CN1980909B - 作为激酶抑制剂的2-氨基噻唑-5-芳香族甲酰胺的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及制备具有式(I)的化合物及其结晶形式的方法，其中Ar是芳基或杂芳基，L是任选的亚烷基连接基，以及R₂、R₃、R₄和R₅如本说明书中定义，其中所述的化合物用作激酶抑制剂，特别是用作蛋白酪氨酸激酶和p38激酶的抑制剂。

Description

作为激酶抑制剂的2-氨基噻唑-5-芳香族甲酰胺的制备方法

发明领域

本发明涉及作为激酶抑制剂如蛋白酪氨酸激酶和p38激酶的抑制剂的2-氨基噻唑-5-芳香族甲酰胺、其中间体和结晶形式的制备方法。

发明背景

式I的氨基噻唑-芳香族酰胺用作激酶抑制剂，特别是用作蛋白酪氨酸激酶和p38激酶的抑制剂，

其中Ar是芳基或杂芳基，L是任选的亚烷基连接基，以及R₂、R₃、R₄和R₅如本说明书中定义。它们被期望用于治疗与蛋白酪氨酸激酶有关的疾病如免疫学和肿瘤学疾病[参见，美国专利号6,596,746(′746专利)，转让给现在的受让人并在此引入作为参考]，以及与p38激酶有关的病症如炎性和免疫性病症，如在2004年2月6日提交的美国专利申请序列号10/773,790中所述的，其要求2003年2月6日提交的美国临时申请序列号60/445,410的优先权(在下文中称为′410申请)，这两篇申请同样被转让给现在的受让人并在此引入作为参考。

式(IV)的化合物，′N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-[[6-[4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪基]-2-甲基-4-嘧啶基]氨基]-5-噻唑甲酰胺，是一种SRC/ABL抑制剂并用于治疗肿瘤疾病。

制备2-氨基噻唑-5-甲酰胺的其它方法描述在′746专利和′410申请中。该′746专利描述了一种方法，包括氯噻唑用正丁基锂处理，接着与异氰酸苯酯反应，得到氯噻唑-苯甲酰胺，其通过保护、氯-被-氨基取代以及脱保护后，进一步加工成氨基噻唑-苯甲酰胺最终产品，例如，

该′410申请描述了一种多步方法，包括首先，通过用亚硝酸叔丁酯重氮化接着用CuBr₂处理，将N-未取代的氨基噻唑羧酸甲酯或乙酯转化为溴噻唑羧酸酯，例如，

然后，将所得的溴噻唑酯水解，得到相应的羧酸并将该酸转化为相应的酰氯，例如，

最后，所述的酰氯与苯胺偶合，得到溴噻唑-苯甲酰胺中间体，其进一步加工得到氨基噻唑-苯甲酰胺最终产品，例如，

制备2-氨基噻唑-5-甲酰胺的其它方法包括将2-氨基噻唑-5-羧酸与胺使用不同的偶合条件进行偶合，例如DCC[Roberts等，J.Med.Chem.(1972)，15，在p.1310]和DPPA[Marsham等，J.Med.Chem.(1991)，34，在p.1594)]。

上述方法的缺点是生成副产物，使用昂贵的偶合试剂，比所希望的收率低，以及需要多个反应步骤来获得所述的2-氨基噻唑-5-甲酰胺化合物。

现已报道了N，N-二甲基-N′-(氨基硫代羰基)-甲脒与α-卤代酮和酯的反应得到5-羰基-2-氨基噻唑。参见Lin，Y.等，J.Heterocycl.Chem.(1979)，16，在第1377页；Hartmann，H.等，J.Chem.Soc.Perkin Trans.(2000)，1，在第4316页；Noack，A.等；Tetrahedron(2002)，58，在第2137页；Noack，A.；等.Angew.Chem.(2001)，113，在第3097页和Kantlehner，W.等，J.Prakt.Chem./Chem.-Ztg.(1996)，338，在第403页。也已报道了β-乙氧基丙烯酸酯和硫脲反应以制备2-氨基噻唑-5-羧酸酯。参见Zhao，R.，等，Tetrahedron Lett.(2001)，42，在第2101页。然而，丙烯酰苯胺(acrylanilide)和巴豆苯胺的亲电溴化已知经历芳香族溴化和加入α，β-不饱和碳-碳双键。参见Autenrieth，Chem.Ber.(1905)，38，在第2550页；Eremeev等，Chem.Heterocycl.Compd.Engl.Transl.(1984)，20，在第1102页。

需要制备2-氨基噻唑-5-甲酰胺的新的和有效的方法。

发明概述

本发明涉及制备式(I)的2-氨基噻唑-5-芳香族酰胺的方法，

其中L、Ar、R₂、R₃、R₄、R₅和m如下面所定义，所述方法包括使具有式(II)的化合物

其中Q是基团-O-P^*，其中P^*这样选择，以致当与P^*连接的氧原子一起考虑时，Q是离去基团，并且Ar、L、R₂、R₃和m如下面所定义，

与卤化剂在水存在下反应，接着与具有式(III)的硫脲化合物反应，

其中，R₄和R₅如下面所定义，

得到式(I)的化合物，

其中，

Ar在式(I)和(II)中是相同的，并且是芳基或杂芳基；

L在式(I)和(II)中是相同的，并且是任选取代的亚烷基；

R₂在式(I)和(II)中是相同的，并且选自氢、烷基、取代烷基、链烯基、取代链烯基、炔基、取代炔基、芳基、杂芳基、环烷基和杂环基；

R₃在式(I)和(II)中是相同的，并且选自氢、卤素、氰基、卤代烷基、烷基、取代烷基、链烯基、取代链烯基、芳基、杂芳基、环烷基和杂环基；

R₄(i)在每个式(I)和(III)中是相同的，并且(ii)独立地选自氢、烷基、取代烷基、链烯基、取代链烯基、炔基、取代炔基、芳基、杂芳基、环烷基和杂环基，或者，R₄与R₅一起形成杂芳基或杂环基；

R₅(i)在每个式(I)和(III)中是相同的，并且(ii)独立地选自氢、烷基、取代烷基、链烯基、取代链烯基、炔基、取代炔基、芳基、杂芳基、环烷基和杂环基，或者，R₅与R₄一起形成杂芳基或杂环基；以及

m是0或1。

申请人现已令人吃惊地发现将β-(P^*)氧基丙烯酰基芳香族酰胺和硫脲转化为2-氨基噻唑衍生物的所述方法，其中所述的芳香族酰胺没有进一步卤化而产生其它副产物。因此能用此方法有效地制备高收率的氨基噻唑-芳香族酰胺，特别是2-氨基噻唑-5-苯甲酰胺。

另一方面，本发明涉及式(IV)化合物的结晶形式。

附图的简要说明

本发明通过参考下述附图进行说明。

图1表示式(IV)化合物的结晶一水合物的模拟(底部)(由在室温下产生的原子坐标计算获得)和实测的(顶部)pXRD图。

图2表示式(IV)化合物的一水合物结晶形式的DSC和TGA。

图3表示式(IV)化合物的结晶丁醇溶剂合物的模拟(底部)(由在室温下精确的(refined)原子参数获得)和实测的(顶部)pXRD图。

图4表示式(IV)化合物的结晶乙醇溶剂合物的模拟(底部)(由在-40℃下精确的原子参数获得)和实测的(顶部)pXRD图。

图5表示式(IV)化合物的结晶纯形式(N-6)的模拟(底部)(由在室温下精确的原子参数获得)和实测的(顶部)pXRD图。

图6表示式(IV)化合物的结晶纯形式(T1H1-7)的模拟(底部)(由在室温下精确的原子参数获得)和实测的(顶部)pXRD图。

发明的详细说明

缩写

便于参考，在此可以使用下列缩写：

Ph＝苯基

Bz＝苄基

t-Bu＝叔丁基

Me＝甲基

Et＝乙基

Pr＝丙基

Iso-P＝异丙基

MeOH＝甲醇

EtOH＝乙醇

EtOAc＝乙酸乙酯

Boc＝叔丁氧基羰基

CBZ＝苄氧羰基

DMF＝二甲基甲酰胺

DMF-DMA＝N，N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛

DMSO＝二甲亚砜

DPPA＝二苯基磷酰基叠氮化物

DPPF＝1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁

HATU＝O-苯并三唑-1-基0N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐

LDA＝二异丙基氨基化锂

TEA＝三乙胺

TFA＝三氟乙酸

THF＝四氢呋喃

KOH＝氢氧化钾

K₂CO₃＝碳酸钾

POCl₃＝三氯氧化磷

EDC或EDCI＝3-乙基-3′-(二甲基氨基)丙基-碳二亚胺

DIPEA＝二异丙基乙胺

HOBt＝1-羟基苯并三唑水合物

NBS＝N-溴琥珀酰胺

NMP＝N-甲基-2-吡咯烷酮

NaH＝氢化钠

NaOH＝氢氧化钠

Na₂S₂O₃＝硫代硫酸钠

Pd＝钯

Pd-C或Pd/C＝钯/碳

min＝分钟

L＝升

mL＝毫升

μL＝微升

g＝克

mg＝毫克

mol＝摩尔

mmol＝毫摩尔

meq＝毫当量

RT或rt＝室温

RBF＝圆底烧瓶

ret.t.＝HPLC保留时间(分钟)

sat或sat′d＝饱和的

aq.＝含水

TLC＝薄层层析

HPLC＝高效液相色谱

LC/MS＝高效液相色谱/质谱

MS＝质谱

NMR＝核磁共振

mp＝熔点

DSC＝示差扫描量热法

TGA＝热重量分析

XRPD＝X-射线粉末衍射图

pXRD＝X-射线粉末衍射图

定义

下列是在本说明书和所附的权利要求书中所使用的术语的定义。除非另有说明，在此所提供的基团或术语的最初定义(单独地或作为另一基团的一部分)适用于在整个说明书和权利要求书的基团或术语。

在此单独地或作为另一基团的一部分所使用的术语″烷基″是指直链和支链饱和烃，含有1-20个碳原子，1-10个碳原子或1-8个碳原子，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、叔丁基、异丁基、戊基、己基、异己基、庚基、4，4-二甲基戊基、辛基、2，2，4-三甲基-戊基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基、其各种支链异构体等。低级烷基，即，1-4个碳原子的烷基。

术语″取代烷基″是指被一个或多个取代基(例如1-4个取代基，或1-2个取代基)在任何可用的连接点取代的烷基。示例性的取代基可以选自一个或多个(或1-3个)下列基团：

(i)卤素(例如，单卤代取代基或多卤代取代基，在后者的情况中，基团如全氟烷基或带Cl₃或CF₃的烷基)、卤代烷氧基、氰基、硝基、氧代(＝O)、-OR_a、-SR_a、-S(＝O)R_e、-S(＝O)₂R_e、-S(＝O)₃H、-P(＝O)₂-R_e、-S(＝O)₂OR_e、-P(＝O)₂OR_e、-U₁-NR_bR_c、-U₁-N(R_d)-U₂-NR_bR_c、-U₁-NR_d-U₂-R_b、-NR_bP(＝O)₂R_e、-P(＝O)₂NR_bR_c、-C(＝O)OR_e、-C(＝O)R_a、-OC(＝O)R_a、-NR_dP(＝O)₂NR_bR_c、-R_bP(＝O)₂R_e、-U₁-芳基、-U₁-杂芳基、-U₁-环烷基、-U₁-杂环基、-U₁-亚芳基-R_e、-U₁-亚杂芳基(heteroarylene)-R_e、-U₁-亚环烷基-R_e和/或-U₁-亚杂环基-R_e，

其中，在基团(i)中，

(ii)-U₁-和-U₂-每个独立地是单键、-U³-S(O)_t-U⁴-、-U³-C(O)-U⁴、-U³-C(S)-U⁴-、-U³-O-U⁴-、-U³-S-U⁴-、-U³-O-C(O)-U⁴-、-U³-C(O)-O-U⁴-或-U³-C(＝NR_g)-U⁴-；

其中，

(iii)U³和U⁴每个独立地是单键、亚烷基、亚烯基或亚炔基；

其中，在基团(i)中，

(iv)R_a、R_b、R_c、R_d和R_e每个独立地是氢、烷基、链烯基、炔基、环烷基、芳基、杂环基或杂芳基，其每个是未取代的或被1-4个基团R_f取代，除R_e不是氢外；或R_b和R_c可以与它们相连的原子一起形成3-至8-元饱和或不饱和环，其中环是未取代的或被1-4个下面所列的R_f基团取代；或者R_b和R_c可与它们相连的氮原子一起形成基团-N＝CR_gR_h，其中R_g和R_h每个独立地是氢、烷基或被基团R_f取代的烷基；以及；

其中，

(v)R_f在每次出现时独立地选自烷基、卤素、氰基、羟基、-O(烷基)、SH、-S(烷基)、氨基、烷基氨基、卤代烷基、卤代烷氧基或被1或2个卤素、氰基、羟基、-O(烷基)、SH、-S(烷基)、氨基、烷基氨基、卤代烷基和/或卤代烷氧基取代的低级烷基，以及

其中，

(vi)t是0、1或2。

在此单独地或作为另一基团的一部分所使用的术语″链烯基″是指在正链中具有2至20个碳原子、或者2至12个碳原子和/或1至8个碳原子的直链或支链基团，其中在所述的正链中包括1至6个双键，例如乙烯基、2-丙烯基、3-丁烯基、2-丁烯基、4-戊烯基、3-戊烯基、2-己烯基、3-己烯基、2-庚烯基、3-庚烯基、4-庚烯基、3-辛烯基、3-壬烯基、4-癸烯基、3-十一碳烯基、4-十二烯基、4，8，12-十四三烯基等。取代链烯基是指具有一个或多个取代基(例如1至3个取代基，或1至2个取代基)的链烯基，所述的取代基选自上面取代烷基中所定义的那些。

