CN1982453A - 人类新基因及其编码多肽的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明属于分子生物学领域,涉及选择性剪切产生的人类新基因及其编码的多肽的用途。本发明所述的人类新基因是从不同组织cDNA文库中克隆得到的具有新的剪切形式的基因,用于制备对临床病理中是否存在特定基因的某种特异剪切体的探针,或者制备对疾病标本和正常标本进行特定基因的不同剪切方式表达谱比较的PCR引物,或者用作特定疾病的药物靶点以制备对相关疾病的治疗药物。所述人类新基因编码的多肽用于制备检测疾病的抗原-抗体诊断试剂盒,以及用作特定疾病的药物靶点以筛选对相关疾病的治疗药物。
Description
技术领域
本发明属于分子生物学领域,涉及基因及其编码的多肽,具体是涉及选择性剪切产生的人类新基因及其编码的多肽的用途。
背景技术
基因上含有蛋白质编码信息的部分叫做外显子(exon),每个外显子均编码一个完整蛋白质的特定部分。在一些生物(包括人类)基因的外显子常被一些长的DNA片段分割,这些片段又称内含子(intron),其功能目前仍在研究中。
剪切(Splicing)是指在RNA中去除内含子(intron)和连接外显子(exon),从而使内含子们被剪除掉,而原来被分隔的外显子们被接在一起。剪切是真核生物前体mRNA(pre-mRNA)转录后加工的常见方法,其结果是从一个前体mRNA(pre-mRNA)上产生出不同的mRNA。
mRNA选择性剪切
学者们正在改写人类遗传学的规则,他们的发现有助于覆盖从糖尿病到癌症到心脏病的范围的医药的进展。正被打破的是老版本的“一个基因一个蛋白”规则,它是指一个单独的基因只能产生一种蛋白。该规则已经被人们的最新研究所抛弃,因为一个称为选择性剪切(alternative splicing)的过程的发现,该过程中一个单独的基因可以产生许多不同的蛋白质。
选择性剪切(alternative splicing)是指一个基因不仅编码一氨基酸链,它能编码一定数量的氨基酸链。在某些基因中,不同的外显子的组合会在不同的时期被激活,每一种组合都会产生一种蛋白。真核细胞中的绝大部分基因必须经过剪切,才能作为蛋白质合成的模板。其中许多基因可通过不同的剪切方式,即变换剪切而编码不同功能的蛋白。
选择性剪切的发现解决了有关人类基因组的一个最大困惑,即为什么人类基因组可用如此少的基因产生出如此众多的多样性。生物学家以前认为复杂的人类需要至少5万个基因,最终从人类基因组计划的3万个数据中找出所有的基因。最新的预测是约2万个基因——跟一种简单的蠕虫的基因数目差不多。选择性剪切长久以来一直被认为是一种非常罕见的现象,但是研究者们现在宣称至少在过半,有些人甚至说几乎全部的人类基因,都有或多或少的选择性剪切发生。这个发现在原理上可以解释人类基因数目虽少,可是依然可以产生如此众多的,几十万甚至上百万的蛋白种类。
目前的研究表明,基因的选择性剪切(alternative splicing)是进化中新基因产生的重要方式之一。例如,中科院昆明动物研究所、美国Cincinnati大学宿兵博士的研究小组研究了Neuropsin基因选择性剪切的分子进化。Neuropsin基因是编码主要在大脑海马区表达的丝氨酸蛋白酶的基因。对小鼠的研究发现该基因同学习和记忆的功能调节以及大脑的发育相关。在人脑中,Neuropsin基因表达两种RNA(Type-I和Type-II)。其中,Type II是小鼠中没有的。在人的胚胎中,Type-I和Type-II两种剪切方式都有表达,且丰度相似。在成人脑中,Type-II成为优势表达的剪切方式,Type-I仅有少量表达。该研究小组测定了主要灵长类代表物种的Neurospin基因序列。研究发现,在新大陆猴和旧大陆猴中,Type-II特异的第3外显子存在1-2个碱基的插缺,从而导致Type-II读码框的改变;但在小猿和大猿中没有发现插缺。因此,他们推测,TypeII起源于距今约1千8百万年前的人猿超科(Hominoid)的祖先。这种新的Neuropsin基因的剪切方式的产生,可能对灵长类大脑功能的演化产生影响。他们进一步分析了Neuropsin两种剪切产物在人和非人灵长类大脑中的表达情况。结果显示,Type-II只在人的大脑中表达。在检测的猕猴、滇金丝猴和长臂猿的大脑中只表达Type-I。因此,Type-II在大脑中发挥生物学功能可能比1千8百万年更晚近。相关研究论文2004年7月28日发表于国际知名杂志《分子生物学与进化》(MolecularBiology and Evolution)网络版上。
此外,选择性剪切有可能是决定生物体种间差异的重要原因。人们希望能根据已知的选择性剪切的数据,寻找出决定选择性剪切的因素,并以此来预测新的选择性剪切的位点。
mRNA选择性剪切与疾病的关系
由于同一个基因在不同生长发育阶段,或不同生理病理下,或不同组织器官中,或不同细胞类型中可能转录为不同的剪切体,而同一个基因的不同剪切体可能具有不同的甚至相反的功能,因此研究同一个基因的不同剪切体的表达对于疾病诊断与治疗评估至关重要。
某些基因的初级RNA转录产物可以进行选择性剪切以产生mRNA,该mRNA与该基因产生的大部分mRNA是不同的,该mRNA翻译成选择性剪切形式的蛋白质,该蛋白质含有与相应的正常剪切产生的蛋白质不同的氨基酸序列。选择性剪切形式的蛋白质通常在一定生理或病理状态下以组织特异性的方式表达。这些选择性剪切产生的mRNA存在于许多类型的癌症、糖尿病、阿尔海默氏病和红斑狼疮等病人的患病或异常细胞中,而在正常细胞中基本不存在。
目前研究发现,选择性剪切是人体中蛋白组多样性的主要来源,它与疾病和治疗有高度相关性。例如,止痛药的长期目标是一种神经特异性的COX-1的选择性剪切异构体。几种主要疾病,如胆囊纤维化,与顺式因子或反式因子的突变或变化有关,导致异常剪切和不正常蛋白的产生。更正错误的剪切是分子治疗法的一个重要目标。近来的研究已经采用修改的寡聚核苷酸去抑制隐藏的内含子,或通过突变使活跃的内含子减弱,提示这些反应物可最终导致有效的治疗。(Mariano A Garcia-Blanco,et al.Alternative splicing in diseaseand therapy,Natrue Biotechnology 22,535-546,2004)
其他类似的研究可见Jiang C,Yu L,Zhao Y et al.Cloning and characterization of CIS 1b(cytokine inducible SH2-containing protein 1b),an alternative splicing form of CIS 1 gene.DNA Seq.2000;11:149-154.(复旦大学),该研究揭示:细胞因子可诱导的SH2包含蛋白1b(CIS 1b)是CIS 1基因的一种选择性剪切形式。
mRNA选择性剪切与心脏病的关系
机体从青年到成年的发育过程中,会发生组织和器官水平的重塑现象,这种重塑现象依赖于外界环境和条件。同样在许多疾病条件下,如心肌肥厚,心力衰竭等条件下,心脏会发生病理性重塑,但心脏的发育和重塑中作用的机理并不是十分清楚。一篇发表于2005年1月14日《细胞》(Cell)上的封面文章(Xiang-Dong Fu,et al,ASF/SF2-Regulated CaMKIIδ Alternative Splicing Temporally Reprograms Excitation-Contraction Coupling in CardiacMuscle,Cell,Vol.120,59-72,January 14,2005)报道了来自美国加州大学(UCSD)的以华人学者为主的一项重要研究成果:选择性剪切在心脏病中扮演重要角色。
付向东等人的研究发现内质网(SR)上一个蛋白ASF/SF2的基因在心脏的发育和重塑中可能扮演着中心的角色,而ASF/SF2是作用于选择性剪切的蛋白家族成员。采用该基因敲除的小鼠进行研究,发现该基因是通过调节CaMKIIδ(一种负责心脏收缩和组织生长的钙酶),从而调节了心脏的兴奋收缩耦联的过程,该基因突变或缺失会导致心脏兴奋收缩耦联的丧失,从而严重影响了心脏的发育和重塑。ASP/SF2这一内质网上蛋白的发现为将来心肌发育和许多心脏疾病提供了新的药物靶点。《细胞》杂志对该篇文章作了高度的评价,认为:选择性剪切调节影响了心脏发育(Alternative Splicing Regulation Impacts HeartDevelopment)。
mRNA选择性剪切与自身免疫疾病的关系
杨晓峰和他的同事研究了在自身免疫疾病(例如风湿性关节炎和I型糖尿病)中的选择性剪切现象,这类疾病中机体免疫系统错误攻击了自身的组织(Xiao-Feng Yang,M.D.,Ph.D,assistant professor,medicine and immunology,and Thomas A.Cooper,professor,pathology,Baylor School of Medicine,Houston;Jan.14,2005,Cell;December 2004 Journal ofAllergy and Clinical Immunology)。他们比较了随机选自人类基因组的9,554个蛋白质中的45个与自身免疫疾病相关的蛋白。他们发现:在特殊区域的选择性剪切发生在称为自身抗原的所有蛋白中,该剪切引发免疫系统的攻击。在仅42%的随机挑选的蛋白质中发现了选择性剪切。当这些异构体(不同的蛋白形式)超过一定差异的极限,自体蛋白的免疫耐受会被打破,免疫系统开始攻击这些蛋白和细胞。这些发现将具有药物开发的潜力,人们将找到阻止该蛋白的异常形式的表达,或者阻断免疫系统对它们的反应。
mRNA选择性剪切与癌症的关系
基因的选择性剪切的研究也有助于人们最终揭示肿瘤的机制。正常肿瘤的发生、发展和转移是一个非常复杂的病理过程,其中牵涉的生物大分子及其相互作用非常复杂。正常组织和肿瘤组织在基因组DNA水平上是有差异的,这种差异诸如易位、倒位、插入和缺失、扩增等。已知的这些种类的突变可以作为探针进行荧光原位杂交,对待分析个体进行突变检测。有研究报道基因的不同剪切方式同癌症的发生相关[Cooper TA,Mattox W.Theregulation of splice-site selection,and its role in human disease.Am J HumGenet,1997,61:259-266.]。
目前的研究表明,肿瘤从本质上来说是基因病。原癌基因、癌基因、肿瘤抑制基因,实际上是对细胞生长,分化起正向或者反向调节的基因。在保持机体的正常功能方面起重要的作用。如果发生异常改变,则可能引起细胞的转化和肿瘤的发生。而肿瘤的生长和转移,依赖于肿瘤内的血管生成。在肿瘤血管生成中起作用的众多因子,当前研究得最多,最受重视的是血管内皮生长因子(VEGF)。VEGF是一种重要的血管源性生长因子,主要由血管内皮细胞、巨噬细胞、纤维母细胞、平滑肌细胞等组织细胞以及各种肿瘤细胞分泌,能特异性的与血管内皮细胞受体结合,促进血管内皮细胞的分裂与增殖,并能增加微血管的通透性,对抗体、肿瘤的血管生成起着重要的作用。人VEGF基因长约14kb,由8个外显子、7个内含子交替组成,经过转录1水平的剪切,产生5种不同的转录子,形成5种异构体,VEGF121、VEGF145、VEGF165、VEGF189、VEGF206,各种异构体所含氨基酸的数量不同,其生物学特性也有所不同。VEGF121因缺少外显子6和7编码的氨基酸,无肝素结合活性,以可溶性形式存在;VEGF165仅缺少外显子6编码的氨基酸,而具有外显子7编码的氨基酸,分泌后50%与肝素结合,50%可溶形式存在,在组织细胞中含量最丰富,适于肌注、静脉使用,在动物实验和临床研究中应用较多;VEGF189、VEGF206则富含碱性氨基酸,有强肝素亲合力,主要以结合形式存在。
例如,为寻求KCHIP1基因与乳腺癌之间的关系,刘征等人对收集到的12例乳腺癌组织、12例正常乳腺组织样本进行KCHIP1基因cDNA扩增、突变检测。经测序证实,在这些乳腺癌组织样本中没有发现KCHIP1基因的突变,但发现了KCHIP1基因一种新的剪接型,这个新剪接型是在原来KCHIP1基因外显子1和外显子2之间多了一个162bp的插入片段(AY780424)。(刘征,肖向军,樊飞跃,孙元明,李雨民,杨福军,KCHIP1基因一种新剪切型的发现,癌症,2005年6期)
例如,在乳腺癌、食道癌、胰腺癌等多种癌症中,经常会发现Cyclin D1的过度表达。糖原合成酶激酶3β(Glycogen synthesis kinase 3β)导致Cyclin D1在保守的C端残基Thr-286处磷酸化,从而促使G1期进入S期时CRM1依赖的cyclin D1核输出。Cyclin D1在Thr-286处的突变会影响其磷酸化从而引发细胞转化。但是,仅是普通的cyclin D1的过度表达并不能导致这种转化。Cyclin D1的突变体,Cyclin D1-T286,不能被GSK-3β3磷酸化,并且在整个细胞周期都处于核中,该突变体能够在没有其他癌基因存在情况下转化鼠纤维细胞,这表明cyclin D1无法核输出会提高cyclin D1的致癌性。但是迄今为止,在人类癌症中还没有发现类似的突变。尽管没有证据表明cyclin D1会在Thr-286处发生突变,但FengminLu等人的研究表明,一种经选择性剪切得到的cyclin D1 mRNA(cyclin D1b)编码了缺少Thr-286的cyclin D1异构体,在许多癌症中都发现了cyclin D1b的选择性表达(Fengmin Lu,Andrew B.Gladden,and J.Alan Diehl,Cyclin D1的选择性剪切异构体——Cyclin D1b是核癌基因,CANCER RESEARCH63,7056-7061,November 1,2003)。Cyclin D1(CCND1)被选择性剪切后可得到的一种编码特殊的cyclin D1异构体的mRNA产物,即cyclin D1b,这种异构体缺失Thr-286。通过对cyclin D1b的克隆表达研究,发现它仍然保持了结合和活化CDK4的能力。但跟正常的cyclin D1a不同的是,cyclin D1b在细胞周期中始终处在核内,其组成性表达会促使细胞转化。利用cyclin D1b特异性抗血清,在食道癌来源的细胞株和原发性食道癌中均检测到该蛋白的高表达。从而得到结论,选择性剪切导致了核内致癌性cyclin D1异构体的表达。Fengrnin Lu等的研究已经证实,cyclin D1b编码的蛋白编码了一个致癌性的细胞周期蛋白异构体。尽管cyclin D1b保持了结合并活化CDK4的能力,cyclinD1b蛋白对GSK-3β和CRM1依赖的核输出有阻碍作用,从而会留在核中。同普通的cyclinD1相比,cyclin D1b的表达足够推动NIH-3T3鼠纤维细胞的转化。
发明内容
本发明的目的是提供人类新基因及其编码的多肽的用途。
本发明所述的人类新基因,是以已公开的同源参考基因序列为标准,从人体不同组织cDNA文库中克隆得到的具有新的剪切形式的基因,剪切体之间的差异DNA序列为SEQ IDNO:1-102之一。
本发明提供了所述的人类新基因用于制备对临床病理中是否存在特定基因的某种特异剪切体的探针的用途。
本发明提供了所述的人类新基因用于制备对疾病标本和正常标本进行特定基因的不同剪切方式表达谱比较的PCR引物的用途。
本发明提供了所述的人类新基因用作特定疾病的药物靶点以制备对相关疾病的治疗药物的用途。
本发明所述的人类新基因所编码的多肽,其特征在于:是以已公开的同源参考基因编码序列为标准,从人体不同组织cDNA文库中克隆得到的特定基因的具有新的剪切形式的基因编码的多肽,剪切体之间的差异氨基酸序列为SEQ ID NO:103-204之一。
所述的多肽用作抗原免疫动物以生产相应的抗体。
本发明提供了所述的多肽用于制备检测疾病的抗原-抗体诊断试剂盒的用途。
本发明所述的多肽用于制备检测自身免疫疾病的抗原-抗体诊断试剂盒。
本发明所述的多肽用于制备检测非自身免疫疾病的抗原-抗体诊断试剂盒。所述的非自身免疫疾病包括癌症、心血管病、精神病等疾病。
本发明提供了所述的多肽用作特定疾病的药物靶点以筛选对相关疾病的治疗药物的用途。
本发明涉及102个基因的新剪切方式,见下表:
序号 | 参考基因存取号(注1) | 新基因存取号 | 新基因的缺失或插入的核苷酸序列(注2) | 新基因的缺失或插入的氨基酸序列(注3) | 基因分类 | 基因名称 |
1 | NM_005023.1 | AY780790.1 | 613:D231SEQ ID NO.1 | 205:D77SEQ ID NO.103 | 分泌蛋白 | PGGTlB |
2 | NM_032019.3 | AY450395.1 | 754:D150SEQ IDNO.2 | 252:D50SEQ ID NO.104 | 分泌蛋白 | HDAC10 |
3 | NM_005671.1 | AY302140.1 | 88:D111SEQ ID NO.3 | 30:D37SEQ ID NO.105 | 分泌蛋白 | reproduction 8 |
4 | BC033868.1 | AY487420.1 | 127:D108SEQ ID NO.4 | 43:D36SEQ ID NO.106 | 分泌蛋白 | hypotheticalprotein |
5 | NM_004269.1 | DQ099387.1 | 460:D108SEQ ID NO.5 | 154:D36SEQ ID NO.107 | 分泌蛋白 | CRSP8 |
6 | NM_021229.1 | AY330211.1 | 1510:D69SEQ ID NO.6 | 504:D23SEQ ID NO.108 | 分泌蛋白 | NTN4 |
7 | NM_003480.1 | AY339060.1 | 217:D30SEQ ID NO.7 | 73:D10SEQ ID NO.109 | 分泌蛋白 | MAGP2 |
8 | AK097858.1 | AY359884.1 | 343:D30SEQ ID NO.8 | 115:D10SEQ ID NO.110 | 分泌蛋白 | TCRB |
9 | NM_001890.1 | DQ064604.1 | 277:D24SEQ ID NO.9 | 93:D8SEQ ID NO.111 | 分泌蛋白 | casein(CSN1) |
10 | NM_007164.1 | DQ076657.1 | 703:D24SEQ ID NO.10 | 235:D8SEQ ID NO.112 | 分泌蛋白 | MADCAM1 |
11 | XM_209363.1 | AY424277.1 | 157:D294SEQ ID NO.11 | 53:D98SEQ ID NO.113 | 蛋白磷酸化酶 | PTPNS |
12 | BC012102.2 | DQ234351.1 | 679:D255SEQ ID NO.12 | 227:D85SEQ ID NO.114 | 蛋白磷酸化酶 | protein tyroSinephosphatasereceptor type F |
13 | NM_020547.1 | AY714878.1 | 1141:D285SEQ ID NO.13 | 381:D95SEQ ID NO.115 | 蛋白激酶 | AMHR2 |
14 | NM_002750.2 | DQ234352.1 | 616:D228SEQ ID NO.14 | 206:D76SEQ ID NO.116 | 蛋白激酶 | MAPK8 |
15 | L01087.1 | AY702977.1 | 1648:D189SEQ ID NO.15 | 550:D63SEQ ID NO.117 | 蛋白激酶 | PRKCQ |
16 | AK057247.1 | DQ104438.1 | 805:D171SEQ ID NO.16 | 269:D57SEQ ID NO.118 | 蛋白激酶 | |
17 | NM_002759.1 | AY302136.1 | 787:D123SEQ ID NO.17 | 263:D41SEQ ID NO.119 | 蛋白激酶 | PRKR |
18 | NM_016276.3 | AY987010.1 | 55:D102SEQ ID NO.18 | 19:D34SEQ ID NO.120 | 蛋白激酶 | SGK2 |
19 | NM_014489.1 | AY373030.1 | 160:D183SEQ ID NO.19 | 54:D61SEQ ID NO.121 | 膜蛋白 | FRAG1 |
20 | NM_005074.1 | AY780791.1 | 736:D162SEQ ID NO.20 | 246:D54SEQ ID NO.122 | 膜蛋白 | SLC17A1 |
21 | NM_023003.1 | DQ021909.1 | 709:D93SEQ ID NO.21 | 237:D31SEQ ID NO.123 | 膜蛋白 | TM6SF1 |
22 | NM_002231.2 | AY303776.1 | 262:D75SEQ ID NO.22 | 88:D25SEQ ID NO.124 | 膜蛋白 | KAI1 |
