CN1898254A

CN1898254A - 肽合成的新偶联剂

Info

Publication number: CN1898254A
Application number: CNA2004800380876A
Authority: CN
Inventors: L·A·卡尔皮诺; 夏举松; 张重武; C·D·斯弗迪恩
Original assignee: University of Massachusetts UMass
Current assignee: University of Massachusetts UMass
Priority date: 2003-10-30
Filing date: 2004-11-01
Publication date: 2007-01-17
Also published as: US8471006B2; IL175297A0; US8217169B2; US20110028720A1; EP1687318A2; WO2005042562A2; WO2005042562A3; US7812158B2; CA2543930A1; AU2004285951A1; EP1687318A4; US20070112196A1; US20120277428A1

Abstract

本发明涉及式(I)和(II)所示化合物或它们的盐或N－氧化物以及它们在肽合成中的应用。

Description

肽合成的新偶联剂

政府支持

本项工作受到国家卫生研究院基金GM-09706和国家科学基金(CHE-9003190)的支持。政府对本发明享有一定权利。

发明背景

发明领域

本发明涉及影响酰胺形成，特别是肽合成中的酰化步骤的新方法。

现有技术描述

多肽，特别是蛋白质在活细胞的基础生化过程中起重要作用。由蛋白质构成的酶催化生化反应，包括代谢反应。这些蛋白质是手性分子，可能经常存在的各种立体异构体中，其中一种通常是最有效的。

此外，多肽也用作药物。近年来，发现多肽可用于抵御各种疾病，包括癌症、糖尿病、植物毒素等。另外，肽显示出作为生长促进剂、抑制剂、抗生素、杀虫剂、避孕药、抗高血压药、安眠药、抗抑郁药、镇痛药等的特定活性。

蛋白质合成始终是化学家所面临的挑战。然而，化学合成可提供遗传工程或其它生物方法，例如分离天然蛋白质所不具有的优势。首先，化学合成可用于确定蛋白质的结构。此外，蛋白质合成对于合成类似物是必需的。这使得科学家能评估与分子结构相关的生物活性和/或药理作用。

肽化学合成的成功部分取决于使用合适的偶联剂与合适的保护基团。特别是在肽合成中，两个氨基酸之间形成肽键需要在反应开始之前活化其中一个氨基酸的羧基。然而，与偶联反应相关联的活化步骤导致在被活化的羧基处丧失构型的严重问题。因此，设计肽的化学合成的目标是提供良好产率并保持羧基部分的构型完整性，即外消旋化最低的肽产物。由于最佳方法需要将酸转化为携带良好离去基团的衍生物，因此难以同时实现良好的产量和最低或没有外消旋化。所以在常规偶联条件下，构型会丧失。

此外，当前的合成方法也易于发生降低产率的副反应。

当前通过传统或各种重复方法在溶液中合成肽。或者可在固体载体上合成肽(Merrifield方法)。这些都是通常的技术，从偶联两个或更多个氨基酸来合成肽，从偶联氨基酸与较小的肽或偶联较小的肽来合成较大的肽。溶液方法具有易于监测的优点，从而可在任何阶段纯化中间体(如果需要的话)。然而，其主要缺点在于相对较慢的合成速度以及每步需手工操作。

Merrifield方法的优点是易于自动化，从而可进行无人的、计算机控制的机器合成。不幸的是，由于在其上进行合成的载体的不可溶性质使得该方法有固有的缺陷。除非每一酰化步骤以约100％的效率发生，混合物不可避免地会累积于聚合物上。链越长越可能被不利的副反应所污染。在这种反应中产生的副产物持续污染所需产物直至其在循环结束时从聚合基质上除去。这些现有技术不能用于制备大于40-50个残基的肽；当合成较大的肽时，从所需产物中分离副产物的困难骤增。

因此，就非常长的片段而言(50或更多个氨基酸)，现有方法不令人满意。获得的混合物经常具有如此糟糕的复杂性以至于难于或不能分离所需肽。

如果可发现基础氨基酸的合适的衍生物和/或偶联反应的合适条件，则可解决以上本文列举的问题。保护基团，例如叔丁氧羰基(t-Boc)或N-α-(9-芴基甲基)氧羰基(Fmoc)用于尽可能减少副反应。

最常用的偶联试剂是与各种添加剂一起使用的碳二亚胺，例如二环己基碳二亚胺、二异丙基碳二亚胺、1-乙基-3-(3’-二甲基氨基丙基)碳二亚胺。

添加剂通常抑制副反应并降低外消旋化。迄今为止，在用于肽合成的肽偶联过程中最常用的肽偶联添加剂是1-羟基苯并三唑(HOBt)。该试剂既可与碳二亚胺也可与其它偶联剂联用，或者作为独立试剂，例如1-苯并三唑基氧三(二甲基氨基)六氟磷酸(BOP)或类似的脲盐的组成部分。HOBt适用于分步或片段缩合。然而，许多时候遇到HOBt无效的情况，可能是因为氨基部分的位阻效应或碱性弱。由于可能有严重的外消旋化问题，在除甘氨酸或脯氨酸以外的氨基酸单元处的片段偶联尤其有问题。相关的N-羟基苯并三唑酮(HOOBt)可提供抗外消旋化的较好保护，但由于参与开环的竞争性副反应，它极少使用。使用BOP的一个缺点在于它产生毒性副产物，六甲基磷酸三酰胺。

近来，其它偶联剂得到介绍，例如N-[1-H-苯并三唑-1-基](二甲基氨基)亚甲基]-N-甲基甲铵(methanaminium)-六氟磷酸盐N-氧化物(HBTU)、N-[(1-H-苯并三唑)二甲基氨基]亚甲基]N-甲基甲铵四氟硼酸盐N-氧化物(TBTU)、O-(苯并三唑-1-基)-1，3-二甲基-1，3-二亚甲基脲六氟磷酸盐(HBMDU)、O-(苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-双(四亚甲基)脲六氟磷酸盐(HBPyU)和O-(苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-双(五亚甲基)脲六氟磷酸盐(HBPipU)。

用于肽合成的另一种添加剂是3-羟基-4-氧代-3，4-二氢-1，2，3-苯并三嗪(HODhbt)。HODhbt已证实一般优于HOBt。此外，使用它可通过酰化完成时的颜色变化来目测追踪反应完成。然而，由于固有的副反应，HODhbt具有与之相关的问题。

其它添加剂也适用于肽偶联，包括O-(3，4-二氢-4-氧代-1，2，3-苯并三嗪-3-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸盐、O-(3，4-二氢-4-氧代-1，2，3-苯并三嗪-3-基)-1，1，3，1-四甲基脲四氟硼酸盐和[3，4-二氢-4-氧代-1，2，3-苯并三嗪-3基]氧]三(吡咯烷基)六氟磷酸盐。

有助于肽偶联的其它试剂也已有描述。例如， Tetrahedron Letters，1994，2279-2282，Carpino等公开了分别命名为HAPyU和AOP的1-羟基-7-氮杂苯并三唑及其相应的脲盐和盐在固相肽片段偶联方法模型中有效促进肽偶联并避免外消旋化。此外，例如Carpino等，在 J.Org.Chem.，1994，59，695-698中公开了命名为HBTU、HATU、HAPyU和HAMDU的氮杂苯并三唑基脲盐用在肽合成中。

授予Carpino的美国专利号5,644,029公开了下式所示化合物或其N-氧化物或其盐等在促进肽偶联中的应用：

其中

R₁和R₂与和它们相连的碳原子结合在一起，形成杂芳基环，其中所述杂芳基环是含有从3个到最多总共13个环碳原子的含氧、硫或氮的杂芳环，所述杂芳基可以是未取代的或被低级烷基或供电子基团取代；

Y是O、NR₄、CR₄R₅；

R₅独立为氢或低级烷基；

X可以是CR₆R₇或NR₆；

R₆和R₇独立为氢或低级烷基；或者R₆和R₇结合在一起，形成氧代基团或当n＝0时，R₄和R₆结合在一起，在Y的氮或碳原子和X的氮或碳原子之间形成键；

Q是(CR₈R₉)或(NR₈)；

当n＝1时，R₄和R₈结合在一起，在Q的环碳或氮原子和R₈的环碳或氮原子之间形成键；

n是0或1；

R₃是氢低级烷基羰基、芳基羰基、低级芳基烷基羰基、

一种带正电的吸电子基团、SO₂R₁₄或

R₁₄是低级烷基、芳基或低级芳基烷基；q是0-3；

R₈和R₉独立为氢或低级烷基，或者R₇和R₈与和它们相连的碳结合在一起，形成芳环，AA₁是氨基酸，BLK是氨基保护基团，m是0或1。

本发明人发现了其它偶联剂，所述偶联剂可提供相对纯的产物和少许一起产生副产物(如果有的话)以及最低的外消旋化(如果有的话)。此外，反应条件非常温和并且所用试剂易于制备。因此通过使用本发明的化合物作为添加剂可提高肽产率并且发生极少的外消旋化(如果有的话)。

发明概述

本发明涉及式I所示化合物及其在肽合成的肽键制备中的应用，所述化合物如下式所示：

或式I所述化合物的N-氧化物或盐，其中

R₁和R₂与和它们相连的碳原子结合在一起，形成芳基或杂芳基环，其中所述芳基环是含有6-14个环碳原子的芳香族，所述杂芳基环是含有氧、硫或氮的杂芳香族，其含有至少1个最多达4个选自氧、氮和硫的杂环原子并且含有3到最多共13个环碳原子，所述芳基和杂芳基可各自独立是未取代的或被低级烷基或供电子基团或吸电子基团取代；

Q是CR₈R₉或NR₈；

Y是O、NR₄或CR₄R₅；

X是CR₆R₇或NR₆；

R₅是氢或低级烷基；

R₄是氢或低级烷基或

当Y是NR₄或CR₄R₅并且当Q不存在时，R₄和R₆在X和Y之间可形成键；或者当Y是NR₄或CR₄R₅并且当Q存在时，R₄和R₈可在Y和Q之间形成键，或者当Q存在时，R₆和R₈可在Q和X之间形成键；

R₈和R₉独立为氢或低级烷基，或者当Q存在时，R₈与R₄结合在一起，可在Q和Y之间形成键，当Y是NR₄或CR₄R₅或当Q存在时，R₈和R₆可在Q和X之间形成键；

R₆和R₇独立为氢或低级烷基，或者R₆和R₇结合在一起，形成氧代；或者当Q不存在并且Y是NR₄或CR₄R₅时，R₆与R₄结合在一起，可在Y和X之间形成键，或者当Q存在时，R₆和R₈结合在一起，可在Q和X之间形成键；当X和Q与Q和Y之间不能同时具有双键；

n是0或1；

R₃是

或

R₁₀是OR₁₂、低级烷基、芳基、芳基低级烷基、低级环烷基、低级环烷基低级烷基、杂环基、杂环基低级烷基、环烯基或环烯基低级烷基；

R₁₁是OR₁₃、低级烷基、芳基、芳基低级烷基、低级环烷基、低级环烷基低级烷基、杂环基或杂环基低级烷基环烯基或环烯基低级烷基，或者R₁₀和R₁₁可通过S、O、NR₃₀或(CHR₃₀)_m组成的桥连基团相连，其中R₃₀是低级烷基或H，m是1-3，从而使得R₁₀和R₁₁与磷原子结合在一起，形成5或6元环；

R₁₂和R₁₃独立为低级烷基、芳基、芳基低级烷基、低级环烷基、低级环烷基低级烷基、杂环基、杂环基低级烷基、环烯基或环烯基低级烷基；

环A₁和B独立为含有6-14个环碳原子的芳环或含有5-14个环碳原子的环烯基或环烷基；

T是CHR₃₁、O、S或NR₃₁；

R₃₁是低级烷基或H；和

Rb₁、Rb₂、Rc₁和Rc₂独立为氢、低级烷基或供电子基团。

在另一个实施方案中，本发明涉及式II所示的化合物或其中阳离子部分具有式II所示结构的盐和该化合物或盐的应用：

或其N氧化物或式II所述化合物的盐，其中

R₁和R₂与和它们相连的碳原子结合在一起，形成杂芳基环，其中所述杂芳基含有至少1个最多4个选自O、S和N的环杂原子并且含有3个到最多总共13个环碳原子，所述杂环基可以是未取代的或用低级烷基或供电子基团或吸电子基团取代；

