细胞膜或骨架)的活性。“活性”也可指特异性活性，例如[催化活性]/[mg蛋白质]、或[免疫活性]/[mg蛋白质]等等。

当应用于动物、人、实验个体、细胞、组织、器官或生物液体，“给药”和“处理”指使外源药学的、治疗性的、诊断性的试剂或组合物与所述动物、人、个体、细胞、组织、器官或生物液体接触。“给药”和“处理”可例如指治疗性的、药物代谢动力学的、诊断的、研究性的和实验性的方法。对细胞的处理包括使试剂与细胞接触，以及试剂与液体接触，而该液体是与该细胞接触着的。“给药”和“处理”还指通过试剂、诊断物、结合组合物，或通过另一细胞对例如细胞进行体外和离体处理。处理包括例如在混合的细胞反应中使用纯化的免疫细胞，或者将纯化的免疫细胞用于对研究的动物或人个体给药。本发明关注对细胞、纯化的细胞、受刺激的细胞、富集了特定细胞和纯化的细胞的细胞群的处理。处理还包括这样的情况，其中给予的试剂或给予的细胞被代谢、降解或被储存条件所修饰。

“氨基酸”指天然存在的和合成的氨基酸，以及以与天然存在的氨基酸类似的方式起作用的氨基酸类似物和氨基酸模拟物。天然存在的氨基酸为那些由遗传密码编码的氨基酸，包括硒蛋氨酸，以及那些在纳入多肽后被修饰的氨基酸，例如羟脯氨酸、O-磷酸丝氨酸、O-磷酸酪氨酸、γ-羧基谷氨酸和胱氨酸。氨基酸类似物指与天然存在的氨基酸具有相同的基本化学结构的化合物，即α-碳结合到氢、羧基、氨基和R基团，例如高丝氨酸、原亮氨酸、蛋氨酸亚砜、甲硫氨酸甲基锍。这类类似物具有经修饰的R基团(例如原亮氨酸)或经修饰的肽骨架，但保留与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构。氨基酸模拟物指结构与氨基酸的通常化学结构不同，但以与天然存在的氨基酸类似的方式起作用的化合物。本文可以它们的通常已知的三字母符号或以它们的单字母符号表示氨基酸。

“结合组合物”指能够结合目标的分子、小分子、大分子、抗体、其片段或类似物、或可溶受体。“结合组合物”也指分子复合物(例如非共价复合物)、离子化的分子以及例如被磷酸化、酰基化、交联、环化或有限切割修饰的共价或非共价修饰的分子，其能够结合目标。“结合组合物”也指与稳定剂、赋形剂、盐、缓冲剂、溶剂、添加剂组合的分子，其能够结合目标。“结合”可定义为结合组合物与目标的缔合，在该结合组合物可溶于或悬浮在溶液中的情况下，该缔合导致结合组合物的正常布朗运动的减弱。

“双特异性抗体”通常指共价复合物，但也可指来自两种不同抗体的结合片段、来自两种不同抗体的人源化结合片段或源于来自两种不同抗体的结合片段的肽模拟物的稳定非共价复合物。每一结合片段识别不同的目标或表位，例如不同的受体，例如抑制受体和活化受体。双特异性抗体一般表现出对两种不同抗原的特异性结合。

“皮肤性炎症”指皮肤或真皮中免疫应答的不正确调节，导致炎症性细胞的渗透和包括细胞因子在内的各种炎症性因子的释放。皮肤性炎症包括牛皮癣、特应性皮炎、硬皮病等。

可按下文所述对活化或抑制中的终点(endpoint)进行监测。可通过终点来监测对例如细胞、皮肤组织、角质化细胞、生理液体、组织、器官以及动物或人个体的处理的应答和活化、抑制。该终点可包括预定量的或预定百分比的例如炎症、致肿瘤性或细胞脱颗粒或分泌的指标，例如细胞因子、毒性氧或蛋白酶的释放。该终点可包括例如预定量的离子内流或转运；细胞迁移；细胞粘附；细胞增殖；转移的可能性；细胞分化；以及表型的改变，例如与炎症、凋亡、转化、细胞周期或转移有关基因的表达的改变(参见，例如，Knight(2000)Ann.Clin.Lab.Sci. 30：145-158；Hood and Cheresh(2002)Nature Rev.Cancer2：91-100；Timme，et al.(2003)Curr.Drug Targets 4：251-261；Robbinsand Itzkowitz(2002)Med.Clin.North Am.86：1467-1495；Grady andMarkowitz(2002)Annu.Rev.Genomics Hum.Genet.3：101-128；Bauer，et al.(2001)Glia 36：235-243；Stanimirovic and Satoh(2000)Brain Pathol.10：113-126)。

为了测定抑制的程度，例如，以可能的活化剂或抑制剂处理包含给定的例如蛋白、基因、细胞或生物体的样品或测定物，并与无抑制剂的对照样品进行比较。对照样品，即不以拮抗剂处理的样品被指定为相对活性100％。当相对于对照的活性值为约90％或更少、典型地为约85％或更少、更典型地为约80％或更少、最典型地为约75％或更少、通常为约70％或更少、更通常为约65％或更少、最通常为约60％或更少、典型地为约55％或更少、经常为约50％或更少、更经常为约45％或更少、最经常为约40％或更少、优选为约35％或更少、更优选为约30％或更少、再更优选为约25％或更少、最优选少于约25％时，实现了抑制。当相对于对照的活性值为约110％、通常至少为120％、更通常至少为140％、更通常至少为160％、经常至少为180％、更经常至少为2倍、最经常至少为2.5倍、一般至少为5倍、更一般至少为10倍、优选至少为20倍、更优选至少为40倍以及最优选为40倍以上时，实现了活化。

“外源的”指在生物体、细胞、或人体之外产生的物质，这取决于上下文。“内源的”指在细胞、生物体或人体内产生的物质，这取决于上下文。

除非有明确说明，此处所用的“IL-17”指IL-17A和/或IL-17F。

“IL-17的表达水平”指相对泛素归一化的实时PCR值。在经对数转化的数据上进行Kruskal-Wallis统计分析(中值法)。通常，所计算的平均IL-17mRNA表达水平在未损伤的牛皮癣组织中是正常组织中的2倍至50倍高。优选该水平为5-20倍高。

