CN1954842A - 蜜远志及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种蜜远志，它以远志为原料，加入炼蜜炮制而成，它的HPLC指纹图谱同时含有五个明显特征峰。本发明还提供了该蜜远志的制备方法。该蜜远志毒性低、药效明确，通过测定该蜜远志的HPLC指纹图谱，其HPLC图谱与生远志有实质性差异，并通过指纹图谱控制其质量，使本发明蜜远志质量稳定，可控性强，为临床安全用药提供新的选择。

Description

蜜远志及其制备方法

技术领域

本发明提供了一种远志的炮制品，具体地，它是远志的蜜制品，属药物领域。

背景技术

远志为常见中药，始载于《神农本草经》。《中华人民共和国药典》(2005版第一部)收载远志Polygala tenuifolia Willd和卵叶远志P.sibirica L.的干燥根为正品药材。本品味苦、辛、温，归心、肾、肺经，具有安神益智、祛痰、消肿功效，用于心肾不交引起的失眠多梦、健忘惊悸、神志恍惚、咳痰不爽、疮疡肿毒、乳房肿痛等。根据《中华本草》记载及现代对远志的应用情况分析，临床单味使用生远志治疗喉痹作痛，小儿惊悸，神经衰弱，咳嗽，脑风头痛，气郁成臌胀，蛇螯伤，一切痈疽、发背、疖毒等，约占配伍应用的30％。现代临床用以治疗神经衰弱、失眠、智力低下、慢性支气管炎等，《中华人民共和国药典》及中药学教材均载有炙用或生用。现今临床应用较广泛，尤其在安神、增智、祛痰方面的应用及其普遍。但由于本品生用内服常有“戟人咽喉”的副作用，故临床多用炮制品。且不同炮制品，其临床应用略有不同。现代研究表明：临床应用中发现远志常规用量偶可引起轻度恶心，若大剂量服用可引起恶心、呕吐、腹泻、溶血[陈达理，周立红.常用中药与不良反应.(北京)：军事医科科学出版社，1998：196]。临床使用注明如有胃、十二指肠溃疡、胃炎、严重贫血或气血两虚者慎用[王大观，杨淑芬.中药临床学.(北京)：人民卫生出版社，1998：276～277]。提示临床使用远志应注意其毒副作用。

远志炮制品的应用历史较早。南齐时代就有去心用(《刘涓子鬼遗方》龚庆宣著)。南北朝刘宋时代就提出“用时须去心，若不去心，服之令人闷”。用熟甘草汤浸(《雷公炮炙论》)的方法沿用至今。此外宋代增加了炒黄、甘草煮、生姜汁炒(《普济本事方》)、酒浸(《鸡峰普济方》)、焙制、酒洒蒸(《和剂局方》)、姜汁淹、酒蒸炒(《三因极一病证方论》)等方法。明、清时代又增加了小麦炒、干姜汁蘸焙(《普济方》)、灯心煮(《奇效良方》)、甘草，黑豆水煮后姜汁炒(《医学入门》)、猪胆汁煮过，晒干，姜汁制(《增补万病回春》)、米泔浸、米泔煮(《证治准绳》)、微炒(《外科正宗》)、甘草汁浸后蒸(《先醒斋医学广笔记》)、炙制(《医宗金鉴》)、炒炭(《类证治裁》)等炮制方法。现代沿用生远志，远志筒(肉)，蜜制，甘草制，朱砂制等[叶定江，张世臣.主编.中药炮制学.(北京)人民卫生出版社，1999：315～318]。其中蜜制具体方法如下：①取炼蜜，加入少许开水稀释后，淋于远志中，拌匀，稍闷润，待蜜被吸尽后，置炒制容器内，用文火加热，炒至深黄色，略带焦斑，不粘手时取出，晒凉。每100kg远志，用炼蜜20kg。(《中华人民共和国药典》63年版)②取炼蜜，用适量开水稀释后，加入远志段拌匀置锅内，用文火加热，炒至不粘手为度，取出，放凉。每远志100kg，用炼蜜25kg[中华人民共和国药政管理局编.全国中药炮制规范(一九八八年版).人民卫生出版社，1988：57～58]。③先将蜜入锅溶解，加少许水，拌均匀，放入远志拌炒，至蜜水被完全吸干为止。取出后，用文火或烤箱烘烤，呈黄色后取出。置铁筛上堆放，冷至不粘手，用手揉即散为度。每100kg生远志用蜜50kg[于华光编著.常用中草药的加工炮制.(北京)：台盾出版社出版，1992：74]。④取泡远志，用蜜制至不钻手为度。每远志10kg，用蜜3kg[江西省卫生厅药政管用局编.江西省中药炮制规范(1991年版).(上海)上海科学技术出版社出版，1991：62～63]。⑤取制远志，用蜂蜜按蜜制法炒至远志呈黄棕色时取出，置铁丝网上烘干。每制远志1000g，用蜂蜜160g[贵州省卫生厅.贵州省中药饮片炮制规范.(贵州)：贵州人民卫生出版社，1988：50]。“远志，酒浸半日，新布裹捶取肉，焙用”(明·《普济方》)。目前报道了蜜远志的化学成分研究，远志蜜制后能增强其化痰止咳作用，刺激胃粘膜迷走神经，反射性地引起支气管分泌，使气管内容物易咯出，用于慢性支气管炎，咳嗽痰多，粘稠不爽等[单建学.远志的炮制及临床应用.湖南中医药导报，2001，7(2)：89]。试验表明，蜜远志与其它炮制品中浸出物含量有显著性差异，而其它炮制品之间无显著性差异，薄层鉴别结果显示各炮制品与生品其成分未明显变化。且浸出物中主要成分为具祛痰作用的皂甙类，从而印证了远志蜜制后能增强化痰止咳作用[李希，谢守德.远志不同炮制工艺比较.四川中医，2002，20(3)：19～20]。