Y₁是N或CR₁₅；

R₁₅是H或低级烷基；

Q₁是N或CR₁₆；

R₁₆是H或低级烷基；和

R₁₄是氢、带正电荷的吸电子基团、SO₂R₁₇、低级烷基羰基、芳基羰基、低级芳基烷基羰基、BLK₁AA₁，

或

R₁₁是OR₁₃、低级烷基、芳基、芳基低级烷基、低级环烷基、低级环烷基低级烷基、杂环基、杂环基低级烷基、环烯基或环烯基低级烷基；或

R₁₀和R₁₁可任选通过由O、NR₃₀或(CHR₃₀)_m构成的桥连基团T₁相连，其中R₃₀是低级烷基或H，m是1-3；

R₁₂和R₁₃独立为低级烷基、芳基、芳基低级烷基、低级环烷基、低级环烷基低级烷基、杂环基、杂环基低级烷基、低级环烯基或环烯基低级烷基；

T是O、S、NR₃₁或CHR₃₁；

R₃₁是H或低级烷基；和

Rb₁、Rb₂、Rc₁和Rc₂独立为氢、低级烷基或供电子基团；

R₁₇是芳基、低级烷基或低级芳基烷基，AA₁是氨基酸或在N-末端少一个氢原子在C-末端少一个OH的肽，BLK₁是氨基保护基团。此外，本发明涉及式II所示化合物或当R₁₄是带正电荷的吸电子基团时，其阳离子部分具有式II所示结构的盐在制备肽中的应用。

本发明的其它实施方案涉及从氨基化合物和羧酸的酰化衍生物之间的反应制备肽键的方法，所述氨基化合物是氨基酸或肽，所述羧酸是N-末端氨基受保护的氨基酸或N-末端氨基受保护的肽，该方法包括使所述氨基化合物与所述羧酸的酰化衍生物在存在有效量的式I或式II所示化合物或阳离子部分具有式II所示结构的盐时，在有效形成肽键的条件下反应。

在另一个实施方案中，本发明涉及从具有游离氨基的有机胺和羧酸的酰化衍生物的反应形成酰胺的方法，该方法包括使所述胺和羧酸的酰化衍生物与有效量的式I或II所示化合物或当R₁₄是带正电荷的吸电子基团时，与阳离子部分具有式II所示结构的盐在有效形成酰胺的条件下反应。

本发明的其它实施方案涉及合成肽的方法，包括(a)使第一Nα-氨基受保护的氨基酸与肽合成树脂在将氨基酸有效共价连接至树脂的条件下反应，(b)将保护基团从氨基酸上切除以形成具有游离氨基的胺，(c)在存在肽形成有效量的式I或II所示化合物或阳离子部分具有式II所示结构的盐(当R₁₄是带正电荷的吸电子基团时)时使所述胺与第二Nα-氨基受保护的氨基酸反应，所述反应在肽形成条件下进行，(d)重复步骤(b)和(c)直至获得所需肽，和(e)从树脂上取下肽。

发明详述

本文使用的术语“式II的盐”或任何涉及式II的盐的术语表示由阴离子和阳离子构成的式II的盐，其中阳离子部分带正电荷。正电荷可得自式II所示化合物例如在酸的存在下的质子化，或可得自R₁₄是带正电荷的吸电子基团。如果涉及到式II的盐，其中式II所示结构含有带正电荷的吸电子基团，可使用术语“式II的阳离子”或其等价术语。

如上所述，本发明的一个实施方案涉及式I或式II所示化合物或其盐或其N-氧化物或式I的阳离子以及它们在肽偶联中的应用。换言之，在存在式I或II所示化合物或其盐或其N-氧化物或式II的阳离子时，在酰胺形成条件下使各具有游离氨基的第一氨基酸或第一肽与第二氨基酸或第二肽的酰化衍生物偶联以形成肽键从而形成更大的肽。

本文使用的术语“杂芳基”是含有至少一个、最多4个选自氮、硫和氧的环杂原子的杂芳基。杂芳基含有5-14个环原子、最多总共13个环碳原子和总共18个碳原子。杂芳基可以是单环、双环或三环，但是优选杂芳基是双环并且特别优选单环。该表达方式也包括苯并杂环。所述杂芳基优选含有不超过两个环杂原子，最优选含有一个环杂原子。最优选的环杂原子是氧和氮，最优选氮。

如果氮是环原子，也可形成N-氧化物。本发明考虑了含有氮的杂芳基的N氧化物。

杂芳基的例子包括噻吩基、苯并噻吩基、1-萘并噻吩基、噻蒽基、呋喃基、苯并呋喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、吲哚基、异吲哚基、吲唑基、嘌呤基、异喹啉基、喹啉基、1，5-二氮杂萘基(napthyridinyl)、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基、蝶啶基(pteridinyl)、咔啉基、异噻唑基、异噻唑基等。杂芳基优选是吡啶基、吡咯基、呋喃基、吲哚基、喹啉基(quninolyl)、异喹啉基或苯并呋喃基。特别优选的是吡啶基。

当R₁和R₂与和它们相连的碳结合在一起，形成三环杂芳基时，则式I或II所示化合物是四环的；如果当R₁和R₂与和它们相连的碳结合在一起，形成双环杂芳基时，则式I或II所示化合物是三环的。最后如果R₁和R₂的结合在一起，形成单环杂芳基时，式I或II所示化合物是双环的。式I或II所示化合物优选是三环，特别是双环的。

当本文使用的术语“杂环基”单独使用或与其它基团联用时，表示含有至少一个、最多4个选自氮、硫和氧的杂原子，5-14个环原子和最多共18个碳原子的杂环基环。杂环基可是单环、双环或三环。它可以是完全饱和的或可以是部分不饱和的，即，它可在环原子之间含有一个或多个双键。杂环基优选含有0、1、2、3或4个双键。术语杂环基也包括本文定义的杂芳基。此外，杂环基部分优选含有不超过两个环杂原子，最优选不超过一个环杂原子。例子包括四氢呋喃、吗啉基、哌嗪基、2-四氢喹啉基、3-四氢喹啉基、6-四氢喹啉基或7-四氢喹啉基等。

当术语“低级烷基”单独使用或与其它基团联用时，表示含有1-6个碳原子的碳链。它可以是直链或支链的，包括甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、戊基、己基等。优选的低级烷基含有1-3个碳原子，最优选甲基。

单用或联用的本文使用的术语“芳基”表示含有6-10个环碳原子和最多共15个碳原子的芳环。包括苯基、α-萘基、β-萘基等。优选的芳基是苯基。该术语不包括杂芳基。

芳烷基是通过亚烷基桥与主链相连的芳基。这种基团包括苄基、苯乙基等。

“低级烷基羰基”表示通过羰基与主链相连的低级烷基。类似地，“芳基羰基”指通过羰基与主链相连的芳基。

本文使用的“低级环烷基”指含有3-10个碳环原子和最多共15个碳原子的环烷基。环烷基可以是单环、双环或三环。例子包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、降冰片烷基、金刚烷基、萘烷基等。低级环烷基优选环戊基和环己基。

“低级环烷基低级烷基”是通过亚烷基桥与主链相连的低级环烷基。这种基团包括环己基甲基、环戊基乙基等。

“环烯基”指含有至少一个双键和最多6个碳碳双键的本文所定义的低级环烷基。它不是完全芳香族的；但可包括芳香族部分。它可包含一个环或稠合到一起的两个或多个环。双键可位于一个环或两个环中。一个或多个环可以是完全芳香族的，而结构中剩余的环(如果有的话)可各自是完全饱和的或含有1或2个双键。然而，应该注意的是，本文定义的环烯基不包括芳基。例子包括环己烯基，环辛烯基，1-、2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-茚满基等。

本文使用的“供电子基团”表示如果处于分子中相同的位置，比氢释放或提供更多电子的基团。参见J.March，《高等有机化学》( Advanced Organic Chemistry)，第三版，John Wiley & Sons第237页，(1985)。这些类型的基团是本领域熟知的。例子包括低级烷基氨基、二低级烷基氨基、氨基、卤素、芳基、低级烷氧基、低级芳烷氧基(aralkoxy)、芳氧基(aryloxy)、巯基、低级烷硫基(alkylthio)等。优选的供电子基团是氨基、羟基、低级烷氧基、低级烷基氨基和二低级烷基氨基。

本文定义的术语“吸电子基团”指如果处于分子中相同位置比氢原子向自身拉电子更多的基团。参见J.March，《高等有机化学》( Advanced Organic Chemistry)，第三版，John Wiley & Sons第237页，(1985)。这些基团包括硝基、单卤代烷基、二卤代烷基、三卤代烷基(例如，CF₃)、卤素、甲酰基、低级烷酰基、低级烷基磺酰基、低级烷基亚硫酰基、羧基、低级烷氧基羰基、亚磺酰氨基、酰氨基、CONR₅₀R₅₁，其中R₅₀和R₅₁独立为氢、低级烷基、芳基、芳基低级烷基、杂环基、杂环基低级烷基、低级环烷基、低级环烷基低级环烷基低级烷基、环烯基环烯基低级烷基等。

“带正电荷的吸电子基团”是带有正电荷并与N-氢氧化物(N-O)形成稳定的键的吸电子基团。这些基团的类型是本领域熟知的。例子包括脲(uronium)基团，例如

亚氨基阳离子，例如

或阳离子，例如

等，

其中R₁₈、R₁₉、R₂₀、R₂₁、R₂₂、R₂₃、R₂₄和R₂₅独立为氢、低级烷基、低级烷氧基低级烷基；或者如果形成亚氨基阳离子，R₁₈和R₂₀与和它们相连的氮原子和它们之间的碳原子结合在一起，可形成含有最多6个环原子和最多5个环碳原子的环；或者R₁₈和R₁₉与和它们相连的氮原子在一起，或R₂₀和R₂₁与和它们相连的碳原子结合在一起，可形成含有最多共5个环碳原子的5或6元杂环基环；或者如果形成脲阳离子，R₂₀和R₁₈可与和它们相连的氮结合在一起，形成含有最多5个环碳原子的5或6元杂环基环；或者R₁₈和R₁₉与和它们相连的氮原子结合在一起，或R₂₀和R₂₁与和它们相连的氮原子结合在一起，可各自同时形成每个环含有最多共5个环碳原子的5或6元杂环基环。在脲和亚氨基阳离子中，当存在R₁₈、R₁₉、R₂₀和R₂₁时，优选它们是相同的。特别优选只要存在R₁₈、R₁₉、R₂₀、R₂₁时均是相同的。还更优选与脲、亚氨基和阳离子相关的形成的环是5或6元环。

就阳离子而言，R₁₈和R₁₉和/或R₂₀和R₂₁和/或R₂₂和R₂₃可各自独立与和它们相连的氮原子结合在一起以形成环。因此，阳离子可包含一个环、两个环或三个环。R₁₈和R₁₉、或R₂₀和R₂₁、或R₂₂和R₂₃优选是相同的。特别优选R₁₈、R₁₉、R₂₀、R₂₁、R₂₂和R₂₃是相同的。

就式II的阳离子而言，优选的环状脲和亚氨基分别如下式所示：

和

其中R₁₉和R₂₀如上定义，n₁和n₂独立为0或1，U₁和U₂独立为O、CH₂或NH或N-Alk，其中Alk是低级烷基。

在以上式中，R₁₈、R₁₉、R₂₀、R₂₁、R₂₂和R₂₃优选独立为甲基、乙基、正丁基、戊基和-CH₂CH₂-OCH₂CH₃。R₁₈、R₁₉、R₂₀(对全部)和当R₂₁存在时(就亚氨基而言)，与当R₂₂和R₂₃(就而言)存在时，它们优选是相同的。

当R₁₈、R₁₉、R₂₀、R₂₁存在时，当R₂₂存在时和当R₂₃存在时，它们优选独立为低级烷基，特别是甲基。当R₁₈、R₁₉、R₂₀和R₂₁存在时，当R₂₂存在时和当R₂₃存在时，它们优选是相同的。还优选它们均是甲基。

