CN1910294A - 用Fc受体多态性诊断免疫应答疾病的治疗方案 - Google Patents

Abstract

本发明提供了利用Fcγ受体(FcγR)多态性作为白介素－2(IL－2)免疫治疗干预的诊断方法。所述方法包括检测个体的FcγRIIIA基因或FcγRIIA基因的等位基因模式并确定该等位基因模式是否预示了对IL－2免疫治疗有阳性治疗反应。存在FcγRIIIA 158F/F纯合基因型，和/或存在FcγRIIIA 48L等位基因的一份或两份拷贝，和/或存在FcγRIIA 131RL等位基因的一份或两份拷贝预示了对IL－2免疫治疗有阳性治疗反应，因此表明可采用IL－2免疫治疗进行医学干预来治疗免疫疾病。所述诊断方法可用于鉴定能通过IL－2免疫治疗提高免疫功能的个体，特别是患有癌症的个体。

Description

用Fc受体多态性诊断免疫应答疾病的治疗方案

                            发明领域

本发明涉及预测医学领域，更具体地说涉及利用Fcγ受体(FcγR)多态性作为评价免疫应答疾病治疗方案的诊断方法。

                            发明背景

白介素-2(IL-2)是天然杀伤细胞(NK)和T-细胞增殖和功能的有效刺激物(Morgan等，(1976)，Science 193：1007-1011)。该天然存在的淋巴因子单独或与淋巴因子激活的杀伤(LAK)细胞或肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)联合(使用)显示对各种恶性肿瘤具有抗肿瘤活性(参见，例如Rosenberg等，(1987)，N.Engl.J.Med.，316：889-897；Rosenberg，(1988)，Ann.Surg.，208：121-135；Topalian等，(1988)，J.Clin.Oncol.6：839-853；Rosenberg等，(1988)，N.Engl.J.Med.，319：1676-1680；和Weber等，(1992)，J.Clin.Oncol.，10：33-40)。已报道采用Proleukin^(一种商品化可购得的IL-2制剂)显示IL-2在转移性黑色素瘤和肾细胞癌患者中有抗肿瘤活性。其它疾病，包括淋巴瘤也显示对IL-2治疗有反应(Gisselbrecht等，(1994)，Blood，83(8)：2020-2022)。然而，为获得对肿瘤生长具有阳性治疗结果所用的高剂量IL-2常引起严重的副作用，包括发热与寒颤、低血压与毛细管渗漏(血管渗漏综合征或VLS)和神经变化(参见，例如Duggan等，(1992)，J.Immunotherapy，12：115-122；Gisselbrecht等，(1994)，Blood，83：2081-2085；和Sznol与Parkinson，(1994)，Blood，83：2020-2022)。

单克隆抗体日益成为治疗实体瘤，例如乳腺癌以及治疗表达CD20细胞表面抗原的B细胞型淋巴瘤的选择方法。体外研究证明抗CD20单克隆抗体能通过凋亡导致(肿瘤)细胞死亡(Shan等，(1998)，Blood，91：1644-1652)。其它研究报道了B细胞死亡主要由依赖抗体的细胞毒性(ADCC)所介导。

鉴于抗-CD20抗体的抗肿瘤活性可能以免疫学为基础，检测了这些抗体与其它能提高NK细胞功能的细胞因子的联用效果。测试了细胞因子，例如IL-12、IL-15、TNF-α、TNF-β、γ-IFN和IL-2是否能增强ADCC，这是一种NK独特功能。虽然每种细胞因子伴有其自身的特异性毒性，但是看来均增强了ADCC活性。参见，例如Rosenberg等，(1986)，Science，233(4770)：1318-1321；Gollob等，(1998)，J Clin Invest.，102(3)：561-575。正在进行对IL-2和单克隆抗体利妥昔单抗(Rituxan^；IDEC-C2B8；IDEC Pharmaceuticals Corp.，San Diego，California)联合治疗的研究显示用这两种治疗药物改善了非何杰金B-细胞性淋巴瘤患者的临床反应(美国专利公布号20030185796)。

利妥昔单抗是含有人IgG1和κ恒定区与分离自鼠抗-CD20单克隆抗体，IDEC-2B8的鼠可变区的嵌合性抗-CD20单克隆抗体(Reff等，(1994)，Blood，83：435-445)。利妥昔单抗显示了能有效治疗低度-中度和高度非何杰金淋巴瘤(参见，例如Maloney等，(1994)，Blood，84：2457-2466；McLaughlin等，(1998)，J.Clin.Oncol.，16：2825-2833；Maloney等，(1997)，Blood，90：2188-2195；Hainsworth等，(2000)，Blood，95：3052-3056；Colombat等，(2001)，Blood，97：101-106；Coiffier等，(1998)，Blood，92：1927-1932；Foran等，(2000)，J.Clin.Oncol.，18：317-324；Anderson等，(1997)，Biochem.Soc.Trans.，25：705-708；Vose等，(1999)，Ann.Oncol.10：58a)。然而，30％-50％低度NHL患者显示对该单克隆抗体无临床反应(Hainsworth等，(2000)，Blood，95：3052-3056；Colombat等，(2001)，Blood，97：101-106)。虽然利妥昔单抗的确切作用机理还未知，但有证据表明其抗淋巴瘤活性部分是因为补体介导的细胞毒性(CMC)和抗体依赖的细胞介导的细胞毒性(ADCC)，从而抑制了细胞增殖并最终直接诱导凋亡。

IgG的Fc部分的淋巴细胞受体(FcγR)介导了ADCC。Fc受体是表达于以下细胞表面的膜结合糖蛋白：主要功能为结合并内化免疫球蛋白、免疫复合物和其它颗粒的嗜中性白细胞、巨噬细胞和其它类型细胞。不同类型的FcγR可表达在各种免疫效应细胞上。结合特定FcγR可激活或抑制该效应细胞。

迄今鉴定到的FcγR可分为三类：FcγRI(CD64)、FcγRIIA(CD32)和FcγRIIIA(CD16)能活化效应细胞；而FcγRIIB抑制活化；和FcγRIIIB与其它FcγR合作起作用。FcγRIIIA位于NK细胞、巨噬细胞和单核细胞上；而FcγRIIA和FcγRIIB主要表达在巨噬细胞而非NK细胞上。结合活化受体可促进免疫活性，例如细胞因子释放和炎性反应；而结合抑制性受体主要导致免疫复合物清除而不激活免疫反应。

在ADCC中，利妥昔单抗结合癌细胞表面的CD20抗原，然后经效应细胞，例如NK细胞和巨噬细胞上的FcγR桥连(bridge)这些效应细胞。约占人外周血淋巴细胞15％的天然杀伤细胞是介导抗肿瘤细胞ADCC的主要效应细胞。NK细胞表面的低亲和力FcγRIIIA受体能识别并结合IgG抗体。据认为，结合NK细胞上的FcγRIIIA是治疗性给予IgG单克隆抗体，例如利妥昔单抗的抗肿瘤活性的基本机理(Clynes等，(2000)，Nature Med.，6：443-446；Cooper等，(2001)，TrendsImmunol.，22：633-640；Leibson，(1997)，Immunity，6：655-661；Roitt等，(2001)，《免疫学》(Immunology)，(第六版；Mosby，Edinburgh，UK)。细胞因子，例如IL-2和IL-12能激活NK细胞的细胞毒性。

近来，鉴定到对特定的IgG亚类具有不同结合亲和力的这些FcγR的三种多态性：在FcγRIIIA成熟序列的158位具有缬氨酸(V)或苯丙氨酸(F)残基的多态性；在FcγRIIIA成熟序列的48位具有亮氨酸(L)、精氨酸(R)或组氨酸(H)残基的三等位基因多态性；和在FcγRIIA成熟序列的131位具有组氨酸(H)或精氨酸(R)残基的多态性。FCγRIIIA 158V等位基因(的产物)比FCγRIIIA 158F等位基因(的产物)更好地结合人IgG1(Koene等，(1997)，Blood，90：1109-1114)，158V等位基因(产物)结合的增加导致效应细胞的活化提高和更强的ADCC(Shields等，(2001)，J.Biol.Chem.，176：6591-6604；Vance等，(1993)，J.Immunol.，151：6429-6439)。据报道，FcγRIIIA 48R和FcγRIIIA 48H等位基因(产物)对人IgG1、IgG3和IgG4的亲和力比FcγRIIIA 48L等位基因(产物)高(de Haas等，(1996)，J.Immunol.，156(8)：3948-3955)。据报道，FcγRIIA 131H等位基因(产物)对IgG2的亲和力比FcγRIIA 131R等位基因(产物)高，虽然这些等位基因(产物)形式对IgG1的亲和力无明显差异(Parren等，(1992)，J.Clin.Invest.，90：1537-1546)。因此，纯合性FcγRIIIA的48L/L、FcγRIIIA的158F/F或FcγRIIA的131R/R与特定的IgG亚类相互作用的能力降低。发现这些多态性的后二者可作为利妥昔单抗临床反应的预测物。因此，较高的利妥昔单抗反应率与FcγRIIIA 158V/V基因型(Cartron等，(2002)，Blood，99：754-758；Weng和Levy，(2003)，J.Clin.Oncol.，21：1-8)或FcγRIIA 131H/H基因型(Weng和Levy，(2003)，J.Clin.Oncol.，21：1-8)相关。此外，同时具有FcγRIIIA 158V/V和FcγRIIA 131H/H基因型的那些个体(肿瘤)缓解持续时间长(Weng和Levy，(2003)，J.Clin.Oncol.，21：1-8)。

鉴于这些多态性在单克隆抗体治疗反应中的重要性，需要利用这些多态性来诊断对其它免疫调节剂起临床反应的其它方法。

                            发明概述

本发明提供了利用Fcγ受体(FcγR)多态性作为诊断白介素-2(IL-2)免疫治疗干预的方法。这些方法包括检测个体的FcγRIIIA基因或FcγRIIA基因的等位基因模式，确定等位基因模式是否可预示对IL-2免疫治疗有阳性治疗反应。存在FcγRIIIA158F/F纯合基因型，和/或存在FcγRIIIA 48L等位基因的一种或两种拷贝，和/或存在FcγRIIA 131R等位基因的一种或两种拷贝可预示对IL-2免疫治疗有阳性治疗反应，因此表明可用IL-2免疫治疗进行医学干预来治疗免疫疾病。

发现这些方法可用于鉴定免疫应答受损而IL-2免疫治疗能提高其有效产生FcγR-介导的免疫应答能力的那些个体。因此，本发明也提供治疗携带这些特定FcγR多态性个体的免疫疾病的方法，所述治疗包括IL-2单独给药或与一种或多种能通过FcRIIIA介导或FcγRIIA介导的免疫反应提供治疗作用的其它药物联合给药。可用本发明方法治疗的免疫疾病包括但不限于例如B细胞淋巴瘤和实体瘤，如乳腺癌、结肠癌、宫颈癌、前列腺癌和其它癌症。

本发明包括以下实施方案：

1.一种预测需要白介素-2(IL-2)免疫治疗的个体对IL-2治疗的治疗反应的诊断方法，所述方法包括检测所述个体的Fcγ受体IIIA(FcγIIIA)基因的等位基因模式，其中存在纯合FcγRIIIA 158F/F基因型表明该个体对所述IL-2免疫治疗将显示阳性治疗反应。

2.如1所述的方法，其中所述个体需要IL-2免疫治疗来治疗癌症。

3.如2所述的方法，其中所述个体还正用靶向在所述癌症细胞表面表达的细胞表面抗原的抗体进行治疗。

4.如3所述的方法，其中所述抗体是免疫球蛋白G1(IgG1)单克隆抗体。

5.如2、3或4中任一项所述的方法，其中所述癌症是B-细胞淋巴瘤。

6.如5所述的方法，其中所述B-细胞性淋巴瘤是非何杰金B-细胞淋巴瘤。

7.如2、3或4中任一项所述的方法，其中所述癌症选自：乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、前列腺癌、结肠癌、黑色素瘤、肾细胞癌、急性髓性白血病(AML)和慢性淋巴细胞性白血病(CLL)。

8.如1-7中任一项所述的方法，其中通过选自以下的方法检测所述FcγRIIIA基因的等位基因模式：等位基因特异性杂交、引物特异性延伸、寡核苷酸连接试验、限制性酶切位点分析和单链构型多态性分析。

9.一种预测需要白介素-2(IL-2)免疫治疗的个体对IL-2治疗的治疗反应的诊断方法，所述方法包括检测所述个体的Fcγ受体IIA(FcγIIA)基因的等位基因模式，其中存在杂合的FcγRIIA 131H/R基因型或存在纯合的FcγRIIA 131R/R基因型表明该个体对所述IL-2免疫治疗将显示阳性治疗反应。

10.如9所述的方法，其中所述个体需要IL-2免疫治疗来治疗癌症。

11.如9所述的方法，其中所述个体还正在用靶向在所述癌症细胞表面表达的细胞表面抗原的抗体进行治疗。

12.如11所述的方法，其中所述抗体是免疫球蛋白G1(IgG1)单克隆抗体。

13.如10、11或12中任一项所述的方法，其中所述癌症是B-细胞淋巴瘤。

14.如13所述的方法，其中所述B-细胞性淋巴瘤是非何杰金B-细胞淋巴瘤。

15.如10、11或12中任一项所述的方法，其中所述癌症选自：乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、前列腺癌、结肠癌、黑色素瘤、肾细胞癌、急性髓性白血病(AML)和慢性淋巴细胞性白血病(CLL)。

16.如9-15中任一项所述的方法，其中通过选自以下的方法检测所述FcγRIIA基因的等位基因模式：等位基因特异性杂交、引物特异性延伸、寡核苷酸连接试验、限制性酶切位点分析和单链构型多态性分析。

17.一种提高含有纯合Fcγ受体RIIIA(FcγRIIIA)158F/F基因型个体的免疫功能的方法，所述方法包括给予所述个体白介素-2免疫治疗。

18.如17所述的方法，其中所述IL-2免疫治疗包括给予所述个体至少一种治疗有效剂量的IL-2或其生物学活性变体。

19.如18所述的方法，其中给予所述个体多份治疗有效剂量的IL-2或其变体。

20.如19所述的方法，其中所述IL-2或其变体按每日一次给药方案给予。

21.如19所述的方法，其中所述IL-2或其变体按每周两次或每周三次给药方案给予。

22.如17-22中任一项所述的方法，其中所述IL-2或其变体皮下给予。

23.如17-21中任一项所述的方法，其中所述IL-2或其变体以选自以下的药物组合物提供：单体IL-2药物组合物、多聚体IL-2组合物、冻干的IL-2药物组合物和喷雾干燥的IL-2药物组合物。

24.如17-23中任一项所述的方法，其中所述IL-2是具有人IL-2氨基酸序列的重组产生的IL-2或其与人IL-2的氨基酸序列具有至少70％序列相同性的变体。

25.如24所述的方法，其中所述IL-2的变体是脱-丙氨酰-1，丝氨酸125人白介素-2。

26.如17-25中任一项所述的方法，还包括给予所述个体免疫球蛋白G1(IgG1)单克隆抗体。

27.如26所述的方法，其中所述个体正接受癌症治疗。

28.如27所述的方法，其中所述癌症是B-细胞淋巴瘤。

29.如28所述的方法，其中所述B-细胞性巴瘤是非何杰金B-细胞淋巴瘤。

30.如29所述的方法，其中所述IgG1单克隆抗体是抗-CD20抗体或其抗原结合片段。

31.如27所述的方法，其中所述癌症选自：乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、前列腺癌、结肠癌、黑色素瘤、肾细胞癌、急性髓性白血病(AML)和慢性淋巴细胞性白血病(CLL)。

32.如27所述的方法，其中所述IgG1单克隆抗体选自：Therex、MDX-010、EMD 72000、Erbitux、WX-G250、IDM-1、MDX-210、ZAMYL、Campath和它们的抗原结合片段。

33.一种提高含有杂合Fcγ受体RIIA(FcγRIIA)131H/R基因型或纯合FcγRIIA131R/R基因型个体的免疫功能的方法，所述方法包括给予所述个体白介素-2免疫治疗。

34.如33所述的方法，其中所述IL-2免疫治疗包括给予所述个体至少一种治疗有效剂量的IL-2或其生物学活性变体。

35.如34所述的方法，其中给予所述个体多份治疗有效剂量的IL-2或其变体。

36.如35所述的方法，其中所述IL-2或其变体按每日一次给药方案给予。

37.如35所述的方法，其中所述IL-2或其变体按每周两次或每周三次给药方案给予。

38.如33-37中任一项所述的方法，其中所述IL-2或其变体皮下给予。

39.如33-38中任一项所述的方法，其中所述IL-2或其变体以选自以下的药物组合物提供：单体IL-2药物组合物、多聚体IL-2组合物、冻干的IL-2药物组合物和喷雾干燥的IL-2药物组合物。

40.如33-39中任一项所述的方法，其中所述IL-2是具有人IL-2氨基酸序列的重组产生的IL-2或其与人IL-2的氨基酸序列具有至少70％序列相同性的变体。

41.如40所述的方法，其中所述IL-2的变体是脱-丙氨酰-1，丝氨酸125人白介素-2。

42.如33-41中任一项所述的方法，还包括给予所述个体免疫球蛋白G1(IgG1)单克隆抗体。

43.如42所述的方法，其中所述个体正接受癌症治疗。

44.如43所述的方法，其中所述癌症是B-细胞淋巴瘤。

45.如44所述的方法，其中所述B-细胞淋巴瘤是非何杰金B-细胞淋巴瘤。

46.如45所述的方法，其中所述IgG1单克隆抗体是抗-CD20抗体或其抗原结合片段。

47.如43所述的方法，其中所述癌症选自：乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、前列腺癌、结肠癌、黑色素瘤、肾细胞癌、急性髓性白血病(AML)和慢性淋巴细胞性白血病(CLL)。

48.如43所述的方法，其中所述IgG1单克隆抗体选自：Therex、MDX-010、EMD 72000、Erbitux、WX-G250、IDM-1、MDX-210、ZAMYL、Campath和它们的抗原结合片段。

49.一种治疗含有纯合FcγIIIA(FcγRIIIA)158F/F基因型个体的癌症的方法，所述方法包括给予所述个体白介素-2免疫治疗。

50.如49所述的方法，其中所述IL-2免疫治疗包括给予所述个体至少一种治疗有效剂量的IL-2或其生物活性变体。

51.如50所述的方法，其中给予所述个体多份治疗有效剂量的IL-2或其变体。

52.如51所述的方法，其中所述IL-2或其变体按每日一次给药方案给予。

53.如51所述的方法，其中所述IL-2或其变体按每周两次或每周三次给药方案给予。

54.如49-53中任一项所述的方法，其中所述IL-2或其变体皮下给予。

55.如49-54中任一项所述的方法，其中所述IL-2或其变体以选自以下的药物组合物提供：单体IL-2药物组合物、多聚体IL-2组合物、冻干的IL-2药物组合物和喷雾干燥的IL-2药物组合物。

56.如49-55中任一项所述的方法，其中所述IL-2是具有人IL-2氨基酸序列的重组产生的IL-2或其与人IL-2的氨基酸序列具有至少70％序列相同性的变体。

57.如56所述的方法，其中所述IL-2的变体是脱-丙氨酰-1，丝氨酸125人白介素-2。

58.如49-57中任一项所述的方法，还包括给予所述个体免疫球蛋白G1(IgG1)单克隆抗体。

59.如58所述的方法，其中所述个体正接受癌症治疗。

60.如59所述的方法，其中所述癌症是B-细胞淋巴瘤。

61.如60所述的方法，其中所述B-细胞淋巴瘤是非何杰金B-细胞淋巴瘤。

62.如61所述的方法，其中所述IgG1单克隆抗体是抗-CD20抗体或其抗原结合片段。

63.如59所述的方法，其中所述癌症选自：乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、前列腺癌、结肠癌、黑色素瘤、肾细胞癌、急性髓性白血病(AML)和慢性淋巴细胞性白血病(CLL)。

