CN1985859A - 一种鉴别卷柏属植物及其制剂的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种用以鉴别卷柏属植物及其制剂的方法，该方法采用醇类提取江南卷柏，并增加了穗花杉双黄酮作为阳性对照，同时增加了江南卷柏药材与制剂和较易和其混淆的兖州卷柏、二型卷柏及深绿卷柏等10种卷柏的鉴别。该质量方法具有较强的专属性和较好稳定性，能有效实现江南卷柏药材及其成品如化妆品、保健品以及药品的质量控制。
Description
技术领域
本发明涉及一种用薄层色谱法鉴别卷柏属植物及其制剂的方法。
背景技术
卷柏为蕨类植物门卷柏科卷柏属植物，分布于全世界，约有700种，大多数产于热带和亚热带。多生长于岩壁或周期性干燥的土壤中。我国约有50种，分布全国各地。卷柏科植物集古老性、特化性和进化性于一体，最早出现异型孢子，在进化方面具特殊的理论意义。一般认为，现存卷柏科植物仅一属，即卷柏属(Selaginella Beauv.)。截至目前，对卷柏属化学成分的研究主要集中于分离鉴定和定性分析。可以认为，双黄酮类和海藻糖是卷柏属的特征性成分；这两种成分在卷柏属中是广泛分布的。对卷柏属所含化学成分的含量测定较少见。对卷柏(S.tamariscina)化学成分的研究以双黄酮类居多，据报道，其中含有穗花杉双黄酮、日扁柏双黄酮、苏铁双黄酮、异柳杉双黄酮和柳杉黄素B等，双黄酮类化合物具有抗菌性，能增进血液循环、控制皮炎，在发蜡中或是发孔中加入黄酮类化合物，能刺激毛发的生长，在肤用品中加入双黄酮具有活血调理作用，是卷柏属植物的有效成分之一。在很多中草药如银杏叶、贯叶连翘中均存在穗花衫双黄酮，而卷柏中的量远高于其他中草药，如贯叶连翘中穗花衫双黄酮的质量分数在0.01-0.05％，而卷柏中穗花衫双黄酮的质量分数则高达0.8％。同时市面上尚无其余双黄酮类标准品购买，故选用穗花衫双黄酮作为本发明的对照品。
江南卷柏(Herba Selaginellae moellendorfii)，英文名Moellendorf’sSpikemoss Herb，别名石柏、岩柏草、黄疸卷柏，在浙江衢州一带，江南卷柏又名仙胃草，为卷柏科植物江南卷柏的全草。生于林下或溪边。分布于长江以南各地、北至陕西南部。含两种醛类成分，另有酚类、酸性及中性物资。性平，味微甘。主治清热利尿，活血消肿，也用于急性传染性肝炎、胸肋腰部挫伤、全身浮肿、血小板减少。
现有广东省中药材标准中，江南卷柏药材鉴别采用薄层色谱(TLC)方法，该方法的过程为：江南卷柏药材水煮、水溶液滤过、乙酸乙酯萃取、萃取物浓缩、点于硅胶H薄层板，以苯-乙酸乙酯(1∶1)为展开剂，紫外灯(365nm)下检视，与对照药材在同一部位有一亮蓝色荧光斑点。江南卷柏片是广州白云山制药总厂生产的中药品种，其国家标准WS3-254-(Z-55)-2001(Z)鉴别方法中也是采取了药材相同的处理方法：水煮醇提。目前很多卷柏采用穗花杉双黄酮进行研究，但这两种标准中存在以下不足：1)采用水煮方法，不能提出穗花杉双黄酮；2)只用江南卷柏药材作为简单对照，且对照斑点均为未知物，方法较为粗放。又因为药典中只标明了江南卷柏才可作为江南卷柏片的药材，为了更有效地鉴别出江南卷柏，仅靠现有技术鉴别江南卷柏药材是不够的。
发明内容
(一)要解决的技术问题
