CN1922982A - 一种辅助选育玉米自交系的方法及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种辅助选育玉米自交系的方法及其应用。该辅助选育玉米自交系的方法，包括以下步骤：(1)筛选对选育基础材料S0代群体具有多态性的SSR引物至少20个；每对同源染色体上至少2个SSR引物，位于一对同源染色体上的每两个SSR引物位点之间的遗传距离至少50cM；(2)利用步骤(1)中的至少6个SSR引物，筛选S1群体中在所述至少6个SSR引物位点纯合的单株；所述至少6个SSR引物位于至少6对同源染色体上；(3)利用步骤(1)中除去步骤(2)中所用的SSR引物之外的至少14个SSR引物，筛选S2世代群体，得到的在所述至少14个SSR引物位点纯合的S2代单株，即为候选玉米自交系。可将该候选自交系结合S2世代群体的农艺性状和/或配合力和/或产量选育玉米自交系。
Description
技术领域
本发明涉及一种辅助选育玉米自交系的方法及其应用。
背景技术
玉米(Zea mays)是当今世界栽培面积最为广泛的农作物之一，玉米具有产量高、增产潜力大、适应性强、营养丰富等特点。除直接用作饲料和粮食以外，玉米还是医药、食品、造纸、化工、酿造等许多行业必不可少的原料，在国民经济中发挥重要作用。玉米作为天然异花授粉作物，其遗传基础的杂合性，以及由此产生的使用自交系间F1代的杂种优势利用的育种程序，形成了玉米育种的特殊性。
玉米自交系是从玉米品种群体或者各类杂交种经过连续多代自交和选择分离出的基因型纯合、性状整齐一致的自交后代。自交系不是直接用于生产，而是利用其作为亲本配制强优势杂交种在生产上使用。因此玉米自交系选育是玉米育种的重要基础工作。
现有玉米自交系选育方法，通常采用传统的育种程序：育种者依据工作经验，在育种材料表型性状观察的基础上进行选择。用以选育自交系的基础材料在自交过程中，随着基因的分离与重组，表现型会出现大量的分离，在自然鉴定或人工选择的压力下，有利基因就会随着选择逐渐被积累，一般经过6～8个世代选择，后代植株的外观性状表现就基本一致，结合配合力测定结果，选择综合性状优良的穗行自交留种，完成自交系的选育。
传统玉米自交系选育是依据工作经验，在育种材料表型性状观察的基础上进行选择。这种表型性状除少部分属于单基因决定的质量性状之外，大多数性状通常为复杂的多基因相互作用且受环境影响所致。这就局限了性状的选择。并且传统方法对基础材料的选择至少需要6～8个自交世代，因而育种周期比较冗长，需要耗费较多的人力、财力等资源。且受育种者主观因素与客观环境的影响较大。
SSR分子标记以其独特的优点，可以在植物不同的发育阶段、不同的环境条件下、不同的组织中都进行检测，使得对基因型的早期选择成为可能。所建立的遗传标记不仅数量大，而且在后代中表现为显性或共显性遗传。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种辅助选育玉米自交系的方法。
本发明所提供的辅助选育玉米自交系的方法，包括以下步骤：
(1)筛选对玉米自交系选育基础材料S0代群体具有多态性的SSR引物至少20个；所述SSR引物序列来自网站www.maizegdb.org.