64.如59所述的方法，其中所述IgG1单克隆抗体选自：Therex、MDX-010、EMD 72000、Erbitux、WX-G250、IDM-1、MDX-210、ZAMYL、Campath和它们的抗原结合片段。

65.一种治疗含有杂合FcγIIA(FcγRIIA)131H/R基因型或纯合FcγRIIA 131R/R基因型个体的癌症的方法，所述方法包括给予所述个体白介素-2免疫治疗。

66.如65所述的方法，其中所述IL-2免疫治疗包括给予所述个体至少一种治疗有效剂量的IL-2或其生物活性变体。

67.如66所述的方法，其中给予所述个体多份治疗有效剂量的IL-2或其变体。

68.如67所述的方法，其中所述IL-2或其变体按每日一次给药方案给予。

69.如67所述的方法，其中所述IL-2或其变体按每周两次或每周三次给药方案给予。

70.如65-69中任一项所述的方法，其中所述IL-2或其变体皮下给予。

71.如65-70中任一项所述的方法，其中所述IL-2或其变体以选自以下的药物组合物提供：单体IL-2药物组合物、多聚体IL-2组合物、冻干的IL-2药物组合物和喷雾干燥的IL-2药物组合物。

72.如65-71中任一项所述的方法，其中所述IL-2是具有人IL-2氨基酸序列的重组产生的IL-2或其与人IL-2的氨基酸序列具有至少70％序列相同性的变体。

73.如72所述的方法，其中所述IL-2的变体是脱-丙氨酰-1，丝氨酸125人白介素-2。

74.如65-73中任一项所述的方法，还包括给予所述个体免疫球蛋白G1(IgG1)单克隆抗体。

75.如74所述的方法，其中所述个体正接受癌症治疗。

76.如75所述的方法，其中所述癌症是B-细胞淋巴瘤。

77.如76所述的方法，其中所述B-细胞淋巴瘤是非何杰金B-细胞淋巴瘤。

78.如77所述的方法，其中所述IgG1单克隆抗体是抗-CD20抗体或其抗原结合片段。

79.如75所述的方法，其中所述癌症选自：乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、前列腺癌、结肠癌、黑色素瘤、肾细胞癌、急性髓性白血病(AML)和慢性淋巴细胞性白血病(CLL)。

80.如75所述的方法，其中所述IgG1单克隆抗体选自：Therex、MDX-010、EMD 72000、Erbitux、WX-G250、IDM-1、MDX-210、ZAMYL、Campath和它们的抗原结合片段。

81.一种用于诊断方法的试剂盒，所述诊断方法可用于预测需要白介素-2(IL-2)免疫治疗的个体对IL-2治疗的治疗反应，所述试剂盒装有至少一种能与Fcγ受体IIIA(FcγRIIA)基因毗邻区域或其多态性区域特异性杂交的探针或引物，所述多态性区域包含编码(encoding)FcγRIIIA 158F等位基因的核苷酸。

82.如81所述的试剂盒，还装有使用说明书。

83.一种用于诊断方法的试剂盒，所述诊断方法可用于预测需要白介素-2(IL-2)免疫治疗的个体对IL-2治疗的治疗反应，所述试剂盒装有至少一种能与Fcγ受体IIA(FcγRIIA)基因毗邻区域或其多态性区域特异性杂交的探针或引物，所述多态性区域包含编码FcγRIIA 131R等位基因的核苷酸。

84.如83所述的试剂盒，还装有使用说明书。

85.一种预测需要白介素-2(IL-2)免疫治疗的个体对IL-2治疗的治疗反应的诊断方法，所述方法包括检测所述个体的Fcγ受体IIIA(FcγIIIA)基因的等位基因模式，其中存在纯合FcγRIIIA 48L/L基因型、杂合FcγRIIIA 48L/R基因型或杂合FcγRIIIA 48L/H基因型表明该个体对所述IL-2免疫治疗将显示阳性治疗反应。

86.如85所述的方法，其中所述个体需要IL-2免疫治疗来治疗癌症。

87.如86所述的方法，其中所述个体还正在用靶向在所述癌症细胞表面表达的细胞表面抗原的抗体进行治疗。

88.如87所述的方法，其中所述抗体是免疫球蛋白G1(IgG1)单克隆抗体。

89.如86、87或88所述的方法，其中所述癌症是B-细胞淋巴瘤。

90.如89所述的方法，其中所述B-细胞淋巴瘤是非何杰金B-细胞淋巴瘤。

91.如86、87或88所述的方法，其中所述癌症选自：乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、前列腺癌、结肠癌、黑色素瘤、肾细胞癌、急性髓性白血病(AML)和慢性淋巴细胞性白血病(CLL)。

92.如85-91所述的方法，其中通过选自以下的方法检测所述FcγRIIIA基因的等位模式：等位基因特异性杂交、引物特异性延伸、寡核苷酸连接试验、限制性酶切位点分析和单链构型多态性分析。

93.一种提高含有纯合FcγRIIIA(FcγRIIIA)48L/L基因型个体的免疫功能的方法，所述方法包括给予所述个体白介素-2免疫治疗。

94.如93所述的方法，其中所述IL-2免疫治疗包括给予所述个体至少一种治疗有效剂量的IL-2或其生物学活性变体。

95.如94所述的方法，其中给予所述个体多份治疗有效剂量的IL-2或其变体。

96.如95所述的方法，其中所述IL-2或其变体按每日一次给药方案给予。

97.如95所述的方法，其中所述IL-2或其变体按每周两次或每周三次给药方案给予。

98.如93-97中任一项所述的方法，其中所述IL-2或其变体皮下给予。

99.如93-98中任一项所述的方法，其中所述IL-2或其变体以选自以下的药物组合物提供：单体IL-2药物组合物、多聚体IL-2组合物、冻干的IL-2药物组合物和喷雾干燥的IL-2药物组合物。

100.如93-99中任一项所述的方法，其中所述IL-2是具有人IL-2氨基酸序列的重组产生的IL-2或其与人IL-2的氨基酸序列具有至少70％序列相同性的变体。

101.如100所述的方法，其中所述IL-2的变体是脱-丙氨酰-1，丝氨酸125人白介素-2。

102.如93-101中任一项所述的方法，还包括给予所述个体免疫球蛋白G1(IgG1)单克隆抗体。

103.如102所述的方法，其中所述个体正接受癌症治疗。

104.如103所述的方法，其中所述癌症是B-细胞淋巴瘤。

105.如104所述的方法，其中所述B-细胞淋巴瘤是非何杰金B-细胞淋巴瘤。

106.如105所述的方法，其中所述IgG1单克隆抗体是抗-CD20抗体或其抗原结合片段。

107.如103所述的方法，其中所述癌症选自：乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、前列腺癌、结肠癌、黑色素瘤、肾细胞癌、急性髓性白血病(AML)和慢性淋巴细胞性白血病(CLL)。

108.如103所述的方法，其中所述IgG1单克隆抗体选自：Therex、MDX-010、EMD 72000、Erbitux、WX-G250、IDM-1、MDX-210、ZAMYL、Campath和它们的抗原结合片段。

109.一种治疗含有纯合FcγIIA(FcγRIIA)131H/R基因型或纯合FcγRIIA131R/R基因型个体的癌症的方法，所述方法包括给予所述个体白介素-2免疫治疗。

110.如109所述的方法，其中所述IL-2免疫治疗包括给予所述个体至少一种治疗有效剂量的IL-2或其生物活性变体。

111.如110所述的方法，其中给予所述个体多份治疗有效剂量的IL-2或其变体。

112.如111所述的方法，其中所述IL-2或其变体按每日一次给药方案给予。

113.如111所述的方法，其中所述IL-2或其变体按每周两次或每周三次给药方案给予。

114.如109-113中任一项所述的方法，其中所述IL-2或其变体皮下给予。

115.如109-114中任一项所述的方法，其中所述IL-2或其变体以选自以下的药物组合物提供：单体IL-2药物组合物、多聚体IL-2组合物、冻干的IL-2药物组合物和喷雾干燥的IL-2药物组合物。

116.如109-115中任一项所述的方法，其中所述IL-2是具有人IL-2氨基酸序列的重组产生的IL-2或其与人IL-2的氨基酸序列具有至少70％序列相同性的变体。

117.如116所述的方法，其中所述IL-2的变体是脱-丙氨酰-1，丝氨酸125人白介素-2。

118.如109-117中任一项所述的方法，还包括给予所述个体免疫球蛋白G1(IgG1)单克隆抗体。

119.如118所述的方法，其中所述个体正接受癌症治疗。

120.如119所述的方法，其中所述癌症是B-细胞淋巴瘤。

121.如120所述的方法，其中所述B-细胞淋巴瘤是非何杰金B-细胞淋巴瘤。

122.如121所述的方法，其中所述IgG1单克隆抗体是抗-CD20抗体或其抗原结合片段。

123.如119所述的方法，其中所述癌症选自：乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、前列腺癌、结肠癌、黑色素瘤、肾细胞癌、急性髓性白血病(AML)和慢性淋巴细胞性白血病(CLL)。

124.如103所述的方法，其中所述IgG1单克隆抗体选自：Therex、MDX-010、EMD 72000、Erbitux、WX-G250、IDM-1、MDX-210、ZAMYL、Campath和它们的抗原结合片段。

125.一种用于诊断方法的试剂盒，所述诊断方法可用于预测需要白介素-2(IL-2)免疫治疗的个体对IL-2治疗的治疗反应，所述试剂盒装有至少一种能与Fcγ受体IIIA(FcγRIIA)基因毗邻区域或其多态性区域特异性杂交的探针或引物，所述多态性区域包含编码FcγRIIIA 48L等位基因的核苷酸。

126.如125所述的试剂盒，还装有使用说明书。

                        附图简述

图1显示了FcγRIIIA 158V/F多态性的位置，该位置取决于SEQ ID NO：1中3个可能的起始密码子的哪一个用于启动人FcγRIIIA序列的开放读框。当翻译起始于SEQ ID NO：1的核苷酸185时(即，第一起始密码子)，G/T取代导致在所翻译多肽的氨基酸残基212处发生V/F多态性(参见SEQ ID NO：4)。当翻译起始于SEQ ID NO：1的核苷酸293时(即，第二起始密码子)，G/T取代导致在所翻译多肽的氨基酸残基176处发生V/F多态性(参见SEQ ID NO：6)。当翻译起始于SEQID NO：1的核苷酸344时(即，第三起始密码子)，G/T取代导致在所翻译多肽的氨基酸残基159处发生V/F多态性(参见SEQ ID NO：8)。

图2显示了本文以下实验部分所述的IL2NHL03研究中CD 16/56+NK细胞数和FcγRIIIA 158F/F患者亚组的临床特征的相关性。

图3是描述开始联合给予利妥昔单抗-IL-2八周后检测到的基因分型患者中肿瘤体积变化百分比的示意图。实施例4详述了该给药方案。

图4，图A和B比对了FcγRIIIa和FcγRIIIb基因的核苷酸序列。图4A比对了FcγRIIIa(上行，标记的HSFCGR31，也称为基因B)和FcγRIIIb(下行，标记的HSFCGR32，也称为基因A)的部分cDNA序列。图4A的方框中还显示了：表明基因A或基因B的位置(473、531和641位)以及预示V→F取代的559位的单个核苷酸多态性(仅发生在基因A中)。图4B比对了基因A和B的外显子4并显示了这两种基因之间的各种核苷酸差异，包括313位(相对于外显子4的第一碱基编号)的高特异性核苷酸变化。

图5，图A-N描述了SEQ ID NO：1-14。

                            发明详述

本发明涉及预测需要白介素-2(IL-2)免疫治疗的病人，特别是考虑联用IL-2免疫治疗与抗癌症单克隆抗体的个体对这种治疗的治疗反应的诊断方法，所述单克隆抗体可通过受体介导的抗体依赖的细胞毒性(ADCC)介导其治疗作用。本发明的方法利用Fcγ受体(FcγR)功能性多态性作为诊断工具来确定IL-2免疫治疗干预是否可能提供阳性治疗反应。特别感兴趣的是成熟的人FcγRIIIA的158位的缬氨酸(V)/苯丙氨酸(F)多态性(对应于SEQ ID NO：6所示176位的V残基；由SEQ IDNO：5所示核苷酸序列编码)；成熟的人FcγRIIIA的48位的亮氨酸(L)/精氨酸(R)/组氨酸(H)三等位多态性(对应于SEQ ID NO：6所示66位的L残基；由SEQID NO：5所示核苷酸序列编码)；和成熟的人FcγRIIA的131位的组氨酸(H)/精氨酸(R)多态性(对应于SEQ ID NO：12所示165位的R残基；由SEQ ID NO：11所示核苷酸序列(GenBank登录号NM 021642)编码)。

取决于是成熟的FcγRIIIA序列还是前体FcγRIIIA序列用作给该多态性位置编号的参考，FcγRIIIA 158V/F多态性在科学文献中称为158V/F多态性和176V/F多态性。对于本发明的目的，这两个术语可互换使用。编码人FcγRIIIA的全长序列示于SEQ ID NO：1，所翻译非氨基酸序列示于SEQ ID NO：2。参见GenBank登录号NM 000569。该编码序列包含3个可能的翻译起始密码子。当翻译起始于SEQ ID NO：1的核苷酸185时(即，第一起始密码子)，G/T取代导致在所翻译多肽的氨基酸残基212处发生V/F多态性(参见SEQ ID NO：4，由SEQ ID NO：3编码)。当翻译起始于SEQ ID NO：1的核苷酸293时(即，第二起始密码子)，G/T取代导致在所翻译多肽的氨基酸残基176处发生V/F多态性(参见SEQ ID NO：6，由SEQ ID NO：5编码)。当翻译起始于SEQ ID NO：1的核苷酸344时(即，第三起始密码子)，G/T取代导致在所翻译多肽的氨基酸残基159处发生V/F多态性(参见SEQ ID NO：8，由SEQ ID NO：7)。所有这些序列显示多态性在各自位置处的V残基。导致苯丙氨酸(F)残基取代缬氨酸(V)残基的G/T取代确切位置位于SEQ IDNOＬ1的核苷酸818、SEQ ID NO：3的核苷酸634、SEQ ID NO：5的核苷酸526和SEQ ID NO：7的核苷酸475处。对于本发明的目的，该第二翻译起始密码子用作起始位点，因此所翻译的多肽具有SEQ ID NO：5编码的SEQ ID NO：6所示序列。SEQ ID NO：5的526位G/T取代产生编码SEQ ID NO：10的人FcγRIIIA多肽的SEQ ID NO：9序列，SEQ ID NO：10显示该序列176位为苯丙氨酸残基。这对应于成熟的人FcγRIIIA序列158位的苯丙氨酸取代。成熟的人FcγRIIIA158位的多态性导致3种可能的基因型。具有两份158V等位基因拷贝的个体称为具有纯合的FcγRIIIA 158V/V基因型，而具有158F等位基因的两份拷贝的个体称为具有纯合的FcγRIIIA 158F/F基因型。具有158V和158F等位基因拷贝的个体称为具有杂合的FcγRIIIA 158V/F基因型。

取决于分别是成熟的FcγRIIIA序列还是前体FcγRIIIA序列用作给该多态性位置编号的参考，FcγRIIIA 48L/R/H三等位基因多态性在科学文献中称为FcγRIIIA48L/R/H多态性和FcγRIIIA 66L/R/H多态性。对于本发明的目的，这两个术语可互换使用。当翻译起始于SEQ ID NO：1的核苷酸185时(即，第一起始密码子)，T/G取代或T/A取代分别导致在所翻译多肽的氨基酸残基102处发生L/R或L/H多态性(参见SEQ ID NO：4，由SEQ ID NO：3编码)。当翻译起始于SEQ ID NO：1的核苷酸293时(即，第二起始密码子)，T/G取代或T/A取代分别导致在所翻译多肽的氨基酸残基66处发生L/R或L/H多态性(参见SEQ ID NO：6，由SEQ ID NO：5编码)。当翻译起始于SEQ ID NO：1的核苷酸344时(即，第三起始密码子)，T/G取代或T/A取代分别导致在所翻译多肽的氨基酸残基49处发生L/R或L/H多态性(参见SEQ ID NO：8，由SEQ ID NO：7)。所有这些序列显示的多态性在各自位置处的L残基。导致精氨酸(R)或组氨酸(H)残基取代亮氨酸(L)残基的T/G取代或T/A取代的确切位置位于SEQ ID NO：1的核苷酸489、SEQ ID NO：3的核苷酸305、SEQ ID NO：5的核苷酸197和SEQ ID NO：7的核苷酸146处。对于本发明的目的，第二翻译起始密码子用作起始位点，因此所翻译的多肽具有SEQ ID NO：5编码、SEQ ID NO：6所示序列。SEQ ID NO：5的197位的T/G取代或T/A取代导致在SEQ ID NO：6D的66位精氨酸(R)或组氨酸(H)取代了亮氨酸(L)。这对应于成熟的人FcγRIIIA序列48位的精氨酸(R)或组氨酸(H)取代亮氨酸(L)。成熟的人FcγRIIIA序列48位的三等位基因多态性可能导致本发明感兴趣的以下携带L的基因型。具有两份48L等位基因拷贝的个体称为具有纯合的FcγRIIIA 48L/L基因型。具有48L和48R等位基因拷贝的个体称为具有杂合的FcγRIIIA 48L/R基因型，而具有48L和48H等位基因拷贝的个体称为具有杂合的FcγRIIIA 48L/H基因型。

编码FcγRIIA的DNA的“常规”形式在SEQ ID NO：11的494位含有G(鸟嘌呤)；而“多态性”形式在该位置含有A(腺嘌呤)。A取代G导致在对应于成熟的人FcγRIIA序列131位的由SEQ ID NO：12的165位编码的氨基酸残基从精氨酸变为组氨酸。成熟的人FcγRIIA的131位的多态性导致以下3种基因型：纯合的FcγRIIA 131H/H、纯合的FcγRIIA 131R/R和杂合的FcγRIIA 131H/R。

与携带高亲和力FcγRIIIA 158V等位基因两份拷贝，和/或FcγRIIIA 48H或48R等位基因两份拷贝，和/或高亲和力FcγRIIA 131H等位基因两份拷贝的个体相比，携带低亲和力FcγRIIIA 158F等位基因一份或多份拷贝，和/或低亲和力FcγRIIIA 48L等位基因一份或多份拷贝，和/或低亲和力FcγRIIA 131R等位基因一份或多份拷贝的个体具有缺陷性FcγR介导的免疫应答。“FcγR-介导的免疫应答”指导致正进行治疗的个体免疫疾病的至少一种症状减轻或缓解的免疫应答，特别是ADCC所介导的免疫应答。“缺陷性”指通过可与FcγR相互作用介导细胞毒性作用的药物给予某个体时，该个体未能产生有效的FcγR-介导的免疫应答，从而使得给予的该药物未能引发阳性治疗反应。这种个体对通过IgG与活化的FcγR相互作用，特别是通过与FcγRIIIA或FcγRIIA相互作用而介导细胞毒性的抗癌症单克隆抗体产生耐药性。

本发明基于以下发现：即用白介素-2(IL-2)免疫治疗进行干预可将携带纯合的FcγRIIIA 158F/F基因型和/或杂合的FcγRIIA 131H/R或纯合的FcγRIIA 131R/R基因型的个体转变为起反应状态。“起反应状态”指通过可与FcγR相互作用而介导细胞毒性作用的药物给予某个体时，该个体能产生有效的FcγR-介导的免疫应答，从而使得给予该药物引发了阳性治疗反应。

不受理论的束缚，用IL-2免疫治疗进行干预能诱导携带FcγR的细胞，包括天然杀伤(NK)细胞、单核细胞/巨噬细胞和嗜中性白细胞的扩增和活化，从而提高治疗性药物，例如抗癌症抗体的ADCC介导的细胞毒性作用。作为结果，用IL-2或其生物学活性变体进行免疫治疗干预能在携带低亲和力IgG FcγRIIIA和/或FcγRIIA同种异型的个体中达到足以更有效驱动ADCC的临界阈值。