现有文献记载的传统蜜制工艺一般仅对加蜜量进行规定，而对加热温度、时间均无具体规定，大多以主观判断为主，如“加蜜炒至不粘手为度”等，难以掌握，且缺乏可靠性，且制备的产品质量稳定性及可控性差，难以保证临床用药的安全、有效。

发明内容

为了解决上述问题，本发明的技术方案是提供了一种蜜远志，它是远志的新炮制品。本发明还提供了该蜜远志的制备方法。

本发明提供了一种蜜远志，它由以远志为原料，加入炼蜜炮制而成，它的HPLC指纹图谱同时含有五个明显特征峰，相对保留时间分别是：相对保留时间为0.2445-0.2458的2号峰，相对保留时间为0.5563-0.5589的5号峰，相对保留时间为1.0000的S号峰，相对保留时间为1.8505-1.8557的12号峰，相对保留时间为2.1861-2.1986的14峰；相对峰面积分别是2号峰0.3760-0.4333，5号峰0.3120-0.4091，S号峰：1.0000，12号峰：0.2640-0.2962，14号峰：0.3063-0.3487。

其中，它的指纹图谱如图1所述，其色谱条件为：

色谱柱：DIKMA公司Diamonsil C₁₈(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈-0.05％磷酸水进行梯度洗脱；检测波长：350nm；柱温：30℃；流速：1.0ml/分钟；进样量：10μl。

进一步地，该指纹图谱共有21个特征峰，相对保留时间分别是：1号峰0.0759、2号峰0.2453、3号峰0.3362、4号峰0.4790、5号峰0.5568、6号峰0.6980、S号峰1.0000、7号峰1.0660、8号峰1.2831、9号峰1.6060、10号峰1.6965、11号峰1.8117、12号峰1.8553、13号峰2.0745、14号峰2.1939、15号峰2.9426、16号峰2.9755、17号峰2.9994、18号峰3.0172、19号峰3.0319、20号峰3.1299。

它是由下述制备方法制备而成：

称取下述重量配比的原料：生远志：100份、炼蜜10～30份，加入原料1/5倍量水，浸泡3h，60～160℃炒制3～9min，即得。

进一步地，它是由下述制备方法制备而成：

称取下述重量配比的原料：生远志：100份、炼蜜30份，加入原料1/5倍量水，浸泡3h，60℃炒制9min，即得。

本发明还提供了一种药物组合物，它是由所述的蜜远志或其提取物为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅料性成分制备而成的制剂。

其中，所述的制剂是口服制剂。进一步地，所述的口服制剂是片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂。

本发明蜜远志是通过对制备过程中，蜜制影响较大的蜜制时间、温度、加蜜量因素分析，并采用炮制法——毒理药理实验——与化学成分分析相结合的综合研究模式，避免实验过程中因单一因素干扰实验结果，通过多层次研究，客观反映蜜制减毒存效，确定出稳定、最佳的蜜制工艺。通过该工艺制备的蜜远志毒性低、药效明确，且测定出HPLC指纹图谱，该HPLC图谱与生远志有实质性差异，且通过该HPLC指纹图谱的测定，可直接反映制备的蜜远志高效低毒的特性，达到质量稳定，可控性强的目的，为临床安全用药提供新的选择及依据。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

图1 蜜远志共有峰标定图

图2 10批蜜远志水煎液指纹图谱

图3 蜜远志水煎液对照图谱

图4 生远志水煎液指纹图谱

图5 生远志水煎液对照图谱

图6 生远志水煎液与蜜远志水煎液对照图谱的比较(注：最低线为蜜远志)

图7 生远志水煎液对照图谱与蜜远志水煎液对照图谱的比较(1生远志、2蜜远志)

具体实施方式

实施例1  本发明9个蜜制样品的详细制备工艺

1号：每100g生远志加蜜10ml，水20ml闷润3h，60℃炒制3min；

2号：每100g生远志加蜜20ml，水20ml闷润3h，60℃炒制6min；

3号：每100g生远志加蜜30ml，水20ml闷润3h，60℃炒制9min；

4号：每100g生远志加蜜10ml，水20ml闷润3h，110℃炒制6min；

5号：每100g生远志加蜜20ml，水20ml闷润3h，110℃炒制9min；

6号：每100g生远志加蜜30ml，水20ml闷润3h，110℃炒制3min；

7号：每100g生远志加蜜10ml，水20ml闷润3h，160℃炒制9min；

8号：每100g生远志加蜜20ml，水20ml闷润3h，160℃炒制3min；

9号：每100g生远志加蜜30ml，水20ml闷润3h，160℃炒制6min；

均得到不同规格的蜜远志。

实施例2  本发明药物颗粒剂的制备

取生远志100g，炼蜜30g，加入水20ml闷润3h，60℃炒制9min，得蜜远志，打粉，加入淀粉，制粒、整粒，即得颗粒剂。

实施例3  本发明药物片剂的制备

取每100g生远志加蜜20ml，水20ml闷润3h，160℃炒制3min，得蜜远志，打粉，粉末直接压片，得片剂。

实施例4  本发明药物胶囊剂的制备

取每100g生远志加蜜20ml，加入水20ml闷润3h，60℃炒制6min，加水浸泡，加水煎煮，浓缩，得浸膏，加入淀粉，制颗粒、整粒，即得。

除了上述的制备的剂型外，可将实施例1制备的不同远志炮制品为原料，经提取、浓缩、提纯，可制备成不同规格的药学上常用的制剂。

实施例5  本发明蜜远志水煎液的HPLC指纹图谱测定试验及与生远志水煎液的HPLC指纹图谱的比较

1、仪器与材料

WATERS2995高效液相色谱仪

DAD检测器

WATERS-EMPOWER工作站

BP211D电子分析天平(SARTORIUS)

远志：生远志购自成都荷花池药材批发市场，经本校鉴定教研室卢先明老师鉴定为远志Polygala tenuifolia Willd.的干燥根；蜜远志由本校炮制教研室瞿燕老师提供。

乙腈(色谱纯，美国Fisher公司)，自制重蒸水。

中药色谱图分析和数据管理系统(中国药品生物制品检定所)