所述对玉米自交系选育基础材料S0代群体具有多态性的SSR引物满足以下条件：每对同源染色体(每个连锁群)上至少2个SSR引物，位于一对同源染色体(位于一个连锁群)上的每两个SSR引物位点之间的遗传距离至少50cM；
(2)利用步骤(1)筛选到的对玉米自交系选育基础材料S0代群体具有多态性的的SSR引物中至少6个SSR引物，筛选S1世代群体中在所述至少6个SSR引物位点纯合的单株并获得其自交果穗；每个自交果穗种为单行；所述至少6个SSR引物位于至少6对同源染色体(6个连锁群)上；
(3)利用步骤(1)筛选到的对玉米自交系选育基础材料S0代群体具有多态性的SSR引物中除去步骤(2)中所用的SSR引物之外的至少14个SSR引物，筛选S2世代群体，得到的在所述至少14个SSR引物位点纯合的S2世代群体单株，即为候选玉米自交系。
其中，S0表示玉米自交系选育基础材料的种子及由它长成的植株，种子用于繁殖后代，植株用于提取DNA进行分析；S1表示由S0植株自交产生的种子及由它长成的植株；S2表示由S1自交产生的种子及由它长成的植株。
所述玉米基础材料可为单交种、品种间杂交种、品种与自交系间杂交种或综合杂交种。优选为单交种。
当所述玉米自交系选育基础材料为单交种，所述单交种的父本和母本已知时，可按照如下方法筛选对玉米自交系选育基础材料S0代群体具有多态性的SSR引物：分别以父本和母本的基因组DNA为模板，利用SSR引物进行PCR扩增，检测PCR产物的多态性，在父本和母本之间有多态性的PCR产物对应的SSR引物即为对玉米自交系选育基础材料S0代群体具有多态性的SSR引物。在该种情况下，所述SSR引物位点纯合的单株为S1世代群体或S2世代群体中与单交种的父本或母本的该SSR引物扩增产物带型一致的单株。
当所述玉米自交系选育基础材料为单交种，所述单交种的父本和母本未知时，可按照如下方法筛选对玉米自交系选育基础材料S0代群体具有多态性的SSR引物：分别以S1世代群体单株的基因组DNA为模板，利用SSR引物进行PCR扩增，检测PCR产物的多态性，在S1世代群体中能产生三种带型，记作带型I、带型II、带型III，且产生带型I、带型II、带型III的单株数目符合1∶2∶1的比例的SSR引物即为对玉米自交系选育基础材料S0代群体具有多态性的SSR引物。在该种情况下，所述SSR引物位点纯合的单株为S1世代群体或S2世代群体中与所述S1世代群体中的该SSR引物的带型I或带型III一致的单株。
所述玉米自交系选育基础材料为沈单16时，步骤(1)中筛选到的对玉米自交系选育基础材料S0代群体具有多态性的SSR引物为umc1228、umc2008、bnlg1523、bnlg1741、bnlg1306、umc1887、umc1366、phi0115、umc1505、umc1196、bnlg149、bnlg2042、phi053、bnlg1023、umc2036、bnlg1759、phi045、umc1562、phi022和bnlg1655；所述步骤(2)中所用的SSR引物为umc1228、umc2008、bnlg1523、bnlg1741、bnlg1306和umc1887，步骤(3)中所用的SSR引物为umc1366、phi0115、umc1505、umc1196、bnlg149、bnlg2042、phi053、bnlg1023、umc2036、bnlg1759、phi045、umc1562、phi022和bnlg165。
为了兼顾工作量和筛选效率，所述S0代群体由20个单株组成；所述S1代群体由4100个单株组成；所述S2代群体由167个单株组成。
本发明的另一个目的是提供一种选育玉米自交系的方法。
本发明所提供的选育玉米自交系的方法，是将上述方法获得的候选玉米自交系结合S2世代群体的农艺性状(如株高、穗位、叶片数、抗性等)和/或配合力和/或产量选育自交系。
本发明利用SSR分子标记技术具有的共显性特点，从DNA分子水平上检测选择材料的位点纯合度，筛选自交系育种基础材料的分离世代，在自交系选育早代发现基因位点纯合的材料，较传统玉米育种中育种者依靠育种经验在表型性状水平上推测育种材料的基因型纯合情况更为科学、直观。同时结合农艺性状(如株高、穗位、叶片数、抗性等)和/或配合力和/或产量鉴定，选择基因型纯合，表现型一致，配合力较高的自交系。实现了基因型和表现型双重选择，大大提高了纯合体的选择效率，有效缩短自交系的选育周期，加快育种进展。