本发明的目的旨在提供一种用薄层色谱法鉴别卷柏属植物及其制剂的方法，尤其是提供一种鉴别卷柏属植物中的江南卷柏、剑叶卷柏(Selaginella xipholepis Bak.)、二型卷柏(S.biformis A.Br.)、薄叶卷柏(S.delicatula(Desv.)Alston)、深绿卷柏(S.doederleinii Hieron)、单籽卷柏(S.monospors Spring)、黑顶卷柏(S.picta A.Br.)、卷柏(S.tamariscina(Beauv.)Spring)、粗叶卷柏(S.trachyphylla A.Br)、翠云草(S.uncinata(desv.)Spring)、兖州卷柏(S.involvens Spring)药材及其中医药学常用剂型的方法。
(二)技术方案
本发明提供的鉴别卷柏属植物的方法步骤如下：
A、供试品的制备：待测药材或制剂加入甲醇和/或95-100％的乙醇提取，制成浓度为0.5-2g/ml的溶液；
B、对照品的制备：称取穗花杉双黄酮对照品适量于容量瓶中，以甲醇溶解并稀释至刻度，配成0.03-0.06mg/ml的对照品溶液；
C、吸取供试品溶液及对照品溶液各0.1-10ul，点于同一块聚酰胺或硅胶G薄层板上，以苯-石油醚(60-90℃)-丁酮-甲醇(5∶2∶3∶3)和苯-氯仿-丁酮-甲醇(6∶3∶1∶1)为展开剂同时展开，或者以苯-氯仿-丁酮-甲醇(6∶3∶1∶1)和甲苯-甲酸乙酯-甲酸(5∶4∶1)为展开剂同时展开，取出晾干，喷以5％三氯化铝试液，置紫外灯366nm下检视。通过比较分析两种展开剂的展开效果更有效地鉴别出江南卷柏。
其中供试品溶液的制备方法如下：
将待测药材或制剂用甲醇提取制成浓度为0.5-2g/ml的供试品溶液；
或将待测药材或制剂先用氯仿脱脂再用甲醇提取制成浓度为0.5-2g/ml的供试品溶液；
或将待测药材或制剂加甲醇提取，滤液蒸干后残渣加无水乙醇溶解，作为供试品溶液；
或将待测药材或制剂用95-100％乙醇提取，滤过，滤液蒸干，残渣加95％乙醇溶解，作为供试品溶液。
其中所述的提取方法包括超声波处理10-40min或冷浸12-36小时。
优选的鉴别方法如下：
A、供试品的制备：称取待测药材称取2g，加入甲醇30ml提取，超声处理30min，滤过滤液蒸干，残渣加无水乙醇2ml使溶解，制成浓度为0.5-2g/ml的溶液；
B、对照品的制备：称取穗花杉双黄酮对照品适量于容量瓶中，以甲醇溶解并稀释至刻度，配成0.03-0.06g/ml的对照品溶液；
C、吸取供试品溶液和对照品溶液各0.1-1ul，点于同一块聚酰胺或硅胶G薄层板上，以苯-石油醚(60-90℃)-丁酮-甲醇(5∶2∶3∶3)为展开剂，展开至5cm，取出晾干，再以十二烷基硫酸钠-正庚烷-正丁醇-水(3g∶2∶6∶25)为展开剂，展至约8cm，取出，晾干，喷以5％三氯化铝试液，置紫外灯366nm下检视。此时所有的样品在Rf＝0.2左右均出现亮绿色斑点，其中在Rf＝0.8处，可以观察到：2、江南卷柏，4、二型卷柏，5、薄叶卷柏，11、翠云草四个样品出现红色斑点，这四个样品中，在Rf＝0.6处，可以观察到：5、薄叶卷柏，11、翠云草两个样品出现绿色斑点，因此可将江南卷柏和薄叶卷柏及翠云草区分开来；
同时采用步骤D，吸取供试品溶液和对照品溶液各10ul，点于同一块聚酰胺薄层板上，以苯-氯仿-丁酮-甲醇(6∶3∶1∶1)为展开剂展开，取出晾干，喷以5％三氯化铝试液，置紫外灯366nm下检视。此时在Rf＝0.4及Rf＝0.1处，4、二型卷柏样品分别出现蓝色及绿色斑点，而江南卷柏样品在此两处未观察到斑点，因此可将江南卷柏和二型卷柏区分开来。