2、实验部分

2.1供试品溶液的制备

精密称取实施例1制备的3号粉末2.0g(过3号筛)，加入25ml水，称定，浸泡1小时后煎煮1小时，放冷，补足重量，滤过，取续滤液适量，以0.45μm微孔滤膜滤过，即得。

2.2色谱条件

色谱柱：DIKMA公司Diamonsil C₁₈(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈-0.05％磷酸水进行梯度洗脱，见表1；检测波长：350nm；柱温：30℃；流速：1.0ml/分钟；进样量：10μl。

                  表1  梯度洗脱条件

时间(min)	乙腈(％)	0.05％磷酸水溶液(％)
			0～4545～5050～5555～7070～9090～100	16→3333→3434→4444→4848→100100	84→6767→6666→5656→5252→00

2.2.1检测波长的确定

分别取生远志及蜜远志供试品溶液在检测波长210nm、280nm及350nm时的HPLC图进行比较，结果表明波长350nm时，色谱峰分离效果较为理想，故选择350nm为检测波长。

2.2.2内参比峰的选择

因无对照品，故采用保留时间在19分钟左右的、对称性较好的峰作为内参比峰。

2.3方法学考察

2.3.1重复性实验

取同一批蜜远志5份，按照供试品的制备和检测方法制备供试品，考察主要共有色谱峰(归一划法峰面积＞5％)的相对保留时间、相对峰面积，结果如下表2、表3。

                  表2  重复性实验主要共有色谱峰相对保留时间

峰号	相对保留时间					RSD(％)
							C1	C2	C3	C4	C5
	25S1214	0.24580.55721.00001.85262.1889	0.24580.55661.00001.85432.1915	0.24550.55601.00001.85572.1937	0.24540.55731.00001.85252.1890							0.24550.55891.00001.85052.1861	0.07620.19450.00000.10650.1316

                    表3  重复性实验主要共有色谱峰相对峰面积

峰号	相对峰面积					RSD(％)
							C1	C2	C3	C4	C5
	25S1214	0.45540.48281.00000.32080.3911	0.45610.46181.00000.33490.3832	0.45920.46081.00000.33210.3920	0.45600.46051.00000.32570.3835							0.45850.46661.00000.32800.3900	0.37022.02310.00001.67601.1003

使用中药色谱图分析和数据管理系统计算整体相似度，其全谱图相似度结果如下表4

              表4  重复性实验相似度(全谱图相似度参照模板为C1，夹角余弦法)

样品	C1	C2	C3	C4	C5	RSD(％)
							相似度	1.0000	0.9904	0.9863	0.9772	0.95743	1.6411

结果表明主要共有色谱峰(归一划法峰面积＞5％)的相对保留时间、相对峰面积RSD均小于3％，符合指纹图谱要求，其重复性试验结果良好。

2.3.2精密度实验

取同一蜜远志供试品，连续进样5次，考察主要共有色谱峰(归一划法峰面积＞5％)的相对保留时间、相对峰面积，结果如下表5、表6。

                表5  精密度实验主要共有色谱峰相对保留时间

峰号	相对保留时间					RSD(％)
							C1	C2	C3	C4	C5
	25S1214	0.24550.55891.00001.85052.1861	0.24580.55771.00001.85182.1986	0.24550.55691.00001.85412.1916	0.24550.55711.00001.85452.1927							0.24520.55701.00001.85432.1926	0.08640.14920.00000.09670.2025

                  表6  精密度实验主要共有色谱峰相对峰面积

峰号	相对峰面积					RSD(％)
							C1	C2	C3	C4	C5
	25S1214	0.45850.46661.00000.32800.3900	0.44010.44241.00000.31990.3830	0.44430.44271.00000.31040.3818	0.45160.44071.00000.31820.3957							0.44750.44481.00000.31150.3907	2.41581.57210.00002.24231.4893

使用中药色谱图分析和数据管理系统计算整体相似度，其全谱图相似度结果如下表7

          表7  精密度实验相似度(全谱图相似度参照模板为J1，夹角余弦法)

样品	J1	J2	J3	J4	J5	RSD(％)
							相似度	1.0000	0.9648	0.9794	0.9925	0.9927	1.4128

结果表明主要共有色谱峰(归一划法峰面积＞5％)的相对保留时间、相对峰面积RSD均小于3％，符合指纹图谱要求，其精密度试验结果良好。

2.3.3稳定性实验

取同一蜜远志供试品，分别在0h，3h，6h，9h，12h，24h进样，考察主要共有色谱峰(归一划法峰面积＞5％)的相对保留时间、相对峰面积，结果如下表8、表9。

                    表8  稳定性实验主要共有色谱峰相对保留时间

峰号	相对保留时间						RSD(％)
								0h	3h	6h	9h	12h	24h
	25S1214	0.24500.55761.00001.85422.1912	0.24450.55631.00001.85552.1935	0.24460.55661.00001.85482.1923	0.24510.55691.00001.85452.1926	0.24500.55731.00001.85462.1923								0.24480.55681.00001.85572.1945	0.09890.08450.00000.03190.0518

                        表9  精密度实验主要共有色谱峰相对峰面积

峰号	相对峰面积						RSD(％)
								0h	3h	6h	9h	12h	24h
	25S1214	0.39580.41241.00000.27600.3313	0.40760.42061.00000.27680.3436	0.39900.40911.00000.28360.3401	0.39740.41081.00000.28220.3285	0.40050.42991.00000.29360.3416								0.39460.42211.00000.29550.3363	1.16561.93410.00002.90311.7785

使用中药色谱图分析和数据管理系统计算整体相似度，其全谱图相似度结果如下表10。

          表10  稳定性实验相似度(全谱图相似度参照模板为J1，夹角余弦法)

样品	0h	3h	6h	9h	12h	24h	RSD(％)
								相似度	1.0000	0.9549	0.9590	0.9542	0.9829	0.9814	1.9352