在此单独地或作为另一基团的一部分所使用的术语″炔基″是指具有2-12个碳原子、或者2至4个碳原子以及至少一个碳碳三键的直链或支链烃基，例如乙炔基、2-丙炔基、3-丁炔基、2-丁炔基、4-戊炔基、3-戊炔基、2-己炔基、3-己炔基、2-庚炔基、3-庚炔基、4-庚炔基、3-辛炔基、3-壬炔基、4-癸炔基、3-十一碳炔基、4-十二碳炔基等。取代炔基是指具有一个或多个取代基(例如1-4个取代基，或1至2个取代基)的炔基，所述的取代基选自上面取代烷基中所定义的那些。

当术语″烷基″被作为另一基团的后缀使用时，例如在(芳基)烷基或芳烷基中，这种连接是指取代烷基，其中所述取代基中的至少一个是在该连接中具体命名的基团。例如，(芳基)烷基是指如上所定义的取代烷基，其中烷基取代基中的至少一个是芳基，例如苄基。然而，在基团-O(烷基)和-S(烷基)中，应当理解，在这些情况中的连接点分别是氧和硫原子。

如果烷基被定义成二价，即，具有两个单键以连接两个其它基团，那么它们被称为″亚烷基″基团。类似地，如果如上所定义的链烯基和如上所定义的炔基分别是具有连接两个其它基团的单键的二价基团，那么它们分别被称为″亚烯基″和″亚炔基″。亚烷基、亚烯基和亚炔基的例子包括：-CH＝CH-CH₂-，-CH₂CH＝CH-，-C≡C-CH₂-，-CH₂-，-CH₂C≡CCH₂-，

-(CH₂)₂-，-(CH₂)₃-，-(CH₂)₄-，

等。只要化合价允许，亚烷基可以任选独立地被一个或多个取代烷基中所定义的基团所取代。因此，例如，取代亚烷基将包括

和等。

在此单独地或作为另一基团的一部分所使用的术语″环烷基″是指任选取代的含有1-3个环的饱和和部分不饱和(含有1或2个双键)环烃基团，包括单环烷基、二环烷基和三环烷基，其含有总共3-20个构成环的碳原子，或含有总共3-7个构成环的碳原子。多环环烷基的其它环可以是稠合的、桥连的和/或通过一个或多个螺接连接的。示例性的环烷基包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环癸基、环十二烷基、环戊烯基、环庚烯基、环辛烯基、环己二烯基、环庚二烯基、

等。

除非提到环烷基取代基的特定选择，否则每一个环烷基是指包括将在下面所定义的取代环烷基和未取代环烷基(例如，其中环烷基被一个或多个基团R_f所取代)。当没有描述特定的选择时，所述的环烷基的任选取代基可以选自下列：

(i)卤素(例如，单卤代取代基或多卤代取代基，在后者的情况中，基团如全氟烷基或带Cl₃或CF₃的烷基)、卤代烷氧基、氰基、硝基、氧代(＝O)、-OR_a、-SR_a、-S(＝O)R_e、-S(＝O)₂R_e、-S(＝O)₃H、-P(＝O)₂-R_e、-S(＝O)₂OR_e、-P(＝O)₂OR_e、-U₁-NR_bR_c、-U₁-N(R_d)-U₂-NR_bR_c、-U₁-NR_d-U₂-R_b、-NR_bP(＝O)₂R_e、-P(＝O)₂NR_bR_c、-C(＝O)OR_e、-C(＝O)R_a、-OC(＝O)R_a、-NR_dP(＝O)₂NR_bR_c、-R_bP(＝O)₂R_e和/或-U₁-R_e，和/或

(ii)-U₁-烷基、-U₁-链烯基或-U₁-炔基，其中所述的烷基、链烯基和炔基被一个或多个(或1-3个)在(i)中所述的基团所取代，

其中，在组(i)和(ii)中，

(iii)-U₁-和-U₂-每个独立地是单键、-U³-S(O)_t-U⁴-、-U³-C(O)-U⁴-、-U³-C(S)-U⁴-、-U³-O-U⁴-、-U³-S-U⁴-、-U³-O-C(O)-U⁴-、-U³-C(O)-O-U⁴-或-U³-C(＝NR_g)-U⁴-；

其中，在组(iii)中，

(iv)U³和U⁴每个独立地是单键、亚烷基、亚烯基或亚炔基；

其中，

(v)R_a、R_b、R_c、R_d和R_e每个独立地是氢、烷基、链烯基、炔基、环烷基、芳基、杂环基或杂芳基，其每个是未取代的或被一个或多个基团R_f取代，除R_c不是氢外；或R_b和R_c可以与它们相连的原子一起形成3-至8-元饱和或不饱和环，其中环是未取代的或被一个或多个下面所列的R_f基团取代；或者R_b和R_c与它们相连的氮原子可一起形成基团-N＝CR_gR_h，其中R_g和R_h每个独立地是氢、烷基或被基团R_f取代的烷基；以及；

其中，

(vi)R_f在每次出现时独立地选自烷基、卤素、氰基、羟基、-O(烷基)、SH、-S(烷基)、氨基、烷基氨基、卤代烷基、卤代烷氧基或被1至2个卤素、氰基、羟基、-O(烷基)、SH、-S(烷基)、氨基、烷基氨基、卤代烷基和/或卤代烷氧基取代的低级烷基，以及

其中，

(vii)t是0、1或2。

当使用后缀″亚(ene)″连接环状基团时，这用来表示在此所定义的具有两个单键作为与其它基团的连接点的环状基团。因此，例如在此所使用的术语″亚环烷基″是指如上所定义的″环烷基″，其是连接基团例如

等。

术语″烷氧基″是指通过氧原子(-O-)连接的如上所定义的烷基或取代烷基，即，基团-OR_i，其中R_i是烷基或取代烷基。

术语″烷硫基″是指通过硫原子(-S-)连接的如上所定义的烷基或取代烷基，即，基团-SR_i，其中R_i是烷基或取代烷基。

术语″酰基″是指与基团(例如，但不局限于烷基、链烯基、炔基、芳基、碳环基、杂环基)连接的羰基，更特别地，是指基团C(＝O)R_j，其中R_j可以选自在此所定义的烷基、链烯基、取代烷基或取代链烯基。

术语″烷氧基羰基″是指与烷基基团连接的羧基

(即，以形成CO₂R_j)，其中R_j如上面对酰基所定义。当在此使用名称″CO₂″时，这用来指基团

术语″烷基氨基″是指氨基，其中一个或两个氢原子被烷基代替，即，NR_kR_l，其中R_k和R_l之一是氢以及另一个是烷基，或R_k和R_l两个都是烷基。

术语″卤代″或“卤素”是指氯、溴、氟和碘。

术语″卤代烷基″是指具有一个或多个卤素取代基的取代烷基。例如″卤代烷基″包括单、二和三氟甲基。

术语“卤代烷氧基”是指具有一个或多个卤素取代基的烷氧基。例如″卤代烷氧基″包括OCF₃。

在此单独地或作为另一基团的一部分所使用的术语″芳(ar)″或″芳基(aryl)″是指任选取代的芳香族同素环(即烃)的单环、二环或三环芳族基团，在环部分[例如苯基、联苯基、萘基(包括1-萘基和2-萘基)和蒽基(antracenyl)]中含有6-14个碳，并且可以任选包括一至三个与其稠合的其它环(环烷基、杂环基或杂芳基)。例子包括：

等。

除非提到芳基取代基的特定选择，否则每一个芳基是指包括在文中所定义的取代芳基和未取代芳基(例如，当芳基被一个或多个上面的基团R_f所取代时)。当没有描述具体的选择时，在化合价容许的情况下，芳基的任选取代基可以选自上面所述的环烷基的那些。

在此单独地或作为另一基团的一部分所使用的术语″杂芳基″是指含有5-10个原子的任选取代的单环和二环芳环，其包括1-4个杂原子例如氮、氧或硫，并且这些环与芳基、环烷基、杂芳基或杂环基环稠合，其中所述的氮和硫杂原子可以任选被氧化以及所述的氮杂原子可以任选被季铵化。杂芳基的例子包括吡咯基、吡唑基、吡唑啉基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、噻二唑基、异噻唑基、呋喃基、噻吩基、噁二唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、三嗪基、吲哚基、苯并噻唑基、苯并二氧杂环戊烯基(benzodioxolyl)、苯并噁唑基、苯并噻吩基、喹啉基、四氢异喹啉基、异喹啉基、苯并咪唑基、苯并吡喃基、中氮茚基(indolizinyl)、苯并呋喃基、色酮基(chromonyl)、香豆素基、苯并吡喃基、噌啉基、喹喔啉基、吲唑基、吡咯并吡啶基、呋喃并吡啶基、二氢异吲哚基、四氢喹啉基、咔唑基、benzidolyl、菲咯啉基(phenanthrollinyl)、吖啶基、菲啶基、呫吨基、

等。

除非提到杂芳基的特定选择，否则每一个杂芳基是指包括在文中所定义的取代和未取代杂芳基(例如，当杂芳基被一个或多个上面的基团Rf所取代)。当没有描述具体的选择时，在化合价容许的情况下，杂芳基的任选取代基可以选自上面所述的环烷基的那些。

在此单独地或作为另一基团的一部分所使用的术语″杂环的″或″杂环基″是指非芳香族的、任选取代的、全部饱和或部分不饱和的环状基团(例如，3-13员单环，7-17员二环，或10-20员三环体系，或含有总共3-10个环原子)，其在至少一个含碳原子的环中具有至少一个杂原子。含杂原子的杂环基团的每个环可以具有1、2、3或4个选自氮原子、氧原子和/或硫原子的杂原子，其中所述的氮和硫杂原子可以任选被氧化以及所述的氮杂原子可以任选被季铵化。只要化合价容许，所述的杂环基团可以在环或环体系的任何杂原子或碳原子处连接。多环杂环的环可以是稠合的、桥连的和/或通过一个或多个螺接连接。

示例性的杂环基包括氧杂环丁烷基、咪唑啉基、噁唑烷基、异噁唑啉基(isoxazolinyl)、噻唑烷基、异噻唑烷基、哌啶基、哌嗪基、2-氧代哌嗪基、2-氧代哌啶基、2-氧代吡咯烷基(pyrrolodinyl)、2-氧代氮杂

基、氮杂

基、4-哌啶酮基(piperidonyl)、四氢吡喃基、吗啉基、硫吗啉基、硫吗啉基亚砜(thiamorpholinyl sulfoxide)、硫吗啉基砜、1，3-二氧戊环和四氢-1，1-二氧代噻吩基(dioxothienyl)、

等，其任选可以被取代。

除非提到杂环基的特定选择，否则每一个杂环基是指包括在文中所定义的取代和未取代杂环基(例如，当杂环基被一个或多个上面的基团R_f所取代)。当没有描述具体的选择时，在化合价容许的情况下，杂环基的任选取代基可以选自上面所述的环烷基的那些。

术语″环″包括同素环(即，如文中所用的，所有环原子是碳)或″杂环的″(即，如文中所用的，环原子包括碳和1-4个选自N、O和/或S的杂原子，也称为杂环基)，如在此所使用的，其每个(同素环的或杂环的)可以饱和或部分不饱和或完全不饱和。

除非另有说明，当提到具体名称的芳基(例如，苯基)、环烷基(例如，环己基)、杂环基(例如，吡咯烷基)或杂芳基(例如，咪唑基)时，除另外具体所指之外，是指包括具有0-3个或0-2个取代基的环，所述的取代基视情况选自上面所述的芳基、环烷基、杂环基和/或杂芳基的那些。

术语″杂原子″应包括氧、硫和氮。

术语″碳环的″是指饱和或不饱和的单环或双环，其中所有环的所有原子是碳。因此，该术语包括环烷基和芳环。所述的碳环可以被取代，在此情况下，所述的取代基选自上面所述的环烷基和芳基的那些。

当在此使用的术语“不饱和的”是指环或基团时，除非另有说明，所述的环或基团可以完全不饱和的或部分不饱和的。

当在此使用时，″碱″包括金属氧化物、氢氧化物或醇盐、氢化物、或化合物如氨水，其在水或溶剂中接受质子。因此，示例性的碱包括，但不局限于，碱金属氢氧化物和醇盐(即，MOR，其中M是碱金属如钾、锂或钠，并且R是氢或如上所定义的烷基，或其中R是直链或支链的C_1-5烷基，因此包括，但不限于，氢氧化钾、叔丁醇钾、叔戊醇钾、氢氧化钠、叔丁醇钠、氢氧化锂等)；其它氢氧化物如氢氧化镁(Mg(OH)₂)或氢氧化钙(Ca(OH)₂)；碱金属氢化物(即，MH，其中M如上所定义，因此包括，但不限于，氢化钠和氢化锂)；烷基化的二硅氮烷(disilazide)，例如，六甲基二硅氮烷钾盐和六甲基二硅氮烷锂盐；碳酸盐如碳酸钾(K₂CO₃)、碳酸钠(Na₂CO₃)、碳酸氢钾(KHCO₃)和碳酸氢钠(NaHCO₃)，烷基氢氧化铵如N-四丁基氢氧化铵(TBAH)等。在此所使用的术语“偶合试剂”是指用于偶合羧酸和胺或苯胺以形成酰胺键的试剂。它可以包括偶合添加剂，例如CDI、HOBt、HOAt、HODhbt、HOSu或NEPIS，与另一种偶合试剂组合使用以加速偶合过程和抑制副反应。具体的肽偶合试剂可以包括CDI、DCC、EDC、BBC、BDMP、BOMI、HATU、HAPyU、HBTU、TAPipU、AOP、BDP、BOP、PyAOP、PyBOP、TDBTU、TNTU、TPTU、TSTU、BEMT、BOP-Cl、BroP、BTFFH、CIP、EDPBT、Dpp-Cl、EEDQ、FDPP、HOTT-PF6、TOTT-BF4、PyBrop、PyClop和TFFH。参见“Peptide Coupling Reagents：Names，Acronyms and References，”AlbanyMolecular Research，Inc.，Technical Reports，Vol.4，No.1，在此引入作为参考。