就脲和/或亚氨基而言，当R₁₈和R₁₉或R₂₀和R₂₁结合在一起形成环时，它们可形成如下式所示的杂环基部分：

或

其中U＝CH₂、O、NH或N-Alk，其中Alk是低级烷基，特别是甲基。

阳离子中的环状基团也优选如下式所示

或

其中U如上定义。

优选R₁和R₂与和它们相连的碳原子结合在一起以形成芳基或杂芳基环，其中芳基环是苯基或萘基，杂芳基环含有5-10个环原子，一个或两个选自O、S、N的环杂原子和3-8个环碳原子。

就式I所示化合物而言，优选以下情况。当n是1时，优选R₇和R₈是氢或低级烷基，但最优选氢。

Y优选是S、O、NR₄或CR₄R₅，其中R₄和R₅独立为氢或甲基。Y特别优选O、CH₂和NH。然而，也优选不存在Q并且Y与X形成双键。

X优选是CR₆R₇或NR₆。R₆和R₇优选是氢或低级烷基。

就式I所示化合物而言，优选Q不存在并且Y和X独立为N或CH。更优选Y和X中至少一个是N而另一个是CH。甚至更优选Y是N，X是CH或N，或者Y和X均是N。

当R₆和R₇结合在一起形成氧代基团时，X成为C＝O。最优选的是X是C＝O、CH₂、NH或N(CH₃)。此外，式I所示的一个具体形式如下式所示：

或

当n是0时，则R₄和R₆结合在一起，可在X和Y之间形成键，即在X的环碳原子和Y的环碳原子之间、在X的环氮原子和Y的环氮原子之间、或在X的环氮原子和Y的环碳原子之间或在X的环碳原子和Y的环氮原子之间形成键。换言之，在这些情况下，当n是0时且R₄和R₆结合在一起，在X和Y之间形成键时，式I所示化合物变为以下化合物：

或

其中R₁、R₂、Y、X和R3如上定义。在这些条件下，优选Y是CH或N，X是CH或N。最优选Y和X是N。

当n是1时，式I所示化合物变为以下化合物：

其中R₁、R₂、Q、R₈、R₉、Y、R₄、R₅、X、R₆、R₇和R₃、R₁₀、R₁₁、R₁₂和R₁₃如上定义。优选R₈和R₉是氢。

如上所述，当n是1时，R₄和R₈结合在一起，可在Q和Y之间形成键，即R₄的环碳原子和R₈的环碳原子可形成键，或R₄的环碳原子和R₈的环氮原子可形成键，或R₄的环氮原子和R₈的环碳原子可形成键或R₄的环氮原子和R₈的环氮原子可形成键。例如，在这些条件下式I所示化合物变为以下化合物：

或

在该式中X优选是C＝O或NH或CH₂。

当n是1时，Q优选CH₂或NH。然而，式I所示化合物也优选如下式所示：

其中

Q是CR₉或N，和

R₉是氢或低级烷基

且R₁、R₂、X、OR₃和Y如上定义。式I所示化合物的例子包括：

或

其中R₁、R₂和R₃如上定义。

式I所示化合物也优选如下式所示：

或

其中R₁、R₂、R₃、Y和X如上定义。

最优选的式I所示化合物如下式所示：

或其N-氧化物，

其中Q、Y、X、R₃、n如上定义，

A是N或CR₂₄；

D是CR₂₅或N；

E是CR₂₆或N；

G是CR₂₇或N；和

R₂₄、R₂₅、R₂₆和R₂₇独立为氢或低级烷基或供电子基团；或者R₂₅和R₂₆或R₂₄和R₂₅或R₂₆和R₂₇分别与和它们相连的碳原子结合在一起形成芳环。优选A、D、E或G均是CH，更优选A、D、E、G中至少一个是N。

优选A、D、E、G中不超过两个是N。最优选A、D、E、G中仅有一个是N。还优选R₂₄、R₂₅、R₂₆或R₂₇是氢或如上定义的供电子基团。供电子基团优选低级二烷基氨基，特别是N，N-二甲基氨基和低级烷氧基，例如甲氧基。

优选的式III所示化合物如下式所示：

或它们的N-氧化物，

其中Y、X、n、Q和R₃如上定义，R₂₄和R₂₅独立为低级烷基或供电子基团。

当n是1时，式IV-VII所示化合物中最优选的化合物是式IVa所示

或其N-氧化物

其中Q、Y、X和R₃如上定义，R₂₄和R₂₅独立为低级烷基或氢或供电子基团。

优选的式I所示化合物也如下式所示

或

或其N-氧化物，

其中n、Q、D、E、X和Y如上定义，J是NR₂₈、O、CR₂₈R₂₉或S(O)p，p是0、1、2。

R₂₈是氢、低级烷基或如上定义的供电子基团，R₂₉是氢或低级烷基。R₂₉优选氢。R₂₈优选供电子基团或氢。

J优选O或S(O)p；p优选的值为1。

当n是1时，优选的式VIII所示化合物如下式所示：

或其N-氧化物，

J、Y、R₈、R₉、n和R₃如上定义，X是C＝O。

在上述式VIII、IX和VIIIa所示化合物中，D、E或J中至少一个是杂原子。此外，更优选J、E和D中最多两个是杂原子。最优选J、E和D中仅一个是杂原子。

当n是1时，优选的式I所示化合物变为以下化合物：

或

因此，本发明包括下式所示化合物：

或它们的N-氧化物，

其中A、D、E、G、Y、X、R₃和J如上定义

更优选的式I所示化合物为下式所示化合物：

或它们的N-氧化物。

在上式中，当环含有Y＝X时意味着Y的R₄和X的R₆结合在一起，在Y环原子和X环原子之间形成环键，从而如上所述在Y环原子和X环原子之间形成双键。

此外，在上式中，当环含有Y＝N时，则Y的R₄和Q的NR₈的R₈结合在一起，形成环键，从而在氮环原子和Y原子之间存在双键。因此，在这些情况下Y是CR₅或N。

最优选的式I的具体形式如下式所示：

其中A、D、E、G中的一个或两个是N，剩下的是CH，X是CH或N。最优选X是N。也优选A、D、E和G中最多一个是N，剩下的是CH。最优选A是N，特别是G是N。

式I所示化合物的优选具体形式包括：

或它们的N-氧化物。

就式I所示化合物而言，R₃如上定义。R₁₀、R₁₁、R₁₂和R₁₃上的各种基团，例如烷基、芳基、芳基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基低级烷基或低级环烷基杂环基可以是未取代的或被低级烷基或供电子基团或吸电子基团取代。优选未取代或由低级烷基取代的基团。

就式I所示化合物而言，优选R₁₀是OR₁₂、低级烷基、芳基或芳基低级烷基。最优选R₁₀是OR₁₂或芳基。

也优选R₁₁是OR₁₃、低级烷基、芳基或芳基低级烷基。最优选R₁₁是OR₁₃或芳基。R₁₂和R₁₃优选各自独立为低级烷基、芳基或芳基或芳基低级烷基。R₁₂和R₁₃最优选是具有1-3个碳原子的烷基或苯基。也优选R₁₂和R₁₃相同。

也优选R₁₀和R₁₁通过桥连基团，T₁相互连接。当R₃₀是低级烷基，更优选H时，T₁优选O、CH₂、S或NR₃₀。当R₁₀和R₁₁相连时，则R₃变为：

其中R₁₀、R₁₁和T₁如上定义。R₃在本文中可定义为

优选环A₁和B独立为芳香族，特别是苯基。

优选R₃是

或

或

其中R₁₀′和R₁₁′，R₁₂和R₁₃独立为低级烷基、芳基或芳基低级烷基，Rb₁、Rc₁、Rb₂和Rc₂独立为氢或低级烷基。也优选R₁₂和R₁₃通过桥连基团T₁相连形成以下R₃部分

在本发明的一个实施方案中，如上定义的，R₁₀和R₁₁通过桥连基团T₁相连。T₁优选CH₂、O、S和NH，最优选CH₂和O。

R₃的具体形式包括

其中R₁₆和R₁₇独立为低级烷基，R_b1和R_c1独立为H或低级烷基，T如上定义并优选O、NH或CH₂。

R₃的例子包括

和

本发明当然也考虑了本文所述各式的各种组合与排列。此外，本发明也考虑了含有不超过所有上述元素的马库什分组(Markush grouping)以及它们的各种排列。

可通过本领域已知的技术制备式I所示化合物。下文描述了说明性的技术。

例如，下式所示化合物

可通过使

和

在取代反应条件下反应来制备，其中R₁、R₂、Y、Q、n、R₃、R₁₀和R₁₁如上定义，L是离去基团，例如卤素等。

反应优选在惰性极性有机溶剂中进行并且优选室温下反应物可溶于该溶剂。也优选室温下该取代(反应)的产物不溶于该溶剂。适用于反应的溶剂的例子包括氯仿、四氯化碳、乙醚、二烷、四氢呋喃和二氯甲烷等。反应在有效温度发生，所述温度可从溶剂的熔点到其回流温度但反应优选在约室温或将温度略微升高至溶剂的回流温度处发生。反应特别优选在室温或略微升高的温度处发生，例如升至60℃。

式100所示化合物可根据以下专利所述制备：美国专利号RE 37,686；RE38,073；5,580,981；5,644,029；5,698,675；这些专利的内容引作参考。

例如，式100所示化合物，如

和

可通过使肼分别与

或或

反应来制备，其中R’是卤素、NH-NH₂或OR”，和

R”是低级烷基，例如甲基。该反应在略微升高的温度，例如70-100℃进行，虽然该反应也可在从室温到溶剂的沸点的温度进行。

反应通常在室温下反应物不可溶，但在略微升高的温度下反应物和产物可溶的有机溶剂中进行。有用的溶剂的例子包括乙醇、DMF等。在许多情况中，反应混合物中有颜色变化，这说明产物形成。后处理(work-up)，例如除去溶剂，然后酸化得到所需产物。

可通过使相应的卤化物，例如氯化物或溴化物在取代反应的条件下与肼反应制备肼基衍生物(R′＝NH-NH₂)。可通过使相应的醇在形成醚的条件下与烷化试剂，例如Me₂SO₄/Na₂CO₃反应制备醚衍生物(R¹＝OR″)。

式100a、100b或100c所示化合物用于制备式I所示化合物。也可通过本领域已知的技术制备后者化合物。例如，通过使式100a、100b或100c所示化合物在取代反应条件下分别与

反应来制备式I所示化合物，其中R₁₀和R₁₁如上定义，L是离去基团，例如卤素(如Cl、Br、I)等。

可从在杂芳基中具有氮环杂原子的式I所示化合物制备N-氧化物。这些N-氧化物可通过本领域已知的技术，例如通过它们的氧化来制备，例如用过酸，如过乙酸或间-氯过苯甲酸来氧化。

就式II所示化合物而言，优选Y₁是N或CR₁₅，其中R₁₅是氢或甲基。Y₁特别优选CH和N。

Q₁也优选N或CR₁₆，其中R₁₆是氢或低级烷基。Q₁优选是N或CH。

就式II所示化合物而言，Y₁和Q₁优选是CH或N。在一优选的实施方案中，式II所示化合物如下式所示

其中R₁和R₂和R₁₄如上定义，Q₁是N或CH，但特别(优选)是N。

式II所示化合物或具有该式所示阳离子(部分)的式II的盐的另一具体形式为：

其中

R₁和R₂与和它们相连的碳原子结合在一起，形成杂芳基环，其中所述杂芳基环是含有3-13个环碳原子和1-4个选自O、S和N的杂原子的氧、硫、氮杂芳香族。所述杂芳基环可以是未取代的或被低级烷基或供电子基团取代；

