CN1962863A

CN1962863A - 抑制人PEG10基因表达的PEG10－siRNA及其药物应用

Info

Publication number: CN1962863A
Application number: CNA2005101101195A
Authority: CN
Inventors: 黄健; 韩泽广; 林昀
Original assignee: Shanghai Human Genome Research Center
Current assignee: Chinese National Human Genome Center at Shanghai; Shanghai Human Genome Research Center
Priority date: 2005-11-08
Filing date: 2005-11-08
Publication date: 2007-05-16

Abstract

本发明公开了一种抑制人PEG10基因表达的PEG10－siRNA；此外，本发明还公开了该PEG10－siRNA的药物应用。本发明PEG10－siRNA可以高效特异地降低PEG10基因的表达水平，抑制肿瘤细胞，对肝癌等肿瘤的基因治疗有着广泛的应用前景。

Description

抑制人PEG10基因表达的PEG10-siRNA及其药物应用

技术领域

本发明涉及一种短干扰核糖核酸siRNA，尤其涉及一种抑制人PEG10基因表达的PEG10-siRNA；此外，本发明还涉及PEG10-siRNA的药物应用。

背景技术

随着环境污染的日益严重和其它生存条件的变化，近年来肝癌病人的死亡率逐渐升高。我国是原发性肝细胞肝癌(primaryhepatocellularcarcinoma，HCC)的高发地区，其死亡率已占我国部分农村和城市的第一、二位，是严重影响我国人民健康的重大疾病，每年世界上有38.6万人死于肝癌，而其中的45％是在中国。目前认为，肝癌的发生、发展，亦和其它恶性肿瘤一样，是多基因、多因素参与的复杂过程，包括体细胞基因突变、抑癌基因的丢失、癌基因的激活和过表达等等，许多癌基因、抑癌基因，及相关基因的异常激活或失活是肝癌发生的分子基础。因此，对肝癌进行基因治疗方面的研究具有一定的实际意义。

肝癌受多个基因的网络调控作用，PEG10基因，定位于人类染色体7q21上，PEG10位于SGCE基因附近，其小鼠同族体最近显示被印迹。因此在人类染色体7q21中很可能存在一类新的印迹基因群。两种预知的公开阅读框架(ORF1 and ORF2)的分析显示ORF1和ORF2相对于一些脊椎动物的蛋白质是同源的。有胎盘的PEG10在早期缺氧阶段是低调节的，在怀孕的11-12周内是高活性的。PEG10的外因表达对致瘤活性有作用。PEG10蛋白质与媒介SIAH1相关联，PEG10的过量表达降低了媒介SIAH1的细胞死亡。结构显示，印迹基因PEG10在人类肝细胞的肝脏再生及抑癌中会起到重要的作用。

从理论上讲，若能降低PEG10基因在肝癌组织中的表达水平，就可以抑制肝癌肿瘤的发生和发展。1998年发现的RNA干扰(RNAi)现象，是从低等生物到高等生物都普遍存在的一种防御外源性核酸侵扰的生理机制，它是由siRNA介导的高度特异的转录后基因沉默效应(Nature.1998，391：806-811)。通过siRNA发挥导向作用来激活RNA诱导的沉默复合体(RNA-induced silencing complex，RISC)，由其中的RNaseIII来高度特异地切割靶mRNA。RNA干扰技术已发展成为抑制靶基因表达的一个有效工具。

虽然RNAi的研究尚处于不完善阶段，但它已被认为是一种生物体固有的基因组“免疫系统”，使得它具有许多反义核酸不可比的优势。siRNA与反义核酸相比具有如下一些特点：前者是由双链RNA分子在细胞内发挥作用，由于细胞内可能存在某种稳定机制，使得siRNA的稳定性较高；siRNA的正义链和反义链在反应过程中都是必需的，而不是仅由一条反义链来发挥作用；siRNA本身没有催化活性，要求有许多辅助因子形成复合体才能发挥作用；在某些生物体内发现RNAi还具有遗传性，扩增性和可传递性。正是由于这些特点，使RNAi与传统的反义技术相比具有高效性，高特异性的特点(Lancet.2001，358(9282)：489-497)。目前已有大量报道表明，向哺乳动物和人类的细胞中导入siRNA可以引起靶mRNA分子高效特异的降解。

鉴于PEG10-siRNA的重要功能，研究和开发PEG10-siRNA具有重要意义。

发明内容

本发明要解决的技术问题之一是提供一种抑制人PEG10基因表达的PEG10-siRNA。

本发明要解决的技术问题之二是提供一种上述PEG10-siRNA在制备抗肝癌肿瘤基因治疗药物中的应用。

为了解决上述技术问题，本发明通过如下技术方案实现：

本发明以RNA干扰技术为基础，从GenBank中获得PEG10基因的cDNA序列，根据siRNA靶序列选择的基本原则，针对PEG10基因设计了长度为21个核苷酸的siRNA。