上述步骤C中还可以吸取供试品溶液和对照品溶液各0.1-1ul，点于同一块聚酰胺或硅胶G薄层板上，采用甲苯-甲酸乙酯-甲酸(5∶4∶1)作为展开剂。此时所有样品在Rf＝0.4处，可以观察到：2、江南卷柏，4、二型卷柏，12、衮州卷柏，三个样品均出现蓝色斑点；在Rf＝0.7处，2、江南卷柏，4、二型卷柏均出现红色斑点，而12、衮州卷柏没有红色斑点出现；再同时采用上述的步骤D，即可鉴别江南卷柏。
(三)有益效果
本发明提供的鉴别方法中采用了醇提的方法，增加了穗花杉双黄酮作为阳性对照，此外，同时增加了江南卷柏和兖州卷柏、深绿卷柏及二型卷柏等10种卷柏的鉴别区分方法，这几种卷柏在外观及薄层色谱上与江南卷柏上容易混淆，但是本发明的方法能够达到有效鉴别江南卷柏的目的。
附图说明
图1-3为本发明鉴别方法的薄层色谱图
其中：1、穗花杉双黄酮 2、江南卷柏 3、剑叶卷柏 4、二型卷柏 5、薄叶卷柏 6、深绿卷柏 7、单籽卷柏 8、黑顶卷柏 9、卷柏 10、粗叶卷柏 11、翠云草 12、兖州卷柏。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1
A、供试品的制备：11种待测植物全草各称取2g加入甲醇10ml，超声处理10min，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇2ml使溶解制备成浓度为1g/ml的溶液；
B、对照品的制备：称取穗花杉双黄酮对照品0.5mg于容量瓶中，以甲醇溶解并稀释至10ml刻度，配成0.05mg/ml的对照品溶液；
C、吸取供试品溶液及对照品溶液各1ul，点于同一块聚酰胺薄层板上，以苯-石油醚(60-90℃)-丁酮-甲醇(5∶2∶3∶3)为展开剂展开，取出晾干，再以十二烷基硫酸钠-正庚烷-正丁醇-水(3g∶2∶6∶25)为展开剂，展至约8cm，取出，晾干，喷以5％三氯化铝试液，置紫外灯366nm下检视；
结果见图1。在Rf＝0.8处，可以观察到：2、江南卷柏，4、二型卷柏，5、薄叶卷柏，11、翠云草四个样品出现红色斑点，这四个样品中，在Rf＝0.6处，可以观察到：5、薄叶卷柏，11、翠云草两个样品出现绿色斑点；
同时，吸取供试品溶液10ul，点于同一块聚酰胺薄层板上，以苯-氯仿-丁酮-甲醇(6∶3∶1∶1)为展开剂展开，取出晾干，喷以5％三氯化铝试液，置紫外灯366nm下检视；
结果见图2。在Rf＝0.4及Rf＝0.1处，4、二型卷柏样品分别出现蓝色及绿色斑点，而江南卷柏样品在此两处未观察到斑点。
实施例2
A、供试品的制备：11种待测植物全草各称取2g加95％乙醇40ml，冷浸36小时，滤过，滤液蒸干，残渣加95％乙醇2ml使溶解，制成浓度为0.5g/ml的溶液；
B、对照品的制备：称取穗花杉双黄酮对照品0.3mg于容量瓶中，以甲醇溶解并稀释至10ml刻度，配成0.03mg/ml的对照品溶液；
C、吸取供试品溶液0.1ul及对照品溶液各0.1ul，点于同一块硅胶G薄层板上，以甲苯-甲酸乙酯-甲酸(5∶4∶1)为展开剂展开，取出晾干，喷以5％三氯化铝试液，置紫外灯366nm下检视；
结果见图3。在Rf＝0.4处，可以观察到：2、江南卷柏，4、二型卷柏，12、衮州卷柏，三个样品均出现蓝色斑点；在Rf＝0.7处，2、江南卷柏，4、二型卷柏均出现红色斑点，而12、衮州卷柏没有红色斑点出现；
同时，吸取供试品溶液10ul，点于同一块聚酰胺薄层板上，以苯-氯仿-丁酮-甲醇(6∶3∶1∶1)为展开剂展开，取出晾干，喷以5％三氯化铝试液，置紫外灯366nm下检视；
结果见图2。在Rf＝0.4及Rf＝0.1处，4、二型卷柏样品分别出现蓝色及绿色斑点，而江南卷柏样品在此两处未观察到斑点。
实施例3