Y₁是N或CR₁₅；

R₁₅是H或低级烷基；

Q₁是N或CR₁₆；

R₁₆是H或低级烷基；

R₁₄是氢、带正电荷的吸电子基团、

SO₂R₁₇、低级烷基羰基、芳基羰基、低级烷基芳基或BLK₁-AA₁；

R₁₇是芳基、芳基低级烷基或低级芳基烷基；

AA₁是氨基酸或在N-末端少一个氢原子、在C-末端少一个OH的肽；

BLK₁是氨基保护基团；

R₁₀是OR₁₂、低级烷基、芳基、芳基低级烷基、低级环烷基、低级环烷基低级烷基、杂环基、杂环基低级烷基、低级环烯基、低级环烯基或低级环烯基低级烷基；

R₁₁是OR₁₃、低级烷基、芳基、芳基低级烷基、低级环烷基杂环基、杂环基低级烷基、低级环烯基、低级环烯基低级烷基；

和R₁₀与R₁₁可任选通过桥连基团相连，该桥连基团选自O、S、NR₃₀或(CHR₃₀)_m，其中各R₃₀独立为低级烷基或氢，m是1-3；

R₁₂和R₁₃独立为低级烷基、低级环烷基、低级环烷基低级烷基、杂环基、杂环基低级烷基、低级环烯基或低级环烯基低级烷基；

环A₁和环B独立为含有6-14个环碳原子的芳香族或含有5-14个环碳原子的环烯基或环烷基；

R_b1、R_c1、R_b2、R_c2独立为氢、低级烷基或供电子基团；

T是CHR₃₁、O、S或NR₃₀；和

R₃₁是氢或低级烷基。

式II所示化合物或具有该式所示阳离子(部分)的式II的盐的另一具体形式是：

或其N-氧化物或盐，

其中Y₁和Q₁之一是CR₁₅，另一个是N或CH；

R₁₅是H或低级烷基；

R₁和R₂与和它们相连的碳原子结合在一起，形成芳基或杂芳基环，其中所述芳基环是含有6-14个环碳原子的芳香环，所述杂芳基环是含有3-13个环碳原子和1-4个选自O、S和N的杂原子的氧、硫、氮杂芳香族，所述杂芳基环可以是未取代的或被低级烷基或供电子基团取代；

R₁₄是氢、带正电荷的吸电子基团、

R₁₇是芳基、芳基低级烷基或低级芳基烷基；

BLK₁是氨基保护基团；

R_b1、R_c1、R_b2、R_c2独立为氢、低级烷基或供电子基团；

T是CHR₃₁、O、S或NR₃₁；和

R₃₁是氢或低级烷基。

如本文所定义的，在式II的一些具体形式中，R₁和R₂与和它们相连的碳原子结合在一起，形成芳基环。芳基环优选是萘基，特别是苯基。

此外，如本文所定义的，在式II中R₁₄优选H或以上定义的带正电荷的吸电子基团，或

其中R₁₀和R₁₁如本文所定义，吸电子基团如上定义。R₁₄最优选

就式I而言，优选的R₁₀和R₁₁如上定义。

式II的优选结构如下式所示：

其中

Y₁是N或CR₁₅；

R₁₅是H或低级烷基；

Q₁是N或CR₁₆；

R₁₄是氢、带正电荷的吸电子基团，

R₁₆是H或低级烷基；

SO₂R₁₇、低级烷基羰基、芳基羰基、低级烷基芳基或BLK₁-AA₁；AA₁是氨基酸或在N-末端少一个氢原子、在C-末端少一个OH的肽；

BLK₁是氨基保护基团；

R₁₀是OR₁₂、低级烷基、芳基、芳基低级烷基、低级环烷基、低级环烷基低级烷基、杂环基、杂环基低级烷基、低级环烯基或低级环烯基低级烷基；

R₁₁是OR₁₃、低级烷基、芳基、芳基低级烷基、低级环烷基、低级环烷基低级烷基、杂环基、杂环基低级烷基、低级环烯基或低级环烯基低级烷基；

和R₁₀与R₁₁可任选通过桥连基团相连，该桥连基团选自O、S、NR₃₀或(CHR₃₀)_m，其中各R₃₀独立为低级烷基或氢，m是1-3；和

环A₁和环B独立为含有6-14个环碳原子的芳香族或含有5-14个环碳原子的环烯基或环烷基；和

R_b1、R_c1、R_b2、R_c2独立为氢、低级烷基或供电子基团；T是CHR₃₁、O、S或NR₃₁，其中R₃₁是氢或低级烷基；

A是N或CR₂₄；

D是N或CR₂₅；

E是N或CR₂₆；

G是CR₂₇或N；

R₂₄、R₂₅、R₂₆和R₂₇独立为氢或低级烷基或供电子基团；或者R₂₅和R₂₆或R₂₄和R₂₅或R₂₆和R₂₇与和它们相连的碳原子结合在一起，形成芳基环，但是A、D、E和G中至少一个是N。

式II所示结构优选如下式所示：

或

其中

Y₁、Q₁和R₁₄如上定义；

D是CR₂₅或N；

G是CR₂₆或_N；

J是NR₂₈、O、CR₂₈R₂₉或S(O)_p；

R₂₅和R₂₆独立为氢或低级烷基或供电子基团，或者R₂₅和R₂₆与和它们相连的碳原子结合在一起，形成芳基；

R₂₈是氢或供电子基团或低级烷基；

R₂₉是氢或低级烷基，和

p是0、1或2。

式II所示结构更优选如下式所示

或

其中A是/N或CR₂₄；

D是CR₂₅或N；

E是CR₂₆或N；

G是CR₂₇或N；

J是NR₂₈、O、CR₂₈、R₂₉或S(O)_p；和

R₂₄、R₂₅、R₂₆、R₂₇、R₂₈、R₂₉、p、Q₁和R₁₄如上定义。

就式II和其所有上述各种具体形式而言，优选A、D、E和G中不超过两个是N。最优选A、D、E和G中仅有一个是N。此外，R₂₄、R₂₅、R₂₆或R₂₇优选独立为氢或如上定义的供电子基团。优选的供电子基团是低级二烷基氨基、特别是N，N-二甲基氨基和低级烷氧基，例如甲氧基。

此外，T优选是CH₂、O、S或NH，更优选CH₂或O。式X的优选结构如下式所示

或它们的N-氧化物，其中R₂₄、R₂₅、Q₁和R₁₄如上定义。

在式XI-XIV所示结构中，最优选的化合物是XIa所示，即

其中R₂₄、R₂₅、Q₁和OR₁₄如本文定义。

式II所示结构也优选如下式所示：

或

其中J、E、D、Q₁和R₁₄如上定义。优选R₂₄是氢、低级烷基或如上定义的供电子基团，R₂₅是氢或低级烷基。最优选R₂₅是氢，且最优选R₂₄是供电子基团或氢。

J优选O或S(O)p或NH；p的值优选是1。

式II所示结构也优选如下式所示：

或其N-氧化物。

在本文所述的各种结构中，无论是式I或II所示的化合物或是本文所述本发明的任何其它实施方案，T优选O、S、NH或CH₂。此外，在上述各种结构中，m优选是1，R₃₀优选是H。

式II所示化合物或盐(特别是其阳离子部分具有式II所示结构)可通过本领域已知的技术制备。例如，当R₁₄是氢时，可通过使式XVII所示化合物

与R₁₄L反应来制备式II所示化合物，其中R₁、R₂、Q₁和R₁₄如本文定义，L是离去基团，例如卤素(如，氯、溴或碘)。然而，如果R₁₄是带正电荷的吸电子基团，则式II所示结构是阳离子，这时就需要与该阳离子部分结合的阴离子。例如，当R₁₄是时，式XVII所示化合物在取代反应的条件下与

反应，其中R₁₂、R₁₁和L如上定义。该反应优选在室温下反应物可溶的惰性极性有机溶剂中进行。也优选室温下产物不溶于该溶剂。可用溶剂的例子包括氯仿、四氯化碳、乙醚、二烷、四氢呋喃和二氯甲烷等。反应在有效温度发生，所述温度可从溶剂的熔点到其回流温度，但反应优选约在室温或将温度略微升高至溶剂的回流温度处发生。反应特别优选在室温或略微升高的温度处发生，例如升至60℃。

也可通过本领域普通技术人员已知的技术制备式XVII所示化合物。示范性方法如下：

例如，式VII所示化合物在酸酐形成条件下与乙酸酐回流得到对应的酸酐。然后在酰胺形成条件下用乙酰胺处理酸酐产物得到对应的环状二酰亚胺XIX。环状二酰亚胺XIX经有效进行霍夫曼重排的条件，例如通过使之与次溴酸钠(或氢氧化钠和溴)反应然后水解。例如，环状二酰亚胺XIX与NaOBr、乙酸铜(II)和H₂S反应得到少一个碳原子的氨基羧酸(XX)。酸XX在酯化条件下酯化得到对应的酯XXI。在酯化反应条件下用酸配制的羟胺(羟基铵盐)处理XXI得到异羟肟酸衍生物XXII。重氮化，然后分子内环化得到偶氮衍生物XXIII。另一方面，异羟肟酸在有效条件下与甲酸反应得到产物XXIV，所述条件例如是在有效温度下加热异羟肟酸与甲酸，所述有效温度例如是刚超过室温至回流温度，包括回流温度，优选甲酸的回流温度。

本发明当然也考虑了本文所述各式的各种组合与排列。此外，本发明也考虑了含有不超过所有上述元素的马库什分组以及它们的各种排列。

如本文所述，上述化合物或盐或N-氧化物用于促进肽偶联，即在第一氨基酸或第一肽的游离氨基和第二氨基酸或肽的游离羧基或酰化基团之间的反应。本发明的方法是通用的；它用于偶联氨基酸的二肽、三肽和氨基酸、二肽、五肽、更高的肽、多肽等。

当式I所示化合物或式II所示结构与氨基化合物，例如氨基被保护(blocked)的氨基酸或式BLK₁-AA₁所示蛋白质反应时，以下化合物之一取决于所用的偶联剂而形成相应的氨基酸酯：

或

其中AA₁是氨基酸或本文定义的蛋白质，BLK₁是本文定义的保护基团(blockinggroup)，Y、Q、Q1、n、X、R₁和R₂如上定义。该氨基酸酯然后可与具有游离氨基的化合物反应得到下式所示的化合物：

所述游离氨基例如是以R₃₃R₃₄NH表示的芳基氨基、烷基氨基、低级芳基氨基、杂环基氨基、杂环基低级烷基氨基、低级环烷基氨基、低级环烷基低级烷基氨基等，其中R₃₃和R₃₄独立为氢、低级烷基、芳基或低级芳基烷基。

通过本领域技术人员已知的技术除去保护基团得到产物：AA₁NR₃₃R₃₄。

当第二氨基化合物是氨基酸或具有游离氨基的肽(称为AA₂)时，该技术极其有用。例如，如果偶联剂是式I所示化合物，可在AA₁和AA₂之间形成以下的肽，例如

其中AA₁、AA₂、BLK₁、R₁、R、Y、Q、n和X如本文定义的。

如果偶联剂含有式II所示结构，

(无论是化合物或盐的阳离子部分)，则反应变为

在反应中，AA₁、AA₂、BLK₁、R₁、R₂和Q₁入本文所定义。

保护基团可以是本领域已知的任何保护基团，但优选的保护基团是FMOC、BOC、苄氧羰基BSMOC和Bspoc。

本文使用的术语“氨基酸”或AA、AA₁或AA₂指含有碱性氨基(NH₂)和酸性羧基(COOH)的有机酸。

因此，所述分子是两性的并以偶极离子存在于水溶液中。(参见《缩合化学词典》(The Condensed Chemical Dictionary)，第10版，Gessner G.Hawley编，Van Nostrand Reinhold Company，London，England，第48页，(1981))。优选的氨基酸是α-氨基酸。包括但不限于确认为蛋白质成分的25种氨基酸。它们在氨基酸分子中必须至少含有一个羧基和一个伯氨基或仲氨基。该术语包括蛋白原性(proteinogenic)氨基酸，例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、正亮氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、2，4-二氨基丁酸、甲硫氨酸、甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、胱氨酸、谷氨酸、赖氨酸、羟赖氨酸、鸟氨酸、精氨酸、组氨酸、青霉胺、萘胺、α-苯基甘氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、精氨酸、酪氨酸等。

本文使用的术语“肽”指由酰胺键化学结合在一起的氨基酸单元组成的一类化合物。肽最少可含有两个氨基酸残基或可由氨基酸残基的聚合物组成(多肽)。

本文使用的术语“氨基酸”和“肽”也包括分别含有保护基团的氨基酸或肽。为防止不利的副反应，这些保护“基团”保护涉及或参与偶联的氨基酸或肽的氨基或羧基。这些保护基团也保护侧链上的反应基团。