此外，仍不受理论的束缚，联用IL-2免疫治疗与治疗作用取决于通过和FcγR相互作用的ADCC介导的细胞毒性的抗癌症治疗药物，例如抗癌症抗体的总体反应看来依赖于3个关键性变量：肿瘤抗原的表达水平、给予IL-2后NK细胞扩增的量和FcγR基因型。因此，例如当用利妥昔单抗(Rituxan^；IDEC PharmaceuticalsCorp.，San Diego，California)对治疗癌症对象时，初始治疗反应将取决于待治疗肿瘤上CD20抗原的表达水平。某些NHL组织学，例如慢性淋巴细胞性白血病，浆细胞表达低水平的CD20抗原，因此不大可能对靶向CD20的肿瘤治疗药物，例如利妥昔单抗起反应。此外，反复使用利妥昔单抗可能产生肿瘤逃逸机制(escapemechanism)，而下调肿瘤的CD20表达。可预计IL-2扩增的NK细胞在肿瘤CD20抗原表达低下或无表达的个体中不能有效地恢复利妥昔单抗的治疗反应。试举另一例子，携带FcγRIIIA 158V等位基因的个体(即，FcγRIIIA 158V/V或158V/F基因型)应对单用利妥昔单抗有反应；当反应率低下时，可能与CD210低水平表达有关，而这是对先前反复使用利妥昔单抗起反应时反应不佳者细胞组织学(例如CLL和浆细胞)或肿瘤逃逸的结果。

仍不受理论的束缚，IL-2治疗后NK细胞数扩增(即，IL-2诱导的免疫重建)可能是确定在利妥昔单抗复发/难治对象中利妥昔单抗/IL-2联合治疗的总体反应的关键所在。NK细胞数低下导致无效的ADCC。给予IL-2后NK细胞扩增至理论临界阈值之上时可恢复/或驱动利妥昔单抗的使用率。

最后，再次不受理论的束缚，FcγR基因型在总体反应率中起着作用。FcγRIIIA158V等位基因(产物)能以最高亲和力与IgG1结合，因此可预计对利妥昔单抗IgG1抗体的总体临床应答率在FcγRIIIA 158V/V携带者中最高。然而，IL-2也能在具有FcγRIIIA 158V/V或158V/F表型但免疫系统由于化疗/放疗或衰老而受损或遭破坏的个体中恢复有效的FcR细胞介导的ADCC。FcγRIIIA 158多态性看来在确定对IgG1的亲和力中起着主要作用，并且与成熟的人FcγRIIIA48位的三等位L/R/H多态性操作有明显但不完全的联系。FcγRIIIA 158F等位基因(产物)显示对IgG1的亲和力较低，因此IL-2最可能有助于促进FcγRIIIA 158F/F携带者的ADCC。类似地，FcγRIIIA 48L结合IgG1的亲和力比48R或48H等位基因(产物)低，因此预计IL-2对FcγRIIIA 48L携带者，即FcγRIIIA 48L/L、FcγRIIIA 48L/R或FcγRIIIA 48L/H基因型个体可能提供最大益处。

“IL-2免疫治疗”指给予下文定义的至少一种治疗有效剂量的IL-2或其生物学活性变体。就治疗个体的免疫应答，特别是对癌症而言，IL-2或其变体的“治疗有效剂量或用量”指当给予IL-2或其变体时能产生阳性治疗反应的用量。IL-2或其变体的特别感兴趣的用量是能使携带纯合的FcγRIIIA 158F/F基因型和/或杂合的FcγRIIA 131H/R或纯合的FcγRIIA 131R/R基因型的个体转变为上述起反应状态。

当IL-2免疫治疗考虑给予多份治疗有效剂量时，IL-2或其变体可按每日一次给药方案给予或间歇给予。“间歇”给予IL-2或其变体指治疗有效剂量可以例如每隔一天、每隔两天、每隔三天等给予。在一些实施方案中，IL-2免疫治疗包括每周两次或每周三次给予治疗有效剂量的IL-2或其变体。“每周两次”指在7天时期内给予对象两份治疗有效剂量的IL-2或其变体，始于IL-2给药第一周的第一天，每次给药之间至少间隔72小时，最多间隔96小时。“每周三次”指在7天时期内给予对象三份治疗有效剂量的IL-2或其变体，每次给药之间至少间隔48小时，最多间隔72小时。对于本发明的目的，该类型的IL-2给药称为“间歇IL-2免疫治疗”。根据本发明的方法，对象可接受使用IL-2或其变体的间歇IL-2免疫治疗(即，每周两次或每周三次给予治疗有效剂量的IL-2或其变体)一周或数周的循环直至获得所需治疗反应。IL-2或其变体可通过下文所述可接受的给药途径给予。

因此，本发明提供一种用于预测需要IL-2免疫治疗的个体，特别是正在用第二种药物进行治疗的个体对这种治疗的治疗反应的诊断方法，所述第二种药物通过其与FcγR的相互作用介导细胞毒性作用。所述方法包括检测个体的FcγRIIIA基因和/或FcγRIIA基因的等位基因模式，从而确定个体的FcγR基因的基因型。存在纯合FcγRIIIA 158F/F基因型和/或存在FcγRIIA 131R等位基因的至少一份拷贝表明用IL-2免疫治疗干预将为该个体提供阳性治疗反应。“阳性治疗反应”指进行IL-2免疫治疗的个体显示出所治疗的免疫疾病的一种或多种症状有所改善。

因此，例如当个体患包括上文所述的癌症时，“阳性治疗反应”是与IL-2免疫治疗相关的该疾病有所改善，和/或与IL-2免疫治疗相关的该疾病一种或多种症状有所改善。IL-2免疫治疗可以是个体所接触的单线(sole line)治疗。或者，IL-2免疫治疗可与第二种治疗药物，特别是抗癌症药物同时给予，所述抗癌症药物通过其与FcγRIIIA和/或FcγRIIA相互作用可介导细胞毒性作用。因此，例如阳性治疗反应可赋予该疾病的以下一种或多种改善：(1)肿瘤体积减小；(2)癌细胞数量减少；(3)抑制肿瘤生长(即，其生长减缓至一定程度，最好生长停止)；(4)抑制癌细胞渗入外周器官(即，渗入减缓至一定程度，最好停止渗入)；(5)抑制肿瘤转移(即，转移减缓至一定程度，最好停止转移)；和(6)在一定程度上减轻癌症相关的一种或多种症状。这种治疗反应的特征还在于改善的程度。因此，例如改善的特征可以是完全反应。“完全反应”指开始研究时所有初始的异常或阳性部位经反复的物理检测、实验室、核与放射显影研究(即，CT(计算机化断层显像)和/或MRI(磁共振成像))和其它非侵入性方法证实所有可检测或可评价的所有疾病症状和迹象均消失。或者，疾病的改善可归类为部分反应。“部分反应”指与治疗前检测值相比，所有可检测病损的垂直直径的乘积和降低超过50％(就只有可检测反应的患者而言，部分反应不适用)。

在一个实施方案中，与IL-2免疫治疗联合给予的药物是抗癌症抗体，特别是能通过IgG1/FcγR介导的ADCC介导细胞毒性作用的单克隆抗体。这种单克隆抗体包括但不限于：Rituxan^(靶向致瘤性B细胞上的CD20抗原并能有效地治疗B-细胞淋巴瘤，包括非何杰金B细胞淋巴瘤和慢性淋巴细胞性白血病(CLL))；Therex(MUC1特异性人源化HMFG1，开发用于乳腺癌和其它MUC1-阳性肿瘤，包括卵巢癌和结肠癌)；MDX-010(对活化T细胞的人抗-CTLA-4负调节物；开发用于骨髓瘤、滤泡性淋巴瘤、结肠癌和前列腺癌)；EMD 72000和Erbitux(IMC-225)(人抗-EGFR，开发用于EGFR-阳性癌症，特别是结肠癌)；WX-G250(对MN抗原特异性；开发用于肾细胞瘤和宫颈癌)；IDM-1(用于治疗卵巢癌)；MDX-210(用于治疗乳腺癌和卵巢癌)；ZAMYL(用于治疗急性髓细胞性白血病(AML))和Campath(用于治疗CLL)。联合给予个体一份或多份治疗有效剂量的抗癌症单克隆抗体和一份或多份治疗有效剂量的IL-2或其生物学活性变体。

个体的等位基因模式可用本领域已知的任何检测方法检测，包括但不限于：用下文所述基于抗体和/或基于核酸的诊断方法检测个体的血细胞或DNA是否存在不同的FcγRIIIA和/或FcγRIIA等位基因变体。在一个实施方案中，通过测定得自个体的DNA样品中FcγRIIIA基因每份拷贝在SEQ ID NO：1所示FcγRIIIA编码区的526位是否含有T或G，和/或在个体的免疫细胞表面表达的FcγRIIIA多肽在成熟的人FcγRIIIA的158位(即，SEQ ID NO：2所示全长翻译产物的176位)是否含有相应的缬氨酸或苯丙氨酸残基来检测等位基因模式。在另一实施方案中，通过测定得自个体的DNA样品中FcγRIIA基因每份拷贝在SEQ ID NO：3所示FcγRIIA编码区的494位是否含有G或A，和/或在个体的免疫细胞表面表达的FcγRIIA多肽在成熟的人FcγRIIA的131位(即，SEQ ID NO：4所示全长翻译产物的165位)是否含有相应的组氨酸或精氨酸残基来检测等位基因模式。

检测FcγRIIIA和FcγRIIA基因的等位基因模式的方法是本领域熟知的。参见，例如已公开于以下文献中的基因分型(genotyping)方法：Koene等，(1997)，Blood，90：1109-1114(“用于检测FcγRIIIA基因型的嵌套式PCR等位基因特异性限制性分析试验”(nested PCR-based allele-specific restriction analysis assay fordetection of FcγRIIIA genotype))和Jiang等，(1996)，J.Immunol.Methods，199：55-59，(“用于检测FcγRIIA基因型的PCR等位基因特异性限制性酶消化”(PCR-based allele-specific restriction enzyme digestion for detection of FcγRIIAgenotype))；Morgan等，(2003)，Rheumatology，42：528-533，(“用于检测FcγRIIIA基因型的单链构型多态性试验”(single-stranded conformational polymorphismassay for detection of FcγRIIIA genotype))；Dall′Ozzo等，(2003)，J.Immunol.Methods，277：185-192(“在存在SYBR Green I荧光染料时用于检测FcγRIIIA基因型的实时多重等位基因特异性PCR和解链曲线分析”(real-timemultiplex allele-specific PCR and melting curve analysis in the presence of SYBRGreen I fluorescent dye for detection of FcγRIIIA genotype))；美国专利号5,830,652和5,985,561(“使用PCR等位基因特异性限制性分析试验和单链构型多态性检测FcγRIIA或FcγRIIIA表型”(detection of FcγRIIA or FcγRIIIAphenotype by flowcytometry，genotyping using PCR-based allele-specificrestriction analysis assay，and single-stranded conformational polymorphism))；deHaas等，(1996)，J.Immunology，156(8)：3948，(“检测FcγRIIIA 48L/R/H基因型”(detection of FcγRIIIA 48L/R/H genotype))；每篇文献全文纳入本文作为参考。

在本发明的一个实施方案中，某个体的FcγRIIA或FcγRIIIA基因型(即，等位基因模式)可通过以下方式测定：1)免疫检测存在于合适的免疫细胞表面的FcyRIIA或FcyRIIIA多肽的一种或多种等位形式(即，“表型特征”)；或2)利用核酸探针(用或不用核酸扩增或测序)进行编码一种或多种FcγRIIA或FcγRIIIA等位形式的DNA或RNA的分子检测(即，“基因型特征”)。

在第一种方法中，用本领域已知的方法，例如梯度离心和/或免疫吸附法分离待测试个体的白细胞或其亚组。然后将能区分FcγRIIA或FcγRIIIA的不同等位形式的抗体施加于分离的细胞来测定每种等位形式的存在或相对量。抗体可以是多克隆或单克隆抗体，优选单克隆抗体。可通过已知的方法检测与细胞结合的特异性抗体，包括但不限于：定量流式细胞术或酶联或荧光连接免疫试验。通过比较得自个体的值与从已知基因型个体人群建立的标准值来确定特定等位基因以及等位基因模式(即，纯合性与杂合性)存在与否。

在其它实施方案中，获得个体DNA样品并测定对应于特定FcγRIIA或FcγRIIIA等位基因的DNA序列的存在。可从任何细胞来源或体液获得DNA。临床实践可用的细胞来源的非限制性例子包括血细胞、口腔细胞、子宫颈阴道细胞、尿液的上皮细胞、胚胎细胞或活检获得组织中的任何细胞。体液包括血液、尿液、脑脊髓液和活检部位的组织渗出液。可用本领域许多标准方法之一从细胞来源或体液提取DNA。应理解，用于提取DNA的具体方法取决于来源的性质。在一些实施方案中，细胞来源或体液是PMBC或血清。

一旦提取后，DNA可用于本发明而无需进一步操作。或者，可通过PCR或本领域已知的其它扩增方法扩增对应于所有FcγRIIA或FcγRIIIA或其一部分的DNA区域。此时，所选择的用作引物的特定侧翼序列确定了被扩增的区域。此步扩增优点是增加了FcγRIIA或FcγRIIIA DNA序列的浓度。可扩增的DNA序列的长度为80bp-30kbp。所用引物优选明确含有能区分(differ between)各自受体不同等位形式的序列的较短区段。优选的检测方法是使用探针的等位基因特异性杂交，所用探针与感兴趣的多态性位点(即，FcγRIIA 131H或R等位基因；FcγRIIIA 158V或F等位基因；或FcγRIIIA 48L、R或H等位基因)重叠并具有约5、10、15、20、25或30个环绕该多态性区域的核苷酸。

可通过已知的方法测定FcγRIIA或FcγRIIIA等位基因特异性DNA序列的存在，包括而不限于：直接DNA测序、与等位基因特异性寡核苷酸杂交，和单链构型多态性(SSCP)分析。可通过化学测序，例如用Maxam-Gilbert法，或者通过酶解测序，例如用桑格法来直接测序。在后一种情况中，用标准方法合成特异性寡核苷酸用作双脱氧核苷酸测序反应的引物。

个体的DNA优选用特异性扩增引物经聚合酶链式反应(PCR)扩增，然后与等位基因特异性寡核苷酸杂交。或者，可用SSCP分析扩增的DNA区域来确定等位基因模式。最优选用等位基因特异性PCR，其中等位基因特异性寡核苷酸用作引物，扩增产物存在与否表明特定的等位基因存在与否。

在其它实施方案中，通过免疫吸附分离表达FcγRIIA或FcγRIIIA的细胞，用熟知的方法，例如硫氰酸胍-苯酚-氯仿提取(Chomocyznski等，(1987)，Anal.Biochem.，162：156)分离免疫纯化细胞的RNA。然后用等位基因特异性寡核苷酸引物通过聚合酶链式反应(RT-PCR)偶联地逆转录和扩增分离的RNA。选择能保证特异性逆转录和扩增的引物退火条件；因此，看见扩增产物即可诊断存在所用特定引物相应的等位基因。在另一个实施方案中，以等位基因不依赖的方式逆转录并扩增编码FcγRIIA或FcγRIIIA的RNA，然后通过与等位基因特异性寡核苷酸杂交或直接DNA测序鉴定扩增的编码FcγRIIA或FcγRIIIA的cDNA。对于FcγRIIA基因的特异性引物，可参见，例如以上引用的参考文献中用于检测特定FcγRIIA或FcγRIIIA等位基因存在与否的PCR方法。

在一个实施方案中，对象的基因型如2004年4月7日提交的共有的美国专利系列号60/560,649“鉴定Fc受体多态性的核酸试验”(Nucleic Acid BasedAssays ForIdentification Of Fc Receptor Polymorphisms)所述测定，该专利全文纳入本文作为参考。

需要治疗免疫疾病并鉴定为携带FcγRIIIA 158F/F基因型、FcγRIIIA 48L/L基因型、FcγRIIIA 48L/R基因型或FcγRIIIA 48L/H基因型；和/或FcγRIIA 131H/R或FcγRIIA 131R/R基因型的个体是适用上文所述IL-2免疫治疗干预的候选者。因此，本发明也提供提高携带FcγRIIIA 158F/F基因型和/或FcγRIIIA 48L/L基因型、FcγRIIIA 48L/R基因型或FcγRIIIA 48L/H基因型和/或FcγRIIA 131H/R或FcγRIIA 131R/R基因型的个体的免疫功能和治疗这些个体的免疫疾病的方法。这些方法包括给予这些个体IL-2免疫治疗。如上所述，IL-2免疫治疗可以是单线治疗(sole line of treatment)；或者该个体可用另一种药物，特别是能通过与FcγRIIIA或FcγEIIA相互作用进而激发ADCC途径来介导其治疗作用的药物治疗。在一个实施方案中，所述个体患免疫疾病，特别是癌症，可单独给予IL-2免疫治疗或与抗癌症单克隆抗体联合给予。可用本发明方法治疗的癌症的例子包括但不限于下文列出的：B-细胞淋巴瘤、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、前列腺癌、结肠癌、黑色素瘤、肾细胞癌、急性髓性白血病(AML)和慢性淋巴细胞性白血病(CLL)。如上所述，联合给予所述个体一种或多种治疗有效剂量的抗癌症单克隆抗体和一种或多种治疗有效剂量的IL-2或其生物学活性变体。

联用IL-2免疫治疗和抗癌症单克隆抗体治疗提供了抗肿瘤活性。“抗肿瘤活性”指降低细胞增殖速率从而降低已存在肿瘤或在治疗过程中产生的肿瘤的生长速率；和/或破坏已存在的致瘤性(肿瘤)细胞或治疗过程中新形成的致瘤性细胞从而降低肿瘤的总体积。就治疗特定的感兴趣癌症而言，经本发明方法用IL-2免疫治疗联合至少一种抗癌症单克隆抗体治疗的对象经产生有益的生理反应。

包括癌症治疗方案所用的治疗药物或多种治疗药物和IL-2或其变体的不同药物组合物可用任何本领域已知的医学上可接受的方法以相同或不同的给药途径给予。合适的给药途径包括胃肠外给药，例如皮下(SC)、肌肉内(IM)、静脉内(IV)或输液，口服和肺部、鼻、局部、经皮给药和栓剂。当IL-2或其变体经肺部递送给药时，应调整治疗有效剂量使得血流中的IL-2或其变体的可溶水平等于胃肠外给药，例如SC、IM或IV时的治疗有效剂量所获得的水平。

含有IL-2或其变体的药物组合物优选通过任何注射形式，包括静脉内(IV)、肌肉内(IM)或皮下(SC)注射给予。在本发明的一些实施方案中，含有IL-2或其变体的药物组合物经IM或SC注射给药，特别是通过IM或SC局部注射的癌症治疗方案所用的治疗药物或多种药物给予的区域。当IL-2免疫治疗与另一种药物，特别是抗癌症单克隆抗体或其抗原结合片段共同给予时，含有它们的药物组合物可通过，例如静脉内给予。当含有抗癌症单克隆抗体或其抗原结合片段的药物组合物通过静脉内给予时，该药物组合物可通过输液在约0.5-5小时期间给予。在一些实施方案中，输液可视所给予的抗癌症单克隆抗体和其用量在约0.5-2.5小时期间、约0.5-2.0小时期间、约0.5-1.5小时期间、约1.5小时期间进行。

在IL-2免疫治疗期间影响待给予的IL-2或其变体各自用量的因素包括但不限于：给药方式、给药频率(即，每日给药或间歇给药，例如每周两次或三次)、所治疗的具体疾病、疾病的严重性、病史、该个体是否同时进行另一种治疗药物，例如抗癌症单克隆抗体的治疗、所治疗个体的年龄、身高、体重、健康和身体状况。随所治疗对象的体重增加一般宜提高该药物的剂量。