A、供试品的制备：江南卷柏片2片，每片重0.34g，研碎，加入甲醇10ml，超声处理10min，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇使溶解制备成浓度为2g/ml的溶液；其他10种待测植物全草的供试品制备方法相同；
B、对照品的制备：称取穗花杉双黄酮对照品0.6mg于容量瓶中，以甲醇溶解并稀释至10ml刻度，配成0.06mg/ml的对照品溶液；
C、吸取供试品溶液及对照品溶液各1ul，点于同一块聚酰胺薄层板上，以苯-石油醚(60-90℃)-丁酮-甲醇(5∶2∶3∶3)为展开剂展开，取出晾干，喷以5％三氯化铝试液，置紫外灯366nm下检视；
结果显示，在Rf＝0.8处，可以观察到：2、江南卷柏，4、二型卷柏，5、薄叶卷柏，11、翠云草四个样品出现红色斑点，这四个样品中，在Rf＝0.6处，可以观察到：5、薄叶卷柏，11、翠云草两个样品出现绿色斑点；
同时，吸取供试品溶液10ul及对照品溶液各10ul，点于同一块聚酰胺薄层板上，以苯-氯仿-丁酮-甲醇(6∶3∶1∶1)为展开剂展开，取出晾干，喷以5％三氯化铝试液，置紫外灯366nm下检视；
结果显示，在Rf＝0.4及Rf＝0.1处，4、二型卷柏样品分别出现蓝色及绿色斑点，而江南卷柏样品在此两处未观察到斑点。
实施例4
A、供试品的制备：江南卷柏片2片，每片重0.34g，研碎，加95％乙醇40ml，冷浸24小时，滤过，滤液蒸干，残渣加98％乙醇使溶解，制成浓度为1.5g/ml的溶液；其他10种待测植物全草的供试品制备方法相同；
B、对照品的制备：称取穗花杉双黄酮对照品0.4mg于容量瓶中，以甲醇溶解并稀释至10ml刻度，配成0.04mg/ml的对照品溶液；
C、吸取供试品溶液及对照品溶液各1ul，点于同一块聚酰胺薄层板上，以苯-石油醚(60-90℃)-丁酮-甲醇(5∶2∶3∶3)为展开剂展开，取出晾干，喷以5％三氯化铝试液，置紫外灯366nm下检视；
结果显示，在Rf＝0.8处，可以观察到：2、江南卷柏，4、二型卷柏，5、薄叶卷柏，11、翠云草四个样品出现红色斑点，这四个样品中，在Rf＝0.6处，可以观察到：5、薄叶卷柏，11、翠云草两个样品出现绿色斑点；
同时，吸取供试品溶液10ul及对照品溶液各10ul，点于同一块聚酰胺薄层板上，以苯-氯仿-丁酮-甲醇(6∶3∶1∶1)为展开剂展开，取出晾干，喷以5％三氯化铝试液，置紫外灯366nm下检视；
结果显示，在Rf＝0.4及Rf＝0.1处，4、二型卷柏样品分别出现蓝色及绿色斑点，而江南卷柏样品在此两处未观察到斑点。
实施例5
A、供试品的制备：江南卷柏胶囊2颗，每颗重1g，加入甲醇30ml，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇使溶解制备成浓度为1g/ml的溶液；其他10种待测植物全草的供试品制备方法相同；
B、对照品的制备：称取穗花杉双黄酮对照品0.5mg于容量瓶中，以甲醇溶解并稀释至10ml刻度，配成0.05mg/ml的对照品溶液；
C、吸取供试品溶液及对照品溶液各1ul，点于同一块聚酰胺薄层板上，以苯-石油醚(60-90℃)-丁酮-甲醇(5∶2∶3∶3)为展开剂展开，取出晾干，喷以5％三氯化铝试液，置紫外灯366nm下检视；
结果显示，在Rf＝0.8处，可以观察到：2、江南卷柏，4、二型卷柏，5、薄叶卷柏，11、翠云草四个样品出现红色斑点，这四个样品中，在Rf＝0.6处，可以观察到：5、薄叶卷柏，11、翠云草两个样品出现绿色斑点；
同时，吸取供试品溶液10ul及对照品溶液各10ul，点于同一块聚酰胺薄层板上，以苯-氯仿-丁酮-甲醇(6∶3∶1∶1)为展开剂展开，取出晾干，喷以5％三氯化铝试液，置紫外灯366nm下检视；