术语″卤化剂″或″卤化试剂″是指能够卤化式(II)化合物的一种或多种试剂。卤化剂包括无机和有机卤化剂。无机卤化剂的例子包括氯、溴、碘、氟和次氯酸钠。有机卤化剂包括N-氯琥珀酰亚胺(NCS)、N-溴丁二酰亚胺(NBS)、N-碘琥珀酰亚胺(NIS)、1，3-二氯-5，5-二甲基乙内酰脲、1，3-二溴-5，5-二甲基乙内酰脲和1，3-二碘-5，5-二甲基乙内酰脲。

在此所使用的″高收率″是指收率大于80％、大于85％、大于90％或大于95％。

″离去基团″是指当与亲核试剂反应时能够被置换的基团包括I、Br、Cl、R₁₀SO₂O-(其中R₁₀是如在此所定义的烷基、取代烷基、芳基或杂芳基)和弱碱，例如，HSO₄-。离去基团的例子包括I、Br、Cl和硫酸二甲酯(methyl sulfate)、甲磺酸盐(甲烷磺酸盐)、三氟甲磺酸盐和甲苯磺酸盐(对甲苯磺酸盐)的离子。

在式(II)的化合物中，基团Q是-O-P^*，其中P^*这样选择以致，当P^*与连接在一起的氧原子一起考虑时，Q是离去基团，即，Q当与亲核试剂反应时具有能被置换的能力。因此，所述的基团P^*可以选自烷基、SO₂OR₁₀、-SO₂R₁₀、-C(＝O)R₁₁和-Si(R₁₂)₃，其中R₁₀如上面″离去基团″的定义中所定义，R₁₁是烷基、芳基或杂芳基，以及R₁₂选自烷基和芳基。

在此所使用的“合适的溶剂”是指单一溶剂以及溶剂的混合物。溶剂可以视给定的反应步骤的情况进行选择，例如，可以选自无质子极性溶剂如DMF、DMA、DMSO、二甲基亚丙基脲、N-甲基吡咯烷酮(NMP)和六甲基磷酰三胺；醚溶剂如乙醚、THF、1，4-二噁烷、甲基叔丁基醚、二甲氧基甲烷和乙二醇二甲醚；醇溶剂如MeOH、EtOH和异丙醇；以及含卤素溶剂如二氯甲烷、氯仿、四氯化碳和1，2-二氯乙烷。溶剂的混合物还可以包括双相混合物。

在此所使用的术语″淤浆″是指式(IV)化合物的饱和溶液和额外量的式(IV)化合物以得到一种式(IV)化合物和溶剂的多相溶液。

本发明描述了以基本上纯的形式存在的式(IV)化合物的结晶形式。在此所使用的″基本上纯的″是指化合物的纯度大于90％，包括90、91、92、93、94、95、96、97、98、99和100％。

作为一个例子，式(IV)化合物的结晶形式可以是基本上纯的，纯度大于90百分比，其中其余小于10％的物质包含式(IV)化合物的其它形式，和/或由制备它所产生的反应和/或处理杂质。基本上纯的式(IV)化合物的结晶形式因此可用于药物组合物，可向该药物组合物中加入其它所需的组分，例如，赋形剂、载体或不同分子结构的活性化学物质。

当溶解时，式(IV)化合物的结晶形式丧失它的结晶结构，并因此被称为式(IV)化合物的溶液。然而，本发明的所有形式可以被用来制备所述的药物溶解或悬浮在其中的液体制剂。此外，式(IV)化合物的结晶形式可以混入到固态剂型中。

将治疗有效量的式(IV)化合物的结晶形式与药学上可接受的载体混合以制备本发明的药物组合物。术语″治疗有效量″是指这样一种数量，当单独给药或与其它治疗药物一起给药时，可以有效地预防、抑制或改善所述疾病或病症或所述疾病或病症的进展。

一般方法

本发明涉及一种制备2-氨基噻唑基-5-芳香族酰胺的方法，所述的2-氨基噻唑基-5-芳香族酰胺用作激酶抑制剂，特别是蛋白酪氨酸激酶和p38激酶的抑制剂。该方法涉及卤化β-(P^*)氧基-α，β-不饱和羧基芳香族酰胺(II)(其中P^*如在此所定义)，例如β-(烷基)氧基-α，β-不饱和羧基苯甲酰胺，并与硫脲(III)反应以得到式(I)的2-氨基噻唑-5-芳香族酰胺。2-氨基和/或5-芳香族基团上的所需取代基可以在氨基噻唑生成前后连接。例如，在一种实施方案中，式(I)的化合物通过硫脲其中R₄是氢的反应制备，然后，R₄的氢原子被修饰为更多的官能基，例如，在一种实施方案中，为取代嘧啶。在另一种实施方案中，式(I)的化合物通过硫脲其中R₄是嘧啶基的反应制备，接着如果需要，所述的嘧啶基任选进一步被其它取代基所修饰。

该方法提供了一种有效的制备2-氨基噻唑基-5-芳香族酰胺的途径，基本上在一步中并且以高收率的，没有使用昂贵的偶合试剂或催化剂。令人吃惊地，使用这种方法卤化接着与硫脲反应以制备所述的氨基噻唑，没有不希望的芳香族卤化。

本发明的一种实施方案表示在方案1中。

方案1

在方案1中，Ar是芳基或杂芳基，更优选芳基，尤其更优选任选取代的苯基。最优选的是该方法涉及化合物，其中Ar是被一至三个烷基、卤素、-C(＝O)NR₈和/或NR₈C(＝O)取代的苯基，其中R₈是烷基、环烷基或杂芳基，更优选其中R₈是环丙基或甲基，并且尤其更优选其中Ar选自2-氯-6-甲基苯基、N-环丙基-1-甲基-苯甲酰胺和N，1-二甲基-苯甲酰胺。本发明的方法可以在连接基L存在的情况下进行，如在式I中，但是有利地该Ar基团直接连接于甲酰胺的氮原子上，如在式(Ia)中。

正如所述的，所需的取代基可以在卤化和环化过程前或后与基团Ar连接。同样，具有所需的基团R₄和R₅(与在所需的最终产物上的基团相一致)的硫脲化合物(III)可以在环化之前制备，或者，所需的基团可以在环化后连接于氨基-噻唑基上。例如，可以在反应中这样制备和使用硫脲化合物(III)，其中R₄和R₅两个都是氢，或R₄和R₅是其它基团，不同于最终所需产物的那些基团，然后，形成(I)或(Ia)的氨基噻唑后，将基团R₄和R₅修饰为最终所需产物的取代基。所有这些可供选择的实施方案及其改变形式都在本发明的范围之内。

在式(II)和(IIa)的中间体中，基团P^*优选可以选自如上所定义的烷基、-SO₂OR₁₀、-SO₂R₁₀、-C(＝O)R₁₁和-Si(R₁₂)₃，但P^*优选是烷基，更优选是低级烷基，即，甲基、乙基、正丙基、异丙基或直链或支链丁基。基团R₂优选是氢或低级烷基，更优选是氢，以及R₃优选是氢。因此对于化合物(II)，β-烷氧基-α，β-不饱和羧基苯甲酰胺是优选的，包括β-取代的和β-未取代的β-烷氧基-α，β-未取代的羧基苯甲酰胺，其中后者是更优选的，其中苯甲酰胺的苯基如上面式(Ia)中的Ar所述的任选被取代。同样优选的β-未取代的β-烷氧基-α，β-未取代的羧基苯甲酰胺是β-乙氧基丙烯酰基(acryl)苯甲酰胺，其中苯甲酰胺的苯基如上面Ar所述那样被任选取代。中间体(II)和(IIa)可以通过相应的苯胺，NHR₂-Ar与烷氧基丙烯酰基化合物反应而制备。制备β-乙氧基丙烯酰基苯甲酰胺的方法例如还描述在中Ashwell，M.A.等，J.Bioorg.Med.Chem.Lett.(2001)，24，在第3123页和Yoshizaki，S.，et al.Chem.Pharm.Bull.(1980)，28，在第3441页中，在此引入作为参考。

在该方法中使用的卤化剂可以是文中所定义的能够卤化文中前面所定义的化合物(II)的任何一种或多种试剂。优选的试剂包括NBS和N-卤代乙内酰脲。硫脲化合物(III)包括未取代的硫脲、N-单取代的硫脲和N，N-二取代的硫脲。卤化和环化的步骤在合适的溶剂中进行，其可以包括一种或多种溶剂例如烃、醚、酯、酰胺和酮与醚一起，其中优选与二噁烷一起。

本发明的另一种实施方案表示在方案2中。

方案2

从方案2中可以看出，β-(P^*)氧基-丙烯酰基苯甲酰胺(IIb)，其中R₂和R₃都是氢，以及P^*如之前所定义，P^*优选是低级烷基，与卤化剂如NBS在合适的溶剂中在水存在下卤化，然后与未取代的硫脲(IIIa)环化。所得的2-(未取代的)氨基-噻唑-5-芳香族酰胺(Ib)与嘧啶化合物4反应，其中R和R’是氢或任选的取代基，更优选是氢或低级烷基，以及X和Y两个都是如在此所定义的离去基团，以制备化合物Ic。离去基团X和Y优选是I、Br、Cl或R₁₀SO₂O-(其中R₁₀是如在本文中所定义的烷基、取代烷基、芳基或杂芳基)，更优选X和Y选自I、Br、Cl、硫酸二甲酯、甲磺酸盐、三氟甲磺酸盐和甲苯磺酸盐，尤其更优选Cl和Br。因此，嘧啶4包括二-卤素和磺酰氧基取代的嘧啶，其中前者如二-氯取代的嘧啶是优选的。有利地，此步骤在碱存在下进行，其中所述的碱可以包括碱金属氢化物和醇盐，其中后者如叔丁醇钠是优选的。合适的溶剂包括溶剂如烃、醚、酯、酰胺、酮和醇或上述溶剂的混合物，其中醚如THF是优选的。

然后，化合物(Ic)可以与胺NHR₂₀R₂₁(5)反应，得到式(Id)的化合物。例如，R₂₀和R₂₁两个可以都是氢，或者R₂₀和R₂₁可以独立地选自氢、烷基、取代烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，或者R₂₀和R₂₁可以一起形成杂环基。优选地，R₂₀和R₂₁一起，这样NHR₂₀R₂₁形成任选取代的哌嗪，更优选哌嗪N′-被取代烷基取代，更优选羟基乙基。有利地，此步骤在碱(包括无机和有机碱，其中有机碱如叔胺是优选的)存在下进行。合适的溶剂包括溶剂如烃、卤代烃、醚、酯、酰胺、酮、内酰胺和醇以及上述溶剂的混合物，其中醇的一个非限制性例子是正丁醇，以及DMF(二甲基甲酰胺)、DMA(二甲基乙酰胺)和NMP(N-甲基吡咯烷)作为另外的例子。根据需要，由此生成的式(Id)的化合物可以任选进行进一步加工和/或提纯和结晶。

另一种方法表示在方案3中，其中使用单取代的硫脲化合物(IIIb)。

方案3

从方案3中可以看出，方案2中的β-(P^*)氧基-丙烯酰基苯甲酰胺(IIb)用卤化剂卤化，然后进一步与连接官能性嘧啶基团的单取代硫脲(IIIb)反应，其中R、R′和Y如方案2中所述，得到式(Ic)的中间体2-取代-氨基噻唑-芳香族酰胺。然后，式(Ic)的化合物可以任选与胺NHR₂₀R₂₁(5)反应，得到式(Id)的化合物，和/或根据需要任选进一步加工和/或提纯和结晶。