本发明利用SSR分子标记，实现了高效、快捷的玉米自交系选育新体系的建立。SSR分子标记辅助选育玉米自交系的方法提高了分离世代纯合个体的选择效率，缩短了育种周期。SSR分子标记技术操作简单，重复性好，试验成本低等特点。并且SSR标记引物丰富，目前公布于maizegdb.org网站上有2000多对，并且正在不断增加、更新中。本发明的方法操作简单，可以显著缩短自交系选育时间，育种成本较常规方法在人力、财力等方面有明显降低，有利于在目前的商业育种中推广和利用。
附图说明
图1为筛选在沈单16的母本和父本间具有多态性的SSR引物扩增电泳图谱
图2为利用引物umc1228鉴定沈单16的S1群体中umc1228位点纯合的部分单株的扩增电泳图谱
图3为引物umc2036筛选到的沈单16的S2世代群体中umc2036位点纯合的部分单株的电泳图谱
图4为沈单16的S2苗期植株长势图
图5为沈单16的S2穗期植株长势图
具体实施方式
下述实施例中的实验方法，如无特别说明，均为常规方法。
下述实施例中的百分含量，如无特别说明，均为质量百分含量。
下述实施例中所使用的各种SSR引物购自上海生工；Taq DNA聚合酶、dNTP、剥离硅烷、亲和硅烷购自鼎国生物公司。
实施例1、以单交种沈单16为基础材料选育玉米自交系
一、筛选对沈单16S0代群体具有多态性的SSR引物
(一)提取沈单16的母本和父本的基因组DNA
按照CTAB法分别提取沈单16的母本和父本的基因组DNA，具体方法如下：
1、分别取沈单16的母本-自交系K12(国家农作物种质保存中心)和父本-自交系沈137(国家农作物种质保存中心)单株的新鲜叶片1g，放入1.5毫升离心管中，然后放入液氮中预冷。
2、取出液氮中的离心管快速研磨离心管中的叶片，直到磨成粉末状为止。
3、将装有叶片粉末的离心管中加入预热至95℃的CTAB缓冲液(1.17MNaCl，0.016M EDTA PH＝8.0，0.0835M Tris PH＝7.5，2％CTAB，1％β-巯基乙醇)700μl，720ng/μl RNAase迅速混匀。
4、将离心管置于65℃水浴锅，温浴30min。
5、取出离心管待冷至25℃后，加入570μl的氯仿∶异戊醇(24∶1)，慢慢摇动离心管30分钟，至有机相由无色变为绿色变为暗绿色。
6、于室温下13krpm离心10min，用剪去尖部的枪头将上清液转至另一离心管中，如上清液仍为绿色应重复步骤5。
7、加500μl异戊醇，慢慢摇摆，至DNA成絮状小团漂在液面上，12krpm离心5分钟。倒出异戊醇，离心管中加入75％的酒精50μl于4度冰箱保存。
提取的DNA经紫外线分光光度计检测纯度和浓度，稀释配成50ng/μl的DNA，即可以进行PCR扩增，扩增产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离获得扩增指纹图。
(二)SSR引物扩增
本试验从随机抽取分布于玉米染色体上的共69个SSR引物中选择得到在沈单16的母本和父本间具有多态性的20个引物(每对同源染色体分别取2个SSR引物)：umc1228、umc2008、bnlg1523、bnlg1741、bnlg1306、umc1887、umc1366、phi0115、umc1505、umc1196、bnlg149、bnlg2042、phi053、bnlg1023、umc2036、bnlg1759、phi045、umc1562、phi022或bnlg165。所述SSR引物序列来自网站www.maizegdb.org。
具体的实验方法如下：
(1)预先将PCR扩增仪(GeneAmp PCR System 9100)加热至94℃(热启动可保证得到特异的PCR扩增产物)；
(2)在PCR管中依次加入以下组分：
ddH2O 12.2μl
10×PCR Buffer 2.5μl
2.5mM dNTP 0.8μl
5.0U Taq DNA聚合酶 0.4μl
0.5mol/μl正向引物 0.8μl
0.5mol/μl反向引物 0.8μl
50ng/μl基因组DNA 2.5μl
总计 20.0μl
(3)按照以下程序进行扩增：95℃变性5min；再于95℃变性1min，58℃退火1min，72℃延伸2min，34个循环；然后72℃延伸10min；4℃保持。
(三)电泳、染色、显影