结果显示，在Rf＝0.4及Rf＝0.1处，4、二型卷柏样品分别出现蓝色及绿色斑点，而江南卷柏样品在此两处未观察到斑点。
实施例6
A、供试品的制备：江南卷柏胶囊2颗，每颗重1g，加95％乙醇20ml，冷浸12小时，滤过，滤液蒸干，残渣加95％乙醇使溶解，制成浓度为1.8g/ml的溶液；其他10种待测植物全草的供试品制备方法相同；
B、对照品的制备：称取穗花杉双黄酮对照品0.5mg于容量瓶中，以甲醇溶解并稀释至10ml刻度，配成0.05mg/ml的对照品溶液；
C、吸取供试品溶液及对照品溶液各1ul，点于同一块聚酰胺薄层板上，以苯-石油醚(60-90℃)-丁酮-甲醇(5∶2∶3∶3)为展开剂展开，取出晾干，喷以5％三氯化铝试液，置紫外灯366nm下检视；
结果显示，在Rf＝0.8处，可以观察到：2、江南卷柏，4、二型卷柏，5、薄叶卷柏，11、翠云草四个样品出现红色斑点，这四个样品中，在Rf＝0.6处，可以观察到：5、薄叶卷柏，11、翠云草两个样品出现绿色斑点；
同时，吸取供试品溶液10ul及对照品溶液各10ul，点于同一块聚酰胺薄层板上，以苯-氯仿-丁酮-甲醇(6∶3∶1∶1)为展开剂展开，取出晾干，喷以5％三氯化铝试液，置紫外灯366nm下检视；
结果显示，在Rf＝0.4及Rf＝0.1处，4、二型卷柏样品分别出现蓝色及绿色斑点，而江南卷柏样品在此两处未观察到斑点。
Claims (10)
1、一种鉴别卷柏属植物及其制剂的方法，其特征在于选用对照品为穗花杉双黄酮。
2、如权利要求1所述的方法，其特征在于使用醇类溶剂制备供试品的溶液。
3、如权利要求2所述的方法，其特征在于所述供试品的制备方法是将待测植物或制剂用甲醇提取制成浓度为0.5-2g/ml的溶液。
4、如权利要求2所述的方法，其特征在于所述供试品的制备方法是将待测药材或制剂加体积质量比10-40倍的甲醇，超声处理10-40min，取滤液蒸干，残渣加无水乙醇溶解后作为供试品溶液。
5、如权利要求2所述的方法，其特征在于所述供试品的制备方法是将待测药材或制剂加入体积质量比10-40倍95-100％的乙醇和/或甲醇，冷浸12-36小时，取滤液蒸干，残渣加95％乙醇溶解后作为供试品溶液。
6、如权利要求1或2所述的方法，其特征在于该方法步骤如下：
A、供试品的制备：待测药材或制剂加入甲醇和/或乙醇提取，制成浓度为0.5-2g/ml的溶液；
B、对照品的制备：称取穗花杉双黄酮对照品于容量瓶中，以甲醇溶解并稀释至刻度，配制成0.03-0.06mg/ml的对照品溶液；
C、吸取供试品溶液及对照品溶液各0.1-10ul，点于同一块聚酰胺或硅胶G薄层板上，以苯∶石油醚∶丁酮∶甲醇＝5∶2∶3∶3和苯∶氯仿∶丁酮∶甲醇＝6∶3∶1∶1为展开剂同时展开，取出晾干，喷以5％三氯化铝试液，置紫外灯366nm下检视。
7、如权利要求6所述的方法，其特征在于所述步骤C中以苯∶氯仿∶丁酮∶甲醇＝6∶3∶1∶1和甲苯∶甲酸乙酯∶甲酸＝5∶4∶1为展开剂同时展开。
8、如权利要求6或7所述的方法，其特征在于所述待测药材为江南卷柏、剑叶卷柏、二型卷柏、薄叶卷柏、深绿卷柏、单籽卷柏、黑顶卷柏、卷柏、粗叶卷柏、翠云草或兖州卷柏。
9、如权利要求6或7所述的方法，其特征在于所述制剂为江南卷柏所制备的中医药学上常用剂型。
10、如权利要求9所述的方法，其特征在于所述中医药学上常用剂型为片剂或胶囊剂。
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