其它实施方案

在一种实施方案中，所述的方法包括制备式(Ie)化合物的方法，

其中Z₁和Z₅选自氢、烷基、卤素、羟基和烷氧基；

Z₂、Z₃和Z₄选自氢、烷基、卤素、羟基、烷氧基、C(＝O)NR₈和/或NR₈C(＝O)，其中R₈是烷基、环烷基或杂芳基；

包括使下式的化合物，

其中Q是基团-O-P^**，其中P^**这样选择，使得当P^**与所连接的氧原子一起考虑时，Q是离去基团，以及Z₁、Z₂、Z₃、Z₄和Z₅如上所定义，

与卤化剂反应，接着在水存在下与下式的硫脲化合物反应，

得到式(Ie)的化合物

在上面的方法中，在一种实施方案中，R₄是氢，其中该方法得到一种式(If)的化合物

在另一种实施方案中，R₄可以是下式的基团，

其中R₁₅和R₁₆如在本文中所定义，其中所述的方法得到式(Ih)的化合物，

其中R₁₅、R₁₆、Z₁、Z₂、Z₃、Z₄、Z₅、R₂₀和R₂₁如在本文中所定义。

在还有另一种实施方案中，R₄是下式的基团，

其中Y、R₁₅和R₁₆如本文中所定义，其中所述的方法得到式(Ii)的化合物

在还有另一种实施方案中，R₄是下式的基团，

或

在上述方法的另一种实施方案中，例如，当R₄是氢时，得到化合物(If)，该方法可以进一步包括使式(If)的化合物

与式4a的嘧啶化合物反应，

其中X和Y是离去基团，并且R₁₅和R₁₆独立地选自氢、烷基和取代烷基，得到式(Ig)的化合物，

其中Y、R₁₅、R₁₆、Z₁、Z₂、Z₃、Z₄和Z₅如上面所定义。

在上述方法的另一种实施方案中，例如，当R₄是氢时，得到化合物(If)，该方法可以进一步包括使式(If)的化合物

与式4a的嘧啶化合物反应，

(例如与碱反应或通过金属催化)，其中X和Y是离去基团，并且R₁₅和R₁₆独立地选自氢、烷基和取代烷基，得到式(Ig)的化合物，

其中Y、R₁₅、R₁₆、Z₁、Z₂、Z₃、Z₄和Z₅如上所定义。

化合物(Ig)可以任选进一步与式NHR₂₀R₂₁的胺反应，其中R₂₀和R₂₁独立地选自氢、烷基、取代烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，或者R₂₀和R₂₁可以一起形成杂环基，得到式(Ih)的化合物，

其中R₁₅、R₁₆、Z₁、Z₂、Z₃、Z₄、Z₅、R₂₀和R₂₁如上所定义。

在一种实施方案中，所述的胺NHR₂₀R₂₁是任选被羟基(烷基)取代的哌嗪，更优选被羟基乙基取代的哌嗪。

在一种实施方案中，所述的胺NHR₂₀R₂₁是

在另一种实施方案中，当R₄是氢时，得到化合物(If)，该方法可以进一步包括使式(If)的化合物，

与式4b的嘧啶化合物反应，

其中R₁₅、R₁₆、R₂₀和R₂₁如上所定义，

得到式(Ih)的化合物，

上述方法的其它改变形式也在本发明的范围内，包括对2-氨基-噻唑-5-芳香族酰胺进一步加工的方法。

在一种实施方案中，本发明提供了式(IV)化合物的结晶一水合物

在另一种实施方案中，所述的一水合物形式是基本上纯的形式。

在另一种实施方案中，所述的一水合物形式是基本上纯的形式，其中基本上纯的是纯度大于90％。

在另一种实施方案中，式(IV)化合物的一水合物形式的特征为具有基本上根据图1中所示的X-射线粉末衍射图。

在另一种实施方案中，式(IV)化合物的一水合物形式的特征为具有基本上根据图2中所示的示差扫描量热法热分析图和热重量分析法。

在另一种实施方案中，式(IV)化合物的一水合物形式的特征为一种X-射线粉末衍射图(CuKα

在约23℃的温度下)，其包含4个或以上(或者，包含5个或以上，6个或以上，或包含2θ值)选自：18.0±0.2、18.4±0.2、19.2±0.2、19.6±0.2、21.2±0.2、24.5±0.2、25.9±0.2和28.0±0.2的2θ值。

在另一种实施方案中，式(IV)化合物的一水合物形式的特征为一种X-射线粉末衍射图(CuKα在约23℃的温度下)，其包含4个或以上(或者，包含5个或以上，6个或以上，或包含2θ值)选自：4.6±0.2、11.2±0.2、13.8±0.2、15.2±0.2、17.9±0.2、19.1±0.2、19.6±0.2、23.2±0.2、23.6±0.2的2θ值。

在另一种实施方案中，式(IV)化合物的一水合物形式的特征为晶胞参数约等于下列：

晶胞大小：

          

          

空间群    Pbca

分子/晶胞 8

密度(计算值)(g/cm³)  1.300

其中所述的化合物处于约-50℃的温度下。

在另一种实施方案中，在式(IV)化合物的一水合物形式中，每一分子的式(IV)化合物存在一分子的水。

在另一种实施方案中，本发明提供式(IV)化合物的结晶丁醇溶剂合物

在另一种实施方案中，式(IV)化合物的丁醇溶剂合物形式的特征为晶胞参数约等于下列：

晶胞大小：

          

          

空间群    P2₁/a

分子/晶胞 4

密度(计算值)(g/cm³)  1.283

在另一种实施方案中，式(IV)化合物的结晶丁醇溶剂合物的特征为X-射线粉末衍射图(CuKα在约23℃的温度下)，其包含4个或以上(或者，包含5个或以上，6个或以上，或包含2θ值)选自：5.9±0.2、12.0±0.2、13.0±0.2、17.7±0.2、24.1±0.2和24.6±0.2的2θ值。

在另一种实施方案中，本发明涉及式(IV)化合物的结晶乙醇溶剂合物。

在另一种实施方案中，式(IV)化合物的结晶乙醇溶剂合物的特征为X-射线粉末衍射图(CuKα

在约23℃的温度下)，其包含4个或以上(或者，包含5个或以上，6个或以上，或包含2θ值)选自：5.8±0.2、11.3±0.2、15.8±0.2、17.2±0.2、19.5±0.2、24.1±0.2、25.3±0.2和26.2±0.2的2θ值。

在另一种实施方案中，本发明涉及式(IV)化合物的结晶纯形式。

在另一种实施方案中，式(IV)化合物的结晶纯形式的特征为X-射线粉末衍射图(CuKα在约23℃的温度下)，其包含4个或以上(或者，包含5个或以上，6个或以上，或包含2θ值)选自：6.8±0.2、11.1±0.2、12.3±0.2、13.2±0.2、13.7±0.2、16.7±0.2、21.0±0.2、24.3±0.2和24.8±0.2的2θ值。

在另一种实施方案中，本发明描述了药物组合物，其包含治疗有效量的至少一种式(IV)化合物的结晶形式以及药学上可接受的载体。

在另一种实施方案中，本发明描述了一种治疗癌症的方法，其包括给予需要这种治疗的宿主治疗有效量的至少一种式(IV)化合物的结晶形式。

在另一种实施方案中，本发明描述了一种治疗肿瘤疾病的方法，其包括给予需要这种治疗的宿主治疗有效量的至少一种式(IV)化合物的结晶形式，其中所述的疾病选自慢性髓细胞性白血病(CML)、胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumor)(GIST)、小细胞肺癌(SCLC)、非小细胞肺癌(NSCLC)、卵巢癌、黑素瘤、肥大细胞增生病、生殖细胞瘤、急性髓细胞性白血病(AML)、儿科肉瘤(pediatric sarcomas)、乳腺癌、结肠直肠癌、胰腺癌和前列腺癌。

在另一种实施方案中，本发明涉及至少一种式(IV)化合物的结晶形式在制备用于治疗肿瘤疾病的药物中的用途，如在此所述的那些疾病。

在另一种实施方案中，本发明涉及一种治疗如在此所述的肿瘤疾病的方法，其是抗或耐Gleevec(STI-571)的，包括给予需要这种治疗的宿主治疗有效量的式(IV)化合物或至少一种式(IV)化合物的结晶形式。

本发明还包括本发明的可供选择方面的所有组合。可以理解，本发明的任何和所有实施方案可以与任何其它实施方案一起描述本发明的其它实施方案。此外，一种实施方案的任何要素可以与任何实施方案的任何和所有其它要素结合以描述其它实施方案。

实用性

根据本发明的方法制得的式(I)化合物抑制蛋白酪氨酸激酶，尤其是Src-族激酶例如Lck、Fyn、Lyn、Src、Yes、Hck、Fgr和Blk，并由此用于治疗(包括预防和治疗)与蛋白酪氨酸激酶有关的疾病如免疫学和肿瘤学疾病。式(I)的化合物还可以抑制受体酪氨酸激酶包括HER1和HER2，并由此用于治疗增殖性疾病例如牛皮癣和癌症。这些化合物抑制HER1以及其它受体激酶的能力将使得它们可以作为抗血管形成试剂用于治疗疾病例如癌症和糖尿病性视网膜病。“与蛋白酪氨酸激酶有关的疾病”是那些疾病，其由异常的酪氨酸激酶活性产生，和/或其由抑制一种或多种这些酶减轻。例如，Lck抑制剂在治疗许多这些疾病(例如，治疗自身免疫性疾病)中是有价值的，因为Lck抑制阻滞了T细胞激活。T细胞介导的疾病的治疗，包括抑制T细胞激活和增殖，是根据本发明的方法制得的式(I)化合物的特别优选的用途。

式(I)的化合物在治疗与蛋白酪氨酸激酶有关的疾病中的用途例如，但不局限于，治疗一系列疾病例如：移植(例如器官移植、急性移植或异种移植或同种移植(例如在烧伤治疗中使用))排异反应；保护缺血性或再灌注损伤例如在器官移植、心肌梗死、中风或其它原因期间引起的缺血性或再灌注损伤；移植耐受诱导(transplantation tolerance induction)；关节炎(例如类风湿性关节炎、牛皮癣性关节炎或骨关节炎)；多发性硬化；慢性阻塞性肺病(COPD)、例如肺气肿；炎性肠病，包括溃疡性结肠炎和克罗恩病；狼疮(系统性红斑狼疮)；移植物抗宿主病；T-细胞介导的超敏性疾病，包括接触性过敏反应、迟发型超敏反应和谷蛋白敏感性肠病(乳糜泻)；牛皮癣；接触性皮炎(包括由于毒藤导致的那些皮炎)；桥本氏甲状腺炎；斯耶格伦氏综合征；自身免疫性甲状腺机能亢进，例如格雷夫斯氏病；阿狄森(氏)病(肾上腺自身免疫性疾病)；自身免疫性多腺病(亦称自身免疫性多腺综合征)；自身免疫性脱发；恶性贫血；白斑病；自身免疫性脑下垂体机能减退；格-巴二氏综合征；其它自身免疫性疾病；癌症，包括癌症其中Lck或其它Src-族激酶例如Src被激活或过度表达，例如结肠癌和胸腺瘤，以及其中Src-族激酶活性促进肿瘤生长或存活的癌症；肾小球肾炎；血清病；uticaria；变应性疾病例如呼吸性变态反应(respiratory allergies)(哮喘，花粉热，过敏性鼻炎)或皮肤变态反应；scleracierma；蕈样真菌病；急性炎性反应(例如急性呼吸窘迫综合征和缺血性/再灌注损伤)；皮肌炎；斑秃；慢性光化性皮炎；湿疹；贝切特氏病；掌跖脓疱病(Pustulosis palmoplanteris)；坏疽性脓皮症；赛杂瑞氏综合征；特应性皮炎；全身性硬化症(systemic schlerosis)和硬斑病。

本发明的化合物可用于治疗癌症例如慢性髓细胞性白血病(CML)、胃肠道间质瘤(GIST)、小细胞肺癌(SCLC)、非小细胞肺癌(NSCLC)、卵巢癌、黑素瘤、肥大细胞增生病、生殖细胞瘤、急性髓细胞性白血病(AML)、儿科肉瘤、乳腺癌、结肠直肠癌、胰腺癌、前列腺癌以及其它已知与蛋白酪氨酸激酶有关的，例如，SRC、BCR-ABL和c-KIT。本发明的化合物还可用于治疗对化疗剂敏感的以及抗化疗剂的癌症，该化疗剂的靶标是BCR-ABL和c-KIT，例如，Gleevec

(STI-571)。在本发明的一种实施方案中，例如，式(IV)的化合物(包括，但不限于在此所述的化合物的结晶形式，例如结晶一水合物)用于治疗患者抗或耐Gleevec

(STI-571)的疾病例如在此所述的慢性髓细胞性白血病(CML)或其它癌症(包括其它白血病)。

在本发明的另一种实施方案中，式I的化合物和至少一种抗肿瘤剂一起给药。

在此所使用的术语“抗肿瘤剂”或“抗癌药”与″化疗剂″和/或″抗增生性药剂″具有相同的含义，并且是指预防癌症或过度增殖性细胞繁殖的化合物。抗增殖性药通过：(1)干涉细胞复制DNA的能力和(2)在癌细胞中诱发细胞死亡和/或程序性细胞死亡预防癌细胞繁殖。

可以用作抗增殖的细胞毒素剂和/或抗增殖性药的化合物的类型包括下列：

烷基化试剂(包括，但不限于，氮芥类、氮丙啶衍生物、烷基磺酸酯、亚硝基脲和三氮烯)：尿嘧啶氮芥、氮芥、环磷酰胺(Cytoxan@)、异环磷酰胺、美法仑、苯丁酸氮芥、哌泊溴烷、三乙烯-三聚氰胺、三乙烯硫代磷胺(Triethylenethiophosphoramine)、白消安、卡莫司汀、洛莫司汀、链佐星、达卡巴嗪和替莫唑胺。

抗代谢药(包括，但不限于叶酸拮抗药、嘧啶类似物、嘌呤类似物和腺苷脱氨酶抑制剂)：甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶、氟尿苷、阿糖胞苷、6-巯嘌呤、6-硫鸟嘌呤、磷酸氟达拉滨、喷司他丁(Pentostatine)和吉西他滨。