“标记物”指细胞、组织、器官、动物或人个体的表型。标记物用于例如在细胞纯化、定量、迁移、活化、成熟或发生中检测细胞，并可用于体外和体内研究。活化标记物为与细胞活化有关的标记物。

“单功能性试剂”例如指特异地结合单一类型目标的抗体，源自抗体的结合位点的结合组合物，抗体模拟物，可溶受体，其工程化的、重组的、或化学修饰的衍生物。例如，单功能性试剂可含有一个或多个针对IL-17或IL-23配体或受体的功能性结合位点。“单功能性试剂”也指含有一个或多个针对例如IL-17或IL-23配体或受体的功能性结合位点以及一个或多个针对另一类型受体的非功能性结合位点的多肽、抗体或其它试剂。例如，单功能性试剂可包括针对IL-17或IL-23配体或受体的抗体结合位点加上Fc片段，该Fc片段经工程化以便不与Fc受体特异结合。

“核酸”指脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸及其聚合物，无论是单链形式还是双链形式。术语核酸可与基因、cDNA、mRNA、寡核苷酸和多核苷酸互换地使用。具体的核酸序列还隐含地包括“等位变体”和“剪接变体”

皮肤的“状况”包括病症，但也包括不必要划分为病症的skincle状态，例如美容状况或正常生理学状态。皮肤的病症包括细胞病症，其中该细胞与该皮肤为同一遗传谱系，例如皮肤角质化细胞的前体细胞，其中该前体注定成为角质化细胞。

“样品”指来自人、动物的样品，或指研究样品，例如细胞、组织、器官、液体、气体、气溶胶、膏剂、胶体、或凝结的材料。“样品”可在体内测试，例如无需从人或动物中取出，或者可在体外测试。可在处理后对样品例如通过组织学方式进行测试。“样品”还例如指构成液体或组织样品的细胞或与液体或组织样品分离的细胞。“样品”还可以指从人或动物中新鲜获取的细胞、组织、器官或液体，或指经处理或储藏的细胞、组织、器官或液体。

提供了小分子用于处理皮肤生理和病症，例如皮肤炎症。“小分子”被定义为分子量小于10kD、典型地小于2KD、优选小于1KD的分子。小分子包括但不限于无机分子、有机分子、含有无机成分的有机分子、包含放射性原子的分子、合成分子、肽模拟物和抗体模拟物。作为治疗剂，与较大的分子相比，小分子可对细胞有更大的渗透性，较不易降解以及较不易引起免疫应答。已描述过小分子毒素(参见，例如授予Stewart等人的美国专利6,326,482)。

当指配体/受体、抗体/抗原或其它结合对时，“特异地”或“选择性地”结合表示下述结合反应，其对于蛋白质和其它生物产物的异质群体中该蛋白的存在来说是决定性的。在指定的条件下，特异的配体结合特定的受体，而不以显著量结合存在于样品中的其它蛋白。所预期的方法中的抗体、衍生自抗体的抗原结合位点的结合组合物与它的抗原或其变体或突变蛋白结合的亲和力或结合常数是任何其它抗体或其所衍生的结合组合物的至少2倍大、优选至少10倍大、更优选至少20倍大并且最优选至少100倍大。在优选的实施方案中，例如按照Scatchard分析(Munsen，et al.(1980)Analyt.Biochem.107：220-239)，该抗体具有大于约10⁹升/摩尔的亲和力。

当应用于人、兽医学或研究对象时，“处理”指治疗性处理，防止或预防措施，指研究或诊断应用。当应用于人、兽医学或研究个体、或细胞、组织、或器官时，“处理”包括使IL-17或IL-23的拮抗剂与人或动物个体接触，或与细胞、组织、生理区室或生理液体接触。“对细胞、组织、器官或个体的处理”包括这样的情况，其中未证实IL-17或IL-23拮抗剂已与它们各自的受体或表达这些受体的细胞接触。

治疗剂的“治疗有效量”定义为：药物制剂中的每一活性组分的下述量，该量足以显示出对患者有意义的益处，即引起对所处理状况的症状的减弱、缓解或预防。当药物制剂包括诊断试剂，“治疗有效量”定义为足以产生信号、图像或其它有助于诊断的诊断参数的量。药物制剂的有效量会随各种因素而改变，例如个体的敏感性程度、年龄、性别和个体的体重以及个体的特应性(idiosyncratic)的反应(参见，例如美国专利5,888,530)。

II.概述

哺乳动物皮肤由真皮(内)和表皮(外)层组成。表皮几乎完全由角质化细胞(95％)以及包括郎格罕(Langerhans)细胞和黑素细胞在内的其它细胞类型构成。表皮生长迅速，在小鼠为每7天更新一次。在牛皮癣，由于IL-17诱导的角质细胞过度增殖，这种更新缩短到3-5天。

本发明部分地基于这样的发现，即与正常或非牛皮癣组织相比，未损伤的牛皮癣组织以明显升高的水平表达IL-17A mRNA。通过实时定量PCR(TaqMan)分析人炎症皮肤块。该皮肤块包括正常的、未损伤的和损伤的牛皮癣皮肤组织，以及损伤的和未损伤的特应性皮炎皮肤样品。未损伤的和损伤的牛皮癣组织取自PASI(牛皮癣面积和严重性指数)分值在9-20.75之间的患者样品。未损伤的和损伤的特应性皮炎组织取自EASI(湿疹面积和严重性指数)分值在1.85-35.95之间的患者样品。

PCR分析的结果对泛素进行归一化，并在对数转化的数据上进行Kruskal-Wallis统计分析(中值法)。正常的皮肤组织的平均IL-17AmRNA表达值为0.42，而与正常皮肤比较时，牛皮癣未损伤组织、牛皮癣损伤组织、未损伤的特应性皮炎组织以及损伤的特应性皮炎组织的平均IL-17A mRNA表达值分别为5.19(高12.3倍)、25.7(高61.2倍)，0.72(高1.7倍)和2.1(高5倍)，如表1所示(L＝损伤的、NL＝未损伤的、AD＝特应性皮炎)。

