CN1982453A - 人类新基因及其编码多肽的用途 - Google Patents

人类新基因及其编码多肽的用途 Download PDF

Info

Publication number
CN1982453A
CN1982453A CN 200510102128 CN200510102128A CN1982453A CN 1982453 A CN1982453 A CN 1982453A CN 200510102128 CN200510102128 CN 200510102128 CN 200510102128 A CN200510102128 A CN 200510102128A CN 1982453 A CN1982453 A CN 1982453A
Authority
CN
China
Prior art keywords
leu
ser
gly
ala
pro
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN 200510102128
Other languages
English (en)
Inventor
杨淑伟
李华平
林立
周贵良
黄冰
沈川
柯瑞勤
温世萍
李满华
钟国维
Original Assignee
杨淑伟
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 杨淑伟 filed Critical 杨淑伟
Priority to CN 200510102128 priority Critical patent/CN1982453A/zh
Publication of CN1982453A publication Critical patent/CN1982453A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Landscapes

  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明属于分子生物学领域,涉及选择性剪切产生的人类新基因及其编码的多肽的用途。本发明所述的人类新基因是从不同组织cDNA文库中克隆得到的具有新的剪切形式的基因,用于制备对临床病理中是否存在特定基因的某种特异剪切体的探针,或者制备对疾病标本和正常标本进行特定基因的不同剪切方式表达谱比较的PCR引物,或者用作特定疾病的药物靶点以制备对相关疾病的治疗药物。所述人类新基因编码的多肽用于制备检测疾病的抗原-抗体诊断试剂盒,以及用作特定疾病的药物靶点以筛选对相关疾病的治疗药物。

