CN1961978A - 载药或载基因支架的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种载药或载基因支架的制备方法，制备步骤为：(1)支架表面的预处理，包括：溅射或电镀金、固定高分子；(2)药物或基因分子在支架表面的固化包括：支架表面活化、上载体、封闭后再将药物或基因固化，本发明采用多层组装的方法，在支架上稳定连接网状大分子骨架，有利于提高载药量，降低支架和连接分子的毒性及免疫原性，便于临床使用；本发明通过网状分子共价连接糖类、肽类及抗体分子，有利于药物/抗体的稳定牢固连接，又能在胞吞及酶的作用下，起到缓释作用；本发明通过网状分子静电吸附基因分子和转染介导分子，有利于提高基因分子的转染效率。
Description
技术领域
本发明属于医疗材料领域，特别是涉及一种血管支架。
背景技术
冠状动脉栓塞是危害人类健康的重大疾病之一，介入治疗(PTCA)和搭桥术是临床主要治疗手段，介入治疗中的冠状动脉支架在治疗冠状动脉栓塞中起着重要的作用，目前临床上在介入治疗后放置不锈钢支架可防止扩张后血管壁塌破，维持血流畅通，但支架的异物刺激往往导致局部内皮细胞过度生长，发生内膜增生，最后发展到再度栓塞，临床称为再狭窄(RS)，术后血管再狭窄的发病率高达30-50％，严重限制了治疗的远期效果和广泛应用，成为临床心血管病治疗中亟待解决的难题。用动脉血管支架携带药物和基因有其独特的优越性，它可以在介入治疗放置支架的同时，将药物和基因运载到心血管内的病灶部位，借助支架与血管内膜之间的紧密接触，达到局部定位输送，通过与血管壁持续作用而抑制血管内膜的过度增殖，降低再狭窄的发生，全球已有两家公司生产的药物涂层支架(强生公司的雷帕霉素涂层支架和波士顿科技公司的紫杉醇涂层支架)得到FDA的认证，早期的临床应用有抑制介入术后再狭窄的效果。这些药物支架主要采用涂层和吸附的方法携带药物，我国在临床应用中发现随着植入时间延长，发生局部血管壁变薄，有继发再狭窄等问题，专家认为是早期药物释放过量(过度抑制内皮生长)，而后期药物不足(失去药效)所致。基因治疗在遗传性疾病和获得性疾病的治疗中极具前景。动物研究证明支架携带基因能够作为基因传递系统提供治疗基因，阻止支架内再狭窄和潜在的血管疾病。使用支架作为基因载体具有显著的治疗优势，并得到了广泛关注。通过吸附方法将基因负载到血管支架上存在基因与支架结合不牢固而易被血流冲走的不足，是目前研究中的另一个难题。2006年1月美国PNAS杂志报道了费城大学Levy研究小组用聚乙烯亚胺双磷酸酯在金属支架表面形成亚胺双磷酸酯单分子层，结合反义腺病毒抗体再偶联病毒基因，植入实验兔体内，显示有效地抑制了血管增殖。近年来，我们采用了化学和免疫双重结合方式在胶原涂层的血管支架上偶联抗DNA抗体携带质粒基因，在动物模型实验中也证明了治疗再狭窄的可行性。目前存在的主要问题是胶原涂层很容易被洗脱掉，连接的基因也随之被洗脱。因此，高效、稳定、可控药物/基因的支架载体是支架在临床治疗中面临的主要技术难关。
本发明借助于金属表面自组装技术的发展，采用化学方法固定化生物活性分子，来解决目前血管支架在载药和载基因中所面临的难题。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术中的不足，提供一种具有临床可实施的载药或载基因支架的制备方法。
本发明的技术方案概述如下：
一种载药或载基因支架的制备方法，包括如下步骤：
(1)支架表面的预处理
①溅射或电镀：在洁净干燥的支架原料上直接溅射或电镀金或银成40～1000nm的薄膜，或者先溅射铬成10～50nm的薄膜，然后再溅射或电镀金或银成40～1000nm的薄膜；
②固定高分子：将经步骤①处理后的支架用0.001-0.1M的巯基烷醇的乙醇水溶液或0.001-0.1M的巯基烷酸的乙醇水溶液浸泡至少5分钟，所述乙醇水溶液的体积百分浓度为50％～100％，用蒸馏水冲洗，再放入0.01M～10M环氧氯丙烷-碱性二甘醇二甲醚溶液或环氧溴丙烷-碱性二甘醇二甲醚溶液中浸泡至少5分钟，所述碱性二甘醇二甲醚溶液是体积比为1∶1-5的二甘醇二甲醚和0.4M碱金属氢氧化物混合制成，取出后放入pH为3.6-9的0.1g/L-1000g/L高分子水溶液中浸泡至少5分钟；
(2)药物或基因分子在支架表面的固化
固化的方法为下述步骤之一种：
①直接固化：将已固定高分子的支架放入质量浓度为0.01％-10％药物的水溶液或质量浓度为0.01％-10％药物的乙醇水溶液中浸泡至少5分钟或放入0.001-1g/L基因溶液与0.001-1g/L转染试剂溶液的混合溶液中浸泡至少5分钟，所述乙醇水溶液的体积百分浓度为50％～100％，所述基因溶液是将基因溶于pH为5-8的PBS溶液制成，所述转染试剂溶液是将转染试剂溶于pH为5-8的PBS溶液制成；
②间接固化：将已固定高分子的支架放入pH为3.6-9的0.1g/L-1000g/L载体水溶液中浸泡至少5分钟，取出，放入质量浓度为0-01％-10％药物的水溶液或质量浓度为0.01％-10％药物的乙醇水溶液中浸泡至少5分钟或放入0.001-1g/L基因溶液与0.001-1g/L转染试剂溶液的混合溶液中浸泡至少5分钟，所述乙醇水溶液的体积百分浓度为50％～100％，所述基因溶液是将基因溶于pH为5-8的PBS溶液制成，所述转染试剂溶液是将转染试剂溶于pH为5-8的PBS溶液制成；
③先活化，上载体，封闭后再固化：
a.支架表面活化：将经步骤(1)处理的具有羧基表面的支架放入0.01-10M N-羟基丁二酰亚胺和0.01-10M乙基-二甲氨基丙基-碳二亚胺的混合水溶液中浸泡至少1分钟进行表面活化；
b.固定化：将表面活化的支架放入pH为3.6-9的0.1g/L-1000g/L载体水溶液中浸泡至少5分钟，取出，放入pH为8-9的0.01-10M盐酸乙醇胺水溶液中浸泡1-30分钟以封闭活化基团，再放入质量浓度为0.01％-10％药物的水溶液或质量浓度为0.01％-10％药物的乙醇水溶液中浸泡至少5分钟或放入0.001-1g/L基因溶液与0.001-1g/L转染试剂溶液的混合溶液中浸泡至少5分钟，所述乙醇水溶液的体积百分浓度为50％～100％，所述基因溶液是将基因溶于pH为5-8的PBS溶液制成，所述转染试剂溶液是将转染试剂溶于pH为5-8的PBS溶液制成；