23 | NM_018375.1 | AY780789.1 | 403:D69SEQ ID NO.23 | 135:D23SEQ ID NO.125 | 膜蛋白 | SLC39A9 |
24 | NM_080476.1 | AY339061.1 | 196:D60SEQ ID NO.24 | 66:D20SEQ ID NO.126 | 膜蛋白 | CDC91L1 |
25 | AF395708.1 | AY357943.1 | 127:D48SEQ ID NO.25 | 43:D16SEQ ID NO.127 | 膜蛋白 | ORMDL3 |
26 | NM_005373.1 | DQ234353.1 | 79:D21SEQ ID NO.26 | 27:D7SEQ ID NO.128 | 膜蛋白 | MPL |
27 | NM_003471.1 | AY780786.1 | 514:D87SEQ ID NO.27 | 172:D29SEQ ID NO.129 | 离子通道 | KCNAB1 |
28 | NM_002561.1 | DQ234349.1 | 289:D72SEQ ID NO.28 | 97:D24SEQ ID NO.130 | 离子通道 | P2RX5 |
29 | NM_031954.1 | AY597809.1 | 526:D69SEQ ID NO.29 | 176:D23SEQ ID NO.131 | 离子通道 | KCTD10 |
30 | NM_018983.2 | AY780787.1 | 541:D54SEQ ID NO.30 | 181:D18SEQ ID NO.132 | 离子通道 | NOLA1 |
31 | AF484416.1 | AY780792.1 | 400:D1536SEQ ID NO.31 | 134:D512SEQ ID NO.133 | rhysin 2 | |
32 | NM_024773.1 | AY345239.1 | 499:D588SEQ ID NO.32 | 167:D196SEQ ID NO.134 | FLJ13798 |
33 | NM_001115.1 | DQ104739.1 | 2110:D393SEQ ID NO.33 | 704:D131SEQ ID NO.135 | ADCY8 | |
34 | NM_175709.1 | DQ064603.1 | 241:D279SEQ ID NO.34 | 81:D93SEQ ID NO.136 | CBX7 | |
35 | NM_006813.1 | AY303779.1 | 304:D237SEQ ID NO.35 | 102:D79SEQ ID NO.137 | PROL2 | |
36 | NM_004809.3 | DQ064605.1 | 790:D213SEQ ID NO.36 | 264:D71SEQ ID NO.138 | STOML1 | |
37 | NM_003624.1 | DQ234346.1 | 79:D204SEQ ID NO.37 | 27:D68SEQ ID NO.139 | RANBP3 | |
38 | BC020242.1 | AY333987.1 | 253:D192SEQ ID NO.38 | 85:D64SEQ ID NO.140 | ||
39 | NM_007267.3 | DQ104440.1 | 451:D180SEQ ID NO.39 | 151:D60SEQ ID NO.141 | LAK-4P | |
40 | NM_021734.2 | AY346372.1 | 289:D171SEQ ID NO.40 | 97:D57SEQ ID NO.142 | SLC25A19 | |
41 | BC033153.1 | AY337579.1 | 112:D129SEQ ID NO.41 | 38:D43SEQ ID NO.143 | MGC45780 | |
42 | NM_018152.1 | DQ104738.1 | 208:D123SEQ ID NO.42 | 70:D41SEQ ID NO.144 | FLJ10600 | |
43 | AF100751.1 | AY353086.1 | 373:D114SEQ ID NO.43 | 125:D38SEQ ID NO.145 | FKBP7 | |
44 | AK130020.1 | AY987009.1 | 334:D111SEQ ID NO.44 | 112:D37SEQ ID NO.146 | ||
45 | NM_014009.2 | DQ010327.1 | 208:D105SEQ ID NO.45 | 70:D35SEQ ID NO.147 | FOXP3 | |
46 | AK055158.1 | AY360463.1 | 373:D96SEQ ID NO.46 | 125:D32SEQ ID NO.148 | FLJ30596-like 蛋白 | |
47 | NM_003344.1 | AY302138.1 | 205:D93SEQ ID NO.47 | 69:D31SEQ ID NO.149 | UBE2H | |
48 | NM_006611.1 | AY334570.1 | 115:D90SEQ ID NO.48 | 39:D30SEQ ID NO.150 | KLRA1 | |
49 | AF370420.1 | DQ074695.1 | 88:D90SEQ ID NO.49 | 30:D30SEQ ID NO.151 | PP14397 | |
50 | NM_005705.1 | AY303780.1 | 190:D75SEQ ID NO.50 | 64:D25SEQ ID NO.152 | PHEMX |
51 | AK094830.1 | AY336746.1 | 130:D723SEQ ID NO.51 | 44:D24SEQ ID NO.153 | thioredoxin-like 2(TXL2) | |
52 | BC018082.1 | AY302139.1 | 238:D69SEQ ID NO.52 | 80:D23SEQ ID NO.154 | ||
53 | NM_004914.1 | AY336745.1 | 361:D66SEQ ID NO.53 | 121:D22SEQ ID NO.155 | RAB36 | |
54 | BC013953.1 | AY359883.1 | 211:D60SEQ ID NO.54 | 71:D20SEQ ID NO.156 | CAC1 | |
55 | NM_138794.1 | AY341430.1 | 190:D48SEQ ID NO.55 | 64:D16SEQ ID NO.157 | LYPLAL1 | |
56 | BC034353.1 | AY303778.1 | 373:D36SEQ ID NO.56 | 125:D12SEQ ID NO.158 | ||
57 | NM_018388.1 | AY372211.1 | 772:D36SEQ ID NO.57 | 258:D12SEQ ID NO.159 | ||
58 | AK091831.1 | AY439221.1 | 400:D33SEQ ID NO.58 | 134:D11SEQ ID NO.160 | hYPothetical蛋白FLJ34512 | |
59 | S95058.1 | AY353088.1 | 37:D27SEQ ID NO.59 | 13:D9SEQ ID NO.161 | MAX | |
60 | AF142417.1 | AY780788.1 | 625:D24SEQ ID NO.60 | 209:D8SEQ ID NO.162 | quaking isoform | |
61 | NM_021046.1 | AY360461.1 | 88:D21SEQ ID NO.61 | 30:D7SEQ ID NO.163 | LOC57830 | |
62 | NM_080863.1 | AY557346.1 | 772:D18SEQ ID NO.62 | 258:D6SEQ ID NO.164 | ASB16 | |
63 | L34703.1 | AY360462.1 | 346:D15SEQ ID NO.63 | 116:D5SEQ ID NO.165 | TCRA | |
64 | NM_006992.1 | AY834277.1 | 508:D15SEQ ID NO.64 | 170:D5SEQ ID NO.166 | B7 isoform | |
65 | NM_014591.1 | AY302141.1 | 73:D96SEQ ID NO.65 | 25:D32SEQ ID NO.167 | 离子通道 | KCNIP2 |
66 | NM_012452.1 | AY302137.1 | 121:D81SEQ ID NO.66 | 41:D27SEQ ID NO.168 | 细胞因子受体 | TNFRSF13B |
67 | BC015909.1 | DQ099385.1 | 397:D144SEQ ID NO.67 | 133:D48SEQ ID NO.169 | ADP-ribosylation-like factor 6interacting 蛋白 4 | |
68 | BC001244.1 | AY337578.1 | 280:D87 | 94:D29 | ASB9 |
SEQ ID NO.68 | SEQ ID NO.170 | |||||
69 | NM_138567.1 | AY353087.1 | 145:D48SEQ ID NO.69 | 49:D16SEQ ID NO.171 | synaptotagminVIII(SYT8) | |
70 | NM_020528.1 | AY780793.1 | 580:D69SEQ ID NO.70 | 194:D23SEQ ID NO.172 | PCBP3 | |
71 | BC019643.1 | AY506562.1 | 451:D27SEQ ID NO.71 | 151:D9SEQ ID NO.173 | PDIP46 | |
72 | AF301009.1 | AY517497.1 | 667:D30SEQ ID NO.72 | 223:D10SEQ ID NO.174 | BIRC7 | |
73 | BC022317.1 | AY357942.1 | 346:D15SEQ ID NO.73 | 116:D5SEQ ID NO.175 | T cell receptordelta-chain | |
74 | AF111804.1 | AY349360.1 | 64:I42SEQ ID NO.74 | 22:I14SEQ ID NO.176 | 转录因子 | MSTP023 |
75 | NM_032585.1 | AY597808.1 | 196:I99SEQ ID NO.75 | 66:I33SEQ ID NO.177 | 分泌蛋白 | TTTY6 |
76 | NM_007161.1 | DQ099382.1 | 100:I15SEQ ID NO.76 | 34:I5SEQ ID NO.178 | 分泌蛋白 | LST1 |
77 | NM_014370.1 | DQ099381.1 | 949:I99SEQ ID NO.77 | 317:I33SEQ ID NO.179 | 蛋白激酶 | STK23 |
78 | NM_001892.2 | DQ082865.1 | 457:I84SEQ ID NO.78 | 153:I28SEQ ID NO.180 | 蛋白激酶 | CSNK1A1 |
79 | NM_002610.2 | DQ234350.1 | 412:I60SEQ ID NO.79 | 138:I20SEQ ID NO.181 | 蛋白激酶 | PDK1 |
80 | BC032784.1 | AY987011.1 | 985位插入33SEQ ID NO.80 | 329:I11SEQ ID NO.182 | 蛋白激酶 | CaM kinase |
81 | BC039154.1 | AY597811.1 | 592:I96SEQ ID NO.81 | 198:I32SEQ ID NO.183 | chromosome 16hyPotheticalprotein | |
82 | AK127379.1 | DQ070854.1 | 175:I96SEQ ID NO.82 | 59:I32SEQ ID NO.184 | FLJ45455-likeprotein | |
83 | NM_002691.1 | DQ234348.1 | 1777:I78SEQ ID NO.83 | 593:I26SEQ ID NO.185 | POLD1 | |
84 | AK093467.1 | AY360464.1 | 70:I72SEQ ID NO.84 | 24:I24SEQ ID NO.186 | hyPothetical 蛋白LOC146177-likeprotein | |
85 | BC014515.1 | AY349357.1 | 46:I69SEQ ID NO.85 | 16:I23SEQ ID NO.187 | SDCCAG3 |
86 | BC033748.1 | DQ111782.1 | 580:I69SEQ ID NO.86 | 194:I23SEQ ID NO.188 | chromosome 16unknown | |
87 | AK094842.1 | AY333281.1 | 190:I57SEQ ID NO.87 | 64:I19SEQ ID NO.189 | chromosome 9unknown | |
88 | BC016460.1 | AY302134.1 | 367:I54SEQ ID NO.88 | 123:I18SEQ ID NO.190 | MGC18079 | |
89 | NM_014567.1 | AY545071.1 | 913:I54SEQ ID NO.89 | 305:I18SEQ ID NO.191 | BCAR1 | |
90 | BC034296.1 | AY349359.1 | 334:I51SEQ ID NO.90 | 112:I17SEQ ID NO.192 | ||
91 | BC029565.1 | AY336744.1 | 34:I45SEQ ID NO.91 | 12:I15SEQ ID NO.193 | ||
92 | BC021740.1 | AY303777.1 | 25:I39SEQ ID NO.92 | 9:I13SEQ ID NO.194 | ||
93 | AK093059.1 | AY550933.1 | 508:I36SEQ ID NO.93 | 170:I12SEQ ID NO.195 | FLJ35740 | |
94 | BC026189.1 | DQ099386.1 | 562:I36SEQ ID NO.94 | 188:I12SEQ ID NO.196 | Sad1 and UNC84domain containing1 | |
95 | AF042386.1 | DQ160195.1 | 862:I30SEQ ID NO.95 | 288:I10SEQ ID NO.197 | CYP-33 | |
96 | AK001298.1 | AY349358.1 | 124:I21SEQID NO.96 | 42:I7SEQ ID NO.198 | ||
97 | NM_025010.1 | AY714879.1 | 448:I15SEQ ID NO.97 | 150:I5SEQ ID NO.199 | Kelch-like 18(KLHL18) | |
98 | NM_001142.2 | AY487421.1 | 103:I42SEQ ID NO.98 | 35:I14SEQ ID NO.200 | 分泌蛋白 | AMELY |
99 | NM_005122.1 | DQ022681.1 | 823:I15SEQ ID NO.99 | 275:I5SEQ ID NO.201 | 核激素受体 | NR1I3 |
100 | AY360461.1 | AY597812.1 | 241:I102SEQ ID NO.100 | 81:I34SEQ ID NO.202 | chromosome 11UHS KerB-like | |
101 | BC028199.1 | DQ153249.1 | 508:I114SEQ ID NO.101 | 170:I38SEQ IDNO.203 | ||
102 | AY303778.1 | AY597813.1 | 217:I12SEQ ID NO.102 | 73:I4SEQ ID NO.204 | chromosome 3hyPotheticalprotein |
注1:基因存取号是在GenBank的存取号,GenBank包含所有已知的核酸及蛋白质序列、以及与之相关的生物学信息和参考文献,是美国生物技术信息中心(NCBI)建立并维护的,是世界上权威的序列数据库。
注2:以参考基因编码序列为标准,新基因的缺失或插入氨基酸位置及长度。以序号1为例,“613:D231”是指从第613位开始缺失231个核苷酸,如此类推。以序号74为例,“64:I42”是指从第64位开始插入42个核苷酸,如此类推。
注3:以参考基因序列为标准,列出新基因的缺失或插入核苷酸位置及长度。以序号1为例,“205:D77”是指从第205位起缺失77个氨基酸,如此类推。以序号74为例,“22:I14”是指从第22位开始插入14个氨基酸,如此类推。
本发明是针对这些基因的不同剪切形式可能与疾病相关,可用于对临床病理中是否存在某种特异剪切体的探针。
按照GenBank中基因的参照序列设计全长ORF的5’端和3’端引物,在72个人体组织cDNA文库(心脏、肝、肺、肠、脾、肾、子宫、胎盘、睾丸等)中用PCR反应合成蛋白编码序列,然后用DNA测序仪进行测序,以获得同一基因的不同剪切形式。这些新剪切方式mRNA编码的蛋白可能在生物学功能、理化学特性与已报道的同一基因其他剪切方式所编码的蛋白不同,也可能由相同功能但功能强度不同。
基因水平的应用
通过对基因表达谱的分析可获得表达差异的情况,如果某种基因的某种剪切方式只在病变组织表达,那么就这个基因的某种剪切方式就可能与某种疾病直接相关,可用作该疾病诊断试剂盒的探针。因此,本发明所述的核酸序列可用作PCR引物对疾病标本和正常标本进行不同剪切方式表达谱比较,寻找用于疾病的检测和诊断的探针。
DNA芯片技术
目前,DNA芯片技术(DNA Microarray)已经被广泛应用,可以在基因水平上寻找药物靶标。具体而言,本发明所述的核苷酸序列可通过微点阵DNA芯片技术来高通量地分析和发现基因的这些剪切方式在正常和病理样本的表达差异,以寻找这些剪切异构体作为疾病诊断和治疗的探针。
本发明所述的核苷酸序列可通过新的基因表达谱分析技术如AmpArrayTM技术用于检测和诊断疾病。
AmpArrayTM技术
AmpArrayTM技术是广州复能基因有限公司开发的高灵敏的基因表达谱研究方法(http://www.genecopoeia.com.cn/product/amparray/)。该技术是将人体编码基因经过精心设计的高特异引物和高特异性和高灵敏性PCR组分置于96孔板中,每块96孔板中含有47个基因的引物和一个正对照(看家基因)的引物和模板,使用时只需要加入RT产物,然后进行PCR循环,即可及时观察某一类基因在不同情况下的表达差异。该技术具有:操作简单、快速,无需放射性标记、杂交等复杂、耗时的操作,在1-2天内即可获得结果;仅需要能使用96孔板的PCR仪,无需其他设备;高灵敏度,可根据转录水平调整PCR的循环数;高特异性,每对引物都经过严格筛选的具有高特异性;引物配对的选择性可降低基因组污染的影响;可在不同的样本发现不同剪切形式。该方法不仅可以用于基因表达谱的分析,还可以用于检测和诊断。
基于本发明所述的核苷酸序列库,可设计出针对不同选择性剪切体的引物,通过AmpArrayTM技术用于检测和诊断疾病。
分子信标技术
分子信标(molecular beacons)是一种具有自身配对区的DNA寡核苷酸分子探针。分子信标技术是利用荧光标记探针的碱基配对原理,通过观察探针荧光显示或淬灭的现象,确定目的基因的的分子标记。(S Tyagi,F R Kramer Nat Biotechnol,1996,14:303~308)目前,分子信标不仅可以用于基因的定量、定性检测,还可以用于基因点突变等的分析。另外,分子信标技术还为研究DNA-蛋白质之间的相互作用提供了一种简单,直接,灵敏,实时,甚至可以用于活体检测的方法。利用分子信标技术在分析、检测核酸和蛋白质中的优点,分子信标技术还可以作为生物芯片和生物传感器的探针。
分子信标是一种荧光标记的寡核苷酸链,一般含有25~35个核苷酸。在结构上,分子信标大体上可以分为三部分:(1)环状区:一般由15~30个核苷酸组成,可以与靶分子特异结合;(2)茎干区:一般由5~8个碱基对组成,在分子信标与靶分子结合过程中可发生可逆性解离;(3)荧光基团和淬灭基团:荧光基团一般连接在5’端;淬灭基团一般连接在3’端。本发明所述的核苷酸序列可设计为分子信标环状区的序列,因此可通过分子信标技术来分析基因表达,从而用于检测和诊断疾病。