Description

人类新基因及其编码多肽的用途
技术领域
本发明属于分子生物学领域,涉及基因及其编码的多肽,具体是涉及选择性剪切产生的人类新基因及其编码的多肽的用途。
背景技术
基因上含有蛋白质编码信息的部分叫做外显子(exon),每个外显子均编码一个完整蛋白质的特定部分。在一些生物(包括人类)基因的外显子常被一些长的DNA片段分割,这些片段又称内含子(intron),其功能目前仍在研究中。
剪切(Splicing)是指在RNA中去除内含子(intron)和连接外显子(exon),从而使内含子们被剪除掉,而原来被分隔的外显子们被接在一起。剪切是真核生物前体mRNA(pre-mRNA)转录后加工的常见方法,其结果是从一个前体mRNA(pre-mRNA)上产生出不同的mRNA。
mRNA选择性剪切
学者们正在改写人类遗传学的规则,他们的发现有助于覆盖从糖尿病到癌症到心脏病的范围的医药的进展。正被打破的是老版本的“一个基因一个蛋白”规则,它是指一个单独的基因只能产生一种蛋白。该规则已经被人们的最新研究所抛弃,因为一个称为选择性剪切(alternative splicing)的过程的发现,该过程中一个单独的基因可以产生许多不同的蛋白质。
选择性剪切(alternative splicing)是指一个基因不仅编码一氨基酸链,它能编码一定数量的氨基酸链。在某些基因中,不同的外显子的组合会在不同的时期被激活,每一种组合都会产生一种蛋白。真核细胞中的绝大部分基因必须经过剪切,才能作为蛋白质合成的模板。其中许多基因可通过不同的剪切方式,即变换剪切而编码不同功能的蛋白。
选择性剪切的发现解决了有关人类基因组的一个最大困惑,即为什么人类基因组可用如此少的基因产生出如此众多的多样性。生物学家以前认为复杂的人类需要至少5万个基因,最终从人类基因组计划的3万个数据中找出所有的基因。最新的预测是约2万个基因——跟一种简单的蠕虫的基因数目差不多。选择性剪切长久以来一直被认为是一种非常罕见的现象,但是研究者们现在宣称至少在过半,有些人甚至说几乎全部的人类基因,都有或多或少的选择性剪切发生。这个发现在原理上可以解释人类基因数目虽少,可是依然可以产生如此众多的,几十万甚至上百万的蛋白种类。
目前的研究表明,基因的选择性剪切(alternative splicing)是进化中新基因产生的重要方式之一。例如,中科院昆明动物研究所、美国Cincinnati大学宿兵博士的研究小组研究了Neuropsin基因选择性剪切的分子进化。Neuropsin基因是编码主要在大脑海马区表达的丝氨酸蛋白酶的基因。对小鼠的研究发现该基因同学习和记忆的功能调节以及大脑的发育相关。在人脑中,Neuropsin基因表达两种RNA(Type-I和Type-II)。其中,Type II是小鼠中没有的。在人的胚胎中,Type-I和Type-II两种剪切方式都有表达,且丰度相似。在成人脑中,Type-II成为优势表达的剪切方式,Type-I仅有少量表达。该研究小组测定了主要灵长类代表物种的Neurospin基因序列。研究发现,在新大陆猴和旧大陆猴中,Type-II特异的第3外显子存在1-2个碱基的插缺,从而导致Type-II读码框的改变;但在小猿和大猿中没有发现插缺。因此,他们推测,TypeII起源于距今约1千8百万年前的人猿超科(Hominoid)的祖先。这种新的Neuropsin基因的剪切方式的产生,可能对灵长类大脑功能的演化产生影响。他们进一步分析了Neuropsin两种剪切产物在人和非人灵长类大脑中的表达情况。结果显示,Type-II只在人的大脑中表达。在检测的猕猴、滇金丝猴和长臂猿的大脑中只表达Type-I。因此,Type-II在大脑中发挥生物学功能可能比1千8百万年更晚近。相关研究论文2004年7月28日发表于国际知名杂志《分子生物学与进化》(MolecularBiology and Evolution)网络版上。
此外,选择性剪切有可能是决定生物体种间差异的重要原因。人们希望能根据已知的选择性剪切的数据,寻找出决定选择性剪切的因素,并以此来预测新的选择性剪切的位点。
mRNA选择性剪切与疾病的关系
由于同一个基因在不同生长发育阶段,或不同生理病理下,或不同组织器官中,或不同细胞类型中可能转录为不同的剪切体,而同一个基因的不同剪切体可能具有不同的甚至相反的功能,因此研究同一个基因的不同剪切体的表达对于疾病诊断与治疗评估至关重要。
某些基因的初级RNA转录产物可以进行选择性剪切以产生mRNA,该mRNA与该基因产生的大部分mRNA是不同的,该mRNA翻译成选择性剪切形式的蛋白质,该蛋白质含有与相应的正常剪切产生的蛋白质不同的氨基酸序列。选择性剪切形式的蛋白质通常在一定生理或病理状态下以组织特异性的方式表达。这些选择性剪切产生的mRNA存在于许多类型的癌症、糖尿病、阿尔海默氏病和红斑狼疮等病人的患病或异常细胞中,而在正常细胞中基本不存在。
目前研究发现,选择性剪切是人体中蛋白组多样性的主要来源,它与疾病和治疗有高度相关性。例如,止痛药的长期目标是一种神经特异性的COX-1的选择性剪切异构体。几种主要疾病,如胆囊纤维化,与顺式因子或反式因子的突变或变化有关,导致异常剪切和不正常蛋白的产生。更正错误的剪切是分子治疗法的一个重要目标。近来的研究已经采用修改的寡聚核苷酸去抑制隐藏的内含子,或通过突变使活跃的内含子减弱,提示这些反应物可最终导致有效的治疗。(Mariano A Garcia-Blanco,et al.Alternative splicing in diseaseand therapy,Natrue Biotechnology 22,535-546,2004)
其他类似的研究可见Jiang C,Yu L,Zhao Y et al.Cloning and characterization of CIS 1b(cytokine inducible SH2-containing protein 1b),an alternative splicing form of CIS 1 gene.DNA Seq.2000;11:149-154.(复旦大学),该研究揭示:细胞因子可诱导的SH2包含蛋白1b(CIS 1b)是CIS 1基因的一种选择性剪切形式。
mRNA选择性剪切与心脏病的关系
机体从青年到成年的发育过程中,会发生组织和器官水平的重塑现象,这种重塑现象依赖于外界环境和条件。同样在许多疾病条件下,如心肌肥厚,心力衰竭等条件下,心脏会发生病理性重塑,但心脏的发育和重塑中作用的机理并不是十分清楚。一篇发表于2005年1月14日《细胞》(Cell)上的封面文章(Xiang-Dong Fu,et al,ASF/SF2-Regulated CaMKIIδ Alternative Splicing Temporally Reprograms Excitation-Contraction Coupling in CardiacMuscle,Cell,Vol.120,59-72,January 14,2005)报道了来自美国加州大学(UCSD)的以华人学者为主的一项重要研究成果:选择性剪切在心脏病中扮演重要角色。
付向东等人的研究发现内质网(SR)上一个蛋白ASF/SF2的基因在心脏的发育和重塑中可能扮演着中心的角色,而ASF/SF2是作用于选择性剪切的蛋白家族成员。采用该基因敲除的小鼠进行研究,发现该基因是通过调节CaMKIIδ(一种负责心脏收缩和组织生长的钙酶),从而调节了心脏的兴奋收缩耦联的过程,该基因突变或缺失会导致心脏兴奋收缩耦联的丧失,从而严重影响了心脏的发育和重塑。ASP/SF2这一内质网上蛋白的发现为将来心肌发育和许多心脏疾病提供了新的药物靶点。《细胞》杂志对该篇文章作了高度的评价,认为:选择性剪切调节影响了心脏发育(Alternative Splicing Regulation Impacts HeartDevelopment)。
mRNA选择性剪切与自身免疫疾病的关系
杨晓峰和他的同事研究了在自身免疫疾病(例如风湿性关节炎和I型糖尿病)中的选择性剪切现象,这类疾病中机体免疫系统错误攻击了自身的组织(Xiao-Feng Yang,M.D.,Ph.D,assistant professor,medicine and immunology,and Thomas A.Cooper,professor,pathology,Baylor School of Medicine,Houston;Jan.14,2005,Cell;December 2004 Journal ofAllergy and Clinical Immunology)。他们比较了随机选自人类基因组的9,554个蛋白质中的45个与自身免疫疾病相关的蛋白。他们发现:在特殊区域的选择性剪切发生在称为自身抗原的所有蛋白中,该剪切引发免疫系统的攻击。在仅42%的随机挑选的蛋白质中发现了选择性剪切。当这些异构体(不同的蛋白形式)超过一定差异的极限,自体蛋白的免疫耐受会被打破,免疫系统开始攻击这些蛋白和细胞。这些发现将具有药物开发的潜力,人们将找到阻止该蛋白的异常形式的表达,或者阻断免疫系统对它们的反应。
mRNA选择性剪切与癌症的关系
基因的选择性剪切的研究也有助于人们最终揭示肿瘤的机制。正常肿瘤的发生、发展和转移是一个非常复杂的病理过程,其中牵涉的生物大分子及其相互作用非常复杂。正常组织和肿瘤组织在基因组DNA水平上是有差异的,这种差异诸如易位、倒位、插入和缺失、扩增等。已知的这些种类的突变可以作为探针进行荧光原位杂交,对待分析个体进行突变检测。有研究报道基因的不同剪切方式同癌症的发生相关[Cooper TA,Mattox W.Theregulation of splice-site selection,and its role in human disease.Am J HumGenet,1997,61:259-266.]。
目前的研究表明,肿瘤从本质上来说是基因病。原癌基因、癌基因、肿瘤抑制基因,实际上是对细胞生长,分化起正向或者反向调节的基因。在保持机体的正常功能方面起重要的作用。如果发生异常改变,则可能引起细胞的转化和肿瘤的发生。而肿瘤的生长和转移,依赖于肿瘤内的血管生成。在肿瘤血管生成中起作用的众多因子,当前研究得最多,最受重视的是血管内皮生长因子(VEGF)。VEGF是一种重要的血管源性生长因子,主要由血管内皮细胞、巨噬细胞、纤维母细胞、平滑肌细胞等组织细胞以及各种肿瘤细胞分泌,能特异性的与血管内皮细胞受体结合,促进血管内皮细胞的分裂与增殖,并能增加微血管的通透性,对抗体、肿瘤的血管生成起着重要的作用。人VEGF基因长约14kb,由8个外显子、7个内含子交替组成,经过转录1水平的剪切,产生5种不同的转录子,形成5种异构体,VEGF121、VEGF145、VEGF165、VEGF189、VEGF206,各种异构体所含氨基酸的数量不同,其生物学特性也有所不同。VEGF121因缺少外显子6和7编码的氨基酸,无肝素结合活性,以可溶性形式存在;VEGF165仅缺少外显子6编码的氨基酸,而具有外显子7编码的氨基酸,分泌后50%与肝素结合,50%可溶形式存在,在组织细胞中含量最丰富,适于肌注、静脉使用,在动物实验和临床研究中应用较多;VEGF189、VEGF206则富含碱性氨基酸,有强肝素亲合力,主要以结合形式存在。
例如,为寻求KCHIP1基因与乳腺癌之间的关系,刘征等人对收集到的12例乳腺癌组织、12例正常乳腺组织样本进行KCHIP1基因cDNA扩增、突变检测。经测序证实,在这些乳腺癌组织样本中没有发现KCHIP1基因的突变,但发现了KCHIP1基因一种新的剪接型,这个新剪接型是在原来KCHIP1基因外显子1和外显子2之间多了一个162bp的插入片段(AY780424)。(刘征,肖向军,樊飞跃,孙元明,李雨民,杨福军,KCHIP1基因一种新剪切型的发现,癌症,2005年6期)
例如,在乳腺癌、食道癌、胰腺癌等多种癌症中,经常会发现Cyclin D1的过度表达。糖原合成酶激酶3β(Glycogen synthesis kinase 3β)导致Cyclin D1在保守的C端残基Thr-286处磷酸化,从而促使G1期进入S期时CRM1依赖的cyclin D1核输出。Cyclin D1在Thr-286处的突变会影响其磷酸化从而引发细胞转化。但是,仅是普通的cyclin D1的过度表达并不能导致这种转化。Cyclin D1的突变体,Cyclin D1-T286,不能被GSK-3β3磷酸化,并且在整个细胞周期都处于核中,该突变体能够在没有其他癌基因存在情况下转化鼠纤维细胞,这表明cyclin D1无法核输出会提高cyclin D1的致癌性。但是迄今为止,在人类癌症中还没有发现类似的突变。尽管没有证据表明cyclin D1会在Thr-286处发生突变,但FengminLu等人的研究表明,一种经选择性剪切得到的cyclin D1 mRNA(cyclin D1b)编码了缺少Thr-286的cyclin D1异构体,在许多癌症中都发现了cyclin D1b的选择性表达(Fengmin Lu,Andrew B.Gladden,and J.Alan Diehl,Cyclin D1的选择性剪切异构体——Cyclin D1b是核癌基因,CANCER RESEARCH63,7056-7061,November 1,2003)。Cyclin D1(CCND1)被选择性剪切后可得到的一种编码特殊的cyclin D1异构体的mRNA产物,即cyclin D1b,这种异构体缺失Thr-286。通过对cyclin D1b的克隆表达研究,发现它仍然保持了结合和活化CDK4的能力。但跟正常的cyclin D1a不同的是,cyclin D1b在细胞周期中始终处在核内,其组成性表达会促使细胞转化。利用cyclin D1b特异性抗血清,在食道癌来源的细胞株和原发性食道癌中均检测到该蛋白的高表达。从而得到结论,选择性剪切导致了核内致癌性cyclin D1异构体的表达。Fengrnin Lu等的研究已经证实,cyclin D1b编码的蛋白编码了一个致癌性的细胞周期蛋白异构体。尽管cyclin D1b保持了结合并活化CDK4的能力,cyclinD1b蛋白对GSK-3β和CRM1依赖的核输出有阻碍作用,从而会留在核中。同普通的cyclinD1相比,cyclin D1b的表达足够推动NIH-3T3鼠纤维细胞的转化。
发明内容
本发明的目的是提供人类新基因及其编码的多肽的用途。
本发明所述的人类新基因,是以已公开的同源参考基因序列为标准,从人体不同组织cDNA文库中克隆得到的具有新的剪切形式的基因,剪切体之间的差异DNA序列为SEQ IDNO:1-102之一。
本发明提供了所述的人类新基因用于制备对临床病理中是否存在特定基因的某种特异剪切体的探针的用途。
本发明提供了所述的人类新基因用于制备对疾病标本和正常标本进行特定基因的不同剪切方式表达谱比较的PCR引物的用途。
本发明提供了所述的人类新基因用作特定疾病的药物靶点以制备对相关疾病的治疗药物的用途。
本发明所述的人类新基因所编码的多肽,其特征在于:是以已公开的同源参考基因编码序列为标准,从人体不同组织cDNA文库中克隆得到的特定基因的具有新的剪切形式的基因编码的多肽,剪切体之间的差异氨基酸序列为SEQ ID NO:103-204之一。
所述的多肽用作抗原免疫动物以生产相应的抗体。
本发明提供了所述的多肽用于制备检测疾病的抗原-抗体诊断试剂盒的用途。
本发明所述的多肽用于制备检测自身免疫疾病的抗原-抗体诊断试剂盒。
本发明所述的多肽用于制备检测非自身免疫疾病的抗原-抗体诊断试剂盒。所述的非自身免疫疾病包括癌症、心血管病、精神病等疾病。
本发明提供了所述的多肽用作特定疾病的药物靶点以筛选对相关疾病的治疗药物的用途。
本发明涉及102个基因的新剪切方式,见下表:
  序号  参考基因存取号(注1)  新基因存取号  新基因的缺失或插入的核苷酸序列(注2)  新基因的缺失或插入的氨基酸序列(注3)  基因分类  基因名称
  1  NM_005023.1  AY780790.1  613:D231SEQ ID NO.1  205:D77SEQ ID NO.103  分泌蛋白  PGGTlB
  2  NM_032019.3  AY450395.1  754:D150SEQ IDNO.2  252:D50SEQ ID NO.104  分泌蛋白  HDAC10
  3  NM_005671.1  AY302140.1  88:D111SEQ ID NO.3  30:D37SEQ ID NO.105  分泌蛋白  reproduction 8
  4  BC033868.1  AY487420.1  127:D108SEQ ID NO.4  43:D36SEQ ID NO.106  分泌蛋白  hypotheticalprotein
  5  NM_004269.1  DQ099387.1  460:D108SEQ ID NO.5  154:D36SEQ ID NO.107  分泌蛋白  CRSP8
  6  NM_021229.1  AY330211.1  1510:D69SEQ ID NO.6  504:D23SEQ ID NO.108  分泌蛋白  NTN4
  7  NM_003480.1  AY339060.1  217:D30SEQ ID NO.7  73:D10SEQ ID NO.109  分泌蛋白  MAGP2
  8  AK097858.1  AY359884.1  343:D30SEQ ID NO.8  115:D10SEQ ID NO.110  分泌蛋白  TCRB
  9  NM_001890.1  DQ064604.1  277:D24SEQ ID NO.9  93:D8SEQ ID NO.111  分泌蛋白  casein(CSN1)
  10  NM_007164.1  DQ076657.1  703:D24SEQ ID NO.10  235:D8SEQ ID NO.112  分泌蛋白  MADCAM1
  11  XM_209363.1  AY424277.1  157:D294SEQ ID NO.11  53:D98SEQ ID NO.113  蛋白磷酸化酶  PTPNS
  12  BC012102.2  DQ234351.1  679:D255SEQ ID NO.12  227:D85SEQ ID NO.114  蛋白磷酸化酶  protein tyroSinephosphatasereceptor type F
  13  NM_020547.1  AY714878.1  1141:D285SEQ ID NO.13  381:D95SEQ ID NO.115  蛋白激酶  AMHR2
  14  NM_002750.2  DQ234352.1  616:D228SEQ ID NO.14  206:D76SEQ ID NO.116  蛋白激酶  MAPK8
  15  L01087.1  AY702977.1  1648:D189SEQ ID NO.15  550:D63SEQ ID NO.117  蛋白激酶  PRKCQ
  16  AK057247.1  DQ104438.1  805:D171SEQ ID NO.16  269:D57SEQ ID NO.118  蛋白激酶
  17  NM_002759.1  AY302136.1  787:D123SEQ ID NO.17  263:D41SEQ ID NO.119  蛋白激酶  PRKR
  18  NM_016276.3  AY987010.1  55:D102SEQ ID NO.18  19:D34SEQ ID NO.120  蛋白激酶  SGK2
  19  NM_014489.1  AY373030.1  160:D183SEQ ID NO.19  54:D61SEQ ID NO.121  膜蛋白  FRAG1
  20  NM_005074.1  AY780791.1  736:D162SEQ ID NO.20  246:D54SEQ ID NO.122  膜蛋白  SLC17A1
  21  NM_023003.1  DQ021909.1  709:D93SEQ ID NO.21  237:D31SEQ ID NO.123  膜蛋白  TM6SF1
  22  NM_002231.2  AY303776.1  262:D75SEQ ID NO.22  88:D25SEQ ID NO.124  膜蛋白  KAI1
  23  NM_018375.1  AY780789.1  403:D69SEQ ID NO.23  135:D23SEQ ID NO.125  膜蛋白  SLC39A9
  24  NM_080476.1  AY339061.1  196:D60SEQ ID NO.24  66:D20SEQ ID NO.126  膜蛋白  CDC91L1
  25  AF395708.1  AY357943.1  127:D48SEQ ID NO.25  43:D16SEQ ID NO.127  膜蛋白  ORMDL3
  26  NM_005373.1  DQ234353.1  79:D21SEQ ID NO.26  27:D7SEQ ID NO.128  膜蛋白  MPL
  27  NM_003471.1  AY780786.1  514:D87SEQ ID NO.27  172:D29SEQ ID NO.129  离子通道  KCNAB1
  28  NM_002561.1  DQ234349.1  289:D72SEQ ID NO.28  97:D24SEQ ID NO.130  离子通道  P2RX5
  29  NM_031954.1  AY597809.1  526:D69SEQ ID NO.29  176:D23SEQ ID NO.131  离子通道  KCTD10
  30  NM_018983.2  AY780787.1  541:D54SEQ ID NO.30  181:D18SEQ ID NO.132  离子通道  NOLA1
  31  AF484416.1  AY780792.1  400:D1536SEQ ID NO.31  134:D512SEQ ID NO.133  rhysin 2
  32  NM_024773.1  AY345239.1  499:D588SEQ ID NO.32  167:D196SEQ ID NO.134  FLJ13798
  33  NM_001115.1  DQ104739.1  2110:D393SEQ ID NO.33  704:D131SEQ ID NO.135  ADCY8
  34  NM_175709.1  DQ064603.1  241:D279SEQ ID NO.34  81:D93SEQ ID NO.136  CBX7
  35  NM_006813.1  AY303779.1  304:D237SEQ ID NO.35  102:D79SEQ ID NO.137  PROL2
  36  NM_004809.3  DQ064605.1  790:D213SEQ ID NO.36  264:D71SEQ ID NO.138  STOML1
  37  NM_003624.1  DQ234346.1  79:D204SEQ ID NO.37  27:D68SEQ ID NO.139  RANBP3
  38  BC020242.1  AY333987.1  253:D192SEQ ID NO.38  85:D64SEQ ID NO.140
  39  NM_007267.3  DQ104440.1  451:D180SEQ ID NO.39  151:D60SEQ ID NO.141  LAK-4P
  40  NM_021734.2  AY346372.1  289:D171SEQ ID NO.40  97:D57SEQ ID NO.142  SLC25A19
  41  BC033153.1  AY337579.1  112:D129SEQ ID NO.41  38:D43SEQ ID NO.143  MGC45780
  42  NM_018152.1  DQ104738.1  208:D123SEQ ID NO.42  70:D41SEQ ID NO.144  FLJ10600
  43  AF100751.1  AY353086.1  373:D114SEQ ID NO.43  125:D38SEQ ID NO.145  FKBP7
  44  AK130020.1  AY987009.1  334:D111SEQ ID NO.44  112:D37SEQ ID NO.146
  45  NM_014009.2  DQ010327.1  208:D105SEQ ID NO.45  70:D35SEQ ID NO.147  FOXP3
  46  AK055158.1  AY360463.1  373:D96SEQ ID NO.46  125:D32SEQ ID NO.148  FLJ30596-like 蛋白
  47  NM_003344.1  AY302138.1  205:D93SEQ ID NO.47  69:D31SEQ ID NO.149  UBE2H
  48  NM_006611.1  AY334570.1  115:D90SEQ ID NO.48  39:D30SEQ ID NO.150  KLRA1
  49  AF370420.1  DQ074695.1  88:D90SEQ ID NO.49  30:D30SEQ ID NO.151  PP14397
  50  NM_005705.1  AY303780.1  190:D75SEQ ID NO.50  64:D25SEQ ID NO.152  PHEMX
  51  AK094830.1  AY336746.1  130:D723SEQ ID NO.51  44:D24SEQ ID NO.153  thioredoxin-like 2(TXL2)
  52  BC018082.1  AY302139.1  238:D69SEQ ID NO.52  80:D23SEQ ID NO.154
  53  NM_004914.1  AY336745.1  361:D66SEQ ID NO.53  121:D22SEQ ID NO.155  RAB36
  54  BC013953.1  AY359883.1  211:D60SEQ ID NO.54  71:D20SEQ ID NO.156  CAC1
  55  NM_138794.1  AY341430.1  190:D48SEQ ID NO.55  64:D16SEQ ID NO.157  LYPLAL1
  56  BC034353.1  AY303778.1  373:D36SEQ ID NO.56  125:D12SEQ ID NO.158
  57  NM_018388.1  AY372211.1  772:D36SEQ ID NO.57  258:D12SEQ ID NO.159
  58  AK091831.1  AY439221.1  400:D33SEQ ID NO.58  134:D11SEQ ID NO.160  hYPothetical蛋白FLJ34512
  59  S95058.1  AY353088.1  37:D27SEQ ID NO.59  13:D9SEQ ID NO.161  MAX
  60  AF142417.1  AY780788.1  625:D24SEQ ID NO.60  209:D8SEQ ID NO.162  quaking isoform
  61  NM_021046.1  AY360461.1  88:D21SEQ ID NO.61  30:D7SEQ ID NO.163  LOC57830
  62  NM_080863.1  AY557346.1  772:D18SEQ ID NO.62  258:D6SEQ ID NO.164  ASB16
  63  L34703.1  AY360462.1  346:D15SEQ ID NO.63  116:D5SEQ ID NO.165  TCRA
  64  NM_006992.1  AY834277.1  508:D15SEQ ID NO.64  170:D5SEQ ID NO.166  B7 isoform
  65  NM_014591.1  AY302141.1  73:D96SEQ ID NO.65  25:D32SEQ ID NO.167  离子通道  KCNIP2
  66  NM_012452.1  AY302137.1  121:D81SEQ ID NO.66  41:D27SEQ ID NO.168  细胞因子受体  TNFRSF13B
  67  BC015909.1  DQ099385.1  397:D144SEQ ID NO.67  133:D48SEQ ID NO.169  ADP-ribosylation-like  factor  6interacting 蛋白 4
  68  BC001244.1  AY337578.1  280:D87  94:D29  ASB9
 SEQ ID NO.68  SEQ ID NO.170
  69  NM_138567.1  AY353087.1  145:D48SEQ ID NO.69  49:D16SEQ ID NO.171  synaptotagminVIII(SYT8)
  70  NM_020528.1  AY780793.1  580:D69SEQ ID NO.70  194:D23SEQ ID NO.172  PCBP3
  71  BC019643.1  AY506562.1  451:D27SEQ ID NO.71  151:D9SEQ ID NO.173  PDIP46
  72  AF301009.1  AY517497.1  667:D30SEQ ID NO.72  223:D10SEQ ID NO.174  BIRC7
  73  BC022317.1  AY357942.1  346:D15SEQ ID NO.73  116:D5SEQ ID NO.175  T cell receptordelta-chain
  74  AF111804.1  AY349360.1  64:I42SEQ ID NO.74  22:I14SEQ ID NO.176  转录因子  MSTP023
  75  NM_032585.1  AY597808.1  196:I99SEQ ID NO.75  66:I33SEQ ID NO.177  分泌蛋白  TTTY6
  76  NM_007161.1  DQ099382.1  100:I15SEQ ID NO.76  34:I5SEQ ID NO.178  分泌蛋白  LST1
  77  NM_014370.1  DQ099381.1  949:I99SEQ ID NO.77  317:I33SEQ ID NO.179  蛋白激酶  STK23
  78  NM_001892.2  DQ082865.1  457:I84SEQ ID NO.78  153:I28SEQ ID NO.180  蛋白激酶  CSNK1A1
  79  NM_002610.2  DQ234350.1  412:I60SEQ ID NO.79  138:I20SEQ ID NO.181  蛋白激酶  PDK1
  80  BC032784.1  AY987011.1  985位插入33SEQ ID NO.80  329:I11SEQ ID NO.182  蛋白激酶  CaM kinase
  81  BC039154.1  AY597811.1  592:I96SEQ ID NO.81  198:I32SEQ ID NO.183  chromosome 16hyPotheticalprotein
  82  AK127379.1  DQ070854.1  175:I96SEQ ID NO.82  59:I32SEQ ID NO.184  FLJ45455-likeprotein
  83  NM_002691.1  DQ234348.1  1777:I78SEQ ID NO.83  593:I26SEQ ID NO.185  POLD1
  84  AK093467.1  AY360464.1  70:I72SEQ ID NO.84  24:I24SEQ ID NO.186  hyPothetical 蛋白LOC146177-likeprotein
  85  BC014515.1  AY349357.1  46:I69SEQ ID NO.85  16:I23SEQ ID NO.187  SDCCAG3
  86  BC033748.1  DQ111782.1  580:I69SEQ ID NO.86  194:I23SEQ ID NO.188  chromosome 16unknown
  87  AK094842.1  AY333281.1  190:I57SEQ ID NO.87  64:I19SEQ ID NO.189  chromosome 9unknown
  88  BC016460.1  AY302134.1  367:I54SEQ ID NO.88  123:I18SEQ ID NO.190  MGC18079
  89  NM_014567.1  AY545071.1  913:I54SEQ ID NO.89  305:I18SEQ ID NO.191  BCAR1
  90  BC034296.1  AY349359.1  334:I51SEQ ID NO.90  112:I17SEQ ID NO.192
  91  BC029565.1  AY336744.1  34:I45SEQ ID NO.91  12:I15SEQ ID NO.193
  92  BC021740.1  AY303777.1  25:I39SEQ ID NO.92  9:I13SEQ ID NO.194
  93  AK093059.1  AY550933.1  508:I36SEQ ID NO.93  170:I12SEQ ID NO.195  FLJ35740
  94  BC026189.1  DQ099386.1  562:I36SEQ ID NO.94  188:I12SEQ ID NO.196  Sad1 and UNC84domain containing1
  95  AF042386.1  DQ160195.1  862:I30SEQ ID NO.95  288:I10SEQ ID NO.197  CYP-33
  96  AK001298.1  AY349358.1  124:I21SEQID NO.96  42:I7SEQ ID NO.198
  97  NM_025010.1  AY714879.1  448:I15SEQ ID NO.97  150:I5SEQ ID NO.199  Kelch-like 18(KLHL18)
  98  NM_001142.2  AY487421.1  103:I42SEQ ID NO.98  35:I14SEQ ID NO.200  分泌蛋白  AMELY
  99  NM_005122.1  DQ022681.1  823:I15SEQ ID NO.99  275:I5SEQ ID NO.201  核激素受体  NR1I3
  100  AY360461.1  AY597812.1  241:I102SEQ ID NO.100  81:I34SEQ ID NO.202  chromosome 11UHS KerB-like
  101  BC028199.1  DQ153249.1  508:I114SEQ ID NO.101  170:I38SEQ IDNO.203
  102  AY303778.1  AY597813.1  217:I12SEQ ID NO.102  73:I4SEQ ID NO.204  chromosome 3hyPotheticalprotein
注1:基因存取号是在GenBank的存取号,GenBank包含所有已知的核酸及蛋白质序列、以及与之相关的生物学信息和参考文献,是美国生物技术信息中心(NCBI)建立并维护的,是世界上权威的序列数据库。
注2:以参考基因编码序列为标准,新基因的缺失或插入氨基酸位置及长度。以序号1为例,“613:D231”是指从第613位开始缺失231个核苷酸,如此类推。以序号74为例,“64:I42”是指从第64位开始插入42个核苷酸,如此类推。
注3:以参考基因序列为标准,列出新基因的缺失或插入核苷酸位置及长度。以序号1为例,“205:D77”是指从第205位起缺失77个氨基酸,如此类推。以序号74为例,“22:I14”是指从第22位开始插入14个氨基酸,如此类推。
本发明是针对这些基因的不同剪切形式可能与疾病相关,可用于对临床病理中是否存在某种特异剪切体的探针。
按照GenBank中基因的参照序列设计全长ORF的5’端和3’端引物,在72个人体组织cDNA文库(心脏、肝、肺、肠、脾、肾、子宫、胎盘、睾丸等)中用PCR反应合成蛋白编码序列,然后用DNA测序仪进行测序,以获得同一基因的不同剪切形式。这些新剪切方式mRNA编码的蛋白可能在生物学功能、理化学特性与已报道的同一基因其他剪切方式所编码的蛋白不同,也可能由相同功能但功能强度不同。
基因水平的应用
通过对基因表达谱的分析可获得表达差异的情况,如果某种基因的某种剪切方式只在病变组织表达,那么就这个基因的某种剪切方式就可能与某种疾病直接相关,可用作该疾病诊断试剂盒的探针。因此,本发明所述的核酸序列可用作PCR引物对疾病标本和正常标本进行不同剪切方式表达谱比较,寻找用于疾病的检测和诊断的探针。
DNA芯片技术
目前,DNA芯片技术(DNA Microarray)已经被广泛应用,可以在基因水平上寻找药物靶标。具体而言,本发明所述的核苷酸序列可通过微点阵DNA芯片技术来高通量地分析和发现基因的这些剪切方式在正常和病理样本的表达差异,以寻找这些剪切异构体作为疾病诊断和治疗的探针。
本发明所述的核苷酸序列可通过新的基因表达谱分析技术如AmpArrayTM技术用于检测和诊断疾病。
AmpArrayTM技术
AmpArrayTM技术是广州复能基因有限公司开发的高灵敏的基因表达谱研究方法(http://www.genecopoeia.com.cn/product/amparray/)。该技术是将人体编码基因经过精心设计的高特异引物和高特异性和高灵敏性PCR组分置于96孔板中,每块96孔板中含有47个基因的引物和一个正对照(看家基因)的引物和模板,使用时只需要加入RT产物,然后进行PCR循环,即可及时观察某一类基因在不同情况下的表达差异。该技术具有:操作简单、快速,无需放射性标记、杂交等复杂、耗时的操作,在1-2天内即可获得结果;仅需要能使用96孔板的PCR仪,无需其他设备;高灵敏度,可根据转录水平调整PCR的循环数;高特异性,每对引物都经过严格筛选的具有高特异性;引物配对的选择性可降低基因组污染的影响;可在不同的样本发现不同剪切形式。该方法不仅可以用于基因表达谱的分析,还可以用于检测和诊断。
基于本发明所述的核苷酸序列库,可设计出针对不同选择性剪切体的引物,通过AmpArrayTM技术用于检测和诊断疾病。
分子信标技术