天然产物和它们的衍生物(例如，长春花生物碱，抗肿瘤抗生素，酶，淋巴因子和表鬼臼脂素(epipodophyllotoxins))：长春碱、长春新碱、长春地辛、博来霉素、放线菌素D、柔红霉素、多柔比星、表柔比星、伊达比星、Ara-C、紫杉醇(紫杉醇以Taxol形式可市售购得)、普卡霉素、喷司他丁(Deoxyco-formycin)、丝裂霉素-C、L-门冬酰胺酶、干扰素(尤其是IFN-a)、依托泊苷和替尼泊苷。

其它抗增殖性细胞毒素剂和/或抗增殖性药剂是长春瑞滨、CPT-11、阿那曲唑、来曲唑(letrazole)、卡培他滨、雷洛昔芬、环磷酰胺、ifosamide和屈洛昔芬。

短语“放射治疗”包括但不局限于X-射线或γ-射线，其由外部施加的来源如光束或通过植入小的放射源来释放。放射治疗可以与本发明的化合物结合使用。

当给予本发明的化合物时，还可以结合使用下列物质。

微管作用试剂(Microtubule affecting agents)妨碍细胞有丝分裂，它们的抗增殖的细胞毒性活性在本领域中是公知的。在本发明中使用的微管作用试剂包括但不局限于，allocolchicine(NSC 406042)，Halichondrin B(NSC 609395)，秋水仙碱(NSC 757)，秋水仙碱衍生物(例如，NSC 33410)，多拉司他汀10(NSC376128)，美坦生(maytansine)(NSC 153858)，根霉素(NSC 332598)，紫杉醇(Taxol，NSC 125973)，Taxol

衍生物(例如，衍生物(例如，NSC 608832)，硫代秋水仙碱(NSC 361792)，三苯甲基半胱氨酸(NSC 83265)，硫酸长春碱(NSC 49842)，硫酸长春新碱(NSC 67574)，天然和合成的epothilones包括，但不局限于epothilone A、epothilone B、epothilone C、epothilone D、desoxyepothilone A、desoxyepothilone B、[1S-[1R^*，3R^*(E)，7R^*，10S^*，11R^*，12R^*，16S^*]]-7-11-二羟基-8，8，10，12，16-五甲基-3-[1-甲基-2-(2-甲基-4-噻唑基)乙烯基]-4-氮杂-17氧杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(在2001年7月17日出版的US专利6,262,094中公开)，[1S-[1R^*，3R^*(E)，7R^*，10S^*，11R^*，12R^*，16S^*]]-3-[2-[2-(氨基甲基)-4-噻唑基]-1-甲基乙烯基]-7，11-二羟基-8，8，10，12，16-五甲基-4-17-二氧杂双环[14.1.0]-十七烷-5，9-二酮(在2000年2月17日提交的USSN 09/506,481以及文中实施例7和8中公开)，[1S1R^*，3R^*(E)，7R^*，10S^*，11R^*，12R^*，16S^*]]-7，11-二羟基-8，8，10，12，16-五甲基-3-[1-甲基-2-(2-甲基-4-噻唑基)乙烯基]-4-氮杂-17氧杂双环[14.1.0]-十七烷-5，9-二酮，[1S-[1R^*，3R^*(E)，7R^*，10S^*，11R^*，12R^*，16S^*]]-3-[2-[2-(氨基甲基)-4-噻唑基]-1-甲基乙烯基]-7，11-二羟基-8，8，10，12，16-五甲基-4，17-二氧杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮，及其衍生物；以及其它微管破坏试剂(microtubule-disruptor agents)。其它抗肿瘤剂包括，discodermolide(参见Service，(1996)Science，274：2009)、雌莫司汀、诺考达唑、MAP4等。这些试剂的例子还描述在学术和专利文献中，例如，参见Bulinski(1997)J.Cell Sci.110：3055 3064；Panda(1997)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 94：10560-10564；Muhlradt(1997)Cancer Res.57：3344-3346；Nicolaou(1997)Nature 387：268-272；Vasquez(1997)Mol.Biol.Cell.8：973-985；Panda(1996)J.Biol.Chem271：29807-29812。

在用本发明的化学治疗方法进行治疗之前，如果希望使异常增殖性细胞静止(quiescent)，还可以结合给予患者激素和甾类(包括合成类似物)：17a-炔雌醇、己烯雌酚、睾酮、泼尼松、氟甲睾酮、丙酸甲雄烷酮、睾内酯、醋酸甲地孕酮、甲泼尼龙、甲基睾酮、泼尼松龙、曲安西龙、hlorotrianisene、羟孕酮、氨鲁米特、雌莫司汀、醋酸甲羟孕酮、醋酸亮丙瑞林、氟他胺、托瑞米芬、诺雷德。

同样适合与本发明的化学治疗方法联合使用的还包括抗血管形成药(antiangiogenics)如基质金属蛋白酶抑制剂以及其它VEGF抑制剂，例如抗-VEGF抗体和小分子如ZD6474和SU6668。还可以使用Genetech的抗-Her2抗体。一种合适的EGFR抑制剂是EKB-569(一种不可逆抑制剂)。还可以包括的是对EGFR免疫专一的Imclone抗体C225和src抑制剂。

同样适合作为抗增殖性细胞生长抑制剂使用的是Casodex^TM，其使得雄激素-依赖性的癌症变得非增殖性。细胞生长抑制剂的还有另一例子是抗雌激素药他莫昔芬，其抑制雌激素依赖的乳腺癌的增殖或生长。细胞增生性信号转导的抑制剂是细胞生长抑制剂。例子是表皮生长因子抑制剂、Her-2抑制剂、MEK-1激酶抑制剂、MAPK激酶抑制剂、PI3抑制剂、Src激酶抑制剂和PDGF抑制剂。

如之前所提及的，某些抗增殖药是抗血管形成和抗血管剂(antivascularagents)，通过阻断血液流向实体瘤，通过剥夺它们的营养使癌细胞静止。还可以使用阉割，其也可以使雄激素依赖的癌症变得非增殖性。除外科手术破坏血流以外，饥饿是细胞生长抑制剂的另一例子。一类具体的抗血管细胞生长抑制剂是考布他汀。其他示例性的细胞生长抑制剂包括MET激酶抑制剂、MAP激酶抑制剂、非受体和受体酪氨酸激酶抑制剂、整联蛋白信号抑制剂和胰岛素样生长因子受体抑制剂。

同样合适的是蒽环类抗生素(例如，柔红霉素、多柔比星)、阿糖胞苷(ara-C；Cytosar-U

)；6-硫鸟嘌呤(Tabloid)、米托蒽醌(Novantrone

)和依托泊苷(VePesid)、安吖啶(AMSA)以及全反式维甲酸(ATRA)。

本发明的化合物可以与BCR-ABL抑制剂联合(combination)使用，例如，但不局限于，Gleevec(imatinib，STI-571)或AMN-107，该化合物如下所示

本发明的化合物可以与抗癌化合物联合使用，例如芬太尼、多柔比星、干扰素alfa-n3、帕洛诺司琼、多拉司琼、阿那曲唑、依西美坦、贝伐单抗、比卡鲁胺、顺铂、达卡巴嗪、阿糖胞苷、可乐定、表柔比星、左旋咪唑、托瑞米芬、氟维司群、来曲唑、坦洛新、硝酸镓、曲妥单抗、六甲蜜胺、羟基脲、异环磷酰胺、干扰素α-1、吉非替尼(gefitinib)、格拉司琼、亮丙瑞林、屈大麻酚、甲地孕酮、哌替啶、异丙嗪、吗啡、长春瑞滨、聚乙二醇化非格司亭(pegfilgrastim)、非格司亭、尼鲁米特、硫乙拉嗪、亮丙瑞林、培门冬酶、莫罗单抗-CD3、卟菲尔钠、顺铂、阿巴瑞克、卡罗单抗、钐SM153 lexidronam、紫杉醇、多西紫杉醇、依托泊苷、曲普瑞林、戊柔比星、nofetumomab merpentan锝99m Tc、长春新碱、卡培他滨、strptozocin和昂丹司琼。

因此，本发明提供治疗各种癌症的方法，包括但不限于下列：

癌包括膀胱癌(包括加速性和转移性膀胱癌)、乳腺癌、结肠癌(包括结肠直肠癌)、肾癌、肝癌、肺癌(包括小细胞肺癌和非小细胞肺癌以及肺腺癌)、卵巢癌、前列腺癌、睾丸癌、泌尿生殖道癌、淋巴系统癌、直肠癌、喉癌、胰腺癌(包括外分泌的胰腺癌)、食道癌、胃癌、胆囊癌、子宫颈癌、甲状腺癌和皮肤癌(包括鳞状细胞癌)；

淋巴系(lymphoid lineage)的造血性肿瘤包括白血病、急性淋巴细胞性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、B-细胞淋巴瘤、T-细胞淋巴瘤、何杰金(氏)淋巴瘤、非何杰金(氏)淋巴瘤、毛细胞淋巴瘤、组织细胞淋巴瘤和伯基特淋巴瘤(Burketts lymphoma)；

骨髓系的造血性肿瘤包括急性和慢性髓细胞性白血病、骨髓增生异常综合征、髓细胞性白血病和前髓细胞性白血病；

中枢和外周神经系统的肿瘤包括星形细胞瘤、成神经细胞瘤、神经胶质瘤和神经鞘瘤；

间质源的肿瘤包括纤维肉瘤、rhabdomyoscarcoma和骨肉瘤；和

其它肿瘤包括黑素瘤、xenoderma pigmentosum、keratoactanthoma、精原细胞瘤、甲状腺滤泡癌和畸胎癌。

本发明提供治疗各种非癌性增殖性疾病的方法。

本发明可用于治疗GIST、乳腺癌、胰腺癌、结肠癌、NSCLC、CML和ALL、肉瘤以及各种儿科癌症。

本发明的化合物是蛋白酪氨酸激酶抑制剂，因此，除肿瘤疾病外，还可用于治疗免疫性疾病。美国专利号6,596,746描述了该化合物在免疫性疾病中的用途，该文献在此引入作为参考用于说明该化合物在这些免疫性疾病中的用途。

本发明还包括可用于治疗癌症的药物组合物，在有或者没有药学上可接受的载体或稀释剂存在的情况下，包括给予治疗有效量的本发明的组合(combination)。本发明的药物组合物包含一种或多种抗增殖药(式I化合物)以及药学上可接受的载体。所述方法需要肿瘤药与式I化合物联合使用。本发明的组合物可进一步包含一种或多种药学上可接受的其它组分，例如明矾、稳定剂、抗菌剂、缓冲剂、着色剂、芳香剂、佐剂等。所述的抗肿瘤剂，本发明的式I化合物和组合物，可以口服给药或胃肠外给药，胃肠外给药包括静脉内、肌内、腹膜内、皮下、直肠和局部给药。

本发明还提供使用由本发明的方法获得的化合物以进一步制备能够治疗与Src-激酶有关的病症，包括如上所述的病症的药物组合物。所述的组合物可以含有其它治疗药物。药物组合物可根据药物制剂领域公知的技术，使用常规固体或液体载体或稀释剂，以及一种适合于所需给药方式的类型的药物添加剂(例如，赋形剂、粘合剂、防腐剂、稳定剂、调味剂等)进行配制。

所述的药物组合物可以通过适合于所治疗疾病的任何方式给药，其可取决于位点特异性治疗需要或所释放药物的数量。对于与皮肤有关的疾病，局部给药通常是优选的，对于癌性疾病或癌变前疾病，全身性(systematic)治疗是优选的，不过也可以考虑其它给药方式。例如，式(I)的化合物可以经口给药，例如以片剂、胶囊、粒剂、粉剂或液体制剂(包括糖浆)的形式；局部给药，例如以溶液、悬浮液、凝胶剂或软膏剂的形式；舌下给药；口腔给药；胃肠外给药，例如通过皮下、静脉内、肌内或胸骨内注射或输液技术(例如，以无菌可注射水溶液或非水溶液或悬浮液的形式)；鼻内给药，例如通过喷雾吸入；局部给药，例如以乳剂或膏剂的形式；直肠给药，例如以栓剂的形式；或脂质体给药。可以给予含有无毒的、药学上可接受的载体或稀释剂的剂量单位制剂。根据本发明的方法制得的式(I)化合物可以以适于立即释放或缓释的形式给药。立即释放或缓释可以用合适的药物组合物实现，或特别是在缓释的情况中，用装置如皮下植入物或渗透泵来实现。

局部给药的示例性的组合物包括局部载体例如PLASTIBASE(用聚乙烯凝胶化的矿物油)。

口服给药的示例性组合物包括悬浮液，其可以含有例如，用于赋予体积的微晶纤维素，海藻酸或海藻酸钠作为助悬剂，作为粘度增强剂的甲基纤维素，以及增甜剂或芳香剂例如本领域已知的那些；和立即释放片剂其可以含有例如，微晶纤维素、磷酸二钙、淀粉、硬脂酸镁和/或乳糖和/或其它赋形剂、粘合剂、膨胀剂、崩解剂、稀释剂和润滑剂例如本领域已知的那些。式(I)的化合物还可以通过舌下和/或口腔给予经口释放，例如，模制(molded)片剂、压制片剂或冻干片剂。示例性的组合物可以包括快速溶解的稀释剂例如甘露醇、乳糖、蔗糖和/或环糊精。在这些制剂中可以还包括高分子量赋形剂例如纤维素(AVICEL

)或聚乙二醇(PEG)；帮助粘膜粘附的赋形剂例如羟丙基纤维素(HPC)、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、羧甲基纤维素钠(SCMC)和/或马来酸酐共聚物(例如，GANTREZ