表1：经归一化的IL-17A值

	正常皮肤	牛皮癣NL	牛皮癣L	AD NL	ADL
							0.13	0.08	0.06	0.12	0.11
	4.95	16.41	55.06	0.19	0.12
							0.95	19.00	46.43	0.08	0.12
	0.09	18.13	27.84	0.07	1.53
							0.08	0.89	13.35	0.16	0.08
	0.10	0.08	4.69	0.11	0.07
							0.06	0.66	5.53	0.09	1.31
	0.06	2.37	10.43	0.10	0.08
							1.39	1.79	22.67	0.18	1.46
	0.07	3.84	24.76	1.55	6.00
							0.09	6.26	5 1.92	1.58	0.54
	0.76	9.39	49.53	0.16	0.09
							0.06	0.09	16.50	0.53	9.01
	1.53	0.87	22.67	1.29	2.07
							0.08	0.05	23.21	0.95	1.46
	0.11	1.02	20.51	0.09	0.53
							0.20	0.08	11.26	0.39	3.16
	0.11	5.25	6.44	4.29	14.59
							0.09	30.77	39.85	0.07	1.29
	0.18	1.05	9.78	0.08	0.05
							0.06		18.34	1.07	3.62
	0.07	0.10	41.04	0.10	0.87
							0.15	0.84	49.24	0.08	0.09
	0.10	0.75	52.22	0.16	0.11
							1.54	4.92	19.45	1.33	2.10
	0.12			0.09	1.60
							0.09			0.06	0.92
	0.11			2.58	5.80
							0.95			0.93	2.68
	0.05			3.13	1.62
							0.07
	0.06
							0.05
	0.08
							0.10
						平均值	0.42	5.19	25.71	0.72	2.10
相对于正常值增加的倍数		12.37	61.22	1.72	5.01
中值	0.10	1.03	22.67	0.16	1.30
						相对于正常值增加的倍数		10.84	238.01	1.66	13.68

类似地进行了对IL-17F mRNA表达的分析。PCR分析的结果对泛素进行归一化，并在对数转化的数据上进行Kruskal-Wallis统计分析(中值法)。正常的皮肤组织的平均IL-17F mRNA表达值为0.90，而与正常皮肤比较时，牛皮癣未损伤组织、牛皮癣损伤组织、未损伤的特应性皮炎组织以及损伤的特应性皮炎组织的平均IL-17F表达值分别为9.39(高10.43倍)、55.85(高62.05倍)，1.39(高1.54倍)和4.13(高4.59倍)，如表2所示(L＝损伤的、NL＝未损伤的、AD ＝特应性皮炎)。

表2：经归一化的IL-17F值

	正常皮肤	牛皮癣NL	牛皮癣L	AD NL	AD L
							0.15	0.15	1.71	0.19	1.41
	3.22	23.90	67.24	4.72	3.28
							1.49	12.30	61.57	0.09	0.18
	0.27	33.80	64.53	. 1.89	3.93
							0.11	2.59	79.74	0.16	0.09
	0.11	0.13	21.50	3.13	1.19
							1.12	0.25	20.51	0.11	0.13
	0.08	20.03	36.49	0.10	2.30
							4.22	0.09	85.06	0.24	4.80
	0.08	0.17	44.56	0.21	11.13
							3.30	3.54	82.60	2.17	4.77
	2.64	37.14	137.74	0.17	0.09
							0.84	0.14	27.52	2.10	7.38
	2.53	1.85	65.68	2.25	7.20
							2.58	1.35	21.62	1.79	18.24
	0.10	0.15	22.01	0.16	1.12
							0.93	0.08	64.91	0.22	10.19
	0.31	13.43	27.20	7.33	38.92
							0.80	50.12	68.44	0.10	0.12
	0.30	7.08	71.73	0.09	0.12
							0.13		86.58	1.40	1.17
	0.10	0.17	49.82	0.09	0.09
							0.22	0.12	47.54	1.29	0.12
	0.12	5.40	106.98	0.16	1.48
							1.16	11.39	33.02	0.11	0.97
	0.13			0.14	0.15
							0.10			1.62	0.08
	0.14			1.37	2.20
							0.77			4.37	0.11
	0.16			3.89	0.90
							2.83
	0.13
							0.09
	0.09
							0.13
						平均值	0.90	9.39	55.85	1.39	4.13
相对于正常值增加的倍数		10.43	62.05	1.54	4.59
中值	0.22	2.22	61.57	0.23	1.18
						相对于正常值增加的倍数		10.19	282.24	1.04	5.40

首先从活化的啮齿类T细胞杂交瘤中分离出的IL-17A最初被称为CTLA-8(参见，例如Rouvier，et al.，(1993)J.Immunol.150：5445-5456)。该细胞因子与Herpesvirus samiri中的开放阅读框有相当的同源性(58％)。最初的生物学分析发现IL-17可促进其它炎症性细胞因子和诸如IL-6、IL-8和G-CSF等的趋化因子从上皮、内皮和成纤维细胞产生(参见，例如Yao，et al.(1995)Immunity 3：811-821；Kennedy，et al.(1996)J.Interferon Cytokine Res.16：611-617；以及Fossiez，et al.(1996)J.Exp.Med.183：2593-2603)。IL-17与多种炎症性和增殖性病症相关，这些病症包括风湿性关节炎、气道(airway)炎症、移植排斥、系统性硬化、牛皮癣和肿瘤生长(参见，例如Aggarwal and Gurney(2002)J.Leukocyte Biology 71：1-8)。