结果表明主要共有色谱峰(归一划法峰面积＞5％)的相对保留时间、相对峰面积RSD均小于3％，符合指纹图谱要求，说明常温下供试品溶液在24h内保持稳定。

2.4蜜远志水煎液HPLC指纹图谱的建立

2.4.1共有指纹峰的标定

取10批蜜远志，依法制备供试品溶液，测定其HPLC指纹图谱。其中，由中药色谱图分析和数据管理系统出共有峰有21个，如图1。

2.4.2共有指纹峰的相对保留时间

计算10批蜜远志水煎液共有指纹峰的相对保留时间平均值，结果如下表11。

            表11  蜜远志水煎液共有指纹峰的相对保留时间

峰号	相对保留时间	峰号	相对保留时间	峰号	相对保留时间
						123456S789	0.07590.24530.33620.47900.55680.69801.00001.06601.28311.6060	10111213141516171819	1.69651.81171.85532.07452.19392.94262.97552.99943.01723.0319	20	3.1299

2.4.2共有指纹峰的相对峰面积

按照指纹图谱技术要求，对单峰面积占总峰面积5％以上(保留时间在30min以内)或10％以上(保留时间大于30min)的色谱峰计算了峰面积比值，结果如表12。

              表12  蜜远志水煎液共有指纹峰的相对峰面积

峰号	保留时间	峰面积	峰面积比值(实际比值范围)	准许误差范围
					25S15～19	＜30min＜30min＜30min＞30min	5％～10％5％～10％＞20％10％～20％	0.4046(0.3363～0.4849)0.3606(0.2608～0.4584)10.8203(0.7057～0.9684)	0.2832～0.5260(±30％)0.2524～0.4687(±30％)0.6152～1.0253(±25％)

2.4.3非共有峰面积

供试品的图谱与指纹图谱比较，非共有峰总面积均小于总峰面积的10％。

2.4.4相似度的比较

使用中药色谱图分析和数据管理系统计算整体相似度，其全谱图相似度结果如下表13，指纹图谱见图2，生成蜜远志水煎液对照图谱见图3。

表13  相似度(参照模板为10批蜜远志生成对照图谱)

批号	全谱图相似度(夹角余弦法)
		M1(20050820)M2(20050914a)M3(20050914b)M4(20050914c)M5(20050915a)M6(20050915b)M7(20050915c)M8(20050916a)M9(20050916b)M10(20050916c)	0.96450.98490.97870.96980.96610.95620.98660.98070.95420.9991
RSD(％)	1.4733

2.5蜜远志水煎液指纹图谱与生远志水煎液的比较取生远志药材5份，依法制备供试品溶液，测定其HPLC指纹图谱，计算其相似度如下表14，其HPLC指纹图谱见图4，生成生远志水煎液对照图谱见图5。

                     表14  生远志水煎液相似度

        (全谱图相似度参照模板为生远志生成对照图谱SS，夹角余弦法)

样品	S1	S2	S3	S4	S5	RSD(％)
							相似度	0.9850	0.9526	0.9877	0.9594	0.9524	1.8125

以蜜远志水煎液对照图谱作为参照图谱，计算各生远志水煎液图谱与蜜制品的相似度，结果如表15，图谱比较见图6，生远志水煎液对照图谱与蜜远志水煎液对照图谱比较见图7。

             表15  生远志水煎液与蜜远志水煎液对照图谱相似度

        (全谱图相似度参照模板为蜜远志生成对照图谱SS，夹角余弦法)

样品	S1	S2	S3	S4	S5	RSD(％)
							相似度	0.9411	0.9305	0.9383	0.9178	0.9144	1.2868

由上图表可见，生远志各样品水煎液图谱与蜜远志水煎液对照图谱的相似度均小与0.95，蜜远志五个明显特征峰的相对保留时间与生远志一致，但根据95％的值信区间对二者的相对保留峰面积进行计算，得蜜远志3号的相对峰面积分别是2号峰0.3760-0.4333，5号峰0.3120-0.4091，S号峰：1.0000，12号峰：0.2640-0.2962，14号峰：0.3063-0.3487；生远志相对峰面积分别是2号峰0.3940-0.4101，5号峰0.4032-0.4190，S号峰：1.0000，12号峰：0.2665-0.2870，14号峰：0.3196-0.3692。

可见，蜜远志与生远志之间有一定差异，其中生远志5号峰和14号峰的相对保留峰面积则大于蜜远志(P＜0.05)。表明，生远志在蜜制过程中大类成分虽无明显变化，但各成分之间发生了转化，而致使含量发生变化。另外生远志与蜜远志的指纹图谱在全图相似度计算上有所差异的原因有两点，其一是因为这五个明显特征峰有一定的差异，其二则是由于一些按归一划法计算出来峰面积小于5％的小峰的相对峰面积有所不同。

3、结论

3.1在临床用药中，远志皆使用水煎剂，本发明蜜远志也选用水煎液作为指纹图谱研究物质。

3.2测定10批相同炮制条件蜜远志的相似度均大于0.95，计算结果均符合指纹图谱研究的技术要求，证明该炮制方法准确稳定，可用于指纹图谱测定。

3.3经过对10批蜜远志进行测定，制定了其指纹图谱检测标准及相应的技术参数(10批平均值)，符合指纹图谱要求，为蜜远志炮制的质量控制提供了科学依据。

3.4生远志各样品水煎液图谱与蜜远志水煎液对照图谱的相似度均小于0.95，表明生远志水煎液与蜜远志水煎液具有一定的差异。比较二者图谱分析可见，两者的出峰位置基本相同，仅峰形高低略有不同。说明生远志经过炮制的过程后大类成分并无变化，可能各成分之间发生了转化，而含量有所不同。

3.5在计算蜜远志水煎液共有指纹峰的相对峰面积时，因为15～19号峰未能基线分离，故按指纹图谱要求，我们计算了组峰的总峰面积作为峰面积，同时标定该组各峰的相对保留时间。