在本发明的一个实施方案中，携带FcγRIIIA 158F/F基因型和/或FcγRIIA131H/R或FcγRIIA 131R/R基因型的个体进行IL-2免疫治疗联合抗-CD20抗体治疗来治疗B-细胞淋巴瘤，特别是非何杰金B-细胞淋巴瘤。本发明的治疗方法涉及任何非何杰金B-细胞淋巴瘤的治疗方法，所述淋巴瘤的异常类型的B-细胞能表达CD20表面抗原。“CD20表面抗原”指33-37kD的膜内在磷蛋白，其在前B-细胞发育早期表达并持续存在于成熟的B-细胞但在浆细胞阶段丧失。虽然CD20也表达于正常B细胞，但该表面抗原通常以非常高的水平表达在致瘤性B细胞上。超过90％的B-细胞淋巴瘤和慢性淋巴细胞性白血病和约50％的前B-细胞急性成淋巴细胞性白血病(细胞)表达该表面抗原。

认为用IL-2免疫治疗和抗-CD20抗体的共同治疗可用于治疗不衰退(unabated)的增殖细胞表达CD20表面抗原的任何类型癌症。因此，例如治疗与异常T-细胞增殖相关的癌症并且异常T-细胞种群表达CD20表面抗原时，本发明的共同治疗方法可提供阳性治疗反应。已鉴定到表达CD20的人T-细胞群，虽然其表达量比B-细胞少(参见Hultin等，(1993)，Cytometry，14：196-204)。

也认为本发明的方法可用于治疗性处理根据修订的欧美淋巴瘤分类(REAL)系统分类的B-细胞淋巴瘤。这种B-细胞淋巴瘤包括但不限于分类为前体B细胞瘤的淋巴瘤，例如B-成淋巴细胞性白血病/淋巴瘤；外周B-细胞瘤，包括B-细胞慢性淋巴细胞性白血病/小淋巴细胞性淋巴瘤、淋巴浆细胞样(lymphoplasmacytoid)淋巴瘤/免疫细胞瘤(immunocytoma)、外套细胞淋巴瘤(MCL)、滤泡中心淋巴瘤(滤泡性)(包括弥散性小细胞、弥散性混合小细胞和大细胞，和弥散性大细胞淋巴瘤)、边缘层(marginal zone)B-细胞淋巴瘤(包括淋巴结外、淋巴结的和脾类型的)、毛细胞性白血病、浆细胞瘤/骨髓瘤、原发性纵隔(胸腺的)亚型的弥散性大细胞B-细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤和伯基特样高度B-细胞淋巴瘤；和未分类的低度或高度B-细胞淋巴瘤。

“非何杰金B-细胞淋巴瘤”指与异常的不受控的B-细胞增殖有关的任何非何杰金淋巴瘤。对于本发明的目的，根据《工作制剂》(Working Formulation)分类方案(参见“非何杰金淋巴瘤病理分类项目”(The Non-Hodgkin′s LymphomaPathologic Classification Project)，Cancer，49(1982)：2112-2135)将那些B-细胞性淋巴瘤分类为低度、中度和高度。低度B-细胞淋巴瘤包括小淋巴细胞性、滤泡小粘着(cleaved)细胞和滤泡混合的小粘着细胞淋巴瘤；中度淋巴瘤包括滤泡大细胞、弥散性小粘着细胞、弥散性混合小和大细胞、和弥散性大细胞淋巴瘤；高度淋巴瘤包括伯基特和非伯基特型大细胞免疫母细胞性、成淋巴细胞和小非粘着细胞性淋巴瘤。

尽管本发明的方法涉及治疗已存在的淋巴瘤或实体瘤，但应知道这些方法可用于预防治疗期间发生的肿瘤进一步生长。本发明的方法特别可用于治疗患有低度B-细胞淋巴瘤的对象，特别是经标准化疗后复发的对象。低度B-细胞淋巴瘤比中度和高度B-细胞淋巴瘤更顽固，其特征为复发/消退病程。因此，由于可降低复发时(瘤细胞)的数量和严重性，本发明方法改善了对这些淋巴瘤的治疗。

本领域已知IL-2免疫治疗和抗癌症单克隆抗体组合的具体治疗方案。这种方案可用于治疗经鉴定携带FcγRIIIA 158F/F基因型；和/或FcγRIIIA 48L/L、或FcγRIIIA 48L/R、或FcγRIIIA 48L/H基因型；和/或FcγRIIA 131H/R或FcγRIIA131R/R基因型的个体。参见，例如公开的全文纳入本文作为参考的以下文献的治疗方案：待批美国专利公布号2003-0185796(B-细胞淋巴瘤)和2003年7月31日提交、代理人审理号59516-278的名为“治疗慢性淋巴细胞性白血病的方法”的待批美国专利申请号60/491,371。所给予的IL-2(保留IL-2生物活性的天然序列或其变体，例如本文公开的突变蛋白)用量为约0.1-15mIU/M²。就适应症，例如肾细胞癌和转移性黑色素瘤而言，IL-2或其生物学活性变体可以高剂量静脉内药团方式以约300,000-800,000IU/kg/8小时给予。参见上述美国专利申请推荐的B-细胞淋巴瘤和CLL的IL-2免疫治疗剂量。

当具有FcγRIIIA 158F/F基因型；和/或FcγRIIIA 48L/L或FcγRIIIA 48L/R或FcγRIIIA 48L/H基因型；和/或FcγRIIA 131H/R或FcγRIIA 131R/R基因型的个体进行IL-2免疫治疗和抗癌症单克隆抗体治疗时，这些治疗药物以共同治疗方式给予个体。“共同治疗”指将IL-2和至少一种抗癌抗体给予病人，从而在所治疗的对象中产生两种物质相联合的治疗作用。根据具体的给药方案，通过给予至少一种治疗有效剂量的含有IL-2或其变体的药物组合物和至少一种治疗有效剂量的含有至少一种抗癌症抗体或其抗原结合片段的药物组合物可实现共同治疗。分开的药物组合物可同时(即，同时发生)或在不同时间(即，在同一天或不同天以任一顺序依次地)给予，只要能在所治疗的对象中产生两种物质相联合的治疗作用。

含有这些治疗性药物作为治疗活性组分的不同药物组合物可用本领域已知的任何可接受方法给予。因此，例如含有IL-2或其变体的药物组合物可以任何注射形式，包括静脉内(IV)、肌肉内(IM)或皮下(SC)注射剂形式给予。在本发明的一些实施方案中，含有IL-2或其变体的药物组合物通过SC注射给予。在本发明的其它实施方案中，含有IL-2或其变体的药物组合物是缓释剂型或可用缓释装置给药的制剂。这种装置为本领域所熟知，包括，例如透皮贴片和采用含IL-2或其变体的非缓释药物组合物的微型可植入泵，所述泵可以连续、稳态方式提供不同剂量的药物递送而实现缓释作用。含有抗癌症抗体或其抗原结合片段的药物组合物可通过，例如静脉内给予。当含有抗癌症抗体的药物组合物经静脉内给予时，可通过输液在约1-10小时期间给予。在一些实施方案中，抗体的输液视所给予的抗癌症抗体在约2-8小时期间、约3-7小时期间、约4-6小时期间或在约6小时期间进行。

当按上述给药方案治疗的对象出现部分反应，或在长时间消退期后复发时，随后期间可能需要共同治疗以实现该疾病的完全消退。因此，第一治疗时期结束后，对象可接受一个或多个包括IL免疫治疗联合抗癌症抗体给药的额外治疗时期。本文将这种在治疗期间的终止时期称为中断时期。认为该中断时期的长度取决于用这两种治疗药物进行共同治疗之前的治疗时期肿瘤的反应程度(即，完全还是部分反应)。

本文使用的术语“IL-2”指正常外周血淋巴细胞产生的，以低浓度存在于血液中的淋巴因子。IL-2首先由Morgan等，(1976)，Science，193：1007-1008描述，由于它能诱导激活的T淋巴细胞增殖而最初称为T细胞生长因子。这是一种报道分子量为13,000-17,000的蛋白质(Gillis和Watson，(1980)，J.Exp.Med.，159：1709)，其等电点为6-8.5。

本文所述用于本发明方法的药物组合物中存在的IL-2可以是天然的或通过重组技术获得，可得自任何来源，包括哺乳动物来源，例如小鼠、大鼠、家兔、灵长类、猪和人。许多种类的IL-2序列为本领域所熟知。参见，例如但不限于：人IL-2(智人(Homo sapiens)；前体序列，GenBank登录号AAH66254；GenBank登录号AAH66254序列和本文SEQ ID NO：14所示残基21-153所代表的成熟序列)；恒河猴IL-2(猕猴(Macaca mulatto)；前体序列，GenBank登录号P51498；GenBank登录号P51498所示序列的残基21-154所代表的成熟序列)；橄榄狒狒(olive baboon)IL-2(狒狒(Papio anubis)；前体序列，GenBank登录号Q865Y1；GenBank登录号Q865Y1所示序列的残基21-154所代表的成熟序列)；乌黑白眉猴(sooty mangabey)IL-2(白睑猴(Cercocebus torquatus atys)；前体序列，GenBank登录号P46649；GenBank登录号P46649所示序列的残基21-154代表的成熟序列)；食蟹猴(crab-eating macaque)IL-2(食蟹猴(Macaca fascicularis)；前体序列，GenBank登录号Q29615；GenBank登录号Q29615所示序列的残基21-154代表的成熟序列)；普通长臂猿(common gibbon)IL-2(白掌长臂猿(Hylobates lar)；前体序列，GenBank登录号ICGI2；GenBank登录号ICGI2所示序列的残基21-153代表的成熟序列)；普通松鼠猴(common squirrelmonkey)IL-2(松鼠猴(Saimiri sciures)；前体序列，GenBank登录号Q8MKH2；GenBank登录号Q8MKH2所示序列的残基21-154代表的成熟序列)；母牛IL-2((Bos taurus)；前体序列，GenBank登录号P05016；GenBank登录号P05016所示序列的残基21-155代表的成熟序列；也参见以GenBank登录号NP-851340报道的变体前体序列；GenBank登录号NP-851340所示序列的残基24-158代表的成熟序列)；水牛(water buffalo)IL-2(亚洲水牛(Bubalus bubalis)；前体序列，GenBankQ95KP3；GenBank Q95KP3所示序列的残基21-155代表的成熟序列)；马IL-2(家马(Equus caballus)；前体序列，GenBank登录号P37997；GenBank登录号P37997所示序列的残基21-149代表的成熟序列)；山羊IL-2(家山羊(Capra hircus)；前体序列，GenBank登录号P36835；GenBank登录号P36835所示序列的残基21-155代表的成熟序列)；绵羊IL-2(绵羊(Ovis aries)；前体序列，GenBank登录号P19114；GenBank登录号P19114所示序列的残基21-155代表的成熟序列)；猪IL-2(野猪(Sus scrofa)；前体序列，GenBank登录号P26891；GenBank登录号P26891的残基21-154代表的成熟序列)；马鹿IL-2(马鹿(Cervuselaphus)；前体序列，GenBank登录号P51747；GenBank登录号P51747所示序列的残基21-162代表的成熟序列)；犬IL-2(家犬(Canis familiaris)；前体序列，GenBank登录号Q29416；GenBank登录号Q29416所示序列的残基21-155代表的成熟序列)；猫IL-2(家猫(Felis catus)；前体序列，GenBank登录号Q07885；GenBank登录号Q07885所示序列的残基21-154代表的成熟序列)；家兔IL-2(家兔(Oryctolagus cuniculus)；前体序列，GenBank登录号077620；GenBank登录号077620所示序列的残基21-153代表的成熟序列)；逆戟鲸IL-2(逆戟鲸(Orcinus orca)；前体序列，GenBank登录号097513；GenBank登录号097513所示序列的残基21-152代表的成熟序列)；北方象海豹(northern elephant seal)IL-2(北方象海豹(Mirounga angustirostris)；前体序列，GenBank登录号062641；GenBank登录号062641所示序列的残基21-154代表的成熟序列)；家鼠IL-2(小家鼠(Mus musculus)；前体序列，GenBank登录号Np_032392；GenBank登录号NP_032392所示序列的残基21-169代表的成熟序列)；西方野生小鼠(westernwild mouse)IL-2(琉球小鼠(Mus spretus)；前体序列，GenBank登录号Q08867；GenBank登录号Q08867所示序列的残基21-166代表的成熟序列)；挪威大鼠IL-2(褐家鼠(Rattus norvegicus)；前体序列，GenBank登录号P17108；GenBank登录号P17108的残基21-155代表的成熟序列)；蒙古沙鼠IL-2(野生长爪沙鼠(Meriones unguiculatus)；前体序列，GenBank登录号Q08081；GenBank登录号Q08081的残基21-155代表的成熟序列)；这些前述GenBank登录号所公开的任何变体IL-2多肽；每篇GenBank报道全文纳入本文作为参考。虽然可采用任何IL-2来源来实施本发明，但IL-2优选得自人来源，特别是当所治疗的对象是人时。在一些实施方案中，用于本发明方法的IL-2重组产生，例如重组的人IL-2蛋白，包括但不限于得自微生物宿主的。

用于本发明方法的药物组合物可含有IL-2的生物学活性变体，包括得自任何动物种类的IL-2变体。这种变体应保留天然多肽的所需生物活性，从而使得当将含有该变体多肽的药物组合物给予对象时具有与含有天然多肽的药物组合物相同的治疗作用。即，该变体多肽可以类似于采用天然多肽所观察到的方式在药物组合物中用作治疗活性组分。本领域已有能测定变体多肽是否保留所需生物活性进而可用作该药物组合物中的治疗活性组分的方法。可采用专门为检测天然多肽或蛋白质的活性而设计的试验，包括本文所述的试验来检测生物学活性。此外，可测试针对生物学活性天然多肽而产生的抗体结合变体多肽的能力，当有效结合时表明该多肽具有类似于天然多肽的构型。

天然的或天然产生的IL-2的合适生物学活性变体可以是该多肽的片段、类似物和衍生物。“片段”指仅由完整多肽序列和结构的一部分构成的多肽，其可以缺失天然多肽的C-末端或N-末端。“类似物”指天然多肽或天然多肽片段的类似物，其中所述类似物包含具有一个或多个氨基酸取代、插入或缺失的天然多肽序列和结构。“突变蛋白”，例如本文所述的那些和具有一种或多种拟肽(肽模拟物)的肽也包括在该术语类似物范围内(参见国际公布号WO91/04282)。也参见2004年7月7日提交的名为“组合的白介素-2突变蛋白”的美国专利系列号60/585,980以及2004年3月5日提交的名为“改进的白介素-2突变蛋白”，两份申请均全文纳入本文作为参考。

只要保留了天然多肽的所需生物活性，“衍生物”指感兴趣天然多肽的任何合适的修饰物，天然多肽的片段或它们各自的类似物，例如糖蛋白、磷蛋白、聚合物偶联物(如与聚乙二醇偶联)或加入其它外来成分。制备多肽片段、类似物和衍生物的方法是本领域通常可用的。

例如，可通过在编码感兴趣天然多肽的克隆DNA序列中产生突变来制备多肽的氨基酸序列变体。诱变和改变核苷酸序列的方法是本领域所熟知。参见，例如纳入本文作为参考的以下文献：Walker和Gaastra编，(1983)，《分子生物学技术》(Techniques in Molecular Biology)，(MacMillan Publishing Company，New York)；Kunkel，(1985)，Proc.Natl.Acad.Sci.，USA 82：488-492；Kunkel等，(1987)，Methods Enzymol.，154：367-382；Sambrook等，(1989)，《分子克隆：实验室手册》(Molecular Cloning：A Laboratory Manual)，(冷泉港实验室出版社，Plainview，New York)；美国专利号4,873,192；和本文引用的参考文献。不影响感兴趣多肽的生物学活性的合适氨基酸取代的指南可见引作参考的Dayhoff等，(1978)，在《蛋白质序列和结构图》(Atlas of Protein Sequence andStructure)(Natl.Biomed.Res.Found.，Washington，D.C.)中所述的模型。优选保守性取代，例如用具有相似性能的另一种氨基酸替换一种氨基酸。保守性取代的例子包括但不限于：GlyAla、ValIleLeu、AspGlu、LysArg、AsnGln和PheTrpTyr。

可在专业文献中找到残基取代、缺失或插入来改变IL-2蛋白质诸区域的指南。参见，例如其内容全文纳入本文作为参考的以下文献所述的结构/功能关系和/或结合研究：Bazan，(1992)，Science，257：410-412；McKay，(1992)，Science，257：412；Theze等，(1996)，Immunol.Today，17：481-486；Buchli和Ciardelli，(1993)，Arch.Biochem.Biophys.，307：411-415；Collins等，(1988)，Proc.Natl.Acad.Sci.，USA 85：7709-7713；Kuziel等，(1993)，J.Immunol.，150：5731；Eckenberg等，(1997)，Cytokine，9：488-498。

在构建感兴趣IL-2多肽的变体的过程中，进行的修饰应使变体继续具有所需活性。显然，在编码变体多肽的DNA中产生的任何突变不能将该序列置于读框外，并且优选不会产生可能产生二级mRNA结构的互补区域。参见，欧洲专利申请号75,444。

IL-2的生物学活性变体一般与用作比较基础的参比IL-2多肽分子，例如天然的人IL-2具有至少约70％、优选至少约80％、更优选至少约90％-95％或更高、最优选至少约98％、99％或更高的氨基酸序列相同性。序列相同性百分比可用Smith-Waterman同源性检索算法，以相关空格(affine gap)检索测定，所用参数为空格开放罚分12、空格延伸罚分2和BLOSUM矩阵62。Smith-Waterman同源性检索算法的说明见Smith和Waterman，(1981)，Adv.Appl.Math.2：482-489。例如，变体可有少至1-15个氨基酸残基、少至1-10个氨基酸残基，如6-10，少至5个、少至4个、3个、2个、甚至1个氨基酸残基的不同。

就两条氨基酸序列的最佳比对而言，与参比氨基酸序列相比，变体氨基酸序列的毗连区段可具有加入的氨基酸残基或删除的氨基酸残基。用于和参比氨基酸序列比较的毗连区段包含至少20个毗连氨基酸残基，可以是30、40、50或更多个氨基酸残基。可对保守残基取代或空格相关序列的相同性进行校正(参见Smith-Waterman同源性检索算法)。

感兴趣的天然IL-2多肽的生物学活性变体与天然多肽相比有少至1-15个氨基酸残基、少至1-10个氨基酸残基，如6-10，少至5个、少至4个、3个、2个、甚至1个氨基酸残基的不同。

具有IL-2活性的多肽的精确化学结构取决于许多因素。由于分子中存在可电离的氨基和羧基，获得的特定多肽可以是酸性盐或碱性盐，或中性盐形式。在合适的环境中可保留它们的生物活性的所有这种制剂包括在本文所用具有IL-2活性的多肽的定义中。此外，可通过利用糖组分衍生(糖基化)或其它补充分子，例如脂质、磷酸、乙酰基团等增加该多肽的一级氨基酸序列。也可通过和糖偶联来增加该多肽的一级氨基酸序列。这种增加的某些方面可通过生产宿主的翻译后加工系统来实现；可在体外引入其它这种修饰。在任何情况中，只要多肽的IL-2活性未遭破坏，这种修饰就包括在本文所用的IL-2多肽的定义中。在各种试验中，期望这种修饰可通过提高或降低该多肽的活性来定量或定性地影响其活性。此外，可通过氧化、还原或其它衍生方式来修饰链中的单个氨基酸残基，可切割该多肽而得到保留活性的片段。这种不破坏活性的改变不将这种多肽序列排除在本文所用感兴趣的IL-2多肽的定义之外。

本领域为多肽变体的制备和使用提供了基本指南。在制备IL-2变体过程中，本领域的技术人员不难确定对天然蛋白质的核苷酸或氨基酸序列的哪种修饰将导致产生适合用作本发明方法药物组合物中治疗活性组分的变体。