分子信标(molecular beacons)是一种具有自身配对区的DNA寡核苷酸分子探针。分子信标技术是利用荧光标记探针的碱基配对原理,通过观察探针荧光显示或淬灭的现象,确定目的基因的的分子标记。(S Tyagi,F R Kramer Nat Biotechnol,1996,14:303~308)目前,分子信标不仅可以用于基因的定量、定性检测,还可以用于基因点突变等的分析。另外,分子信标技术还为研究DNA-蛋白质之间的相互作用提供了一种简单,直接,灵敏,实时,甚至可以用于活体检测的方法。利用分子信标技术在分析、检测核酸和蛋白质中的优点,分子信标技术还可以作为生物芯片和生物传感器的探针。
分子信标是一种荧光标记的寡核苷酸链,一般含有25~35个核苷酸。在结构上,分子信标大体上可以分为三部分:(1)环状区:一般由15~30个核苷酸组成,可以与靶分子特异结合;(2)茎干区:一般由5~8个碱基对组成,在分子信标与靶分子结合过程中可发生可逆性解离;(3)荧光基团和淬灭基团:荧光基团一般连接在5’端;淬灭基团一般连接在3’端。本发明所述的核苷酸序列可设计为分子信标环状区的序列,因此可通过分子信标技术来分析基因表达,从而用于检测和诊断疾病。
蛋白水平的应用
本发明所述的多肽可以用任何多肽合成的方法制备。例如,该多肽可以在自动合成仪中合成,也可以由体外相应的mRNA翻译而得,还可以采用重组DNA技术生产本发明的多肽。该多肽可用于以下应用领域:
自身免疫疾病的检测和诊断
与自身免疫疾病相关的蛋白由于选择性剪切产生的异构体,是引发自身免疫系统攻击的自身抗原,该病人体内将产生相应抗体。因此,在自身免疫性疾病患者的细胞、组织和器官中能找到多种自身抗体。可通过对自身免疫病人与正常人的血清样本进行比较,寻找检测自身免疫疾病病人自己产生的抗体,即是否存在本发明所述的选择性剪切产生的多肽,从而用于检测和诊断疾病。
癌症及其他非自身免疫疾病的检测和诊断
本发明所述的选择性剪切产生的多肽可用于免疫宿主而制备抗体,该抗体可用于检测同类疾病的病人是否带有对应的抗原,即是否存在本发明所述的选择性剪切产生的多肽。
所述的抗体可以是单克隆抗体、多克隆抗体或者能够与抗原结合的抗体片段。抗体片段,例如Fab抗体片段来自抗体,保留了选择性结合抗原的能力,可以采用本领域已知的方法制备,例如美国专利第5876997号。
在免疫后的适当时机,例如当特异性的抗体滴度最高时,根据Kohler和Milstein(Nature1975,Vol256,p495)所述的融合技术,可以从宿主中获得产生抗体的细胞并采用标准的技术制备单克隆抗体。通过杂交瘤培养的上清液筛选出与多肽结合的抗体,采用如ELISA等分析方法,可以检测本发明的杂交瘤细胞。也可以采用噬菌体抗体展示文库进行筛选,来鉴定并分离针对选择性剪切形式的单克隆抗体。
本发明中的多克隆抗体可采用本领域已知的方法制备,用本发明的多肽免疫宿主,然后收获抗体。例如,采用ELISA法在不同时间检测免疫宿主的抗体滴度。又如,抗体可从宿主中收获与分离,进而用已知技术如色谱来获得抗体。
重组抗体例如嵌合抗体或者人源化单克隆抗体也在本发明的范围之内。这些重组抗体可以用本领域已知的重组DNA技术制备。
疾病的新药物靶点
本发明所述的选择性剪切产生的核苷酸序列和多肽序列,可能是相应疾病的新的药物靶点,人们可以从以下几个途径去开发药物:阻止该蛋白的异常形式的表达;阻断免疫系统对它们的反应。
附图说明
图1为获得基因不同剪切方式的核苷酸序列的克隆策略示意图;
图2为利用AmpArrayTM技术对基因新的剪切方式在正常组织和疾病组织进行表达谱分析的示意图。
具体实施方式
定义
在以下的说明中,广泛利用到许多重组DNA技术术语,为了能令说明书和权利要求书明晰且更好地理解,提供了以下术语的定义。
核苷酸:本文的“核苷酸”是指碱基—糖—磷的复合物。核苷酸是核酸(DNA和RNA)序列的基本单体构成单位。核苷酸还包括脱氧核糖三磷酸如dATP,dITP,dUTP,dGTP,dTTP及其衍生物。如:7-脱氧-dGTP,和7-脱氧-dATP。核苷酸在本文中还应包括双脱氧核糖三磷酸及其衍生物。例如脱氧核糖三磷酸包括ddATP,ddCTP,ddGTP,ddITP和ddTTP,但不仅限于以上例子。在本发明中,核苷酸包括未标记种,然后用各种技术带上可检测的标记核苷酸。可检测的标记,例如有:放射性同位素,荧光标记,化学发光标记及酶标记。
基因:指含有表达出多肽,蛋白或功能性RNA所需信息的DNA序列,包括启动子,结构基因以及其他涉及表达蛋白或功能RNA的序列。
结构基因:指一般能被转录成mRNA的DNA序列。然后这些mRNA又能翻译成为特异的多肽氨基酸序列。
纯化:此处是指相比较于培养物中的平均水平提高酶活性,即提高每单位重量蛋白的活性,不是指将蛋白纯化得非常均一。
引物:指单链寡核苷酸,它能通过与核苷酸单体共价结合而延伸从而扩增或聚合成核酸分子。
模板:指双链、单链的核酸分子,它能够被扩增、合成或测序。如果是双链DNA分子,在其被扩增,合成或测序前,先将双链变性成为一条第一链和一条第二链将促进反应。与部分模板序列互补的引物在合适的条件与模板杂交,然后聚合酶合成一个与模板或部分模板互补的分子。这个新合成的分子与原始模板长度一样或短于原始模板。
扩增:指在体外通过应用DNA聚合酶提高某个核酸序列的拷贝数。DNA扩增导致核苷酸整合到DNA分子的引物上由此形成了与DNA模板互补的新DNA分子。一个扩增反应包含了DNA复制的多个循环。例如包括PCR,一个PCR反应的5-100变性、褪火、合成新分子的循环。
聚合酶链式反应(PCR):包括合成一系列引物与目标DNA序列两端互补。引物与目的DNA,热稳定的DNA聚合酶。4种脱氧核苷酸(A、T、C、G)溶液被加热到足以使DNA互补双链分开的温度(约95℃),然后温度降至使引物与目的DNA两端序列结合,然后混合液再升温(约72℃)合成DNA。此温度延续一段时间后,混合液再次达到足以解开新合成的DNA双链的温度。于是完成第一个循环,混和液随后降温,再重复上述的过程(循环)。
热稳定:指能耐(抵抗)热变性的酶。嗜温性酶加热后可被失活,例如:T4的核苷酸激酶的3′磷酸酶活性在75℃/min就失去。在此发明中,相比较于嗜温性酶如T4的核苷酸激酶,热稳定的3′磷酸酶活性更能耐受热(高温)不失活。实际上,一个热稳定酶并不是意味这种酶能无限制(完全)地耐高温,高温(热)处理还是在某种程度上会降低酶的活性。相比较于嗜温性酶,一个热稳定酶往往具有更高的最适温度。
异源性:指两个不同来源的DNA片段在本质上没有遗传或物理上的相关性,异源性同时也可描述为在物理或遗传上有关联的分子,但这种关联在本质上完全不同。
同源性:在此用于两个不同核酸序列之间的比较。为此同源性的评价可认为是相同碱基的百分比。不包括为了获得较好的序列对比而引入的缺口。同源性比值可用核酸杂交技术评价,众所周知,也可通过比较两个序列的精确碱基的序列来确定。
此外,同源性实质上可理解为:A和B在严谨的条件,即温度介于50-70℃,双倍浓度的SSC缓冲液(2倍NaCl 17.5g/l及8.8g/l柠檬酸钠),0.1%十二烷基硫酸钠(SDS)下杂交,然后用在相同温度下,用浓度减少的SSC缓冲液,如1倍、1/2、1/10强度SSC(含0.1%SDS)来漂洗。然而,最适条件会有很大不同,取决于特定杂交反应。
启动子:在转录起启子上游的一段DNA序列,包含有转录必须的调控区域。在本发明的DNA构建中,所适用的启动子包括病毒、真菌、细菌、动物和植物启动子,它可以选择成为组成型启动子和诱导型启动子,如果是诱导型启动子,它会被诱导物激发而提高转录速率。相反如果是组成型的启动子,那么它的转录就不被诱导物调控或基本不受控制。
克隆载体:一种DNA分子,如:质粒,柯斯粒,噬菌体,它具有在宿主细胞自我复制的能力。往往包含一个标记基因,一个或少数几个限制性内酶切识别位点,用来插入外源DNA序列而不影响载体的基本的生物功能。
表达:指一个结构基因产生多肽或者RNA分子的过程。它包括基因转录成mRNA以及随后翻译成蛋白。
表达载体:指DNA分子含有用于在宿主细胞中表达的基因,通常基因的表达是在某个调控元件,包括组成型启动子和诱导型启动子,调控元件增强子的调控之下。此外的“调控元件”是指控制及调节基因表达的DNA序列。这样一个基因可被说成可调控地连接到一个调控元件上,意味着这个调控元件指导该基因表达所以才连接上。
重组宿主:含有克隆载体或者表达载体的原核或真核细胞,也包括原核或真核细胞的遗传特性被改造。
氨基酸:本文指标准氨基酸,即通常存在于天然多肽中的20种L型氨基酸。本发明的多肽中包含的氨基酸,尤其是羧基或氨基末端的氨基酸,可以被甲基化、酰胺化、乙酰化。
多肽和蛋白质:“多肽”和“蛋白质”是可以互换使用的术语,指的是一种包含至少2个由肽键或修饰的肽键共价连接的氨基酸残基。本发明中的多肽中可以存在二硫键。
阅读框(ORF):指核酸中一系列特定的密码子,例如翻译时产生特定多肽的mRNA。
其它本文所用的分子、细胞生物学和DNA重组上的术语应该被该领域的普通技术人员所掌握。
一.获得不同剪切方式的克隆(图1):
根据GeneBank的参照序列,设计其编码序列的5’和3’端特异引物;
用5’和3’端特异引物从72个人体组织的cDNA文库中进行扩增,扩增反应条件为:现94℃ 5min,然后94℃ 30s 55-58℃ 30s 68℃ 1min/kb反应20-30循环,再68℃7min。
1、用0.8-1.2%的琼脂糖凝胶结合EB(溴化乙啶)染色检测PCR扩增结果;
2、对于扩增结果阳性的PCR产物,应用GatwayTM技术的BP反应把PCR产物克隆到入门载体(pDonr vector),获得穿梭克隆;(具体操作参见Invitrogen Co.GatewayTM)。
3、对穿梭克隆进行测序(测序反应试剂和测序仪均购自ABI公司);
4、测序获得的克隆的序列,与参照序列进行BLAST分析,发现与基因的已经报道剪切方式不一样的剪切方式。
二.设计AmpArray引物:
1.目的基因mRNA序列BLAST分析:利用BLAST工具匹配基因组数据库(genomedatabase),记录剪接mRNA序列外显子的分界点;
2.AmpArray引物选择:根据记录的外显子的分界点,利用GeneLooper2.0引物设计软件,采用PCR引物设计与优化原则和高可信度的引物设计算法,选取(1)退火温度在60℃左右。(2)引物长度18~23BP之间。(3)扩增产物长度在200~400BP之间。(4)相对原始剪接版本插入外显子的新mRNA,一条引物(Forward引物或Reverse引物)在插入的外显子的序列中选择。另一条引物(Forward引物或Reverse引物)在跨至少一个内含子的外显子里选择(确保Forward引物与Reverse引物跨越至少一个内含子)。(5)相对原始剪接版本缺失外显子的新mRNA,一条引物(Forward引物或Reverse引物)选择连接缺失外显子的两个外显子头和尾部部分序列,利用引物设计软件进行优化。另一条引物(Forward引物或Reverse引物)在跨至少一个内含子的外显子里选择(确保Forward引物与Reverse引物跨越至少一个内含子);
三.利用AmpArrayTM技术对新的剪切方式基因在正常组织和疾病组织进行表达谱分析:
1总RNA的提取
1.1组织的匀质化
取100mg的组织样品1和2,分别加入1ml的TRIzoL试剂(按照体积比1∶10),室温放置5分钟,均质化组织。离心10分钟,12000rpm,4℃,吸取上清部分到新的1.5ml离心管中。
1.2分离RNA
加0.2ml的氯仿到离心管中,剧烈摇动15秒,室温放置10分钟后,离心15分钟,12000rpm,4℃。溶液分层。
1.3RNA的沉降
把离心后的上清部分转移到新的I.5ml离心管中,每管加0.5ml的异丙醇,室温放置10分钟,离心15分钟,12000rpm,4℃。RNA沉降在离心管底部。
1.4RNA的洗涤
去上清液,每管加入1ml的75%的乙醇溶液,振荡后。离心5分钟,7500rpm,4℃。
1.5RNA的溶解
去上清液,室温放置,干燥10分钟。加30ul水(用DEPC处理过),溶解RNA沉淀。
2反转录,总RNA样品1和2分别合成第一链cDNA。
2.1按顺序加入下列样品:
总RNA(1.0ug/ul)       10ul
Oligo dT(0.5ug/ul)    2ul
补水到25ul
2.2把样品混合后,70℃变性5分钟,立即放置于冰上。按顺序加入下列试剂:
5×MMLV RT反应缓冲液     20ul
5×dNTP混合物(每个2.5mM) 20ul
MMLV RT(200unit/ul)      2.5ul
补水到100ul
2.3把混合物放置于42℃,反应50分钟。然后70℃,10分钟,灭活酶活性。
2.4合成第一链cDNA样品1和2,冻存在-20℃。
3cDNA的定量实验
3.1第一链cDNA样品1和2,分别制备一系列的cDNA的稀释梯度,每个相差5倍,cDNA的稀释倍数分别为1/5,1/25,1/125,1/625,1/3125。
3.2准备PCR反应:
取稀释后每管cDNA样品          2ul
10×dNTP(每个2mM)             2.5ul
10×PCR缓冲液                 2.5ul
GAPD primers(每个5pmol/ul)    1ul
Taq polymerase                0.2ul
补水到25ul。
3.3PCR反应条件:94℃ 5分钟;(94℃ 30秒,55℃ 30秒,72℃ 60秒,30个循环);72℃ 7分钟;4℃保存。
3.4 PCR完成后,取10ulPCR产物,加入4ul加样缓冲液,电泳使用1%的琼脂糖凝胶。
3.5拍照使用Tanon凝胶成像系统,利用GelPicAnalyzer分析软件,对照片进行分析,根据PCR产物亮度的对比分析,确定cDNA样品1和2在哪个稀释梯度具有相同的浓度。将cDNA样品稀释成具有相同浓度的样品,保存在-20℃。
4 AmpArray PCR
4.1从冰箱中取出AmpArray平板(96孔板,每两个孔的引物是一样的,1,2是同一个引物;3,4是同一个引物……),放置在冰上。
4.2制备PCR反应混合物:
                         正常组织cDNA    疾病组织cDNA2
10×PCR缓冲液            2.5ul           2.5ul
10×dNTP(每个2mM)        2.5ul           2.5ul
cDNA样品                 1ul             1ul
Taq polymerase           0.2ul           0.2ul
补水到24ul。
4.3分别将PCR混合物加入到AmpArray平板孔中,注意把cDNAl的PCR混合物加入到奇数孔中(1,3,5,7……);把cDNA2的PCR混合物加入到偶数孔中(2,4,6,8……)
4.4PCR反应
94℃ 5分钟;(94℃ 30秒,55℃ 30秒,72℃ 60秒,30个循环);72℃ 7分钟;4℃保存。
4.5取10ulPCR产物,加3ul的上样缓冲液,电泳。小心避免污染样品。采用1.2%的琼脂糖凝胶,电压3v/cm。紫外灯下照相。
4.6基因的表达与否,基因的表达丰度以及基因的选择性剪切等,都能从照片中看出;并且可以通过分析软件进行定量分析。
如图2所示,利用AmpArrayTM技术对新的剪切方式基因在正常组织和肺癌组织进行表达谱分析。电泳图中,T为肺癌组织,N为正常组织。23对AmpArrayTM引物在肺癌和正常组织扩增结果显示:第8泳道的AP_80481(AY780789)以及第21泳道的AP_80494(AY387856)在肺癌组织的表达量比正常组织高。
                               序列表(SEQUENCE LISTING)
<110>杨淑伟
<120>人类新基因及其编码多肽的用途
<130>
<160>204
<170>PatentIn version 3.3
<210>1
<211>231
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>1
tcctatgaca atggactggc acagggagct ggacttgaat ctcatggagg atcaactttt    60
tgtggcattg cctcactatg tctgatgggt aaactagaag aagttttttc agaaaaagaa   120
ttgaacagga taaagaggtg gtgtataatg aggcaacaaa atggttatca tggaagacct   180
aataagcctg tagacacctg ttattctttt tgggtgggag caactctgaa g            231
<210>2
<211>150
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>2
gagtttgacc ctgagctggt gctggtctcg gcaggatttg actcagccat cggggaccct    60
gaggggcaaa tgcaggccac gccagagtgc ttcgcccacc tcacacagct gctgcaggtg   120
ctggccggcg gccgggtctg tgccgtgctg                                    150
<210>3
<211>111
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>3
ggaatcaagg attttctttt gctttgtggc cggattttgc tactgcttgc tcttcttact    60
ttaattattt ctgtgactac ctcatggctt aactcattta aatctcccca a            111
<210>4
<211>108
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>4
gtggcgatgt tacgggcact gctccaagag gctcgatcct ctcaagcccc cagctcccgc    60
cccatctctg acccctcttc tcttctggca ccaccgcctc tcctaaag                108
<210>5
<211>108
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>5
gtgaccttgg gaaaggtgtt gaaagtgatc gtcgtcatgc ggagctgttt cattgatcga    60
acaatagtaa agggatataa cgagaatgtc tacacagaag atggcaag                108
<210>6
<211>69
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>6
ggtaaatgcg aatgtaagga acagacatta ggaaatgcca aggcattctg tggaatgaaa    60
tattcatat                                                            69
<210>7
<211>30
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>7
gcctccctca gtgaaaaaaa taccactgca                                     30
<210>8
<211>30
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>8
ggcgggccgt caatggacca attgaacccc                                     30
<210>9
<211>24
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>9
gaaatgtctc tcagtaagtg tgcg                                           24
<210>10
<211>24
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>10
accacctccc cggagcctcc caac                                           24
<210>11
<211>294
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>11
ggtgagacac ttctactgag gtgtatggtg gtcggctcct gcactgatgg tatgataaaa    60
tgggtgaagg tgagcactca ggaccaacag gaaatttata actttaaacg tggctccttc   120
cctggggtaa tgcccatgat ccaacggaca tcagaaccac tgaattgtga ttattccatc   180
tatatccaca atgtcaccag ggagcacact ggaacctacc actgtgtgag gtttgatggt   240
ttgagtgaac actcagaaat gaaatcggat gaaggcacct cagtgcttgt gaag         294
<210>12
<211>255
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>12
ggtaaggact caggcagtgc ctggcccctg tcaccacaga gctgtgctgc acctgccggg    60
ctctctgccc agagcccttg gtgcagacac gcaagggact gccatgggcc cagtctcttc   120
tccttcctgc ttctttctgc agcagcagca acagctccca ctgggcaagt tcctggcgtc   180
tgccactact tcgccttcct tccttgcagg cccatgggga agcagccact cttgggagca   240
tgtatctt   ttgta                                                    255
<210>13
<211>285
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>13
gctggcaccc agaggtacat ggcaccagag ctcttggaca agactctgga cctacaggat    60
tggggcatgg ccctccgacg agctgatatt tactctttgg ctctgctcct gtgggagata   120
ctgagccgct gcccagattt gaggcctgac agcagtccac cacccttcca actggcctat   180
gaggcagaac tgggcaatac ccctacctct gatgagctat gggccttggc agtgcaggag   240
aggaggcgtc cctacatccc atccacctgg cgctgctttg ccaca                   285
<210>14
<211>228
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>14
gtggatttat ggtctgtggg gtgcattatg ggagaaatgg tttgccacaa aatcctcttt    60
ccaggaaggg actatattga tcagtggaat aaagttattg aacagcttgg aacaccatgt   120
cctgaattca tgaagaaact gcaaccaaca gtaaggactt acgttgaaaa cagacctaaa   180
tatgctggat atagctttga gaaactcttc cctgatgtcc ttttccca                228
<210>15
<211>189
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>15
atcttgctgg gtcagaaata caaccactct gtggactggt ggtccttcgg ggttctcctt    60
tatgaaatgc tgattggtca gtcgcctttc cacgggcagg atgaggagga gctcttccac   120
tccatccgca tggacaatcc cttttaccca cggtggctgg agaaggaagc aaaggacctt   180
ctggtgaag                                                           189
<210>16
<211>171
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>16
gctttgctgc ctcttgacct gcttctgaaa gtgccacccc atatgctcag ggcccacatt    60
aaggaaatag aggctgagtt agtgacaggg tggcagtccc atagccttcc tgctgtgatt   120
cttcgaaatc tcaaagatca tgggccacag atgggcacat tcttgtggca a            171
<210>17
<211>123
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>17
tttggcatgg attttaaaga aatagaatta attggctcag gtggatttgg ccaagttttc    60
aaagcaaaac acagaattga cggaaagact tacgttatta aacgtgttaa atataataac   120
gag                                                                 123
<210>18
<211>102
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>18
ggtaggggag gatggagagg gcagtggtgc ctgaagccct ggatgggcgg agctgacccc    60
ccaacaccaa ctctctcatg cctgctcctc cctgtccccc ca                      102
<210>19
<211>183
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>19
tgtggggcca cgccctgcag gatgttctct gcggcctccc agcctttgga ccccgatggg    60
accttgttcc ggcttcgctt cacagccatg gtctggtggg ccatcacttt tcctgtgttc   120
ggcttcttct tctgcatcat ctggtccctg gtgttccact ttgagtacac ggtggccact   180
gac                                                                 183
<210>20
<211>162
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>20
gtcagttcaa gtagacaatc tctgcctatc aaggctatac ttaagtcgct tccagtctgg    60
gctatttcca ttggtagttt tacgtttttc tggtcacata acatcatgac actatacact   120
ccaatgttta tcaactccat gcttcatgtt aatataaaag ag                      162
<210>21
<211>93
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>21
attgctttgg attgcccatc tgagctctgc cgattatata cgcaatttca agagccctat    60
ctaaaggatc ctgctgctta tcctaaaatt cag                                 93
<210>22
<211>75
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>22
tactttgctt tcctgctcct gatcctcatt gcccaggtga cggccggggc cctcttctac    60
ttcaacatgg gcaag                                                     75
<210>23
<211>69
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>23
gatccagaag cagcaaggtc tagcaattcc aaaatcacca ccacgctggg tctggttgtc    60
catgctgca                                                            69
<210>24
<211>60
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>24
actccattaa taatatacct ctttcatttc ctaattgact atgctgaatt ggtgtttatg    60
<210>25
<211>48
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>25
gtgagtgtcc ctgtcgtctg gaccctcacc aacctcattc acaacatg                 48
<210>26
<211>21
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>26
gatgtctcct tgctggcatc a                                              21
<210>27
<211>87
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>27
gaaggattga aaggctccct ccagaggctg cagctcgagt atgtggatgt ggtctttgca    60
aatcgaccgg acagtaacac tcccatg                                        87
<210>28
<211>72
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>28
ggagagaacg tcttttttgt ggtcaccaac ctgattgtga cccccaacca gcggcagaac    60
gtctgtgctg ag                                                        72
<210>29
<211>69
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>29
agcaattctg acgacaatat gttgaaaaac attgaactgt ttgataagct gtctctgcgc    60
tttaacgga                                                            69
<210>30
<211>54
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>30
ggaggaggtg gcagaggtgg tggcagaggc ggtggtttta gaggtggaag agga           54
<210>31
<211>2136
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>31
atctttctta ctgtaacagc tgacctgaac tgtaacctgt tctccaaaga gcagagggca     60
tacataacca cactgtgccc tagtatcaga aaaatggaag gtcacgatgg aattgagaag    120
gtgtgtggtg acttccaaga cattgaaaga atacatcaat ttttgagtga gcagttcctg    180
gaaagtgagc agaaacaaca attttcccct tcaatgacag agaggaagcc actcagtcag    240
caggagaggg acagctgcat ttctccttct gaaccagaaa ccaaggcaga acaaaaaagc    300
aactattttg aagttccctt gccttacttt gaatacttta aatatatctg tcctgataaa    360
atcaactcaa tagagaaaag atttggtgta aacattgaaa tccaggagag ttctccaaat    420
atggtctgtt tagatttcac ctcaagtcga tcaggtgacc tggaagcagc tcgtgagtct    480
tttgctagtg aatttcagaa gaacacagaa cctctgaagc aagaatgtgt ctctttagca    540
gacagtaagc aggcaaataa attcaaacag gaattgaatc accagtttac aaagctcctt    600
atctttctta ctgtaacagc tgacctgaac tgtaacctgt tctccaaaga gcagagggca    660
tacataacca cactgtgccc tagtatcaga aaaatggaag gtcacgatgg aattgagaag    720
gtgtgtggtg acttccaaga cattgaaaga atacatcaat ttttgagtga gcagttcctg    780
gaaagtgagc agaaacaaca attttcccct tcaatgacag agaggaagcc actcagtcag    840
caggagaggg acagctgcat ttctccttct gaaccagaaa ccaaggcaga acaaaaaagc    900
aactattttg aagttccctt gccttacttt gaatacttta aatatatctg tcctgataaa    960
atcaactcaa tagagaaaag atttggtgta aacattgaaa tccaggagag ttctccaaat   1020
atggtctgtt tagatttcac ctcaagtcga tcaggtgacc tggaagcagc tcgtgagtct   1080
tttgctagtg aatttcagaa gaacacagaa cctctgaagc aagaatgtgt ctctttagca   1140
gacagtaagc aggcaaataa attcaaacag gaattgaatc accagtttac aaagctcctt   1200
ataaaggaga aaggaggcga attaactctc cttgggaccc aagatgacat ttcagctgcc   1260
aaacaaaaaa tctctgaagc ttttgtcaag atacctgtga aactatttgc tgccaattac   1320
atgatgaatg taattgaggt tgatagtgcc cactataaac ttttagaaac tgaattacta   1580
caggagatat cagagatcga aaaaaggtat gacatttgca gcaaggtttc tgagaaaggt   1440
cagaaaacct gcattctgtt tgaatccaag gacaggcagg tagatctatc tgtgcatgct   1500
tatgcaagtt tcatcgatgc ctttcaacat gcctcatgtc agttgatgag agaagttctt   1560
ttactgaagt ctttgggcaa ggagagaaag cacttacatc agaccaagtt tgctgatgac   1620
tttagaaaaa gacatccaaa tgtacacttt gtgctaaatc aagagtcaat gactttgact   1680
ggtttgccaa atcaccttgc aaaggcgaag cagtatgttc taaaaggagg aggaatgtct   1740
tcattggctg gaaagaaatt gaaagagggt catgaaacac cgatggacat tgatagcgat   1800
gattccaaag cagcttctcc gccactcaag ggctctgtga gttctgaggc ctcagaactg   1860
gacaagaagg aaaagggcat ctgtgtcatc tgtatggaca ccattagtaa caaaaaagtg   1920
ctaccaaagt gcaagcatga attctgcgcc ccttgtatca acaaagccat gtcatataag   1980
ccaatctgtc ccacatgcca gacttcctat ggtattcaga aaggaaatca gccagaggga   2040
agcatggttt tcactgtttc aagagactca cttccaggtt atgagtcctt tggcaccatt   2100