上述指纹图谱的分析结论可知，本发明蜜远志的指纹图谱特征是由于制备工艺及参数选择的特殊性赋予的，反之，该指纹图谱的测定又能反映出蜜远志的质量，并且通过蜜远志指纹图谱的测定，直接控制本发明药物的质量，保证安全性。

以下通过药效学试验证明本发明的有益效果。

1.实验材料

1.1实验动物健康KM种小鼠，由成都中医药大学动物中心提供。合格证号：川实动管质第6号。

1.2药品和主要试剂、仪器

1.2.1受试药物

远志购于成都市荷花池药材市场，经本校中药鉴定教研室鉴定为Polygalatenuifolia Willd.的根，系正品药材。

蜜远志  按不同处理条件制备的9个蜜制样品(1、2、3、4、5、6、7、8、9号)。

蜂蜜  四川南宝蜂产品有限公司，产品标准号：Q/20276901～0

远志总皂苷  精密称取生远志粗粉50.0130g，经石油醚脱脂后抽滤，药渣挥干，用95％的乙醇回流提出，趁热抽滤，重复4次，合并滤液，并浓缩至约50ml，加入3倍量乙醚沉淀，放置过夜，倾去上清液，将沉淀减压干燥，称重，计算其提取率为32.71％。按所需配成等生药量浓度的溶液。

1.2.2试剂

石油醚，天津化学试剂六厂三分厂，生产批号(040221)

戊巴比妥钠，中国医药集团上海化学试剂公司进口分装，生产批号(F20020405)

氨水，成都科龙化工试剂厂，生产批号(20050306)

甲基橙，北京化工厂，生产批号(800628)

苯酚红，成都科龙化工试剂厂，生产批号(041112)

生理盐水，四川科伦药业股份有限公司，生产批号(C041206-052)

碳酸氢钠，重庆北碚化学试剂厂，生产批号(830603)

1.2.3仪器

756MC紫外可见分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)

980型超声雾化器(上海天缘医用生物有限公司)

ZIL-2程控自主活动箱(医科院药研所)

TDL-5-A型离心机(上海安亭科学仪器厂制造)

2.统计学方法  SPSS11.5版本统计软件

3.实验方法及结果

试验例1 生远志与不同蜜制条件远志的安全性对比

1.生远志与不同蜜制条件远志的急性毒性实验

1.1生远志与不同蜜制条件远志LD₅₀预实验

取健康KM种小鼠180只，雌雄各半，18～22g，实验前禁食不禁水18h，按体重随机分组(9个等生药量蜜远志组加1个生远志组，每个样品3个剂量组——20.0g/kg、16.0g/kg、12.8g/kg，每组6只。)各小组内的相邻组间剂量比为1∶0.8。按0.2ml/10g灌胃给药。给药后观察动物的毒性反应，连续观察7天，记录死亡情况，并对死亡动物进行尸解。结果发现死亡小鼠的胃充气，肿胀，胃壁变薄，胃体积显著膨大。各组小鼠的活动情况减弱，有耸毛现象，食量减少，生远志组尤其明显，统计7天内死亡率，结果如表16所示。1～9号为不同蜜制条件远志样品。

        表16  不同条件蜜制样品的动物死亡率(预试)

样品	20.0g/kg	16.0g/kg	12.8g/kg
					死亡率(％)
	12345678910	16.733.366.783.366.750.083.383.383.383.3	16.733.333.383.310033.333.366.783.350.0					0016.766.750.016.750.016.716.733.3	蜜制品生品

实验结果表明，10号远志生品的小鼠死亡率高，1、2、3、6号蜜制品的小鼠死亡率相对低；其急性毒性随炒制时间增长、温度的增高毒性增大。

选定毒性较小的等生药量蜜远志1、2、3、6号与10号生远志进行LD₅₀正式实验。

1.2生远志与不同蜜制条件远志LD₅₀正式实验结果

取健康KM种小鼠200只，雌雄各半，18～22g，实验前禁食不禁水18h，按体重随机分组，每小组10只。各小组内的相邻组间剂量比为1∶0.8，按0.2ml/10g灌胃给药。给药后观察动物的毒性反应，连续观察7天，记录死亡情况，并对死亡动物进行尸解。结果发现死亡小鼠的胃充气，肿胀，胃壁变薄，胃体积显著膨大。各组小鼠的活动情况减弱，有耸毛现象，食量减少，生远志组尤其明显。统计7天内死亡率，按改良寇氏法计算LD₅₀及LD₅₀95％可信限，其给药剂量及结果如表17。

                  表17  生远志与不同蜜制条件远志LD₅₀

样品	动物数(n)	剂量(g/kg)	死亡数(n)	死亡率(％)	总死亡只数(n)	LD50(g/kg)( X±SD)
							等生药量蜜远志1	10101010	31.2525.0020.0016.00	9582	90508020	24	20.45±2.30
等生药量蜜远志2	10101010	31.2525.0020.0016.00	6586	60508060	25	20.00±8.49
							等生药量蜜远志3	10101010	31.2525.0020.0016.00	7863	70806030	24	20.45±2.58
等生药量蜜远志6	10101010	31.2525.0020.0016.00	8887	80808070	31	17.50±2.02
							生远志	10101010	25.0020.0016.0012.80	10880	10080800	26	15.65±1.22

将生远志与等生药量蜜远志各组的25.00g/kg、20.00g/kg、16.00g/kg三个剂量范围的动物总死亡只数进行卡方统计处理，如表18所示。

        表18  生远志与不同蜜制条件远志的安全性评价(χ²)

组别	总数n	死亡只数	死亡率	χ2值
					生远志等生药量蜜远志1号等生药量蜜远志2号等生药量蜜远志3号等生药量蜜远志6号	3030303030	2615191723	86.6750.0063.3356.6776.67	0.0023*0.0369*0.0195*0.3169

注：与生远志组比较**P＜0.01；*P＜0.05

等生药量蜜远志1号与生远志卡方检验P＜0.01，表明二者死亡率之间有极显著性差异；等生药量蜜远志2、3号与生远志卡方检验P＜0.05，表明二者死亡率之间有显著性差异；等生药量蜜远志6号与生远志卡方检验P＞0.05，二者死亡率之间没有显著性差异。结果提示等生药量蜜远志1、2、3号急性毒性较小，相对安全性高于生远志；等生药量蜜远志6号安全性与生远志没有差异。