许多氨基的保护试剂是本领域已知的并且已用于合成肽。这些保护基团讨论于美国专利号3,835,175；4,508,657；3,839,396；4,581,167；4,394,519；4,460,501和4,108,846；所有这些专利的内容如同全文列出一样引作参考。其它氨基保护基团讨论于美国专利号5,221,754；5,510,491和5,637,719；所有这些专利的内容也引作参考。其它氨基保护基团描述于《肽》( THE PEPTIDE)，第二卷中G.Barany和R.B.Merrifield的题目为“固相肽合成”(Solid Phase Peptide Synthesis)的文章，E.Gross和J.Meienhoffer编，AcademicPress，N.Y.，N.Y.，100-118，(1980)和《有机合成中的保护基团》(PROTECTIVE GROUPS IN ORGANIC SYNTHESIS)，T.W.Green，JohnWiley & Sons，New York，所有文献的内容引作参考。

本文使用的术语氨基酸保护基团(BLK，BLK₁)表示本领域已知、用于保护氨基酸是氨基(NH₂)的保护基团。保护基团，例如9-低级烷基-9-芴基氧羰基、2-氯-1-茚满基甲氧基-羰基(CLIMOC)和苯并[f]茚-3-甲氧基羰基(BIMOC)和dbd-TMOC讨论于上述的美国专利号3,835,175；4,508,657；3,839,396；4,581,167；4,394,519；4,460,501和4,108,846；它们的内容引作参考。此外，其它氨基保护基团，例如有2-(叔丁基磺酰基)-2-丙烯氧基羰基(Bspoc)和苯并噻吩砜-2-甲氧基羰基(Bsmoc)。其它N-氨基保护基团包括有，例如叔丁氧基羰基(BOC)、叔戊氧基羰基(Aoc)、β-三甲基甲硅烷基-乙氧基羰基(TEOC)、金刚烷基-氧羰基(Adoc)、1-甲基-环丁氧基羰基(Mcb)、2-(对-联苯基)丙基-2-氧羰基(Bpoc)、2-(对-苯基苯偶氮基)丙基-2-氧羰基(Azoc)、2，2-二甲基-3，5-二甲氧基苄氧基羰基(Ddz)、2-苯基丙基-2-氧羰基(Poc)、苄氧基羰基(Cbz)、对甲苯磺酰基氨基羰基(Tac)、邻-硝基苯基亚磺酰基(Nps)、二硫代琥珀酰基(Dts)、邻苯二甲酰基、哌啶-氧羰基、甲酰基、三氟乙酰基等。

这些保护基团可分为4类：

1)碱不稳定的Nα-氨基保护基团，例如FMOC等。

2)可用酸除去的基团，例如Boc、TEOC、Aoc、Adoc、Mcb、Bpoc、Azoc、Ddz、Poc、Cbz、2-呋喃甲氧基羰基(Foc)、对-甲氧基苄氧基羰基(Moz)、Nps等。

3)可通过氢化除去的保护基团，例如Dts、Cbz。

4)通过亲核试剂除去的保护基团，例如Bspoc、Bsmoc和Nps等。

5)可通过酸、碱或亲核试剂除去的衍生自羧酸的保护基团，例如甲酰基、乙酰基、三氟乙酰基等。

可采用本领域已知的各种羧基保护基团。许多这种可能的基团的例子见《有机合成中的保护基团》(Protective Groups in Organic Synthesis)，T.W.Green，John Wiley & Sons，1981，其内容引作参考。这些例子包括，例如甲酯、叔丁酯、β-三甲基甲硅烷基乙酯、苄酯等。

此外，在蛋白质合成期间，可能需要保护氨基酸的某些侧链以防止不利的副反应。美国专利号5,360,920描述了各种保护基团，其内容纳入本文作为参考。

术语“氨基酸或肽的酰化基团”指在氨基酸或肽的游离羧基末端上、有助于酰化反应，即在酰基碳处的亲核取代反应的基团。例子包括游离酸；酰基卤；酯；例如低级烷酯、未取代的或用本文定义的1-5个吸电子基团取代的苯氧基酯；或酸酐等。优选的酰化衍生物是酸、酰基卤，特别是酰基氯或酰基氟和苯氧基酯。

优选的酰化氨基酸是BLK-AA-M所示的氨基酸基团，其中BLK是氨基保护基团，AA是在COOH部分少一个H的氨基酸，M是卤素或

其中Ra独立为卤素、低级烷基、硝基、氰基或其它吸电子基团，b是0-5。当b是0时，苯基是未取代的。

氨基酸的酰化基团最优选氨基酰基氯(amino acid chloride)或氨基酰基氟(amino acid fluoride)。Carpino等在J.Org.Chem.，1986，51，3734-3736的文章中讨论了氨基酰基氯的制备及其用作酰化衍生物的应用，其内容纳入本文作为参考。简言之，可通过使氨基酸与亚硫酰氯反应并从重结晶试剂，例如CH₂Cl₂-己烷中重结晶制备氨基酰基氯。

美国专利号5,360,920讨论了氨基酰基氟的制备及其在肽合成中的应用，其内容纳入本文作为参考。如其所述，可通过使N-保护的氨基酸与试剂氰脲酰氟(cyanuric fluoride)反应来制备氨基酰基氟。该反应可在低至0℃高至溶剂的回流温度进行，但优选在室温进行。该反应也可在惰性溶剂，例如吡啶/CH₂Cl₂等中进行。氰脲酰氟可在升高的温度下(150-250℃)根据以下方程式在存在氟化钾时从对应的氯化物制备：

根据本发明制备肽的典型过程包括以下步骤：

1)保护第一氨基酸或第一肽的游离羧基直至氨基酸或肽锚定(anchor)到固相上。

2)保护第二氨基酸或肽的游离氨基。

3)如果需要，可保护侧链。

4)在存在式I所示化合物时偶联第一氨基酸或肽和第二氨基酸或肽。

5)除去保护基团。

步骤1-3可以任何顺序进行。

在偶联步骤中，式I或II所示化合物或盐或其N-氧化物或式II的阳离子以有效量存在。第一氨基酸或肽和第二氨基酸或肽通常以等摩尔量存在。此外，式I或II所示化合物的用量取决于以最低量存在的肽或氨基酸(即，限制性试剂)的量；因此，式I或II所示化合物和以最低摩尔量存在的氨基酸或肽的摩尔比是约1∶3到3∶1，虽然优选使用约等摩尔量的式I或II所示化合物(或其盐或N-氧化物或式II所示的阳离子)和第一氨基酸或肽和第二氨基酸或肽。

偶联反应通常在惰性有机溶剂，例如二甲基甲酰胺(DMF)或醚类，如乙醚，THF或二烷中进行。事实上，DMF由于其有利的溶解性能是固相合成中优选的溶剂。反应在温和条件下进行，通常是约0℃-30℃。肽形成后，通过本领域技术人员已知的技术除去保护基团。

以下顺序是对偶联反应的说明；虽然该方法对氨基酸和/或肽均通用，以下实施例使用的是氨基酸(AA)：

在以上方案中，BLK是氨基酸保护基团，AA₁、AA₂和AA₃分别是第一、第二和第三氨基酸，P是羧基保护基团。

如以上方案所示，N-α氨基受保护的氨基酸与羧基受保护的第二氨基酸反应。

第一氨基酸和第二氨基酸之间形成肽。通过本领域技术人员已知的技术除去α氨基保护基团，然后使相应的二肽在存在式I所示化合物与另一N-α氨基受保护的氨基酸反应形成相应的三肽来增长该肽链。除去该三肽的N-α氨基保护基团并重复上述循环直至获得所需肽。

本发明不难用于固相肽合成。固相肽合成基于肽链的分步骤装配，而肽链的一端连接于固体载体或固相肽树脂上。本领域通常熟知这两种方法。

其一，Merrifield方法利用固体载体来连接氨基酸或肽残基。该方法利用N-保护的氨基酸作为构建单元(building block)，这些构建单元加入通过分子的酰基(酸)端连接于固体载体上的氨基酸或肽残基。肽键形成后，除去保护基团并重复该循环。具有所需序列的肽合成后从载体上取下。

第二种方法是反向Merrifield方法，该方法利用连接于一系列柱上的固体载体上的试剂。氨基酸或肽残基连续流过这些柱形成所需氨基酸序列。

这些本领域熟知的方法讨论于美国专利号4,108,846；3,839,396；3,835,1175；4,508,657；4,623,484；4,575,541；4,581,167；4,394,519以及Advances in Enzymology， 32，221，(1969)和《肽》(PEPTIDES)，第二卷，Erhard Gross和Johannes Meienhoffer编，Academic Press，New York，第3-255页，(1980)，这些文献的内容如同全部列出一样纳入本文作为参考。

本发明的化合物在肽偶联中可用作偶联剂或碱。然而，它们的效果也受用于溶解反应物的溶剂体系和偶联反应所用的碱的影响。如果本发明的化合物在偶联方法所采用的溶剂中溶解不佳，则应将其转化为在该溶剂中易溶的形式或将溶剂换为可溶解该化合物的。在溶液中进行的肽偶联中这一般不是问题。但使用肽合成仪时不能更换溶剂。例如，一些合成仪采用的溶剂是DMF或N-甲基吡咯烷酮。然而，本发明的化合物在所采用的溶剂，例如DMF或N-甲基吡咯烷酮中可能溶解不佳。因此，为克服该问题，本发明的化合物应转化为可溶解于所采用的溶剂，例如DMF或N-甲基吡咯烷酮中的化合物。例如，如果本发明的偶联剂或碱(base)是式I所示并且如果R₁₀或R₁₁是芳基或杂芳基或者如果A₁或B是芳基或杂芳基，则克服该问题的诀窍在于加上叔丁基或叔戊基或其中与芳基或杂芳基环相连的碳原子是叔碳的任何其它基团。

如果R₁₀或R₁₁或A₁或B含有多个环，则叔丁基或叔戊基或其它叔碳基团，例如叔烃基(仅含碳和氢原子)优选连接于和磷原子相连的环上。如果有多个这种基团与环相连，这些基团优选相同。

以下实施例进一步说明了本发明。

以下缩写用于实施例中：

HOAt 1-羟基-7-氮杂苯并三唑

DIEA 二异丙基乙胺

TEA 三乙胺

CBZ或Cbz 苄氧基羰基

EDC N-乙基-N′-[3-二甲基氨基丙基]碳二亚胺盐酸盐

Aib 氨基异丁酸

THF 四氢呋喃

DMF 二甲基甲酰胺

TCFH 1，1，3，3-四甲基氯亚胺甲基铵六氟磷酸盐(1，1，

3，3-tetramethylchloroformamidinium hexafluorophosphate)

PyClu 1，1，3，3-双(四亚甲基)氯代脲六氟磷酸盐

(1，1，3，3-bis(tetramethylene)chlorouronium

hexafluorophosphate)

PyBrop 三(吡咯烷基)溴代六氟磷酸盐

(tris(pyrrolindino)bromophosphonium hexafluorophosphate)

TFA 三氟乙酸

TMP 2，4，6-三甲基吡啶

PCA 对-氯苯胺

DPOPOAt 二苯氧基磷酰基氧-7-氮杂苯并三唑

HDATU O-(3，4-二氢-4-氧代-5-氮杂苯并-1，3-二嗪-3-基)-1，1，3，3-四

甲基脲-六氟磷酸盐

N-HATU 1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1，2，3-三唑-[4，5-b]吡啶六氟

磷酸盐3-氧化物

O-Dhad 3-氧-4-氧代-3，4-二氢-5-氮杂苯并-1，2，3-三嗪

O-HATU N-[(1H-1，2，3-三唑并[4，5-b]吡啶-1-基氧)(二甲基氨基)亚甲

基]-N-甲基甲铵六氟磷酸盐

(N-[(1H-1，2，3-triazolo[4，5-b]pyridin-1-yloxy)(dimethylamino)

methylmethanaminium hexafluorophosphate)

HDTU O-(3，4-二氢-4-氧代-1，2，3-苯并三嗪-3-基)-1，1，3，3-四甲基脲

六氟磷酸盐

(O-(3，4-dihydro-4-oxo-1，2，3-benzotriazin-3-yl)-1，1，3，3-tetrame

thyluronium hexafluorophosphate)