gtgattactt attctatgaa agcaggcata caaaca                             2136
<210>32
<211>588
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>32
aaagcaaggg cggaccatgg tttgattcca gatgtgaagt tagaaaaaac agtcccccgg     60
ctgcaccgtc cgtccctcca gcatttcagg gagcagtttt tggttccagg gaggcccgtg    120
atcctgaaag gcgtggctga ccactggccg tgcatgcaga agtggagttt ggagtatatc    180
caggagatcg ctggctgccg aactgtccca gtggaagttg gttcgaggta cacagatgag    240
gaatggtccc agaccctcat gacggtcaac gagttcatca gcaaatacat cgtgaatgag    300
ccaagggacg tcgggtacct tgctcagcac cagctctttg accagatccc ggagttgaag    360
caggacatca gcatccccga ctactgcagc ctgggcgatg gggaggagga ggaaatcacc    420
atcaatgcct ggtttggtcc ccagggaacc atctccccac tacatcagga tccccagcaa    480
aacttcctag tgcaggtgat ggggaggaag tacatccggc tgtattcccc gcaggagtca    540
ggggctctgt accctcatga cacgcacctt ctccataaca cgagccag                 588
<210>33
<211>393
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>33
tattctcaaa tgagggatga agtgttcaag tcaaacttgg tctgtgcatt tatcgttctt     60
ctatttatca cggcaataca aagtttgctt ccttcttcaa gagtgatgcc aatgaccatc    120
cagttctcca ttctgattat gctgcactcg gctctggtcc tcatcaccac agcagaggat    180
tataaatgtt tgcccctcat cctccggaaa acttgctgtt ggattaatga gacctatttg    240
gcccggaacg tcatcatctt tgcatccatt ttgattaatt tcctgggtgc catcttaaat    300
atcctgtggt gtgattttga caagtcgata cccttgaaga acctgacttt caattcctca    360
gctgtgttta cagatatctg ctcctaccca gag                                 393
<210>34
<211>279
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>34
ctgcagcggc tgtacagcat ggacctgcgg agctcccaca aggccaaggg caaggagaag     60
ctctgcttct ccctgacgtg cccactcggc agcgggagcc ctgagggggt ggtcaaggcg    120
ggggcacctg agctggtgga caagggcccc ttggtgccca ccctgccctt cccgctccgc    180
aagccccgaa aggcccacaa gtacctgcgg ctctcgcgca agaagttccc gccccgcggg    240
cccaacctgg agagccacag ccatcgacgg gagctcttc                           279
<210>35
<211>237
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>35
gtgcgggcca gccccgcagg gcagctgccc agccgcttcc accagtacca gcagcaccgg     60
ccgagtctgg agggcggccg gagccccgcg accggcccga gcggagcgca ggaggtcccg    120
ggcccggccg ccgccttggc cccgagtcct gcagccgcag ccggcacgga gggagccagc    180
cccgaccttg ccccgctgcg gcccgcggct cccggccaaa cccccctcag gaaagag       237
<210>36
<211>213
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>36
gcagacaccg tggagatggt gagtgaagtt gagccacctg cccctcaagt tggtgccagg     60
tccagtccga agcagcctct ggcggagggg ctactgactg ctctacagcc cttcctgtct    120
gaggccctgg tcagccaagt cggggcctgc taccagttca atgtcgtcct gcccagcggc    180
acccaaagcg cctacttcct ggacctcact aca                                 213
<210>37
<211>204
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>37
tcccctgcag agcaaaaaaa cttgtcggat tcgggagagg agcctcgggg ggaggctgag     60
gccccccacc atggcacggg tcaccccgag tcagctggcg agcatgccct agaacctcct    120
gcccctgctg gcgcctcagc cagcactcct ccgcctcccg ctcctgaagc ccagcttcct    180
ccttttccgc gagaactggc aggg                                           204
<210>38
<211>192
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>38
caggagtgga agagactagg agtcgagcag ctgcggctca gcacagtaga catgactggg     60
atccccacct tggacaacct ccagaaggga gtccaatttg ctctcaagta ccagtcgctg    120
ggccagtgtg tttacgtgca ttgtaaggct gggcgctcca ggagtgccac tatggtggca    180
gcatacctga tt                                                        192
<210>39
<211>180
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>39
aggaacctca tcctcaagct ggccatcctg gggacactgt gctaccactg gctgggccgc     60
agggtgggcg tcctgcaggg ccagtgctgg gaggattttg tgggccagga gctgtaccgg    120
ttcctggtga tggacttcgt cctcatgttg ctggacacgc tttttgggga actggtgtgg    180
<210>40
<211>171
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>40
ttcttgtcat ttgaaatgct gacggagctg gtccacagag gcagcgtgta cgacgcccgg     60
gaattctcag tgcactttgt atgtggtggc ctggctgcct gtatggccac cctcactgtg    120
caccccgtgg atgttctgcg cacccgcttt gcagctcagg gtgagcccaa g             171
<210>41
<211>129
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>41
ggtccatgtc acaaacggcg ggcaagcatc tgctgtaccc agctggggtc cctgtcggcc     60
ctgaagcatg ctgtcctggg gctctacctg ctggtcttcc tgattcttgt gggcatcttc    120
atcttagca                                                            129
<210>42
<211>123
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>42
tcgatgtgca gtggggataa agcccctcct ccgcccactc agaaaggggg gaccatttcc    60
tgctacagat gtggtcgctg gaatctctgg gaggcgtcct tctgcggctg gtgtggagcc   120
atg                                                                 123
<210>43
<211>114
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>43
ggtagtcttg aagaagtctt tcttctgcaa aatatccttg tctcatgtca cagaacaacc    60
ctgcatgtct tgaaatgcat gtacttgtta gtgcttaata acaatacatg cgca         114
<210>44
<211>111
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>44
gggttctgca cggcaaaagg gggcctggtg agctccatct tgcacccccg gcccatcaac    60
ttcaagttct ataaacacag catgaagttt gtggctgccc tctctgtcct g            111
<210>45
<211>105
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>45
cagctgccca cactgcccct agtcatggtg gcaccctccg gggcacggct gggccccttg    60
ccccacttac aggcactcct ccaggacagg ccacatttca tgcac                   105
<210>46
<211>96
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>46
gcttcctact atgagatttc agttgatgat ggtccatggg aaaaacagaa gagttcaggg    60
ctcaatttgt gtactggaac aggatcaaag gcctgg                              96
<210>47
<211>93
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>47
ggattcatga ataaaatttt ccatcccaac attgatgaag cgtcaggaac tgtgtgtcta    60
gatgtaatta atcaaacttg gacagctctc tat                                 93
<210>48
<211>90
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>48
gaattttcag tgccctggca cctcattgca gtgactcttg ggatcctctg tttacttctt    60
ctgatgatag tcacagtgtt ggtgacaaat                                     90
<210>49
<211>90
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>49
cgcccgggcg ggccgggggc cgtggcggag gaggagcgct gcacggtgga gcgtcgggcc    60
gacctcacct acgcggagtt cgtgcagcag                                     90
<210>50
<211>75
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>50
ggcttcctgt gcttctccct ggcgttctgy gcacaggtgc aggtggtgtt ctggagactc    60
cacagcccca cccag                                                     75
<210>51
<211>72
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>51
gcagaggcag atcgtcttga tgtcctcgaa aagtacagag ggaagtgcga gccaaccttt    60
ctgttttatg ca                                                        72
<210>52
<211>69
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>52
aggttcatgt ctgtaagcat cctgttgatg ggcatcgtgg gaccaattac tgctggaatc    60
ttgacaagt                                                            69
<210>53
<211>66
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>53
ctcaaactct ccaaggtggt ggtggttggc gatctctacg tggggaagac cagcctcatc    60
cacagg                                                               66
<210>54
<211>60
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>54
gtcatcactt caggcatcgc agccatcgtg ttgtcacgct acctccctag cacccccctg    60
<210>55
<211>48
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>55
agatcatata ctcctatgaa aggaggaatc tccaatgtat  ggtttgac                48
<210>56
<211>36
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>56
cagaagtatt gggaggccct aaactcggag cagtgg                              36
<210>57
<211>36
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>57
gggccaatac tgtgcatggc acccgcttca aatatt                              36
<210>58
<211>33
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>58
caggtgcctg gacactctga tgaccacaga ttc                                 33
<210>59
<211>27
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>59
gaagagcaac cgaggtttca atctgcg                                        27
<210>60
<211>24
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>60
gcccttgcct tttctcttgc agca                                           24
<210>61
<211>21
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>61
ggatgtggct ctagccgctg t                                              21
<210>62
<211>18
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>62
ggtagtgca ggcgacac                                                   18
<210>63
<211>15
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>63
agtgcatact ctggg                                                     15
<210>64
<211>15
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>64
gtgacaggtc tggac                                                     15
<210>65
<211>96
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>65
ggccaccctc cagggcccac taaaaaagcg ctgaagcagc gattcctcaa gctgctgccg    60
tgctgcgggc cccaagccct gccctcagtc agtgaa                              96
<210>66
<211>81
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>66
gatcctctgc tgggtacctg catgtcctgc aaaaccattt gcaaccatca gagccagcgc    60
acctgtgcag ccttctgcag g                                              81
<210>67
<211>144
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>67
caggtggagg ctctgccggg cccctcgctg gaccagtggc accgatcagc tggggaggaa    60
gaggatggcc cagtcctgac ggatgagcag aagtcccgaa tccaggccat gaagcccatg   120
accaaggagg agtgggatgc ccgg                                          144
<210>68
<211>87
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>68
caggtgaatg gtgtgacagc agactggcac actccactgt ttaatgcttg tgtcagcggc    60
agctgggatt gtgtgaattt gcttctg                                        87
<210>69
<211>48
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>69
gggctgcagc tgtccacaga tgcactcagc ctggcctcta ccccaggg                 48
<210>70
<211>69
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>70
gtaagagccg atccgctcgc ggcctccact gccaacctca gccttttact gcagcacccg    60
ccgctgccc                                                            69
<210>71
<211>27
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>71
aatttatatg acctggatga agatgat                                        27
<210>72
<211>30
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>72
gaggcccaga gggcgtggtg ggttcttgag                                     30
<210>73
<211>15
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>73
tccttcctgc  ccttt                                                    15
<210>74
<211>42
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>74
agtgcatata acgagcctct aaccccttct tctaatacca gc                       42
<210>75
<211>99
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>75
gtcttgcagg ggctcttggt gaaatggagg aaccatgaca aaggcaagtc caaggtggag    60
cagtattctc acagctctaa gtggactccc acaggtgca                           99
<210>76
<211>15
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>76
ctggagagga gctgg                                                     15
<210>77
<211>99
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>77
tcaggctgtc accccggggg cgccagagca ggtccctccc cagcctcttc ctcccccgcc    60
ccagggggcg gccgtagcct cagcgcgggc tcacagacc                           99
<210>78
<211>84
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>78
tgtttagaat ctccagtggg gaagaggaaa agaagcatga ctgttagtac ttctcaggac    60
ccatctttct caggattaaa ccag                                           84
<210>79
<211>60
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>79
aggcctagaa gaacatggtt gcaggtctct agtttatgct gtatggcctg caagatgatc    60
<210>80
<211>33
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>80
aaaaggaagt ccagttcgag tgttcagatg atg                                 33
<210>81
<211>96
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>81
ggcgagtcag gaccgctgtg ggggaaggcc aggccctcgg gatggtttga ggagctgggg    60
gcggagccct tggagattca cggcaccctc gccaca                              96
<210>82
<211>96
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>82
gggcattatg ggaaggatgc ttaccgaagt ggaggacctg atctccataa cttcatctca    60
tctggatttg tcacattagg aagaggacac accaag                              96
<210>83
<211>78
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>83
gtgaggccac aagacagggc gggggcggca tgggaactcc tagccctgac tcccggccgc    60
ggctgctccc ctcccagg                                                  78
<210>84
<211>72
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>84
tccggtccag tcctctgcag taggacctgg tatagacagt ccatggacag gggcgtcatg    60
atgactgctg ct                                                        72
<210>85
<211>69
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>85
gattttggct atggaaaggg gaaatgttct aagcagagcc cgtcaggagc ccacgggaca    60
cattttgga                                                            69
<210>86
<211>69
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>86
ctcggcttgc ccttcccctg cttgtgccgt gtaccctgta acactgtgtt tggatcccag    60
catcagatg                                                            69
<210>87
<211>57
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>87
gtctggaggc cggcctggga acaggggccg aagggcgagc cggaccctag gggattg       57
<210>88
<211>54
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>88
tggcaaatcg aggcacagag agggagggcg acttgcccca ggtcacacag ctgg          54
<210>89
<211>54
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>89
gtgagcaaat gccagggcaa tgccagggcc aggctgaggc tgtggggtgt ctgg    54
<210>90
<211>51
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>90
ctaaatcaac aggagactga tgctgctcat accttgaaga agcaactggc a       51
<210>91
<211>45
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>91
gttgttgcca ccttgctctc cactctcctg tcccttatct cagta              45
<210>92
<211>39
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>92
ggaactggcg cggtgggcgg cggcggaact agccaggcc                     39
<210>93
<211>36
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>93
atgtctcagc tgctctacaa gggagtccca tttcag                        36
<210>94
<211>36
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>94
gttcagaggt atatgtgcag gtttgttata caggcg                        36
<210>95
<211>30
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>95
aaagccaggg gatccagaaa aaacaaagat                               30
<210>96
<211>21
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>96
ggttttcttc ttgatccttc a                                              21
<210>97
<211>15
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>97
gcagcaaatt tttat                                                     15
<210>98
<211>42
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>98
aactcacatt ctcaggctat caatgttgac aggattgctt ta                       42
<210>99
<211>15
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>99
gctccctatc  ttaca                                                    15
<210>100
<211>102
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>100
ggaggctcca aggggggctg tggctccagc tgctgtgtgc ccgtctgctg ctcctccagc    60
tgtggctcct gtgggggttc caagggggtc tgtggatttc gt                      102
<210>101
<211>114
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>101
aggcacaagc tcctgaagct cagtgtcctc ctgcccctca tcttcaccat attgctgctg    60
cttttggtgg ccgcctcact cttggcttgg aggatgatga agtaccagca gaaa         114
<210>102
<211>12
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>102
gcagtgccac ca                                                        12
<210>103
<211>77
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>103
Ser Tyr Asp Asn Gly Leu Ala Gln Gly Ala Gly Leu Glu Ser His Gly
1               5                   10                  15
Gly Ser Thr Phe Cys Gly Ile Ala Ser Leu Cys Leu Met Gly Lys Leu
            20                  25                  30
Glu Glu Val Phe Ser Glu Lys Glu Leu Asn Arg Ile Lys Arg Trp Cys
        35                  40                  45
Ile Met Arg Gln Gln Asn Gly Tyr His Gly Arg Pro Ash Lys Pro Val
    50                  55                  60
Asp Thr Cys Tyr Ser Phe Trp Val Gly Ala Thr Leu Lys
65                  70                  75
<210>104
<211>50
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>104
Glu Phe Asp Pro Glu Leu Val Leu Val Ser Ala Gly Phe Asp Ser Ala
1               5                   10                  15
Ile Gly Asp Pro Glu Gly Gln Met Gln Ala Thr Pro Glu Cys Phe Ala
            20                  25                  30
His Leu Thr Gln Leu Leu Gln Val Leu Ala Gly Gly Arg Val Cys Ala
        35                  40                  45
Val Leu
    50
<210>105
<211>37
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>105
Gly Ile Lys Asp Phe Leu Leu Leu Cys Gly Arg Ile Leu Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
Ala Leu Leu Thr Leu Ile Ile Ser Val Thr Thr Ser Trp Leu Asn Ser
            20                  25                  30
Phe Lys Ser Pro GIn
        35
<210>106
<211>36
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>106
Val Ala Met Leu Arg Ala Leu Leu Gln Glu Ala Arg Ser Ser Gln Ala
1               5                   10                  15