蛋白水平的应用
本发明所述的多肽可以用任何多肽合成的方法制备。例如,该多肽可以在自动合成仪中合成,也可以由体外相应的mRNA翻译而得,还可以采用重组DNA技术生产本发明的多肽。该多肽可用于以下应用领域:
自身免疫疾病的检测和诊断
与自身免疫疾病相关的蛋白由于选择性剪切产生的异构体,是引发自身免疫系统攻击的自身抗原,该病人体内将产生相应抗体。因此,在自身免疫性疾病患者的细胞、组织和器官中能找到多种自身抗体。可通过对自身免疫病人与正常人的血清样本进行比较,寻找检测自身免疫疾病病人自己产生的抗体,即是否存在本发明所述的选择性剪切产生的多肽,从而用于检测和诊断疾病。
癌症及其他非自身免疫疾病的检测和诊断
本发明所述的选择性剪切产生的多肽可用于免疫宿主而制备抗体,该抗体可用于检测同类疾病的病人是否带有对应的抗原,即是否存在本发明所述的选择性剪切产生的多肽。
所述的抗体可以是单克隆抗体、多克隆抗体或者能够与抗原结合的抗体片段。抗体片段,例如Fab抗体片段来自抗体,保留了选择性结合抗原的能力,可以采用本领域已知的方法制备,例如美国专利第5876997号。
在免疫后的适当时机,例如当特异性的抗体滴度最高时,根据Kohler和Milstein(Nature1975,Vol256,p495)所述的融合技术,可以从宿主中获得产生抗体的细胞并采用标准的技术制备单克隆抗体。通过杂交瘤培养的上清液筛选出与多肽结合的抗体,采用如ELISA等分析方法,可以检测本发明的杂交瘤细胞。也可以采用噬菌体抗体展示文库进行筛选,来鉴定并分离针对选择性剪切形式的单克隆抗体。
本发明中的多克隆抗体可采用本领域已知的方法制备,用本发明的多肽免疫宿主,然后收获抗体。例如,采用ELISA法在不同时间检测免疫宿主的抗体滴度。又如,抗体可从宿主中收获与分离,进而用已知技术如色谱来获得抗体。
重组抗体例如嵌合抗体或者人源化单克隆抗体也在本发明的范围之内。这些重组抗体可以用本领域已知的重组DNA技术制备。
疾病的新药物靶点
本发明所述的选择性剪切产生的核苷酸序列和多肽序列,可能是相应疾病的新的药物靶点,人们可以从以下几个途径去开发药物:阻止该蛋白的异常形式的表达;阻断免疫系统对它们的反应。
附图说明
图1为获得基因不同剪切方式的核苷酸序列的克隆策略示意图;
图2为利用AmpArrayTM技术对基因新的剪切方式在正常组织和疾病组织进行表达谱分析的示意图。
具体实施方式
定义
在以下的说明中,广泛利用到许多重组DNA技术术语,为了能令说明书和权利要求书明晰且更好地理解,提供了以下术语的定义。
核苷酸:本文的“核苷酸”是指碱基—糖—磷的复合物。核苷酸是核酸(DNA和RNA)序列的基本单体构成单位。核苷酸还包括脱氧核糖三磷酸如dATP,dITP,dUTP,dGTP,dTTP及其衍生物。如:7-脱氧-dGTP,和7-脱氧-dATP。核苷酸在本文中还应包括双脱氧核糖三磷酸及其衍生物。例如脱氧核糖三磷酸包括ddATP,ddCTP,ddGTP,ddITP和ddTTP,但不仅限于以上例子。在本发明中,核苷酸包括未标记种,然后用各种技术带上可检测的标记核苷酸。可检测的标记,例如有:放射性同位素,荧光标记,化学发光标记及酶标记。
基因:指含有表达出多肽,蛋白或功能性RNA所需信息的DNA序列,包括启动子,结构基因以及其他涉及表达蛋白或功能RNA的序列。
结构基因:指一般能被转录成mRNA的DNA序列。然后这些mRNA又能翻译成为特异的多肽氨基酸序列。
纯化:此处是指相比较于培养物中的平均水平提高酶活性,即提高每单位重量蛋白的活性,不是指将蛋白纯化得非常均一。
引物:指单链寡核苷酸,它能通过与核苷酸单体共价结合而延伸从而扩增或聚合成核酸分子。
模板:指双链、单链的核酸分子,它能够被扩增、合成或测序。如果是双链DNA分子,在其被扩增,合成或测序前,先将双链变性成为一条第一链和一条第二链将促进反应。与部分模板序列互补的引物在合适的条件与模板杂交,然后聚合酶合成一个与模板或部分模板互补的分子。这个新合成的分子与原始模板长度一样或短于原始模板。
扩增:指在体外通过应用DNA聚合酶提高某个核酸序列的拷贝数。DNA扩增导致核苷酸整合到DNA分子的引物上由此形成了与DNA模板互补的新DNA分子。一个扩增反应包含了DNA复制的多个循环。例如包括PCR,一个PCR反应的5-100变性、褪火、合成新分子的循环。
聚合酶链式反应(PCR):包括合成一系列引物与目标DNA序列两端互补。引物与目的DNA,热稳定的DNA聚合酶。4种脱氧核苷酸(A、T、C、G)溶液被加热到足以使DNA互补双链分开的温度(约95℃),然后温度降至使引物与目的DNA两端序列结合,然后混合液再升温(约72℃)合成DNA。此温度延续一段时间后,混合液再次达到足以解开新合成的DNA双链的温度。于是完成第一个循环,混和液随后降温,再重复上述的过程(循环)。
热稳定:指能耐(抵抗)热变性的酶。嗜温性酶加热后可被失活,例如:T4的核苷酸激酶的3′磷酸酶活性在75℃/min就失去。在此发明中,相比较于嗜温性酶如T4的核苷酸激酶,热稳定的3′磷酸酶活性更能耐受热(高温)不失活。实际上,一个热稳定酶并不是意味这种酶能无限制(完全)地耐高温,高温(热)处理还是在某种程度上会降低酶的活性。相比较于嗜温性酶,一个热稳定酶往往具有更高的最适温度。
异源性:指两个不同来源的DNA片段在本质上没有遗传或物理上的相关性,异源性同时也可描述为在物理或遗传上有关联的分子,但这种关联在本质上完全不同。
同源性:在此用于两个不同核酸序列之间的比较。为此同源性的评价可认为是相同碱基的百分比。不包括为了获得较好的序列对比而引入的缺口。同源性比值可用核酸杂交技术评价,众所周知,也可通过比较两个序列的精确碱基的序列来确定。
此外,同源性实质上可理解为:A和B在严谨的条件,即温度介于50-70℃,双倍浓度的SSC缓冲液(2倍NaCl 17.5g/l及8.8g/l柠檬酸钠),0.1%十二烷基硫酸钠(SDS)下杂交,然后用在相同温度下,用浓度减少的SSC缓冲液,如1倍、1/2、1/10强度SSC(含0.1%SDS)来漂洗。然而,最适条件会有很大不同,取决于特定杂交反应。
启动子:在转录起启子上游的一段DNA序列,包含有转录必须的调控区域。在本发明的DNA构建中,所适用的启动子包括病毒、真菌、细菌、动物和植物启动子,它可以选择成为组成型启动子和诱导型启动子,如果是诱导型启动子,它会被诱导物激发而提高转录速率。相反如果是组成型的启动子,那么它的转录就不被诱导物调控或基本不受控制。
克隆载体:一种DNA分子,如:质粒,柯斯粒,噬菌体,它具有在宿主细胞自我复制的能力。往往包含一个标记基因,一个或少数几个限制性内酶切识别位点,用来插入外源DNA序列而不影响载体的基本的生物功能。
表达:指一个结构基因产生多肽或者RNA分子的过程。它包括基因转录成mRNA以及随后翻译成蛋白。
表达载体:指DNA分子含有用于在宿主细胞中表达的基因,通常基因的表达是在某个调控元件,包括组成型启动子和诱导型启动子,调控元件增强子的调控之下。此外的“调控元件”是指控制及调节基因表达的DNA序列。这样一个基因可被说成可调控地连接到一个调控元件上,意味着这个调控元件指导该基因表达所以才连接上。
重组宿主:含有克隆载体或者表达载体的原核或真核细胞,也包括原核或真核细胞的遗传特性被改造。
氨基酸:本文指标准氨基酸,即通常存在于天然多肽中的20种L型氨基酸。本发明的多肽中包含的氨基酸,尤其是羧基或氨基末端的氨基酸,可以被甲基化、酰胺化、乙酰化。
多肽和蛋白质:“多肽”和“蛋白质”是可以互换使用的术语,指的是一种包含至少2个由肽键或修饰的肽键共价连接的氨基酸残基。本发明中的多肽中可以存在二硫键。
阅读框(ORF):指核酸中一系列特定的密码子,例如翻译时产生特定多肽的mRNA。
其它本文所用的分子、细胞生物学和DNA重组上的术语应该被该领域的普通技术人员所掌握。
一.获得不同剪切方式的克隆(图1):
根据GeneBank的参照序列,设计其编码序列的5’和3’端特异引物;
用5’和3’端特异引物从72个人体组织的cDNA文库中进行扩增,扩增反应条件为:现94℃ 5min,然后94℃ 30s 55-58℃ 30s 68℃ 1min/kb反应20-30循环,再68℃7min。
1、用0.8-1.2%的琼脂糖凝胶结合EB(溴化乙啶)染色检测PCR扩增结果;
2、对于扩增结果阳性的PCR产物,应用GatwayTM技术的BP反应把PCR产物克隆到入门载体(pDonr vector),获得穿梭克隆;(具体操作参见Invitrogen Co.GatewayTM)。
3、对穿梭克隆进行测序(测序反应试剂和测序仪均购自ABI公司);
4、测序获得的克隆的序列,与参照序列进行BLAST分析,发现与基因的已经报道剪切方式不一样的剪切方式。
二.设计AmpArray引物:
1.目的基因mRNA序列BLAST分析:利用BLAST工具匹配基因组数据库(genomedatabase),记录剪接mRNA序列外显子的分界点;
2.AmpArray引物选择:根据记录的外显子的分界点,利用GeneLooper2.0引物设计软件,采用PCR引物设计与优化原则和高可信度的引物设计算法,选取(1)退火温度在60℃左右。(2)引物长度18~23BP之间。(3)扩增产物长度在200~400BP之间。(4)相对原始剪接版本插入外显子的新mRNA,一条引物(Forward引物或Reverse引物)在插入的外显子的序列中选择。另一条引物(Forward引物或Reverse引物)在跨至少一个内含子的外显子里选择(确保Forward引物与Reverse引物跨越至少一个内含子)。(5)相对原始剪接版本缺失外显子的新mRNA,一条引物(Forward引物或Reverse引物)选择连接缺失外显子的两个外显子头和尾部部分序列,利用引物设计软件进行优化。另一条引物(Forward引物或Reverse引物)在跨至少一个内含子的外显子里选择(确保Forward引物与Reverse引物跨越至少一个内含子);
三.利用AmpArrayTM技术对新的剪切方式基因在正常组织和疾病组织进行表达谱分析:
1总RNA的提取
1.1组织的匀质化
取100mg的组织样品1和2,分别加入1ml的TRIzoL试剂(按照体积比1∶10),室温放置5分钟,均质化组织。离心10分钟,12000rpm,4℃,吸取上清部分到新的1.5ml离心管中。
1.2分离RNA
加0.2ml的氯仿到离心管中,剧烈摇动15秒,室温放置10分钟后,离心15分钟,12000rpm,4℃。溶液分层。
1.3RNA的沉降
把离心后的上清部分转移到新的I.5ml离心管中,每管加0.5ml的异丙醇,室温放置10分钟,离心15分钟,12000rpm,4℃。RNA沉降在离心管底部。
1.4RNA的洗涤
去上清液,每管加入1ml的75%的乙醇溶液,振荡后。离心5分钟,7500rpm,4℃。
1.5RNA的溶解
去上清液,室温放置,干燥10分钟。加30ul水(用DEPC处理过),溶解RNA沉淀。
2反转录,总RNA样品1和2分别合成第一链cDNA。
2.1按顺序加入下列样品:
总RNA(1.0ug/ul) 10ul
Oligo dT(0.5ug/ul) 2ul
补水到25ul
2.2把样品混合后,70℃变性5分钟,立即放置于冰上。按顺序加入下列试剂:
5×MMLV RT反应缓冲液 20ul
5×dNTP混合物(每个2.5mM) 20ul
MMLV RT(200unit/ul) 2.5ul
补水到100ul
2.3把混合物放置于42℃,反应50分钟。然后70℃,10分钟,灭活酶活性。
2.4合成第一链cDNA样品1和2,冻存在-20℃。
3cDNA的定量实验
3.1第一链cDNA样品1和2,分别制备一系列的cDNA的稀释梯度,每个相差5倍,cDNA的稀释倍数分别为1/5,1/25,1/125,1/625,1/3125。
3.2准备PCR反应:
取稀释后每管cDNA样品 2ul
10×dNTP(每个2mM) 2.5ul
10×PCR缓冲液 2.5ul
GAPD primers(每个5pmol/ul) 1ul
Taq polymerase 0.2ul
补水到25ul。
3.3PCR反应条件:94℃ 5分钟;(94℃ 30秒,55℃ 30秒,72℃ 60秒,30个循环);72℃ 7分钟;4℃保存。
3.4 PCR完成后,取10ulPCR产物,加入4ul加样缓冲液,电泳使用1%的琼脂糖凝胶。
3.5拍照使用Tanon凝胶成像系统,利用GelPicAnalyzer分析软件,对照片进行分析,根据PCR产物亮度的对比分析,确定cDNA样品1和2在哪个稀释梯度具有相同的浓度。将cDNA样品稀释成具有相同浓度的样品,保存在-20℃。
4 AmpArray PCR
4.1从冰箱中取出AmpArray平板(96孔板,每两个孔的引物是一样的,1,2是同一个引物;3,4是同一个引物……),放置在冰上。
4.2制备PCR反应混合物:
正常组织cDNA 疾病组织cDNA2
10×PCR缓冲液 2.5ul 2.5ul
10×dNTP(每个2mM) 2.5ul 2.5ul
cDNA样品 1ul 1ul
Taq polymerase 0.2ul 0.2ul
补水到24ul。
4.3分别将PCR混合物加入到AmpArray平板孔中,注意把cDNAl的PCR混合物加入到奇数孔中(1,3,5,7……);把cDNA2的PCR混合物加入到偶数孔中(2,4,6,8……)
4.4PCR反应
94℃ 5分钟;(94℃ 30秒,55℃ 30秒,72℃ 60秒,30个循环);72℃ 7分钟;4℃保存。
4.5取10ulPCR产物,加3ul的上样缓冲液,电泳。小心避免污染样品。采用1.2%的琼脂糖凝胶,电压3v/cm。紫外灯下照相。
4.6基因的表达与否,基因的表达丰度以及基因的选择性剪切等,都能从照片中看出;并且可以通过分析软件进行定量分析。
如图2所示,利用AmpArrayTM技术对新的剪切方式基因在正常组织和肺癌组织进行表达谱分析。电泳图中,T为肺癌组织,N为正常组织。23对AmpArrayTM引物在肺癌和正常组织扩增结果显示:第8泳道的AP_80481(AY780789)以及第21泳道的AP_80494(AY387856)在肺癌组织的表达量比正常组织高。
序列表(SEQUENCE LISTING)
<110>杨淑伟
<120>人类新基因及其编码多肽的用途
<130>
<160>204
<170>PatentIn version 3.3
<210>1
<211>231
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>1
tcctatgaca atggactggc acagggagct ggacttgaat ctcatggagg atcaactttt 60
tgtggcattg cctcactatg tctgatgggt aaactagaag aagttttttc agaaaaagaa 120
ttgaacagga taaagaggtg gtgtataatg aggcaacaaa atggttatca tggaagacct 180
aataagcctg tagacacctg ttattctttt tgggtgggag caactctgaa g 231
<210>2
<211>150
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>2
gagtttgacc ctgagctggt gctggtctcg gcaggatttg actcagccat cggggaccct 60
gaggggcaaa tgcaggccac gccagagtgc ttcgcccacc tcacacagct gctgcaggtg 120
ctggccggcg gccgggtctg tgccgtgctg 150
<210>3
<211>111
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>3
ggaatcaagg attttctttt gctttgtggc cggattttgc tactgcttgc tcttcttact 60
ttaattattt ctgtgactac ctcatggctt aactcattta aatctcccca a 111
<210>4
<211>108
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>4
gtggcgatgt tacgggcact gctccaagag gctcgatcct ctcaagcccc cagctcccgc 60
cccatctctg acccctcttc tcttctggca ccaccgcctc tcctaaag 108
<210>5
<211>108
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>5
gtgaccttgg gaaaggtgtt gaaagtgatc gtcgtcatgc ggagctgttt cattgatcga 60
acaatagtaa agggatataa cgagaatgtc tacacagaag atggcaag 108
<210>6
<211>69
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>6
ggtaaatgcg aatgtaagga acagacatta ggaaatgcca aggcattctg tggaatgaaa 60
tattcatat 69
<210>7
<211>30
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>7
gcctccctca gtgaaaaaaa taccactgca 30
<210>8
<211>30
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>8
ggcgggccgt caatggacca attgaacccc 30
<210>9
<211>24
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>9
gaaatgtctc tcagtaagtg tgcg 24
<210>10
<211>24
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>10
accacctccc cggagcctcc caac 24
<210>11
<211>294
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>11
ggtgagacac ttctactgag gtgtatggtg gtcggctcct gcactgatgg tatgataaaa 60
tgggtgaagg tgagcactca ggaccaacag gaaatttata actttaaacg tggctccttc 120
cctggggtaa tgcccatgat ccaacggaca tcagaaccac tgaattgtga ttattccatc 180
tatatccaca atgtcaccag ggagcacact ggaacctacc actgtgtgag gtttgatggt 240
ttgagtgaac actcagaaat gaaatcggat gaaggcacct cagtgcttgt gaag 294
<210>12
<211>255
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>12
ggtaaggact caggcagtgc ctggcccctg tcaccacaga gctgtgctgc acctgccggg 60
ctctctgccc agagcccttg gtgcagacac gcaagggact gccatgggcc cagtctcttc 120
tccttcctgc ttctttctgc agcagcagca acagctccca ctgggcaagt tcctggcgtc 180
tgccactact tcgccttcct tccttgcagg cccatgggga agcagccact cttgggagca 240
tgtatctt ttgta 255
<210>13
<211>285
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>13
gctggcaccc agaggtacat ggcaccagag ctcttggaca agactctgga cctacaggat 60
tggggcatgg ccctccgacg agctgatatt tactctttgg ctctgctcct gtgggagata 120
ctgagccgct gcccagattt gaggcctgac agcagtccac cacccttcca actggcctat 180
gaggcagaac tgggcaatac ccctacctct gatgagctat gggccttggc agtgcaggag 240