将PCR反应产物加5×loading buffer 5μl进行6％聚丙烯酰胺凝胶电泳，恒定功率为60W，电泳1.5h。根据聚丙稀酰胺凝胶显影图谱选择谱带清晰，具有多态性的引物作为本试验的有效多态性引物。结果在69个SSR引物中选择得到在沈单16的母本和父本间具有多态性的20个SSR引物(每对同源染色体分别取2个SSR引物)：umc1228、umc2008、bnlg1523、bnlg1741、bnlg1306、umc1887、umc1366、phi0115、umc1505、umc1196、bnlg149、bnlg2042、phi053、bnlg1023、umc2036、bnlg1759、phi045、umc1562、phi022或bnlg165。该20个SSR引物即为对沈单16 S0代群体具有多态性的SSR引物。其中，umc1228、umc2008、bnlg1523、bnlg1741、bnlg1306、umc1887的聚丙稀酰胺凝胶图谱如图1所示。图1中，♀表示沈单16的母本，♂表示沈单16的父本；No.1、No.2、No.3、No.4、No.5、No.6为对于“沈单16”群体具有多态性的引物对umc1228，umc2008，bnlg1523，bnlg1741，bnlg1306，umc1887的电泳结果。
其中，聚丙烯酰胺凝胶电泳板按照如下方法制备：
1、用酒精擦洗净玻璃板。
2、用剥离硅烷擦洗凹槽玻璃板。
3、用亲和硅烷擦洗电泳板。
4、夹子装紧密玻璃板与凹槽板。
5、60ml 6％丙烯酰胺溶液+300μl20％APS+30μlTEME混匀灌胶，插好梳子。
6、静置2小时即可凝胶。
其中，染色、显影程序如下：
1、固定 电泳玻璃板置于乙醇150ml，冰醋酸10ml，去离子水1400ml的盒子内，均匀摇荡20min；
2、水洗 玻璃板用去离子水洗两遍，每遍2min；
3、染色 玻璃板在盛有2g AgNO3与1500ml去离子水中均匀摇荡15min；
4、迅速漂洗 玻璃板在盛有1500ml的去离子水中迅速漂洗10sec；
5、显影 玻璃板在盛有20gNaOH、7g甲醛、1500ml去离子水中均匀摇荡10min；
6、终止显影 玻璃板置于盛有5gNa2CO3、1500ml去离子水的溶液中均匀振荡1min。
其中，试验用溶液按照如下方法制备：
1)40％丙烯酰胺储存液
丙烯酰胺 190g
N，N-亚甲基双丙烯酰胺 10g
加水至250ml
将溶液加热至37℃以上溶解，将溶液体积调至500ml，过滤。室温下4℃储存于棕色瓶中。
2)6％丙烯酰胺溶液
40％丙烯酰胺储存液 150ml
5×TBE 100ml
尿素 420.7g
搅拌溶解后，用超纯水配成1000ml，漏斗过滤，4℃保存。
3)5×loading buffer
98％甲酰胺 49ml
0.5M EDTA(pH＝8.0) 1ml
溴酚兰 0.125g
二甲基苯青FF 0.125g
4)5×TBE(1000ml)
Tris碱 54g
硼酸 27.5g
0.5mol/L EDTA(pH＝8.0) 20ml
加水至1000ml
5)20％过硫酸铵(APS)
过硫酸铵 2g
加水至10ml
溶解，4℃贮存
6)固定液
95％酒精 200ml
冰醋酸 10ml
去离子水 1800ml
7)染色液
去离子水 2000ml
硝酸银 4g
8)显影液
去离子水 2000ml
甲醛 10ml
NaOH 30g。
二、S1群体中纯合体的筛选
利用步骤一筛选到的对沈单16 S0代群体具有多态性的6个SSR引物，筛选S1世代群体中在该6个SSR引物位点纯合的单株并获得其自交果穗。具体方法如下：将沈单16的种子按常规方法播种、田间培育收获自交果穗。将收获的20穗自交果穗的种子(S1籽粒)按常规方法播种、田间培育，在S1群体植株6片叶时，剪取1g新鲜叶片，冷冻保存。
2、按照步骤一的CTAB法分别提取4100株单株的叶片DNA，所提取的叶片DNA经紫外线分光光度计检测纯度和浓度，稀释配成50ng/μl的DNA，4℃冰箱保存。
3、以umc1228、umc2008、bnlg1523、bnlg1741、bnlg1306和umc1887等6个SSR多态性引物分别逐个对S1群体中的4100株玉米叶片的基因组DNA进行PCR扩增，依据聚丙烯酰胺凝胶电泳谱带筛选在该6个SSR引物位点均纯合的单株。所述SSR引物位点纯合的单株为S1世代群体中与沈单16的父本或母本的该SSR引物扩增产物带型一致的单株。具体筛选方法如下：先用umc1228在4100株单株中进行筛选，得到2104株在umc1228位点纯合的单株；然后用umc2008在该在umc1228位点纯合的2104株单株中筛选，得到1065株在umc1228和umc2008位点均纯合的单株；依此类推，共筛选到在umc1228、umc2008、bnlg1523、bnlg1741、bnlg1306和umc1887等6个SSR引物位点均纯合的单株68株。图2为利用引物umc1228鉴定S1群体中umc1228位点纯合的部分单株的扩增电泳图谱，注：第2、5、8、12、15、16、17、18、21、23、25、26、27、28、31、34、36、38、39、42、44在引物umc1128位点上表现纯合，其他植株在此位点表现杂合；第32、33分别为沈单16的父本、母本。