Pro Ser Ser Arg Pro Ile Ser Asp Pro Ser Ser Leu Leu Ala Pro Pro
            20                  25                  30
Pro Leu Leu Lys
        35
<210>107
<211>36
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>107
Val Thr Leu Gly Lys Val Leu Lys Val Ile Val Val Met Arg Ser Cys
1               5                   10                  15
Phe Ile Asp Arg Thr Ile Val Lys Gly Tyr Asn Glu Asn Val Tyr Thr
            20                  25                  30
Glu Asp Gly Lys
        35
<210>108
<211>23
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>108
Gly Lys Cys Glu Cys Lys Glu Gln Thr Leu Gly Asn Ala Lys Ala Phe
1               5                   10                  15
Cys Gly Met Lys Tyr Ser Tyr
            20
<210>109
<211>10
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>109
Ala Ser Leu Ser Glu Lys Asn Thr Thr Ala
1               5                   10
<210>110
<211>10
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>110
Gly Gly Pro Ser Met Asp Gln Leu Asn Pro
1               5                   10
<210>111
<211>8
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>111
Glu Met Ser Leu Ser Lys Cys Ala
1               5
<210>112
<211>8
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>112
Thr Thr Ser Pro Glu Pro Pro Asn
1               5
<210>113
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>113
Gly Glu Thr Leu Leu Leu Arg Cys Met Val Val Gly Ser Cys Thr Asp
1               5                   10                  15
Gly Met Ile Lys Trp Val Lys Val Ser Thr Gln Asp Gln Gln Glu Ile
            20                  25                  30
Tyr Asn Phe Lys Arg Gly Ser Phe Pro Gly Val Met Pro Met Ile Gln
        35                  40                  45
Arg Thr Ser Glu Pro Leu Asn Cys Asp Tyr Ser Ile Tyr Ile His Asn
    50                  55                  60
Val Thr Arg Glu His Thr Gly Thr Tyr His Cys Val Arg Phe Asp Gly
65                  70                  75                  80
Leu Ser Glu His Ser Glu Met Lys Ser Asp Glu Gly Thr Ser Val Leu
                85                  90                  95
Val Lys
<210>114
<211>85
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>114
Gly Lys Asp Ser Gly Ser Ala Trp Pro Leu Ser Pro Gln Ser Cys Ala
1               5                   10                  15
Ala Pro Ala Gly Leu Ser AIa Gln Ser Pro Trp Cys Arg His Ala Arg
            20                  25                  30
Asp Cys His Gly Pro Ser Leu Phe Ser Phe Leu Leu Leu Ser Ala Ala
        35                  40                  45
Ala Ala Thr Ala Pro Thr Gly Gln Val Pro Gly Val Cys His Tyr Phe
    50                  55                  60
Ala Phe Leu Pro Cys Arg Pro Met Gly Lys Gln Pro Leu Leu Gly Ala
65                  70                  75                  80
Phe Val Ser Phe Val
                85
<210>115
<211>95
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>115
Ala Gly Thr Gln Arg Tyr Met Ala Pro Glu Leu Leu Asp Lys Thr Leu
1               5                   l0                  15
Asp Leu Gln Asp Trp Gly Met Ala Leu Arg Arg Ala Asp Ile Tyr Ser
            20                  25                  30
Leu Ala Leu Leu Leu Trp Glu Ile Leu Ser Arg Cys Pro Asp Leu Arg
        35                  40                  45
Pro Asp Ser Ser Pro Pro Pro Phe Gln Leu Ala Tyr Glu Ala Glu Leu
    50                  55                  60
Gly Asn Thr Pro Thr Ser Asp Glu Leu Trp Ala Leu Ala Val Gln Glu
65                  70                  75                  80
Arg Arg Arg Pro Tyr Ile Pro Ser Thr Trp Arg Cys Phe Ala Thr
                85                  90                  95
<210>116
<211>76
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>116
Val Asp Leu Trp Ser Val Gly Cys lle Met Gly Glu Met Val Cys His
1               5                   10                  15
Lys Ile Leu Phe Pro Gly Arg Asp Tyr Ile Asp Gln Trp Asn Lys Val
            20                  25                  30
Ile Glu Gln Leu Gly Thr Pro Cys Pro Glu Phe Met Lys Lys Leu Gln
        35                  40                  45
Pro Thr Val Arg Thr Tyr Val Glu Asn Arg Pro Lys Tyr Ala Gly Tyr
    50                  55                  60
Ser Phe Glu Lys Leu Phe Pro Asp Val Leu Phe Pro
65                  70                  75
<210>117
<211>63
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>117
Ile Leu Leu Gly Gln Lys Tyr Asn His Ser Val Asp Trp Trp Ser Phe
1               5                   10                  15
Gly Val Leu Leu Tyr Glu Met Leu Ile Gly Gln Ser Pro Phe His Gly
            20                  25                  30
Gln Asp Glu Glu Glu Leu Phe His Ser Ile Arg Met Asp Asn Pro Phe
        35                  40                  45
Tyr Pro Arg Trp Leu Glu Lys Glu Ala Lys Asp Leu Leu Val Lys
    50                  55                  60
<210>118
<211>57
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>118
Ala Leu Leu Pro Leu Asp Leu Leu Leu Lys Val Pro Pro His Met Leu
1               5                   10                  15
Arg Ala His Ile Lys Glu Ile Glu Ala Glu Leu Val Thr Gly Trp Gln
            20                  25                  30
Ser His Ser Leu Pro Ala Val Ile Leu Arg Asn Leu Lys Asp His Gly
        35                  40                  45
Pro Gln Met Gly Thr Phe Leu Trp Gln
    50                  55
<210>119
<211>41
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>119
Phe Gly Met Asp Phe Lys Glu Ile Glu Leu Ile Gly Ser Gly Gly Phe
1               5                   10                  15
Gly Gln Val Phe Lys Ala Lys His Arg Ile Asp Gly Lys Thr Tyr Val
            20                  25                  30
Ile Lys Arg Val Lys Tyr Asn Asn Glu
        35                  40
<210>120
<211>34
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>120
Gly Arg Gly Gly Trp Arg Gly Gln Trp Cys Leu Lys Pro Trp Met Gly
1               5                   10                  15
Gly Ala Asp Pro Pro Thr Pro Thr Leu Ser Cys Leu Leu Leu Pro Val
            20                  25                  30
Pro Pro
<210>121
<211>61
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>121
Cys Gly Ala Thr Pro Cys Arg Met Phe Ser Ala Ala Ser Gln Pro Leu
1               5                   10                  15
Asp Pro Asp Gly Thr Leu Phe Arg Leu Arg Phe Thr Ala Met Val Trp
            20                  25                  30
Trp Ala Ile Thr Phe Pro Val Phe Gly Phe Phe Phe Cys Ile Ile Trp
        35                  40                  45
Ser Leu Val Phe His Phe Glu Tyr Thr Val Ala Thr Asp
    50                  55                  60
<210>122
<211>54
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>122
Val Ser Ser Ser Arg Gln Ser Leu Pro Ile Lys Ala Ile Leu Lys Ser
1               5                   10                  15
Leu Pro Val Trp Ala Ile Ser Ile Gly Ser Phe Thr Phe Phe Trp Ser
            20                  25                  30
His Asn Ile Met Thr Leu Tyr Thr Pro Met Phe Ile Asn Ser Met Leu
        35                  40                  45
His Val Asn Ile Lys Glu
    50
<210>123
<211>3l
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>123
Ile Ala Leu Asp Cys Pro Ser Glu Leu Cys Arg Leu Tyr Thr Gln Phe
1               5                   10                  15
Gln Glu Pro Tyr Leu Lys Asp Pro Ala Ala Tyr Pro Lys Ile Gln
            20                  25                  30
<210>124
<211>25
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>124
Tyr Phe Ala Phe Leu Leu Leu Ile Leu Ile Ala Gln Val Thr Ala Gly
1               5                   10                  15
Ala Leu Phe Tyr Phe Asn Met Gly Lys
            20                  25
<210>125
<211>23
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>125
Asp Pro Glu Ala Ala Arg Ser Ser Asn Ser Lys Ile Thr Thr Thr Leu
1               5                   10                  15
Gly Leu Val Val Hi s Ala Ala
            20
<210>126
<211>20
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>126
Thr Pro Leu Ile Ile Tyr Leu Phe His Phe Leu Ile Asp Tyr Ala Glu
1               5                   10                  15
Leu Val Phe Met
            20
<210>127
<211>16
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>127
Val Ser Val Pro Val Val Trp Thr Leu Thr Asn Leu Ile His Asn Met
1               5                    10                 15
<210>128
<211>7
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>128
Asp Val Ser Leu Leu Ala Ser
1               5
<210>129
<211>29
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>129
Glu Gly Leu Lys Gly Ser Leu Gln Arg Leu Gln Leu Glu Tyr Val Asp
1               5                   10                  15
Val Val Phe Ala Asn Arg Pro Asp Ser Asn Thr Pro Met
            20                  25
<210>130
<211>24
<212>PRT
<213>人(H0mo sapiens)
<400>130
Gly Glu Asn Val Phe Phe Val Val Thr Asn Leu Ile Val Thr Pro Asn
1               5                   10                  15
Gln Arg Gln Asn Val Cys Ala Glu
            20
<210>131
<211>23
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>131
Ser Asn Ser Asp Asp Asn Met Leu Lys Asn Ile Glu Leu Phe Asp Lys
1               5                   10                  15
Leu Ser Leu Arg Phe Asn Gly
            20
<210>132
<211>18
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>132
Gly Gly Gly Gly Arg Gly Gly Gly Arg Gly Gly Gly Phe Arg Gly Gly
1               5                   10                  15
Arg Gly
<210>133
<211>512
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>133
Ile Phe Leu Thr Val Thr Ala Asp Leu Asn Cys Asn Leu Phe Ser Lys
1               5                   10                  15
Glu Gln Arg Ala Tyr Ile Thr Thr Leu Cys Pro Ser Ile Arg Lys Met
            20                  25                  30
Glu Gly His Asp Gly Ile Glu Lys Val Cys Gly Asp Phe Gln Asp Ile
        35                  40                  45
Glu Arg Ile His Gln Phe Leu Ser Glu Gln Phe Leu Glu Ser Glu Gln
    50                  55                  60
Lys Gln Gln Phe Ser Pro Ser Met Thr Glu Arg Lys Pro Leu Ser Gln
65                  70                  75                  80
Gln Glu Arg Asp Ser Cys Ile Ser Pro Ser Glu Pro Glu Thr Lys Ala
                85                  90                  95
Glu Gln Lys Ser Asn Tyr Phe Glu Val Pro Leu Pro Tyr Phe Glu Tyr
            100                 105                 110
Phe Lys Tyr Ile Cys Pro Asp Lys Ile ASn Ser Ile Glu Lys Arg Phe
        115                 120                 125
Gly Val Asn Ile Glu Ile Gln Glu Ser Ser Pro Asn Met Val Cys Leu
    130                 135                 140
Asp Phe Thr Ser Ser Arg Ser Gly Asp Leu Glu Ala Ala Arg Glu Ser
145                 150                 155                 160
Phe Ala Ser Glu Phe Gln Lys Asn Thr Glu Pro Leu Lys Gln Glu Cys
                165                 170                 175
Val Ser Leu Ala Asp Ser Lys Gln Ala Asn Lys Phe Lys Gln Glu Leu
            180                 185                 190
Asn His Gln Phe Thr Lys Leu Leu Ile Lys Glu Lys Gly Gly Glu Leu
        195                 200                 205
Thr Leu Leu Gly Thr Gln Asp Asp Ile Ser Ala Ala Lys Gln Lys Ile
    210                 215                 220
Ser Glu Ala Phe Val Lys Ile Pro Val Lys Leu Phe Ala Ala Asn Tyr
225                 230                 235                 240
Met Met Asn Val Ile Glu Val Asp Ser Ala His Tyr Lys Leu Leu Glu
                245                 250                 255
Thr Glu Leu Leu Gln Glu Ile Ser Glu Ile Glu Lys Arg Tyr Asp Ile
            260                 265                 270
Cys Ser Lys Val Ser Glu Lys Gly Gln Lys Thr Cys Ile Leu Phe Glu
        275                 280                 285
Ser Lys Asp Arg Gln Val Asp Leu Ser Val His Ala Tyr Ala Ser Phe
    290                 295                 300
Ile Asp Ala Phe Gln His Ala Ser Cys Gln Leu Met Arg Glu Val Leu
305                 310                 315                 320
Leu Leu Lys Ser Leu Gly Lys Glu Arg Lys His Leu His Gln Thr Lys
                325                 330                 335
Phe Ala Asp Asp Phe Arg Lys Arg His Pro Asn Val His Phe Val Leu
            340                 345                 350
Asn Gln Glu Ser Met Thr Leu Thr Gly Leu Pro Asn His Leu Ala Lys
        355                 360                 365
Ala Lys Gln Tyr Val Leu Lys Gly Gly Gly Met Ser Ser Leu Ala Gly
    370                 375                 380
Lys Lys Leu Lys Glu Gly His Glu Thr Pro Met Asp Ile Asp Ser Asp
385                 390                 395                 400
Asp Ser Lys Ala Ala Ser Pro Pro Leu Lys Gly Ser Val Ser Ser Glu
                405                 410                 415
Ala Ser Glu Leu Asp Lys Lys Glu Lys Gly Ile Cys Val Ile Cys Met
            420                 425                 430
Asp Thr Ile Ser Asn Lys Lys Val Leu Pro Lys Cys Lys His Glu Phe
        435                 440                 445
Cys Ala Pro Cys Ile Asn Lys Ala Met Ser Tyr Lys Pro Ile Cys Pro
    450                 455                 460
Thr Cys Gln Thr Ser Tyr Gly Ile Gln Lys Gly Asn Gln Pro Glu Gly
465                 470                 475                 480
Val Phe Thr Val Ser Arg Asp Ser Leu Pro Gly Tyr Glu Ser
                485                 490                 495
Phe Gly Thr Ile Val Ile Thr Tyr Ser Met Lys Ala Gly Ile Gln Thr
            500                 505                 510
<210>134
<211>196
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>134
Lys Ala Arg Ala Asp His Gly Leu Ile Pro Asp Val Lys Leu Glu Lys
1               5                   10                  15
Thr Val Pro Arg Leu His Arg Pro Ser Leu Gln His Phe Arg Glu Gln
            20                  25                  30
Phe Leu Val Pro Gly Arg Pro Val Ile Leu Lys Gly Val Ala Asp His
        35                  40                  45
Trp Pro Cys Met Gln Lys Trp Ser Leu Glu Tyr Ile Gln Glu Ile Ala
    50                  55                  60
Gly Cys Arg Thr Val Pro Val Glu Val Gly Ser Arg Tyr Thr Asp Glu
65                  70                  75                  80
Glu Trp Ser Gln Thr Leu Met Thr Val Asn Glu Phe Ile Ser Lys Tyr
                85                  90                  95
Ile Val Asn Glu Pro Arg Asp Val Gly Tyr Leu Ala Gln His Gln Leu
            100                 105                 110
Phe Asp Gln Ile Pro Glu Leu Lys Gln Asp Ile Ser Ile Pro Asp Tyr
        115                 120                 125
Cys Ser Leu Gly Asp Gly Glu Glu Glu Glu Ile Thr Ile Asn Ala Trp
    130                 135                 140
Phe Gly Pro Gln Gly Thr Ile Ser Pro Leu His Gln Asp Pro Gln Gln
145                 150                 155                 160
Asn Phe Leu Val Gln Val Met Gly Arg Lys Tyr Ile Arg Leu Tyr Ser
                165                 170                 175
Pro Gln Glu Ser Gly Ala Leu Tyr Pro His Asp Thr His Leu Leu His
            180                 185                 190
Asn Thr Ser Gln
        195
<210>135
<211>131
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>135
Tyr Ser Gln Met Arg Asp Glu Val Phe Lys Ser Asn Leu Val Cys Ala
1               5                   10                  15
Phe Ile Val Leu Leu Phe Ile Thr Ala Ile Gln Ser Leu Leu Pro Ser
            20                  25                  30
Ser Arg Val Met Pro Met Thr Ile Gln Phe Ser Ile Leu Ile Met Leu
        35                  40                  45
His Ser Ala Leu Val Leu Ile Thr Thr Ala Glu Asp Tyr Lys Cys Leu
    50                  55                  60
Pro Leu Ile Leu Arg Lys Thr Cys Cys Trp Ile Asn Glu Thr Tyr Leu
65                  70                  75                  80
Ala Arg Asn Val Ile Ile Phe Ala Ser Ile Leu Ile Asn Phe Leu Gly
                85                  90                  95
Ala Ile Leu Asn Ile Leu Trp Cys Asp Phe Asp Lys Ser Ile Pro Leu
            100                 105                 110
Lys Asn Leu Thr Phe Asn Ser Ser Ala Val Phe Thr Asp Ile Cys Ser
        115                 120                 125
Tyr Pro Glu
    130
<210>136
<211>93
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>136
Leu Gln Arg Leu Tyr Ser Met Asp Leu Arg Ser Ser His Lys Ala Lys
1               5                   10                  15
Gly Lys Glu Lys Leu Cys Phe Ser Leu Thr Cys Pro Leu Gly Ser Gly
            20                  25                  30
Ser Pro Glu Gly Val Val Lys Ala Gly Ala Pro Glu Leu Val Asp Lys
        35                  40                  45
Gly Pro Leu Val Pro Thr Leu Pro Phe Pro Leu Arg Lys Pro Arg Lys
    50                  55                  60
Ala His Lys Tyr Leu Arg Leu Ser Arg Lys Lys Phe Pro Pro Arg Gly
65                  70                  75                  80
Pro Asn Leu Glu Ser His Ser His Arg Arg Glu Leu Phe
                85                  90
<210>137
<211>79
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>137
Val Arg Ala Ser Pro Ala Gly Gln Leu Pro Ser Arg Phe His Gln Tyr
1               5                   10                  15
Gln Gln His Arg Pro Ser Leu Glu Gly Gly Arg Ser Pro Ala Thr Gly
            20                  25                  30
Pro Ser Gly Ala Gln Glu Val Pro Gly Pro Ala Ala Ala Leu Ala Pro