本发明提供一种抑制人PEG10基因表达的PEG10-siRNA，所述的PEG10-siRNA的序列及作用部位如下：

1)GUGCCAGAUCUUCAUGGAAtt，UUCCAUGAAGAUCUGGCACtt，作用于人PEG10mRNA的第555-575位；

2)GUAGUUGUGCAUCAGGUAGtt，CUACCUGAUGCACAACUACtt，作用于人PEG10mRNA的第681-701位；

3)ACUGACGGAUGGGCGCUUCtt，GAAGCGCCCAUCCGUCAGUtt，作用于人PEG10mRNA的第10-30位；

4)UCCAGAACGAGGAGCAGCGtt，CGCUGCUCCUCGUUCUGGAtt，作用于人PEG10mRNA的第42-62位；

5)CGAGGAGCAGCGAUAUAGGtt，CCUAUAUCGCUGCUCCUCGtt，作用于人PEG10mRNA的第49-69位；

6)CUGAAUUGCGCUUUACAUGtt，CAUGUAAAGCGCAAUUCAGtt，作用于人PEG10mRNA的第84-104位；

7)UUGCGCUUUACAUGCGCUGtt，CAGCGCAUGUAAAGCGCAAtt，作用于人PEG10mRNA的第89-109位；

8)UCUGAGCUGCAGAAGAGUAtt，UACUCUUCUGCAGCUCAGAtt，作用于人PEG10mRNA的第113-133位；

9)ACGAUGCGAUUAGCCAGCCtt，GGCUGGCUAAUCGCAUCGUtt，作用于人PEG10mRNA的第155-175位；

10)CAGCGCUUCAUUGCGCUGCtt，GCAGCGCAAUGAAGCGCUGtt，作用于人PEG10mRNA的第180-200位；

11)CUGCAGAGCGCCUCCUCCUtt，AGGAGGAGGCGCUCUGCAGtt，作用于人PEG10mRNA的第211-231位；

12)GAAGGAGUGGAAGAGGGGGtt，CCCCCUCUUCCACUCCUUCtt，作用于人PEG10mRNA的第534-554位；

13)GGAGUGGAAGAGGGGGCCAtt，UGGCCCCCUCUUCCACUCCtt，作用于人PEG10mRNA的第537-557位；

14)GAGGGGGCCAGGAUCCAGGtt，CCUGGAUCCUGGCCCCCUCtt，作用于人PEG10mRNA的第546-566位；

15)GUGAAGCUACAGCUGGGAGtt，CUCCCAGCUGUAGCUUCACtt，作用于人PEG10mRNA的第582-602位；

16)GCUACAGCUGGGAGGUCUCtt，GAGACCUCCCAGCUGUAGCtt，作用于人PEG10mRNA的第587-607位；

17)CCGUCACCCUGGGUCCCGAtt，UCGGGACCCAGGGUGACGGtt，作用于人PEG10mRNA的第618-638位；

18)CAACAACAACAACAACAACtt，GUUGUUGUUGUUGUUGUUGtt，作用于人PEG10mRNA的第670-690位；

19)CAACAACAACAACAACUCCtt，GGAGUUGUUGUUGUUGUUGtt，作用于人PEG10mRNA的第673-693位；

20)CAACAACAACAACUCCAAGtt，CUUGGAGUUGUUGUUGUUGtt，作用于人PEG10mRNA的第676-696位；

21)CAACAACAACUCCAAGCACtt，GUGCUUGGAGUUGUUGUUGtt，作用于人PEG10mRNA的第679-699位；

22)CAACAACUCCAAGCACACCtt，GGUGUGCUUGGAGUUGUUGtt，作用于人PEG10mRNA的第682-702位；

23)CAACUCCAAGCACACCGGCtt，GCCGGUGUGCUUGGAGUUGtt，作用于人PEG10mRNA的第685-705位；

24)CUCCAAGCACACCGGCCAUtt，AUGGCCGGUGUGCUUGGAGtt，作用于人PEG10mRNA的第688-708位；

25)GCACACCGGCCAUAAGAGUtt，ACUCUUAUGGCCGGUGUGCtt，作用于人PEG10mRNA的第694-714位；

26)GAGUGCGUGUGUCCCCAACtt，GUUGGGGACACACGCACUCtt，作用于人PEG10mRNA的第709-729位；

27)CAUGACCGAACGAAGAAGGtt，CCUUCUUCGUUCGGUCAUGtt，作用于人PEG10mRNA的第727-747位；

28)CGAAGAAGGGACGAGCUCUtt，AGAGCUCGUCCCUUCUUCGtt，作用于人PEG10mRNA的第737-757位；

29)GAAGGGACGAGCUCUCUGAtt，UCAGAGAGCUCGUCCCUUCtt，作用于人PEG10mRNA的第741-761位；

30)GGGACGAGCUCUCUGAAGAtt，UCUUCAGAGAGCUCGUCCCtt，作用于人PEG10mRNA的第744-764位；

31)GAGAUCAACAACUUAAGAGtt，CUCUUAAGUUGUUGAUCUCtt，作用于人PEG10mRNA的第761-781位；

32)CAACUUAAGAGAGAAGGUCtt，GACCUUCUCUCUUAAGUUGtt，作用于人PEG10mRNA的第769-789位；

33)CUUAAGAGAGAAGGUCAUGtt，CAUGACCUUCUCUCUUAAGtt，作用于人PEG10mRNA的第772-792位；

34)GAGAGAAGGUCAUGAAGCAtt，UGCUUCAUGACCUUCUCUCtt，作用于人PEG10mRNA的第777-797位；

35)GGUCAUGAAGCAGUCGGAGtt，CUCCGACUGCUUCAUGACCtt，作用于人PEG10mRNA的第784-804位；

36)GCAGUCGGAGGAGAACAACtt，GUUGUUCUCCUCCGACUGCtt，作用于人PEG10mRNA的第793-813位；

37)CAACAACCUGCAGAGCCAGtt，CUGGCUCUGCAGGUUGUUGtt，作用于人PEG10mRNA的第808-828位；

38)CAACCUGCAGAGCCAGGUGtt，CACCUGGCUCUGCAGGUUGtt，作用于人PEG10mRNA的第811-831位；

39)CCUGCAGAGCCAGGUGCAGtt，CUGCACCUGGCUCUGCAGGtt，作用于人PEG10mRNA的第814-834位；

40)GCUCACAGAGGAGAACACCtt，GGUGUUCUCCUCUGUGAGCtt，作用于人PEG10mRNA的第835-855位；

41)CACCACCCUUCGAGAGCAAtt，UUGCUCUCGAAGGGUGGUGtt，作用于人PEG10mRNA的第850-870位；

42)GUGGAACCCACCCCUGAGGtt，CCUCAGGGGUGGGUUCCACtt，作用于人PEG10mRNA的第869-889位；

43)CCCACCCCUGAGGAUGAGGtt，CCUCAUCCUCAGGGGUGGGtt，作用于人PEG10mRNA的第875-895位；

44)UAGAGGAAGAGUGCCCAGAtt，UCUGGGCACUCUUCCUCUAtt，作用于人PEG10mRNA的第948-968位；

45)GAGUGCCCAGAAGACCUCCtt，GGAGGUCUUCUGGGCACUCtt，作用于人PEG10mRNA的第956-976位；

46)GACCUCCCAGAGAAGUUCGtt，CGAACUUCUCUGGGAGGUCtt，作用于人PEG10mRNA的第968-988位；

47)GUUCGAUGGCAACCCAGACtt，GUCUGGGUUGCCAUCGAACtt，作用于人PEG10mRNA的第982-1002位；

48)CCCAGACAUGCUGGCUCCUtt，AGGAGCCAGCAUGUCUGGGtt，作用于人PEG10mRNA的第994-1014位；

49)GAGCACCAGGGAUUUCUCAtt，UGAGAAAUCCCUGGUGCUCtt，作用于人PEG10mRNA的第1045-1065位；

50)GCAUGAUGACCGGCCGUGCtt，GCACGGCCGGUCAUCAUGCtt，作用于人PEG10mRNA的第1095-1115位；

51)AGCUGGAGCGCUCCCACUAtt，UAGUGGGAGCGCUCCAGCUtt，作用于人PEG10mRNA的第1134-1154位；

52)CUACCCAGCUUUCAUGAUGtt，CAUCAUGAAAGCUGGGUAGtt，作用于人PEG10mRNA的第1165-1185位；

53)AUGAAGCAUGUCUUUGAAGtt，CUUCAAAGACAUGCUUCAUtt，作用于人PEG10mRNA的第1187-1207位；

54)GCAUGUCUUUGAAGACCCUtt，AGGGUCUUCAAAGACAUGCtt，作用于人PEG10mRNA的第1192-1212位；

55)GACCCUCAGAGGCGAGAGGtt，CCUCUCGCCUCUGAGGGUCtt，作用于人PEG10mRNA的第1205-1225位；

56)ACGCAAGAUCAGACGCCUGtt，CAGGCGUCUGAUCUUGCGUtt，作用于人PEG10mRNA的第1231-1251位；

57)GAUCAGACGCCUGCGCCAAtt，UUGGCGCAGGCGUCUGAUCtt，作用于人PEG10mRNA的第1237-1257位；

58)GGCAUGGGGUCUGUCAUCGtt，CGAUGACAGACCCCAUGCCtt，作用于人PEG10mRNA的第1256-1276位；

59)UGCUUUCCAGAUGAUUGCCtt，GGCAAUCAUCUGGAAAGCAtt，作用于人PEG10mRNA的第1285-1305位；

60)CGAGCCUGCGCUGAUUGACtt，GUCAAUCAGCGCAGGCUCGtt，作用于人PEG10mRNA的第1321-1341位；

61)GUCGCUGUCUGCUCUGAUUtt，AAUCAGAGCAGACAGCGACtt，作用于人PEG10mRNA的第1402-1422位；

62)GGCUGGCCAGGGCUGCUGCtt，GCAGCAGCCCUGGCCAGCCtt，作用于人PEG10mRNA的第1446-1466位；

63)GCCACGCUCGCCACCCCGGtt，CCGGGGUGGCGAGCGUGGCtt，作用于人PEG10mRNA的第1474-1494位；

64)GCCACCACCAGGUAGAUCCtt，GGAUCUACCUGGUGGUGGCtt，作用于人PEG10mRNA的第1518-1538位；

65)CCGAGCCGGUGGGAGGUGCtt，GCACCUCCCACCGGCUCGGtt，作用于人PEG10mRNA的第1539-1559位；

66)AGAAAGACGCAGAAAGCUGtt，CAGCUUUCUGCGUCUUUCUtt，作用于人PEG10mRNA的第1585-1605位；

67)AGACGCAGAAAGCUGAACCtt，GGUUCAGCUUUCUGCGUCUtt，作用于人PEG10mRNA的第1589-1609位；

68)AGCUGAACCUGUGCCUCUAtt，UAGAGGCACAGGUUCAGCUtt，作用于人PEG10mRNA的第1599-1619位；

69)CCUGUGCCUCUACUGUGGAtt，UCCACAGUAGAGGCACAGGtt，作用于人PEG10mRNA的第1606-1626位；

70)CAGGAGGUCACUACGCUGAtt，UCAGCGUAGUGACCUCCUGtt，作用于人PEG10mRNA的第1626-1646位；