)；以及控制释放的试剂例如聚丙烯酸共聚物(例如，CARBOPOL 934)。还可以加入润滑剂、助流剂、调味剂、着色剂和稳定剂以便于制造和使用。

口服给药的组合物的例子是式(IV)化合物、乳糖一水合物(粒内相(intra-granular phase))，微晶纤维素(粒内相)，交联羧甲基纤维素钠(粒内相)，羟丙基纤维素(粒内相)，微晶纤维素(粒外相(extra-granular phase))，交联羧甲基纤维素钠(粒外相)和硬脂酸镁(粒外相)。

鼻内气雾剂或吸入给药的示例性组合物包括溶液，其可以含有例如，苄醇或其它合适的防腐剂，吸收促进剂以改善吸收和/或生物利用度，和/或其它增溶剂或分散剂例如本领域已知的那些。

肠胃外给药的示例性组合物包括可注射溶液或悬浮液，其可以含有例如，合适的无毒、胃肠外可接受的稀释剂或溶剂，例如甘露醇、1，3-丁二醇、水、林格溶液、等渗氯化钠溶液、或其它合适的分散剂或湿润剂和助悬剂，包括合成单-或甘油二酸酯，以及脂肪酸，包括油酸。

直肠给药的示例性组合物包括栓剂，其可以含有例如，合适的无刺激性赋形剂，例如可可脂，合成甘油酯或聚乙二醇，其在正常温度下是固体，但是在直肠腔内液化和/或溶解以释放所述的药物。

式(I)化合物的有效量可以由本领域普通熟练技术人员确定，哺乳动物的示例性剂量为每日约0.05-100mg/kg体重的活性化合物，其可以以单一剂量给药或以分开的分剂量形式给药，例如每日1-4次。可以理解，任何特定患者的具体剂量水平和剂量频率可以变化，并且取决于各种因素，包括所使用具体化合物的活性、该化合物的代谢稳定性和作用持续时间、患者的类型、年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食、给药方式和次数、排泄速度、联合用药以及具体病症的严重程度。优选的治疗对象包括动物，最优选哺乳动物例如人，以及家畜例如狗、猫、马等。因此，当在此使用术语“患者”时，此术语包括所有对象，最优选是哺乳动物，其受Src激酶水平调节的影响。

当静脉内给药时，本发明的化合物包括式IV的化合物的结晶形式，使用本发明的制剂给药。在一种实施方案中，本发明的化合物，通过IV输液在约10分钟-约3小时内，优选在约30分钟-约2小时，更优选在约45分钟-90分钟，以及最优选约1小时给药。典型地，所述的化合物以约0.5mg/m²-65mg/m²，优选约1mg/m²-50mg/m²，更优选约2.5mg/m²-30mg/m²，以及最优选约25mg/m²的剂量静脉内给药。

在患者给定身高和/或体重的情况下，本领域普通熟练技术人员将很容易知道如何将剂量从mg/kg转换为mg/m²(参见，例如http://www.fda.gov/cder/cancer/animalframe.htm)。

如上所述，本发明的化合物包括式IV化合物的结晶形式，可以口服给药、静脉内或两种方式给药。特别地，本发明的方法包括剂量方案例如一天一次给药2-10天，优选每3-9天，更优选每4-8天以及最优选每5天。在一种实施方案中，在治疗周期之间，有3天-5周，或4天-4周，或5天-3周，或1周-2周没有进行治疗。在另一种实施方案中，本发明的化合物包括式IV化合物的结晶形式，可以通过口服、静脉内或通过两种方式给药，一天一次给药三天，其中在治疗周期之间有1周-3周的时间没有进行治疗。在还有另一种实施方案中，本发明的化合物包括式IV化合物的结晶形式，可以通过口服、静脉内或通过两种方式给药，一天一次给药五天，其中在治疗周期之间有1周-3周的时间没有进行治疗。

在另一种实施方案中，本发明化合物(式IV化合物的结晶形式)的给药治疗周期为每天一次连续给药5天，治疗周期之间的时间为2-10天，或者一周。在一种实施方案中，本发明的化合物例如式IV的化合物，每天给药一次连续给药5天，接着2天没有进行治疗。

本发明的化合物，式IV化合物的结晶形式，还可以通过口服、静脉内或通过两种方式给药，每1-10周给药一次，每2-8周给药一次，每3-6周给药一次，或每3周给药一次。

在本发明的另一种方法中，本发明的化合物，式IV化合物的结晶形式，在28天周期中给药，其中所述的化合物在第1、7和14天静脉内给药以及在第21天口服给药。或者，本发明的化合物，式IV化合物的结晶形式，在28天周期中给药，其中所述的式IV化合物在第1天口服给药以及在第7、14和28天静脉内给药。

根据本发明的方法，本发明的化合物，包括式IV化合物，一直给药直到患者表现出反应为止，例如，肿瘤大小减少或直到达到剂量最大容许毒性为止。

在式(I)范围内的化合物可以使用如下所述的试验或其本领域常规熟练技术人员可以预见的改变形式，用于测试作为蛋白激酶抑制剂的活性。

细胞试验

(1)细胞酪氨酸磷酸化

将Jurkat T细胞与测试化合物一起培养，然后通过加入CD3抗体(单克隆抗体G19-4)进行刺激。4分钟后细胞裂解，或在另一个所需的时间通过加入含有NP-40洗涤剂的裂解缓冲液对细胞进行裂解。蛋白磷酸化通过抗-磷酸酪氨酸免疫印迹法进行检测。使人感兴趣的特异性蛋白的磷酸化例如ZAP-70的检测通过免疫沉淀法进行检测，使用抗-ZAP-70抗体接着抗-磷酸酪氨酸免疫印迹法。这些方法描述在中Schieven，G.L.，Mittler，R.S.，Nadler，S.G.，Kirihara，J.M.，Bolen，J.B.，Kanner，S.B.，and Ledbetter，J.A.，“ZAP-70tyrosine kinase，CD45 and T cell receptor involvement in UV and H₂O₂ inducedT cell signal transduction”，J.Biol.Chem.，269，20718-20726(1994)中，这些文献在此引入作为参考。Lck抑制剂抑制由抗-CD3抗体诱导的细胞蛋白的酪氨酸磷酸化。

对于G19-4的制备，参见Hansen，J.A.，Martin，P.J.，Beatty，P.G.，Clark，E.A.，and Ledbetter，J.A.，“Human T lymphocyte cell surface molecules definedby the workshop monoclonal antibodies，”in Leukocyte Typing I，A.Bernard，J.Boumsell，J.Dausett，C.Milstein，and S.Schlossman，eds.(New York：SpringerVerlag)，p.195-212(1984)；and Ledbetter，J.A.，June，C.H.，Rabinovitch，P.S.，Grossman，A.，Tsu，T.T.，and Imboden，J.B.，“Signal transduction through CD4receptors：stimulatory vs.inhibitory activity is regulated by CD4 proximity to theCD3/T cell receptor”，Eur.J.Immunol.，18，525(1988)。

(2)钙试验

Lck抑制剂阻断用抗-CD3抗体刺激的T细胞中的钙动员。将细胞用钙指示剂染料indo-1负载，用抗-CD3抗体例如单克隆抗体G19-4处理，钙动员使用流式细胞计通过记录蓝/紫indo-1比值变化进行测量，如Schieven，G.L.，Mittler，R.S.，Nadler，S.G.，Kirihara，J.M.，Bolen，J.B.，Kanner，S.B.，andLedbetter，J.A.，“ZAP-70 tyrosine kinase，CD45 and T cell receptor involvementin UV and H₂O₂ induced T cell signal transduction”，J.Biol.Chem.，269，20718-20726(1994)中所述，这些文献在此引入作为参考。

(3)增殖试验

Lck抑制剂抑制正常人外周血T细胞的增殖，所述T细胞用抗-CD3抗体加抗-CD28抗体刺激生长。将96孔板用CD3单克隆抗体(例如G19-4)包被，将该抗体结合，然后对板进行洗涤。与板结合的抗体用来刺激细胞。将正常人外周血T细胞与测试化合物加抗-CD28抗体一起加入到孔中以提供共刺激。一段所需的时间(例如3天)后，将[3H]-胸苷加入到细胞中，进一步培养以使标记掺入到新合成的DNA中，收获细胞并在闪烁计数器中计数以测定细胞增殖。

下列实施例用于说明本发明，但不应该解释成对本发明的限制。

实施例

实施例1

中间体的制备：

(S)-1-仲丁基硫脲

在0℃下，向S-仲丁基-胺(7.31g，0.1mol)在氯仿(80mL)中的溶液中缓慢加入苯甲酰基异硫氰酸酯(13.44mL，0.1mol)。将混合物温热至10℃并搅拌10分钟。然后，在减压下除去溶剂，残余物溶于MeOH(80mL)中。将NaOH(4g，0.1mol)的水溶液(10mL)加入到此溶液中，接着混合物在60℃下再搅拌2小时。然后，在减压下除去MeOH，残余物在水(50mL)中搅拌。真空过滤收集沉淀，干燥，得到S-1-仲丁基-硫脲(12.2g，92％收率)。mp133-134℃；¹H NMR(500MHz，DMSO-D₆)δ7.40(s，1H)，7.20(br s，1H)，6.76(s，1H)，4.04(s，1H)，1.41(m，2H)，1.03(d，J＝6.1Hz，3H)，0.81(d，J＝7.7Hz，3H)；¹³CNMR(125MHz，DMSO-D₆)δ182.5，50.8，28.8，19.9，10.3；LRMS m/z133.2(M+H)；元素分析C₅H₁₂N₂S的计算值：C，45.41；H，9.14.；N，21.18；S，24.25.实测值：C，45.49；H，8.88；N，21.32；S，24.27.

实施例2

中间体的制备：

(R)-1-仲丁基硫脲

(R)-1-仲丁基硫脲根据实施例1所列的一般方法进行制备，收率为92％。mp 133-134℃；¹H NMR(500MHz，DMSO)δ0.80(m，3H，J＝7.7)，1.02(d，3H，J＝6.1)，1.41(m，2H)，(3.40，4.04)(s，1H)，6.76(s，1H)，7.20(s，br，1H)，7.39(d，1H，J＝7.2)；¹³C NMR(500MHz，DMSO)δ：10.00，19.56，28.50，50.20，182.00；m/z133.23(M+H)；元素分析C₅H₁₂N₂S的计算值：C，45.41；H，9.14.；N，21.18；S，24.25.实测值：C，45.32；H，9.15；N，21.14；S，24.38.

实施例3

制备：

3A.

在0℃下，向3-氨基-N-甲基-4-甲基苯甲酰胺盐酸盐(1.0g，5mmol)在丙酮(10mL)中的溶液中通过注射器滴加吡啶(1.2mL，15mmol)。加入3-甲氧基丙烯酰氯(0.72mL，6.5mmol)并将反应在室温下搅拌1小时。将溶液再次冷却至0℃，接着通过移液管滴加1N HCl(1.5mL)。将反应混合物搅拌5分钟，然后通过加料漏斗加入水(8.5mL)。在真空中除去丙酮，接着将所得溶液搅拌4小时。在15分钟内开始结晶。搅拌4小时后，将容器在冰浴中冷却30分钟，过滤，接着用冰冷水(2×3mL)漂洗，得到白色固体形式的化合物3A(0.99g，78％收率)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.95(s，1H)，8.12(br s，1H)，7.76(s，1H)，7.29(m，2H)，7.05(d，J＝7.9Hz，1H)，5.47(d，J＝12.3Hz，1H)，3.48(s，3H)，2.54(d，J＝4.7Hz，3H)，2.03(s，3H)；HPLC rt 2.28分钟(条件A).

3B.实施例3

向含有上述化合物3A(0.5g，2.0mmol)的50mL RBF中加入THF(2.5mL)和水(2mL)，接着加入NBS(0.40g，2.22mmol)，接着将该溶液搅拌90分钟。加入R-仲丁基硫脲(实施例2)(267mg)，接着将溶液于75℃加热8小时。加入浓NH₄OH，将pH值调节到10，接着加入EtOH(15mL)。加入水(15mL)，将淤浆搅拌16小时，过滤，用水洗涤，得到浅褐色固体形式的实施例3(0.48g，69％收率，98％纯度)。MS 347.1；HPLC 2.59。

实施例4

制备：

实施例4按照实施例3的方法但使用合适的丙烯酰基(acryl)苯甲酰胺和实施例1进行制备。

实施例5

制备：

N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(6-(4-(3-羟基乙基)哌嗪-1-基)-2-甲基嘧啶-4-基氨基)噻唑-5-甲酰胺(式(IV)化合物)

5A.1-(6-氯-2-甲基嘧啶-4-基)硫脲

向搅拌下的4-氨基-5-氯-2-甲基嘧啶(6.13g，42.7mmol)在THF(24mL)中的淤浆中加入异氰硫基甲酸乙酯(ethyl isothiocyanatoformate)(7.5mL，63.6mmol)，接着将混合物加热至回流。5小时后，加入另一部分的乙基异硫氰酸甲酯(1.0mL，8.5mmol)，10小时后，加入最后一部分的乙基异硫氰酸甲酯(1.5mL，12.7mmol)，接着再将混合物搅拌6小时。所述淤浆在真空中蒸发以除去大部分溶剂，接着向残余物中加入庚烷(6mL)。真空过滤收集固体，用庚烷(2×5mL)洗涤，得到8.01g(68％收率)中间体6-氯-2-甲基嘧啶-4-基氨基碳亚硫酰基(carbamothioyl)氨基甲酸乙酯。

加热6-氯-2-甲基嘧啶-4-基氨基碳亚硫酰基(carbamothioyl)氨基甲酸乙酯(275mg，1.0mmol)和1N氢氧化钠(3.5当量)的溶液并在50℃搅拌2小时。将所得淤浆冷却至20-22℃。真空过滤收集固体，用水洗涤，干燥，得到185mg的1-(6-氯-2-甲基嘧啶-4-基)硫脲(91％收率)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ2.51(S，3H)，7.05(s，1H)，9.35(s，1H)，10.07(s，1H)，10.91(s，1H)；¹³CNMR(125MHz，DMSO-d6)δ：25.25，104.56，159.19，159.33，167.36，180.91.