HODhat 3-羟基-4-氧代-3，4-二氢-5-氮杂苯并-1，2，3-三嗪

HODhbt 3-羟基-4-氧代-3，4-二氢-1，2，3-苯并三嗪

DEPOAt 二乙氧基磷酰基氧-7-氮杂苯并三唑

DtpOAt 二(邻-甲苯基)氧膦基氧-7-氮杂苯并三唑

HODhad 3-羟基-4-氧代-3，4-二氢-5-氮杂苯并-1，3-二嗪

Odhad 3-氧-4-氧代-3，4-二氢-5-氮杂苯并-1，3-二嗪

HDADU O-(3，4-二氢-4-氧代-5-氮杂苯并-1，3-二嗪-3-基)-1，1，3，3-四甲

基脲六氟磷酸盐

(O-(3，4-dihydro-4-oxo-5-azabenzo-1，3-diazin-3-yl)-1，1，3，3-tetr

amethyluronium hexafluorophosphate)

HDAPyU O-(3，4-二氢-4-氧代-5-氮杂苯并-1，2，3-三嗪-3-基)-1，1，3，3-双

(四亚甲基)脲六氟磷酸盐

(O-(3，4-dihydro-4-oxo-5-azabenzo-1，2，3-triazin-3-yl)-1，1，3，3-b

is(tetramethylene)uronium hexafluorophosphate)

PyDAOP [(3，4-二氢-4-氧代-5-氮杂苯并-1，2，3-三嗪-3-基)氧]三(吡咯烷

基)六氟磷酸盐

[3，4-dihydro-4-oxo-5-azabenzo-1，2，3-triazin-3-yl]oxy]-tris(pyr

rolidino)phosphonium Hexafluorophosphate)

DtpOBt 二(邻-甲苯基)氧膦基氧苯并三唑

DtpODhbt 3-[二-邻-甲苯基)氧膦基氧]-3，4-二氢-4-氧代-2，3苯并三嗪

DEPDBt 3-(二乙氧基磷酰基氧)-3，4-二氢-4-氧代-1，2，3-苯并三嗪

DPOPDBt 3-(二苯氧基磷酰基氧)-3，4-二氢-4-氧代-1，2，3-苯并三嗪

DPOPOAt 二苯氧基磷酰基氧-7-氮杂苯并三唑

PyDOP [(3，4-二氢-4-氧代-1，2，3-苯并三嗪-3-基)氧]三(吡咯烷基)六

氟磷酸盐

[(3，4-dihydro-4-oxo-1，2，3-benzotriazin-3-yl)oxy]tris(pyrrolidin

o)phosphonium Hexafluorophosphate)

HDPyU O-(3，4-二氢-4-氧代-1，2，3-苯并三嗪-3-基)-1，1，3，3-四甲基脲

六氟磷酸盐

(O-(3，4-dihydro-4-oxo-1，2，3-benzotriazin-3-yl)-1，1，3，3-tetrame

thyluronium hexafluorophosphate)

DIC 二异丙基碳二亚胺

DCHMA N，N-二环己基甲基胺

DmppOAt 2，8-二甲基吩氧膦基氧-7-氮杂苯并三唑

Bt 苯并三唑

Pfp 五氟苯基酯

N-HBTU 1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-苯并三唑六氟磷酸盐-3-

氧化物1-[bis(dimethylamino)mythylene]-1-H-benzotriazolium

hexafluorophosphate-3-oxide

O-HBTU N-[1H-苯并三唑-基氧](二甲基氨基)亚甲基]-N-甲基甲铵六

氟磷酸盐

N-[1H-benzotriazol-1-yloxy](dimethylamino)mythylene]-N-me

thylmethanaminium hexafluorophosphate

实施例1

二乙氧基磷酰基氧-7-氮杂苯并三唑

(DEPOAt)

HOAt(1.36g，10mmol)和三乙胺(TEA)(1.39mL，10mmol)的15ml干燥苯溶液在冰浴中冷却。在N₂气氛中向该溶液滴加氯代磷酸二乙酯(1.72g，1.45ml，10mmol)的在10ml干燥苯中的溶液，同时搅拌。在10分钟内加入完毕，继续在冰浴上搅拌1小时，然后于室温再搅拌4小时。反应混合物冷却至5-10℃，经过滤快速除去TEA HCl。无色的澄清溶液在温度维持低于35℃时蒸发至干。将干燥己烷加入油状残留物，在N₂气氛中给该体系紧密盖上盖子并置于冰箱中(-20℃)2小时。油状残留物固化为白色固体，然后经干燥CH₂Cl₂-己烷重结晶得到1.74g(63％)无色片状的酯：熔点48-50℃；¹H NMR(CDCl₃)：δ8.77(dd，1H)，8.40(dd，1H)，7.44(dd，1H)，4.57(m，4H，2CH₂)，1.47(2t，2CH₃)；IR(在NaCl板上的膜)：2987(m)，1596(m)，1395(m)，1306(s)，1026(vs)，838(m)，775(s)，699(m)cm^-1。

C₉H₁₃N₄O₄P的分析计算值：C，39.71；H，4.81；N，20.58。

实测值：C，39.84；H，4.72；N，20.54。

实施例2

二(邻-甲苯基)氧膦基氧-7-氮杂苯并三唑

(DtpOAt)

在冰浴中冷却HOAt(0.136g，1mmol)和DIEA(0.21mL，1.2mmol)在10ml干燥CH₂Cl₂中的溶液，在N₂气氛中向该溶液分批滴加0.2647g(1mmol)二(邻-甲苯基)膦酰(phosphinoyl)氯(DTP-Cl)，同时搅拌。溶液继续在冰浴上搅拌30分钟，然后于室温再搅拌5小时。除去溶剂后，用冷的饱和NaHCO₃溶液(2×10ml)和盐水(2×10ml)洗涤得到的无色溶液，MgSO₄干燥得到0.26g(69％)白色固体。经CH₂Cl₂-己烷重结晶得到0.21g无色块状晶体的酯的分析纯样品：熔点170-172℃；¹H NMR(CDCl₃)：δ8.74(dd，1H)，8.32(d，1H)，7.99(dd，1H)，7.56(m，2H，Ar-H)，7.35(m，6H，Ar-H)，2.70(d，6H，2CH₃)；IR(KBr)：3064(w)，1592(s)，1458(m)，1379(m)，1334(m)，1238(sh，s)，1113(s)，928(m)，811(s)，770(s)，691(s)cm^-1。

C₁₉H₁₇N₄O₂P的分析计算值：C，62.62；H，4.70；N，15.37。

实测值：C，62.23；H，4.72；N，15.47。

实施例3

合成3-羟基-4-氧代-3，4-二氢-5-氮杂苯并-1，2，3-三嗪

(HODhat)

A.喹啉酰亚胺(Quinolinimide).将2，3-吡啶二羧酸(22.5g，0.135mol)加入到25ml乙酸酐中，混合物在蒸气浴上加热回流，同时搅拌。约1小时后得到澄清无色的溶液，继续加热2小时。然后蒸馏除去乙酸和过量的的酸酐(约12.6g)直至残留溶液的温度达到165℃。冷却至室温后留在烧瓶中的残留物固化得到灰红色固体。

向上述固体中加入乙酰胺(14g，0.237mol，1.75当量)，用油浴加热混合物使之维持于120-125℃过夜。冷至室温后，收集固体并用乙酸(2×10ml)和水(3×50ml)洗涤。将灰色的固体悬浮于250ml热水中，搅拌混合物15分钟，过滤得到15g(75％)灰色固体的上述酰亚胺：熔点237-239℃(文献报道的熔点233℃)。

B.3-氨基吡啶甲酸.在冰浴冷却的条件下将喹啉酰亚胺(50g，0.344mol)溶解于1000ml 10％NaOH，在搅拌并冷却的条件下向溶液中缓慢加入冷的NaOBr溶液，该NaOBr溶液通过在冰浴中混合56g(18ml，0.344mmol)Br₂和350ml 15％NaOH获得。加入完毕后，继续在冰浴中搅拌15分钟，室温中搅拌1小时。然后将得到的混合物加热至85℃并搅拌，持续1小时。冷却后，用50％H₂SO₄中和混合物至pH 5-6，整体维持于室温过夜。

加热得到的白色混浊混合物，用22g(0.11mol)一水乙酸铜(II)在400mlH₂O和10ml乙酸中的热溶液处理澄清的溶液。蒸气浴加热混合物15分钟，然后于室温冷却，收集铜盐并用冷水洗涤两次。

铜盐重悬于500ml水中，向悬液通H₂S 2-3小时，同时搅拌。过滤除去混合物中黑色的CuS，滤液用活性炭脱色。除去水得到灰黄色固体，用水-乙醇(1∶1体积/体积)重结晶得到29g(60％)奶黄色固体的上述酸：熔点212-214℃(文献报道的熔点210℃)。

C.3-氨基吡啶甲酸乙酯.3-氨基吡啶甲酸(5.07g，36mmol)、无水乙醇(20ml)和浓H₂SO₄(6ml)的混合物回流48小时。冷却后，将混合物浓缩至约15ml并倒入15g冰中。在冰浴冷却下，用浓氨水将混合物碱化至pH 8-9，过滤收集分离出的白色沉淀物。滤液用乙醚(4×50ml)萃取，乙醚层用盐水洗涤(4×50ml)，MgSO₄干燥。蒸发醚溶液得到另一固体。合并两部分并经苯-己烷重结晶得到4.05g(68％)白色针状的上述乙酯：熔点126-127.5℃(文献报道的熔点131-133℃，产率42％)；¹H NMR(CDCl₃)：δ8.09(dd，1H)，7.23(dd，1H)，7.04(dd，1H)，5.76(s，2H，NH₂)，4.46(q，2H，CH₂)，1.45(t，3H，CH₃)。

D.3-氨基-2-甲基吡啶异羟肟酸.向用18.7g(0.467mol)NaOH配制的110ml NaOH水溶液中缓慢加入盐酸羟胺(16.3g，0.233mol)，同时搅拌并冷却。向该溶液中分批加入以上C节制备的乙酯19.4g(0.116mol)，然后加入110ml甲醇，混合物于室温搅拌48小时。溶液减压浓缩至约100ml，在冷却下用25％HCl中和至pH 5-6。过滤收集分离出的白色沉淀物，用少量冷水洗涤，经P₂O₅真空干燥得到17.8g(100％)白色固体的3-氨基-2-甲基吡啶-异羟肟酸，该物质纯度足够用于下一步。从MeNO₂-MeOH-EtOAc重结晶两次后得到产率为90％的白色块状晶体的该酸分析样品：熔点131-133℃(文献报道的熔点143-145℃，产率49％)；¹H NMR(DMSO-d₆CDCl₃)：δ10.91(s，1H，OH)，8.89(s，1H，NH)，7.74(t，1H)，7.16(d，2H)，6.71(s，2H，NH₂)；IR(KBr)：3443(m)，3334(s)，1660(s，CON)，1606(s)，1262(w)，1017(w)，805(m)cm^-1。

E.3-羟基-4-氧代-3，4-二氢-5-氮杂苯并-1，2，3-三嗪(HODhat).在搅拌下，向以上步骤D产生的细粉产物(7.3g，47.6mmol)在28ml水中的悬液中加入8.5ml浓盐酸。在冰浴中冷却的条件下，向该混合物中滴入5mlNaNO2(4.93g，71.4mmol)的冷水溶液，温度维持低于5℃。加入完毕后，继续在冰浴中再搅拌30分钟，过滤收集沉淀的固体，少量冷水洗涤并空气干燥得到黄色固体的2.52g(32％)三嗪：熔点195℃(爆炸(explodes))[文献报道的熔点：195℃(爆炸)]。在乙醇水(9∶1体积/体积)中重结晶得到淡橙色-黄色针状的分析样品(2.1g)：熔点203℃(爆炸)；¹H NMIR(DMSOd₆)：δ9.13(dd，11H)，8.65(dd，111)，8.08(dd，11H)；IR(KBr)：2600(宽峰，OH)，1713(vs，C(O)N)，1574(s)，1420(m)，1230(sh，s)，1185(s)，1066(sh，s)，974(sh，m)，794(m)cm^-1。

从母液中分离淡粉色针状的3-羟基吡啶甲酸(1.6g，20％)：熔点222-224℃(文献报道的熔点220-222℃)。C₆H₅NO₃的分析计算值：C 51.80，H 3.62，N 10.07；实测值：C 51.52，H 3.58，N 9.98。

实施例4

3-羟基-4-氧代-3，4-二氢-5-氮杂苯并-1，3-二嗪(HODhad)