        35                  40                  45
Ser Pro Ala Ala Ala Ala Gly Thr Glu Gly Ala Ser Pro Asp Leu Ala
    50                  55                  60
Pro Leu Arg Pro Ala Ala Pro Gly Gln Thr Pro Leu Arg Lys Glu
65                  70                  75
<210>138
<211>71
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>138
Ala Asp Thr Val Glu Met Val Ser Glu Val Glu Pro Pro Ala Pro Gln
1               5                   10                  15
Val Gly Ala Arg Ser Ser Pro Lys Gln Pro Leu Ala Glu Gly Leu Leu
            20                  25                  30
Thr Ala Leu Gln Pro Phe Leu Ser Glu Ala Leu Val Ser Gln Val Gly
        35                  40                  45
Ala Cys Tyr Gln Phe Asn Val Val Leu Pro Ser Gly Thr Gln Ser Ala
    50                  55                  60
Tyr Phe Leu Asp Leu Thr Thr
65                  70
<210>139
<211>68
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>139
Ser Pro Ala Glu Gln Lys Asn Leu Ser Asp Ser Gly Glu Glu Pro Arg
1               5                   10                  15
Gly Glu Ala Glu Ala Pro His His Gly Thr Gly His Pro Glu Ser Ala
            20                  25                  30
Gly Glu His Ala Leu Glu Pro Pro Ala Pro Ala Gly Ala Ser Ala Ser
        35                  40                  45
Thr Pro Pro Pro Pro Ala Pro Glu Ala Gln Leu Pro Pro Phe Pro Arg
    50                  55                  60
Glu Leu Ala Gly
65
<210>140
<211>64
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>140
Gln Glu Trp Lys Arg Leu Gly Val Glu Gln Leu Arg Leu Ser Thr Val
1               5                   10                  15
Asp Met Thr Gly Ile Pro Thr Leu Asp Asn Leu Gln Lys Gly Val Gln
            20                  25                  30
Phe Ala Leu Lys Tyr Gln Ser Leu Gly Gln Cys Val Tyr Val His Cys
        35                  40                  45
Lys Ala Gly Arg Ser Arg Ser Ala Thr Met Val Ala Ala Tyr Leu Ile
    50                  55                  60
<210>141
<211>60
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>141
Arg Asn Leu Ile Leu Lys Leu Ala Ile Leu Gly Thr Leu Cys Tyr His
1               5                   10                  15
Trp Leu Gly Arg Arg Val Gly Val Leu Gln Gly Gln Cys Trp Glu Asp
            20                  25                  30
Phe Val Gly Gln Glu Leu Tyr Arg Phe Leu Val Met Asp Phe Val Leu
        35                  40                  45
Met Leu Leu Asp Thr Leu Phe Gly Glu Leu Val Trp
    50                  55              60
<210>142
<211>57
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>142
Phe Leu Ser Phe Glu Met Leu Thr Glu Leu Val His Arg Gly Ser Val
1               5                   10                  15
Tyr Asp Ala Arg Glu Phe Ser Val His Phe ValCys Gly Gly Leu Ala
            20                  25                 30
Ala Cys Met Ala Thr Leu Thr Val His Pro Val Asp Val Leu Arg Thr
        35                  40                  45
Arg Phe Ala Ala Gln Gly Glu Pro Lys
    50                  55
<210>143
<211>43
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>143
Gly Pro Cys His Lys Arg Arg Ala Ser Ile Cys Cys Thr Gln Leu Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Ser Ala Leu Lys His Ala Val Leu Gly Leu Tyr Leu Leu Val
            20                  25                  30
Phe Leu Ile Leu Val Gly Ile Phe Ile Leu Ala
        35                  40
<210>144
<211>41
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>144
Ser Met Cys Ser Gly Asp Lys Ala Pro Pro Pro Pro Thr Gln Lys Gly
1               5                   10                  15
Gly Thr Ile Ser Cys Tyr Arg Cys Gly Arg Trp Asn Leu Trp Glu Ala
            20                  25                  30
Ser Phe Cys Gly Trp Cys Gly Ala Met
        35                  40
<210>145
<211>38
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>145
Gly Ser Leu Glu Glu Val Phe Leu Leu Gln Asn Ile Leu Val Ser Cys
1               5                   10                  15
His Arg Thr Thr Leu His Val Leu Lys Cys Met Tyr Leu Leu Val Leu
            20                  25                  30
Asn Asn Asn Thr Cys Ala
        35
<210>146
<211>37
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>146
Gly Phe Cys Thr Ala Lys Gly Gly Leu Val Ser Ser Ile Leu His Pro
1               5                   10                  15
Arg Pro Ile Asn Phe Lys Phe Tyr Lys His Ser Met Lys Phe Val Ala
            20                  25                  30
Ala Leu Ser Val Leu
        35
<210>147
<211>35
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>147
Gln Leu Pro Thr Leu Pro Leu Val Met Val Ala Pro Ser Gly Ala Arg
1               5                   10                  15
Leu Gly Pro Leu Pro His Leu Gln Ala Leu Leu Gln Asp Arg Pro His
            20                  25                  30
Phe Met His
        35
<210>148
<211>32
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>148
Ala Ser Tyr Tyr Glu Ile Ser Val Asp Asp Gly Pro Trp Glu Lys Gln
1               5                   10                  15
Lys Ser Ser Gly Leu Asn Leu Cys Thr Gly Thr Gly Ser Lys Ala Trp
            20                  25                  30
<210>149
<211>31
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>149
Gly Phe Met Asn Lys Ile Phe His Pro Asn Ile Asp Glu Ala Ser Gly
1               5                   10                  15
Thr Val Cys Leu Asp Val Ile Asn Gln Thr Trp Thr Ala Leu Tyr
            20                  25                  30
<210>150
<211>30
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>150
Glu Phe Ser Val Pro Trp His Leu Ile Ala Val Thr Leu Gly Ile Leu
1               5                   10                  15
Cys Leu Leu Leu Leu Met Ile Val Thr Val Leu Val Thr Asn
            20                  25                  30
<210>151
<211>30
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>151
Arg Pro Gly Gly Pro Gly Ala Val Ala Glu Glu Glu Arg Cys Thr Val
1               5                   10                  15
Glu Arg Arg Ala Asp Leu Thr Tyr Ala Glu Phe Val Gln Gln
            20                  25                  30
<210>152
<211>25
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>152
Gly Phe Leu Cys Phe Ser Leu Ala Phe Cys Ala Gln Val Gln Val Val
1               5                   10                  15
Phe Trp Arg Leu His Ser Pro Thr Gln
            20                  25
<210>153
<211>24
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>153
Ala Glu Ala Asp Arg Leu Asp Val Leu Glu Lys Tyr Arg Gly Lys Cys
1               5                   10                  15
Glu Pro Thr Phe Leu Phe Tyr Ala
            20
<210>154
<211>23
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>154
Arg Phe Met Ser Val Ser Ile Leu Leu Met Gly Ile Val Gly Pro Ile
1               5                   10                  15
Thr Ala Gly Ile Leu Thr Ser
            20
<210>155
<211>22
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>155
Leu Lys Leu Ser Lys Val Val Val Val Gly Asp Leu Tyr Val Gly Lys
1               5                   10                  15
Thr Ser Leu Ile His Arg
            20
<210>156
<211>20
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>156
Val Ile Thr Ser Gly Ile Ala Ala Ile Val Leu Ser Arg Tyr Leu Pro
1               5                   10                  15
Ser Thr Pro Leu
            20
<210>157
<211>16
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>157
Arg Ser Tyr Thr Pro Met Lys Gly Gly Ile Ser Asn Val Trp Phe Asp
1               5                   10                  15
<210>158
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>158
Gln Lys Tyr Trp Glu Ala Leu Asn Ser Glu Gln Trp
1               5                   10
<210>159
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>159
Gly Pro Ile Leu Cys Met Ala Pro Ala Ser Asn Ile
1               5                   10
<210>160
<211>11
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>160
Gln Val Pro Gly His Ser Asp Asp His Arg Phe
1               5                   10
<210>161
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>161
Glu Glu Gln Pro Arg Phe Gln Ser Ala
1               5
<210>162
<211>8
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>162
Ala Leu Ala Phe Ser Leu Ala Ala
1               5
<210>163
<211>7
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>163
Gly Cys Gly Ser Ser Arg Cys
1               5
<210>164
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>164
Gly Ser Cys Arg Arg His
1               5
<210>165
<211>5
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>165
Ser Ala Tyr Ser Gly
1               5
<210>166
<211>5
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>166
Val Thr Gly Leu Asp
1               5
<210>167
<211>32
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>167
Gly His Pro Pro Gly Pro Thr Lys Lys Ala Leu Lys Gln Arg Phe Leu
1               5                   10                  15
Lys Leu Leu Pro Cys Cys Gly Pro Gln Ala Leu Pro Ser Val Ser Glu
            20                  25                  30
<210>168
<211>27
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>168
Asp Pro Leu Leu Gly Thr Cys Met Ser Cys Lys Thr Ile Cys Asn His
1               5                   10                  15
Gln Ser Gln Arg Thr Cys Ala Ala Phe Cys Arg
            20                  25
<210>169
<211>48
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>169
Gln Val Glu Ala Leu Pro Gly Pro Ser Leu Asp Gln Trp His Arg Ser
1               5                   10                  15
Ala Gly Glu Glu Glu Asp Gly Pro Val Leu Thr Asp Glu Gln Lys Ser
            20                  25                  30
Arg Ile Gln Ala Met Lys Pro Met Thr Lys Glu Glu Trp Asp Ala Arg
        35                  40                  45
<210>170
<211>29
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>170
Gln Val Asn Gly Val Thr Ala Asp Trp His Thr Pro Leu Phe Asn Ala
1               5                   10                  15
Cys Val Ser Gly Ser Trp Asp Cys Val Asn Leu Leu Leu
            20                  25
<210>171
<211>16
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>171
 Gly Leu Gln Leu Ser Thr Asp Ala Leu Ser Leu Ala Ser Thr Pro Gly
 1               5                   10                  15
<210>172
<211>23
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>172
Val Arg Ala Asp Pro Leu Ala Ala Ser Thr Ala Asn Leu Ser Leu Leu
1               5                   10                  15
Leu Gln His Pro Pro Leu Pro
            20
<210>173
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>173
Asn Leu Tyr Asp Leu Asp Glu Asp Asp
1               5
<210>174
<211>10
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>174
Glu Ala Gln Arg Ala Trp Trp Val Leu Glu
1               5                   10
<210>175
<211>5
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>175
Ser Phe Leu Pro Phe
1               5
<210>176
<211>14
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>176
Ser Ala Tyr Asn Glu Pro Leu Thr Pro Ser Ser Asn Thr Ser
1               5                   10
<210>177
<211>33
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>177
Val Leu Gln Gly Leu Leu Val Lys Trp Arg Asn His Asp Lys Gly Lys
1               5                   10                  15
Ser Lys Val Glu Gln Tyr Ser His Ser Ser Lys Trp Thr Pro Thr Gly
            20                  25                  30
<210>178
<211>5
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>178
Leu Glu Arg Ser Trp
1               5
<210>179
<211>33
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>179
Ser Gly Cys His Pro Gly Gly Ala Arg Ala Gly Pro Ser Pro Ala Ser
1               5                   10                  15
Ser Ser Pro Ala Pro Gly Gly Gly Arg Ser Leu Ser Ala Gly Ser Gln
            20                  25                  30
Thr
<210>180
<211>28
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>180
Cys Leu Glu Ser Pro Val Gly Lys Arg Lys Arg Ser Met Thr Val Ser
1               5                   10                  15
Thr Ser Gln Asp Pro Ser Phe Ser Gly Leu Asn Gln
            20                  25
<210>181
<211>20
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>181
Arg Pro Arg Arg Thr Trp Leu Gln Val Ser Ser Leu Cys Cys Met Ala
1               5                   10                  15
Cys Lys Met Ile
            20
<210>182
<211>11
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>182
Lys Arg Lys Ser Ser Ser Ser Val Gln Met Met
1               5                   10
<210>183
<211>32
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>183
Gly Glu Ser Gly Pro Leu Trp Gly Lys Ala Arg Pro Ser Gly Trp Phe
1               5                   10                  15
Glu Glu Leu Gly Ala Glu Pro Leu Glu Ile His Gly Thr Leu Ala Thr
            20                  25                  30
<210>184
<211>32
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>184
Gly His Tyr Gly Lys Asp Ala Tyr Arg Ser Gly Gly Pro Asp Leu His
1               5                   10                  15
Asn Phe Ile Ser Ser Gly Phe Val Thr Leu Gly Arg Gly His Thr Lys
            20                  25                  30
<210>185
<211>26
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>185
Val Arg Pro Gln Asp Arg Ala Gly Ala Ala Trp Glu Leu Leu Ala Leu
1               5                   10                  15
Thr Pro Gly Arg Gly Cys Ser Pro Pro Arg
            20                  25
<210>186
<211>24
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>186
Ser Gly Pro Val Leu Cys Ser Arg Thr Trp Tyr Arg Gln Ser Met Asp
1               5                   10                  15
Arg Gly Val Met Met Thr Ala Ala
            20
<210>187
<211>23
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>187
Asp Phe Gly Tyr Gly Lys Gly Lys Cys Ser Lys Gln Ser Pro Ser Gly
1               5                   10                  15
Ala His Gly Thr His Phe Gly
            20
<210>188
<211>23
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>188
Leu Gly Leu Pro Phe Pro Cys Leu Cys Arg Val Pro Cys Asn Thr Val
1               5                   10                  15
Phe Gly Ser Gln His Gln Met
            20
<210>189
<211>19
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>189
Val Trp Arg Pro Ala Trp Glu Gln Gly Pro Lys Gly Glu Pro Asp Pro
1               5                   10                  15
Arg Gly Leu
<210>190
<211>18
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>190
Trp Gln Ile Glu Ala Gln Arg Gly Arg Ala Thr Cys Pro Arg Ser His
1               5                   10                  15
Ser Trp
<210>191
<211>18
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>191
Val Ser Lys Cys Gln Gly Asn Ala Arg Ala Arg Leu Arg Leu Trp Gly
1               5                   10                  15
Val Trp
<210>192
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>192
Leu Asn Gln Gln Glu Thr Asp Ala Ala His Thr Leu Lys Lys Gln Leu
1               5                   10                  15
Ala
<210>193
<211>15
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>193
Val Val Ala Thr Leu Leu Ser Thr Leu Leu Ser Leu Ile Ser Val
1               5                   10                  15
<210>194
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>194
Gly Thr Gly Ala Val Gly Gly Gly Gly Thr Ser Gln Ala
1               5                   10
<210>195
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>195
Met Ser Gln Leu Leu Tyr Lys Gly Val Pro Phe Gln
1               5                   10
<210>196
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>196
Val Gln Arg Tyr Met Cys Arg Phe Val Ile Gln Ala
1               5                   10
<210>197
<211>10
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>197
Lys Ala Arg Gly Ser Arg Lys Asn Lys Asp
1               5                   10
<210>198
<211>7
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>198
Gly Phe Leu Leu Asp Pro Ser
1               5
<210>199
<211>5
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>199
Ala Ala Asn Phe Tyr
1               5
<210>200
<211>14
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>200
Asn Ser His Ser Gln Ala Ile Asn Val Asp Arg Ile Ala Leu
1               5                   10
<210>201
<211>5
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>201
Ala Pro Tyr Leu Thr
1               5
<210>202
<211>34
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>202
Gly Gly Ser Lys Gly Gly Cys Gly Ser Ser Cys Cys Val Pro Val Cys
1               5                   10                  15
Cys Ser Ser Ser Cys Gly Ser Cys Gly Gly Ser Lys Gly Val Cys Gly
            20                  25                  30
Phe Arg
<210>203
<211>38
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>203
Arg His Lys Leu Leu Lys Leu Ser Val Leu Leu Pro Leu Ile Phe Thr
1               5                   10                  15
Ile Leu Leu Leu Leu Leu Val Ala Ala Ser Leu Leu Ala Trp Arg Met
            20                  25                  30
Met Lys Tyr Gln Gln Lys
        35
<210>204
<211>4
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>204
Ala Val Pro Pro
1