5B.(E)-N-(2-氯-6-甲基苯基)-3-乙氧基丙烯酰胺

向冷的搅拌下的2-氯-6-甲基苯胺(59.5g，0.42mol)和吡啶(68mL，0.63mol)在THF(600mL)中的溶液中缓慢地加入3-乙氧基丙烯酰氯(84.7g，0.63mol)，同时保持温度在0-5℃的范围内。然后，将混合物温热至20℃并在该温度下搅拌2小时。在0-10℃下加入盐酸(1N，115mL)。将混合物用水(310mL)稀释，所得溶液在真空中浓缩至稠的淤浆。将所述淤浆用甲苯(275mL)稀释并在20-22℃下搅拌15分钟，接着在0℃下搅拌1小时。真空过滤收集固体，用水(2×75mL)洗涤，干燥，得到74.1g(73.6％收率)的(E)-N-(2-氯-6-甲基苯基)-3-乙氧基丙烯酰胺)。¹H NMR(400Hz，DMSO-d₆)δ1.26(t，3H，J＝7Hz)，2.15(s，3H)，3.94(q，2H，J＝7Hz)，5.58(d，1H，J＝12.4Hz)，7.10-7.27(m，2H，J＝7.5Hz)，7.27-7.37(d，1H，J＝7.5Hz)，7.45(d，1H，J＝12.4Hz)，9.28(s，1H)；¹³CNMR(100MHz，CDCl₃)δ：14.57，18.96，67.17，97.99，126.80，127.44，129.07，131.32，132.89，138.25，161.09，165.36.

5C.2-氨基-N-(2-氯-6-甲基苯基)噻唑-5-甲酰胺

在-10至0℃下，向化合物5B(5.00g，20.86mmol)在1，4-二噁烷(27mL)和水(27mL)中的混合物中加入NBS(4.08g，22.9mmol)。将所得淤浆温热并在20-22℃搅拌3小时。加入硫脲(1.60g，21mmol)，接着将混合物加热至80℃。2小时后，将所得溶液冷却至20-22℃并滴加浓氨水(4.2mL)。将所得淤浆在真空中浓缩至约一半体积，接着冷却至0-5℃。真空过滤收集固体，用冷水(10mL)洗涤，干燥，得到5.3g(94.9％收率)的2-氨基-N-(2-氯-6-甲基苯基)噻唑-5-甲酰胺。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ2.19(s，3H)，7.09-7.29(m，2H，J＝7.5)，7.29-7.43(d，1H，J＝7.5)，7.61(s，2H)，7.85(s，1H)，9.63(s，1H)；¹³CNMR(125MHz，DMSO-d6)δ：18.18，120.63，126.84，127.90，128.86，132.41，133.63，138.76，142.88，159.45，172.02.

5D.2-(6-氯-2-甲基嘧啶-4-基氨基)-N-(2-氯-6-甲基苯基)噻唑-5-甲酰胺

向搅拌下的化合物5C(5.00g，18.67mmol)和4，6-二氯-2-甲基嘧啶(3.65g22.4/mmol)在THF(65mL)中的溶液中缓慢地加入30％重量的叔丁醇钠在THF(21.1g，65.36mmol)中的溶液，同时冷却以保持温度在10-20℃之间。将混合物在室温下搅拌1.5小时，接着冷却至0-5℃。缓慢地加入2N盐酸(21.5mL)，接着将混合物在0-5℃搅拌1.75小时。真空过滤收集固体，用水(15mL)洗涤，干燥，得到6.63g(86.4％收率)的化合物5D。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ2.23(s，3H)，2.58(s，3H)，6.94(s，1H)，7.18-7.34，(m，2H，J＝7.5)，7.34-7.46(d，1H，，J＝7.5)，8.31(s，1H)，10.02(s，1H)，12.25(s，1H).

5E.实施例5

向化合物5D(4.00g，10.14mmol)和羟基乙基哌嗪(6.60g，50.69mmol)在正丁醇(40mL)中的混合物中加入DIPEA(3.53mL，20.26mmol)。将所得淤浆在118℃加热4.5小时，然后缓慢地冷却至室温。真空过滤收集固体，用正丁醇(5mL)洗涤，接着干燥。将产物(5.11g)溶于热的80％EtOH-H₂O(80mL)中，所得溶液通过过滤净化。将该热溶液用水(15mL)缓慢地稀释并缓慢地冷却至室温。真空过滤收集固体，用50％乙醇-水(5mL)洗涤，干燥，得到4.27g(83.2％收率)的N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(6-(4-(3-羟基乙基)哌嗪-1-基)-2-甲基嘧啶-4-基氨基)噻唑-5-甲酰胺的一水合物。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ2.23(s，3H)，2.40(s，3H)，2.42(t，2H，J＝6)，2.48(t，4H，J＝6.3)，3.50(m，4H)，3.53(q，2H，J＝6)，4.45(t，1H，J＝5.3)，6.04(s，1H)，7.25(t，1H，J＝7.6)，7.27(dd，1H，J＝7.6，1.7)，7.40(dd，1H，J＝7.6，1.7)，8.21(s，1H)，9.87(s，1H)，11.47.

实施例6

制备：

N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(6-(4-(3-羟基乙基)哌嗪-1-基)-2-甲基嘧啶-4-基氨基)噻唑-5-甲酰胺

在0℃下，向(E)-N-(2-氯-6-甲基苯基)-3-乙氧基丙烯酰胺5B(120mg，0.50mmol)在THF(0.75mL)和水(0.5mL)中的淤浆中加入NBS(98mg，0.55mmol)。将所得混合物温热并在20-22℃搅拌3小时。向此混合物中加入1-(6-氯-2-甲基嘧啶-4-基)硫脲5A(100mg，0.49mmol)，接着将该淤浆在回流下加热和搅拌2小时。将该淤浆冷却至20-22℃，真空过滤收集固体，得到140mg(71％收率)的2-(6-氯-2-甲基嘧啶-4-基氨基)-N-(2-氯-6-甲基苯基)噻唑-5-甲酰胺5D。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ2.23(s，3H)，2.58(s，3H)，6.94(s，1H)，7.18-7.34，(m，2H，J＝7.5)，7.34-7.46(d，1H，，J＝7.5)，8.31(s，1H)，10.02(s，1H)，12.25(s，1H).

按照步骤5E，将化合物5D进一步加工成N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(6-(4-(3-羟基乙基)哌嗪-1-基)-2-甲基嘧啶-4-基氨基)噻唑-5-甲酰胺。

实施例7

制备：

N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(6-(4-(3-羟基乙基)哌嗪-1-基)-2-甲基嘧啶-4-基氨基)噻唑-5-甲酰胺

7A.2-[4-(6-氯-2-甲基-嘧啶-4-基)-哌嗪-1-基]-乙醇

在室温下，将2-哌嗪-1-基-乙醇(8.2g，63.1mmol)加入到4，6-二氯-2-甲基嘧啶(5.2g，31.9mmol)在二氯甲烷(80mL)中的溶液中。将混合物搅拌两小时，接着加入三乙胺(0.9ml)。将混合物在室温下搅拌20小时。所得固体过滤。滤饼用二氯甲烷(20mL)洗涤。将滤液浓缩，得到一种油。将此油在高真空中干燥20小时，得到一种固体。将此固体与庚烷(50ml)一起在室温下搅拌5小时。过滤，得到白色固体形式的7C(8.13g)。

7B.实施例7

向250ml圆底烧瓶中加入化合物5C(1.9g，7.1mmol)、化合物7C(1.5g，5.9mmol)、K₂CO₃(16g，115.7mmol)、Pd(OAc)₂(52mg，0.23mmol)和BINAP(291mg，0.46mmol)。将烧瓶放置在真空中并用氮气冲洗。加入甲苯(60mL)。将所得悬浮液加热至100-110℃并在此温度下搅拌20小时。冷却至室温后，将混合物施加于硅胶柱上。柱子首先用EtOAc洗脱，然后用含10％MeOH的EtOAc洗脱。最后，柱子用10％的在MeOH/90％EtOAc中的2M氨溶液洗。收集含所需产物的级分(fractions)，浓缩，得到黄色固体形式的化合物IV(2.3g)。

分析方法

固态核磁共振(SSNMR)

所有固态C-13NMR用Bruker DSX-400，400MHz核磁共振波谱仪进行测量。高分辨率波谱使用高功率质子去耦和TPPM脉冲序列以及在约12kHz具有魔角旋转(MAS)的斜坡振幅(ramp amplitude)交叉极化(RAMP-CP)技术获得(A.E.Bennett等，J.Chem.Phys.，1995，103，6951)，(G.Metz，X.Wu和S.O.Smith，J.Magn.Reson.A，.1994，110，219-227)。在每次试验中，将约70mg样品装入罐状设计(canister-design)的氧化锆旋转体(rotor)中。化学位移(δ)以在38.56ppm具有高频共振的外金刚烷(external adamantane)为基准(W.L.Earland D.L.VanderHart，J.Magn.Reson.，1982，48，35-54)。

X-射线粉末衍射

本领域普通熟练技术人员应当理解，取决于所使用的测量条件，所获得的X-射线衍射图具有一定的测量误差。特别地，通常已知，X-射线衍射图中的强度可以随所使用的测量条件而波动。应进一步理解，相对强度也可能随实验条件而改变，因此，不应考虑强度的精确数量级(exact order)。此外，对于常规X-射线衍射图，衍射角的测量误差典型地约5％或更少，对于上述衍射角，应考虑这样程度的测量误差。因此，应当理解，本发明的晶形不局限于其X-射线衍射图完全等同于在此公开的附图中所述的X-射线衍射图的那些晶形。其X-射线衍射图基本上等同于附图中所示的任何晶形都落入本发明的范围之内。本领域普通熟练技术人员能够确定X-射线衍射图之间是否基本相同。

化合物(IV)的结晶形式的X-射线粉末衍射数据使用BrukerGADDS(BRUKER AXS，Inc.，5465 East Cheryl Parkway Madison，WI 53711USA)(General Area Detector Diffraction System)manual chi platform goniometer获得。将粉末样品放在1mm或更小直径的薄壁玻璃毛细管中；在数据收集期间旋转该毛细管。样品-检测器距离是17cm。辐射线是Cu Kα(45kV 111mA，)。数据从3＜2θ＜35°收集，其中样品暴露时间至少300秒。

单晶X-射线

所有单晶数据在Bruker-Nonius上收集(BRUKER AXS，Inc.，5465 EastCheryl Parkway Madison，WI 53711 USA)Kappa CCD 2000系统使用Cu Kα辐射线并仅对洛伦兹-极化因子进行修正。测得的强度数据用在收集程序组(Collect program suite)(Data collection and processing user interface：Collect：Data collection software，R.Hooft，Nonius B.V.，1998)中的HKL2000软件包进行索引和加工(Otwinowski，Z.& Minor，W.(1997)in MacromolecularCrystallography，eds.Carter，W.C.Jr & Sweet，R.M.(Academic，NY)，Vol.276，pp.307-326)。

结构通过直接法解析，在所观察的反射基础上使用带较少局部修饰的SDP软件包(SDP，Structure Determination Package，Enraf-Nonius，Bohemia NY11716 Scattering factors，including f′and f″，in the SDP^* software were taken fromthe″International Tables for Crystallography″，Kynoch Press，Birmingham，England，1974；Vol IV，表2.2A和2.3.1)或结晶学软件包MAXUS(maXussolution and refinement software suite：S.Mackay，C.J.Gilmore，C.Edwards，M.Tremayne，N.Stewart，K.Shankland.maXus：a computer program for thesolution and refinement of crystal structures from diffraction data)进行精算(refined)。

衍生的原子参数(坐标和温度因素)通过全矩阵最小二乘法进行精算。在精算中最小的函数是∑_w(|F_o|-|F_c|)²。R定义为∑||F_o|-|F_c||/∑|F_o|而R_w＝[∑_w(|F_o|-|F_c|)₂/∑_w|F_o|²]^1/2其中w是基于观察强度误差的合适的加权函数。在精算的所有阶段都检测示差图(Difference maps)。将氢引入具有各向同性温度因子的理想的位置，但没有改变氢参数。

衍生的原子参数(坐标和温度因素)通过全矩阵最小二乘法进行精算。在精算中最小的函数是∑_w(|F_o|-|F_c|)²。R定义为∑||F_o|-|F_c||/∑|F_o|而R_w＝[∑_w(|F_o|-|F_c|)₂/∑_w|F_o|²]^1/2其中w是基于观察强度误差的合适的加权函数。在精算的所有阶段都检测示差图。将氢引入具有各向同性温度因子的理想的位置，但没有改变氢参数。