④先连抗体，再固化基因分子：将已固定高分子的支架先放入0.01-10M N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶二硫基)丙酸酯溶液活化的0.01-100g/L抗体溶液中浸泡5-30分钟，再放入0.001-1g/L基因与0.001-1g/L转染试剂的混合溶液中浸泡至少5分钟，所述N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶二硫基)丙酸酯溶液是将N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶二硫基)丙酸酯溶于pH为5-8的PBS溶液制成，所述抗体溶液是将抗体溶于pH为5-8的PBS溶液制成，所述基因溶液是将基因溶于pH为5-8的PBS溶液制成，所述转染试剂溶液是将转染试剂溶于pH为5-8的PBS溶液制成。
所述步骤(1)支架表面的预处理中还可以包括③含羟基高分子的羧基化：将已固定了含羟基高分子的支架放入0.01-10M溴乙酸的浓碱水溶液中浸泡至少5分钟，所述浓碱为2M NaOH水溶液，所述含羟基高分子成羧基化。
所述高分子为壳聚糖、葡聚糖、肝素、纤维素、普鲁兰多糖、聚乙二醇、琼脂糖、藻酸双酯钠、聚氧乙烯化蓖麻油、聚原酸酯、聚乳酸聚羟基乙酸共聚物中至少一种。
所述载体为壳聚糖、聚赖氨酸、聚乙烯亚胺、聚酰胺、聚乳酸聚羟基乙酸共聚物、聚谷氨酸、聚精氨酸、聚天冬氨酸、环磷酰胺、聚氨基甲酸酯、聚亚氨基碳酸酯、聚氧杂酯、聚胺酯中至少一种或其修饰产物中至少一种。
所述巯基烷醇为6-巯基己醇、7-巯基庚醇、8-巯基辛醇、9-巯基壬醇、10-巯基癸醇、11-巯基十一烷醇、12-巯基十二烷醇、13-巯基十三烷醇、14-巯基十四烷醇、15-巯基十五烷醇、16-巯基十六烷醇、17-巯基十七烷醇、18-巯基十八烷醇中至少一种。
所述巯基烷酸为6-巯基己酸、7-巯基庚酸、8-巯基辛酸、9-巯基壬酸、10-巯基癸酸、11-巯基十一烷酸、12-巯基十二烷酸、13-巯基十三烷酸、14-巯基十四烷酸、15-巯基十五烷酸、16-巯基十六烷酸、17-巯基十七烷酸、18-巯基十八烷酸中至少一种。
所述转染试剂为脂质体、壳聚糖、聚乙烯亚胺、聚酰胺、聚赖氨酸、聚精氨酸、聚天冬氨酸、聚亚氨基碳酸酯中至少一种或所述各种转染试剂的各种修饰产物中至少一种。
所述脂质体为1，2-二油酰-3-三甲铵基丙烷、Lipofectin(Invitrogen)、LipofectamineTM 2000(Invitrogen)
所述药物为紫杉醇、雷帕霉素、地塞米松、肝素或水蛭素。
所述抗体为抗CD34抗体。
本发明的有益效果：
(1)本发明采用多层组装的方法，在支架上稳定连接网状大分子骨架，有利于提高载药量，降低支架和连接分子的毒性及免疫原性，便于临床推广使用。
(2)本发明通过网状分子共价连接糖类、肽类及抗体分子，有利于药物/抗体的稳定牢固连接，又能在胞吞及酶的作用下，起到缓释作用。
(3)本发明通过网状分子静电吸附基因分子和转染介导分子，有利于提高基因分子的转染效率。
附图说明
图1为载有pEGFP-C1质粒DNA的支架植入兔颈动脉的实验结果照片；
图2是实验组和对照组血管内膜与中膜的面积变化。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步地说明：
实施例1一种载基因支架的制备方法，由下述步骤组成：
(1)支架表面的预处理
①支架浸泡于丙酮溶液中超声清洗30分钟，然后换用异丙醇溶液浸泡超声清洗30分钟，双蒸水清洗后置于0.2N的盐酸溶液中浸泡30分钟，双蒸水冲洗3次，放入烘箱干燥备用，在干燥后的支架上溅射20nm铬和溅射50nm金的金属薄膜；
②固定高分子：将裸金支架在0.1M 11-巯基十一烷醇(先将11-巯基十一烷醇在乙醇中溶解再加水，溶解于80∶20的乙醇和水中)中浸泡30分钟，以在金膜上形成单层的自组装膜，用蒸馏水冲洗；再放入0.6M的环氧氯丙烷(溶解于1∶1的二甘醇二甲醚和0.4M NaOH混合溶液中)反应30分钟，然后用水、乙醇、水各冲洗一次；取出后再放入pH为7的0.3g/ml葡聚糖水溶液反应1小时(这里最好是加热)；
③含羟基高分子的羧基化：放入0.1M溴乙酸的浓碱水溶液中，(溴乙酸溶解于2MNaOH中)反应30分钟，使葡聚糖羧基化；
(2)基因分子在支架表面的固化
a.支架表面活化：将已固定高分子的支架放入0.2M的N-羟基丁二酰亚胺和0.2M的乙基-二甲氨基丙基-碳二亚胺的混合水溶液浸泡7分钟以活化支架表面；
b.固定化：将表面活化的支架放入pH为7.4的0.5g/L的壳聚糖(载体)水溶液中浸泡30分钟，取出，放入pH为8的1M盐酸乙醇胺水溶液中浸泡15分钟以封闭活化基团；
c.放入0.1g/L需载入的基因溶液与0.1g/L LipofectamineTM2000的混合溶液中浸泡30分钟，所述基因溶液是将基因溶于pH为7.4的PBS溶液制成，所述LipofectamineTM2000溶液是将LipofectamineTM2000溶于pH为7.4的PBS溶液制成，然后再放入pH为7.4的0.5g/L的壳聚糖(载体)水溶液中浸泡30分钟；
重复步骤c15次；
将支架放入容器中保存，备临床使用。
图1为载有pEGFP-C1质粒DNA的(实施例1的方法制备)支架植入兔颈动脉的实验结果，图为GFP表达结果，显示阳性主要位于血管内膜。
实施例2一种载基因支架的制备方法，由下述步骤组成：
(1)同实施例1；
(2)基因分子在支架表面的固化
a.支架表面活化：将已固定高分子的支架放入0.01M的N-羟基丁二酰亚胺和0.01M的乙基-二甲氨基丙基-碳二亚胺的混合水溶液浸泡1分钟以活化支架表面；
b.固定化：将表面活化的支架放入pH为3.6的1000g/L的壳聚糖(载体)水溶液中浸泡60分钟，取出，放入pH为9的0.01M盐酸乙醇胺水溶液中浸泡30分钟以封闭活化基团；