用于本发明方法中的IL-2或其变体可以是任何来源，但优选重组产生。“重组IL-2”或“重组IL-2变体”指具有与天然序列IL-2相当生物学活性和通过例如Taniguchi等，(1983)，Nature，302：305-310和Devos，(1983)，Nucleic AcidsResearch，11：4307-4323所述重组DNA技术制备的白介素-2或其变体；或者如Wang等，(1984)，Science，224：1431-1433所述经突变而改变的IL-2。大体上，克隆编码IL-2的基因，然后在本文所述转化的生物，优选微生物、最优选大肠杆菌(E.coli)中表达。宿主生物能在表达条件下表达外来基因而产生IL-2。合成的重组IL-2也可以在真核生物，例如酵母或人细胞中制备。生长、收集、破裂(disrupt)或自细胞者中提取IL-2的方法的基本描述见，例如全文纳入本文作为参考的美国专利号4,604,377；4,738,927；4,656,132；4,569,790；4,748,234；4,530,787；4,572,798；4,748,234。

例如变体IL-2蛋白质，参见欧洲专利(EP)公布号EP 136,489(公开了天然存在的IL-2的氨基酸序列中的一种或多种以下改变：Asn26-Gln26；Trp121-Phe121；Cys58-Ser58或Ala58；Cys105-Ser105或Ala105；Cys125-Ser125或Ala125；删除Arg 120之后的所有残基；和它们的Met-1形式)；1983年10月13日提交的欧洲专利申请号83306221.9所述的重组IL-2突变蛋白(1984年5月30日以公布号EP 109,748公布)，该专利是比利时专利号893,016和共有的美国专利4,518,584的等同专利(这两份专利公开了重组的人IL-2突变蛋白，其中天然人IL-2编号的125位半胱氨酸被删除或被中性氨基酸所取代；丙氨酰-ser125-IL-2；和脱-丙氨酰-ser125-IL-2)。也参见美国专利号4,752,585(该专利公开了以下变体IL-2蛋白：ala104 ser125 IL-2、ala104 IL-2、ala104 ala125 IL-2、val104 ser125IL-2、val104 IL-2、val104 ala125 IL-2、脱-ala1 ala104 ser125 IL-2、脱-ala1 ala104IL-2、脱-ala1 ala104 ala125 IL-2、脱-ala1 val104 ser125 IL-2、脱-ala1 val104 IL-2、脱-ala1 val104 ala125 IL-2、脱-ala1脱-pro2 ala104 ser0125 IL-2、脱-ala1脱-pro2ala104 IL-2、脱-ala1脱-pro2 ala104 ala125 IL-2、脱-ala1脱-pro2 val104 ser125IL-2、脱-ala1脱-pro2 val104 IL-2、脱-ala1脱-pro2 val104 ala125 IL-2、脱-ala1脱-pro2脱-thr3 ala104 ser125 IL-2、脱-ala1脱-pro2脱-thr3 ala104 IL-2、脱-ala1脱-pro2脱-thr3 ala104 ala125 IL-2、脱-ala1脱-pro2脱-thr3 val104 ser125 IL-2、脱-ala1脱-pro2脱-thr3 val104 IL-2、脱-ala1脱-pro2脱-thr3 val104 ala125IL-2、脱-ala1脱-pro2脱-thr3脱-ser4 ala104 ser125 IL-2、脱-ala1脱-pro2脱-thr3脱-ser4 ala104 IL-2、脱-ala1脱-pro2脱-thr3脱-ser4 ala104 ala125 IL-2、脱-ala1脱-pro2脱-thr3脱-ser4 val104 ser125 IL-2、脱-ala1脱-pro2脱-thr3脱-ser4 val104 IL-2、脱-ala1脱-pro2脱-thr3脱-ser4 val104 ala125 IL-2、脱-ala1脱-pro2脱-thr3脱-ser4脱-ser5 ala104 ser125 IL-2、脱-ala1脱-pro2脱-thr3脱-ser4脱-ser5 ala104 IL-2、脱-ala1脱-pro2脱-thr3脱-ser4脱-ser5 ala104ala125 IL-2、脱-ala1脱-pro2脱-thr3脱-ser4脱-ser5 val104 ser125 IL-2、脱-ala1脱-pro2脱-thr3脱-ser4脱-ser5 val104 IL-2、脱-ala1脱-pro2脱-thr3脱-ser4脱-ser5 val104 ala125 IL-2、脱-ala1脱-pro2脱-thr3脱-ser4脱-ser5脱-ser6ala104 ala125 IL-2、脱-ala1脱-pro2脱-thr3脱-ser4脱-ser5脱-ser6 ala104IL-2、脱-ala1脱-pro2脱-thr3脱-ser4脱-ser5脱-ser6 ala104 ser125 IL-2、脱-ala1脱-pro2脱-thr3脱-ser4脱-ser5脱-ser6 val104 ser125 IL-2、脱-ala1脱-pro2脱-thr3脱-ser4脱-ser5脱-ser6 val104 IL-2和脱-ala1脱-pro2脱-thr3脱-ser4脱-ser5脱-ser6 val104 ala125 IL-2)和美国专利号4,931、543(该专利公开了用于本文实施例的IL-2突变蛋白脱-丙氨酰-1，丝氨酸-125人IL-2以及其它IL-2突变蛋白)。

也参见欧洲专利公布号EP 200,280(1986年12月10日公布)，该专利公开了重组IL-2突变蛋白，其中104位的甲硫氨酸被保守性氨基酸取代。例子包括以下突变蛋白：ser4脱-ser5 ala104 IL-2；脱-ala1脱-pro2脱-thr3脱-ser4脱-ser5 ala104 ala125 IL-2；脱-ala1脱-pro2脱-thr3脱-ser4脱-ser5 glu104 ser125IL-2；脱-ala1脱-pro2脱-thr3脱-ser4脱-ser5 glu104 IL-2；脱-ala1脱-pro2脱-thr3脱-ser4脱-ser5 glu104 ala125 IL-2；脱-ala1脱-pro2脱-thr3脱-ser4脱-ser5脱-ser6 ala104 ala125IL-2；脱-ala1脱-pro2脱-thr3脱-ser4脱-ser5脱-ser6 ala104 IL-2；脱-ala1脱-pro2脱-thr3脱-ser4脱-ser5脱-ser6 ala104ser125 IL-2；脱-ala1脱-pro2脱-thr3脱-ser4脱-ser5脱-ser6 glu104 ser125IL-2；脱-ala1脱-pro2脱-thr3脱-ser4脱-ser5脱-ser6 glu104 IL-2和脱-ala1脱-pro2脱-thr3脱-ser4脱-ser5脱-ser6 glu104 ala125 IL-2。也参见欧洲专利申请号EP 118,617和美国专利号5,700,913，该两份专利公开了以丙氨酸取代天然IL-2的甲硫氨酸作为N-末端氨基酸的未糖基化人IL-2变体；删除了起始甲硫氨酸从而使脯氨酸是N-末端氨基酸的未糖基化人IL-2；和在N-末端甲硫氨酸和脯氨酸之间插入丙氨酸的未糖基化人IL-2。

其它IL-2突变蛋白包括公开于WO 99/60128的(用组氨酸或异亮氨酸取代20位的天冬氨酸，用精氨酸、甘氨酸或异亮氨酸取代88位的天冬酰胺，或者用亮氨酸或谷氨酸取代126位的谷氨酰胺)，据报道这些突变蛋白对T细胞受体表达细胞所表达的高亲和力IL-2受体具有优于NK细胞所表达受体的选择活性并且IL-2毒性降低；美国专利号5,229,109所公开的突变蛋白(用丙氨酸取代38位的精氨酸，或者用赖氨酸取代42位的苯丙氨酸)，与天然IL-2相比这些突变蛋白显示与高亲和力IL-2受体结合(能力)降低但仍能激活LAK细胞；国际公布号WO 00/58456所公开的突变蛋白(改变或删除天然IL-2中天然存在的(x)D(y)序列，其中D是天冬氨酸，(x)是亮氨酸、异亮氨酸、甘氨酸或缬氨酸，(y)是缬氨酸、亮氨酸或丝氨酸)，这些突变蛋白据称能缓解血管渗漏综合征；公开于国际公布号WO 00/04048中的IL-2p1-30肽(对应于IL-2的前30个氨基酸，该肽含有IL-2的整个a-螺旋A并能与IL-2受体的b链相互作用)，据报道该肽能激活NK细胞并诱导LAK细胞；和公开于WO 00/04048的IL-2p1-30肽的突变形式(用赖氨酸取代20位的天冬氨酸)，据报道该突变形式不导致血管出血(bleeds)当仍能产生LAK细胞。此外，可用聚乙二醇修饰IL-2来提高其溶解性并改变药代动力学状况(参见美国专利号4,766,106)。

具有预计的毒性降低的IL-2突变蛋白的其它例子公开于2004年3月5日提交的名为“改进的IL-2突变蛋白”的待批申请和转让的美国临时申请系列号60/550,868中，此申请全文纳入本文作为参考。这些突变蛋白包含在125位用丝氨酸取代半胱氨酸的成熟的人IL-2(SEQ ID NO：14)的氨基酸序列，并且在该成熟的人IL-2序列中具有至少一处额外的氨基酸取代从而使该突变蛋白具有以下功能特征：在可比试验条件下与类似量的脱-丙氨酰-1，C125S人IL-2或C125S人IL-2相比，1)能维持或促进天然杀伤(NK)细胞的增殖，和2)诱导NK细胞产生的促炎细胞因子水平降低。在一些实施方案中，此额外取代选自：T7A、T7D、T7R、K8L、K9A、K9D、K9R、K9S、K9V、K9W、T10K、T10N、Q11A、Q11R、Q11T、E15A、H16D、H16E、L19D、L19E、D20E、I24L，K32A、K32W、N33E、P34E、P34R、P34S、P34T、P34V、K35D、K35I、K35L、K35M、K35N、K35P、K35Q、K35T、L36A、L36D、L36E、L36F、L36G、L36H、L36I、L36K、L36M、L36N、L36P、L36R、L36S、L36W、L36Y、R38D、R38G、R38N、R38P、R38S、L40D、L40G、L40N、L40S，T41E、T41G、F42A、F42E、F42R、F42T、F42V、K43H、F44K、M46I、E61K、E61M、E61R、E62T、E62Y、K64D、K64E、K64G、K64L、K64Q、K64R、P65D、P65E、P65F、P65G、P65H、P65I、P65K、P65L、P65N、P65Q、P65R、P65S、P65T、P65V、P65W、P65Y、L66A、L66F、E67A、L72G、L72N、L72T、F78S、F78W、H79F、H79M、H79N、H79P、H79Q、H79S、H79V、L80E、L80F、L80G、L80K、L80N、L80R、L80T、L80V、L80W、L80Y、R81E、R81K、R81L、R81M、R81N、R81P、R81T、D84R、S87T、N88D、N88H、N88T、V91A、V91D、V91E、V91F、V91G、V91N、V91Q、V91W、L94A、L94I、L94T、L94V、L94Y、E95D、E95G、E95M、T102S、T102V、M104G、E106K、Y107H、Y107K、Y107L、Y107Q、Y107R、Y107T、E116G、N119Q、T123S、T123C、Q126I和Q126V；其中氨基酸残基位置相对于成熟的人IL-2氨基酸序列(SEQ ID NO：14)编号。在其它实施方案中，这些突变蛋白包含在125位用丙氨酸取代半胱氨酸的成熟的人IL-2(SEQ ID NO：14)的氨基酸序列，并且在该成熟的人IL-2序列中具有至少一处额外的氨基酸取代从而使该突变蛋白具有相同的功能特征。在一些实施方案中，此额外取代选自：T7A、T7D、T7R、K8L、K9A、K9D、K9R、K9S、K9V、K9W、T10K、T10N、Q11A、Q11R、Q11T、E15A、H16D、H16E、L19D、L19E、D20E、I24L、K32A、K32W、N33E、P34E、P34R、P34S、P34T、P34V、K35D、K35I、K35L、K35M、K35N、K35P、K35Q、K35T、L36A、L36D、L36E、L36F、L36G、L36H、L36I、L36K、L36M、L36N、L36P、L36R、L36S、L36W、L36Y、R38D、R38G、R38N、R38P、R38S、MOD、L40G、L40N、L40S、T41E、T41G、F42A、F42E、F42R、F42T、F42V、K43H、F44K、M46I、E61K、E61M、E61R、E62T、E62Y、K64D、K64E、K64G、K64L、K64Q、K64R、P65D、P65E、P65F、P65G、P65H、P65I、P65K、P65L、P65N、P65Q、P65R、P65S、P65T、P65V、P65W、P65Y、L66A、L66F、E67A、L72G、L72N、L72T、F78S、F78W、H79F、H79M、H79N、H79P、H79Q、H79S、H79V、L80E、L80F、L80G、L80K、L80N、L80R、L80T、L80V、L80W、L80Y、R81E、R81K、R81L、R81M、R81N、R81P、R81T、D84R、S87T、N88D、N88H、N88T、V91A、V91D、V91E、V91F、V91G、V91N、V91Q、V91W、L94A、L94I、L94T、L94V、L94Y、E95D、E95G、E95M、T102S、T102V、M104G、E106K、Y107H、Y107K、Y107L、Y107Q、Y107R、Y107T、E116G、N119Q、T123S、T123C、Q126I和Q126V；其中氨基酸残基位置相对于成熟的人IL-2氨基酸序列(SEQ ID NO：14)编号。在其它实施方案中，这些突变蛋白包含具有至少一处额外氨基酸取代的成熟的人IL-2(SEQ ID NO：14)的氨基酸序列，从而使该突变蛋白具有相同的功能特征。在一些实施方案中，此额外取代选自：T7A、T7D、T7R、K8L、K9A、K9D、K9R、K9S、K9V、K9W、T10K、T10N、Q11A、Q11R、Q11T、E15A、H16D、H16E、L19D、L19E、D20E、I24L、K32A、K32W、N33E、P34E、P34R、P34S、P34T、P34V、K35D、K35I、K35L、K35M、K35N、K35P、K35Q、K35T、L36A、L36D、L36E、L36F、L36G、L36H、L36I、L36K、L36M、L36N、L36P、L36R、L36S、L36W、L36Y、R38D、R38G、R38N、R38P、R38S、L40D、L40G、L40N、L40S、T41E、T41G、F42A、F42E、F42R、F42T、F42V、K43H、F44K、M46I、E61K、E61M、E61R、E62T、E62Y、K64D、K64E、K64G、K64L、K64Q、K64R、P65D、P65E、P65F、P65G、P65H、P65I、P65K、P65L、P65N、P65Q、P65R、P65S、P65T、P65V、P65W、P65Y、L66A、L66F、E67A、L72G、L72N、L72T、F78S、F78W、H79F、H79M、H79N、H79P、H79Q、H79S、H79V、L80E、L80F、L80G、L80K、L80N、L80R、L80T、L80V、L80W、L80Y、R81E、R81K、R81L、R81M、R81N、R81P、R81T、D84R、S87T、N88D、N88H、N88T、V91A、V91D、V91E、V91F、V91G、V91N、V91Q、V91W、L94A、L94I、L94T、L94V、L94Y、E95D、E95G、E95M、T102S、T102V、M104G、E106K、Y107H、Y107K、Y107L、Y107Q、Y107R、Y107T、E116G、N119Q、T123S、T123C、Q126I和Q126V；其中氨基酸残基位置相对于成熟的人IL-2氨基酸序列(SEQ ID NO：14)编号。除了在成熟的人IL-2序列1位删除了起始丙氨酸残基之外，公开于该待批申请的其它突变蛋白包括上述鉴定的突变蛋白。

预计毒性降低的IL-2突变蛋白的其它例子公开于2004年7月7日提交的名为“组合性白介素-2突变蛋白”的待批申请和转让的美国临时申请系列号60/585,980，这些申请全文纳入本文作为参考。该申请所述的组合性突变蛋白包括但不限于：125位丝氨酸取代半胱氨酸的成熟的人IL-2氨基酸序列，和在成熟的人IL-2序列中至少具有两处额外的氨基酸取代，从而使得该突变蛋白具有以下功能特征：在可比试验条件下与类似量的脱-丙氨酰-1，C125S人IL-2或C125S人IL-2相比，1)能维持或促进天然杀伤(NK)细胞的增殖，和2)诱导NK细胞产生的促炎细胞因子水平降低；其中NK细胞增殖和促炎细胞因子产生可用NK-92生物试验测定。在一些实施方案中，突变蛋白还包括1位丙氨酸缺失。在一些实施方案中，此额外的取代选自：19D40D、19D81K、36D42R、36D61R、36D65L、40D36D、40D61R、40D65Y、40D72N、40D80K、40G36D、40G65Y、80K36D、80K65Y、81K36D、81K42E、81K61R、81K65Y、81K72N、81K88D、81K91D、81K107H、81L107H、91N95G、107H36D、107H42E、107H65Y、107R36D、107R72N、40D81K107H、40G81K107H和91N94Y95G。

本文所用的术语IL-2也包括IL-2融合物或偶联物，所述融合物或偶联物包含与第二蛋白融合或与聚脯氨酸或水溶性聚合物共价偶联以降低给药频率或提高IL-2耐受性的IL-2。例如，IL-2(或如本文定义的其变体)可用本领域已知的方法(参见，WO 01/79258)与人白蛋白或白蛋白片段融合。或者，IL-2可用本领域已知方法(参见，例如美国专利号4,766,106；5,206,344和4,894,226)与聚脯氨酸或聚乙二醇均聚物和聚氧乙基化多元醇共价偶联，其中所述均聚物是未取代的或在一端用烷基取代，所述多元醇是未取代的。

任何包含IL-2作为治疗活性组分的药物组合物可用于本发明的方法。这种药物组合物是本领域已知的，包括但不限于纳入本文作为参考的美国专利号4,745,180；4,766,106；4,816,440；4,894,226；4,931,544和5,078,997所述的那些。因此，可将本领域已知的包含IL-2或其变体的液体、冻干或喷雾干燥的组合物制备成水性或非水性溶液或悬液，随后按本发明的方法给予对象。每一种这些组合物均包含IL-2或其变体作为治疗性或预防性活性组分。当将所述药物组合物给予某对象时，就治疗或防止该对象的疾病或病症而言，“治疗性或预防性活性组分”指将IL-2或其变体专门掺入到该组合物以产生所需的治疗性或预防性反应。所述药物组合物优选包含合适的稳定剂、填充剂或同时包含二者以尽可能减少制备和储存期间蛋白质稳定性和生物活性丧失等相关问题。

在本发明的优选实施方案中，用于本发明方法的含有IL-2的药物组合物是包含稳定的单体IL-2或其变体的组合物、包含多聚体IL-2或其变体的组合物和包含稳定的冻干或喷雾干燥的IL-2或其变体的组合物。

包含冻干的单体IL-2或其变体的药物组合物公开于2000年10月3日提交、转让的PCT号为PCT/US00/27156、名为“含有3种多肽的稳定液体药物组合物”的待批PCT申请中，其内容纳入本文作为参考。“单体”IL-2指蛋白质分子在本文所述药物组合物中基本上以它们的单体形式，而非聚合形式存在。因此不存在IL-2的共价或疏水寡聚物或凝聚物。简言之，用氨基酸碱配制这些液体组合物中的IL-2或其变体，所述氨基酸碱的用量足以减少储存期间IL-2或其变体凝聚物的形成。所述氨基酸碱是氨基酸或氨基酸的组合，其中任何给定的氨基酸以其游离碱或其盐的形式存在。优选的氨基酸选自：精氨酸、赖氨酸、天冬氨酸和谷氨酸。这些组合物还包含缓冲剂以将液体组合物的pH维持在能使IL-2或其变体稳定性的可接受范围内，其中所述缓冲剂是基本上不含其盐形式的某种酸、盐形式的某种酸或某种酸及其盐形式的混合物。优选的酸选自：琥珀酸、柠檬酸、磷酸和谷氨酸。本文将这种组合物称为稳定的单体IL-2药物组合物。