IL-17F与IL-17A有高度的同源性。但是，IL-17F(也称为ML-1)的表达水平比IL-17A的低，并且IL-17F的表达模式与IL-17A的表达模式有相当大的区别。RT-PCR结果表明IL-17F由活化的CD4+T细胞和活化的单核细胞表达(参见，例如Starnes，et al.(2001)J.Immunol.167：4137-4140)。IL-17F表达和活性已与肺上皮细胞以及血管发生相联系起来(参见，例如Starnes，et al.supra；Kawaguchi，et al.(2001)J.Immunol.167：4430-4435；以及Kawaguchi，et al.(2004)J.Allergy Clin.Immunol.114：1256-1273)。本发明揭示IL-17F在损伤和未损伤牛皮癣和特应性皮炎中的表达反映了IL-17A在相同组织中的表达(参见，例如表1和表2)。因此，利用IL-17家族成员之一或二者的表达水平会对预测这两种炎症性皮肤病症的发作提供有用信息。另外，拮抗这些细胞因子之一或二者会提供预防性治疗，以避免这些病症的发作。

IL-23是异源二体细胞因子，其由一种独特的亚基p19(也称为IL-B30、IL-30)与来自IL-12的p40亚基缔合而构成(参见，例如Oppmann，et al.(2000)J.Immunity 13：715-725)。IL-23p19的转基因过度表达显示足以诱导全身性炎症和过早死亡，但是，这种效果看起来与INFγ无关。因此，暗示IL-23具有独立于并实质上不同于IL-12的效果(参见，例如Wiekowski，et al.(2001)J.Immunol.166：7563-7570)。最近的研究已显示IL-23可诱导不同的T细胞活化状态，导致IL-17的产生(参见，Aggarwal，et al.(2003)J.Biol.Chem 278：1910-1914)。因此，拮抗IL-17和/或IL-23应能有效防止皮肤炎症，尤其是牛皮癣。

III.结合组合物

由本发明的方法提供的结合组合物包括下述试剂，例如IL-17和IL-23、可溶受体和抗体的试剂以及编码这些试剂的核酸。

可制备单克隆、多克隆和人源化抗体(参见，例如Sheperd andDean(eds.)(2000)Monoclonal Antibodies，Oxford Univ.Press，New York，NY；Kontermann and Dubel(eds.)(2001)Antibody Engineering，Springer-Verlag，New York；Harlow and Lane(1988)Antibodies ALaboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold SpringHarbor，NY，pp.139-243；Carpenter，et al.(2000)J.hnmunol.165：6205；He，et al.(1 998)J.Immunol.160：1029；Tang，et al.(1999)J.Biol.Chem.274：27371-27378；Baca，et al.(1997)J.Biol.Chem.272：10678-10684；Chothia，et al.(1989)Nature 342：877-883；Foote and Winter(1992)J.Mol.Biol.224：487-499；授予Vasquez等人的美国专利6,329,511)。

人源化的备选方法是使用在噬菌体上展示的人抗体库或转基因小鼠中的人抗体库(Vaughan，et al.(1996)Nature Biotechnol.14：309-314；Barbas(1995)Nature Medicine 1：837-839；Mendez，et al.(1997)NatureGenetics 15：146-156；Hoogenboom and Chames(2000)Immunol.Today21：371-377；Barbas，et al.(2001)Phage Disp1ay：A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，New York；Kay，et al.(1996)Phage Display of Peptides and Proteins：A LaboratoryManual，Academic Press，San Diego，CA；de Bruin，et al.(1999)NatureBiotechnol.17：397-399)。

单链抗体和双链抗体(diabody)也已有描述(参见，例如，Malecki，etal.(2002)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 99：213-218；Conrath，et al.(2001)J.Biol.Chem.276：7346-7350；Desmyter，et al.(2001)J.Biol.Chem.276：26285-26290；Hudson and Kortt(1999)J.Immunol.Methods231：177-189；以及U.S.Pat.No.4,946,778)。也提供了双功能抗体(参见，例如，Mack，et al.(1995)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 92：7021-7025；Carter(2001)J.Immunol.Methods 248：7-15；Volkel，et al.(2001)ProteinEngineering 14：815-823；Segal，et al.(2001)J.Immunol.Methods 248：1-6；Brennan，et al(1985)Science 229：81-83；Raso，et al.(1997)J.Biol.Chem. 272：27623；Morrison(1985)Science 229：1202-1207；Traunecker，et al.(1991)EMBO J.10：3655-3659；以及U.S.Pat.Nos.5,932,448，5,532,210，和6,129,914)。

本发明提供了能特异结合IL-17和IL-23或其受体的双特异性抗体(参见，例如Azzoni，et al.(1998)J.Immunol.161：3493；Kita，et al.(1999)J.Immunol.162：6901；Merchant，et al.(2000)J.Biol.Chem. 74：9115；Pandey，et al.(2000)J.Biol.Chem.275：38633；Zheng，et al.(2001)J.Biol Chem.276：12999；Propst，et al.(2000)J.Immunol.165：2214；Long(1999)Ann.Rev.Immunol.17：875)。

对于产生抗体来说，抗原的纯化并非必要。能以带有目的抗原的细胞对动物进行免疫。然后可从经免疫的动物中分离出脾细胞，该脾细胞可与骨髓瘤细胞系融合以生成杂交瘤(参见，例如，Meyaard，et al.(1997)Immunity 7：283-290；Wright，et al.(2000)Immunity13：233-242；Preston，et al.，supra；Kaithamana，et al.(1999)J.Immunol.163：5157-5164)。

抗体经常以至少约10^-3M、更经常以至少10^-6M、典型的以至少10^-7M、更典型的以至少10^-8M、优选以至少约10^-9M、更优选以至少约10^-9M、最优选以至少约10^-11M的Kd结合(参见，例如，Presta，et al.(2001)Thromb.Haemost.85：379-389；Yang，et al.(2001)Crit.Rev.Oncol.Hematol.38：17-23；Carnahan，et al.(2003)Clin.Cancer Res.(Suppl.)9：3982s-3990s)。

多肽、抗体和核酸能被偶联到例如小药物分子、酶、脂质体、聚乙二醇(PEG)或融合蛋白抗体上。抗体可用于诊断或试剂盒目的，并包括例如连接到染料、放射性同位素、酶或金属(例如胶体金)的抗体(参见，例如Le Doussal，et al.(1991)J.Immunol.146：169-175；Gibellini，etal.(1998)J.Immunol.160：3891-3898；Hsing and Bishop(1999)J.Immunol.162：2804-2811；Everts，et al.(2002)J.Immunol.168：883-889)。