c.放入0.001g/L需载入的基因溶液与0.001g/L LipofectamineTM2000的混合溶液中浸泡30分钟，所述基因溶液是将基因溶于pH为8的PBS溶液制成，所述LipofectamineTM2000溶液是将LipofectamineTM2000溶于pH为8的PBS溶液制成，然后再放入pH为8的0.5g/L的壳聚糖(载体)水溶液中浸泡30分钟；
重复步骤c15次；
将支架放入容器中保存，备临床使用。
实施例3一种载基因支架的制备方法，由下述步骤组成：
(1)同实施例1；
(2)基因分子在支架表面的固化
a.支架表面活化：将已固定高分子的支架放入10M的N-羟基丁二酰亚胺和10M的乙基-二甲氨基丙基-碳二亚胺的混合水溶液浸泡60分钟以活化支架表面；
b.固定化：将表面活化的支架放入pH为9的0.1g/L的壳聚糖(载体)水溶液中浸泡5分钟，取出，放入pH为8的10M盐酸乙醇胺水溶液中浸泡1分钟以封闭活化基团；
c.放入1g/L需载入的基因溶液与1g/L LipofectamineTM2000的混合溶液中浸泡120分钟，所述基因溶液是将基因溶于pH为5的PBS溶液制成，所述LipofectamineTM2000溶液是将LipofectamineTM2000溶于pH为5的PBS溶液制成，然后再放入pH为5的0.5g/L的壳聚糖(载体)水溶液中浸泡30分钟；
重复步骤c15次；
将支架放入容器中保存，备临床使用。
实施例4一种载药物支架的制备方法，由下述步骤组成：
(1)同实施例1；
(2)药物在支架表面的固化
a.支架表面活化：将已固定高分子的支架放入0.01M的N-羟基丁二酰亚胺和0.01M的乙基-二甲氨基丙基-碳二亚胺的混合水溶液浸泡1分钟以活化支架表面；
b.固定化：将表面活化的支架放入pH为3.6的1000g/L的壳聚糖(载体)水溶液中浸泡60分钟，取出，放入pH为9的0.01M盐酸乙醇胺水溶液中浸泡30分钟以封闭活化基团；
c.再放入质量浓度为0.01％紫杉醇的水溶液中浸泡5分钟，然后再放入pH为8的0.5g/L的壳聚糖(载体)水溶液中浸泡30分钟；
重复步骤c15次；
将支架放入容器中保存，备临床使用。
实施例5一种载药物支架的制备方法，由下述步骤组成：
(1)同实施例1；
(2)药物在支架表面的固化
a.支架表面活化：将已固定高分子的支架放入0.01M的N-羟基丁二酰亚胺和0.01M的乙基-二甲氨基丙基-碳二亚胺的混合水溶液浸泡1分钟以活化支架表面；
b.固定化：将表面活化的支架放入pH为3.6的1000g/L的壳聚糖(载体)水溶液中浸泡60分钟，取出，放入pH为9的0.01M盐酸乙醇胺水溶液中浸泡30分钟以封闭活化基团；
c.再放入质量浓度为10％雷帕霉素的水溶液浸泡60分钟，然后再放入pH为8的0.5g/L的壳聚糖(载体)水溶液中浸泡30分钟；
重复步骤c15次；
将支架放入容器中保存，备临床使用。
实施例6一种载药物支架的制备方法，是由下述步骤组成：
(1)支架表面的预处理
①支架浸泡于丙酮溶液中超声清洗30分钟，然后换用异丙醇溶液浸泡超声清洗30分钟，双蒸水清洗后置于0.2N的盐酸溶液中浸泡30分钟，双蒸水冲洗3次，放入烘箱干燥备用，在洁净干燥的支架原料上先溅射铬成10nm的薄膜，然后再溅射金成40nm的薄膜；
②固定高分子：将经①处理后的支架用0.1M的16-巯基十六烷醇的乙醇水溶液浸泡10分钟，所述乙醇水溶液的体积百分浓度为50％，用蒸馏水冲洗，再放入0.01M环氧氯丙烷-碱性二甘醇二甲醚溶液浸泡1小时，所述碱性二甘醇二甲醚溶液是体积比为1∶3的二甘醇二甲醚和0.4M氢氧化钾水溶液混合制成，然后，用水、乙醇、水各冲洗一次，取出后放入pH为7.4的0.3g/L壳聚糖水溶液中浸泡30分钟；
③含羟基高分子的羧基化：放入0.2M溴乙酸的浓碱水溶液中，(溴乙酸溶解于2MNaOH中)反应15分钟，使壳聚糖羧基化；
(2)药物在支架表面的固化
a.支架表面活化：将已固定高分子的支架放入0.5M的N-羟基丁二酰亚胺和0.5M的乙基-二甲氨基丙基-碳二亚胺的混合水溶液浸泡7分钟以活化支架表面；
b.固定化：将表面活化的支架放入pH为7.4的0.5g/L的聚赖氨酸(载体)水溶液中浸泡30分钟，取出，放入pH为8的1M盐酸乙醇胺水溶液中浸泡15分钟以封闭活化基团；
c.放入质量浓度为0.01％紫杉醇的乙醇水溶液中浸泡30分钟，所述乙醇水溶液的体积百分浓度为70％，再放入pH为7.4的0.5g/L的聚赖氨酸(载体)水溶液中浸泡30分钟；
重复步骤c15次；
将支架放入容器中保存，备临床使用。
图2中是实验组(实施例6制备的支架)和对照组血管内膜与中膜的面积变化。显示载有紫杉醇的支架有抑制血管内膜增生的效果。
实施例7一种载药物支架的制备方法，是由下述步骤组成：
(1)支架表面的预处理
同实施例6；
(2)药物在支架表面的固化
a.同实施例6；
b.固定化：同实施例6；
c.放入质量浓度为0.01％肝素的乙醇水溶液中浸泡30分钟，再放入pH为7.4的0.5g/L的聚赖氨酸(载体)水溶液中浸泡30分钟；
重复步骤e15次；
将支架放入容器中保存，备临床使用。
实施例8一种载药物支架的制备方法，是由下述步骤组成：
(1)支架表面的预处理
同实施例6；
(2)药物在支架表面的固化
a.同实施例6；
b.同实施例6；
c.放入质量浓度为10％水蛭素的水溶液中浸泡30分钟，再放入pH为7.4的0.5g/L的聚赖氨酸(载体)水溶液中浸泡30分钟；
重复步骤c15次；
将支架放入容器中保存，备临床使用。
实施例9一种载药物支架的制备方法，是由下述步骤组成：
(1)支架表面的预处理
同实施例6；
(2)药物在支架表面的固化
a.同实施例6；
b.同实施例6；
c.放入质量浓度为10％地塞米松的乙醇水溶液中浸泡5分钟，所述乙醇水溶液的体积百分浓度为50％，再放入pH为7.4的0.5g/L的聚赖氨酸(载体)水溶液中浸泡30分钟；
重复步骤c15次：
将支架放入容器中保存，备临床使用。