试验例2 生远志与不同蜜制条件远志对小鼠胃肠靶器官毒性的影响

1.生远志及其总皂苷与不同蜜制条件远志对小鼠胃排空的影响

取健康KM种小鼠130只，雌雄各半，18～22g，实验前禁食不禁水18h，按体重随机分为13组，每组10只。按0.2ml/10g灌胃给药，NS组灌胃给予同体积生理盐水。给药40min后，每只小鼠灌胃0.1％甲基橙溶液0.2ml，20min后颈椎脱位处死，剖腹摘取胃置于小烧杯内，加入10ml蒸馏水，用小剪刀沿胃大弯剪开胃，将胃内容物充分洗于蒸馏水中，用5％NaHCO₃溶液调节pH值至6.0～6.5，倒入刻度离心管，以2000rpm离心10min，取上清液用756MC紫外可见分光光度计(波长420nm)比色，用蒸馏水调零，测量溶液的光密度，测得的光密度为胃中甲基橙光密度，并以0.1％甲基橙0.2ml加入10ml蒸馏水摇匀后测量其光密度作为甲基橙光密度基数，并按下列公式计算甲基橙胃残留率，甲基橙胃残留率的高低可反映胃排空的快慢。其结果如下表19所示。

      表19  生远志及其总皂苷与不同蜜制条件远志对小鼠胃排空的影响( X±SD)

组别	动物数(n)	给药量(g/kg)	胃残留率(％)
				NS组生远志高剂量组生远志低剂量组等生药量总皂苷高剂量组等生药量总皂苷低剂量组等生药量蜜远志1高剂量组等生药量蜜远志1低剂量组等生药量蜜远志2高剂量组等生药量蜜远志2低剂量组等生药量蜜远志3高剂量组等生药量蜜远志3低剂量组等生药量蜜远志6高剂量组等生药量蜜远志6低剂量组	1010109101010101010101010	等体积生理盐水848484848484	51.30±9.75△△91.54±23.61**57.28±12.22△△97.51±26.29**90.56±21.75**89.10±17.94**49.30±7.00△△106.35±30.78**55.15±15.77△△66.75±17.59△52.27±9.18△△84.35±18.63**46.60±9.40△△

**与NS组比较P＜0.01；△△与生远志高剂量组比较P＜0.01

*与NS组比较P＜0.05；△与生远志高剂量组比较P＜0.05

生远志高剂量组、等生药量总皂苷高、低剂量组、等生药量1、2、6号高剂量组胃残留率极显著高于NS组(P＜0.0)；等生药量蜜远志3号高、低剂量组胃残留率均与NS组无显著性差异，而与生远志高剂量组有显著性差异。结果提示：等生药量蜜远志3号对胃排空抑制作用较生远志小，局部安全性较高。

2、生远志及其总皂苷与不同蜜制条件远志对小鼠小肠推进运动的影响

取健康KM种小鼠130只，雌雄各半，18～22g，实验前禁食不禁水24h，按体重随机分为13组，每组10只。用5％炭末制成混悬液(给药组用药液，NS组用生理盐水配制)，按0.2ml/10g灌胃给药，NS组给予同体积生理盐水，给药30min后脱颈椎处死，即而剖腹，取出自幽门至回盲部的消化管，不加牵引地平铺于玻璃板上，测其全长和炭末前沿至幽门的距离，计算其与全长的百分比，即推进百分率。各组剂量及实验结果如下表20。

表20  生远志及其总皂苷与不同蜜制条件远志对小鼠小肠推进运动的影响( X±SD)

组  别	动物数(n)	给药量(g/kg)	小肠推进率(％)
				NS组生远志高剂量组生远志低剂量组等生药量总皂苷高剂量组等生药量总皂苷低剂量组等生药量蜜远志1高剂量组等生药量蜜远志1低剂量组等生药量蜜远志2高剂量组等生药量蜜远志2低剂量组等生药量蜜远志3高剂量组等生药量蜜远志3低剂量组等生药量蜜远志6高剂量组等生药量蜜远志6低剂量组	10101010101010101010101010	等体积生理盐水848484848484	70.41±4.96△△51.30±4.57**61.19±7.87△48.68±11.39**62.38±13.01△69.86±9.29△△74.98±6.64△△67.82±5.68△△73.24±8.82△△72.13±7.18△△69.34±6.92△△71.03±6.62△△68.00±3.82△△

注：**与NS组比较P＜0.01；△△与生远志高剂量组比较P＜0.01

*与NS组比较P＜0.05；△生远志高剂量组比较P＜0.05

生远志高剂量组、等生药量总皂苷高剂量组小肠推进率极显著低于NS组(P＜0.01)，其它各组与NS组没有差异，与生远志高剂量组均有显著或极显著性差异。结果提示各等生药量蜜远志组对小鼠小肠运动抑制均低于生远志，蜜制品对小肠运动影响小。

试验例3 生远志与不同条件蜜制远志的相关药效对比研究

1.安神作用

1.1生远志与不同蜜制条件远志对小鼠自主活动的影响

取健康KM种小鼠110只，雌雄各半，18～22g，禁食不禁水9h，按体重随机分组，每组10只，分组及剂量见表20。按0.2ml/10g灌胃给药，NS组给予相同体积的生理盐水，给药1h后将小鼠分别放入ZIL-2程控自主活动箱中，适应5min后，观察5min内的活动次数。以小鼠自主活动次数为指标，观察生远志与不同蜜制条件远志对小鼠自主活动的影响，结果见表21所示。

        表21  生远志与不同蜜制条件远志对小鼠自主活动的影响( X±SD)