本发明还提供了用作反义核酸或用于小干扰RNA(siRNA)的结合组合物(参见，例如，Arenz and Schepers(2003)Naturwissenschaften90：345-359；Sazani and Kole(2003)J.Clin.Invest.112：481-486；Pirollo，et al.(2003)Pharmacol.Therapeutics 99：55-77；Wang，et al.(2003)Antisense Nucl.Acid Drug Devel.13：169-189；Cheng，et al.(2003)Mol.Genet. Metab.80：121-128；Kittler and Buchholz(2003)Semin.CancerBiol.13：259-265)。

IV.多肽和核酸的纯化和修饰

可通过现有技术中已建立的方法对用于所设计的方法中的多肽，例如抗原、抗体、抗体片段和核酸进行纯化。纯化可涉及对细胞或组织的均质化、免疫沉淀和层析。例如通过抗蛋白酶剂、抗氧化剂、离子和非离子性去垢剂以及诸如二醇或二甲亚砜的溶剂可增强纯化或储存期间的稳定性。

对例如肽、多肽和核酸的修饰包括表位标记物、荧光或放射性基团、单糖或多糖、硫酸或磷酸基团、C-末端酰胺、乙酰化和酯化的N-基团、酰基化，例如脂肪酸、链内切割的肽键和脱酰胺化产物(参见，例如，Johnson，et al.(1989)J.Biol.Chem.264：14262-14271；Young，et al.(2001)J.Biol.Chem.276：37161-37165)。糖基化取决于所采用的重组宿主生物体的种类或生理状态(参见，例如Jefferis(2001)BioPharm14：19-27；Mimura，et al.(2001)J.Biol.Chem.276：45539-45547；Axford(1999)Biochim.Biophys.Acta 1：219-229；Malhotra，et al.(1995)NatureMedicine 1：237-243)。

V.治疗性组合物和方法

为了制备包括IL-17或IL-23的拮抗剂的药物或灭菌组合物，使这些试剂与药物可接受的载体或赋形剂混合。治疗、预防(profilactic)和诊断试剂的制剂可通过与生理学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂以例如冻干粉末、膏剂、水溶液、洗液或混悬液的形式混合而制备(参见，例如，Hardman，et al.(2001)Goodman and Gilman’s ThePharmacological Basis of Terapeutics，McGraw-Hill，New York，NY；Gennaro(2000)Remington：The Science and Practice of Pharmacy，Lippincott，Williams，and Wilkins，New York，NY；Avis，et al.(eds.)(1993)Pharmaceutical Dosage Forms：Parenteral Medications，MarcelDekker，NY；Lieberman，et al.(eds.)(1990)Pharmaceutical DosageForms：Tablets，Marcel Dekker，NY；Lieberman，et al.(eds.)(1990)Pharmaceutical Dosage Forms：Disperse Systems，Marcel Dekker，NY；Weiner and Kotkoskie(2000)Excipient Toxicity and Safety，MarcelDekker，Inc.，New York，NY)。

对用于预防或治疗的给药方案的选择取决于数种因素，包括实体(entity)的血清或组织流通率、症状的程度、实体的免疫原性、生物基质中目标细胞的可达性。优选地，给药方案最大化递送到患者的治疗药物量，同时与可接受的副作用水平相容。因此，生物递送的量部分地取决于特定的实体和所处理的状况的严重性。可获得在选择合适剂量的抗体、细胞因子和小分子方面的指导(参见，例如，Wawrzynczak(1996)Antibody Therapy，Bios Scientific Pub.Ltd，Oxfordshire，UK；Kresina(ed.)(1991)Monoclonal Antibodies，Cytokines and Arthritis，Marcel Dekker，New York，NY；Bach(ed.)(1993)Monoclonal Antibodiesand Peptide Therapy in Autoimmune Diseases，Marcel Dekker，New York，NY；Baert，et al.(2003)New Engl.J.Med.348：601-608；Milgrom，et al.(1999)New Engl.J.Med.341：1966-1973；Slamon，et al.(2001)NewEngl.J.Med.344：783-792；Beniaminovitz，et al.(2000)New Engl.J.Med.342：613-619；Ghosh，et al.(2003)New Engl.J.Med.348：24-32；Lipsky，et al.(2000)New Engl.J.Med.343：1594-1602)。

抗体、抗体片段和细胞因子可通过连续注入来提供，或通过例如1天、1周或每周1-7次的间隔给药来提供。可通过静脉内、皮下、局部、口服、鼻用、直肠、肌内、大脑内或通过吸入方式给药。优选的给药方案是涉及能避免明显的不希望的副作用时的最大剂量或给药频率。总的周剂量经常为至少0.05μg/kg体重、更经常为至少0.2μg/kg、最经常为至少0.5μg/kg、典型的为至少1μg/kg、更典型的为至少10μg/kg、最典型的为至少100μg/kg、优选为至少0.2mg/kg、更优选为至少1.0mg/kg、更优选为至少2.0mg/kg、较佳为至少10mg/kg、更佳为至少25mg/kg以及最佳为至少50mg/kg(参见，例如Yang，et al.(2003)NewEngl.J.Med.349：427-434；Herold，et al.(2002)New Engl.J.Med.346：1692-1698；Liu，et al.(1999)J.Neurol.Neurosurg.Psych.67：451-456；Portielji，et al.(20003)Cancer Immunol.Immunother.52：133-144)。基于摩尔/kg体重，小分子治疗药物(例如肽模拟物、天然产物或有机化合物)的需要剂量与抗体或多肽的大致相同。基于摩尔/kg体重，小分子治疗药物的理想血浆浓度与抗体的大致相同。

对于特定患者来说，有效量可随一些因素而变动，这些因素例如为所处理的状况、患者的总体健康情况、给药的方法路线和剂量以及副作用的严重性，参见例如参见Maynard，et al.(1996)A Handbook ofSOPs for Good Clinical Practice，Interpharm Press，Boca Raton，FL；Dent(2001)Good Laboratory and Good Clinical Practice，Urch Publ.，London，UK。