实施例10一种载药物支架的制备方法，是由下述步骤组成：
(1)支架表面的预处理
同实施例6；
(2)药物在支架表面的固化
a.同实施例6；
b.同实施例6；
c.放入质量浓度为0.01％雷帕霉素的乙醇浸泡120分钟，所述乙醇水溶液的体积百分浓度为70％，再放入pH为7.4的0.5g/L的聚赖氨酸(载体)水溶液中浸泡30分钟；
重复步骤c15次；
将支架放入容器中保存，备临床使用。
实施例11一种载药物支架的制备方法，是由下述步骤组成：
(1)支架表面的预处理
①支架浸泡于丙酮溶液中超声清洗30分钟，然后换用异丙醇溶液浸泡超声清洗30分钟，双蒸水清洗后置于0.2N的盐酸溶液中浸泡30分钟，双蒸水冲洗3次，放入烘箱干燥备用，在洁净干燥的支架原料上先溅射铬成50nm的薄膜，然后再溅射金成1000nm的薄膜；
②固定高分子：将经①处理后的支架用0.001M的12-巯基十二烷醇的无水乙醇溶液浸泡5分钟，用蒸馏水冲洗，再放入0.01M环氧氯丙烷-碱性二甘醇二甲醚溶液中浸泡5分钟，所述碱性二甘醇二甲醚溶液是体积比为1∶1的二甘醇二甲醚和0.4M氢氧化钠混合制成，取出后放入pH为3.6的0.1g/L聚乙二醇水溶液中浸泡1小时；
(2)药物在支架表面的固化
将已固定高分子的支架放入质量浓度为0.01％雷帕霉素的乙醇水溶液中浸泡1小时，所述乙醇水溶液的体积百分浓度为50％，再放入pH为7的300g/L聚乙二醇水溶液中浸泡1小时；
重复此步骤15次；
将支架放入容器中保存，备临床使用。
实施例12一种载药物支架的制备方法，是由下述步骤组成：
(1)支架表面的预处理
①支架浸泡于丙酮溶液中超声清洗30分钟，然后换用异丙醇溶液浸泡超声清洗30分钟，双蒸水清洗后置于0.2N的盐酸溶液中浸泡30分钟，双蒸水冲洗3次，放入烘箱干燥备用，在洁净干燥的支架原料上先溅射铬成40nm的薄膜，然后再电镀金成50nm的薄膜；
②固定高分子：将经①处理后的支架用0.1M的11-巯基十一烷酸的乙醇水溶液浸泡5小时，所述乙醇水溶液的体积百分浓度为50％，用蒸馏水冲洗，再放入10M环氧氯丙烷-碱性二甘醇二甲醚溶液中浸泡5小时，所述碱性二甘醇二甲醚溶液是体积比为1∶5的二甘醇二甲醚和0.4M氢氧化钾混合制成，取出后放入pH为9的1000g/L琼脂糖水溶液中浸泡20小时；
(2)药物在支架表面的固化
将已固定高分子的支架放入质量浓度为10％地塞米松的乙醇水溶液中浸泡5小时，所述乙醇水溶液的体积百分浓度为95％，再放入pH为8的100g/L琼脂糖水溶液中浸泡20小时；
重复此步骤15次；
将支架放入容器中保存，备临床使用。
实施例13一种载药物支架的制备方法，是由下述步骤组成：
(1)支架表面的预处理
同实施例11；
(2)药物在支架表面的固化
将已固定高分子的支架放入质量浓度为0.01％雷帕霉素的水溶液中浸泡1小时，再放入pH为7的300g/L聚乙二醇水溶液中浸泡1小时；
重复此步骤15次；
将支架放入容器中保存，备临床使用。
实施例14一种载药物支架的制备方法，是由下述步骤组成：
(1)支架表面的预处理
同实施例11；
(2)药物在支架表面的固化
将已固定高分子的支架放入质量浓度为0.01％雷帕霉素的水溶液中浸泡1小时，再放入pH为7的300g/L聚乙二醇水溶液中浸泡1小时；
重复此步骤15次；
将支架放入容器中保存，备临床使用。
实施例15一种载基因分子支架的制备方法，是由下述步骤组成：
(1)支架表面的预处理
同实施例11；
(2)基因分子在支架表面的固化
将已固定高分子的支架放入0.001g/L基因溶液与0.001g/L壳聚糖(转染试剂)溶液的混合溶液中浸泡5分钟，所述基因溶液是将基因溶于pH为8的PBS溶液制成，所述壳聚糖溶液是将壳聚糖溶于pH为8的PBS溶液制成，再放入pH为7的300g/L聚乙二醇水溶液中浸泡1小时；
重复此步骤15次；
将支架放入容器中保存，备临床使用。
实施例16一种载基因分子支架的制备方法，是由下述步骤组成：
(1)支架表面的预处理
同实施例11；
(2)基因分子在支架表面的固化
将已固定高分子的支架放入1g/L基因溶液与1g/L聚乙烯亚胺(转染试剂)溶液的混合溶液中浸泡60分钟，所述基因溶液是将基因溶于pH为5的PBS溶液制成，所述聚乙烯亚胺溶液是将聚乙烯亚胺溶于pH为5的PBS溶液制成，再放入pH为7的300g/L聚乙二醇水溶液中浸泡1小时；
重复此步骤15次；
将支架放入容器中保存，备临床使用。
实施例17一种载药物支架的制备方法，是由下述步骤组成：
(1)支架表面的预处理
同实施例11；
(2)药物在支架表面的固化
将已固定高分子的支架放入pH为3.6的1000g/L聚酰胺水溶液中浸泡至少5分钟，取出，放入质量浓度为0.01％雷帕霉素的乙醇水溶液中浸泡1小时，所述乙醇水溶液的体积百分浓度为50％，再放入pH为7的300g/L聚乙二醇水溶液中浸泡1小时；
重复此步骤15次；
将支架放入容器中保存，备临床使用。
实施例18一种载药物支架的制备方法，是由下述步骤组成：
(1)支架表面的预处理
同实施例12；
(2)药物在支架表面的固化
将已固定高分子的支架放入pH为9的0.1g/L聚乳酸聚羟基乙酸共聚物水溶液中浸泡至少5分钟，取出，放入质量浓度为10％地塞米松的乙醇水溶液中浸泡5小时，所述乙醇水溶液的体积百分浓度为95％，再放入pH为8的100g/L琼脂糖水溶液中浸泡20小时；
重复此步骤15次；
将支架放入容器中保存，备临床使用。
实施例19一种载基因分子支架的制备方法，是由下述步骤组成：
(1)支架表面的预处理
同实施例15；
(2)基因分子在支架表面的固化
将已固定高分子的支架放入pH为3.6的1000g/L聚酰胺水溶液中浸泡至少5分钟，取出，放入0.001g/L基因溶液与0.001g/L壳聚糖(转染试剂)溶液的混合溶液中浸泡5分钟，所述基因溶液是将基因溶于pH为8的PBS溶液制成，所述壳聚糖溶液是将壳聚糖溶于pH为8的PBS溶液制成，再放入pH为7的300g/L聚乙二醇水溶液中浸泡1小时；
重复此步骤15次；
将支架放入容器中保存，备临床使用。
实施例20一种载基因支架的制备方法，是由下述步骤组成：