这些组合物中的氨基酸碱作用是稳定IL-2或其变体防止其在该液体药物组合物储存期间形成凝聚物，同时采用基本上不含其盐形式的某种酸、盐形式的某种酸或某种酸及其盐形式的混合物作为缓冲剂可导致该液体组合物具有接近等渗的重量克分子的渗透浓度。该液体药物组合物还可含其它稳定剂，更具体地说是甲硫氨酸、非离子表面活性剂，例如聚山梨酸酯80和EDTA以进一步提高该多肽的稳定性。由于联合加入氨基酸碱和基本上不含其盐形式的某种酸、盐形式的某种酸或某种酸及其盐形式的混合物，导致该组合物稳定性高于不含这两种组分配制的液体药物组合物，据说这种液体药物组合物是稳定的。

含稳定的单体IL-2或其变体的这些液体药物组合物可以水溶液体形式使用，或以冷冻状态保存待用，或为以后可重建成液体形式的干粉形式，或适合根据本发明方法给予对象的其它形式。“干粉形式”指该液体药物组合物或制剂经冷冻干燥(即，冻干；参见，例如Williams和Polli，(1984)，J.Parenteral Sci.Technol.，38：48-59)、喷雾干燥(参见Masters，(1991)，《喷雾干燥手册》(Spray-DryingHandbook)，(第五版；Longman Scientific and Technical，Essez，U.K.)，第491-676页；Broadhead等，(1992)，Drug Devel.Ind.Pharm.，18：1169-1206；和Mumenthaler等，(1994)，Pharm.Res.，11：12-20)、或空气干燥(Carpenter和Crowe，(1988)，Cryobiology，25：459-470；和Roser，(1991)，Biopharm.，4：47-53)而成为干粉。

含非聚合单体状态的IL-2的IL-2制剂的其它例子包括Whittington和Faulds，(1993)，Drugs，46(3)：446-514中所述的那些。这些制剂包含重组IL-2产物，其中用0.25％人血清白蛋白将重组IL-2突变蛋白Teceleukin(在氨基末端加有一甲硫氨酸残基的未糖基化人IL-2)配制成可用等渗盐水重建的冻干粉末，将重组IL-2突变蛋白Bioleukin(在氨基末端加有一甲硫氨酸残基并在人IL-2序列的125位丙氨酸取代半胱氨酸残基的人IL-2)配制成使0.1-1.0mg/ml的IL-2突变蛋白与酸结合，该制剂的pH为3.0-4.0，优选不含缓冲剂，电导低于1000mmhos/cm(优选低于500mmhos/cm)。参见，EP 373,679；Xhang等，(1996)，Pharmaceut.Res.，13(4)：643-644；和Prestrelski等，(1995)，Pharmaceut.Res.，12(9)：1250-1258。

含多聚体IL-2或其变体的药物组合物的例子公开于共有的美国专利号6,604,377中，其内容纳入本文作为参考。“多聚体”指以平均分子为10-50个分子缔合的微聚合形式存在于该药物组合物中的蛋白质分子。这些多聚体以松散结合、物理缔合的IL-2分子存在。冻干形式的这些组合物可以商品名Proleukin(Chiron Corporation，Emeryville，California)购得。该参考文献公开的冻干制剂含有经选择性氧化的微生物产生的重组IL-2，其中重组IL-2与提供填充作用(bulk)的水溶性运载体，例如甘露醇和足够量的十二烷基硫酸钠混合以保证重组IL-2在水中的溶解性。这些组合物适合于重建成胃肠外给药的水性注射剂，在病人中稳定且耐受良好。当重建时，IL-2或其变体维持了其多聚体状态。本发明的方法包括这种含有多聚体IL-2或其变体的冻干或液体组合物。本文将这种组合物称为多聚体IL-2药物组合物。

本发明的方法也采用含有IL-2或其变体的稳定的冻干或喷雾干燥的药物组合物，所述组合物可重建成按本发明方法给药的液体形式或其它合适的形式。这种药物组合物公开于2000年11月28日提交的美国系列号09/724,810，名为“白介素-2的肺部递送方法”的待批申请中，和2000年12月27日提交的国际申请PCT/US00/35452中，以上申请全文纳入本文作为参考。这些组合物还可包含至少一种填充剂，其用量足以在干燥过程中稳定蛋白质的试剂，或同时包含二者。“稳定的”指在冻干或喷雾干燥后获得组合物的固体或干粉形式后IL-2蛋白或其变体保留了单体或多聚体形式以及质量、纯度和效力等其它关键性能。在这些组合物中，用作填充剂的优选运载体物质包括甘氨酸、甘露醇、丙氨酸或它们的组合，最优选甘氨酸。取决于所用试剂，填充剂在该制剂中可占0％-约10％(w/v)。用作稳定剂的优选运载体物质包括任何糖或糖醇或任何氨基酸。优选的糖包括蔗糖、海藻糖、棉籽糖、水苏糖、山梨醇、葡萄糖、乳糖、右旋糖或它们的任何组合，优选蔗糖。当稳定剂是糖时，其含量范围约0％-9.0％(w/v)、优选约0.5％-5.0％、更优选约1.0％-3.0％、最优选约1.0％。当稳定剂是氨基酸时，其含量范围约0％-1.0％(w/v)、优选约0.3％-0.7％、最优选约0.5％。这些稳定的冻干或喷雾干燥组合物可任选包含甲硫氨酸、乙二胺四乙酸(EDTA)或其盐之一，例如EDTA二钠或能保护IL-2或其变体抵御甲硫氨酸氧化的其它螯合剂。纳入本文作为参考的美国临时申请系列号60/157696描述了以此种方式采用的这些试剂。当稳定的冻干或喷雾干燥组合物处于液体状态，例如配制过程中或干粉形式的组合物重建后，可用缓冲剂配制，将该药物组合物的pH维持于可接受的范围，优选约pH 4.0-pH 8.5。选择的缓冲剂应与干燥过程相容，不影响加工和储存过程中该蛋白质的质量、纯度、效力和稳定性。

上述稳定的单体、多聚体和稳定的冻干或喷雾干燥IL-2药物组合物代表了用于本发明方法的合适组合物。然而，本发明的方法包括任何含有IL-2或其变体作为治疗活性组分的药物组合物。

本文使用的术语“抗癌症抗体”包括设计可靶向癌细胞，特别是位于感兴趣特定癌症细胞上细胞表面抗原的抗体。抗癌症抗体优选在性质上是单克隆的，优选IgG1单克隆抗体。合适的IgG1单克隆抗体包括但不限于：Rituxan^(靶向致瘤性B细胞上的CD20抗原并能有效治疗B-细胞淋巴瘤，包括非何杰金B细胞淋巴瘤和慢性淋巴细胞性白血病(CLL))；Therex(对MUC1特异的人源化HMFG1，开发用于乳腺癌和其它MUC1-阳性肿瘤，包括卵巢癌和结肠癌)；MDX-010(活化的T细胞上的人抗-CTLA-4负调节物；开发用于骨髓瘤、滤泡性淋巴瘤、结肠癌和前列腺癌)；EMD 72000和Erbitux(IMC-225)(人抗-EGFR，开发用于EGFR-阳性癌症，特别是结肠癌)；WX-G250(对MN抗原特异；开发用于肾细胞瘤和宫颈癌)；IDM-1(用于治疗卵巢癌)；MDX-210(用于治疗乳腺癌和卵巢癌)；ZAMYL(用于治疗急性髓细胞性白血病(AML))和Campath(用于治疗CLL)。虽然以下的讨论涉及治疗B-细胞淋巴瘤的感兴趣抗-CD20抗体，但此概念同样适用于以上列出的抗体。

本文使用的术语“抗-CD20抗体”包括能特异性识别CD20B-细胞表面抗原的任何抗体，包括多克隆抗-CD20抗体、单克隆抗-CD20抗体、人抗-CD20抗体、人源化抗-CD20抗体、嵌合性抗-CD20抗体、异种抗-CD20抗体和能特异性识别CD20B-细胞表面抗原的这些抗-CD20抗体的片段。所述抗体优选在性质上是单克隆的。“单克隆抗体”指得自基本上同质的抗体群的抗体，即除了可能存在极少量天然发生的突变以外，构成该群的每个抗体都是相同的。单克隆抗体是高度特异性的，针对一个的抗原性位点，即本发明的CD20B-胞表面抗原。此外，与通常包含针对不同决定簇(表位)的不同抗体的常规(多克隆)抗体制剂相反，每种单克隆抗体只针对抗原上一个决定簇。修饰词“单克隆的”表示得自基本上均质的抗体群的抗体特性，不可理解为需要通过任何具体方法产生该抗体。例如，本发明所用的单克隆抗体可通过Kohler等，(1975)Nature 256：495首次描述的杂交瘤方法或重组DNA方法制备(参见，例如美国专利号4,816,567)。“单克隆抗体”也可用，例如Clackson等，(1991)Nature 352：624-628；Marks等，(1991)J.Mol.Biol.222：581-597；和美国专利号5,514,548中所述技术自噬菌体抗体文库分离得到。

鼠源性抗-CD20抗体适用于本发明的方法。这种鼠源抗-CD20抗体的例子包括但不限于：B1抗体(描述于美国专利号6,015,542)；1F5抗体(参见Press等，(1989)，J.Clin.Oncol.，7：1027)；NKI-B20和BCA-B20抗-CD20抗体(描述于Hooijberg等，(1995)，Cancer Research，55：840-846)；IDEC-2B8(购自IDECPharmaceuticals Corp.，San Diego，California)；2H7抗体(描述于Clark等，(1985)，Proc.Natl.Acad.Sci.，USA，82：1766-1770；和其它描述于Clark等，(1985)，同上和Stashenko等，(1980)，J.Immunol.，125：1678-1685中的抗体。

本文使用的术语“抗-CD20抗体”包括嵌合性抗-CD20抗体。“嵌合性抗体”指最好是用重组脱氧核糖核酸技术产生的包含人(包括免疫相关种类，例如黑猩猩)和非人组分的抗体。因此，嵌合性抗体的恒定区最好与天然的人抗体恒定区基本相同；嵌合性抗体的可变区最好衍生自非人来源并具有所需CD20细胞表面抗原的抗原特异性。非人来源是可用来产生抗人CD20细胞表面抗原或含有人CD20细胞表面抗原物质的抗体的任何脊椎动物来源。这种非人来源包括但不限于：啮齿类(例如，家兔、大鼠、小鼠等；参见，例如美国专利号4,816,567)和非人灵长类(例如，古猴(Old World Monkey)，类人猿等；参见，例如美国专利号5,750,105和5,756,096)。非人组分(可变区)最好衍生自鼠源。当本文所用的短语“免疫活性”指嵌合性抗-CD20抗体时，指能结合人C1q、介导人B淋巴细胞系的依赖补体的裂解(“CDC”)和通过依赖抗体的细胞毒性(“ADCC”)裂解人靶细胞的嵌合性抗体。嵌合性抗-CD20抗体的例子包括但不限于：IDEC-C2B8，可以利妥昔单抗的名字购得(Rituxan^；IDEC Pharmaceuticals Corp.，San Diego，California)，描述于美国专利号5,736,137；5,776,456和5,843,439；美国专利号5,750,105所述的嵌合性抗体；美国专利号5,500,362；5,677,180；5,721,108和5,843,685所述的那些抗体。

本文使用的术语抗-CD20抗体也包括人源化抗-CD20抗体。“人源化”指含有衍生自非人免疫球蛋白序列的最小序列的抗-CD20抗体形式。就大部分序列而言，人源化抗体指其中受者的超变区残基被非人种类(供体抗体)，例如小鼠、大鼠、家兔或非人灵长类的超变区残基取代的，具有所需特异性、亲和力或能力的人免疫球蛋白(受者抗体)。参见，例如美国专利号5,225,539；5,585,089；5,693,761；5,693,762和5,859,205。在一些例子中，人免疫球蛋白的框架残基为对应的非人残基所取代(参见，例如美国专利号5,585,089；5,693,761；5,693,762)。此外，人源化抗体可含有在受者抗体或供体抗体中没发现的残基。进行这些修饰可进一步精制抗体的性能(例如，获得所需的亲和力)。总体上，人源化抗体基本上含有至少一个，通常两个可变区，其中所有或基本上所有的超变区对应于非人免疫球蛋白序列(超变区)，所有或基本上所有的框架区为人免疫球蛋白序列(框架区)。人源化抗体也任选包含免疫球蛋白恒定区(Fc)，通常是人免疫球蛋白的恒定区的至少一部分。更多的细节见Jones等，(1986)Nature 331：522-525；Riechmann等，(1988)Nature 332：323-329；和Presta(1992)Curr.Op.Struct.Biol.2：593-596。

术语抗-CD20抗体也包括在非人哺乳动物宿主，更具体说是以灭活的内源性免疫球蛋白(Ig)基因座为特征的转基因小鼠中产生的异种或修饰的抗-CD20抗体。在这种转基因动物中，使得表达宿主免疫球蛋白轻链和重链亚基的活性内源性基因无功能，并用同类人免疫球蛋白基因座取代。这些转基因动物可产生基本上无宿主免疫球蛋白轻或重链亚基的人抗体。参见，例如美国专利号5,939,598。

只要抗-CD20抗体的片段保留了所需的全长抗体的亲和力，它们就适用于本发明的方法。因此，抗-CD20抗体的片段保留了结合CD20B细胞表面抗原的能力。抗体的片段含有全长抗体的一部分，通常是其抗原结合区或可变区。抗体片段的例子包括但不限于：Fab、Fab’、F(ab′)₂、Fv片段和单链抗体分子。“单链Fv”或“sFv”抗体片段指含有抗体的V_H和V_L结构域的片段，这些结构域以一条多肽链的形式存在。参见，例如美国专利号4,946,778；5,260,203；5,455,030；5,856,456。Fv多肽通常在V_H和V_L结构域之间还含有一多肽接头，使sFv形成抗原结合所需的结构。sFv的综述见Pluckthun(1994)《单克隆抗体的药理学》(The Pharmacology ofMonoclonal Antibodies)，第113卷，Rosenburg和Moore编，(Springer-Verlag，NewYork)，第269-315页。

可从利用McCafferty等，(1990)Nature 348：552-554(1990)所述技术产生的抗体噬菌体文库分离得到抗体或抗体片段。Clackson等，(1991)Nature 352：624-628和Marks等，(1991)J.Mol.Bird.222：581-597分别描述了利用噬菌体文库分离得到鼠和人抗体。随后的出版物描述了作为构建非常大的噬菌体文库方法通过链改组(Marks等，(1992)Bio/Technology 10：779-783)以及组合性感染和体内重组来产生高亲和力(nM范围)的人抗体(Waterhouse等，(1993)Nucleic.Acids Res.21：2265-2266)。因此，这些技术是分离单克隆抗体的传统单克隆抗体杂交瘤技术的可行替代方法。

人源化抗体具有引入的非人来源的一个或多个氨基酸残基。这些非人氨基酸残基通常称为“供体”残基，一般取自“供体”的可变结构域。人源化基本上可根据Winter及其同事(Jones等，(1986)Nature 321：522-525；Riechmann等，(1988)Nature 332：323-327；Verhoeyen等，(1988)Science 239：1534-1536)的方法通过用啮齿类或突变型啮齿类CDR或CDR序列取代人抗体的相应序列来进行。参见，例如美国专利号5,225,539；5,585,089；5,693,761；5,693,762；5,859,205。因此，这种“人源化”抗体可包括其中基本上小于完整的人可变结构域被非人种类的相应序列取代的抗体。实际上，人源化抗体通常是其中一些CDR残基和可能的一些框架残基被啮齿类抗体中类似位点的残基取代的人抗体。参见，例如美国专利号5,225,539；5,585,089；5,693,761；5,693,762；5,859,205。也参见美国专利号6,180,370，和国际公布号WO 01/27160，其中公开了人源化抗体和产生对预定抗原具有改进亲和力的人源化抗体的技术。

已开发了各种技术来制备抗体片段。传统上，这些片段通过使完整抗体蛋白水解消化而获得(参见，例如Morimoto等，(1992)Journal of Biochemical andBiophysical Methods 24：107-117(1992)和Brennan等，(1985)Science 229：81)。然而，现在这些片段可通过重组宿主细胞直接制备。例如，可从上述噬菌体文库分离抗体片段。或者，可从大肠杆菌中直接回收Fab′-SH片段并化学偶联形成F(ab′)₂片段(Carter等，(1992)Bio/Technology 10：163-167)。根据另一方法，可从重组宿主细胞培养物直接分离得到F(ab′)₂片段。其它制备抗体片段的技术为技术人员所熟知。

此外，任何上述抗-CD20抗体在用于本发明方法前可偶联。本领域已有这种偶联的抗体。因此，可用间接标记或间接标记方法来标记抗-CD20抗体。“间接标记”或“间接标记方法”指将螯合剂共价偶联于抗体并且将至少一种放射性核素插入该螯合剂中。参见，例如Srivagtava和Mease，(1991)Nucl.Med.Bio.18：589-603中所述的螯合剂和放射性核素。或者，抗-CD20抗体可使用放射性核素与抗体直接共价相连(一般通过氨基酸残基)的“直接标记”或“直接标记方法”标记。优选的放射性核素见Srivagtava和Mease(1991)，同上。特别优选间接标记方法。也参见，例如美国专利号6,015,542所述的抗-CD20抗体的标记形式。

抗-CD20抗体通常用标准技术以药学上可接受的缓冲剂，例如无菌盐水、无菌缓冲水、丙二醇、上述物质的组合等来提供。《雷明顿药物科学》(Remington′sPharmaceutical Sciences)(第18版；Mack Publishing Company，Eaton，Pennsylvania，1990)描述了制备可胃肠外给予的药物的方法。也参见，例如描述了适用于本发明方法的稳定的抗体药物制剂的国际公布号WO98/56418。

本发明也提供可用于本发明诊断方法的试剂盒。这种试剂盒装有能与Fcγ受体IIIA(FcγRIIIA)基因相毗邻区域或其多态性区域特异性杂交的至少一种探针或引物，所述多态性区域包含编码FcγRIIIA 158F等位基因的核苷酸。这种试剂盒可用于检测个体中是否存在该等位基因，优选用于检测纯化的158F/F基因型。或者该试剂盒装有能与Fcγ受体IIA(FcγRIIA)基因毗邻区域或其多态性区域特异性杂交的至少一种探针或引物，所述多态性区域包含编码FcγRIIA 131R等位基因的核苷酸。这种试剂盒可用于检测个体中是否存在该等位基因的至少一份拷贝。可联用这些试剂盒，在一个试剂盒中装有两种基因的特异性引物或探针。这些试剂盒还可装有使用说明书。

提供以下实施例是为了说明而非限制。

                         实验

实施例1：材料与方法

A.IL-2

所用的IL-2制剂由California，Emeryville的Chiron Corporation生产，商品名为Proleukin^。该制剂中的IL-2是重组产生，未糖基化的IL-2突变蛋白，称为aldesleukin，其删除了起始丙氨酸残基并用丝氨酸残基取代125位半胱氨酸残基(称为脱-丙氨酰-1，丝氨酸-125人白介素-2)而与天然人IL-2氨基酸序列不同。该IL-2突变蛋白在大肠杆菌中表达，然后如美国专利号4,931543所述经渗滤和离子交换层析纯化。IL-2制剂以Proleukin^商品名提供，为无菌、白色至灰白色无防腐剂的冻干粉，每小瓶含有1.3mg蛋白(22MIU)。

B.抗-CD20抗体

用于本实施例和以下实施例的抗-CD20抗体是Rituxan^(利妥昔单抗；IDEC-C2B8；IDEC Pharmaceuticals Corp.，San Diego，California)。它按照其包装插页所述剂量给药(在6小时期间输液375mg/m²)。