aggaggcgtc cctacatccc atccacctgg cgctgctttg ccaca 285
<210>14
<211>228
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>14
gtggatttat ggtctgtggg gtgcattatg ggagaaatgg tttgccacaa aatcctcttt 60
ccaggaaggg actatattga tcagtggaat aaagttattg aacagcttgg aacaccatgt 120
cctgaattca tgaagaaact gcaaccaaca gtaaggactt acgttgaaaa cagacctaaa 180
tatgctggat atagctttga gaaactcttc cctgatgtcc ttttccca 228
<210>15
<211>189
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>15
atcttgctgg gtcagaaata caaccactct gtggactggt ggtccttcgg ggttctcctt 60
tatgaaatgc tgattggtca gtcgcctttc cacgggcagg atgaggagga gctcttccac 120
tccatccgca tggacaatcc cttttaccca cggtggctgg agaaggaagc aaaggacctt 180
ctggtgaag 189
<210>16
<211>171
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>16
gctttgctgc ctcttgacct gcttctgaaa gtgccacccc atatgctcag ggcccacatt 60
aaggaaatag aggctgagtt agtgacaggg tggcagtccc atagccttcc tgctgtgatt 120
cttcgaaatc tcaaagatca tgggccacag atgggcacat tcttgtggca a 171
<210>17
<211>123
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>17
tttggcatgg attttaaaga aatagaatta attggctcag gtggatttgg ccaagttttc 60
aaagcaaaac acagaattga cggaaagact tacgttatta aacgtgttaa atataataac 120
gag 123
<210>18
<211>102
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>18
ggtaggggag gatggagagg gcagtggtgc ctgaagccct ggatgggcgg agctgacccc 60
ccaacaccaa ctctctcatg cctgctcctc cctgtccccc ca 102
<210>19
<211>183
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>19
tgtggggcca cgccctgcag gatgttctct gcggcctccc agcctttgga ccccgatggg 60
accttgttcc ggcttcgctt cacagccatg gtctggtggg ccatcacttt tcctgtgttc 120
ggcttcttct tctgcatcat ctggtccctg gtgttccact ttgagtacac ggtggccact 180
gac 183
<210>20
<211>162
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>20
gtcagttcaa gtagacaatc tctgcctatc aaggctatac ttaagtcgct tccagtctgg 60
gctatttcca ttggtagttt tacgtttttc tggtcacata acatcatgac actatacact 120
ccaatgttta tcaactccat gcttcatgtt aatataaaag ag 162
<210>21
<211>93
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>21
attgctttgg attgcccatc tgagctctgc cgattatata cgcaatttca agagccctat 60
ctaaaggatc ctgctgctta tcctaaaatt cag 93
<210>22
<211>75
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>22
tactttgctt tcctgctcct gatcctcatt gcccaggtga cggccggggc cctcttctac 60
ttcaacatgg gcaag 75
<210>23
<211>69
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>23
gatccagaag cagcaaggtc tagcaattcc aaaatcacca ccacgctggg tctggttgtc 60
catgctgca 69
<210>24
<211>60
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>24
actccattaa taatatacct ctttcatttc ctaattgact atgctgaatt ggtgtttatg 60
<210>25
<211>48
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>25
gtgagtgtcc ctgtcgtctg gaccctcacc aacctcattc acaacatg 48
<210>26
<211>21
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>26
gatgtctcct tgctggcatc a 21
<210>27
<211>87
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>27
gaaggattga aaggctccct ccagaggctg cagctcgagt atgtggatgt ggtctttgca 60
aatcgaccgg acagtaacac tcccatg 87
<210>28
<211>72
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>28
ggagagaacg tcttttttgt ggtcaccaac ctgattgtga cccccaacca gcggcagaac 60
gtctgtgctg ag 72
<210>29
<211>69
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>29
agcaattctg acgacaatat gttgaaaaac attgaactgt ttgataagct gtctctgcgc 60
tttaacgga 69
<210>30
<211>54
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>30
ggaggaggtg gcagaggtgg tggcagaggc ggtggtttta gaggtggaag agga 54
<210>31
<211>2136
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>31
atctttctta ctgtaacagc tgacctgaac tgtaacctgt tctccaaaga gcagagggca 60
tacataacca cactgtgccc tagtatcaga aaaatggaag gtcacgatgg aattgagaag 120
gtgtgtggtg acttccaaga cattgaaaga atacatcaat ttttgagtga gcagttcctg 180
gaaagtgagc agaaacaaca attttcccct tcaatgacag agaggaagcc actcagtcag 240
caggagaggg acagctgcat ttctccttct gaaccagaaa ccaaggcaga acaaaaaagc 300
aactattttg aagttccctt gccttacttt gaatacttta aatatatctg tcctgataaa 360
atcaactcaa tagagaaaag atttggtgta aacattgaaa tccaggagag ttctccaaat 420
atggtctgtt tagatttcac ctcaagtcga tcaggtgacc tggaagcagc tcgtgagtct 480
tttgctagtg aatttcagaa gaacacagaa cctctgaagc aagaatgtgt ctctttagca 540
gacagtaagc aggcaaataa attcaaacag gaattgaatc accagtttac aaagctcctt 600
atctttctta ctgtaacagc tgacctgaac tgtaacctgt tctccaaaga gcagagggca 660
tacataacca cactgtgccc tagtatcaga aaaatggaag gtcacgatgg aattgagaag 720
gtgtgtggtg acttccaaga cattgaaaga atacatcaat ttttgagtga gcagttcctg 780
gaaagtgagc agaaacaaca attttcccct tcaatgacag agaggaagcc actcagtcag 840
caggagaggg acagctgcat ttctccttct gaaccagaaa ccaaggcaga acaaaaaagc 900
aactattttg aagttccctt gccttacttt gaatacttta aatatatctg tcctgataaa 960
atcaactcaa tagagaaaag atttggtgta aacattgaaa tccaggagag ttctccaaat 1020
atggtctgtt tagatttcac ctcaagtcga tcaggtgacc tggaagcagc tcgtgagtct 1080
tttgctagtg aatttcagaa gaacacagaa cctctgaagc aagaatgtgt ctctttagca 1140
gacagtaagc aggcaaataa attcaaacag gaattgaatc accagtttac aaagctcctt 1200
ataaaggaga aaggaggcga attaactctc cttgggaccc aagatgacat ttcagctgcc 1260
aaacaaaaaa tctctgaagc ttttgtcaag atacctgtga aactatttgc tgccaattac 1320
atgatgaatg taattgaggt tgatagtgcc cactataaac ttttagaaac tgaattacta 1580
caggagatat cagagatcga aaaaaggtat gacatttgca gcaaggtttc tgagaaaggt 1440
cagaaaacct gcattctgtt tgaatccaag gacaggcagg tagatctatc tgtgcatgct 1500
tatgcaagtt tcatcgatgc ctttcaacat gcctcatgtc agttgatgag agaagttctt 1560
ttactgaagt ctttgggcaa ggagagaaag cacttacatc agaccaagtt tgctgatgac 1620
tttagaaaaa gacatccaaa tgtacacttt gtgctaaatc aagagtcaat gactttgact 1680
ggtttgccaa atcaccttgc aaaggcgaag cagtatgttc taaaaggagg aggaatgtct 1740
tcattggctg gaaagaaatt gaaagagggt catgaaacac cgatggacat tgatagcgat 1800
gattccaaag cagcttctcc gccactcaag ggctctgtga gttctgaggc ctcagaactg 1860
gacaagaagg aaaagggcat ctgtgtcatc tgtatggaca ccattagtaa caaaaaagtg 1920
ctaccaaagt gcaagcatga attctgcgcc ccttgtatca acaaagccat gtcatataag 1980
ccaatctgtc ccacatgcca gacttcctat ggtattcaga aaggaaatca gccagaggga 2040
agcatggttt tcactgtttc aagagactca cttccaggtt atgagtcctt tggcaccatt 2100
gtgattactt attctatgaa agcaggcata caaaca 2136
<210>32
<211>588
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>32
aaagcaaggg cggaccatgg tttgattcca gatgtgaagt tagaaaaaac agtcccccgg 60
ctgcaccgtc cgtccctcca gcatttcagg gagcagtttt tggttccagg gaggcccgtg 120
atcctgaaag gcgtggctga ccactggccg tgcatgcaga agtggagttt ggagtatatc 180
caggagatcg ctggctgccg aactgtccca gtggaagttg gttcgaggta cacagatgag 240
gaatggtccc agaccctcat gacggtcaac gagttcatca gcaaatacat cgtgaatgag 300
ccaagggacg tcgggtacct tgctcagcac cagctctttg accagatccc ggagttgaag 360
caggacatca gcatccccga ctactgcagc ctgggcgatg gggaggagga ggaaatcacc 420
atcaatgcct ggtttggtcc ccagggaacc atctccccac tacatcagga tccccagcaa 480
aacttcctag tgcaggtgat ggggaggaag tacatccggc tgtattcccc gcaggagtca 540
ggggctctgt accctcatga cacgcacctt ctccataaca cgagccag 588
<210>33
<211>393
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>33
tattctcaaa tgagggatga agtgttcaag tcaaacttgg tctgtgcatt tatcgttctt 60
ctatttatca cggcaataca aagtttgctt ccttcttcaa gagtgatgcc aatgaccatc 120
cagttctcca ttctgattat gctgcactcg gctctggtcc tcatcaccac agcagaggat 180
tataaatgtt tgcccctcat cctccggaaa acttgctgtt ggattaatga gacctatttg 240
gcccggaacg tcatcatctt tgcatccatt ttgattaatt tcctgggtgc catcttaaat 300
atcctgtggt gtgattttga caagtcgata cccttgaaga acctgacttt caattcctca 360
gctgtgttta cagatatctg ctcctaccca gag 393
<210>34
<211>279
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>34
ctgcagcggc tgtacagcat ggacctgcgg agctcccaca aggccaaggg caaggagaag 60
ctctgcttct ccctgacgtg cccactcggc agcgggagcc ctgagggggt ggtcaaggcg 120
ggggcacctg agctggtgga caagggcccc ttggtgccca ccctgccctt cccgctccgc 180
aagccccgaa aggcccacaa gtacctgcgg ctctcgcgca agaagttccc gccccgcggg 240
cccaacctgg agagccacag ccatcgacgg gagctcttc 279
<210>35
<211>237
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>35
gtgcgggcca gccccgcagg gcagctgccc agccgcttcc accagtacca gcagcaccgg 60
ccgagtctgg agggcggccg gagccccgcg accggcccga gcggagcgca ggaggtcccg 120
ggcccggccg ccgccttggc cccgagtcct gcagccgcag ccggcacgga gggagccagc 180
cccgaccttg ccccgctgcg gcccgcggct cccggccaaa cccccctcag gaaagag 237
<210>36
<211>213
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>36
gcagacaccg tggagatggt gagtgaagtt gagccacctg cccctcaagt tggtgccagg 60
tccagtccga agcagcctct ggcggagggg ctactgactg ctctacagcc cttcctgtct 120
gaggccctgg tcagccaagt cggggcctgc taccagttca atgtcgtcct gcccagcggc 180
acccaaagcg cctacttcct ggacctcact aca 213
<210>37
<211>204
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>37
tcccctgcag agcaaaaaaa cttgtcggat tcgggagagg agcctcgggg ggaggctgag 60
gccccccacc atggcacggg tcaccccgag tcagctggcg agcatgccct agaacctcct 120
gcccctgctg gcgcctcagc cagcactcct ccgcctcccg ctcctgaagc ccagcttcct 180
ccttttccgc gagaactggc aggg 204
<210>38
<211>192
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>38
caggagtgga agagactagg agtcgagcag ctgcggctca gcacagtaga catgactggg 60
atccccacct tggacaacct ccagaaggga gtccaatttg ctctcaagta ccagtcgctg 120
ggccagtgtg tttacgtgca ttgtaaggct gggcgctcca ggagtgccac tatggtggca 180
gcatacctga tt 192
<210>39
<211>180
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>39
aggaacctca tcctcaagct ggccatcctg gggacactgt gctaccactg gctgggccgc 60