组别	动物数(n)	剂量(g/kg)	自主活动次数(n)
				NS组生远志高剂量组生远志低剂量组.等生药量蜜远志1高剂量组等生药量蜜远志1低剂量组等生药量蜜远志2高剂量组等生药量蜜远志2低剂量组等生药量蜜远志3高剂量组等生药量蜜远志3低剂量组等生药量蜜远志6高剂量组等生药量蜜远志6低剂量组	99910101010991010	等体积生理盐水8484848484	173.56±24.9265.33±39.71**147.33±33.92108.90±40.01*153.10±51.35118.20±43.22*152.40±44.4470.67±37.49**117.11±36.55*98.20±40.85**130.40±35.31

注：**与NS组比较，P＜0.01；*与NS组比较，P＜0.05

生远志、等生药量蜜远志3、6号高剂量组与NS对照组比较均有极显著性差异；等生药量蜜远志1、2号高剂量组、等生药量蜜远志3号低剂量组与NS对照组比较，均有显著性差异。结果提示等生药量蜜远志3号使小鼠自主活动减少作用显著。

1.2生远志及其总皂苷与不同蜜制条件远志对小鼠入睡只数的影响

取健康KM种小鼠130只，雌雄各半，18～22g，禁食不禁水9h，按体重随机分组，每组10只，具体分组及剂量如下表20所示。按0.2ml/10g灌胃给药30min后，腹腔注射戊巴比妥钠30mg/kg，以小鼠翻正反射消失1min以上为入睡标准，统计各组15min内入睡鼠数，其结果如表22所示。

表22  生远志及其总皂苷与不同蜜制条件远志对小鼠入睡只数的影响

组别	剂量(g/kg)	入睡只数/动物总数(n)
			NS组生远志高剂量组生远志低剂量组.等生药量皂苷高剂量组等生药量皂苷低剂量组等生药量蜜远志1高剂量组等生药量蜜远志1低剂量组等生药量蜜远志2高剂量组等生药量蜜远志2低剂量组等生药量蜜远志3高剂量组等生药量蜜远志3低剂量组等生药量蜜远志6高剂量组等生药量蜜远志6低剂量组	等体积生理盐水848484848484	3/108/9*8/107/99/10*5/104/106/108/1010/10**7/108/1010/10**

注：**与NS组比较p＜0.01；*与NS组比较p＜0.05

生远志高剂量组、皂苷低剂量组与NS组比较有显著性差异；等生药量蜜远志3号高剂量组、等生药量蜜远志6号低剂量组与NS组比较有极显著性差异。结果提示生远志、等生药量蜜远志3号高剂量组与戊巴比妥钠有协同作用。

2.镇咳、祛痰作用研究

1.1生远志及其总皂苷与不同蜜制条件远志对小鼠镇咳作用的影响

取健康KM种小鼠130只，雌雄各半，18～22g，禁食不禁水9h，按重随机分组，每组10只，具体分组及剂量如下表20所示。按0.2ml/10g灌胃给药1h后，开始接受喷雾(980型超声雾化器，25％氨水)，喷雾浓氨水20s，记录3min内小鼠咳嗽次数，结果如表23所示。

表23  生远志及其总皂苷与不同蜜制条件远志对小鼠止咳作用的影响

组别	动物数(n)	剂量(g/kg)	咳嗽次数(n)
				NS组生远志高剂量组生远志低剂量组.等生药量皂苷高剂量组等生药量皂苷低剂量组等生药量蜜远志1高剂量组等生药量蜜远志1低剂量组等生药量蜜远志2高剂量组等生药量蜜远志2低剂量组等生药量蜜远志3高剂量组等生药量蜜远志3低剂量组等生药量蜜远志6高剂量组等生药量蜜远志6低剂量组	891098991010910108	等体积生理盐水848484848484	27.50±33.132.89±2.78*5.40±3.29*1.44±1.43*31.13±57.4010.89±8.435.44±7.15*4.80±4.17*6.10±3.22*1.33±1.39*2.60±2.41*6.30±10.89*5.25±6.43*

注：*与NS组比较p＜0.05

生远志高、低剂量组、等生药量皂苷高剂量组、等生药量蜜远志1号低剂量组、等生药量蜜远志2、3、6号高、低剂量组与NS组比较有显著性差异。结果提示生远志，等生药量蜜远志2、3、6号均有明显镇咳作用。

1.2生远志及其总皂苷与不同蜜制条件远志对小鼠祛痰作用的影响

1.2.1制定酚红标准曲线  精密称取一定量的酚红，加5％NaHCO₃溶解，配成100μg/ml，然后顺次稀释成每ml含酚红0.1、0.3、0.5、0.7、1、3、5、10μg，测OD值，以酚红剂量为横坐标，OD值为纵坐标，连成直线，从标准曲线上查出各鼠酚红的排泌量。

1.1.3方法与结果取健康KM种小鼠，雌雄各半，18～22g，禁食不禁水9h，按体重随机分为13组，每组8只。NS组给同体积生理盐水，灌胃给药30min后，按0.1ml/10g体重腹腔注射酚红(50mg/ml)，30min后处死小鼠，剥去气管周围组织，剪下自甲状软骨下至气管分支处的一段气管，放进盛有2ml生理盐水的试管中，再加入0.1mlNaOH，用756MC紫外可见分光光度计，波长546nm，测定OD值。其结果如表24所示。

   表24  生远志与不同蜜制条件远志对小鼠祛痰作用的影响( X±SD)

组别	动物数(n)	给药量(g/kg)	气管酚红排泌量(μg/ml)
				NS组生远志高剂量组生远志低剂量组等生药量皂苷高剂量组等生药量皂苷低剂量组等生药量蜜远志1高剂量组等生药量蜜远志1低剂量组等生药量蜜远志2高剂量组等生药量蜜远志2低剂量组等生药量蜜远志3高剂量组等生药量蜜远志3低剂量组等生药量蜜远志6高剂量组等生药量蜜远志6低剂量组	8888888888888	等体积生理盐水848484848484	0.096±0.0090.176±0.043**0.125±0.0390.175±0.037**0.223±0.081*0.169±0.046*0.204±0.073*0.210±0.057**0.240±0.102*0.233±0.089*0.154±0.034*0.190±0.052*0.209±0.089