示差扫描量热法

用于测试结晶形式的DSC仪是TA Instruments

Q1000型。DSC室/样品室用100mL/min的超高纯度氮气进行吹扫。该仪器用高纯铟进行校准。使用这种方法测得的样品温度的准确性在约+/-1℃的范围之内，熔化热可以在一个约+/-5％的相对误差内进行测定。将样品放入开口铝DSC盘中，并相对于空的参考盘进行测量。将至少2mg样品粉末放入到盘的底部，轻轻地抽头降压(tapped down)，以保证与盘良好接触。精确地测定样品的重量，记录到毫克的百分之一。将所述仪器以10℃/分钟的速度在25至350℃的温度范围内进行程序加热。

热流，其通过样品重量归一化(normalized)，对测得的样品温度绘图。数据以瓦特/克(″W/g″)的单位记录。该图用朝下的吸热峰制成。在此分析中，吸热的熔化峰用外推的始点温度、峰值温度和熔化热进行评价。

热重量分析(TGA)

用于测试结晶形式的TGA仪是TAInstruments

Q500型。将至少10毫克样品以10℃/min的加热速率在25℃至约350℃的温度范围之间进行分析。

实施例8

制备：

N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(6-(4-(3-羟基乙基)哌嗪-1-基)-2-甲基嘧啶-4-基氨基)噻唑-5-甲酰胺(IV)的结晶一水合物

获得结晶一水合物形式的结晶方法的实施例在此给出。

加入48g式(IV)化合物。

加入约1056mL(22mL/g)乙醇，或其它合适的醇。

加入约144mL水。

通过加热到约75℃，溶解该悬浮液。

任选的：净化过滤(Polish filter)，将式(IV)化合物溶液在75℃下通过预热过滤器转移到接收器中。

用43mL乙醇和5mL水的混合物冲洗溶解(dissolution)反应器和转移管线。

将接收器中的物质加热到75-80℃并在75-80℃下保持以获得完全的溶解。

加入约384mL水，水的加入速度使物料温度保持在75-80℃之间。

冷却至75℃，并任选地加入一水合物晶种。晶种对获得一水合物来说不是必须的，但是可以更好地控制结晶。

冷却至70℃并在70℃保持约1小时。

在2小时内从70℃冷却至5℃，并在0至5℃的温度下保持至少2小时。

过滤该结晶淤浆。

用96mL乙醇和96mL水的混合物洗涤所述的滤饼。

在≤50℃下在减压下干燥所述物质，直到通过KF测得的水含量为3.4至4.1％为止，得到41g(85M％)。

或者，一水合物可以通过下面获得：

1)化合物IV的乙酸盐的水溶液用一水合物接种并在80℃下加热，得到大块的(bulk)一水合物。

2)化合物IV的乙酸盐的水溶液用一水合物接种。在室温下静置数天后，形成大块的一水合物。

3)化合物IV的含水悬浮液用一水合物接种并在70℃下加热4小时，得到大块的一水合物。在没有接种晶种的情况下，化合物IV的含水淤浆在室温下82天后没有变化。

4)将化合物IV在溶剂如NMP或DMA中的溶液用水处理直到溶液变成浑浊为止，并在75-85℃下保持数小时。冷却和过滤后，分离得到一水合物。

5)将化合物IV在乙醇、丁醇和水中的溶液加热。将一水合物晶种加入到该热溶液中，然后冷却。冷却和过滤后分离得到一水合物。

本领域普通熟练技术人员将理解，式(IV)化合物的一水合物可以由图1中所示的XRPD表示或由表1中所示的代表性样品峰表示。

式(IV)化合物的一水合物的XRPD的代表性峰表示在表1中。

                    表1.

2-θ          

        高度

17.994        4.9257        915

18.440        4.8075        338

19.153        4.6301        644

19.599        4.5258        361

21.252        4.1774        148

24.462        3.6359        250

25.901        3.4371        133

28.052        3.1782        153

XRPD还可以通过下列进行表征，包含选自下面的2θ值：4.6±0.2，11.2±0.2，13.8±0.2，15.2±0.2，17.9±0.2，19.1±0.2，19.6±0.2，23.2±0.2，23.6±0.2。所述的XRPD还可以通过下列2θ值进行表征，选自：18.0±0.2，18.4±0.2，19.2±0.2，19.6±0.2，21.2±0.2，24.5±0.2，25.9±0.2和28.0±0.2。

在室温(+25℃)下获得单晶X-射线数据。分子结构被证实为式(IV)化合物的一水合物形式。

从在25℃下的X-射线分析中获得式(IV)化合物的一水合物的下列晶胞参数：

Z′＝1；Vm＝621

空间群    Pbca

分子/晶胞 8

密度(计算值)(g/cm³)  1.354

其中Z’＝每个不对称单位的药物分子的数目。Vm＝V(晶胞)/(Z药物分子/晶胞)。

单晶X-射线数据也在-50℃下获得。式(IV)化合物的一水合物形式的特征为晶胞参数约等于下列：

晶胞大小：

          

          

空间群    Pbca

分子/晶胞 8

密度(计算值)(g/cm³)  1.300

其中所述的化合物处于约-50℃的温度下。

模拟XRPD由室温下的精确的(refined)原子参数计算得到。

式(IV)化合物的一水合物由如图2中所示的DSC表示。所述DSC的特征在于在约95℃至130℃之间有一宽峰。此峰是宽的和可变的并且相当于损失一个水合水，如TGA图所示。所述DSC还在约287℃具有一特征峰，其相当于式(IV)化合物的脱水形式的熔化物。

式(IV)化合物的一水合物的TGA与DSC一起表示在图2中。TGA表示从50℃到175℃有3.48％重量损失。该重量损失相当于从式(IV)化合物中损失一个水合水。

该一水合物也可以通过从醇溶剂中结晶制备，醇溶剂例如为甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、戊醇和水。

实施例9

制备：

N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(6-(4-(3-羟基乙基)哌嗪-1-基)-2-甲基嘧啶-4-基氨基)噻唑-5-甲酰胺(IV)的结晶正丁醇溶剂合物

在回流(116-118℃)下，在约1g/25mL溶剂的浓度下，通过将化合物(IV)溶解在1-丁醇中，制得式(IV)化合物的结晶丁醇溶剂合物。当冷却时，该丁醇溶剂合物从溶液中结晶出来。过滤，用丁醇洗涤，接着干燥。

下列晶胞参数由在室温下获得的结晶丁醇溶剂合物的X-射线分析获得：

Z′＝1；Vm＝728

空间群    P2₁/a

分子/晶胞 4

密度(计算值)(g/cm³)  1.283

其中Z’＝每个不对称单位的药物分子的数目。Vm＝V(晶胞)/(Z药物分子/晶胞)。

本领域普通熟练技术人员将会理解，式(IV)化合物的丁醇溶剂合物可以由图3中所示的XRPD表示或由样品的代表性峰值表示。该结晶丁醇溶剂合物的代表性峰值是下列2θ值：5.9±0.2，12.0±0.2，13.0±0.2，17.7±0.2，24.1±0.2和24.6±0.2。

实施例10

制备：

N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(6-(4-(3-羟基乙基)哌嗪-1-基)-2-甲基嘧啶-4-基氨基)噻唑-5-甲酰胺(IV)的结晶乙醇溶剂合物

向100-mL圆底烧瓶中加入4.00g(10.1mmol)的5D(含2.3面积％的5C)，6.60g(50.7mmol)的7B，80mL正丁醇和2.61g(20.2mmol)的DIPEA。将所得淤浆加热至120℃并在120℃保持4.5小时，其中HPLC分析表明，相对于化合物IV，存在0.19相对面积％的残余5D。将该均匀混合物冷却至20℃，并搅拌过夜。将所得结晶过滤。湿滤饼用正丁醇(2×10mL)洗涤，得到白色结晶产物。HPLC分析表明，此物质包含99.7面积％的化合物IV和0.3面积％的5C。

将所得湿滤饼返回到100mL反应器中，装入56mL(12mL/g)的200度乙醇。在80℃，再加入25mL乙醇。向此混合物中加入10mL水，这将引起快速溶解。除去加热，在75-77℃观察结晶。将结晶淤浆进一步冷却至20℃接着过滤。湿滤饼用10mL的1∶1乙醇∶水洗涤一次，接着用10mL正庚烷洗涤一次。该湿滤饼含1.0％水(由KF测定)和8.10％挥发物(由LOD测定)。该物质在60℃/30in Hg下干燥17小时，得到3.55g(70M％)仅含0.19％水(由KF测定)的物质，由HPLC测得99.87面积％。然而，¹H NMR谱显示该乙醇溶剂合物已经形成。

下列晶胞参数由在-40℃下获得的结晶乙醇溶剂合物(二-乙醇盐)的X-射线分析获得：

Z′＝1；Vm＝758

空间群    P2₁/a

分子/晶胞 4

密度(计算值)(g/cm³)  1.271

其中Z’＝每个不对称单位的药物分子的数目。Vm＝V(晶胞)/(Z药物分子/晶胞)。

本领域普通熟练技术人员将会理解，式(IV)化合物的乙醇溶剂合物可以由图4中所示的XRPD表示或由样品的代表性峰值表示。该结晶乙醇溶剂合物的代表性峰值是下列2θ值：5.8±0.2，11.3±0.2，15.8±0.2，17.2±0.2，19.5±0.2，24.1±0.2，25.3±0.2和26.2±0.2。

实施例11

制备：

结晶N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(6-(4-(3-羟基乙基)哌嗪-1-基)-2-甲基嘧啶-4-基氨基)噻唑-5-甲酰胺(IV)(纯形式的N-6)

向化合物5D(175.45g，0.445mol)和羟基乙基哌嗪(289.67g，2.225mol)在NMP(1168mL)中的混合物中加入DIPEA(155mL，0.89mmol)。将悬浮液在110℃加热25分钟(获得溶液)，然后冷却至约90℃。将所得热溶液滴加到热(80℃)水(8010mL)中，在约80℃的温度下保持。将所得悬浮液在80℃搅拌15分钟，然后缓慢地冷却至室温。真空过滤收集固体，用水(2×1600mL)洗涤，在55-60℃下在真空中干燥，得到192.45g(88.7％收率)的N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(6-(4-(3-羟基乙基)哌嗪-1-基)-2-甲基嘧啶-4-基氨基)噻唑-5-甲酰胺。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ2.24(s，3H)，2.41(s，3H)，2.43(t，2H，J＝6)，2.49(t，4H，J＝6.3)，3.51(m，4H)，3.54(q，2H，J＝6)，4.46(t，1H，J＝5.3)，6.05(s，1H)，7.26(t，1H，J＝7.6)，7.28(dd，1H，J＝7.6，1.7)，7.41(dd，1H，J＝7.6，1.7)，8.23(s，1H)，9.89(s，1H)，11.48.KF0.84；DSC：285.25℃(始点)，286.28℃(最大)。

下列晶胞参数由在23℃下获得的纯结晶化合物IV的X-射线分析获得：

Z′＝1；Vm＝630

空间群    P2₁/a

分子/晶胞 4

密度(计算值)(g/cm³)  1.286

其中Z’＝每个不对称单位的药物分子的数目。Vm＝V(晶胞)/(Z药物分子/晶胞)。

本领域普通熟练技术人员将会理解，式(IV)化合物的结晶形式可以由图5中所示的XRPD表示或由样品的代表性峰值表示。结晶纯形式(N-6)的代表性峰值为下列2θ值：6.8±0.2，11.1±0.2，12.3±0.2，13.2±0.2，13.7±0.2，16.7±0.2，21.0±0.2，24.3±0.2和24.8±0.2。

实施例12

制备：

结晶N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(6-(4-(3-羟基乙基)哌嗪-1-基)-2-甲基嘧啶-4-基氨基)噻唑-5-甲酰胺(IV)(纯形式的T1H1-7)

纯形式的标题化合物可以将式(IV)化合物的一水合物形式在高于脱水温度下进行加热而制得。

下列晶胞参数由在25℃下获得的纯结晶(T1H1-7)化合物IV的X-射线分析获得：

Z′＝1；Vm＝615

空间群   Pbca

密度(计算值)(g/cm³)  1.317

其中Z’＝每个不对称单位的药物分子的数目。Vm＝V(晶胞)/(Z药物分子/晶胞)。

本领域普通熟练技术人员将会理解，式(IV)化合物的纯结晶形式(T1H1-7)可以由图6中所示的XRPD表示或由样品的代表性峰值表示。结晶纯形式(T1H1-7)的代表性峰值为下列2θ值：8.0±0.2，9.7±0.2，11.2±0.2，13.3±0.2，17.5±0.2，18.9±0.2，21.0±0.2，22.0±0.2。

显然，根据以上教导，本发明的许多修饰和改变是可能的。因此，应该理解，在所附的权利要求书的范围内，本发明的做法可以与在此具体所述的做法不同。

Claims (4)

1.式(IV)化合物的结晶一水合物

其特征在于X-射线粉末衍射图基本上与图1中所示的一致。

2.药物组合物，其包含治疗有效量的权利要求1所述的结晶一水合物以及药学上可接受的载体。

3.权利要求1所述的结晶一水合物在制备治疗癌症的药物中的用途。

4.权利要求1所述的结晶一水合物在制备治疗肿瘤疾病的药物中的用途，其中所述的疾病选自慢性髓细胞性白血病、胃肠道间质瘤、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、卵巢癌、黑素瘤、肥大细胞增生病、生殖细胞瘤、急性髓细胞性白血病、儿科肉瘤、乳腺癌、结肠直肠癌、胰腺癌和前列腺癌。

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