agggtgggcg tcctgcaggg ccagtgctgg gaggattttg tgggccagga gctgtaccgg 120
ttcctggtga tggacttcgt cctcatgttg ctggacacgc tttttgggga actggtgtgg 180
<210>40
<211>171
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>40
ttcttgtcat ttgaaatgct gacggagctg gtccacagag gcagcgtgta cgacgcccgg 60
gaattctcag tgcactttgt atgtggtggc ctggctgcct gtatggccac cctcactgtg 120
caccccgtgg atgttctgcg cacccgcttt gcagctcagg gtgagcccaa g 171
<210>41
<211>129
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>41
ggtccatgtc acaaacggcg ggcaagcatc tgctgtaccc agctggggtc cctgtcggcc 60
ctgaagcatg ctgtcctggg gctctacctg ctggtcttcc tgattcttgt gggcatcttc 120
atcttagca 129
<210>42
<211>123
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>42
tcgatgtgca gtggggataa agcccctcct ccgcccactc agaaaggggg gaccatttcc 60
tgctacagat gtggtcgctg gaatctctgg gaggcgtcct tctgcggctg gtgtggagcc 120
atg 123
<210>43
<211>114
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>43
ggtagtcttg aagaagtctt tcttctgcaa aatatccttg tctcatgtca cagaacaacc 60
ctgcatgtct tgaaatgcat gtacttgtta gtgcttaata acaatacatg cgca 114
<210>44
<211>111
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>44
gggttctgca cggcaaaagg gggcctggtg agctccatct tgcacccccg gcccatcaac 60
ttcaagttct ataaacacag catgaagttt gtggctgccc tctctgtcct g 111
<210>45
<211>105
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>45
cagctgccca cactgcccct agtcatggtg gcaccctccg gggcacggct gggccccttg 60
ccccacttac aggcactcct ccaggacagg ccacatttca tgcac 105
<210>46
<211>96
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>46
gcttcctact atgagatttc agttgatgat ggtccatggg aaaaacagaa gagttcaggg 60
ctcaatttgt gtactggaac aggatcaaag gcctgg 96
<210>47
<211>93
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>47
ggattcatga ataaaatttt ccatcccaac attgatgaag cgtcaggaac tgtgtgtcta 60
gatgtaatta atcaaacttg gacagctctc tat 93
<210>48
<211>90
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>48
gaattttcag tgccctggca cctcattgca gtgactcttg ggatcctctg tttacttctt 60
ctgatgatag tcacagtgtt ggtgacaaat 90
<210>49
<211>90
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>49
cgcccgggcg ggccgggggc cgtggcggag gaggagcgct gcacggtgga gcgtcgggcc 60
gacctcacct acgcggagtt cgtgcagcag 90
<210>50
<211>75
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>50
ggcttcctgt gcttctccct ggcgttctgy gcacaggtgc aggtggtgtt ctggagactc 60
cacagcccca cccag 75
<210>51
<211>72
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>51
gcagaggcag atcgtcttga tgtcctcgaa aagtacagag ggaagtgcga gccaaccttt 60
ctgttttatg ca 72
<210>52
<211>69
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>52
aggttcatgt ctgtaagcat cctgttgatg ggcatcgtgg gaccaattac tgctggaatc 60
ttgacaagt 69
<210>53
<211>66
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>53
ctcaaactct ccaaggtggt ggtggttggc gatctctacg tggggaagac cagcctcatc 60
cacagg 66
<210>54
<211>60
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>54
gtcatcactt caggcatcgc agccatcgtg ttgtcacgct acctccctag cacccccctg 60
<210>55
<211>48
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>55
agatcatata ctcctatgaa aggaggaatc tccaatgtat ggtttgac 48
<210>56
<211>36
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>56
cagaagtatt gggaggccct aaactcggag cagtgg 36
<210>57
<211>36
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>57
gggccaatac tgtgcatggc acccgcttca aatatt 36
<210>58
<211>33
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>58
caggtgcctg gacactctga tgaccacaga ttc 33
<210>59
<211>27
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>59
gaagagcaac cgaggtttca atctgcg 27
<210>60
<211>24
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>60
gcccttgcct tttctcttgc agca 24
<210>61
<211>21
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>61
ggatgtggct ctagccgctg t 21
<210>62
<211>18
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>62
ggtagtgca ggcgacac 18
<210>63
<211>15
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>63
agtgcatact ctggg 15
<210>64
<211>15
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>64
gtgacaggtc tggac 15
<210>65
<211>96
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>65
ggccaccctc cagggcccac taaaaaagcg ctgaagcagc gattcctcaa gctgctgccg 60
tgctgcgggc cccaagccct gccctcagtc agtgaa 96
<210>66
<211>81
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>66
gatcctctgc tgggtacctg catgtcctgc aaaaccattt gcaaccatca gagccagcgc 60
acctgtgcag ccttctgcag g 81
<210>67
<211>144
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>67
caggtggagg ctctgccggg cccctcgctg gaccagtggc accgatcagc tggggaggaa 60
gaggatggcc cagtcctgac ggatgagcag aagtcccgaa tccaggccat gaagcccatg 120
accaaggagg agtgggatgc ccgg 144
<210>68
<211>87
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>68
caggtgaatg gtgtgacagc agactggcac actccactgt ttaatgcttg tgtcagcggc 60
agctgggatt gtgtgaattt gcttctg 87
<210>69
<211>48
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>69
gggctgcagc tgtccacaga tgcactcagc ctggcctcta ccccaggg 48
<210>70
<211>69
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>70
gtaagagccg atccgctcgc ggcctccact gccaacctca gccttttact gcagcacccg 60
ccgctgccc 69
<210>71
<211>27
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>71
aatttatatg acctggatga agatgat 27
<210>72
<211>30
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>72
gaggcccaga gggcgtggtg ggttcttgag 30
<210>73
<211>15
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>73
tccttcctgc ccttt 15
<210>74
<211>42
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>74
agtgcatata acgagcctct aaccccttct tctaatacca gc 42
<210>75
<211>99
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>75
gtcttgcagg ggctcttggt gaaatggagg aaccatgaca aaggcaagtc caaggtggag 60
cagtattctc acagctctaa gtggactccc acaggtgca 99
<210>76
<211>15
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>76
ctggagagga gctgg 15
<210>77
<211>99
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>77
tcaggctgtc accccggggg cgccagagca ggtccctccc cagcctcttc ctcccccgcc 60
ccagggggcg gccgtagcct cagcgcgggc tcacagacc 99
<210>78
<211>84
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>78
tgtttagaat ctccagtggg gaagaggaaa agaagcatga ctgttagtac ttctcaggac 60
ccatctttct caggattaaa ccag 84
<210>79
<211>60
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>79
aggcctagaa gaacatggtt gcaggtctct agtttatgct gtatggcctg caagatgatc 60
<210>80
<211>33
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>80
aaaaggaagt ccagttcgag tgttcagatg atg 33
<210>81
<211>96
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>81
ggcgagtcag gaccgctgtg ggggaaggcc aggccctcgg gatggtttga ggagctgggg 60
gcggagccct tggagattca cggcaccctc gccaca 96
<210>82
<211>96
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>82
gggcattatg ggaaggatgc ttaccgaagt ggaggacctg atctccataa cttcatctca 60
tctggatttg tcacattagg aagaggacac accaag 96
<210>83
<211>78
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>83
gtgaggccac aagacagggc gggggcggca tgggaactcc tagccctgac tcccggccgc 60
ggctgctccc ctcccagg 78
<210>84
<211>72
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>84
tccggtccag tcctctgcag taggacctgg tatagacagt ccatggacag gggcgtcatg 60
atgactgctg ct 72
<210>85
<211>69
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>85
gattttggct atggaaaggg gaaatgttct aagcagagcc cgtcaggagc ccacgggaca 60
cattttgga 69
<210>86
<211>69
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>86
ctcggcttgc ccttcccctg cttgtgccgt gtaccctgta acactgtgtt tggatcccag 60
catcagatg 69
<210>87
<211>57
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>87
gtctggaggc cggcctggga acaggggccg aagggcgagc cggaccctag gggattg 57
<210>88
<211>54
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>88
tggcaaatcg aggcacagag agggagggcg acttgcccca ggtcacacag ctgg 54
<210>89
<211>54
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>89
gtgagcaaat gccagggcaa tgccagggcc aggctgaggc tgtggggtgt ctgg 54
<210>90
<211>51
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>90
ctaaatcaac aggagactga tgctgctcat accttgaaga agcaactggc a 51
<210>91
<211>45
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>91
gttgttgcca ccttgctctc cactctcctg tcccttatct cagta 45
<210>92
<211>39
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>92
ggaactggcg cggtgggcgg cggcggaact agccaggcc 39
<210>93
<211>36
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>93
atgtctcagc tgctctacaa gggagtccca tttcag 36
<210>94
<211>36
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>94
gttcagaggt atatgtgcag gtttgttata caggcg 36
<210>95
<211>30
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>95
aaagccaggg gatccagaaa aaacaaagat 30
<210>96
<211>21
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>96
ggttttcttc ttgatccttc a 21
<210>97
<211>15
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>97
gcagcaaatt tttat 15
<210>98
<211>42
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>98
aactcacatt ctcaggctat caatgttgac aggattgctt ta 42
<210>99
<211>15
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>99
gctccctatc ttaca 15
<210>100
<211>102
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>100
ggaggctcca aggggggctg tggctccagc tgctgtgtgc ccgtctgctg ctcctccagc 60