典型的兽医上的、实验性的或研究对象包括猴、狗、猫、大鼠、小鼠、兔、豚鼠、马和人。

合适剂量由临床医生使用例如现有技术中已知或推测会影响处理或预计会影响处理的参数或因素来确定。通常，以稍低于最优剂量的量开始给药，此后以较小的增量增加，直至相对于任何负面的副作用达到所需的或最优的效果。重要的诊断措施包括例如炎症的症状或所产生的炎症因子的水平。优选地，将使用的生物产物从与治疗目标动物相同的物种获得，由此最小化对试剂的体液应答。

共给药或与第二种治疗剂(例如细胞因子、类固醇、化疗剂、抗生素或放射)一起使用的方法为本领域所熟知(参见，例如Hardman，et al.(eds.)(2001)Goodman and Gilman′s The Pharmacological Basis ofTherapeutics，10^th ed.，McGraw-Hill，New York，NY；Poole and Peterson(eds.)(2001)Pharmacotherapeutics for Advanced Practice：A PracticalApproach，Lippincott，Williams & Wilkins，Phila.，PA；Chabner andLongo(eds.)(2001)Cancer Chemotherapy and Biotherapy，Lippincott，Williams & Wilkins，Phila.，PA)。药物的有效量典型地会减少症状至少10％、通常为至少20％、优选为至少约30％、更优选为至少约40％以及最优选为至少50％。

给药途径为例如通过局部或皮肤涂敷，通过静脉内、腹膜内、大脑内、肌内、眼内、动脉内、脑脊髓内、损伤部位内的注射或注入，或通过缓释系统或植入物给药(参见，例如Sidman et al.(1983)Biopolymers 22：547-556；Langer，et al.(1981)J.Biomed.Mater.Res.15：167-277；Langer(1982)Chem.Tech.12：98-105；Epstein，et al.(1985)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82：3688-3692；Hwang，et al.(1980)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77：4030-4034；U.S.Pat.Nos.6,350466和6,316,024)。

VI.试剂盒

本发明提供的诊断试剂盒为包括抗体或抗体片段在内的结合组合物，用于检测IL-17或IL-23，及其代谢产物和分解产物，包括由脱酰胺、受限的蛋白水解或水解切割、或二硫键氧化或形成导致的产物。典型地，该试剂盒具有小室，其含有IL-17或IL-23多肽或其抗原性片段，其结合组合物，或能够在严紧条件下与编码IL-17或IL-23的核酸杂交的核酸，例如核酸探针或引物。

该试剂盒可例如包含试剂和小室、试剂和使用说明书，或试剂连同小室和使用说明书。试剂可包含全长IL-17或IL-23多肽或其抗原片段、结合组合物或核酸。用于测定例如从生物样品或从化学品库获得的测试化合物的结合的试剂盒可包含对照化合物、经标记的化合物以及使游离的标记化合物与结合的标记的化合物分离的方法。

使得能进行核酸探针或引物的严紧杂交的条件是可获得的(参见，例如Freeman，et al.(2000)Biotechniques 29：1042-1055；de Silva andWittwer(2000)J.Chromatogr.B.Biomed.Sci.Appl.741：3-13；Long(1998)Eur.J.Histochem.42：101-109；Musiani，et al.(1998)Histol.Histopathol.13：243-248；Gillespie(1990)Vet.Microbiol.24：217-233；Giulietti，et al.(2001)Methods 25：386-401；Schweitzer and Kingsmore(2001)Curr.Opin.Biotechnol.12：21-27；Speel，et al.(1999)J.Histochem.Cytochem.47：281-288；Tsuruoka and Karube(2003)Comb.Chem.HighThroughput Screen.6：225-234；Rose，et al.(2002)Biotechniques33：54-56)。

诊断测试可用在生物基质上，例如干细胞、细胞提取物、细胞裂解物、固定的细胞、细胞培养物、体液或法医样品。用于诊断或试剂盒目的的偶联的抗体包括偶联染料、同位素、酶和金属的抗体(参见，例如，Le Doussal，et al.(1991)New Engl.J.Med.146：169-175；Gibellini，et al.(1998)J.Immunol.160：3891-3898；Hsing and Bishop(1999)NewEngl.J.Med.162：2804-2811；Everts，et al.(2002)New Engl.J.Med.168：883-889)。存在多种测试方式，例如实时PCR、放射免疫测定(RIA)、ELISA和芯片上的实验室(美国专利号6,176,962和6,517,234)。

诊断方法可包括使来自测试个体的样品与特异地结合IL-17或IL-23的多肽或核酸的结合组合物接触。此外，该诊断方法还可包括使结合组合物与来自对照个体的样品或对照样品接触，以及将对测试个体的结合与对对照个体或对照样品的结合进行比较。“测试样品”可从来自患有牛皮癣(损伤的和未损伤的)的个体的皮肤样品获得，而“对照样品”可从来自正常个体的皮肤样品或从来自患有皮肤炎症的个体的未感染皮肤样品获得。所述个体可为例如人类个体、兽医个体、实验性个体或农业个体。获得的包括组织活检、取样、提取或加工的、纯化的或半纯化的样品或提取物。

或者，可取得如上所定义的测试和正常皮肤样品，并将其用于标准的mRNA提取方案。mRNA随后反转录为ssDNA，其再用于第二条DNA链的合成。该双链DNA接着用于实时PCR(例如TaqMan)反应。数据分析如后。

VII.用途

本发明提供了诊断或防止皮肤性炎症的方法，这些皮肤性炎症包括但不限于瘢痕性类天疱疮、硬皮病、化脓性汗腺炎、中毒性表皮坏死溶解、痤疮、骨炎、移植物抗宿主病(GvHD)、坏疽性脓皮病和白塞氏病(参见，例如，如上Willams and Griffiths(2002))。皮肤性炎症的最常见形式为牛皮癣。