Claims (10)

1、人类新基因,其特征在于:是以已公开的同源参考基因序列为标准,从人体不同组织cDNA文库中克隆得到的具有新的剪切形式的基因,剪切体之间的差异DNA序列为SEQ ID NO:1-102之一。
2、如权利要求1所述的人类新基因用于制备对临床病理中是否存在特定基因的某种特异剪切体的探针的用途。
3、如权利要求1所述的人类新基因用于制备对疾病标本和正常标本进行特定基因的不同剪切方式表达谱比较的PCR引物的用途。
4、如权利要求1所述的人类新基因用作特定疾病的药物靶点以制备对相关疾病的治疗药物的用途。
5、如权利要求1所述的人类新基因所编码的多肽,其特征在于:是以已公开的同源参考基因编码序列为标准,从人体不同组织cDNA文库中克隆得到的特定基因的具有新的剪切形式的基因编码的多肽,剪切体之间的差异氨基酸序列为SEQ ID NO:103-204之一。
6、如权利要求5所述的多肽用作抗原免疫动物以生产相应的抗体。
7、如权利要求5所述的多肽用于制备检测疾病的抗原-抗体诊断试剂盒的用途。
8、根据权利要求6所述的用途,其特征在于:所述的多肽用于制备检测自身免疫疾病或者非自身免疫疾病的抗原-抗体诊断试剂盒。
9、根据权利要求8所述的用途,其特征在于,所述的非自身免疫疾病包括癌症、心血管病、精神病等疾病。
10、如权利要求5所述的多肽用作特定疾病的药物靶点以筛选对相关疾病的治疗药物的用途。
CN 200510102128 2005-12-12 2005-12-12 人类新基因及其编码多肽的用途 Pending CN1982453A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN 200510102128 CN1982453A (zh) 2005-12-12 2005-12-12 人类新基因及其编码多肽的用途