tgtggctcct gtgggggttc caagggggtc tgtggatttc gt 102
<210>101
<211>114
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>101
aggcacaagc tcctgaagct cagtgtcctc ctgcccctca tcttcaccat attgctgctg 60
cttttggtgg ccgcctcact cttggcttgg aggatgatga agtaccagca gaaa 114
<210>102
<211>12
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>102
gcagtgccac ca 12
<210>103
<211>77
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>103
Ser Tyr Asp Asn Gly Leu Ala Gln Gly Ala Gly Leu Glu Ser His Gly
1 5 10 15
Gly Ser Thr Phe Cys Gly Ile Ala Ser Leu Cys Leu Met Gly Lys Leu
20 25 30
Glu Glu Val Phe Ser Glu Lys Glu Leu Asn Arg Ile Lys Arg Trp Cys
35 40 45
Ile Met Arg Gln Gln Asn Gly Tyr His Gly Arg Pro Ash Lys Pro Val
50 55 60
Asp Thr Cys Tyr Ser Phe Trp Val Gly Ala Thr Leu Lys
65 70 75
<210>104
<211>50
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>104
Glu Phe Asp Pro Glu Leu Val Leu Val Ser Ala Gly Phe Asp Ser Ala
1 5 10 15
Ile Gly Asp Pro Glu Gly Gln Met Gln Ala Thr Pro Glu Cys Phe Ala
20 25 30
His Leu Thr Gln Leu Leu Gln Val Leu Ala Gly Gly Arg Val Cys Ala
35 40 45
Val Leu
50
<210>105
<211>37
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>105
Gly Ile Lys Asp Phe Leu Leu Leu Cys Gly Arg Ile Leu Leu Leu Leu
1 5 10 15
Ala Leu Leu Thr Leu Ile Ile Ser Val Thr Thr Ser Trp Leu Asn Ser
20 25 30
Phe Lys Ser Pro GIn
35
<210>106
<211>36
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>106
Val Ala Met Leu Arg Ala Leu Leu Gln Glu Ala Arg Ser Ser Gln Ala
1 5 10 15
Pro Ser Ser Arg Pro Ile Ser Asp Pro Ser Ser Leu Leu Ala Pro Pro
20 25 30
Pro Leu Leu Lys
35
<210>107
<211>36
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>107
Val Thr Leu Gly Lys Val Leu Lys Val Ile Val Val Met Arg Ser Cys
1 5 10 15
Phe Ile Asp Arg Thr Ile Val Lys Gly Tyr Asn Glu Asn Val Tyr Thr
20 25 30
Glu Asp Gly Lys
35
<210>108
<211>23
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>108
Gly Lys Cys Glu Cys Lys Glu Gln Thr Leu Gly Asn Ala Lys Ala Phe
1 5 10 15
Cys Gly Met Lys Tyr Ser Tyr
20
<210>109
<211>10
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>109
Ala Ser Leu Ser Glu Lys Asn Thr Thr Ala
1 5 10
<210>110
<211>10
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>110
Gly Gly Pro Ser Met Asp Gln Leu Asn Pro
1 5 10
<210>111
<211>8
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>111
Glu Met Ser Leu Ser Lys Cys Ala
1 5
<210>112
<211>8
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>112
Thr Thr Ser Pro Glu Pro Pro Asn
1 5
<210>113
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>113
Gly Glu Thr Leu Leu Leu Arg Cys Met Val Val Gly Ser Cys Thr Asp
1 5 10 15
Gly Met Ile Lys Trp Val Lys Val Ser Thr Gln Asp Gln Gln Glu Ile
20 25 30
Tyr Asn Phe Lys Arg Gly Ser Phe Pro Gly Val Met Pro Met Ile Gln
35 40 45
Arg Thr Ser Glu Pro Leu Asn Cys Asp Tyr Ser Ile Tyr Ile His Asn
50 55 60
Val Thr Arg Glu His Thr Gly Thr Tyr His Cys Val Arg Phe Asp Gly
65 70 75 80
Leu Ser Glu His Ser Glu Met Lys Ser Asp Glu Gly Thr Ser Val Leu
85 90 95
Val Lys
<210>114
<211>85
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>114
Gly Lys Asp Ser Gly Ser Ala Trp Pro Leu Ser Pro Gln Ser Cys Ala
1 5 10 15
Ala Pro Ala Gly Leu Ser AIa Gln Ser Pro Trp Cys Arg His Ala Arg
20 25 30
Asp Cys His Gly Pro Ser Leu Phe Ser Phe Leu Leu Leu Ser Ala Ala
35 40 45
Ala Ala Thr Ala Pro Thr Gly Gln Val Pro Gly Val Cys His Tyr Phe
50 55 60
Ala Phe Leu Pro Cys Arg Pro Met Gly Lys Gln Pro Leu Leu Gly Ala
65 70 75 80
Phe Val Ser Phe Val
85
<210>115
<211>95
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>115
Ala Gly Thr Gln Arg Tyr Met Ala Pro Glu Leu Leu Asp Lys Thr Leu
1 5 l0 15
Asp Leu Gln Asp Trp Gly Met Ala Leu Arg Arg Ala Asp Ile Tyr Ser
20 25 30
Leu Ala Leu Leu Leu Trp Glu Ile Leu Ser Arg Cys Pro Asp Leu Arg
35 40 45
Pro Asp Ser Ser Pro Pro Pro Phe Gln Leu Ala Tyr Glu Ala Glu Leu
50 55 60
Gly Asn Thr Pro Thr Ser Asp Glu Leu Trp Ala Leu Ala Val Gln Glu
65 70 75 80
Arg Arg Arg Pro Tyr Ile Pro Ser Thr Trp Arg Cys Phe Ala Thr
85 90 95
<210>116
<211>76
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>116
Val Asp Leu Trp Ser Val Gly Cys lle Met Gly Glu Met Val Cys His
1 5 10 15
Lys Ile Leu Phe Pro Gly Arg Asp Tyr Ile Asp Gln Trp Asn Lys Val
20 25 30
Ile Glu Gln Leu Gly Thr Pro Cys Pro Glu Phe Met Lys Lys Leu Gln
35 40 45
Pro Thr Val Arg Thr Tyr Val Glu Asn Arg Pro Lys Tyr Ala Gly Tyr
50 55 60
Ser Phe Glu Lys Leu Phe Pro Asp Val Leu Phe Pro
65 70 75
<210>117
<211>63
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>117
Ile Leu Leu Gly Gln Lys Tyr Asn His Ser Val Asp Trp Trp Ser Phe
1 5 10 15
Gly Val Leu Leu Tyr Glu Met Leu Ile Gly Gln Ser Pro Phe His Gly
20 25 30
Gln Asp Glu Glu Glu Leu Phe His Ser Ile Arg Met Asp Asn Pro Phe
35 40 45
Tyr Pro Arg Trp Leu Glu Lys Glu Ala Lys Asp Leu Leu Val Lys
50 55 60
<210>118
<211>57
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>118
Ala Leu Leu Pro Leu Asp Leu Leu Leu Lys Val Pro Pro His Met Leu
1 5 10 15
Arg Ala His Ile Lys Glu Ile Glu Ala Glu Leu Val Thr Gly Trp Gln
20 25 30
Ser His Ser Leu Pro Ala Val Ile Leu Arg Asn Leu Lys Asp His Gly
35 40 45
Pro Gln Met Gly Thr Phe Leu Trp Gln
50 55
<210>119
<211>41
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>119
Phe Gly Met Asp Phe Lys Glu Ile Glu Leu Ile Gly Ser Gly Gly Phe
1 5 10 15
Gly Gln Val Phe Lys Ala Lys His Arg Ile Asp Gly Lys Thr Tyr Val
20 25 30
Ile Lys Arg Val Lys Tyr Asn Asn Glu
35 40
<210>120
<211>34
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>120
Gly Arg Gly Gly Trp Arg Gly Gln Trp Cys Leu Lys Pro Trp Met Gly
1 5 10 15
Gly Ala Asp Pro Pro Thr Pro Thr Leu Ser Cys Leu Leu Leu Pro Val
20 25 30
Pro Pro
<210>121
<211>61
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>121
Cys Gly Ala Thr Pro Cys Arg Met Phe Ser Ala Ala Ser Gln Pro Leu
1 5 10 15
Asp Pro Asp Gly Thr Leu Phe Arg Leu Arg Phe Thr Ala Met Val Trp
20 25 30
Trp Ala Ile Thr Phe Pro Val Phe Gly Phe Phe Phe Cys Ile Ile Trp
35 40 45
Ser Leu Val Phe His Phe Glu Tyr Thr Val Ala Thr Asp
50 55 60
<210>122
<211>54
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>122
Val Ser Ser Ser Arg Gln Ser Leu Pro Ile Lys Ala Ile Leu Lys Ser
1 5 10 15
Leu Pro Val Trp Ala Ile Ser Ile Gly Ser Phe Thr Phe Phe Trp Ser
20 25 30
His Asn Ile Met Thr Leu Tyr Thr Pro Met Phe Ile Asn Ser Met Leu
35 40 45
His Val Asn Ile Lys Glu
50
<210>123
<211>3l
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>123
Ile Ala Leu Asp Cys Pro Ser Glu Leu Cys Arg Leu Tyr Thr Gln Phe
1 5 10 15
Gln Glu Pro Tyr Leu Lys Asp Pro Ala Ala Tyr Pro Lys Ile Gln
20 25 30
<210>124
<211>25
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>124
Tyr Phe Ala Phe Leu Leu Leu Ile Leu Ile Ala Gln Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Ala Leu Phe Tyr Phe Asn Met Gly Lys
20 25
<210>125
<211>23
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>125
Asp Pro Glu Ala Ala Arg Ser Ser Asn Ser Lys Ile Thr Thr Thr Leu
1 5 10 15
Gly Leu Val Val Hi s Ala Ala
20
<210>126
<211>20
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>126
Thr Pro Leu Ile Ile Tyr Leu Phe His Phe Leu Ile Asp Tyr Ala Glu
1 5 10 15
Leu Val Phe Met
20
<210>127
<211>16
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>127
Val Ser Val Pro Val Val Trp Thr Leu Thr Asn Leu Ile His Asn Met
1 5 10 15
<210>128
<211>7
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>128
Asp Val Ser Leu Leu Ala Ser
1 5
<210>129
<211>29
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>129
Glu Gly Leu Lys Gly Ser Leu Gln Arg Leu Gln Leu Glu Tyr Val Asp
1 5 10 15
Val Val Phe Ala Asn Arg Pro Asp Ser Asn Thr Pro Met
20 25
<210>130
<211>24
<212>PRT
<213>人(H0mo sapiens)
<400>130
Gly Glu Asn Val Phe Phe Val Val Thr Asn Leu Ile Val Thr Pro Asn
1 5 10 15
Gln Arg Gln Asn Val Cys Ala Glu
20
<210>131
<211>23
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>131
Ser Asn Ser Asp Asp Asn Met Leu Lys Asn Ile Glu Leu Phe Asp Lys
1 5 10 15
Leu Ser Leu Arg Phe Asn Gly
20
<210>132
<211>18
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>132
Gly Gly Gly Gly Arg Gly Gly Gly Arg Gly Gly Gly Phe Arg Gly Gly
1 5 10 15
Arg Gly
<210>133
<211>512
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>133
Ile Phe Leu Thr Val Thr Ala Asp Leu Asn Cys Asn Leu Phe Ser Lys
1 5 10 15
Glu Gln Arg Ala Tyr Ile Thr Thr Leu Cys Pro Ser Ile Arg Lys Met
20 25 30
Glu Gly His Asp Gly Ile Glu Lys Val Cys Gly Asp Phe Gln Asp Ile
35 40 45
Glu Arg Ile His Gln Phe Leu Ser Glu Gln Phe Leu Glu Ser Glu Gln
50 55 60
Lys Gln Gln Phe Ser Pro Ser Met Thr Glu Arg Lys Pro Leu Ser Gln
65 70 75 80
Gln Glu Arg Asp Ser Cys Ile Ser Pro Ser Glu Pro Glu Thr Lys Ala
85 90 95
Glu Gln Lys Ser Asn Tyr Phe Glu Val Pro Leu Pro Tyr Phe Glu Tyr
100 105 110
Phe Lys Tyr Ile Cys Pro Asp Lys Ile ASn Ser Ile Glu Lys Arg Phe
115 120 125
Gly Val Asn Ile Glu Ile Gln Glu Ser Ser Pro Asn Met Val Cys Leu
130 135 140
Asp Phe Thr Ser Ser Arg Ser Gly Asp Leu Glu Ala Ala Arg Glu Ser
145 150 155 160
Phe Ala Ser Glu Phe Gln Lys Asn Thr Glu Pro Leu Lys Gln Glu Cys
165 170 175
Val Ser Leu Ala Asp Ser Lys Gln Ala Asn Lys Phe Lys Gln Glu Leu
180 185 190
Asn His Gln Phe Thr Lys Leu Leu Ile Lys Glu Lys Gly Gly Glu Leu
195 200 205
Thr Leu Leu Gly Thr Gln Asp Asp Ile Ser Ala Ala Lys Gln Lys Ile
210 215 220