71)UUGUCCUGCCAAGGCCUCAtt，UGAGGCCUUGGCAGGACAAtt，作用于人PEG10mRNA的第1648-1668位；

72)GGCCUCAAAGUCUUCGCCGtt，CGGCGAAGACUUUGAGGCCtt，作用于人PEG10mRNA的第1660-1680位；

73)AGUCUUCGCCGGCGGGAAAtt，UUUCCCGCCGGCGAAGACUtt，作用于人PEG10mRNA的第1668-1688位；

74)ACUCCCCGGCCCCGCUGUAtt，UACAGCGGGGCCGGGGAGUtt，作用于人PEG10mRNA的第1686-1706位；

75)AUAAUAAGGUCCCCACAAGtt，CUUGUGGGGACCUUAUUAUtt，作用于人PEG10mRNA的第1732-1752位；

76)UAAGGUCCCCACAAGAUGAtt，UCAUCUUGUGGGGACCUUAtt，作用于人PEG10mRNA的第1736-1756位；

77)GGUCCCCACAAGAUGAUGCtt，GCAUCAUCUUGUGGGGACCtt，作用于人PEG10mRNA的第1739-1759位；

78)GAUGAUGCCUCAUCUCCACtt，GUGGAGAUGAGGCAUCAUCtt，作用于人PEG10mRNA的第1750-1770位；

79)GUGAUGCUCCAGAUUCAUCtt，GAUGAAUCUGGAGCAUCACtt，作用于人PEG10mRNA的第1777-1797位；

80)CUUCAUUGAUCACGAAUAUtt，AUAUUCGUGAUCAAUGAAGtt，作用于人PEG10mRNA的第1854-1874位；

81)UGGAAUUCCUCUAAGAAUCtt，GAUUCUUAGAGGAAUUCCAtt，作用于人PEG10mRNA的第1884-1904位；

82)UUCCUCUAAGAAUCAAGGAtt，UCCUUGAUUCUUAGAGGAAtt，作用于人PEG10mRNA的第1889-1909位；

83)GAAUCAAGGACUGGCCAAUtt，AUUGGCCAGUCCUUGAUUCtt，作用于人PEG10mRNA的第1898-1918位；

84)UCAAGGACUGGCCAAUACUtt，AGUAUUGGCCAGUCCUUGAtt，作用于人PEG10mRNA的第1901-1921位；

85)GGACUGGCCAAUACUUGUGtt，CACAAGUAUUGGCCAGUCCtt，作用于人PEG10mRNA的第1905-1925位；

86)UACUUGUGGAAGCAAUUGAtt，UCAAUUGCUUCCACAAGUAtt，作用于人PEG10mRNA的第1916-1936位；

87)GCAAUUGAUGGGCGCCCCAtt，UGGGGCGCCCAUCAAUUGCtt，作用于人PEG10mRNA的第1927-1947位；

88)UUGAUGGGCGCCCCAUAGCtt，GCUAUGGGGCGCCCAUCAAtt，作用于人PEG10mRNA的第1931-1951位；

89)ACUCACGACCUGAUAGUUGtt，CAACUAUCAGGUCGUGAGUtt，作用于人PEG10mRNA的第1972-1992位；

90)UAUCACAUGGAGCACUCGAtt，UCGAGUGCUCCAUGUGAUAtt，作用于人PEG10mRNA的第2091-2111位；

91)UACUGCCGCUACCACUGCCtt，GGCAGUGGUAGCGGCAGUAtt，作用于人PEG10mRNA的第2131-2151位；

92)UACCACCAUCGCUCCCACCtt，GGUGGGAGCGAUGGUGGUAtt，作用于人PEG10mRNA的第2165-2185位；

93)CCGCCACUCUAUUAUCCAGtt，CUGGAUAAUAGAGUGGCGGtt，作用于人PEG10mRNA的第2197-2217位；

94)CCAGUGAGGUAUUACUAUGtt，CAUAGUAAUACCUCACUGGtt，作用于人PEG10mRNA的第2239-2259位；

95)UGUGUACACUCCAGUAGAUtt，AUCUACUGGAGUGUACACAtt，作用于人PEG10mRNA的第2265-2285位；

96)AUGAUACCUGGAGCACACAtt，UGUGUGCUCCAGGUAUCAUtt，作用于人PEG10mRNA的第2329-2349位；

97)CCUGAAAUGGCAGCUCUUCtt，GAAGAGCUGCCAUUUCAGGtt，作用于人PEG10mRNA的第2383-2403位；

98)AUGGCAGCUCUUCGAGAUUtt，AAUCUCGAAGAGCUGCCAUtt，作用于人PEG10mRNA的第2389-2409位；

99)GAUGGGCUAAUUACUCCAAtt，UUGGAGUAAUUAGCCCAUCtt，作用于人PEG10mRNA的第2428-2448位；

100)UUACUCCAACGAUUGCACCtt，GGUGCAAUCGUUGGAGUAAtt，作用于人PEG10mRNA的第2438-2458位；

101)CGAUUGCACCUAAUGGAGCtt，GCUCCAUUAGGUGCAAUCGtt，作用于人PEG10mRNA的第2447-2467位；

102)UGGAGCCCAAGUUCUCCAGtt，CUGGAGAACUUGGGCUCCAtt，作用于人PEG10mRNA的第2460-2480位；

103)GUUCUCCAGGUGAAGAGGGtt，CCCUCUUCACCUGGAGAACtt，作用于人PEG10mRNA的第2470-2490位；

104)GAGGGGGUGGAAACUGCAAtt，UUGCAGUUUCCACCCCCUCtt，作用于人PEG10mRNA的第2484-2504位；

105)ACUGCAAGUUUCUUAUGAUtt，AUCAUAAGAAACUUGCAGUtt，作用于人PEG10mRNA的第2496-2516位；

106)GUUUCUUAUGAUUGCCGAGtt，CUCGGCAAUCAUAAGAAACtt，作用于人PEG10mRNA的第2503-2523位；

107)UCAGUAUCCUCGCCUAUCUtt，AGAUAGGCGAGGAUACUGAtt，作用于人PEG10mRNA的第2547-2567位；

108)AUUUAGAAGACCAAGCACAtt，UGUGCUUGGUCUUCUAAAUtt，作用于人PEG10mRNA的第2573-2593位；

109)GACCAAGCACACCUGGCAAtt，UUGCCAGGUGUGCUUGGUCtt，作用于人PEG10mRNA的第2581-2601位；

110)GCACACCUGGCAACGUACAtt，UGUACGUUGCCAGGUGUGCtt，作用于人PEG10mRNA的第2587-2607位；

111)CGUACACUGAAUUCGUACCtt，GGUACGAAUUCAGUGUACGtt，作用于人PEG10mRNA的第2600-2620位；

112)UUCGUACCUCAAAUACCUGtt，CAGGUAUUUGAGGUACGAAtt，作用于人PEG10mRNA的第2611-2631位；

113)AUACCUGGAUACCAAACAUtt，AUGUUUGGUAUCCAGGUAUtt，作用于人PEG10mRNA的第2623-2643位；

114)ACAUACCCCACAUAUGCCGtt，CGGCAUAUGUGGGGUAUGUtt，作用于人PEG10mRNA的第2638-2658位；

115)GGAAGAUCACUAUAUGUACtt，GUACAUAUAGUGAUCUUCCtt，作用于人PEG10mRNA的第2713-2733位；

116)GAUCACUAUAUGUACCUGUtt，ACAGGUACAUAUAGUGAUCtt，作用于人PEG10mRNA的第2717-2737位；

117)UCCACACUGGUACCGCCAGtt，CUGGCGGUACCAGUGUGGAtt，作用于人PEG10mRNA的第2751-2771位；

118)AUACCUGUCAUGUCCUUCAtt，UGAAGGACAUGACAGGUAUtt，作用于人PEG10mRNA的第2854-2874位；

119)UUUAUUCCUGUUCAGCUUCtt，GAAGCUGAACAGGAAUAAAtt，作用于人PEG10mRNA的第2891-2911位；

120)UCAGUGACUGUGUGCUAAAtt，UUUAGCACACAGUCACUGAtt，作用于人PEG10mRNA的第2914-2934位；

121)ACGGCUAUGGAAGGUUAGGtt，CCUAACCUUCCAUAGCCGUtt，作用于人PEG10mRNA的第2981-3001位；

122)GGUUAGGGCCACUCUGGACtt，GUCCAGAGUGGCCCUAACCtt，作用于人PEG10mRNA的第2993-3013位；

123)CAGAGUAUUUGCCAAUAAAtt，UUUAUUGGCAAAUACUCUGtt，作用于人PEG10mRNA的第3062-3082位；

124)UAAUUAAUAAGUUUACUUUtt，AAAGUAAACUUAUUAAUUAtt，作用于人PEG10mRNA的第3123-3143位；

125)UUAAUAAGUUUACUUUCCAtt，UGGAAAGUAAACUUAUUAAtt，作用于人PEG10mRNA的第3126-3146位；

126)UAAGUUUACUUUCCAGCCAtt，UGGCUGGAAAGUAAACUUAtt，作用于人PEG10mRNA的第3130-3150位；

127)GUUUACUUUCCAGCCAGUCtt，GACUGGCUGGAAAGUAAACtt，作用于人PEG10mRNA的第3133-3153位；

128)CCUCCAUCACCAUCUAAAUtt，AUUUAGAUGGUGAUGGAGGtt，作用于人PEG10mRNA的第3180-3200位；

129)AUUAUAGGCUGCCAAAUUUtt，AAAUUUGGCAGCCUAUAAUtt，作用于人PEG10mRNA的第3197-3217位；

130)AUUUGCUGUUUAACAUUUAtt，UAAAUGUUAAACAGCAAAUtt，作用于人PEG10mRNA的第3212-3232位；

131)CAUUUACAGAGAAGCUGAUtt，AUCAGCUUCUCUGUAAAUGtt，作用于人PEG10mRNA的第3225-3245位；

132)GCUGAUACAAACGCAGGAAtt，UUCCUGCGUUUGUAUCAGCtt，作用于人PEG10mRNA的第3238-3258位；

133)ACGCAGGAAAUGCUGAUUUtt，AAAUCAGCAUUUCCUGCGUtt，作用于人PEG10mRNA的第3248-3268位；

134)AUGCUGAUUUCUUUAUGGAtt，UCCAUAAAGAAAUCAGCAUtt，作用于人PEG10mRNA的第3257-3277位；

135)AUCACUGGAGGACUGAGGCtt，GCCUCAGUCCUCCAGUGAUtt，作用于人PEG10mRNA的第3336-3356位；

136)UUAUCGGUGCAGUGUGGAAtt，UUCCACACUGCACCGAUAAtt，作用于人PEG10mRNA的第3374-3394位；

137)AGGCUUCCGUGAUCCUCUCtt，GAGAGGAUCACGGAAGCCUtt，作用于人PEG10mRNA的第3393-3413位；

138)ACUUCACCGUCUUCAAACUtt，AGUUUGAAGACGGUGAAGUtt，作用于人PEG10mRNA的第3427-3447位；