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN 200510102128 CN1982453A (zh) 2005-12-12 2005-12-12 人类新基因及其编码多肽的用途

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN1982453A true CN1982453A (zh) 2007-06-20

Family

ID=38165297

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN 200510102128 Pending CN1982453A (zh) 2005-12-12 2005-12-12 人类新基因及其编码多肽的用途

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN1982453A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106319064A (zh) * 2016-09-13 2017-01-11 北京天科雅生物科技有限公司 一种基于高通量测序构建人tcra文库的多重pcr引物及方法
JP2017012188A (ja) * 2011-05-27 2017-01-19 ザ ユニバーシティ オブ ワシントン スルー イッツ センター フォー コマーシャライゼーションThe University Of Washington Through Its Center For Commercialization 歯科疾患を治療するためのアメロゲニン由来のポリペプチド

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2017012188A (ja) * 2011-05-27 2017-01-19 ザ ユニバーシティ オブ ワシントン スルー イッツ センター フォー コマーシャライゼーションThe University Of Washington Through Its Center For Commercialization 歯科疾患を治療するためのアメロゲニン由来のポリペプチド
CN106319064A (zh) * 2016-09-13 2017-01-11 北京天科雅生物科技有限公司 一种基于高通量测序构建人tcra文库的多重pcr引物及方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2019201577B2 (en) Cancer diagnostics using biomarkers
KR101446626B1 (ko) 신장암 진단, 신장암 환자 예후 예측을 위한 조성물 및 방법
US20090118175A1 (en) Compositions and Methods for Detection, Prognosis and Treatment of Breast Cancer
CN101258249A (zh) 检测黑素瘤的方法和试剂
JP5150997B2 (ja) 炎症性腸疾患に関与する遺伝子およびその用途
CA2410949A1 (en) Novel target genes for diseases of the heart
US6368794B1 (en) Detection of altered expression of genes regulating cell proliferation
US20030165864A1 (en) Genes regulated by DNA methylation in tumor cells
CN1982453A (zh) 人类新基因及其编码多肽的用途
US20060078913A1 (en) Compositions, splice variants and methods relating to cancer specific genes and proteins
US11459613B2 (en) Methods of characterizing resistance to modulators of Cereblon
US20020127237A1 (en) Compositions and methods relating to prostate specific genes and proteins
US20050123551A1 (en) Compositions and methods relating to endometrial specific genes and proteins
US20030175704A1 (en) Genes expressed in lung cancer
EP1354961B1 (en) Compositions and methods for detection and treatment of proliferative abnormalities associated with overexpression of human transketolase like-1 gene
US20020132255A1 (en) Compositions and methods relating to breast specific genes and proteins
KR102480128B1 (ko) 면역력 강화 소 African Humped Cattle (AFH) 품종 특이적 단일염기다형성 및 그의 용도
CN101892237B (zh) 线粒体膜电位下降相关的多核苷酸及其编码多肽和用途
US20030044815A1 (en) Compositions and methods relating to breast specific genes and proteins
JP4317984B2 (ja) 活性硫酸運搬作用を有するタンパク質、組織の癌化の検出方法
US20020192220A1 (en) Compositions and methods relating to colon specific genes and proteins
US20030100495A1 (en) Human NAC-1 protein
US20020177140A1 (en) Compositions and methods relating to prostate specific genes and proteins
JP2003284560A (ja) Abcトランスポーター関連遺伝子abcc13
JP2003284560A6 (ja) Abcトランスポーター関連遺伝子abcc13

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C12 Rejection of a patent application after its publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Open date: 20070620