其中SSR引物扩增、电泳、染色、显影按照步骤一的方法操作。
将在umc1228、umc2008、bnlg1523、bnlg1741、bnlg1306和umc1887等6个SSR引物位点均纯合的68株单株对应的S1植株进行控制授粉自交，收获果穗考种保存。
用以分析鉴定的6个SSR引物分别位于6对同源染色体上(umc1228、umc2008、bnlg1523、bnlg1741、bnlg1306和umc1887分别在No.1、No.2、No.3、No.4、No.5、No.6染色体上)，因此引物位点间在S1代为随机分离，不受基因连锁等的影响。根据孟德尔遗传规律中互相独立遗传的n个杂合基因自交后代纯合基因(1/2)n的分离规律，可以得出4100份材料6个杂合位点在自交S1代中，纯合个体的理论值为64，本试验S1代群体中获得纯合体植株68株。实际结果与理论数据误差不大于5％。
三、S2群体中纯合体的筛选
利用步骤一筛选到的沈单16的S0代群体具有多态性的20个SSR引物中的除了步骤二中所用的6个之外的14个SSR引物，筛选S2世代群体，得到的在该14个SSR引物位点纯合的S2世代群体单株，即为候选玉米自交系。具体方法如下：
1、种植上年收获的于umc1228、umc2008、bnlg1523、bnlg1741、bnlg1306和umc1887等6个SSR引物位点均纯合的68个果穗(S2籽粒)，每穗种为单行，共68个穗行，共1156个单株。
2、S2代群体苗期植株长势图如图4所示，表明经过位点纯合体筛选得到的S2代群体苗期植株穗行内株型性状较为整齐。苗期第6片叶时，分别剪取所有S2代个体植株新叶片1g，按照步骤一的CTAB法分别提取CTAB法提取叶片DNA，提取的叶片DNA经紫外线分光光度计检测纯度和浓度，稀释配成50ng/μl的DNA，4℃冰箱保存。
3、S2代群体植株中，依据田间植株表形鉴定结果，选择株型性状(株高、叶片数、穗位)较为整齐的9个穗行，共167个单株，将其植株叶片的基因组DNA以umc1366、phi0115、umc1505、umc1196、bnlg149、bnlg2042、phi053、bnlg1023、umc2036、bnlg1759、phi045、umc1562、phi022、bnlg165等14个SSR多态性引物分别逐个对S2群体中的167株玉米叶片DNA进行PCR扩增，依据聚丙烯酰胺凝胶电泳谱带筛选在该14个SSR引物位点均纯合的单株。所述SSR引物位点纯合的单株为S2世代群体中与沈单16的父本或母本的该SSR引物扩增产物带型一致的单株。具体方法同步骤二。结果在S2代167单株中共得到20对引物位点完全纯合的25个单株，该25个单株分布于6个穗行，将该6个穗行作为候选自交系。其中，umc2036筛选到的S2世代群体中umc2036位点纯合的部分单株的电泳图谱如图3所示，其中第一泳道为沈单16的父本，其余泳道为umc2036位点纯合的单株。
S2代群体穗期植株长势图如图5所示，表明经过位点纯合体筛选得到的S2代群体穗期穗行内植株间全株型性状较为整齐一致。
S0代群体中，20个独立遗传的杂合位点不加任何选择，随机分离后代在S2代中纯合体的概率仅为0.3％。本试验利用20对SSR多态性引物在S1、S2两代群体中鉴定纯合个体，结果在S2代167单株中共得到20对引物位点完全纯合的25个单株，纯合体概率达到14.9％。利用SSR分子标记辅助选择提高选择效率达到50倍。说明以SSR分子标记结合田间株型鉴定对纯合体选择的效果很明显。
四、配合力的鉴定
在S2代群体中，选择步骤三获得的20对引物位点完全纯合的25个单株对应的6个穗行中株型形状较为整齐的6个穗行与我国玉米优势群-瑞得优势群、兰卡斯特优势群、旅大红骨优势群、塘四平头优势群、P优势群的郑58、L6515、丹340、黄早四、丹598(自有自交系)等5个骨干自交系进行杂交组配，以不完全双列杂交NC II设计，即以郑58、L6515、丹340、黄早四、丹598(国家农作物种质保存中心)为父本，分别与所选择的6个穗行中的一个植株为母本进行杂交。共组配30个杂交组合，每个杂交组合34株，进行配合力鉴定。结果表明6个穗行(分别命名为S2-E，S2-35，S2-I，S2-44，S2-28、S2-k)的一般配合力分别是0.03，-0.03，-0.07，0.13，0.21，-0.15。