Ser Glu Ala Phe Val Lys Ile Pro Val Lys Leu Phe Ala Ala Asn Tyr
225 230 235 240
Met Met Asn Val Ile Glu Val Asp Ser Ala His Tyr Lys Leu Leu Glu
245 250 255
Thr Glu Leu Leu Gln Glu Ile Ser Glu Ile Glu Lys Arg Tyr Asp Ile
260 265 270
Cys Ser Lys Val Ser Glu Lys Gly Gln Lys Thr Cys Ile Leu Phe Glu
275 280 285
Ser Lys Asp Arg Gln Val Asp Leu Ser Val His Ala Tyr Ala Ser Phe
290 295 300
Ile Asp Ala Phe Gln His Ala Ser Cys Gln Leu Met Arg Glu Val Leu
305 310 315 320
Leu Leu Lys Ser Leu Gly Lys Glu Arg Lys His Leu His Gln Thr Lys
325 330 335
Phe Ala Asp Asp Phe Arg Lys Arg His Pro Asn Val His Phe Val Leu
340 345 350
Asn Gln Glu Ser Met Thr Leu Thr Gly Leu Pro Asn His Leu Ala Lys
355 360 365
Ala Lys Gln Tyr Val Leu Lys Gly Gly Gly Met Ser Ser Leu Ala Gly
370 375 380
Lys Lys Leu Lys Glu Gly His Glu Thr Pro Met Asp Ile Asp Ser Asp
385 390 395 400
Asp Ser Lys Ala Ala Ser Pro Pro Leu Lys Gly Ser Val Ser Ser Glu
405 410 415
Ala Ser Glu Leu Asp Lys Lys Glu Lys Gly Ile Cys Val Ile Cys Met
420 425 430
Asp Thr Ile Ser Asn Lys Lys Val Leu Pro Lys Cys Lys His Glu Phe
435 440 445
Cys Ala Pro Cys Ile Asn Lys Ala Met Ser Tyr Lys Pro Ile Cys Pro
450 455 460
Thr Cys Gln Thr Ser Tyr Gly Ile Gln Lys Gly Asn Gln Pro Glu Gly
465 470 475 480
Val Phe Thr Val Ser Arg Asp Ser Leu Pro Gly Tyr Glu Ser
485 490 495
Phe Gly Thr Ile Val Ile Thr Tyr Ser Met Lys Ala Gly Ile Gln Thr
500 505 510
<210>134
<211>196
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>134
Lys Ala Arg Ala Asp His Gly Leu Ile Pro Asp Val Lys Leu Glu Lys
1 5 10 15
Thr Val Pro Arg Leu His Arg Pro Ser Leu Gln His Phe Arg Glu Gln
20 25 30
Phe Leu Val Pro Gly Arg Pro Val Ile Leu Lys Gly Val Ala Asp His
35 40 45
Trp Pro Cys Met Gln Lys Trp Ser Leu Glu Tyr Ile Gln Glu Ile Ala
50 55 60
Gly Cys Arg Thr Val Pro Val Glu Val Gly Ser Arg Tyr Thr Asp Glu
65 70 75 80
Glu Trp Ser Gln Thr Leu Met Thr Val Asn Glu Phe Ile Ser Lys Tyr
85 90 95
Ile Val Asn Glu Pro Arg Asp Val Gly Tyr Leu Ala Gln His Gln Leu
100 105 110
Phe Asp Gln Ile Pro Glu Leu Lys Gln Asp Ile Ser Ile Pro Asp Tyr
115 120 125
Cys Ser Leu Gly Asp Gly Glu Glu Glu Glu Ile Thr Ile Asn Ala Trp
130 135 140
Phe Gly Pro Gln Gly Thr Ile Ser Pro Leu His Gln Asp Pro Gln Gln
145 150 155 160
Asn Phe Leu Val Gln Val Met Gly Arg Lys Tyr Ile Arg Leu Tyr Ser
165 170 175
Pro Gln Glu Ser Gly Ala Leu Tyr Pro His Asp Thr His Leu Leu His
180 185 190
Asn Thr Ser Gln
195
<210>135
<211>131
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>135
Tyr Ser Gln Met Arg Asp Glu Val Phe Lys Ser Asn Leu Val Cys Ala
1 5 10 15
Phe Ile Val Leu Leu Phe Ile Thr Ala Ile Gln Ser Leu Leu Pro Ser
20 25 30
Ser Arg Val Met Pro Met Thr Ile Gln Phe Ser Ile Leu Ile Met Leu
35 40 45
His Ser Ala Leu Val Leu Ile Thr Thr Ala Glu Asp Tyr Lys Cys Leu
50 55 60
Pro Leu Ile Leu Arg Lys Thr Cys Cys Trp Ile Asn Glu Thr Tyr Leu
65 70 75 80
Ala Arg Asn Val Ile Ile Phe Ala Ser Ile Leu Ile Asn Phe Leu Gly
85 90 95
Ala Ile Leu Asn Ile Leu Trp Cys Asp Phe Asp Lys Ser Ile Pro Leu
100 105 110
Lys Asn Leu Thr Phe Asn Ser Ser Ala Val Phe Thr Asp Ile Cys Ser
115 120 125
Tyr Pro Glu
130
<210>136
<211>93
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>136
Leu Gln Arg Leu Tyr Ser Met Asp Leu Arg Ser Ser His Lys Ala Lys
1 5 10 15
Gly Lys Glu Lys Leu Cys Phe Ser Leu Thr Cys Pro Leu Gly Ser Gly
20 25 30
Ser Pro Glu Gly Val Val Lys Ala Gly Ala Pro Glu Leu Val Asp Lys
35 40 45
Gly Pro Leu Val Pro Thr Leu Pro Phe Pro Leu Arg Lys Pro Arg Lys
50 55 60
Ala His Lys Tyr Leu Arg Leu Ser Arg Lys Lys Phe Pro Pro Arg Gly
65 70 75 80
Pro Asn Leu Glu Ser His Ser His Arg Arg Glu Leu Phe
85 90
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<211>79
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>137
Val Arg Ala Ser Pro Ala Gly Gln Leu Pro Ser Arg Phe His Gln Tyr
1 5 10 15
Gln Gln His Arg Pro Ser Leu Glu Gly Gly Arg Ser Pro Ala Thr Gly
20 25 30
Pro Ser Gly Ala Gln Glu Val Pro Gly Pro Ala Ala Ala Leu Ala Pro
35 40 45
Ser Pro Ala Ala Ala Ala Gly Thr Glu Gly Ala Ser Pro Asp Leu Ala
50 55 60
Pro Leu Arg Pro Ala Ala Pro Gly Gln Thr Pro Leu Arg Lys Glu
65 70 75
<210>138
<211>71
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>138
Ala Asp Thr Val Glu Met Val Ser Glu Val Glu Pro Pro Ala Pro Gln
1 5 10 15
Val Gly Ala Arg Ser Ser Pro Lys Gln Pro Leu Ala Glu Gly Leu Leu
20 25 30
Thr Ala Leu Gln Pro Phe Leu Ser Glu Ala Leu Val Ser Gln Val Gly
35 40 45
Ala Cys Tyr Gln Phe Asn Val Val Leu Pro Ser Gly Thr Gln Ser Ala
50 55 60
Tyr Phe Leu Asp Leu Thr Thr
65 70
<210>139
<211>68
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>139
Ser Pro Ala Glu Gln Lys Asn Leu Ser Asp Ser Gly Glu Glu Pro Arg
1 5 10 15
Gly Glu Ala Glu Ala Pro His His Gly Thr Gly His Pro Glu Ser Ala
20 25 30
Gly Glu His Ala Leu Glu Pro Pro Ala Pro Ala Gly Ala Ser Ala Ser
35 40 45
Thr Pro Pro Pro Pro Ala Pro Glu Ala Gln Leu Pro Pro Phe Pro Arg
50 55 60
Glu Leu Ala Gly
65
<210>140
<211>64
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>140
Gln Glu Trp Lys Arg Leu Gly Val Glu Gln Leu Arg Leu Ser Thr Val
1 5 10 15
Asp Met Thr Gly Ile Pro Thr Leu Asp Asn Leu Gln Lys Gly Val Gln
20 25 30
Phe Ala Leu Lys Tyr Gln Ser Leu Gly Gln Cys Val Tyr Val His Cys
35 40 45
Lys Ala Gly Arg Ser Arg Ser Ala Thr Met Val Ala Ala Tyr Leu Ile
50 55 60
<210>141
<211>60
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>141
Arg Asn Leu Ile Leu Lys Leu Ala Ile Leu Gly Thr Leu Cys Tyr His
1 5 10 15
Trp Leu Gly Arg Arg Val Gly Val Leu Gln Gly Gln Cys Trp Glu Asp
20 25 30
Phe Val Gly Gln Glu Leu Tyr Arg Phe Leu Val Met Asp Phe Val Leu
35 40 45
Met Leu Leu Asp Thr Leu Phe Gly Glu Leu Val Trp
50 55 60
<210>142
<211>57
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>142
Phe Leu Ser Phe Glu Met Leu Thr Glu Leu Val His Arg Gly Ser Val
1 5 10 15
Tyr Asp Ala Arg Glu Phe Ser Val His Phe ValCys Gly Gly Leu Ala
20 25 30
Ala Cys Met Ala Thr Leu Thr Val His Pro Val Asp Val Leu Arg Thr
35 40 45
Arg Phe Ala Ala Gln Gly Glu Pro Lys
50 55
<210>143
<211>43
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>143
Gly Pro Cys His Lys Arg Arg Ala Ser Ile Cys Cys Thr Gln Leu Gly
1 5 10 15
Ser Leu Ser Ala Leu Lys His Ala Val Leu Gly Leu Tyr Leu Leu Val
20 25 30
Phe Leu Ile Leu Val Gly Ile Phe Ile Leu Ala
35 40
<210>144
<211>41
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>144
Ser Met Cys Ser Gly Asp Lys Ala Pro Pro Pro Pro Thr Gln Lys Gly
1 5 10 15
Gly Thr Ile Ser Cys Tyr Arg Cys Gly Arg Trp Asn Leu Trp Glu Ala
20 25 30
Ser Phe Cys Gly Trp Cys Gly Ala Met
35 40
<210>145
<211>38
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>145
Gly Ser Leu Glu Glu Val Phe Leu Leu Gln Asn Ile Leu Val Ser Cys
1 5 10 15
His Arg Thr Thr Leu His Val Leu Lys Cys Met Tyr Leu Leu Val Leu
20 25 30
Asn Asn Asn Thr Cys Ala
35
<210>146
<211>37
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>146
Gly Phe Cys Thr Ala Lys Gly Gly Leu Val Ser Ser Ile Leu His Pro
1 5 10 15
Arg Pro Ile Asn Phe Lys Phe Tyr Lys His Ser Met Lys Phe Val Ala
20 25 30
Ala Leu Ser Val Leu
35
<210>147
<211>35
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>147
Gln Leu Pro Thr Leu Pro Leu Val Met Val Ala Pro Ser Gly Ala Arg
1 5 10 15
Leu Gly Pro Leu Pro His Leu Gln Ala Leu Leu Gln Asp Arg Pro His
20 25 30
Phe Met His
35
<210>148
<211>32
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>148
Ala Ser Tyr Tyr Glu Ile Ser Val Asp Asp Gly Pro Trp Glu Lys Gln
1 5 10 15
Lys Ser Ser Gly Leu Asn Leu Cys Thr Gly Thr Gly Ser Lys Ala Trp
20 25 30
<210>149
<211>31
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>149
Gly Phe Met Asn Lys Ile Phe His Pro Asn Ile Asp Glu Ala Ser Gly
1 5 10 15
Thr Val Cys Leu Asp Val Ile Asn Gln Thr Trp Thr Ala Leu Tyr
20 25 30
<210>150
<211>30
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>150
Glu Phe Ser Val Pro Trp His Leu Ile Ala Val Thr Leu Gly Ile Leu
1 5 10 15
Cys Leu Leu Leu Leu Met Ile Val Thr Val Leu Val Thr Asn
20 25 30
<210>151
<211>30
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>151
Arg Pro Gly Gly Pro Gly Ala Val Ala Glu Glu Glu Arg Cys Thr Val
1 5 10 15
Glu Arg Arg Ala Asp Leu Thr Tyr Ala Glu Phe Val Gln Gln
20 25 30
<210>152
<211>25
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>152
Gly Phe Leu Cys Phe Ser Leu Ala Phe Cys Ala Gln Val Gln Val Val
1 5 10 15
Phe Trp Arg Leu His Ser Pro Thr Gln
20 25
<210>153
<211>24
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>153
Ala Glu Ala Asp Arg Leu Asp Val Leu Glu Lys Tyr Arg Gly Lys Cys
1 5 10 15
Glu Pro Thr Phe Leu Phe Tyr Ala
20
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<211>23
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>154
Arg Phe Met Ser Val Ser Ile Leu Leu Met Gly Ile Val Gly Pro Ile
1 5 10 15
Thr Ala Gly Ile Leu Thr Ser
20
<210>155
<211>22
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>155
Leu Lys Leu Ser Lys Val Val Val Val Gly Asp Leu Tyr Val Gly Lys
1 5 10 15
Thr Ser Leu Ile His Arg
20
<210>156
<211>20
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>156
Val Ile Thr Ser Gly Ile Ala Ala Ile Val Leu Ser Arg Tyr Leu Pro
1 5 10 15
Ser Thr Pro Leu
20
<210>157
<211>16
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>157
Arg Ser Tyr Thr Pro Met Lys Gly Gly Ile Ser Asn Val Trp Phe Asp
1 5 10 15
<210>158