139)ACUCCAUUUCCAUGGUUCUtt，AGAACCAUGGAAAUGGAGUtt，作用于人PEG10mRNA的第3443-3463位；

140)UUCUCAAGGAGCAGCAACUtt，AGUUGCUGCUCCUUGAGAAtt，作用于人PEG10mRNA的第3467-3487位；

141)GGAGCAGCAACUCGACUGGtt，CCAGUCGAGUUGCUGCUCCtt，作用于人PEG10mRNA的第3474-3494位；

142)CUCGACUGGUUCUCCCAGGtt，CCUGGGAGAACCAGUCGAGtt，作用于人PEG10mRNA的第3484-3504位；

143)ACCCUUGUGACAUGAAACAtt，UGUUUCAUGUCACAAGGGUtt，作用于人PEG10mRNA的第3513-3533位；

144)GAAAGUGCUCUCUCAGAUGtt，CAUCUGAGAGAGCACUUUCtt，作用于人PEG10mRNA的第3547-3567位；

145)AGUGCUCUCUCAGAUGGACtt，GUCCAUCUGAGAGAGCACUtt，作用于人PEG10mRNA的第3550-3570位；

146)GACUAUGUCUUCACAUCAUtt，AUGAUGUGAAGACAUAGUCtt，作用于人PEG10mRNA的第3582-3602位；

147)AUCACAUGUACCCAAUGACtt，GUCAUUGGGUACAUGUGAUtt，作用于人PEG10mRNA的第3608-3628位；

148)UGACUCCGGCUUUGACACAtt，UGUGUCAAAGCCGGAGUCAtt，作用于人PEG10mRNA的第3623-3643位；

149)CACCUUACCAUCAUCAUGCtt，GCAUGAUGAUGGUAAGGUGtt，作用于人PEG10mRNA的第3643-3663位；

150)AGCAUUAAACCUGGUAACCtt，GGUUACCAGGUUUAAUGCUtt，作用于人PEG10mRNA的第3679-3699位；

151)ACCUGGUAACCAGAGAUUAtt，UAAUCUCUGGUUACCAGGUtt，作用于人PEG10mRNA的第3687-3707位；

152)CCAGAGAUUACUGGUGGCUtt，AGCCACCAGUAAUCUCUGGtt，作用于人PEG10mRNA的第3696-3716位；

153)AUGUGACCACCUCUCAAUCtt，GAUUGAGAGGUGGUCACAUtt，作用于人PEG10mRNA的第3739-3759位；

154)UCACCUUUGAGGGCUAAAGtt，CUUUAGCCCUCAAAGGUGAtt，作用于人PEG10mRNA的第3756-3776位；

155)UCCCAUACCCAACUCUUAAtt，UUAAGAGUUGGGUAUGGGAtt，作用于人PEG10mRNA的第3801-3821位；

156)CUCUUAAGAGAUUUGUCCUtt，AGGACAAAUCUCUUAAGAGtt，作用于人PEG10mRNA的第3813-3833位；

157)GAGAUUUGUCCUGGUACUUtt，AAGUACCAGGACAAAUCUCtt，作用于人PEG10mRNA的第3820-3840位；

158)GAAUCUAUCCAUGUGUCUGtt，CAGACACAUGGAUAGAUUCtt，作用于人PEG10mRNA的第3900-3920位；

159)UCUAUCCAUGUGUCUGCCUtt，AGGCAGACACAUGGAUAGAtt，作用于人PEG10mRNA的第3903-3923位；

160)AUGAUUUAGCACCCAGAUUtt，AAUCUGGGUGCUAAAUCAUtt，作用于人PEG10mRNA的第3996-4016位；

161)GGGGGACAUCUUUGAAGAAtt，UUCUUCAAAGAUGUCCCCCtt，作用于人PEG10mRNA的第4034-4054位；

162)GAAGAGGAAUUAGGGCUGUtt，ACAGCCCUAAUUCCUCUUCtt，作用于人PEG10mRNA的第4050-4070位；

163)GAGGAAUUAGGGCUGUGGAtt，UCCACAGCCCUAAUUCCUCtt，作用于人PEG10mRNA的第4053-4073位；

164)UUAGGGCUGUGGACACUGUtt，ACAGUGUCCACAGCCCUAAtt，作用于人PEG10mRNA的第4059-4079位；

165)GGAUCAGAAUCCACGUAAUtt，AUUACGUGGAUUCUGAUCCtt，作用于人PEG10mRNA的第4137-4157位；

166)AGGUCCCUCUAGAGGAUGGtt，CCAUCCUCUAGAGGGACCUtt，作用于人PEG10mRNA的第4161-4181位；

167)GCCUCAGAAAGCAACUCAAtt，UUGAGUUGCUUUCUGAGGCtt，作用于人PEG10mRNA的第4210-4230位；

168)AGCAACUCAAAGGACUCAAtt，UUGAGUCCUUUGAGUUGCUtt，作用于人PEG10mRNA的第4219-4239位；

169)CUCAAAGGACUCAAAGCAAtt，UUGCUUUGAGUCCUUUGAGtt，作用于人PEG10mRNA的第4224-4244位；

170)AGGACUCAAAGCAACGGACtt，GUCCGUUGCUUUGAGUCCUtt，作用于人PEG10mRNA的第4229-4249位；

171)AGCAACGGACAACACAAGAtt，UCUUGUGUUGUCCGUUGCUtt，作用于人PEG10mRNA的第4238-4258位；

172)CGGACAACACAAGAGUUGUtt，ACAACUCUUGUGUUGUCCGtt，作用于人PEG10mRNA的第4243-4263位；

173)CACAAGAGUUGUCUUCAGCtt，GCUGAAGACAACUCUUGUGtt，作用于人PEG10mRNA的第4250-4270位；

174)GAGUUGUCUUCAGCCCAGUtt，ACUGGGCUGAAGACAACUCtt，作用于人PEG10mRNA的第4255-4275位；

175)GCUUUGUGCUAACCUGGGAtt，UCCCAGGUUAGCACAAAGCtt，作用于人PEG10mRNA的第4297-4317位；

176)CCUGGGACUGCCUGACUUCtt，GAAGUCAGGCAGUCCCAGGtt，作用于人PEG10mRNA的第4309-4329位；

177)UUCUUUGCUACUGCCAUUGtt，CAAUGGCAGUAGCAAAGAAtt，作用于人PEG10mRNA的第4391-4411位；

178)GAGGCAGGCUUUAAUUGCCtt，GGCAAUUAAAGCCUGCCUCtt，作用于人PEG10mRNA的第4486-4506位；

179)UUGCCAAAGCACAGUUUGAtt，UCAAACUGUGCUUUGGCAAtt，作用于人PEG10mRNA的第4500-4520位；

180)AGCACAGUUUGAGCAGUAGtt，CUACUGCUCAAACUGUGCUtt，作用于人PEG10mRNA的第4507-4527位；

181)CAACAUGGUGUAUAUCUCAtt，UGAGAUAUACACCAUGUUGtt，作用于人PEG10mRNA的第4530-4550位；

182)CAUGGUGUAUAUCUCAAAUtt，AUUUGAGAUAUACACCAUGtt，作用于人PEG10mRNA的第4533-4553位；

183)AUUGCCUGACAUGAAGAGGtt，CCUCUUCAUGUCAGGCAAUtt，作用于人PEG10mRNA的第4550-4570位；

184)GAGGAGUCUAACGGUGAAGtt，CUUCACCGUUAGACUCCUCtt，作用于人PEG10mRNA的第4565-4585位；

185)GUGGUGACUAGGCUUUCAAtt，UUGAAAGCCUAGUCACCACtt，作用于人PEG10mRNA的第4691-4711位；

186)ACUUCCAUUGAAUUACAAAtt，UUUGUAAUUCAAUGGAAGUtt，作用于人PEG10mRNA的第4712-4732位；

187)UUACAAAGCACUAUCCAGUtt，ACUGGAUAGUGCUUUGUAAtt，作用于人PEG10mRNA的第4724-4744位；

188)AGCACUAUCCAGUUCUUAUtt，AUAAGAACUGGAUAGUGCUtt，作用于人PEG10mRNA的第4730-4750位；

189)AUGAUAAGUAACAUAGUGUtt，ACACUAUGUUACUUAUCAUtt，作用于人PEG10mRNA的第4766-4786位；

190)UAUUCCUUUACUGUGAACUtt，AGUUCACAGUAAAGGAAUAtt，作用于人PEG10mRNA的第4789-4809位；

191)CUUCUUACAAUGCUGUGAAtt，UUCACAGCAUUGUAAGAAGtt，作用于人PEG10mRNA的第4806-4826位；

192)UGCUGUGAAUGAGAGGCUCtt，GAGCCUCUCAUUCACAGCAtt，作用于人PEG10mRNA的第4816-4836位；

193)UGAGAGGCUCCUCAGAACUtt，AGUUCUGAGGAGCCUCUCAtt，作用于人PEG10mRNA的第4825-4845位；

194)CUGGAGCAUUUGUAUAAUAtt，UAUUAUACAAAUGCUCCAGtt，作用于人PEG10mRNA的第4842-4862位；

195)UAAUUCAUCCUGUUCAUCUtt，AGAUGAACAGGAUGAAUUAtt，作用于人PEG10mRNA的第4859-4879位；

196)UUCAUCCUGUUCAUCUUCAtt，UGAAGAUGAACAGGAUGAAtt，作用于人PEG10mRNA的第4862-4882位；

197)CAUCAUAUAUAAUUUCAAUtt，AUUGAAAUUAUAUAUGAUGtt，作用于人PEG10mRNA的第4888-4908位；

198)UUUCAAUUCUAUCAAUUGGtt，CCAAUUGAUAGAAUUGAAAtt，作用于人PEG10mRNA的第4900-4920位；

199)UUCUAUCAAUUGGGCCUUUtt，AAAGGCCCAAUUGAUAGAAtt，作用于人PEG10mRNA的第4906-4926位；

200)GAGAAACCUAAUUGGCUAUtt，AUAGCCAAUUAGGUUUCUCtt，作用于人PEG10mRNA的第4958-4978位；

201)ACCUAAUUGGCUAUUUAAUtt，AUUAAAUAGCCAAUUAGGUtt，作用于人PEG10mRNA的第4963-4983位；

202)UGGAAUCAGAAAGCUUGUCtt，GACAAGCUUUCUGAUUCCAtt，作用于人PEG10mRNA的第5008-5028位；

203)UCAGAAAGCUUGUCAAUCAtt，UGAUUGACAAGCUUUCUGAtt，作用于人PEG10mRNA的第5013-5033位；

204)AGCUUGUCAAUCACUCAUGtt，CAUGAGUGAUUGACAAGCUtt，作用于人PEG10mRNA的第5019-5039位；

205)UGGUGCAUUUGUGCUUCUGtt，CAGAAGCACAAAUGCACCAtt，作用于人PEG10mRNA的第5063-5083位；

206)GAGUCACUUCUGUUUACCUtt，AGGUAAACAGAAGUGACUCtt，作用于人PEG10mRNA的第5094-5114位；