C.基因分型

通过IgG FcγR与活化的FcγR相互作用介导的依赖抗体的细胞毒性(ADCC)看来是利妥昔单抗治疗活性的潜在重要机理。据报道，FcγRIIIA(CD16)和FcγRIIA(CD32)的遗传多态性影响到滤泡性淋巴瘤(FL)患者对利妥昔单抗的临床反应。参见，例如Weng等，(2003)，J Clin Oncol.，21(21)：3940-7。白介素-2(Proleukin^)可诱导携带FcR的细胞，包括天然杀伤(NK)细胞、单核细胞/巨噬细胞和嗜中性细胞的增殖与激活，从而提高单克隆抗体介导的ADCC。

因此，为确定对象氨基酸158位的FcγRIIIa基因型(158FF、158FV或158VV)，评价对象以确定他们在FcγRIIIa中的一种或多种已知多态性的基因型，包括核苷酸559位的双等位基因功能性多态性(G→T)，该多态性预示了氨基酸158位的缬氨酸(V)至苯丙氨酸(F)的取代。参见，例如Koene等，(1997)，Blood，90(3)：1109-14。也可确定对象的一种或多种其它多态性(例如，48L/R/H、131R/H、176F/V等)的基因型。参见，例如Weng等，(2003)，同上；de Vries等，(1996)，Blood，88(8)：3022-7；de Haas等，(1996)，J Immunol.，1996，156(8)：3948-55。

对象的基因分型基本上按Koene等，(1997)，Blood，90：1109-1114和/或Leppers-van de Straat等，(2000)，J Immunol Methods，242(1-2)：127-32所述进行。简言之，利用聚合酶链式反应(PCR)扩增得自待基因分型对象的样品(例如，全血或PBMC)中含有目标多态性的序列。基因分型的其它方法详述见2004年4月7日提交的美国临时申请系列号60/560,649，该申请全文纳入本文作为参考。

D.反应分级

根据非何杰金淋巴瘤的标准化反应标准的国际研讨会(InternationalWorkshop to Standardize Response Criteria for Non-Hodgkin′s Lymphomas)的报告(参见，Cheson等，(1999)，J.Clin.Oncol.，17：1244-1253)和按照以下定义的标准方案对肿瘤反应进行分级：

·完全反应(CR)-定义为无临床可检测的疾病，任何以前异常的放射显影研究、骨髓和脑脊液(CSF)均正常。反应至少持续一个月。化疗之前淋巴瘤骨髓阳性的患者必须接受反复活检，一个月后确认淋巴瘤阴性。

·部分反应(PR)-定义为在无新的病损时，所有可检测的肿瘤负荷降低至少50％并持续至少一个月(仅适用于可检测肿瘤)。

也根据以下标准评价患者(例如，评价Proleukine^IL-2和利妥昔单抗治疗的疗效)：

反应持续时间-定义为从首次记录反应直至进行性疾病(发生)的时间。

进展时间-定义为从研究开始到进行性疾病(发生)、复发或死亡的时间。

稳定的疾病(SD)-定义为在无进行性疾病时，肿瘤负荷降低少于50％。

进行性疾病(PD)-定义为表示肿瘤负荷增加25％或更高或出现该疾病的新部位。

复发(R)-定义为完全反应确认后出现肿瘤。

实施例2：在人B-细胞非何杰金淋巴瘤的异种移植模型中联用IL-2-利妥昔单抗

在以下两个不同的人B-细胞淋巴瘤的异种移植模型中评价了IL-2(Proleukin^)和利妥昔单抗联合给药。参见，例如Hudson等，(1998)，Leukemia，12(12)：2029-2033所述的Namalwa和Daudi异种移植模型。

Namalwa和Daudi人B-细胞系在NK-活性Balb/c裸鼠(n＝10/组)中生长为皮下肿瘤(处于100-200mm³的阶段)。Namalwa/Balb/c裸鼠是与低水平的CD20表达相关并认为是侵袭性/高度疾病的模型。Daudi/Balb/c裸鼠模型表达高水平的CD20并与较低侵袭性/低度疾病特性(profile)相关。此外，NK细胞在无细胞因子，例如IL-2激活时不能裂解Daudi肿瘤细胞。参见，例如Damle等，(1987)，J.Iimmunol.，138(6)：1779-1785。以下显示了所选的不同小鼠模型的特性：

特性	Namalwa	Daudi
			CD20表达	低	高
疾病状态	侵袭性	低度
			利妥昔单抗疗效	耐受	有反应
IL-2疗效	有效	疗效低
			模型持续时间	2周	6周

将Namalwa或Daudi肿瘤细胞植入小鼠中，当肿瘤处于100-200mm³阶段时，通常是肿瘤细胞植入后8-12天开始给予利妥昔单抗和/或IL-2。

以下是单一药物剂量方案。一组小鼠每天皮下(s.c.)接受0.25mg/kg的IL-2(每日低剂量组)。另一组小鼠在第1、3、5、8、10、12、15、17、19、22、24和26天以1mg/kg经皮下每周3次接受IL-2。第三组小鼠在第1、8、15和22天经静脉内或腹膜内接受利妥昔单抗(例如，10mg/kg，1×/周，腹膜内)。此外，在Daudi小鼠中，其它组的小鼠以10mg/kg经静脉内或腹膜内每周1次(第1、8、15和22天)接受利妥昔单抗F(ab’)₂片段。对照组小鼠仅接受运载体。

也在第1、8、15和22天以上述剂量对接受每日一次或每周三次IL-2给药的小鼠给予利妥昔单抗来测试联合用药的剂量方案。一组Daudi小鼠也联合接受IL-2(每日一次或每周三次)和利妥昔单抗F(ab’)(1×/周)。所有单一药物和联合用药的剂量方案均耐受良好。

A.Namalwa模型

在Namalwa小鼠模型中，每日一次或每周三次给予作为单一药物的IL-2对抑制肿瘤生长的效果相当。特别是，每日一次和每周三次的IL-2剂量方案在Namalwa小鼠模型中导致有统计学意义的肿瘤生长抑制，抑制肿瘤生长约40％-60％的(p＜0.05，ANOVA)。

Namalwa肿瘤通常对利妥昔单抗有耐药性。当利妥昔单抗以10、25或50mg/kg，1×/周给药时，在Namalwa小鼠中未观察到(抗)肿瘤疗效的差异(肿瘤生长抑制约0-30％，p＞0.05，ANOVA)。

与只接受IL-2的小鼠相比，接受利妥昔单抗-IL-2联合给药的Namalwa肿瘤小鼠显示每日IL-2(0.5mg/kg，皮下)和每周一次利妥昔单抗(10mg/kg)联用显示较高的疗效(p＝0.046，ANOVA)。此外，联合每周三次给予IL-2(1mg/kg)和利妥昔单抗10mg/kg未显示比仅接受IL-2的小鼠有所改善(1mg/kg，3×/周，p＞0.05，ANOVA)。

B.Daudi模型

Daudi肿瘤小鼠通常对单一药物IL-2给药(每日给药或每周三次)有耐药性。与对照相比，只接受每日IL-2给药(0.5mg/kg，每日给药×12然后进行1周，2轮)的小鼠的Daudi肿瘤体积略微减小(p＝0.047，ANOVA)。与对照相比，每周三次IL-2给药(1或1.5mg/kg，3×/周×4周)的Daudi肿瘤小鼠也显示略微减小了肿瘤体积(p＝0.01，ANOVA)。

然而，Daudi肿瘤对利妥昔单抗给药有高反应。在接受10和50mg/kg，1×/周利妥昔单抗的小鼠中观察到明显的Daudi肿瘤生长抑制和剂量反应作用。联用利妥昔单抗(10mg/kg，1×/周)和每日IL-2(0.25mg/kg，每日)也获得了类似的结果。

与单一药物IL-2、单一药物利妥昔单抗和每日IL-2与每周利妥昔单抗联合给药相比，每周三次IL-2和每周一次利妥昔单抗联合给药明显导致肿瘤生长受抑制和目标肿瘤反应。分别与利妥昔单抗和IL-2相比，肿瘤进展时间明显滞后41天和57天也证明IL-2和利妥昔单抗之间有明显的协同作用。

此外，在单一药物IL-2给药和利妥昔单抗F(ab’)₂10mg/kg与每周三次IL-2(1mg/kg，3×/周)联合给药之间未观察到显著差异，表明在Daudi模型中IL-2和利妥昔单抗联合治疗的效力取决于IgG1 Fc-介导的效应器机制。

因此，IL-2和利妥昔单抗联合给药在Daudi异种移植模型中导致显著且持久的肿瘤反应。临床观察结果总结于表A。

                       表A

治疗(n＝小鼠/组，两项独立研究)	肿瘤反应2(CR/PR/MR+SD)*		到1000mm3的时间中值(天)
					治疗周期结束(第30天)	研究结束(约第80天)
运载体	0	0	17
				每周三次IL-2(1mg/kg)	0CR	1CR	21
利妥昔单抗(10mg/kg，1×/周)	1PR，5MR+SD	3CR，1PR，3MR+SD	42
				每周三次IL-2(1mg/kg)+利妥昔单抗(10mg/kg，1×/周)	4CR，4PR，9MR+SD	4CR，1PR，7MR+SD	＞85

^*反应定义为起始肿瘤的消退程度，即，CR(100％)；PR(50-99％)；MR(25-49％)；SD(±25％)

总之，与较低侵袭性/低度Daudi模型相比，单一药物IL-2在侵袭性/高度Namalwa模型中更有效。此外，肿瘤对利妥昔单抗的反应性与表型CD20表达良好相关(即，Daudi CD20高＞Namalwa CD20低)，并且看来与疾病状态逆相关(低度Daudi＞高度Namalwa)。在高度Namalwa模型中，与单一药物IL-2相比，IL-2和利妥昔单抗每日给药显示疗效有所提高。在Duadi模型中，每周三次IL-2和利妥昔单抗(给药)明显显示协同作用并延长低度Daudi肿瘤模型的进展时间。利妥昔单抗的F(ab’)₂片段消除了活性，揭示了通过IL-2/rituxan联合治疗的IgG1 Fc-FcR介导的ADCC在提升抗肿瘤反应中具有重要作用。

实施例3：I期IL2-利妥昔单抗联合治疗

进行了两项I期平行研究来评价利妥昔单抗和IL-2联合治疗对复发或难治的B-细胞非何杰金淋巴瘤(NHL)患者的效果。参见，Gluck等，(2004)，Clin CancerRes.，10(7)：2253-2264。

患高等NHL的34位患者接受利妥昔单抗(375mg/m(2)，静脉内，每周一次，1-4周)和剂量递增的皮下IL-2(2-7.5百万国际单位(MIU)，每日一次(n＝19)，(例如2、4.5、6和7.5MIU)或4.5-18MIU(例如，4.5、10、14或18MIU)，每周三次(n＝15)，2-5周)。

从这些研究中测定的IL-2最大耐受剂量是6MIU(每日一次，皮下)IL-2或14MIU(3次/每周)。

在每日(给药)时间表MTD登记的9位患者中5位显示有临床反应。就MTD的每周三次(给药)时间表而言，5位患者中4位有反应并且NK细胞数比每日给药大为提高。在各种NHL亚型患者中观察到了反应。接受每日IL-2(给药)的对象中，弥散性大细胞、MALT、滤泡性和淋巴浆细胞性淋巴瘤(患者)中观察到有反应。接受每周三次IL-2(给药)的对象中，弥散性大细胞、滤泡性、小细胞、滤泡中心、滤泡混合、边缘层和外套细胞淋巴瘤患者中观察到有反应。所有的反应看来是持久的。

NK细胞数与每周三次(给药)方案的临床反应相关。在最高剂量水平，NK细胞数中值在第5周最高。此外，在有反应和疾病稳定的患者中，IL-2治疗后ADCC活性增加并可维持。也参见Gluck等，(2004)，Clin Cancer Res.，10(7)：2253-2264。

因此，利妥昔单抗治疗加IL-2是安全的，每周三次IL-2给药导致反应相关的NK细胞增殖。

实施例4：利妥昔单抗难治或复发患者的IL2-利妥昔单抗联合治疗

启动了评价低度/滤泡性非何杰金淋巴瘤(NHL)患者中IL-2(Proleukine^)和利妥昔单抗联合(给药)的II期试验(本文称为IL2NHL03)，所述患者为利妥昔单抗治疗6个月后利妥昔单抗难控制或复发的患者。利妥昔单抗在第1、2、3和4周以375mg/m²(静脉内)剂量每周给药一次，Proleukine^每周皮下(SC)给药三次，共8周(在第2、3、4和5周为14MIU；在6、7、8和9周为10MIU)。本项研究结束时包括了总反应速率(ORR)、NK细胞扩增并评价了NK细胞功能与FcγRIIIA和FcγRIIA多态性。

·可评价的患者定义为：对象必须已接受了4周的利妥昔单抗治疗和70％的所述Proleukine^剂量和给药时间。如以下评价反应。采用最长的直径及其最大的垂直(直径)，根据垂直直径的测量值衡量肿瘤。

迄今登记了34位患者，在第16周有27位目前可评价肿瘤反应。5位患者证明有临床反应，其中两位是完全反应，3位是部分反应，包括在对先前替伊莫单抗(ibritumomab tiuxetan)(Zevalin)治疗失败的1位患者中有部分反应；5位患者的疾病稳定。

A.158F/V多态性

如以上实施例1所述，对20位患者进行基因分型。在该20位患者组中，4位患者证明有临床反应，包括1位完全恢复和3位部分恢复。(下表B)。此外，4位患者的疾病稳定(SD)持续4个月或更长。

                 表B

ID	性别/种族	组织学	反应	持续时间(月)
					12011	M/C	滤泡II级	CR	8.5
01001	F/C	结节外MZL	PR	9.7
					19004	F/C	滤泡I级	PR	9.2
17001	M/C	滤泡II级	PR	1.9

应注意，分别与正常/报道的FL NHL(患者)群的32-39％和46-51％相比，在这种利妥昔单抗难治/复发的(患者)群中FcγRIIIA 158同种异型的频率显著倾向于纯合158F/F(13/20；65％)对象中明显增加与杂合FcγRIIIA 158V/F频率降低(5/20；25％)。参见下表1。

表1.在IL2NHL03研究患者群中FcγRIIIA 158F/F多态性的较高频率

研究	患者群	#对象	FcγRIIIA多态性
									158VV		158VF		158FF
			KoeneCartronWeng&LevyIL2NHL03	正常高加索人以前未治疗的滤泡性CD20+NHL以前治疗过的(Rituxan/Chemo)滤泡性NHLRituxan复发/难治	87558720	1510132	17％20％15％10％	4422405							51％45％46％25％	28173413	32％35％39％65％

的顽固性NHL

令人吃惊的是，基因分型为FcγRIIa 158多态性的临床有反应患者均表达FcγRIIIA 158F/F基因型，这与反应速率较差和对只用利妥昔单抗起反应的持续时间较差相关。参见下表2。

表2.IL2NHL03研究患者群中FcγRIIIA 158V/F多态性与临床反应情况的关系

研究	对象	FcγRIIIA基因型
										158VV		158VF		158FF		158F运载体
		Cartron	M2	10/10	100％													26/39/	67％
M12	9/10									90％					20/39	51％
			Weng	M1-3	12/13	92％	21/40	53％	23/34								68％	44/74	59％
M12	9/12	75％								8/35	23％	8/27	30％	16/62	26％
				IL2NHL03	M1-4	0/2	0％	0/5	0％							4/13	31％	4/18	22％

此外，当检测基因分型患者的肿瘤体积变化百分比时，158F/F患者的肿瘤体积明显减小。(图3)。

获得了研究第10周时携带FcγRIIIA 158F/F的患者亚组的NK细胞数，其与临床状态相关联。结果示于图2。这些数据显示NK CD16+CD56+细胞数与疾病状态正相关(PD＝进行性疾病；SD＝稳定的疾病；PR/CR＝部分/完全反应)。

表3总结了该项研究中低度NHL疾病类型与FcγRIIIA 158基因型之间的关系

表3.低度NHL疾病类型与FcγRIIIA 158基因型之间的关系
FcγRIIIA 158V/V	FcγRIIIA 158V/F	FcγRIIIA 158F/F
			FLC           SD	EA：SLL/CLL    SD	FMCCR
浆细胞样      PD	Xnodal，MZL    SD	FMCPR
			SLL           PD	滤泡性-gr      SD	Xnodal MZLPR
		FSCPR
					FMCSD
		FMC/弥散性SD
					MALT

		SD
					MZL SplenicSD
		MZLSD
					滤泡性SD
		SLLPD

B.131H/R多态性

与其它患者群相比，利妥昔单抗难治或复发患者的基因型也显示纯合FcγRIIA131H/H患者比例高(7/17(42％))和FcγRIIA 131H/R患者比例低下(5/17(29％))。参见下表4。

表4.在IL2NHL03研究的患者群中FcγRIIA 131H/R多态性频率较高

研究	患者群	#对象	FcγRIIIA多态性
									131HH		158VF		158FF
			LehrnbecherWeng &LevyIL2NHL03	正常高加索人以前治疗过(Rituxan/Chemo)滤泡性NHLRituxan复发/难治的顽固性NHL	24198717	627205	26％23％29％	1223435							50％49％29％	579247	24％28％42％

此外，迄今评价的所有临床有反应的患者均为对利妥昔单抗治疗结果不佳的FcγRIIA 131-R携带者。参见下表5。

表5.在IL2NHL03研究的患者群中FcγRIIA 131H/R多态性与临床反应情况的关系

研究	对象	FcγRIIIA基因型
										131HH		131HR		131RR		131R运载体
		Weng	M1-3	16/20	80％	27/43	63％	13/24	54％									40/64	60％
M12	11/20									55％	10/37	27％	4/17	24％	14/54	26％
			IL2NHL03	M1-4	0/4	0％	2/5	40％	1/7								14％	3/12	25％

结论是，遗传多态性FcγRIIIA 158F/F和FcγRIIA 131R/R与单一药物利妥昔单抗临床反应不佳相关。然而，IL-2免疫治疗干预可有效扩增和激活携带FcγR的细胞，在携带低亲和力IgG FcγR同种异型的患者中实现关键性的更有效启动ADCC的NK细胞数阈值，从而恢复这些个体有效地对抗癌症单克隆抗体治疗起反应的能力。

实施例5：对原初对象的IL2-利妥昔单抗联合治疗

检测了患有滤泡性非何杰金淋巴瘤(NHL)的利妥昔单抗原初对象在氨基酸158和131位F的cγRIIIA多态性与对只用利妥昔单抗和联用IL-2的临床反应之间的关系，所述淋巴瘤在以前的化疗后难以控制或复发。按照多态性状态将治疗方案(arms)分为若干层次，对象只接受利妥昔单抗(静脉内，375mg/m²，每周，4周)，或接受该给药方案的利妥昔单抗联合每周三次、皮下给予rhIL-2(Prolcukin)，共8周(前4周为14MIU，然后4周为10MIU)。

收集全血样品和肿瘤活检组织进行随后的基因表达特性分析与鉴定这两种FcγRIIIA多态性和FcγRIIA多态性的基因型。开始该治疗方案后第14周的临床结果与基因型和NK细胞计数相关。

说明书中提及的所有出版物和专利申请代表了本发明所属领域技术人员的水平。如同每篇出版物或专利申请专门且独立地引作参考的程度一样，所有出版物和专利申请全文纳入本文作为参考。

本领域技术人员无需采用更多的常规实验就可认识到或能确定本文所述发明的具体实施方案的许多等价形式。这种等价形式也包括于本文公开的实施方案的范围内。

Claims (126)

1.一种预测需要白介素-2(IL-2)免疫治疗的个体对IL-2免疫治疗的治疗反应的诊断方法，所述方法包括检测所述个体的Fcγ受体IIIA(FcγIIIA)基因的等位基因模式，存在纯合FcγRIIIA 158F/F基因型表明该个体对所述IL-2免疫治疗将显示阳性治疗反应。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述个体需要IL-2免疫治疗来治疗癌症。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述个体还正在用靶向在所述癌症细胞表面表达的细胞表面抗原的抗体进行治疗。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述抗体是免疫球蛋白G1(IgG1)单克隆抗体。