本发明的广义范围可参考以下实施例作最好的理解，但这些实施例并非试图将本发明限定至具体的实施方案。

                        实施例

I.一般方法

对动物和人的皮肤的炎症状况的诊断、预防和治疗方法已有过描述(参见，例如Ackerman(1997)Histological Diagnosis of InflammatorySkin Disease，2^nd ed，Lippincott，Williams，and Wilkins，New York，NY；Gallin，et al.(1999)Inflammation：Basic Principles and ClinicalCorrelates，3^rd ed.，Lippincott，Williams，and Wilkins，New York，NY；Parnham，et al.(1991)Drugs in Inflammation(Agents and ActionsSuppl.，Vol.32)，Springer Verlag，Inc.，New York，NY；Chan(ed.)(2003)Animal Models of Human Inflammatory Skin Diseases，CRC Press，BocaRaton，FL；Kownatzki and Norgauer(eds.)(1998)Chemokines and Skin，Birkhauser Verlag，Basel，Switzerland；Kanitakis，et al.(eds.)(1999)Diagnostic Immunohistochemistry of the Skin，Lippincott，Williams，andWilkins，New York，NY)。

可获得皮肤性炎症的动物模型和相关方法。这些方法包括使用皮肤移植物、注射有免疫细胞的皮肤移植物、免疫细胞的皮下注射以及使用牛皮癣动物，例如多种小鼠模型，尤其是异种移植物模型(参见，例如Kruger，et al.(1981)J.Clin.Invest.，68：1548-1577；Nickoloff，et al.(1995)Am.J.Pathol.146：580-588；and Schn(1999)J.Invest.Dermatol.112：405-410)。

分子生物学中的标准方法已有描述(Maniatis，et al.(1982)Molecular Cloning，A Laboratory Manual，Cold Spring HarborLaboratory Press，Cold Spring Harbor，NY；Sambrook and Russell(2001)Molecular Cloning，3^rd ed.，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，NY；Wu(1993)Recombinant DNA，Vol.217，Academic Press，San Diego，CA)。在Ausbel，et al.(2001)CurrentProtocols in Molecular Biology，Vols.1-4，John Wiley and Sons，Inc.NewYork，NY中也有标准方法，其中描述了在细菌细胞中的克隆和DNA诱变(Vol.1)、在动物细胞和酵母中的克隆(Vol.2)、糖缀合物和蛋白表达(Vol.3)以及生物信息学(Vol.4)。

也描述了用于蛋白纯化的方法，包括免疫沉淀、层析、电泳、离心和结晶(Coligan，et al.(2000)Current Protocols in Protein Science，Vol.1，John Wiley and Sons，Inc.，New York)。也描述了化学分析、化学修饰、转录后修饰、融合蛋白的产生、蛋白的糖基化(参见，例如Coligan，et al.(2000)Current Protocols in Protein Science，Vol.2，John Wiley andSons，Inc.，New York；Ausubel，et al.(2001)Current Protocols inMolecular Biology，Vol.3，John Wiley and Sons，Inc.，NY，NY，pp.16.0.5-16.22.17；Sigma-Aldrich，Co.(2001)Products for Life ScienceResearch，St.Louis，MO；pp.45-89；Amersham Pharmacia Biotech(2001)BioDirectory，Piscataway，N.J.，pp.384-391)。也描述了对多克隆和单克隆抗体的生产、纯化和片段化(Coligan，et al.(2001)CurrentProtcols in Immunology，Vol.1，John Wiley and Sons，Inc.，New York；Harlow and Lane(1999)Using Antibodies，Cold Spring HarborLaboratory Press，Cold Spring Harbor，NY；Harlow and Lane，supra)。也可得到分析配体/受体相互作用的标准技术(参见，例如，Coligan，et al.(2001)Current Protcols in Immunology，Vol.4，John Wiley，Inc.，NewYork)。

也描述了细胞和组织培养的标准技术(参见，例如Freshney(2000)Culture of Animal Cells：A Manual of Basic Technique，4^th ed.，Wiley-Liss，Hoboken，NJ；Masters(ed.)(2000)Animal Cell Culture：A PracticalApproach，3^rd ed.，Oxford Univ.Press，Oxford，UK；Doyle，et al.(eds.)(1994)Cell and Tissue Culture：Laboratory Procedures，John Wiley andSons，NY；Melamed，et al.(1990)Flow Cytometry and Sorting Wiley-Liss，Inc，New York，NY；Shapiro(1988)Practical Flow Cytometry Liss，NewYork，NY；Robinson，et al.(1993)Handbook of Flow Cytometry Methods，Wiley-Liss，New York，NY)。

可得到用于测定例如抗原性片段、信号和前导序列、蛋白折叠和功能结构域的软件包。参见，例如Vector NTISuite(Informax，Inc.，Bethesda，MD)；GCG Wisconsin包(Accelrys，Inc.，San Diego，CA)和DeCypher(TimeLogic Corp.，Crystal Bay，Nevada)；Menne，et al.(2000)Bioinformatics 16：741-742。也可采用公共序列数据库，例如从GenBank和其它来源。

II.实时PCR

如以前所述，总RNA从均质化的组织样品(如下)中提取并被反转录(参见，例如Homey，et al.(2000)J.Immunol.164：3465-3470)。通过产生荧光的5’-核酸酶PCR测定，针对IL-17的表达对互补DNA进行了定量分析(参见，例如，Holland，et al.(1991)Proc.Natl.Acad.Sci.88：7276-7280)。

所使用的具体引物如下：

正向引物(IL-17_Hu/F3-2851)：

5’-CAACCGATCCACCTCACCTT-3’     SEQ ID NO：1

反向引物(IL-17_Hu/F3-2851)：

5’-GGCACTTTGCCTCCCAGAT-3’      SEQ ID NO：2

人IL-17正向引物：

5’-TGCCAGGAGGTAGTATGAAGCTT-3’  SEQ ID NO：3

人IL-17反向引物：

5’-ATGCAGCCCAAGTTCCTACACT-3’   SEQ ID NO：4

通过ABI PRISM 7700序列检测系统(Applied Biosystems)在40个循环中连续测量IL-17特异的PCR产物。将值对泛素归一化。对数转化的数据经Kruskal-Wallis统计分析(中值法)。表达水平(对数转化的)对应于在组织样品中表达的IL-17的量，因此表达水平(对数转化的)越高，则在组织样品中表达的IL-17的量越高。