注：**与NS对照组比较P＜0.01；*与NS对照组比较P＜0.05

生远志、等生药量皂苷、等生药量蜜远志2号高剂量组与NS对照组比较有极显著差异；等生药量蜜远志1、3、6号高剂量组、等生药量皂苷、等生药量蜜远志1、2、3号低剂量组与NS对照组比较有显著差异。结果提示等生药量蜜远志各组均有较好的祛痰作用。

中药的性能和作用无有不偏，其成分的复杂性，对机体也会相应产生及其复杂的影响。使用不当，其在发挥治疗效应同时，往往会呈现诸多不良反映。临床上要达到安全有效用药，中药的合理炮制，与恰当配伍则至关重要。远志作为临床上的常用中药，其安神、祛痰功效迄今仍被广泛使用，现今临床常用远志的炮制品有蜜制、甘草炙、姜炙等。前期实验对远志不同炮制品与生远志的LD₅₀测定研究发现，生远志的LD₅₀小于其他各炮制品，蜜制后毒副作用小，对胃肠运动的抑制作用较生远志缓和，采用本发明药物不同条件处理后的等生药量蜜远志(1、2、3、4、5、6、7、8、9号)进行LD₅₀预实验，确定出毒性较低的等生药量蜜远志(1、2、3、6号)与生远志的进行全身毒性、靶器官毒性及相关药效对比研究，以期对比生品与不同蜜制品的安全性，筛选最佳炮制品，确定最优炮制工艺了，通过生远志及等生药量蜜远志各组进行对比实验研究，发现生远志急性毒性死亡率显著高于等生药量蜜远志1、2、3号，提示生远志的毒性大，等生药量蜜远志1、2、3号的安全性较高；等生药量蜜远志各组对小肠运动、等生药量蜜远志3号对胃排空的抑制作用显著低于生远志，即等生药量蜜远志3号综合毒副作用较小，局部安全性相对更高。等生药量蜜远志1、2、3、6号与生远志均能显著减少小鼠自发活动，具有一定的镇静作用；并均具有良好的止咳化痰作用，可能与蜜制远志能增强远志对胃粘膜迷走神经的刺激，增强支气管的分泌，气管内容物易咳出等有关。且等生药量蜜远志3号与生远志能显著增加戊巴比妥钠所致小鼠入睡只数。以上结果表明等生药量蜜远志3号，其相关主要药效均未因蜜制而发生改变，安神、止咳、祛痰药效仍存。

综上所述本发明蜜远志药效稳定，可控性强，尤其等生药量蜜远志3号在缓解胃肠抑制毒性及胃黏膜损伤，改善消化功能方面呈现出良好作用，即毒性降低，且其主要功效并未影响的，进一步说明等生药量蜜远志3号安全性较高，疗效明确，达到了蜜制减毒、存效的目的。

参考文献

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[4]王建，吴晖晖，武云，等.生远志及其总皂苷与蜜远志的急性毒性对比实验研究.中药药理与临床，2004，20(6)：21

Claims (10)

1、一种蜜远志，其特征在于：它由以远志为原料，加入炼蜜炮制而成，它的HPLC指纹图谱同时含有五个明显特征峰，相对保留时间分别是：相对保留时间为0.2445-0.2458的2号峰，相对保留时间为0.5563-0.5589的5号峰，相对保留时间为1.0000的S号峰，相对保留时间为1.8505-1.8557的12号峰，相对保留时间为2.1861-2.1986的14峰；相对峰面积分别是2号峰0.3760-0.4333，5号峰0.3120-0.4091，S号峰：1.0000，12号峰：0.2640-0.2962，14号峰：0.3063-0.3487。

2、根据权利要求1所述的蜜远志，其特征在于：它的指纹图谱如图1所述，其色谱条件为：

色谱柱：DIKMA公司Diamonsil C₁₈(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈-0.05％磷酸水进行梯度洗脱；检测波长：350nm；柱温：30℃；流速：1.0ml/分钟；进样量：10μl。

3、根据权利要求2所述的蜜远志，其特征在于：共有21个特征峰，相对保留时间分别是：1号峰0.0759、2号峰0.2453、3号峰0.3362、4号峰0.4790、5号峰0.5568、6号峰0.6980、S号峰1.0000、7号峰1.0660、8号峰1.2831、9号峰1.6060、10号峰1.6965、11号峰1.8117、12号峰1.8553、13号峰2.0745、14号峰2.1939、15号峰2.9426、16号峰2.9755、17号峰2.9994、18号峰3.0172、19号峰3.0319、20号峰3.1299。

4、根据权利要求1～3任一项所述的蜜远志，其特征在于：它是由下述制备方法制备而成：

称取下述重量配比的原料：生远志：100份、炼蜜10～30份，加入原料1/5倍量水，浸泡3h，60～160℃炒制3～9min，即得。

5、根据权利要求4所述的蜜远志，其特征在于：它是由下述制备方法制备而成：

称取下述重量配比的原料：生远志：100份、炼蜜30份，加入原料1/5倍量水，浸泡3h，60℃炒制9min，即得。

6、一种制备权利要求1～5任一项所述的蜜远志的方法，它包括如下步骤：

称取下述重量配比的原料：生远志：100份、炼蜜10～30份，加入原料1/5倍量水，浸泡3h，60～160℃炒制3～9min，即得。

7、根据权利要求6所述的蜜远志的制备方法，其特征在于：它是由下述步骤制备：

称取下述重量配比的原料：生远志：100份、炼蜜30份，加入原料1/5倍量水，浸泡3h，60℃炒制9min，即得。

8、一种药物组合物，它是由权利要求1～5任一项所述的蜜远志或其提取物为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅料性成分制备而成的制剂。

9、根据权利要求8所述的药物组合物，其特征在于：所述的制剂是口服制剂。

10、根据权利要求9所述的药物组合物，其特征在于：所述的口服制剂是片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂。

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