207)GUAUCAAUUCAUCCUCCAUtt，AUGGAGGAUGAAUUGAUACtt，作用于人PEG10mRNA的第5116-5136位；

208)UUCAUCCUCCAUACAUUUGtt，CAAAUGUAUGGAGGAUGAAtt，作用于人PEG10mRNA的第5123-5143位；

209)AUUUACAGUUGUCAAUUGAtt，UCAAUUGACAACUGUAAAUtt，作用于人PEG10mRNA的第5165-5185位；

210)UUGAUCUUCAAGCUGCAGGtt，CCUGCAGCUUGAAGAUCAAtt，作用于人PEG10mRNA的第5180-5200位；

211)GCUGCAGGGUGCCUAGAAAtt，UUUCUAGGCACCCUGCAGCtt，作用于人PEG10mRNA的第5191-5211位；

212)AUGGGCCGUUGUCUGUAGCtt，GCUACAGACAACGGCCCAUtt，作用于人PEG10mRNA的第5209-5229位；

213)GUCUGGAGAAGUUCACCAAtt，UUGGUGAACUUCUCCAGACtt，作用于人PEG10mRNA的第5271-5291位；

214)GUUCACCAACGACAAGAACtt，GUUCUUGUCGUUGGUGAACtt，作用于人PEG10mRNA的第5281-5301位；

215)CGACAAGAACGAUUAGGGAtt，UCCCUAAUCGUUCUUGUCGtt，作用于人PEG10mRNA的第5290-5310位；

216)UAUGCUGCUGUGGGUUAACtt，GUUAACCCACAGCAGCAUAtt，作用于人PEG10mRNA的第5312-5332位；

217)CAACUCAGAAAGUCCCUGAtt，UCAGGGACUUUCUGAGUUGtt，作用于人PEG10mRNA的第5330-5350位；

218)CUCAGAAAGUCCCUGAUCCtt，GGAUCAGGGACUUUCUGAGtt，作用于人PEG10mRNA的第5333-5353位；

219)AGUCCCUGAUCCACAUUUGtt，CAAAUGUGGAUCAGGGACUtt，作用于人PEG10mRNA的第5340-5360位；

220)AUGUAGAUGUUAAGGAUAAtt，UUAUCCUUAACAUCUACAUtt，作用于人PEG10mRNA的第5433-5453位；

221)GGAUAAGUAAUUCUAAAUUtt，AAUUUAGAAUUACUUAUCCtt，作用于人PEG10mRNA的第5446-5466位；

222)GUAAUUCUAAAUUUAUUAUtt，AUAAUAAAUUUAGAAUUACtt，作用于人PEG10mRNA的第5452-5472位；

223)UUCUAAAUUUAUUAUUCUAtt，UAGAAUAAUAAAUUUAGAAtt，作用于人PEG10mRNA的第5456-5476位；

224)AUUUAUUAUUCUAUAGUUUtt，AAACUAUAGAAUAAUAAAUtt，作用于人PEG10mRNA的第5462-5482位；

225)GUUUGGUUAAGUUUCCUUUtt，AAAGGAAACUUAACCAAACtt，作用于人PEG10mRNA的第5485-5505位；

226)GUUUCCUUUCACUCAAUUGtt，CAAUUGAGUGAAAGGAAACtt，作用于人PEG10mRNA的第5495-5515位；

227)UCAAAUUUAUGUUAAUUGGtt，CCAAUUAACAUAAAUUUGAtt，作用于人PEG10mRNA的第5531-5551位；

228)AUUUAUGUUAAUUGGAUCCtt，GGAUCCAAUUAACAUAAAUtt，作用于人PEG10mRNA的第5535-5555位；

229)AUGGCUUUAUUCAUAAGAAtt，UUCUUAUGAAUAAAGCCAUtt，作用于人PEG10mRNA的第5585-5605位；

230)AUCAAUGGAAUUUGAUAUCtt，GAUAUCAAAUUCCAUUGAUtt，作用于人PEG10mRNA的第5613-5633位；

231)UGGAAUUUGAUAUCUAAAGtt，CUUUAGAUAUCAAAUUCCAtt，作用于人PEG10mRNA的第5618-5638位；

232)UUUGAUAUCUAAAGAAGUUtt，AACUUCUUUAGAUAUCAAAtt，作用于人PEG10mRNA的第5623-5643位；

233)AGAAGUUAGAAAGGGAGCAtt，UGCUCCCUUUCUAACUUCUtt，作用于人PEG10mRNA的第5635-5655位；

234)CAUAAAGGAGAUAGAUGAAtt，UUCAUCUAUCUCCUUUAUGtt，作用于人PEG10mRNA的第5664-5684位；

235)AGGAGAUAGAUGAAUUAGUtt，ACUAAUUCAUCUAUCUCCUtt，作用于人PEG10mRNA的第5669-5689位；

236)UUAGUAAGCAAAUCAGUAGtt，CUACUGAUUUGCUUACUAAtt，作用于人PEG10mRNA的第5683-5703位；

237)GCAAAUCAGUAGUCGAGUUtt，AACUCGACUACUGAUUUGCtt，作用于人PEG10mRNA的第5690-5710位；

238)AUUUACAUUGUUAAUUAAAtt，UUUAAUUAACAAUGUAAAUtt，作用于人PEG10mRNA的第5749-5769位；

239)UUAAAUCAAGAAGGAAGAAtt，UUCUUCCUUCUUGAUUUAAtt，作用于人PEG10mRNA的第5763-5783位；

240)AUCAAGAAGGAAGAAGAUCtt，GAUCUUCUUCCUUCUUGAUtt，作用于人PEG10mRNA的第5767-5787位；

241)GAAGGAAGAAGAUCUAAGAtt，UCUUAGAUCUUCUUCCUUCtt，作用于人PEG10mRNA的第5772-5792位；

242)GGAAGAAGAUCUAAGAGCUtt，AGCUCUUAGAUCUUCUUCCtt，作用于人PEG10mRNA的第5775-5795位；

243)GAAGAUCUAAGAGCUCCCAtt，UGGGAGCUCUUAGAUCUUCtt，作用于人PEG10mRNA的第5779-5799位；

244)GAUCUAAGAGCUCCCAUUGtt，CAAUGGGAGCUCUUAGAUCtt，作用于人PEG10mRNA的第5782-5802位；

245)GAGCUCCCAUUGAUAGGCAtt，UGCCUAUCAAUGGGAGCUCtt，作用于人PEG10mRNA的第5789-5809位；

246)GCCUAGAGAGAACUAGCUAtt，UAGCUAGUUCUCUCUAGGCtt，作用于人PEG10mRNA的第5809-5829位；

247)CUAGCUAAAUUUAUCAUGCtt，GCAUGAUAAAUUUAGCUAGtt，作用于人PEG10mRNA的第5821-5841位；

248)AUUUAUCAUGCUAGGAUAUtt，AUAUCCUAGCAUGAUAAAUtt，作用于人PEG10mRNA的第5829-5849位；

249)ACACAGAAAGUUUACAUACtt，GUAUGUAAACUUUCUGUGUtt，作用于人PEG10mRNA的第5852-5872位；

250)AGUUUACAUACAUUUAUGAtt，UCAUAAAUGUAUGUAAACUtt，作用于人PEG10mRNA的第5860-5880位；

251)GGGUCAAUUUAGUUUGGACtt，GUCCAAACUAAAUUGACCCtt，作用于人PEG10mRNA的第5880-5900位；

252)UUUAGUUUGGACAGUGAGGtt，CCUCACUGUCCAAACUAAAtt，作用于人PEG10mRNA的第5887-5907位；

253)GGAGAAUUAGUCUGAUCAAtt，UUGAUCAGACUAAUUCUCCtt，作用于人PEG10mRNA的第5927-5947位；

254)UUAGUCUGAUCAAAUCGUGtt，CACGAUUUGAUCAGACUAAtt，作用于人PEG10mRNA的第5933-5953位；

255)AUCGUGAAGUAAUACAGUGtt，CACUGUAUUACUUCACGAUtt，作用于人PEG10mRNA的第5946-5966位；

256)GUAAUACAGUGAACUUGCAtt，UGCAAGUUCACUGUAUUACtt，作用于人PEG10mRNA的第5954-5974位；

257)UACAGUGAACUUGCAGGUGtt，CACCUGCAAGUUCACUGUAtt，作用于人PEG10mRNA的第5958-5978位；

258)UAAGAGGGCCACAUCUAUAtt，UAUAGAUGUGGCCCUCUUAtt，作用于人PEG10mRNA的第5984-6004位；

259)GAGGGCCACAUCUAUAUGGtt，CCAUAUAGAUGUGGCCCUCtt，作用于人PEG10mRNA的第5987-6007位；

260)UUCUGUUUAAGUUUGUAGGtt，CCUACAAACUUAAACAGAAtt，作用于人PEG10mRNA的第6018-6038位；

261)GUUUGUAGGUACCUCUUGGtt，CCAAGAGGUACCUACAAACtt，作用于人PEG10mRNA的第6028-6048位；

262)UUGAUCCAGUUGUCAUCCAtt，UGGAUGACAACUGGAUCAAtt，作用于人PEG10mRNA的第6056-6076位；

263)GAUUGACAACAGAGAACAAtt，UUGUUCUCUGUUGUCAAUCtt，作用于人PEG10mRNA的第6107-6127位；

264)CAGAGAACAACCUGCUGGAtt，UCCAGCAGGUUGUUCUCUGtt，作用于人PEG10mRNA的第6116-6136位；

265)CAACCUGCUGGAAAGACCUtt，AGGUCUUUCCAGCAGGUUGtt，作用于人PEG10mRNA的第6123-6143位；

266)CCUGCUGGAAAGACCUGGGtt，CCCAGGUCUUUCCAGCAGGtt，作用于人PEG10mRNA的第6126-6146位；

267)AGACCUGGGCAGAAAUGGAtt，UCCAUUUCUGCCCAGGUCUtt，作用于人PEG10mRNA的第6136-6156位；

268)AUGGAGAGCCCUGCGGGAAtt，UUCCCGCAGGGCUCUCCAUtt，作用于人PEG10mRNA的第6150-6170位；

269)AGAGAGAAUGCACAUCUGAtt，UCAGAUGUGCAUUCUCUCUtt，作用于人PEG10mRNA的第6190-6210位；

270)UGCACAUCUGAUGAGACUGtt，CAGUCUCAUCAGAUGUGCAtt，作用于人PEG10mRNA的第6198-6218位；

271)UGGUAUUGAAUUGGUCUGUtt，ACAGACCAAUUCAAUACCAtt，作用于人PEG10mRNA的第6246-6266位；

272)UCAAGUUUAAGUAAUAGGGtt，CCCUAUUACUUAAACUUGAtt，作用于人PEG10mRNA的第6298-6318位；

273)GUUUAAGUAAUAGGGGAUAtt，UAUCCCCUAUUACUUAAACtt，作用于人PEG10mRNA的第6302-6322位；

274)GUAAUAGGGGAUAUAUAAUtt，AUUAUAUAUCCCCUAUUACtt，作用于人PEG10mRNA的第6308-6328位；