5.如权利要求2、3或4中任一项所述的方法，其特征在于，所述癌症是B-细胞淋巴瘤。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述B-细胞淋巴瘤是非何杰金B-细胞淋巴瘤。

7.如权利要求2、3或4中任一项所述的方法，其特征在于，所述癌症选自乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、前列腺癌、结肠癌、黑色素瘤、肾细胞癌、急性髓性白血病(AML)和慢性淋巴细胞性白血病(CLL)。

8.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其特征在于，通过选自以下的方法检测所述FcγRIIIA基因的等位基因模式：等位基因特异性杂交、引物特异性延伸、寡核苷酸连接试验、限制性酶切位点分析和单链构型多态性分析。

9.一种预测需要白介素-2(IL-2)免疫治疗的个体对IL-2免疫治疗的治疗反应的诊断方法，所述方法包括检测所述个体的Fcγ受体IIA(FcγIIA)基因的等位基因模式，存在杂合的FcγRIIA 131H/R基因型或存在纯合的FcγRIIA 131R/R基因型表明该个体对所述IL-2免疫治疗将显示阳性治疗反应。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述个体需要IL-2免疫治疗来治疗癌症。

11.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述个体还正在用靶向在所述癌症细胞表面表达的细胞表面抗原的抗体进行治疗。

12.如权利要求11所述的方法，其特征在于，所述抗体是免疫球蛋白G1(IgG1)单克隆抗体。

13.如权利要求10、11或12中任一项所述的方法，其特征在于，所述癌症是B-细胞淋巴瘤。

14.如权利要求13所述的方法，其特征在于，所述B-细胞淋巴瘤是非何杰金B-细胞淋巴瘤。

15.如权利要求10、11或12中任一项所述的方法，其特征在于，所述癌症选自：乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、前列腺癌、结肠癌、黑色素瘤、肾细胞癌、急性髓性白血病(AML)和慢性淋巴细胞性白血病(CLL)。

16.如权利要求9-15中任一项所述的方法，其特征在于，通过选自以下的方法检测所述FcγRIIA基因的等位基因模式：等位基因特异性杂交、引物特异性延伸、寡核苷酸连接试验、限制性酶切位点分析和单链构型多态性分析。

17.一种提高含有纯合Fcγ受体RIIIA(FcγRIIIA)158F/F基因型个体的免疫功能的方法，所述方法包括给予所述个体白介素-2免疫治疗。

18.如权利要求17所述的方法，其特征在于，所述IL-2免疫治疗包括给予所述个体至少一种治疗有效剂量的IL-2或其生物学活性变体。

19.如权利要求18所述的方法，其特征在于，给予所述个体多份治疗有效剂量的IL-2或其变体。

20.如权利要求19所述的方法，其特征在于，所述IL-2或其变体按每日一次给药方案给予。

21.如权利要求19所述的方法，其特征在于，所述IL-2或其变体按每周两次或每周三次给药方案给予。

22.如权利要求17-21中任一项所述的方法，其特征在于，所述IL-2或其变体皮下给予。

23.如权利要求17-21中任一项所述的方法，其特征在于，所述IL-2或其变体以选自以下的药物组合物提供：单体IL-2药物组合物、多聚体IL-2组合物、冻干的IL-2药物组合物和喷雾干燥的IL-2药物组合物。

24.如权利要求17-23中任一项所述的方法，其特征在于，所述IL-2是具有人IL-2氨基酸序列的重组产生的IL-2或其与人IL-2的氨基酸序列具有至少70％序列相同性的变体。

25.如权利要求24所述的方法，其特征在于，所述IL-2的变体是脱-丙氨酰-1，丝氨酸125人白介素-2。

26.如权利要求17-25中任一项所述的方法，其特征在于，还包括给予所述个体免疫球蛋白G1(IgG1)单克隆抗体。

27.如权利要求26所述的方法，其特征在于，所述个体正接受癌症治疗。

28.如权利要求27所述的方法，其特征在于，所述癌症是B-细胞淋巴瘤。

29.如权利要求28所述的方法，其特征在于，所述B-细胞淋巴瘤是非何杰金B-细胞淋巴瘤。

30.如权利要求29所述的方法，其特征在于，所述IgG1单克隆抗体是抗-CD20抗体或其抗原结合片段。

31.如权利要求27所述的方法，其特征在于，所述癌症选自乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、前列腺癌、结肠癌、黑色素瘤、肾细胞癌、急性髓性白血病(AML)和慢性淋巴细胞性白血病(CLL)。

32.如权利要求27所述的方法，其特征在于，所述IgG1单克隆抗体选自：Therex、MDX-010、EMD 72000、Erbitux、WX-G250、IDM-1、MDX-210、ZAMYL、Campath和它们的抗原结合片段。

33.一种提高含有杂合Fcγ受体RIIA(FcγRIIA)131H/R基因型或纯合FcγRIIA131R/R基因型个体的免疫功能的方法，所述方法包括给予所述个体白介素-2免疫治疗。

34.如权利要求33所述的方法，其特征在于，所述IL-2免疫治疗包括给予所述个体至少一种治疗有效剂量的IL-2或其生物学活性变体。

35.如权利要求34所述的方法，其特征在于，给予所述个体多份治疗有效剂量的IL-2或其变体。

36.如权利要求35所述的方法，其特征在于，所述IL-2或其变体按每日一次给药方案给予。

37.如权利要求35所述的方法，其特征在于，所述IL-2或其变体按每周两次或每周三次给药方案给予。

38.如权利要求33-37中任一项所述的方法，其特征在于，所述IL-2或其变体皮下给予。

39.如权利要求33-38中任一项所述的方法，其特征在于，所述IL-2或其变体以选自以下的药物组合物提供：单体IL-2药物组合物、多聚体IL-2组合物、冻干的IL-2药物组合物和喷雾干燥的IL-2药物组合物。

40.如权利要求33-39中任一项所述的方法，其特征在于，所述IL-2是具有人IL-2氨基酸序列的重组产生的IL-2或其与人IL-2的氨基酸序列具有至少70％序列相同性的变体。

41.如权利要求40所述的方法，其特征在于，所述IL-2的变体是脱-丙氨酰-1，丝氨酸125人白介素-2。

42.如权利要求33-41中任一项所述的方法，其特征在于，还包括给予所述个体免疫球蛋白G1(IgG1)单克隆抗体。

43.如权利要求42所述的方法，其特征在于，所述个体正接受癌症治疗。

44.如权利要求43所述的方法，其特征在于，所述癌症是B-细胞淋巴瘤。

45.如权利要求44所述的方法，其特征在于，所述B-细胞淋巴瘤是非何杰金B-细胞淋巴瘤。

46.如权利要求45所述的方法，其特征在于，所述IgG1单克隆抗体是抗-CD20抗体或其抗原结合片段。

47.如权利要求43所述的方法，其特征在于，所述癌症选自：乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、前列腺癌、结肠癌、黑色素瘤、肾细胞癌、急性髓性白血病(AML)和慢性淋巴细胞性白血病(CLL)。

48.如权利要求43所述的方法，其特征在于，所述IgG1单克隆抗体选自：Therex、MDX-010、EMD 72000、Erbitux、WX-G250、IDM-1、MDX-210、ZAMYL、Campath和它们的抗原结合片段。

49.一种治疗含有纯合FcγIIIA(FcγRIIIA)158F/F基因型个体的癌症的方法，所述方法包括给予所述个体白介素-2免疫治疗。

50.如权利要求49所述的方法，其特征在于，所述IL-2免疫治疗包括给予所述个体至少一种治疗有效剂量的IL-2或其生物学活性变体。

51.如权利要求50所述的方法，其特征在于，给予所述个体多份治疗有效剂量的IL-2或其变体。

52.如权利要求51所述的方法，其特征在于，所述IL-2或其变体按每日一次给药方案给予。

53.如权利要求51所述的方法，其特征在于，所述IL-2或其变体按每周两次或每周三次给药方案给予。

54.如权利要求49-53中任一项所述的方法，其特征在于，所述IL-2或其变体皮下给予。

55.如权利要求49-54中任一项所述的方法，其特征在于，所述IL-2或其变体以选自以下的药物组合物提供：单体IL-2药物组合物、多聚体IL-2组合物、冻干的IL-2药物组合物和喷雾干燥的IL-2药物组合物。

56.如权利要求49-55中任一项所述的方法，其特征在于，所述IL-2是具有人IL-2氨基酸序列的重组产生的IL-2或其与人IL-2的氨基酸序列具有至少70％序列相同性的变体。

57.如权利要求56所述的方法，其特征在于，所述IL-2的变体是脱-丙氨酰-1，丝氨酸125人白介素-2。

58.如权利要求49-57中任一项所述的方法，其特征在于，还包括给予所述个体免疫球蛋白G1(IgG1)单克隆抗体。

59.如权利要求58所述的方法，其特征在于，所述个体正接受癌症治疗。

60.如权利要求59所述的方法，其特征在于，所述癌症是B-细胞淋巴瘤。

61.如权利要求60所述的方法，其特征在于，所述B-细胞淋巴瘤是非何杰金B-细胞淋巴瘤。

62.如权利要求61所述的方法，其特征在于，所述IgG1单克隆抗体是抗-CD20抗体或其抗原结合片段。

63.如权利要求59所述的方法，其特征在于，所述癌症选自：乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、前列腺癌、结肠癌、黑色素瘤、肾细胞癌、急性髓性白血病(AML)和慢性淋巴细胞性白血病(CLL)。

64.如权利要求59所述的方法，其特征在于，所述IgG1单克隆抗体选自：Therex、MDX-010、EMD 72000、Erbitux、WX-G250、IDM-1、MDX-210、ZAMYL、Campath和它们的抗原结合片段。

65.一种治疗含有杂合FcγIIA(FcγRIIA)131H/R基因型或纯合FcγRIIA131R/R基因型个体的癌症的方法，所述方法包括给予所述个体白介素-2免疫治疗。

66.如权利要求65所述的方法，其特征在于，所述IL-2免疫治疗包括给予所述个体至少一种治疗有效剂量的IL-2或其生物学活性变体。

67.如权利要求66所述的方法，其特征在于，给予所述个体多份治疗有效剂量的IL-2或其变体。

68.如权利要求67所述的方法，其特征在于，所述IL-2或其变体按每日一次给药方案给予。

69.如权利要求67所述的方法，其特征在于，所述IL-2或其变体根据每周两次或每周三次给药方案给予。

70.如权利要求65-69中任一项所述的方法，其特征在于，所述IL-2或其变体皮下给予。

71.如权利要求65-70中任一项所述的方法，其特征在于，所述IL-2或其变体以选自以下的药物组合物提供：单体IL-2药物组合物、多聚体IL-2组合物、冻干的IL-2药物组合物和喷雾干燥的IL-2药物组合物。

72.如权利要求65-71中任一项所述的方法，其特征在于，所述IL-2是具有人IL-2氨基酸序列的重组产生的IL-2或其与人IL-2的氨基酸序列具有至少70％序列相同性的变体。

73.如权利要求72所述的方法，其特征在于，所述IL-2的变体是脱-丙氨酰-1，丝氨酸125人白介素-2。

74.如权利要求65-73中任一项所述的方法，其特征在于，还包括给予所述个体免疫球蛋白G1(IgG1)单克隆抗体。

75.如权利要求74所述的方法，其特征在于，所述个体正接受癌症治疗。

76.如权利要求75所述的方法，其特征在于，所述癌症是B-细胞淋巴瘤。

77.如权利要求76所述的方法，其特征在于，所述B-细胞淋巴瘤是非何杰金B-细胞淋巴瘤。

78.如权利要求77所述的方法，其特征在于，所述IgG1单克隆抗体是抗-CD20抗体或其抗原结合片段。

79.如权利要求75所述的方法，其特征在于，所述癌症选自：乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、前列腺癌、结肠癌、黑色素瘤、肾细胞癌、急性髓性白血病(AML)和慢性淋巴细胞性白血病(CLL)。

80.如权利要求75所述的方法，其特征在于，所述IgG1单克隆抗体选自：Therex、MDX-010、EMD 72000、Erbitux、WX-G250、IDM-1、MDX-210、ZAMYL、Campath和它们的抗原结合片段。

81.一种用于诊断方法的试剂盒，所述诊断方法用于预测需要白介素-2(IL-2)免疫治疗的个体对IL-2免疫治疗的治疗反应，所述试剂盒装有至少一种与Fcγ受体IIIA(FcγRIIA)基因毗邻区域或其多态性区域特异性杂交的探针或引物，所述多态性区域包含编码FcγRIIIA 158F等位基因的核苷酸。

82.如权利要求81所述的试剂盒，其特征在于，还装有使用说明书。

83.一种用于诊断方法的试剂盒，所述诊断方法用于预测需要白介素-2(IL-2)免疫治疗的个体对IL-2免疫治疗的治疗反应，所述试剂盒装有至少一种与Fcγ受体IIA(FcγRIIA)基因毗邻区域或其多态性区域特异性杂交的探针或引物，所述多态性区域包含编码FcγRIIA 131R等位基因的核苷酸。

84.如权利要求83所述的试剂盒，其特征在于，还装有使用说明书。

85.一种预测需要白介素-2(IL-2)免疫治疗的个体对IL-2免疫治疗的治疗反应的诊断方法，所述方法包括检测所述个体的Fcγ受体IIIA(FcγIIIA)基因的等位基因模式，其中存在纯合FcγRIIIA 48L/L基因型、杂合FcγRIIIA 48L/R基因型或杂合FcγRIIIA 48L/H基因型表明该个体对所述IL-2免疫治疗将显示阳性治疗反应。

86.如权利要求85所述的方法，其特征在于，所述个体需要IL-2免疫治疗来治疗癌症。

87.如权利要求86所述的方法，其特征在于，所述个体还正在用靶向在所述癌症细胞表面表达的细胞表面抗原的抗体进行治疗。

88.如权利要求87所述的方法，其特征在于，所述抗体是免疫球蛋白G1(IgG1)单克隆抗体。

89.如权利要求86、87或88所述的方法，其特征在于，所述癌症是B-细胞淋巴瘤。

90.如权利要求89所述的方法，其特征在于，所述B-细胞淋巴瘤是非何杰金B-细胞淋巴瘤。

91.如权利要求86、87或88所述的方法，其特征在于，所述癌症选自：乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、前列腺癌、结肠癌、黑色素瘤、肾细胞癌、急性髓性白血病(AML)和慢性淋巴细胞性白血病(CLL)。

92.如权利要求85-91所述的方法，其特征在于，通过选自以下的方法检测所述FcγRIIIA基因的等位模式：等位基因特异性杂交、引物特异性延伸、寡核苷酸肽连接试验、限制性酶切位点分析和单链构型多态性分析。

93.一种提高含有纯合FcγRIIIA(FcγRIIIA)48L/L基因型个体的免疫功能的方法，所述方法包括给予所述个体白介素-2免疫治疗。

94.如权利要求93所述的方法，其特征在于，所述IL-2免疫治疗包括给予所述个体至少一种治疗有效剂量的IL-2或其生物学活性变体。

95.如权利要求94所述的方法，其特征在于，给予所述个体多份治疗有效剂量的IL-2或其变体。

96.如权利要求95所述的方法，其特征在于，所述IL-2或其变体按每日一次给药方案给予。

97.如权利要求95所述的方法，其特征在于，所述IL-2或其变体按每周两次或每周三次给药方案给予。

98.如权利要求93-97中任一项所述的方法，其特征在于，所述IL-2或其变体皮下给予。

99.如权利要求93-98中任一项所述的方法，其特征在于，所述IL-2或其变体以选自以下的药物组合物提供：单体IL-2药物组合物、多聚体IL-2组合物、冻干的IL-2药物组合物和喷雾干燥的IL-2药物组合物。

100.如权利要求93-99中任一项所述的方法，其特征在于，所述IL-2是具有人IL-2氨基酸序列的重组产生的IL-2或其与人IL-2的氨基酸序列具有至少70％序列相同性的变体。

101.如权利要求100所述的方法，其特征在于，所述IL-2的变体是脱-丙氨酰-1，丝氨酸125人白介素-2。

102.如权利要求93-101中任一项所述的方法，其特征在于，还包括给予所述个体免疫球蛋白G1(IgG1)单克隆抗体。

103.如权利要求102所述的方法，其特征在于，所述个体正接受癌症治疗。

104.如权利要求103所述的方法，其特征在于，所述癌症是B-细胞淋巴瘤。

105.如权利要求104所述的方法，其特征在于，所述B-细胞淋巴瘤是非何杰金B-细胞淋巴瘤。

106.如权利要求105所述的方法，其特征在于，所述IgG1单克隆抗体是抗-CD20抗体或其抗原结合片段。

107.如权利要求103所述的方法，其特征在于，所述癌症选自：乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、前列腺癌、结肠癌、黑色素瘤、肾细胞癌、急性髓性白血病(AML)和慢性淋巴细胞性白血病(CLL)。

108.如权利要求103所述的方法，其特征在于，所述IgG1单克隆抗体选自：Therex、MDX-010、EMD 72000、Erbitux、WX-G250、IDM-1、MDX-210、ZAMYL、Campath和它们的抗原结合片段。

109.一种治疗含有杂合FcγIIA(FcγRIIA)131H/R基因型或纯合FcγRIIA131R/R基因型个体的癌症的方法，所述方法包括给予所述个体白介素-2免疫治疗。

110.如权利要求109所述的方法，其特征在于，所述IL-2免疫治疗包括给予所述个体至少一种治疗有效剂量的IL-2或其生物学活性变体。

111.如权利要求110所述的方法，其特征在于，给予所述个体多份治疗有效剂量的IL-2或其变体。

112.如权利要求111所述的方法，其特征在于，所述IL-2或其变体按每日一次给药方案给予。

113.如权利要求111所述的方法，其特征在于，所述IL-2或其变体按每周两次或每周三次给药方案给予。

114.如权利要求109-113中任一项所述的方法，其特征在于，所述IL-2或其变体皮下给予。

115.如权利要求109-114中任一项所述的方法，其特征在于，所述IL-2或其变体以选自以下的药物组合物提供：单体IL-2药物组合物、多聚体IL-2组合物、冻干的IL-2药物组合物和喷雾干燥的IL-2药物组合物。

116.如权利要求109-115中任一项所述的方法，其特征在于，所述IL-2是具有人IL-2氨基酸序列的重组产生的IL-2或其与人IL-2的氨基酸序列具有至少70％序列相同性的变体。

117.如权利要求116所述的方法，其特征在于，IL-2的变体是脱-丙氨酰-1，丝氨酸125人白介素-2。

118.如权利要求109-117中任一项所述的方法，还包括给予所述个体免疫球蛋白G1(IgG1)单克隆抗体。

119.如权利要求118所述的方法，其特征在于，所述个体正接受癌症治疗。

120.如权利要求119所述的方法，其特征在于，所述癌症是B-细胞淋巴瘤。

121.如权利要求120所述的方法，其特征在于，所述B-细胞淋巴瘤是非何杰金B-细胞淋巴瘤。

122.如权利要求121所述的方法，其特征在于，所述IgG1单克隆抗体是抗-CD20抗体或其抗原结合片段。

123.如权利要求119所述的方法，其特征在于，所述癌症选自：乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、前列腺癌、结肠癌、黑色素瘤、肾细胞癌、急性髓性白血病(AML)和慢性淋巴细胞性白血病(CLL)。

124.如权利要求119所述的方法，其特征在于，所述IgG1单克隆抗体选自：Therex、MDX-010、EMD 72000、Erbitux、WX-G250、IDM-1、MDX-210、ZAMYL、Campath和它们的抗原结合片段。

125.一种用于诊断方法的试剂盒，所述诊断方法用于预测需要白介素-2(IL-2)免疫治疗的个体对IL-2免疫治疗的治疗反应，所述试剂盒装有至少一种与Fcγ受体IIIA(FcγRIIA)基因毗邻区域或其多态性区域特异性杂交的探针或引物，所述多态性区域包含编码FcγRIIIA 48L等位基因的核苷酸。

126.如权利要求125所述的试剂盒，其特征在于，还装有使用说明书。

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