(1)支架表面的预处理
同实施例16；
(2)基因分子在支架表面的固化
将已固定高分子的支架放入pH为9的0.1g/L聚乳酸聚羟基乙酸共聚物水溶液中浸泡至少5分钟，取出，放入1g/L基因溶液与1g/L聚乙烯亚胺(转染试剂)溶液的混合溶液中浸泡60分钟，所述基因溶液是将基因溶于pH为5的PBS溶液制成，所述聚乙烯亚胺溶液是将聚乙烯亚胺溶于pH为5的PBS溶液制成，再放入pH为7的300g/L聚乙二醇水溶液中浸泡1小时；
重复此步骤15次；
将支架放入容器中保存，备临床使用。
实施例21一种载基因支架的制备方法，是由下述步骤组成：
(1)支架表面的预处理
①支架浸泡于丙酮溶液中超声清洗30分钟，然后换用异丙醇溶液浸泡超声清洗30分钟，双蒸水清洗后置于0.2N的盐酸溶液中浸泡30分钟，双蒸水冲洗3次，放入烘箱干燥备用，在洁净干燥的支架原料上先溅射铬成40nm的薄膜，然后再电镀金成40nm的薄膜；
②固定高分子：将经①处理后的支架用0.05M的16-巯基十六烷酸的无水乙醇溶液浸泡2小时，用蒸馏水冲洗，再放入5M环氧溴丙烷-碱性二甘醇二甲醚溶液中浸泡2小时，所述碱性二甘醇二甲醚溶液是体积比为1∶3的二甘醇二甲醚和0.4M氢氧化钠混合制成，取出后放入pH为7的100g/L普鲁兰多糖水溶液中浸泡20小时；
(2)基因分子在支架表面的固化
将已固定高分子的支架放入0.001g/L需载入的基因溶液与0.001g/L脂质体Lipofectin(Invitrogen)溶液的混合溶液中浸泡10小时，所述基因溶液是将基因溶于pH为7的PBS溶液制成，所述Lipofectin(Invitrogen)溶液是将Lipofectin(Invitrogen)溶于pH为7的PBS溶液，再放入pH为7的100g/L普鲁兰多糖水溶液中浸泡20小时；
重复此步骤15次；
将支架放入容器中保存，备临床使用。
实施例22一种载基因支架的制备方法，是由下述步骤组成：
(1)支架表面的预处理
①支架浸泡于丙酮溶液中超声清洗30分钟，然后换用异丙醇溶液浸泡超声清洗30分钟，双蒸水清洗后置于0.2N的盐酸溶液中浸泡30分钟，双蒸水冲洗3次，放入烘箱干燥备用，在洁净干燥的支架原料上先溅射铬成40nm的薄膜，然后再溅射银成50nm的薄膜；
②固定高分子：将经①处理后的支架用0.01M的7-巯基庚醇的乙醇水溶液浸泡20小时，所述乙醇水溶液的体积百分浓度为70％，用蒸馏水冲洗，再放入5M环氧溴丙烷-碱性二甘醇二甲醚溶液中浸泡20小时，所述碱性二甘醇二甲醚溶液是体积比为1∶3的二甘醇二甲醚和0.4M氢氧化钠混合制成，取出后放入pH为7.4的0.2g/L的壳聚糖水溶液中浸泡30分钟；
(2)基因分子在支架表面的固化
将已固定高分子的支架放入0.1g/L需载入的基因溶液与0.1g/L脂质体1，2-二油酰-3-三甲铵基丙烷混合溶液中浸泡10小时，所述基因溶液是将基因溶于pH为7.4的PBS溶液制成，所述1，2-二油酰-3-三甲铵基丙烷溶液是将脂质体为1，2-二油酰-3-三甲铵基丙烷溶于pH为7.4的PBS溶液，再放入pH为7.4的0.2g/L的壳聚糖水溶液中浸泡30分钟；
重复此步骤15次；
将支架放入容器中保存，备临床使用。
用本实施例的方法，转染试剂还可以选用聚酰胺、聚赖氨酸、聚精氨酸、聚天冬氨酸、聚亚氨基碳酸酯中至少一种或所述各种转染试剂的各种修饰产物中至少一种组成新的实施例。
用本实施例的方法，巯基烷醇还可以选用10-巯基癸醇、14-巯基十四烷醇、15-巯基十五烷醇、17-巯基十七烷醇、18-巯基十八烷6-巯基己酸、7-巯基庚酸、9-巯基壬酸、10-巯基癸酸、11-巯基十一烷酸14-巯基十四烷酸、15-巯基十五烷酸、16-巯基十六烷酸、17-巯基十七烷酸、18-巯基十八烷酸中至少一种组成新的实施例。
实施例23一种载基因支架的制备方法，是由下述步骤组成：
(1)支架表面的预处理
①支架浸泡于丙酮溶液中超声清洗30分钟，然后换用异丙醇溶液浸泡超声清洗30分钟，双蒸水清洗后置于0.2N的盐酸溶液中浸泡30分钟，双蒸水冲洗3次，放入烘箱干燥备用，在洁净干燥的支架原料上镀金成1000nm的薄膜；
②固定高分子：将经①处理后的支架用0.01M的8-巯基辛醇的乙醇水溶液浸泡20小时，所述乙醇水溶液的体积百分浓度为70％，步骤同实施例6的②，高分子为藻酸双酯钠；
③含羟基高分子的羧基化：放入1M溴乙酸的浓碱水溶液中，(溴乙酸溶解于2M NaOH中)反应10小时，使藻酸双酯钠羧基化；
(2)基因分子在支架表面的固化
步骤同实施例1的(2)，所不同的是载体为聚乳酸聚羟基乙酸共聚物。
实施例24一种载基因支架的制备方法，是由下述步骤组成：
(1)支架表面的预处理
①支架浸泡于丙酮溶液中超声清洗30分钟，然后换用异丙醇溶液浸泡超声清洗30分钟，双蒸水清洗后置于0.2N的盐酸溶液中浸泡30分钟，双蒸水冲洗3次，放入烘箱干燥备用，在洁净干燥的支架原料上溅射金成50nm的薄膜；
②固定高分子：将经①处理后的支架用0.01M的9-巯基壬醇的乙醇水溶液浸泡20小时，所述乙醇水溶液的体积百分浓度为70％，步骤同实施例18的②，高分子为聚氧乙烯化蓖麻油；
③含羟基高分子的羧基化：放入10M溴乙酸的浓碱水溶液中，(溴乙酸溶解于2MNaOH中)反应6小时，使聚氧乙烯化蓖麻油羧基化；
(2)基因分子在支架表面的固化
步骤同实施例1的(2)，所不同的是载体为聚谷氨酸。
实施例25一种载基因支架的制备方法，是由下述步骤组成：
(1)支架表面的预处理
①支架浸泡于丙酮溶液中超声清洗30分钟，然后换用异丙醇溶液浸泡超声清洗30分钟，双蒸水清洗后置于0.2N的盐酸溶液中浸泡30分钟，双蒸水冲洗3次，放入烘箱干燥备用，在洁净干燥的支架原料上溅射金成40nm的薄膜；
②固定高分子：将经①处理后的支架用0.01M的8-巯基辛酸的乙醇水溶液浸泡20小时，所述乙醇水溶液的体积百分浓度为70％，步骤同实施例18的②，高分子为聚原酸酯；
③含羟基高分子的羧基化：放入2M溴乙酸的浓碱水溶液中，(溴乙酸溶解于2M NaOH中)反应8小时，使聚原酸酯羧基化；
(2)基因分子在支架表面的固化