275)UAGGGGAUAUAUAAUCAUAtt，UAUGAUUAUAUAUCCCCUAtt，作用于人PEG10mRNA的第6312-6332位；

276)GUGGGUGGGGUUAUUUAGAtt，UCUAAAUAACCCCACCCACtt，作用于人PEG10mRNA的第6369-6389位；

277)UGUUAGAAUAAUAUUAUGUtt，ACAUAAUAUUAUUCUAACAtt，作用于人PEG10mRNA的第6389-6409位；

278)UAAUAUUAUGUAUUAGAUAtt，UAUCUAAUACAUAAUAUUAtt，作用于人PEG10mRNA的第6397-6417位；

279)UAUUAUGUAUUAGAUAUCGtt，CGAUAUCUAAUACAUAAUAtt，作用于人PEG10mRNA的第6400-6420位；

280)GUGGACAUGCGUACUUACUtt，AGUAAGUACGCAUGUCCACtt，作用于人PEG10mRNA的第6425-6445位；

281)CCCUUUACCCUAUAAUUGCtt，GCAAUUAUAGGGUAAAGGGtt，作用于人PEG10mRNA的第6449-6469位；

282)UUGCUAUCCUUAAAGAUUUtt，AAAUCUUUAAGGAUAGCAAtt，作用于人PEG10mRNA的第6464-6484位；

283)AGAUUUCAAAUAAACUCGGtt，CCGAGUUUAUUUGAAAUCUtt，作用于人PEG10mRNA的第6477-6497位；

284)AUAAACUCGGAGGGAACUGtt，CAGUUCCCUCCGAGUUUAUtt，作用于人PEG10mRNA的第6486-6506位；

285)ACUCGGAGGGAACUGCAGGtt，CCUGCAGUUCCCUCCGAGUtt，作用于人PEG10mRNA的第6490-6510位；

286)CUGCAGGGAGACCAACUUAtt，UAAGUUGGUCUCCCUGCAGtt，作用于人PEG10mRNA的第6502-6522位；

287)CUUAUUUAGAGCGAAUUGGtt，CCAAUUCGCUCUAAAUAAGtt，作用于人PEG10mRNA的第6517-6537位；

288)ACCCCAGUGGGAGAAAGUUtt，AACUUUCUCCCACUGGGGUtt，作用于人PEG10mRNA的第6548-6568位；

289)AGUUCAAAGGUGAUUAGAUtt，AUCUAAUCACCUUUGAACUtt，作用于人PEG10mRNA的第6563-6583位；

290)AGGUGAUUAGAUUAAUAAUtt，AUUAUUAAUCUAAUCACCUtt，作用于人PEG10mRNA的第6570-6590位；

291)UAAUUUAAUAGAGGAUGAGtt，CUCAUCCUCUAUUAAAUUAtt，作用于人PEG10mRNA的第6585-6605位；

292)UUUAAUAGAGGAUGAGUGAtt，UCACUCAUCCUCUAUUAAAtt，作用于人PEG10mRNA的第6588-6608位；

293)UAGAGGAUGAGUGACCUCUtt，AGAGGUCACUCAUCCUCUAtt，作用于人PEG10mRNA的第6593-6613位；

294)AUUACUGCUAGAAUGAACUtt，AGUUCAUUCUAGCAGUAAUtt，作用于人PEG10mRNA的第6617-6637位；

295)UGAACUUGUCAAUGAUGGAtt，UCCAUCAUUGACAAGUUCAtt，作用于人PEG10mRNA的第6630-6650位；

296)CUUGUCAAUGAUGGAUGGUtt，ACCAUCCAUCAUUGACAAGtt，作用于人PEG10mRNA的第6634-6654位；

297)CCCCAUUGCCCCUACCCCUtt，AGGGGUAGGGGCAAUGGGGtt，作用于人PEG10mRNA的第6734-6754位；

298)CUUUAUUGCUGUAUUCUCUtt，AGAGAAUACAGCAAUAAAGtt，作用于人PEG10mRNA的第6761-6781位；

299)UAUUGCAUUGCUGUUACAAtt，UUGUAACAGCAAUGCAAUAtt，作用于人PEG10mRNA的第6808-6828位；

300)AUUCAAUAAAGAUUUAGUGtt，CACUAAAUCUUUAUUGAAUtt，作用于人PEG10mRNA的第6832-6852位；

301)UAAAGAUUUAGUGGUUAAGtt，CUUAACCACUAAAUCUUUAtt，作用于人PEG10mRNA的第6838-6858位；

302)AGAUUUAGUGGUUAAGUGCtt，GCACUUAACCACUAAAUCUtt，作用于人PEG10mRNA的第6841-6861位。

较佳地，所述的PEG10-siRNA的序列及作用部位如下：

1)GUGCCAGAUCUUCAUGGAAtt，UUCCAUGAAGAUCUGGCACtt，作用于人PEG10 mRNA的第555-575位；

2)GUAGUUGUGCAUCAGGUAGtt，CUACCUGAUGCACAACUACtt，作用于人PEG10 mRNA的第681-701位。

更佳地，所述的PEG10-siRNA的序列及作用部位如下：

GUGCCAGAUCUUCAUGGAAtt，UUCCAUGAAGAUCUGGCACtt，作用于人PEG10 mRNA的第555-575位。

本发明还提供PEG10-siRNA在制备抗肝癌肿瘤基因治疗药物中的应用。

以这种生物体本身存在的RNA干扰机制为基础，人工设计并合成针对PEG10基因的特异siRNA作为诱发RNA干扰的前体，高效特异地降低PEG10基因的表达水平，抑制肿瘤细胞，可以为肝癌等肿瘤的基因治疗提供更为有效的药物应用。PEG10-siRNA对肝癌等肿瘤的基因治疗有着广泛的应用前景。

附图说明

图1是通过RT-PCR验证PEG10基因在肝癌/癌旁组织中的表达图，N为癌旁组织，C为癌组织，β-actin作为内对照；

图2是通过Western Blotting法验证本发明PEG10-siRNA在肝癌组织中的表达图，Beta-actin作为内对照；

图3是在人肝癌QGY-7703细胞中PEG10-siRNA的生长抑制表达图；

在图2和图3中，pSUPER-RNAi-PEG10(555)表示作用于人PEG10mRNA第555-575位的PEG10-siRNA，pSUPER-RNAi-PEG10(681)表示作用于人PEG10mRNA第681-701位的PEG10-siRNA，None relevant control表示与PEG10-siRNA不相关的对照物。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细的说明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York：ColdSpring Harbor Laboratory Press，1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。

实施例1 RT-PCR

设计引物，PEG10：前向引物为5’-TGCTTCTGGCAACTTCATTG-3’，后向引物为5’-TCAAATGACAGCACCTCTCG-3’；Beta-actin：前向引物为5’-TCACCCACACTGTGCCCATCTACGA-3’，后向引物为5’-CAGCGGAACCGCTCATTGCCAATGG-3’。以β-actin作内对照，反应混合物中各成分为：β-actin(F)、β-actin(R)、PEG10(F)、PEG10(R)、10×Buffer、MgCl₂、dNTP、Taq DNA聚合酶、cDNA模板分别为0.2、0.2、0.4、0.4、1.0、1.0、0.2、0.1和5μLcDNA模板，最后补充ddH₂O使反应体系为10μL。PCR的反应条件是94℃变性5min；然后每个循环94℃ 30s、53℃ 30s、72℃ 30s，共30个循环；最后72℃延伸7min。

结果如图1所示：利用RT-PCR技术在32对肝癌及癌旁组织中检测PEG10基因的表达差异，发现在32例中有24例PEG10基因明显升高，即PEG10基因在肝癌组织中的表达率高达66％。

实施例2 基因芯片实验

基因芯片实验主要包括如下四个步骤：芯片制备、样品制备、杂交反应和信号检测以及结果分析。

1.芯片制备目前制备芯片主要以玻璃片或硅片为载体。通过点样法将靶基因作为探针按顺序排列在载体上，靶基因可分为基因组DNA、cDNA(或人工合成DNA)。

2.样品制备待测样品中总RNA的抽提步骤如下：取细胞株、正常肝脏、胎肝、肝癌旁组织和肝癌组织，再用TRIZol法抽提总RNA。抽提时，每5×10⁶细胞加入1ml TRIzol，在旋涡震荡器上混匀；对于组织样品，每100mg组织可加入1ml TRIzol，用液氮研磨或采用电动匀浆器充分打碎组织块。再加入大约1/5体积的氯仿，上下颠倒充分混匀1分钟左右，室温下静置5分钟。然后，4℃，12000rpm离心15分钟后小心将上清液转入新的1.5ml离心管，加入等体积的异丙醇，轻轻颠倒混匀，室温静置5分钟。再4℃，12000rpm离心10分钟后，去上清，向沉淀中加入2/5体积的70％乙醇，4℃，12000rpm离心洗涤沉淀15分钟。去上清，沉淀室温晾干后加入适量无RNA酶的水充分溶解沉淀，测定A₂₆₀和A₂₈₀值。

3.杂交反应和信号检测芯片杂交前，预杂交不可少。预杂交完成之后取出芯片用ddH₂O浸洗片刻，待盖玻片脱落后将芯片放入干燥的离心管中离心，去除残留的水渍，放置待用。配制杂交液，取杂交液滴加在芯片上，并盖上盖玻片，同时保证盖玻片覆盖在含有杂交液的芯片的有效点样区域。最后，将该杂交芯片放入加有PBS的杂交盒，置于42℃杂交箱中杂交12～20小时。

4.结果分析通过特定的扫描仪比如激光共聚焦扫描仪进行扫描，扫描后将图像转化为基于荧光强度的数字信号，随后进行数据分析和处理。由于样本差异、荧光标记效率和检出率的不平衡，需对原始提取信号进行均衡和修正才能进一步分析实验数据。经过分析，利用基因芯片在肝癌及癌旁组织中检测PEG10基因的表达差异，实验结果显示PEG10基因在肝癌组织中的表达出现了显著上调。

实施例3

siRNA的转染

本发明使用LipofectAMINEm2000脂质体(Life Technologies，产品货号：11668-027)进行转染，转染后18-45小时进行沉默效果测定。将合成的siRNA粉末用水溶解，配成4000nM的储备溶液。实验细胞是在转染前18-20小时用200gl含10％胎牛血清的无抗生素DMEM组织培养液以6000-8000个/孔接种到96孔板中。将4000nM的siRNA用无抗生素无血清的Opti-MEM培养液分别稀释至120nM、400nM、1200nM、2000nM、4000nM各75gl，在另外一个Eppendorf管中，向370glOpti-MEM培养液中加入5gl脂质体，孵育5分钟后，向各浓度的siRNA溶液中分别加入75gl脂质体稀释液并轻轻混匀。siRNA与脂质体复合物于室温静置20分钟后，把50glsiRNA-脂质体复合物加到细胞培养板(细胞生长覆盖率为80％-90％)中。细胞在给药前用无抗生素无血清的DMEM培养液洗一遍后，再加入新的50gl无抗生素无血清Opti-MEM培养液。这样，转染后每孔溶液终体积为100gl。各孔中siRNA的给药浓度分别为30nM、100nM、300nM、500nM、1000nM，每个浓度同时作三个平行孔，每次实验至少重复三次。转染后五小时，每孔中补加100glOpti-MEM培养液。第一次转染后每间隔15小时，同样方法进行第二次、第三次转染。本发明所采用的肝癌QGY-7703细胞由本室自行冻存。