实施例3中步骤D产生的1.224g(8mmol)产物和3ml 98％甲酸的混合物加热回流15分钟，然后加入8ml水，整个体系煮沸15分钟，冷却至室温。过滤收集分离出的沉淀物，用水洗涤(2×5ml)。用乙醇煮沸两次后，得到0.71g(55％)黄色固体的分析纯形式的HODhad：熔点318.5-320℃(分解)；¹H NMR(DMSO-d₆)：δ12.15(br，1H，OH)，8.85(dd，1H)，8.69(s，1H，CH)，8.17(dd，1H)，7.84(dd，1H)；IR(KBr)：2625(宽峰，OH)，1683(sh，vs，CON)，1600(w)，1446(m)，1410(s)，1359(s)，1223(s)，990(s)，902(m)，791(s)cm^-1。

C₇H₅N₃O₂的分析计算值：C，51.53；H，3.09；N，25.76。

实测值：C，51.46；H，3.00；N，25.80。

实施例5

CBA-AiB-ODhat

在冰浴中向CBZ-Aib-OH(0.3555g，1.5mmol)和HODhat(实施例4的产物)(0.246g，1.5mmol)在10ml THF和5ml DMF的悬液中加入0.3168gEDC HCl(1.65mmol)，同时搅拌。得到的混合物于室温搅拌3小时。真空除去溶剂，用40ml EtOAc萃取油状残留物。用5％柠檬酸水溶液(3×10ml)、10％NaHCO₃溶液(3×10ml)和盐水(3×10ml)洗涤EtOAc溶液，MgSO₄干燥。

蒸发溶剂得到奶黄色油状残留物，该残留物在真空中用P₂O₅干燥过夜后固化。粗品固体经快速层析用EtOAc洗脱纯化得到0.46g(80％)奶黄色固体的上述酯：熔点57-59℃；¹H NMR(CDCl₃)：δ9.05(dd，1H)，8.49(dd，1H)，7.86(dd，1H)，7.26(m，5H，C₆H₅)，5.47(s，1H，NH)，5.10(s，2H，CH₂)，1.73(s，6H，2CH₃)；IR(KBr)：1813(m，COO)，1735(vs，NCO)，1267(s)，1052(s)cm^-1。

C₁₈H₁₇N₃O₅的分析计算值：C，56.39；H，4.47；N，18.27。

实测值：C，56.10；H，4.56；N，18.08。

实施例6

CBZ-Aib-ODhad

如实施例6所述，在存在EDC HCl在15ml THF-DMF中的混合物(2∶1)时，用0.3555g(1.5mmol)的CBZ-Aib-OH处理0.2447g(1.5mmol)的HODhad(实施例5的产物)得到0.52g(90％)白色固体的以上产物：熔点48-50℃；¹H NMR(CDCl₃)：δ8.89(dd，1H)，8.13(dd，1H)，7.92(s，1H，CH)，7.71(dd，1H)，7.36(m，5H，C₆H₅)，5.47(s，1H，NH)，5.15(s，2H，CH₂)，1.75(s，6H，2CH₃)；IR.(KBr)：1809(s，COO)，1718(vs，NCO)，1590(sh，m)，1522(sh，m)，1468(m)，1274(sh，s)，1059(s)，974(w)cm^-1。

C₁₉H₁₈N₄O₅的分析计算值：C，59.68；H，4.74；N，14.65。

实测值：C，59.43；H，4.80；N，14.58。

实施例7

Me₃C-COODhat

在干燥N₂气氛中，向HODhat(0.3282g，2mmol)的10ml干燥二氯甲烷悬液中加入TEA(0.42ml，3mmol)。得到的混合物冷却至0℃，搅拌下滴入新戊酰氯(0.27ml，2.2mmol)在5ml干燥二氯甲烷中的溶液。在冰浴中继续搅拌30分钟，使温度回升至室温。4小时后，用30ml CH₂Cl₂稀释混合物，整个体系用饱和的NaHCO₃(3×20ml)、盐水(2×20ml)和水(2×20ml)洗涤，最后用无水MgSO₄干燥。蒸发溶剂得到浅黄色固体，该固体从EtOAc-己烷重结晶得到0.31g(61％)无色针状的分析纯的酯产物：熔点137-139℃；¹H NMR(CDCl₃)：δ9.16(dd，1H)，8.57(dd，1H)，7.95(dd，1H)，1.51(s，9H，3CH₃)；IR(KBr)：3056(s)，1797(vs，COO)，1735(vs，CONO)，1566(s)，1479(m)，1215(s)，1181(m)，1056(sh，s)，1016(s)，974(m)，831(s)cm^-1。

C₁₁H₁₂N₄O₃的分析计算值：C，53.21；H，4.87；N，22.57。

实测值：C，53.08；B，4.74；N，22.51。

实施例8

Me₃C-COODhad

使用实施例8所述的方法，在存在TEA(0.48ml，3.45mmol)时，用新戊酰氯(0.31ml，2.53mmol)在15ml干燥二氯甲烷中的溶液处理如实施例5所述制备的HODhad(0.3708g，2.3mmol)得到0.37g(65％)白色固体的Me₃C-COODhad。从EtOAc-己烷中两次重结晶后得到无色晶体的分析样品(0.26g)：熔点125-126.5℃；¹H NMR(CDCl₃)：δ8.91(dd，1H)，8.13(dd，1H)，8.07(s，1H，CH)，7.73(dd，1H)，1.48(s，911，3CH₃)；IR(KBr)：3036(w)，1794(s，COO)，1715(vs，CONO)，1583(sh，m)，1464(m)，1427(m)，1296(s)，1059(vs)，1018(s)，824(m)cm^-1。

C₁₂H₁₃N₃O₃的分析计算值：C，58.29；H，5.29；N，17.00。

实测值：C，58.34；B，5.28；N，17.02。

实施例9

O-(3，4-二氢-4-氧代-5-氮杂苯并-1，2，3-三嗪-3-基)-1，1，3，3-四甲基脲六

氟磷酸盐(HDATU)

在干燥N₂气氛中，向实施例4制备的HODhat(0.246g，1.5mmol)在10ml干燥二氯甲烷的悬液中加入TEA(0.22ml，1.65mmol)。搅拌5分钟后，得到的浅黄色澄清溶液在冰浴中冷却至0℃，在搅拌下分批加入0.4209g(1.5mmol)1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸盐(TCFH)。在冰浴中继续搅拌30分钟，然后于室温搅拌1.5小时。过滤收集分离出的沉淀物，用二氯甲烷洗涤两次，MeCN-乙醚重结晶两次得到0.42g(69％)白色固体的分析纯六氟磷酸盐产物：熔点152℃(爆炸)；1H NMR(CD₃CN)：δ9.19(dd，1H)，8.69(dd，1H)，8.13(dd，1H)，3.21(s，12H，4CH₃)；IR(KBr)：1738(vs)，1702(vs，CON)，1526(m)，1457(m)，1412(s)，1266(m)，1165(sh，s)，1072(m)，964(s)，850(sh，vs)，708(s)cm^-1。

C₁₁H₁₅N₆O₂PF₆的分析计算值：C，32.36；H，3.70；N，20.58。

实测值：C，32.14；H，3.79；N，20.47。

实施例10

O-(3，4-二氢-4-氧代-5-氮杂苯并-1，3-二嗪-3-基)-1，1，3，3-四甲基脲六

氟磷酸盐(HDADU)

使用实施例10的方法，在存在TEA(0.30ml，2.1mmol)时用10ml干燥CH₂Cl₂配制的TCFH(0.4209g，1.5mmol)处理实施例5制备的HODhad(0.2447g，1.5mmol)得到0.55g(90％)白色固体的上述六氟磷酸盐产物，MeCN-乙醚重结晶两次得到0.48g(79％)白色固体的分析纯的盐：熔点203-205℃(分解)；¹H NMR(CD₃CN)：δ8.91(dd，1H)，8.64(s，1H，CH)，8.22(dd，1H)，7.88(dd，1H)，3.17(s，12H，4CH₃)；IR(KBr)：1701(vs，CON)，1605(sh，m)，1528(s)，1471(s)，1416(sh，s)，1266(s)，1171(m)，1068(w)，965(s)，852(sh，vs)，718(s)cm-1。

C₁₂H₁₆N₅O₂PF₆：C，35.38；H，3.96；N，17.19。

实测值：C，35.51；H，3.86；N，17.33。

实施例11

O-(3，4-二氢-4-氧代-5-氮杂苯并-1，2，3-三嗪-3-基)-1，1，3，3-双(四亚甲基)

脲六氟磷酸盐(HDAPyU)

在干燥N₂气氛中，于0℃向25ml干燥CH₂Cl₂配制的0.4923g(3mmol)HODhat(如实施例4所述制备)和0.46ml(3.3mmol)TEA的混合物中分批加入1.0g(3mmol)PyClu，同时搅拌。在冰浴中继续搅拌1小时，然后于室温搅拌过夜。用CH₂Cl₂稀释澄清的淡黄色混合物至50ml。用冰冷的水(2×15ml)洗涤，MgSO₄干燥。除去溶剂，油状残留物溶解于5mlMeCN，加入30ml乙醚，整个体系于-20℃保存几天直至油状物固化。过滤收集固体，重新溶解于20ml CH₂Cl₂，用冰冷的水(2×5ml)洗涤溶液，MgSO₄干燥。除去溶剂得到粉-黄色的固体，MeCN-乙醚重结晶得到0.42g(30％)白色晶体的上述脲盐产物：熔点136.5℃(爆炸)；¹H NMR(CD₃CN)：δ9.17(dd，1H)，8.67(dd，1H)，8.11(dd，1H)，3.75(t，8H，4NCH₂)，1.97(m，8H，4CH₂)；IR(KBr)：2985(m)，1734(vs，CON)，1679(vs)，1448(sh，s)，1341(m)，1169(m)，1072(m)，964(m)，846(sh，vs)cm^-1。

C₅H₁₉N₆O₂PF₆：C，39.13；H，4.16；N，18.26。

实测值：C，38.94；B，4.08；N，18.30。

实施例12

[(3，4-二氢-4-氧代-5-氮杂苯并-1，2，3-三嗪-3-基)氧]三(吡咯烷基)六氟

磷酸盐(PyDAOP)

在干燥N₂气氛中，于0℃向10ml干燥CH₂Cl₂配制的0.2462g(1.5mmol)HODhat(如实施例4所述制备)和0.24ml(1.65mmol)TEA的混合物中分批加入0.6993g(1.5mmol)PyBrOP(三(吡咯烷基)溴代六氟磷酸盐)，同时搅拌。在冰浴中继续搅拌1小时，然后于室温搅拌过夜。用CH₂Cl₂稀释澄清的淡黄色混合物至25ml，用冰冷的水(2×10ml)洗涤溶液，MgSO₄干燥。用50ml乙醚处理得到的淡黄色澄清溶液，过滤收集分离出的固体，MeCN-乙醚重结晶后得到0.45g(54％)白色固体的分析纯的PyDAOP：熔点149℃(分解)；¹H NMR(CD₃CN)：δ9.20(dd，1H)，8.67(dd，1H)，8.13(dd，1H)，3.42(td，12H，6NCH₂)，1.96(td，12H，6CH₂)；IR(KBr)：2982(m)，2893(m)，1742(vs，CON)，1566(m)，1462(sh，w)，1270(s)，1224(s)，1140(s)，1110(s)，1049(sh，m)，960(s)，839(sh，vs)cm^-1。

C₁₈H₂₇N₇O₂P₂F₆的分析计算值：C，39.34；H，4.95；N，17.84。

实测值：C，39.36；H，5.09；N，17.90。

实施例13

方法A.在磁力搅拌下，向0.42g(3.054mmol)HOAt的20mL无水CH₂Cl₂悬液中加入0.43mL(1当量)三乙胺。得到的澄清黄色溶液在N₂气氛下于冰浴中冷却并用0.85g(1当量)2，8-二甲基吩次膦酰氯(2，8-dimethylphenoxaphosphinic chloride)缓慢处理。