步骤同实施例1的(2)，所不同的是载体为聚精氨酸。
实施例26一种载药物支架的制备方法，是由下述步骤组成：
(1)支架表面的预处理
①支架浸泡于丙酮溶液中超声清洗30分钟，然后换用异丙醇溶液浸泡超声清洗30分钟，双蒸水清洗后置于0.2N的盐酸溶液中浸泡30分钟，双蒸水冲洗3次，放入烘箱干燥备用，在洁净干燥的支架原料上溅射金成1000nm的薄膜；
②固定高分子：步骤同实施例2；
③含羟基高分子的羧基化：步骤同实施例2；
(2)药物在支架表面的固化
a.支架表面活化：将经步骤(1)处理的具有羧基表面的支架放入0.01M N-羟基丁二酰亚胺和0.01M乙基-二甲氨基丙基-碳二亚胺的混合水溶液中浸泡1分钟进行表面活化；
b.固定化：将表面活化的支架放入pH为3.6的10g/L聚天冬氨酸水溶液中浸泡5分钟，取出，放入pH为8的0.1M盐酸乙醇胺水溶液中浸泡1分钟以封闭活化基团；
c.放入质量浓度为1％紫杉醇的乙醇水溶液中浸泡5分钟，所述乙醇水溶液的体积百分浓度为80％，再放入pH为3.6的10g/L聚天冬氨酸水溶液中浸泡5分钟；
重复步骤c15次；
将支架放入容器中保存，备临床使用。
实施例27一种载药物支架的制备方法，是由下述步骤组成：
(1)支架表面的预处理
①支架浸泡于丙酮溶液中超声清洗30分钟，然后换用异丙醇溶液浸泡超声清洗30分钟，双蒸水清洗后置于0.2N的盐酸溶液中浸泡30分钟，双蒸水冲洗3次，放入烘箱干燥备用，在洁净干燥的支架原料上溅射银成50nm的薄膜；
②固定高分子：步骤同实施例5；
③含羟基高分子的羧基化：放入10M溴乙酸的浓碱水溶液中，(溴乙酸溶解于2M NaOH中)反应10分钟，使含羟基高分子羧基化；
(2)药物在支架表面的固化
a.支架表面活化：将经步骤(1)处理的具有羧基表面的支架放入0.1M N-羟基丁二酰亚胺和0.1M乙基-二甲氨基丙基-碳二亚胺的混合水溶液中浸泡10小时进行表面活化；
b.固定化：将表面活化的支架放入pH为9的0.1g/L环磷酰胺水溶液中浸泡1小时，取出，放入pH为8的10M盐酸乙醇胺水溶液中浸泡30分钟以封闭活化基团；
c.放入质量浓度为10％水蛭素水溶液中浸泡1小时，再放入pH为9的0.1g/L环磷酰胺水溶液中浸泡1小时；
重复步骤c15次；
将支架放入容器中保存，备临床使用。
实施例28一种载药物支架的制备方法，是由下述步骤组成：
(1)支架表面的预处理
①支架浸泡于丙酮溶液中超声清洗30分钟，然后换用异丙醇溶液浸泡超声清洗30分钟，双蒸水清洗后置于0.2N的盐酸溶液中浸泡30分钟，双蒸水冲洗3次，放入烘箱干燥备用，在洁净干燥的支架原料上溅射银成1000nm的薄膜；
②固定高分子：步骤同实施例6；
③含羟基高分子的羧基化：放入5M溴乙酸的浓碱水溶液中，(溴乙酸溶解于2M NaOH中)反应30分钟，使含羟基高分子羧基化；
(2)药物在支架表面的固化
a.支架表面活化：将经步骤(1)处理的具有羧基表面的支架放入10M N-羟基丁二酰亚胺和10M乙基-二甲氨基丙基-碳二亚胺的混合水溶液中浸泡1小时进行表面活化；
b.固定化：将表面活化的支架放入pH为7的10g/L聚氨基甲酸酯水溶液中浸泡10小时，取出，放入pH为8的10M盐酸乙醇胺水溶液中浸泡30分钟以封闭活化基团；
c.放入质量浓度为0.01％雷帕霉素的乙醇水溶液浸泡10小时，所述乙醇水溶液的体积百分浓度为50％，再放入pH为7的10g/L聚氨基甲酸酯水溶液中浸泡10小时；
重复步骤c15次；
将支架放入容器中保存，备临床使用。
实施例29一种载基因支架的制备方法，是由下述步骤组成：
(1)支架表面的预处理
①支架浸泡于丙酮溶液中超声清洗30分钟，然后换用异丙醇溶液浸泡超声清洗30分钟，双蒸水清洗后置于0.2N的盐酸溶液中浸泡30分钟，双蒸水冲洗3次，放入烘箱干燥备用，在洁净干燥的支架原料上镀银成50nm的薄膜；
②固定高分子：步骤同实施例2；
③含羟基高分子的羧基化：步骤同实施例1；
(2)基因分子在支架表面的固化
a.支架表面活化：步骤同实施例1；
b.固定化：将表面活化的支架放入pH为7.4的100g/L聚亚氨基碳酸酯水溶液中浸泡10小时，取出，放入pH为9的0.01M盐酸乙醇胺水溶液中浸泡15分钟以封闭活化基团；
c.放入0.001g/L基因溶液与0.001g/L聚赖氨酸溶液的混合溶液中浸泡1小时，所述基因溶液是将基因溶于pH为7.4的PBS溶液制成，所述聚赖氨酸溶液是将聚赖氨酸溶于pH为7.4的PBS溶液制成，然后再放入pH为7.4的100g/L聚亚氨基碳酸酯水溶液中浸泡10小时；
重复步骤c15次；
将支架放入容器中保存，备临床使用。
实施例30一种载基因支架的制备方法，是由下述步骤组成：
(1)支架表面的预处理
①支架浸泡于丙酮溶液中超声清洗30分钟，然后换用异丙醇溶液浸泡超声清洗30分钟，双蒸水清洗后置于0.2N的盐酸溶液中浸泡30分钟，双蒸水冲洗3次，放入烘箱干燥备用，在洁净干燥的支架原料上镀银成50nm的薄膜；
②固定高分子：步骤同实施例1；
③含羟基高分子的羧基化：步骤同实施例1；
(2)基因分子在支架表面的固化
a.支架表面活化：步骤同实施例1；
b.固定化：将表面活化的支架放入pH为7的1000g/L聚氧杂酯水溶液中浸泡10小时，取出，放入pH为9的0.01M盐酸乙醇胺水溶液中浸泡15分钟以封闭活化基团；
c.放入1g/L基因溶液与1g/L聚亚氨基碳酸酯修饰物溶液的混合溶液中浸泡5分钟，所述基因溶液是将基因溶于pH为7的PBS溶液制成，所述聚亚氨基碳酸酯修饰物是将聚亚氨基碳酸酯修饰物溶于pH为7的PBS溶液制成，然后再放入pH为7的1000g/L聚氧杂酯水溶液中浸泡10小时；
重复步骤c15次；
将支架放入容器中保存，备临床使用。
实施例31一种载基因支架的制备方法，是由下述步骤组成：
(1)支架表面的预处理
①支架浸泡于丙酮溶液中超声清洗30分钟，然后换用异丙醇溶液浸泡超声清洗30分钟，双蒸水清洗后置于0.2N的盐酸溶液中浸泡30分钟，双蒸水冲洗3次，放入烘箱干燥备用，在洁净干燥的支架原料上镀银成50nm的薄膜；
②固定高分子：步骤同实施例2；