实施例4

Western Blotting法检测PEG10-siRNA

用2ml含10％胎牛血清的DMEM(Gibco公司产品)培养液在35mm细胞培养皿中于5％二氧化碳100％湿度培养箱中培养肝癌QGY-7703细胞，覆盖率达到80％-90％时，按照LipofectAMINETM2000脂质体操作方案转染100nM siRNA于细胞中，分别在6，12，24，36，48小时后，将细胞用预冷的1xPBS(本实施例中各种试剂和常规操作方法按照《分子克隆实验指南》第二版中相关说明部分配制)洗两遍，加入120μl新鲜配制的细胞裂解液(50mM Tris-HCl，pH7.5；1％NP-40；150mM NaCl；1mM PMSF，1mMEGTA，0.1mg/ml aprotinin；1mS/mlleupeptin；1mM Na₃VO₄；1mM NaF)，立即用细胞刮刀刮下细胞使其与裂解液充分混合，冰浴30分钟至1小时。4℃、13,000g离心15分钟，收集上清至新的EP管中，用标准Bradford法测定蛋白含量。取各样品等量总蛋白(20-50μg)分别加入等体积的2倍上样缓冲液，沸水煮沸变性5分钟后于12％的SDS-PAGE凝胶电泳分离各蛋白，并转印蛋白到杂交的P PVDA膜上，该膜用20％的甲醇在Tris-glycine缓冲器中处理过。转完的膜浸于含5％(w/v)BSA的PBS溶液中封闭，之后，为了免疫分析，以稀释比例为1∶500的抗DLK1抗体在室温下对膜孵育1小时。接着，用羊抗兔二抗室温孵育1小时。最后，利用ECL PLUS系统(AmershamPharmacia Biotech，Inc.，Piscataway，New Jersey)检测PEG10基因的表达情况。

结果表明PEG10-siRNA能抑制QGY-7703细胞中相应PEG10基因的表达，而经mock-siRNA对PEG10基因水平没有影响(如图2所示)。

实施例5：

克隆分析

将包含靶序列的pSUPER或荧光素酶，通过Lipofectamine 2000(Invitrogen)或jetPEI for HepG2，经过24小时，转染到位于25毫米的器皿中的HuH-7，Hep3B，HepG2和Bel-7721细胞中。然后，在100毫米的组织培养器皿中洗膜培养，接着，采用0.6~1.0mg/ml geneticin(Invitrogen)经过21天选择。

结果如图3所示，pSUPER-RNAi-PEG10(555)、pSUPER-RNAi-PEG10(681)、pSUPER-RNAi-PEG10(555+681)在QGY-7703细胞中的克隆数明显下降，而Nonerelevant control基本不变。结果表明PEG10-siRNA能抑制QGY-7703细胞中相应PEG10基因的表达。

序列表

<110>上海人类基因组研究中心

<120>抑制人PEG10基因表达的PEG10-siRNA及其药物应用

<130>NP-10014

<160>1

<210>1

<211>6861

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<222>(1)..(1707)