III.人炎症性皮肤疾病组

人炎症性皮肤疾病组包括来自牛皮癣和特应性皮炎患者的正常皮肤、未损伤或损伤的皮肤。该组包括35份正常皮肤样品(在临床试验设置中15份取自活检供体，20份取自正常供体)、24份未损伤牛皮癣皮肤样品、25份损伤的牛皮癣皮肤样品、30份未损伤的特应性皮炎皮肤样品和30份损伤的特应性皮炎皮肤样品。从每一患者钻取两块4mm活组织。从远离牛皮癣或特应性皮炎损伤的位点取得未损伤的牛皮癣和未损伤的特应性皮炎皮肤样品。样品于斯坦福大学皮肤病学系的临床试验环境下获得。从Zoion获得活检供体材料。该研究得到了各个研究所的当地伦理委员会的许可。

所有的未损伤的和损伤的患者样品都通过采用PASI(牛皮癣面积和严重指数)分值或EASI(湿疹面积和严重指数)分值进行分级。对于牛皮癣患者，PASI分值为9-20.75。对于特应性皮炎患者，EASI分值为1.85-35.95。这些分值反映了疾病在患者身体上的程度和严重性。

IV.细胞培养、组织学和皮肤移植的方法

或者，可采用细胞系。在补充有10％胎牛血清(FBS)的Dulbecco′s改良的Eagle培养基(DMEM)(GIBCO BRL，Grand Island，NY)中培养细胞系。人角质化细胞可从新生人包皮获得，并培养于角质化细胞SFM(GIBCO BRL；Rheinwald and Green Cell 6：317-330)中。通过沿软骨板轻轻撕开来分离皮肤，并在含有0.5％胰蛋白酶(GIBCO BRL)的磷酸盐缓冲液(PBS)中在37℃下悬浮45分钟。表皮层被从真皮上剥离下来，重悬浮在含有0.05％DNAase(Sigma，St.Louis，MO)的含10％胎牛血清的FBS中。通过强力穿过注射器获得单细胞悬浮液。为了逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)分析，在角质化细胞SFM中培养细胞，并且通过标准方法分离RNA。

为了进行流式细胞术，在冷磷酸缓冲液(PBS)中对新鲜分离的表皮细胞清洗两次，然后以任何合适的标记抗体试剂在4℃对4×10⁵细胞染色30分钟。细胞在冷PBS中清洗两次，在Becton DickensonFACScan流式细胞仪(San Jose，CA)上通过流式细胞术分析。

在保持本发明的目的、精神和范围的情况下可对本发明作出很多修改和变化以适应特定情况、材料、物质组成、方法和工艺步骤，这对本领域普通技术人员来说显而易见。所有这些修改应包括在本发明所附的权利要求书的范围内，而不偏离本发明的精神和范围。本文描述的具体实施方案是仅以实施例的方式提供，本发明为所附的权利要求书以及等同于这些权利要求的全部范围所限定；本发明不被通过实施例表示的具体实施方案所限制。

                         序列表

<110>Schering Corporation

<120>IL-17表达预测皮肤炎症的用途；治疗方法

<130>DX06165

<150>US 60/567,747

<151>2004-05-03

<160>4

<170>PatentIn version 3.2

<210>1

<211>20

<212>DNA

<213>人工

<220>

<223>人IL-17A的PCR正向引物

<400>1

caaccgatcc acctcacctt                                                 20

<210>2

<211>19

<212>DNA

<213>人工

<220>

<223>人IL-17A的PCR反向引物

<400>2

ggcactttgc ctcccagat                                                  19

<210>3

<211>23

<212>DNA

<213>人工

<220>

<223>人IL-17F的PCR正向引物

<400>3

tgccaggagg tagtatgaag ctt                                             23

<210>4

<211>22

<212>DNA

<213>人工

<220>

<223>人IL-17F的PCR反向引物

<400>4

atgcagccca agttcctaca ct                                              22

Claims (15)

1.一种方法，用于评估个体出现炎症性皮肤病症的倾向性，包括：

a)从所述患者获得皮肤的样品；以及

b)对所述样品中IL-17表达的水平定量。

2.根据权利要求1的方法，其中所述IL-17表达是mRNA表达。

3.根据权利要求1的方法，其中所述IL-17表达的水平通过实时PCR定量。

4.根据权利要求3的方法，其中所述IL-17表达的水平是正常皮肤5至20倍高之间的平均值。

5.根据权利要求1的方法，其中所述炎症性皮肤病症为皮肤性炎症。

6.根据权利要求4的方法，其中所述皮肤性炎症为牛皮癣。

7.根据权利要求1的方法，其中所述皮肤样品为未损伤的牛皮癣皮肤。

8.根据权利要求1的方法，其中所述个体具有：

a)牛皮癣家族史；或

b)之前表现出牛皮癣症状。

9.根据权利要求1的方法，其中所述个体为人。

10.一种预防皮肤炎症的方法，包括向表现出出现皮肤炎症的倾向性的个体给予：

a)IL-17的拮抗剂；

b)IL-23的拮抗剂；或

c)IL-17的拮抗剂和IL-23的拮抗剂。

11.根据权利要求10的方法，其中所述皮肤炎症为皮肤性炎症。

12.根据权利要求11的方法，其中所述皮肤性炎症为牛皮癣。

13.根据权利要求10的方法，其中根据实时PCR定量，所述个体表现出在未损伤的牛皮癣皮肤样品中IL-17的表达高于正常皮肤样品的至少5倍以上。

14.根据权利要求10的方法，其中所述IL-17和/或IL-23拮抗剂为

a)抗体或其结合片段；

b)siRNA；或

c)小分子抑制剂。

15.根据权利要求14的方法，其中所述抗体是：

a)多克隆抗体；

b)单克隆抗体；

c)人源化抗体；

d)双特异性抗体。