③含羟基高分子的羧基化：步骤同实施例16；
(2)基因分子在支架表面的固化
a.支架表面活化：步骤同实施例16；
b.固定化：将表面活化的支架放入pH为7.6的10g/L聚胺酯水溶液中浸泡2小时，取出，放入pH为9的0.01M盐酸乙醇胺水溶液中浸泡15分钟以封闭活化基团；
c.放入1g/L基因溶液与1g/L聚亚氨基碳酸酯修饰物溶液的混合溶液中浸泡5分钟，所述基因溶液是将基因溶于pH为7.6的PBS溶液制成，所述聚亚氨基碳酸酯修饰物是将聚亚氨基碳酸酯修饰物溶于pH为7.6的PBS溶液制成，然后再放入pH为7.6的10g/L聚胺酯水溶液中浸泡2小时；
重复步骤c15次；
将支架放入容器中保存，备临床使用。
实施例32一种载基因支架的制备方法，是由下述步骤组成：
(1)支架表面的预处理
①步骤同实施例1；
②固定高分子：步骤同实施例18；
(2)基因分子在支架表面的固化
①将已固定高分子的支架先放入10M N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶二硫基)丙酸酯溶液活化的100g/L CD34抗体溶液中浸泡30分钟，所述N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶二硫基)丙酸酯溶液是将N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶二硫基)丙酸酯溶于pH为7.4的PBS溶液制成所述抗体溶液是将抗体溶于pH为7.4的PBS溶液制成；
②放入1g/L基因与1g/L Lipofectin(Invitrogen)的混合溶液中浸泡1小时，所述基因溶液是将基因溶于pH为7.4的PBS溶液制成，所述转染试剂Lipofectin(Invitrogen)溶液是将转染试剂Lipofectin(Invitrogen)溶于pH为7.4的PBS溶液，然后再放入10M N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶二硫基)丙酸酯溶液活化的100g/L CD34抗体溶液中浸泡30分钟；
重复步骤②15次；
将支架放入容器中保存，备临床使用。
实施例33一种载基因支架的制备方法，是由下述步骤组成：
(1)支架表面的预处理
①步骤同实施例1；
②固定高分子：步骤同实施例18；
(2)基因分子在支架表面的固化
①将已固定高分子的支架先放入0.1M N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶二硫基)丙酸酯溶液活化的0.01g/L CD34抗体溶液中浸泡5分钟，所述N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶二硫基)丙酸酯溶液是将N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶二硫基)丙酸酯溶于pH为5的PBS溶液制成所述抗体溶液是将抗体溶于pH为7.4的PBS溶液制成；
②放入0.001g/L基因与0.001g/L Lipofectin(Invitrogen)的混合溶液中浸泡5分钟，所述基因溶液是将基因溶于pH为5的PBS溶液制成，所述转染试剂Lipofectin(Invitrogen)溶液是将转染试剂Lipofectin(Invitrogen)溶于pH为5的PBS溶液，然后再放入10M N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶二硫基)丙酸酯溶液活化的100g/L CD34抗体溶液中浸泡30分钟；
重复步骤②15次；
将支架放入容器中保存，备临床使用。
实施例34一种载基因支架的制备方法，是由下述步骤组成：
(1)支架表面的预处理
①步骤同实施例1；
②固定高分子：步骤同实施例18；
(2)基因分子在支架表面的固化
①将已固定高分子的支架先放入10M N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶二硫基)丙酸酯溶液活化的100g/L CD34抗体溶液中浸泡30分钟，所述N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶二硫基)丙酸酯溶液是将N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶二硫基)丙酸酯溶于pH为8的PBS溶液制成所述抗体溶液是将抗体溶于pH为7.4的PBS溶液制成；
②放入1g/L基因与1g/L Lipofectin(Invitrogen)的混合溶液中浸泡1小时，所述基因溶液是将基因溶于pH为8的PBS溶液制成，所述转染试剂Lipofectin(Invitrogen)溶液是将转染试剂Lipofectin(Invitrogen)溶于pH为8的PBS溶液，然后再放入10M N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶二硫基)丙酸酯溶液活化的100g/L CD34抗体溶液中浸泡30分钟；
重复步骤②15次；
将支架放入容器中保存，备临床使用。
用本实施例的方法，转染试剂还可以选用聚酰胺、聚赖氨酸、聚精氨酸、聚天冬氨酸、聚亚氨基碳酸酯中至少一种或所述各种转染试剂的各种修饰产物中至少一种组成新的实施例。
用本实施例的方法，巯基烷醇还可以选用10-巯基癸醇、14-巯基十四烷醇、15-巯基十五烷醇、17-巯基十七烷醇、18-巯基十八烷6-巯基己酸、7-巯基庚酸、9-巯基壬酸、10-巯基癸酸、11-巯基十一烷酸14-巯基十四烷酸、15-巯基十五烷酸、16-巯基十六烷酸、17-巯基十七烷酸、18-巯基十八烷酸中至少一种组成新的实施例。
Claims (10)
1.一种载药或载基因支架的制备方法，其特征是包括如下步骤：
(1)支架表面的预处理
①溅射或电镀：在洁净干燥的支架原料上直接溅射或电镀金或银成40～1000nm的薄膜，或者先溅射铬成10～50nm的薄膜，然后再溅射或电镀金或银成40～1000nm的薄膜；