<400>1

1 ATGTGCCACA AACTGACGGA TGGGCGCTTC AGTGGCGCTA CAATCCAGAA CGAGGAGCAG

61 CGATATAGGA GCTGCAGACA GAAAACTGAA TTGCGCTTTA CATGCGCTGC AAAATCTGAG

121 CTGCAGAAGA GTAGCACTAC AAAAAACGCT ACAAAAACGA TGCGATTAGC CAGCCCGACA

181 ACAGCGCTTC ATTGCGCTGC GAGGCACATG AACTGCAGAG CGCCTCCTCC TACAGCGCCT

241 CCTCAGAGCC GCCTCCCCTG CAGCGCCGTG ACCCAGAGTC CTTGTGCTAC CATGCGGCCT

301 TCGCAGGCCC GTGCGCCCAG CTCGAGAGCA CGTGACTTCT GGATCCAGGA CCATCGGTCT

361 GAGGCCCCGC ATGAGTTAGT AGGGAGGGGT AGTGCCCTGC TAGTGTCGGG GCGCCATGGT

421 GATGTTCGGA GGGCGCAGCA CGCAGACCAG GGTTCGGATG GGACGCCGTG GTGTCTTTTT

481 GGGTCGGTCG GGTGGTATAG GGCGATAAAT AAGCGGGTTT TGAAAACAAA AAAAAGAAGG

541 AGTGGAAGAG GGGGCCAGGA TCCAGGCCTC CATCCCCACA GAAGTGAAGC TACAGCTGGG

601 AGGTCTCCTC CCACCCCAAC CGTCACCCTG GGTCCCGACT GCCCACCTCC TCCTCCTCCC

661 CCTCCCCCCA ACAACAACAA CAACAACAAC TCCAAGCACA CCGGCCATAA GAGTGCGTGT

721 GTCCCCAACA TGACCGAACG AAGAAGGGAC GAGCTCTCTG AAGAGATCAA CAACTTAAGA

781 GAGAAGGTCA TGAAGCAGTC GGAGGAGAAC AACAACCTGC AGAGCCAGGT GCAGAAGCTC

841 ACAGAGGAGA ACACCACCCT TCGAGAGCAA GTGGAACCCA CCCCTGAGGA TGAGGATGAT

901 GACATCGAGC TCCGCGGTGC TGCAGCAGCT GCTGCCCCAC CCCCTCCAAT AGAGGAAGAG

961 TGCCCAGAAG ACCTCCCAGA GAAGTTCGAT GGCAACCCAG ACATGCTGGC TCCTTTCATG

1021 GCCCAGTGCC AGATCTTCAT GGAAAAGAGC ACCAGGGATT TCTCAGTTGA TCGTGTCCGT

1081 GTCTGCTTCG TGACAAGCAT GATGACCGGC CGTGCTGCCC GTTGGGCCTC AGCAAAGCTG

1141 GAGCGCTCCC ACTACCTGAT GCACAACTAC CCAGCTTTCA TGATGGAAAT GAAGCATGTC

1201 TTTGAAGACC CTCAGAGGCG AGAGGTTGCC AAACGCAAGA TCAGACGCCT GCGCCAAGGC

1261 ATGGGGTCTG TCATCGACTA CTCCAATGCT TTCCAGATGA TTGCCCAGGA CCTGGATTGG

1321 AACGAGCCTG CGCTGATTGA CCAGTACCAC GAGGGCCTCA GCGACCACAT TCAGGAGGAG

1381 CTCTCCCACC TCGAGGTCGC CAAGTCGCTG TCTGCTCTGA TTGGGCAGTG CATTCACATT

1441 GAGAGAAGGC TGGCCAGGGC TGCTGCAGCT CGCAAGCCAC GCTCGCCACC CCGGGCGCTG

1501 GTGTTGCCTC ACATTGCAAG CCACCACCAG GTAGATCCAA CCGAGCCGGT GGGAGGTGCC

1561 CGCATGCGCC TGACGCAGGA AGAAAAAGAA AGACGCAGAA AGCTGAACCT GTGCCTCTAC

1621 TGTGGAACAG GAGGTCACTA CGCTGACAAT TGTCCTGCCA AGGCCTCAAA GTCTTCGCCG

1681 GCGGGAAACT CCCCGGCCCC GCTGTAGAGG GACCTTCAGC GACCGGGCCA GAAATAATAA

1741 GGTCCCCACA AGATGATGCC TCATCTCCAC ACTTGCAAGT GATGCTCCAG ATTCATCTTC

1801 CGGGCAGACA CACCCTGTTC GTCCGAGCCA TGATCGATTC TGGTGCTTCT GGCAACTTCA

1861 TTGATCACGA ATATGTTGCT CAAAATGGAA TTCCTCTAAG AATCAAGGAC TGGCCAATAC

1921 TTGTGGAAGC AATTGATGGG CGCCCCATAG CATCGGGCCC AGTTGTCCAC GAAACTCACG

1981 ACCTGATAGT TGACCTGGGA GATCACCGAG AGGTGCTGTC ATTTGATGTG ACTCAGTCTC

2041 CATTCTTCCC TGTCGTCCTA GGGGTTCGCT GGCTGAGCAC ACATGATCCC AATATCACAT

2101 GGAGCACTCG ATCTATCGTC TTTGATTCTG AATACTGCCG CTACCACTGC CGGATGTATT

2161 CTCCAATACC ACCATCGCTC CCACCACCAG CACCACAACC GCCACTCTAT TATCCAGTAG

2221 ATGGATACAG AGTTTACCAA CCAGTGAGGT ATTACTATGT CCAGAATGTG TACACTCCAG

2281 TAGATGAGCA CGTCTACCCA GATCACCGCC TGGTTGACCC TCACATAGAA ATGATACCTG

2341 GAGCACACAG TATTCCCAGT GGACATGTGT ATTCACTGTC CGAACCTGAA ATGGCAGCTC

2401 TTCGAGATTT TGTGGCAAGA AATGTAAAAG ATGGGCTAAT TACTCCAACG ATTGCACCTA

2461 ATGGAGCCCA AGTTCTCCAG GTGAAGAGGG GGTGGAAACT GCAAGTTTCT TATGATTGCC

2521 GAGCTCCAAA CAATTTTACT ATCCAGAATC AGTATCCTCG CCTATCTATT CCAAATTTAG

2581 AAGACCAAGC ACACCTGGCA ACGTACACTG AATTCGTACC TCAAATACCT GGATACCAAA

2641 CATACCCCAC ATATGCCGCG TACCCGACCT ACCCAGTAGG ATTCGCCTGG TACCCAGTGG

2701 GACGAGACGG ACAAGGAAGA TCACTATATG TACCTGTGAT GATCACTTGG AATCCACACT

2761 GGTACCGCCA GCCTCCGGTA CCACAGTACC CGCCGCCACA GCCGCCGCCT CCACCACCAC

2821 CACCGCCGCC GCCTCCATCT TACAGTACCC TGTAAATACC TGTCATGTCC TTCAGGATCT

2881 CTGCCCTCAA AATTTATTCC TGTTCAGCTT CTCAATCAGT GACTGTGTGC TAAATTTTAG

2941 GCTACTGTAT CTTCAGGCCA CCTGAGGCAC ATCCTCTCTG AAACGGCTAT GGAAGGTTAG

3001 GGCCACTCTG GACTGGCACA CATCCTAAAG CACCAAAAGA CCTTCAACAT TTTCTGAGAG

3061 CAACAGAGTA TTTGCCAATA AATGATCTCT CATTTTTCCA CCTTGACTGC CAATCTAACT

3121 AAAATAATTA ATAAGTTTAC TTTCCAGCCA GTCCTGGAAG TCTGGGTTTT ACCTGCCAAA

3181 ACCTCCATCA CCATCTAAAT TATAGGCTGC CAAATTTGCT GTTTAACATT TACAGAGAAG

3241 CTGATACAAA CGCAGGAAAT GCTGATTTCT TTATGGAGGG GGAGACGAGG AGGAGGAGGA

3301 CATGACTTTT CTTGCGGTTT CGGTACCCTC TTTTTAAATC ACTGGAGGAC TGAGGCCTTA

3361 TTAAGGAAGC CAAAATTATC GGTGCAGTGT GGAAAGGCTT CCGTGATCCT CTCGCTGCAC

3421 CCTTAGAAAC TTCACCGTCT TCAAACTCCA TTTCCATGGT TCTGTTAATT CTCAAGGAGC

3481 AGCAACTCGA CTGGTTCTCC CAGGAGCAGG AAAAACCCTT GTGACATGAA ACATCTCAGG

3541 CCTGAAAAGA AAGTGCTCTC TCAGATGGAC TCTTGCATGT TAAGACTATG TCTTCACATC

3601 ATGGTGCAAA TCACATGTAC CCAATGACTC CGGCTTTGAC ACAACACCTT ACCATCATCA

3661 TGCCATGATG GCTTCCACAA AGCATTAAAC CTGGTAACCA GAGATTACTG GTGGCTCCAG

3721 CGTTGTTAGA TGTTCATGAA ATGTGACCAC CTCTCAATCA CCTTTGAGGG CTAAAGAGTA

3781 GCACATCAAA AGGACTCCAA AATCCCATAC CCAACTCTTA AGAGATTTGT CCTGGTACTT

3841 CAGAAAGAAT TTTCATGAGT GTTCTTAATT GGCTGGAAAA GCACCAGCTG ACGTTTTGGA

3901 AGAATCTATC CATGTGTCTG CCTCCATATG CATCTGGGCA TTTCATCTTC AGTCCCCTCA

3961 TTAGACTGTA GCATTAGGAT GTGTGGAGAG AGGAGAAATG ATTTAGCACC CAGATTCACA

4021 CTCCTATGCC TGGAAGGGGG ACATCTTTGA AGAAGAGGAA TTAGGGCTGT GGACACTGTC

4081 TTGAGGATGT GGACTTCCTT AGTGAGCTCC ACATTACTTG ATGGTAACCA CTTCAAAAGG

4141 ATCAGAATCC ACGTAATGAA AAAGGTCCCT CTAGAGGATG GAGCTGATGT GAAGCTGCCA

4201 ATGGATGAAA AGCCTCAGAA AGCAACTCAA AGGACTCAAA GCAACGGACA ACACAAGAGT

4261 TGTCTTCAGC CCAGTGACAC CTCTGATGTC CCCTGGAAGC TTTGTGCTAA CCTGGGACTG

4321 CCTGACTTCC TTTAGCCTGG TCCCTTGCTA CTACCTTGAA CTGTTTTATC TAACCTCTCT

4381 TTTTCTGTTT AATTCTTTGC TACTGCCATT GACCCTGCTG CAGGATTTGT GTCATTTTCC

4441 TGCCTGGTTG CTGAGACTCC ATTTTGCTGC CACACACAGA GATGTAAGAG GCAGGCTTTA

4501 ATTGCCAAAG CACAGTTTGA GCAGTAGAAA ACAACATGGT GTATATCTCA AATTGCCTGA

4561 CATGAAGAGG AGTCTAACGG TGAAGTTTCA CTTTTCATCA GCATCATCTT TCACATGTTC

4621 ATTATCATCT GCTCTTATTC TTGCATGTTT AAACACTTAA AATTTTTAGT ATAATTTTTA

4681 GTGTGTTTTG AAGTGGTGAC TAGGCTTTCA AAAACTTCCA TTGAATTACA AAGCACTATC

4741 CAGTTCTTAT TGTTAAACTA AGTAAAAATG ATAAGTAACA TAGTGTAAAA TATTCCTTTA

4801 CTGTGAACTT CTTACAATGC TGTGAATGAG AGGCTCCTCA GAACTGGAGC ATTTGTATAA

4861 TAATTCATCC TGTTCATCTT CAATTTTAAC ATCATATATA ATTTCAATTC TATCAATTGG

4921 GCCTTTAAAA ATCATATAAA AGGATATAAA ATTTGAAAAG AGAAACCTAA TTGGCTATTT

4981 AATCCAAAAC AACTTTTTTT TTCCTTCAAT GGAATCAGAA AGCTTGTCAA TCACTCATGT

5041 GTTTTAGAGT AATTACTTTT AAAATGGTGC ATTTGTGCTT CTGAACTATT TTGAAGAGTC

5101 ACTTCTGTTT ACCTCAAGTA TCAATTCATC CTCCATACAT TTGAATTCAA GTTGTTTTTT

5161 TGTCAAATTT ACAGTTGTCA ATTGATCTTC AAGCTGCAGG GTGCCTAGAA ATGGGCCGTT

5221 GTCTGTAGCC CTGGCATGTG CACACGGACA TTTGCCACCA CTGCAAGCAA AAGTCTGGAG

5281 AAGTTCACCA ACGACAAGAA CGATTAGGGA AAATATGCTG CTGTGGGTTA ACAACTCAGA

5341 AAGTCCCTGA TCCACATTTG GCTGTTTACT AAAGCTTGTG ATTAACTTTT TGGCAGTGTG

5401 TACTATGCTC TATTGCTATA TATGCTATCT ATAAATGTAG ATGTTAAGGA TAAGTAATTC

5461 TAAATTTATT ATTCTATAGT TTTGAAGTTT GGTTAAGTTT CCTTTCACTC AATTGATTTA

5521 TTTTGTTGTT AATCAAATTT ATGTTAATTG GATCCTTTAA ATTTTTTTTG GCATTTTCCA

5581 ACAAAAATGG CTTTATTCAT AAGAAAGGAA AAAAATCAAT GGAATTTGAT ATCTAAAGAA

5641 GTTAGAAAGG GAGCAAAATA AAAAACATAA AGGAGATAGA TGAATTAGTA AGCAAATCAG

5701 TAGTCGAGTT TTTCAAACTG GCAAAATTAA TTAATTGACT TTTAGCCCAA ATTTACATTG

5761 TTAATTAAAT CAAGAAGGAA GAAGATCTAA GAGCTCCCAT TGATAGGCAA GCCTAGAGAG

5821 AACTAGCTAA ATTTATCATG CTAGGATATT GAAACACAGA AAGTTTACAT ACATTTATGA

5881 AGGGTCAATT TAGTTTGGAC AGTGAGGTAT TTGTCTTAGT GGAAAAAAGG AGAATTAGTC

5941 TGATCAAATC GTGAAGTAAT ACAGTGAACT TGCAGGTGCA CAAAATAAGA GGGCCACATC

6001 TATATGGTGC AGTCTGGAAT TCTGTTTAAG TTTGTAGGTA CCTCTTGGAC TTCTGAATTG

6061 ATCCAGTTGT CATCCACCAC AGACATCTCA CATCAGATAC AGTTCCAAGA TTGACAACAG

6121 AGAACAACCT GCTGGAAAGA CCTGGGCAGA AATGGAGAGC CCTGCGGGAA CCATGCTACA

6181 TTTTCATCTA AAGAGAGAAT GCACATCTGA TGAGACTGAA AGTTCTTTGT TGTTTTAGAT

6241 TGTAGAATGG TATTGAATTG GTCTGTGGAA AATTGCATTG CTTTTATTTC TTTGTGTAAT

6301 CAAGTTTAAG TAATAGGGGA TATATAATCA TAAGCATTTT AGGGTGGGAG GGACTATTAA

6361 GTAATTTTAA GTGGGTGGGG TTATTTAGAA TGTTAGAATA ATATTATGTA TTAGATATCG

6421 CTATAAGTGG ACATGCGTAC TTACTTGTAA CCCTTTACCC TATAATTGCT ATCCTTAAAG

6481 ATTTCAAATA AACTCGGAGG GAACTGCAGG GAGACCAACT TATTTAGAGC GAATTGGACA

6541 TGGATAAAAA CCCCAGTGGG AGAAAGTTCA AAGGTGATTA GATTAATAAT TTAATAGAGG

6601 ATGAGTGACC TCTGATAAAT TACTGCTAGA ATGAACTTGT CAATGATGGA TGGTAAATTT

6661 TCATGGAAGT TATAAAAGTG ATAAATAAAA ACCCTTGCTT TTACCCCTGT CAGTAGCCCT

6721 CCTCCTACCA CTGAACCCCA TTGCCCCTAC CCCTCCTTCT AACTTTATTG CTGTATTCTC

6781 TTCACTCTAT ATTTCTCTCT ATTTGCTAAT ATTGCATTGC TGTTACAATA AAAATTCAAT

6841 AAAGATTTAG TGGTTAAGTG C

Claims

1.一种抑制人PEG10基因表达的PEG10-siRNA，其特征在于，所述的PEG10-siRNA的序列及作用部位如下：

222)GUAAUUCUAAAUUUAUUAUtt，AUAAUAAAUUUAGAAUUACtt，作用于人PE610mRNA的第5452-5472位；

2.如权利要求1所述的PEG10-siRNA，其特征在于，所述的PEG10-siRNA的序列及作用部位如下：

1)GUGCCAGAUCUUCAUGGAA tt，UUCCAUGAAGAUCUGGCAC tt，作用于人PEG10mRNA的第555-575位；

2)GUAGUUGUGCAUCAGGUAG tt，CUACCUGAUGCACAACUAC tt，作用于人PEG10mRNA的第681-701位。

3.如权利要求2所述的PEG10-siRNA，其特征在于，所述的PEG10-siRNA的序列及作用部位如下：

GUGCCAGAUCUUCAUGGAA tt，UUCCAUGAAGAUCUGGCAC tt，作用于人PEG10mRNA的第555-575位。

4.PEG10-siRNA在制备抗肝癌肿瘤基因治疗药物中的应用。