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>158
Gln Lys Tyr Trp Glu Ala Leu Asn Ser Glu Gln Trp
1 5 10
<210>159
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>159
Gly Pro Ile Leu Cys Met Ala Pro Ala Ser Asn Ile
1 5 10
<210>160
<211>11
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>160
Gln Val Pro Gly His Ser Asp Asp His Arg Phe
1 5 10
<210>161
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>161
Glu Glu Gln Pro Arg Phe Gln Ser Ala
1 5
<210>162
<211>8
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>162
Ala Leu Ala Phe Ser Leu Ala Ala
1 5
<210>163
<211>7
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>163
Gly Cys Gly Ser Ser Arg Cys
1 5
<210>164
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>164
Gly Ser Cys Arg Arg His
1 5
<210>165
<211>5
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>165
Ser Ala Tyr Ser Gly
1 5
<210>166
<211>5
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>166
Val Thr Gly Leu Asp
1 5
<210>167
<211>32
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>167
Gly His Pro Pro Gly Pro Thr Lys Lys Ala Leu Lys Gln Arg Phe Leu
1 5 10 15
Lys Leu Leu Pro Cys Cys Gly Pro Gln Ala Leu Pro Ser Val Ser Glu
20 25 30
<210>168
<211>27
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>168
Asp Pro Leu Leu Gly Thr Cys Met Ser Cys Lys Thr Ile Cys Asn His
1 5 10 15
Gln Ser Gln Arg Thr Cys Ala Ala Phe Cys Arg
20 25
<210>169
<211>48
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>169
Gln Val Glu Ala Leu Pro Gly Pro Ser Leu Asp Gln Trp His Arg Ser
1 5 10 15
Ala Gly Glu Glu Glu Asp Gly Pro Val Leu Thr Asp Glu Gln Lys Ser
20 25 30
Arg Ile Gln Ala Met Lys Pro Met Thr Lys Glu Glu Trp Asp Ala Arg
35 40 45
<210>170
<211>29
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>170
Gln Val Asn Gly Val Thr Ala Asp Trp His Thr Pro Leu Phe Asn Ala
1 5 10 15
Cys Val Ser Gly Ser Trp Asp Cys Val Asn Leu Leu Leu
20 25
<210>171
<211>16
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>171
Gly Leu Gln Leu Ser Thr Asp Ala Leu Ser Leu Ala Ser Thr Pro Gly
1 5 10 15
<210>172
<211>23
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>172
Val Arg Ala Asp Pro Leu Ala Ala Ser Thr Ala Asn Leu Ser Leu Leu
1 5 10 15
Leu Gln His Pro Pro Leu Pro
20
<210>173
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>173
Asn Leu Tyr Asp Leu Asp Glu Asp Asp
1 5
<210>174
<211>10
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>174
Glu Ala Gln Arg Ala Trp Trp Val Leu Glu
1 5 10
<210>175
<211>5
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>175
Ser Phe Leu Pro Phe
1 5
<210>176
<211>14
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>176
Ser Ala Tyr Asn Glu Pro Leu Thr Pro Ser Ser Asn Thr Ser
1 5 10
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<211>33
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>177
Val Leu Gln Gly Leu Leu Val Lys Trp Arg Asn His Asp Lys Gly Lys
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Ser Lys Val Glu Gln Tyr Ser His Ser Ser Lys Trp Thr Pro Thr Gly
20 25 30
<210>178
<211>5
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>178
Leu Glu Arg Ser Trp
1 5
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<211>33
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>179
Ser Gly Cys His Pro Gly Gly Ala Arg Ala Gly Pro Ser Pro Ala Ser
1 5 10 15
Ser Ser Pro Ala Pro Gly Gly Gly Arg Ser Leu Ser Ala Gly Ser Gln
20 25 30
Thr
<210>180
<211>28
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>180
Cys Leu Glu Ser Pro Val Gly Lys Arg Lys Arg Ser Met Thr Val Ser
1 5 10 15
Thr Ser Gln Asp Pro Ser Phe Ser Gly Leu Asn Gln
20 25
<210>181
<211>20
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>181
Arg Pro Arg Arg Thr Trp Leu Gln Val Ser Ser Leu Cys Cys Met Ala
1 5 10 15
Cys Lys Met Ile
20
<210>182
<211>11
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>182
Lys Arg Lys Ser Ser Ser Ser Val Gln Met Met
1 5 10
<210>183
<211>32
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>183
Gly Glu Ser Gly Pro Leu Trp Gly Lys Ala Arg Pro Ser Gly Trp Phe
1 5 10 15
Glu Glu Leu Gly Ala Glu Pro Leu Glu Ile His Gly Thr Leu Ala Thr
20 25 30
<210>184
<211>32
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>184
Gly His Tyr Gly Lys Asp Ala Tyr Arg Ser Gly Gly Pro Asp Leu His
1 5 10 15
Asn Phe Ile Ser Ser Gly Phe Val Thr Leu Gly Arg Gly His Thr Lys
20 25 30
<210>185
<211>26
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>185
Val Arg Pro Gln Asp Arg Ala Gly Ala Ala Trp Glu Leu Leu Ala Leu
1 5 10 15
Thr Pro Gly Arg Gly Cys Ser Pro Pro Arg
20 25
<210>186
<211>24
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>186
Ser Gly Pro Val Leu Cys Ser Arg Thr Trp Tyr Arg Gln Ser Met Asp
1 5 10 15
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20
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<211>23
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>187
Asp Phe Gly Tyr Gly Lys Gly Lys Cys Ser Lys Gln Ser Pro Ser Gly
1 5 10 15
Ala His Gly Thr His Phe Gly
20
<210>188
<211>23
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>188
Leu Gly Leu Pro Phe Pro Cys Leu Cys Arg Val Pro Cys Asn Thr Val
1 5 10 15
Phe Gly Ser Gln His Gln Met
20
<210>189
<211>19
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>189
Val Trp Arg Pro Ala Trp Glu Gln Gly Pro Lys Gly Glu Pro Asp Pro
1 5 10 15
Arg Gly Leu
<210>190
<211>18
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>190
Trp Gln Ile Glu Ala Gln Arg Gly Arg Ala Thr Cys Pro Arg Ser His
1 5 10 15
Ser Trp
<210>191
<211>18
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>191
Val Ser Lys Cys Gln Gly Asn Ala Arg Ala Arg Leu Arg Leu Trp Gly
1 5 10 15
Val Trp
<210>192
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>192
Leu Asn Gln Gln Glu Thr Asp Ala Ala His Thr Leu Lys Lys Gln Leu
1 5 10 15
Ala
<210>193
<211>15
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>193
Val Val Ala Thr Leu Leu Ser Thr Leu Leu Ser Leu Ile Ser Val
1 5 10 15
<210>194
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>194
Gly Thr Gly Ala Val Gly Gly Gly Gly Thr Ser Gln Ala
1 5 10
<210>195
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>195
Met Ser Gln Leu Leu Tyr Lys Gly Val Pro Phe Gln
1 5 10
<210>196
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>196
Val Gln Arg Tyr Met Cys Arg Phe Val Ile Gln Ala
1 5 10
<210>197
<211>10
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>197
Lys Ala Arg Gly Ser Arg Lys Asn Lys Asp
1 5 10
<210>198
<211>7
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>198
Gly Phe Leu Leu Asp Pro Ser
1 5
<210>199
<211>5
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>199
Ala Ala Asn Phe Tyr
1 5
<210>200
<211>14
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>200
Asn Ser His Ser Gln Ala Ile Asn Val Asp Arg Ile Ala Leu
1 5 10
<210>201
<211>5
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>201
Ala Pro Tyr Leu Thr
1 5
<210>202
<211>34
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>202
Gly Gly Ser Lys Gly Gly Cys Gly Ser Ser Cys Cys Val Pro Val Cys
1 5 10 15
Cys Ser Ser Ser Cys Gly Ser Cys Gly Gly Ser Lys Gly Val Cys Gly
20 25 30
Phe Arg
<210>203
<211>38
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>203
Arg His Lys Leu Leu Lys Leu Ser Val Leu Leu Pro Leu Ile Phe Thr
1 5 10 15
Ile Leu Leu Leu Leu Leu Val Ala Ala Ser Leu Leu Ala Trp Arg Met
20 25 30
Met Lys Tyr Gln Gln Lys
35
<210>204
<211>4
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>204
Ala Val Pro Pro
1
Claims (10)
1、人类新基因,其特征在于:是以已公开的同源参考基因序列为标准,从人体不同组织cDNA文库中克隆得到的具有新的剪切形式的基因,剪切体之间的差异DNA序列为SEQ ID NO:1-102之一。
2、如权利要求1所述的人类新基因用于制备对临床病理中是否存在特定基因的某种特异剪切体的探针的用途。
3、如权利要求1所述的人类新基因用于制备对疾病标本和正常标本进行特定基因的不同剪切方式表达谱比较的PCR引物的用途。
4、如权利要求1所述的人类新基因用作特定疾病的药物靶点以制备对相关疾病的治疗药物的用途。
5、如权利要求1所述的人类新基因所编码的多肽,其特征在于:是以已公开的同源参考基因编码序列为标准,从人体不同组织cDNA文库中克隆得到的特定基因的具有新的剪切形式的基因编码的多肽,剪切体之间的差异氨基酸序列为SEQ ID NO:103-204之一。
6、如权利要求5所述的多肽用作抗原免疫动物以生产相应的抗体。
7、如权利要求5所述的多肽用于制备检测疾病的抗原-抗体诊断试剂盒的用途。
8、根据权利要求6所述的用途,其特征在于:所述的多肽用于制备检测自身免疫疾病或者非自身免疫疾病的抗原-抗体诊断试剂盒。
9、根据权利要求8所述的用途,其特征在于,所述的非自身免疫疾病包括癌症、心血管病、精神病等疾病。
10、如权利要求5所述的多肽用作特定疾病的药物靶点以筛选对相关疾病的治疗药物的用途。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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CN 200510102128 CN1982453A (zh) | 2005-12-12 | 2005-12-12 | 人类新基因及其编码多肽的用途 |
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Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106319064A (zh) * | 2016-09-13 | 2017-01-11 | 北京天科雅生物科技有限公司 | 一种基于高通量测序构建人tcra文库的多重pcr引物及方法 |
JP2017012188A (ja) * | 2011-05-27 | 2017-01-19 | ザ ユニバーシティ オブ ワシントン スルー イッツ センター フォー コマーシャライゼーションThe University Of Washington Through Its Center For Commercialization | 歯科疾患を治療するためのアメロゲニン由来のポリペプチド |
-
2005
- 2005-12-12 CN CN 200510102128 patent/CN1982453A/zh active Pending
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JP2017012188A (ja) * | 2011-05-27 | 2017-01-19 | ザ ユニバーシティ オブ ワシントン スルー イッツ センター フォー コマーシャライゼーションThe University Of Washington Through Its Center For Commercialization | 歯科疾患を治療するためのアメロゲニン由来のポリペプチド |
CN106319064A (zh) * | 2016-09-13 | 2017-01-11 | 北京天科雅生物科技有限公司 | 一种基于高通量测序构建人tcra文库的多重pcr引物及方法 |
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PB01 | Publication | ||
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