②固定高分子：将经步骤①处理后的支架用0.001-0.1M的巯基烷醇的乙醇水溶液或0.001-0.1M的巯基烷酸的乙醇水溶液浸泡至少5分钟，所述乙醇水溶液的体积百分浓度为50％～100％，用蒸馏水冲洗，再放入0.01M～10M环氧氯丙烷-碱性二甘醇二甲醚溶液或环氧溴丙烷-碱性二甘醇二甲醚溶液中浸泡至少5分钟，所述碱性二甘醇二甲醚溶液是体积比为1∶1-5的二甘醇二甲醚和0.4M碱金属氢氧化物混合制成，取出后放入pH为3.6-9的0.1g/L-1000g/L高分子水溶液中浸泡至少5分钟；
(2)药物或基因分子在支架表面的固化
固化的方法为下述步骤之一种：
①直接固化：将已固定高分子的支架放入质量浓度为0.01％-10％药物的水溶液或质量浓度为0.01％-10％药物的乙醇水溶液中浸泡至少5分钟或放入0.001-1g/L基因溶液与0.001-1g/L转染试剂溶液的混合溶液中浸泡至少5分钟，所述乙醇水溶液的体积百分浓度为50％～100％，所述基因溶液是将基因溶于pH为5-8的PBS溶液制成，所述转染试剂溶液是将转染试剂溶于pH为5-8的PBS溶液制成；
②间接固化：将已固定高分子的支架放入pH为3.6-9的0.1g/L-1000g/L载体水溶液中浸泡至少5分钟，取出，放入质量浓度为0.01％-10％药物的水溶液或质量浓度为0.01％-10％药物的乙醇水溶液中浸泡至少5分钟或放入0.001-1g/L基因溶液与0.001-1g/L转染试剂溶液的混合溶液中浸泡至少5分钟，所述乙醇水溶液的体积百分浓度为50％～100％，所述基因溶液是将基因溶于pH为5-8的PBS溶液制成，所述转染试剂溶液是将转染试剂溶于pH为5-8的PBS溶液制成；
③先活化，上载体，封闭后再固化：
a.支架表面活化：将经步骤(1)处理的具有羧基表面的支架放入0.01-10M N-羟基丁二酰亚胺和0.01-10M乙基-二甲氨基丙基-碳二亚胺的混合水溶液中浸泡至少1分钟进行表面活化；
b.固定化：将表面活化的支架放入pH为3.6-9的0.1g/L-1000g/L载体水溶液中浸泡至少5分钟，取出，放入pH为8-9的0.01-10M盐酸乙醇胺水溶液中浸泡1-30分钟以封闭活化基团，再放入质量浓度为0.01％-10％药物的水溶液或质量浓度为0.01％-10％药物的乙醇水溶液中浸泡至少5分钟或放入0.001-1g/L基因溶液与0.001-1g/L转染试剂溶液的混合溶液中浸泡至少5分钟，所述乙醇水溶液的体积百分浓度为50％～100％，所述基因溶液是将基因溶于pH为5-8的PBS溶液制成，所述转染试剂溶液是将转染试剂溶于pH为5-8的PBS溶液制成；
④先连抗体，再固化基因分子：将已固定高分子的支架先放入0.01-10M N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶二硫基)丙酸酯溶液活化的0.01-100g/L抗体溶液中浸泡5-30分钟，再放入0.001-1g/L基因与0.001-1g/L转染试剂的混合溶液中浸泡至少5分钟，所述N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶二硫基)丙酸酯溶液是将N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶二硫基)丙酸酯溶于pH为5-8的PBS溶液制成，所述抗体溶液是将抗体溶于pH为5-8的PBS溶液制成，所述基因溶液是将基因溶于pH为5-8的PBS溶液制成，所述转染试剂溶液是将转染试剂溶于pH为5-8的PBS溶液制成。
2.根据权利要求1所述的一种载药或载基因支架的制备方法，其特征是所述步骤(1)支架表面的预处理中包括③含羟基高分子的羧基化：将已固定了含羟基高分子的支架放入0.01-10M溴乙酸的浓碱水溶液中浸泡至少5分钟，所述浓碱为2M NaOH水溶液，所述含羟基高分子成羧基化。
3.根据权利要求1所述的一种载药或载基因支架的制备方法，其特征是所述高分子为壳聚糖、葡聚糖、肝素、纤维素、普鲁兰多糖、聚乙二醇、琼脂糖、藻酸双酯钠、聚氧乙烯化蓖麻油、聚原酸酯、聚乳酸聚羟基乙酸共聚物中至少一种。
4.根据权利要求1所述的一种载药或载基因支架的制备方法，其特征是所述载体为壳聚糖、聚赖氨酸、聚乙烯亚胺、聚酰胺、聚乳酸聚羟基乙酸共聚物、聚谷氨酸、聚精氨酸、聚天冬氨酸、环磷酰胺、聚氨基甲酸酯、聚亚氨基碳酸酯、聚氧杂酯、聚胺酯中至少一种或其修饰产物中至少一种。
5.根据权利要求1所述的一种载药或载基因支架的制备方法，其特征是所述巯基烷醇为6-巯基己醇、7-巯基庚醇、8-巯基辛醇、9-巯基壬醇、10-巯基癸醇、11-巯基十一烷醇、12-巯基十二烷醇、13-巯基十三烷醇、14-巯基十四烷醇、15-巯基十五烷醇、16-巯基十六烷醇、17-巯基十七烷醇、18-巯基十八烷醇中至少一种。
6.根据权利要求1所述的一种载药或载基因支架的制备方法，其特征是所述巯基烷酸为6-巯基己酸、7-巯基庚酸、8-巯基辛酸、9-巯基壬酸、10-巯基癸酸、11-巯基十一烷酸、12-巯基十二烷酸、13-巯基十三烷酸、14-巯基十四烷酸、15-巯基十五烷酸、16-巯基十六烷酸、17-巯基十七烷酸、18-巯基十八烷酸中至少一种。
7.根据权利要求1所述的一种载药或载基因支架的制备方法，其特征是所述转染试剂为脂质体、壳聚糖、聚乙烯亚胺、聚酰胺、聚赖氨酸、聚精氨酸、聚天冬氨酸、聚亚氨基碳酸酯中至少一种或所述各种转染试剂的各种修饰产物中至少一种。
8.根据权利要求7所述的一种载药或载基因支架的制备方法，其特征是所述脂质体为1，2-二油酰-3-三甲铵基丙烷、Lipofectin或LipofectamineTM2000。
9.根据权利要求1所述的一种载药或载基因支架的制备方法，其特征是所述药物为紫杉醇、雷帕霉素、地塞米松、肝素或水蛭素。
10.根据权利要求1所述的一种载药或载基因支架的制备方法，其特征是所述抗体为抗CD34抗体。
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