根据配合力鉴定结果得到产量一般配合力较高(大于0.10)的两个穗行S2-44，S2-28，作为自交系，其自交果穗(S3代籽粒)保存用以下一步的玉米育种应用。
Claims (9)
1、一种辅助选育玉米自交系的方法，包括以下步骤：
(1)筛选对玉米自交系选育基础材料S0代群体具有多态性的SSR引物至少20个；所述SSR引物序列来自网站www.maizegdb.org；
所述对玉米自交系选育基础材料S0代群体具有多态性的SSR引物满足以下条件：每对同源染色体上至少2个SSR引物，位于一对同源染色体上的每两个SSR引物位点之间的遗传距离至少50cM；
(2)利用步骤(1)筛选到的对玉米自交系选育基础材料S0代群体具有多态性的的SSR引物中至少6个SSR引物，筛选S1世代群体中在所述至少6个SSR引物位点纯合的单株并获得其自交果穗；所述至少6个SSR引物位于至少6对同源染色体上；
(3)利用步骤(1)筛选到的对玉米自交系选育基础材料S0代群体具有多态性的SSR引物中除去步骤(2)中所用的SSR引物之外的至少14个SSR引物，筛选S2世代群体，得到的在所述至少14个SSR引物位点纯合的S2世代群体单株，即为候选玉米自交系。
2、根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述玉米自交系选育基础材料为单交种，所述单交种的父本和母本已知，按照如下方法筛选对玉米自交系选育基础材料S0代群体具有多态性的SSR引物：分别以父本和母本的基因组DNA为模板，利用SSR引物进行PCR扩增，检测PCR产物的多态性，在父本和母本之间有多态性的PCR产物对应的SSR引物即为对玉米自交系选育基础材料S0代群体具有多态性的SSR引物。
3、根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述玉米自交系选育基础材料为单交种，所述单交种的父本和母本未知，按照如下方法筛选对玉米自交系选育基础材料S0代群体具有多态性的SSR引物：分别以S1世代群体单株的基因组DNA为模板，利用SSR引物进行PCR扩增，检测PCR产物的多态性，在S1世代群体中能产生三种带型记作带型I、带型II、带型III，且产生带型I、带型II、带型III的单株数目符合1∶2∶1的比例的SSR引物即为对玉米自交系选育基础材料S0代群体具有多态性的SSR引物。
4、根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述SSR引物位点纯合的单株为S1世代群体或S2世代群体中与所述单交种的父本或母本的该SSR引物扩增产物带型一致的单株。
5、根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述SSR引物位点纯合的单株为S1世代群体或S2世代群体中与所述S1世代群体中的该SSR引物的带型I或带型III一致的单株。
6、根据权利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：所述玉米自交系选育基础材料为沈单16，步骤(1)中筛选到的对玉米自交系选育基础材料S0代群体具有多态性的SSR引物为umc1228、umc2008、bnlg1523、bnlg1741、bnlg1306、umc1887、umc1366、phi0115、umc1505、umc1196、bn11149、bnlg2042、phi053、bnlg1023、umc2036、bnlg1759、phi045、umc1562、phi022或bnlg165
7、根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述步骤(2)中所用的SSR引物为umc1228、umc2008、bnlg1523、bnlg1741、bnlg1306和umc1887，步骤(3)中所用的SSR引物为umc1366、phi0115、umc1505、umc1196、bnlg149、bnlg2042、phi053、bnlg1023、uc2036、bnlg1759、phi045、umc1562、phi022和bnlg165。
8、根据权利要求1-7中任一所述的方法，其特征在于：所述S0代群体由20个单株组成；所述S1代群体由4100个单株组成；所述S2代群体由167个单株组成。
9、一种选育玉米自交系的方法，是将权利要求1-8中任一所述的方法获得的候选玉米自交系结合S2世代群体的农艺性状和/或配合力和/或产量选育自交系。
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