反应混合物于0℃搅拌30分钟，然后于室温搅拌2小时。用30mlCH₂Cl₂稀释后，用水、饱和的NaCl水溶液(30mL)洗涤有机相，MgSO₄干燥。借助水泵用旋转蒸发仪除去溶剂后，残留物经CH₂Cl₂-己烷重结晶得到0.65g(56.3％)白色晶体的上述次膦酸酯：熔点164-166℃(分解)；¹H-NMR(200MHz，CDCl₃)δ2.472(s，6)，7.218-7.559(m，5)，8.056-8.130(d，2)，8.319-8.368(d，2)，8.319-8.368(d，1)，8.698-8.729(d，1)。IR(KBr)：1128-(P＝O)。C₁₉H₁₅N₄PO₃的分析计算值：C，60.32；H，4.0：N，14.81。HREIMS：M+378.0882；实测值：378.0877。

方法B：在磁力搅拌下，向1.25g HOAt的20mL无水CH₂Cl₂悬液中加入0.623g(1当量)咪唑。得到的白色悬液在N₂气氛中于冰浴中冷却并用2.56g(1当量)2，8-二甲基吩次膦酰氯缓慢处理。反应混合物于0℃搅拌30分钟，然后于室温搅拌2小时，用30ml CH₂Cl₂稀释。反应混合物在N₂气氛中在烧结的玻璃漏斗中过滤，无水MgSO₄干燥。借助水泵用旋转蒸发仪除去溶剂后，残留物经CH₂Cl₂-己烷重结晶得到2.86g(82.3％)白色晶体的上述次膦酸酯，其熔点和NMR数据与以上报道的数据相同。

实施例14

还使用本文的上述方法制备以下化合物：

(白色固体)

其中吩次膦酸(phenoxophosphinic acid)产物具有以下取代基。

(a)2，8-二溴
(a)2，8-二溴	(b)2，8-二氯
(c)2，8-二氟	(b)2，8-二氯
(c)2，8-二氟	(d)2，8-二甲氧基
(e)2，3，7，8-四甲基	(d)2，8-二甲氧基

实施例15

采用实施例14的方法B并用4-Me-HOAt替代HOAt制备白色固体的上述化合物。

实施例16

2-邻-甲苯基-氧膦基氧-7-氮杂苯并三唑(DtpOAt)

A.二-邻-甲苯基膦氧化物.在氮气环境中向配有冷凝器、磁力搅拌器和滴液漏斗的3-颈烧瓶中的100ml无水乙醚中加入镁屑(13.96g)。向混合物中缓慢加入100ml乙醚配制的邻-溴代甲苯(100g，0.579mol)。在加入过程中，格利雅反应开始，该反应变得非常剧烈需要频繁用冰浴冷却。加入完毕后(40分钟)，反应混合物回流15分钟，然后用冰浴冷却并缓慢用40ml乙醚配制的亚磷酸二乙酯(30.8ml，0.232mol)处理。混合物再回流15分钟，用冰浴冷却。在磁力搅拌下，向冷却的混合物中缓慢加入250ml 10％HCl和200ml水。蒸发乙醚，过滤收集不溶的氧化膦，CH₂Cl₂-己烷重结晶(加入几滴甲醇以帮助溶解固体)得到39.47g(73.9％)浅黄色固体的氧化膦：熔点94℃，文献报道熔点93-94℃，产率57％；¹H-NMR(60MHz，CDCl₃)：δ2.376(s，6)，4.234(s，1)，7.19-7.94(m，8)；IR(KBr)：2369(P-H)，1168(P＝O)cm^-1。

B.二-邻-甲苯基次膦酸.用40ml 30％H₂O₂突然处理80ml 5N NaOH水溶液配制的15.04g二-邻-甲苯基膦氧化物的悬液，得到的混合物在蒸气浴上加热20分钟。得到澄清的溶液并趁热过滤。滤液在冰浴中冷却，用浓HCl缓慢酸化导致白色固体沉淀，该沉淀物经MeOH-乙醚重结晶得到13.4g(83.3％)次膦酸：熔点174-176℃，文献报道的熔点175-177℃，产率58-74％；¹H-NMR(60MHz，TFA)：δ2.369(s，6)，7.245-8.124(m，8)；IR(KBr)：1143(P＝O)cm^-1。

C.二-邻-甲苯基次膦酰氯(DtpCl).在冰浴冷却条件下，向50ml亚硫酰氯中缓慢加入二-邻-甲苯基次膦酸(13.5g)。混合物在使用CaCl₂干燥试管的条件下回流3小时。用水泵在通风厨中除去剩余的亚硫酰氯后，分馏油状残留物得到13.55g(93.4％)快速固化的无色油状的次膦酰氯(沸点158-165℃/0.1mmHg)，文献报道沸点150-160℃，产率80.5％；¹H-NMR(60MHz，CDCl₃)：δ2.449(s，6)，7.05-8.08(m，8)；IR(KBr)：1220(P＝O)cm^-1。

实施例17

二-邻-甲苯基-氧膦基氧-7-氮杂苯并三唑(DtpOAt)

根据以下实施例16方法的改变方案制备上述化合物：

方案1.

A.制备二-邻-甲苯基膦氧化物(1).在氮气环境中向配有有效的冷凝器、磁力搅拌器和两个滴液漏斗的1L的3-颈烧瓶中的100ml无水乙醚中加入镁屑(13.96g)。向混合物中缓慢加入邻-溴代甲苯(72ml)。调节加入速度使得乙醚缓慢沸腾。在加入过程中无需冰浴冷却。加入完毕后(40分钟)，反应混合物回流2小时，然后用冰浴冷却。从第二滴液漏斗缓慢加入50ml乙醚配制的亚磷酸二乙酯(30.8ml)，反应混合物于室温搅拌过夜。亚磷酸二乙酯在使用前蒸馏，沸点62-64℃(5mmHg)。向冷却的混合物中缓慢加入250ml 10％HCl和200ml水，用旋转蒸发仪除去乙醚。过滤分离不溶物质，干燥并经甲苯重结晶得到30.7g(57.4％)浅黄色晶体的氧化膦：熔点95-97℃，文献报道熔点94-95℃。

B.制备二-邻-甲苯基次膦酸(2).用40ml 30％H₂O₂处理二-邻-甲苯基膦氧化物(15g)和80ml的5N NaOH。悬液在蒸气浴上温和加热20分钟。加热应小心进行，因为反应可能很剧烈。如果反应变得剧烈，在大烧杯中进行反应以防产物损失。(反应混合物不会爆炸，但会产生许多泡沫和气体)。将热的反应混合物加入到冰冷的HCl溶液中(90ml浓HCl加上30g冰)。通过氯仿(3×75ml)萃取分离得到的白色固体。用水洗涤氯仿层，硫酸镁干燥。真空除去溶剂后，得到的固体经95％乙醇重结晶。以上量的氧化膦分两批氧化(每批15g)。两次的纯次膦酸平均产率是79％：熔点174-175℃，文献报道的熔点175-177℃。

C.制备二-邻-甲苯基次膦酰氯(3).在用冰浴冷却条件下，向75ml亚硫酰氯中一次性加入二-邻-甲苯基次膦酸(22.5g)，反应混合物加热回流3小时。除去过量的亚硫酰氯后，残留的油状物溶解于干燥的二氯甲烷(DCM)中，旋转蒸发仪除去DCM，以上操作重复三次。得到的油状物的酰基氯静置后固化，可直接使用无需进一步纯化。

D.制备Dtp-OAt-向12.7g HOAt的300mL无水DCM悬液中加入16.7mL DIEA。得到的澄清黄色溶液在氮气气氛中于冰浴中冷却，用25.8g溶解于300ml DCM的二-邻-甲苯基次膦酰氯处理。反应混合物于0℃搅拌1小时，然后于室温搅拌2小时。用600ml DCM稀释反应混合物，用水和饱和的NaCl水溶液洗涤，MgSO₄干燥。借助水泵用旋转蒸发仪除去溶剂后，残留物经CH₂Cl₂/乙酸乙酯重结晶得到30.1g(88％)白色晶体的活性酯，熔点175-177℃，文献报道的熔点170-172℃。

应注意，该物质在DMF中溶解度极低。一些自动的肽合成仪，例如AIB 433A肽合成仪需要将DMF配制的活化物溶液放置于一个试剂瓶中，然后该试剂瓶将活化的物质递送至反应容器。溶液中试剂的浓度必须为0.3-0.8M以保证活化物质的浓度合适。由于该试剂在DMF中的溶解度极低，如果使用这种自动合成仪，偶联两个氨基酸形成肽的产率低。然而，将本实施例产物的结构稍作修饰使得其可溶于DMF便提高了它偶联氨基酸形成肽的能力。以下实施例描述了极大提高Dtp-OAt在DMF和其它有机溶剂中溶解度的Dtp-Oat的结构修饰。

实施例18

5-t-Bu-Dtp-Oat

根据以下概述的方案合成新的偶联剂。合成始于市售的4-叔丁基-甲苯，5步完成。

方案2

A.制备2-溴-4-叔丁基甲苯(4).根据Reich等， J.Med.Chem.，1996，39，2781所述方法进行溴化，该文献的内容引作参考。向4-叔丁基甲苯(90mL，0.518mol)和两份I₂晶体的溶液中滴加溴(27mL，0.524mol)。反应混合物于室温搅拌3小时，然后倒入1L冷水中。混合物转移至分液漏斗，收集下层。用饱和的NaHCO₃、盐水洗涤粗品2-溴-4-叔丁基甲苯，MgSO₄干燥。减压蒸馏粗产物，首先使用水泵然后用高真空油泵。借助水泵在达100℃沸点处收集第一馏份，在高真空中蒸馏残留物得到90.5g(77％)无色液体的溴化物，沸点61-65℃(3-5mm/Hg)。

B.制备双-(5-叔丁基-2-甲基苯基)膦氧化物(5).根据实施例17所述化合物1的方法获得该化合物。DCM/己烷重结晶氧化膦(5)得到15.8g(32％)白色晶体的氧化物，熔点178-180℃；¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ1.317(18H，s)，2.334(6H，s)，7.715(2H，dd)，7.480(2H，dt)，7.779(2H，dd)，8.215(1H，d，J_P-H 474Hz)。IR(KBr)：2336(PH)，1187和1168cm^-1(P＝O)。C₂₂H₃₁OP的分析计算值：C，77.16；H，9.12。实测值：C，77.21；H，8.98。

C.制备双-(5-叔丁基-2-甲基苯基次膦酸(6).向60ml的双-(5-叔丁基-2-甲基苯基)膦氧化物(6g，17.5mmol)乙酸溶液中缓慢加入15ml的30％H₂O₂。反应混合物于室温搅拌3天，然后倒入300ml冷水中。过滤分离白色沉淀物，乙醇/水重结晶得到6g(95％)白色晶体的纯酸(6)，熔点182-183℃；¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ1.230(18H，s)，2.172(6H，s)，7.034-7.902(6H)。IR(KBr)：1162cm^-1(P＝O)。C₂₂H₃₁O₂P的分析计算值：C，73.72；H，8.72。实测值：C，74.00；H，9.01。

D.制备双-(5-叔丁基-2-甲基苯基)次膦酰氯(7).根据实施例17所述化合物(3)的方法制备该化合物。该酰基氯可用于下一步骤而无需纯化。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ1.276(18H，s)，2.384(6H，s)，7.173-7.213(2H，m)，7.493(2H，dt)，7.903(2H，dd)。IR(KBr)：1231cm^-1(P＝O)。

E.制备双-(5-叔丁基-2-甲基苯基)氧膦基氧-7-氮杂苯并三唑.向30ml0.76g(5.58mmol)HOAt的无水DCM悬液中加入0.78mL(5.6mmol)TEA。得到的澄清黄色溶液在氮气气氛中于冰浴中冷却，用溶解于20ml DCM的2g(5.27mmol)双-(5-叔丁基-2-甲基苯基)-次膦酰氯处理。反应混合物于0℃搅拌1小时，然后于室温搅拌4-5小时。用40ml DCM稀释反应混合物，水和饱和的NaCl洗涤，MgSO₄干燥。借助水泵用旋转蒸发仪除去溶剂。用己烷、然后用含有少量乙酸乙酯的己烷重结晶后获得白色固体的以上产物[2.3g(86％)]：熔点86-87℃；¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ1.271(18H，s)，2.687(6H，s)，7.264-7.298(2H，m)，7.369(1H，dd)，7.545(2H，dt)，7.974(2H，dd)，8.309(1H，dd)，8.729(1H，dd)。IR(KBr)：1242cm^-1(P＝O)。C₂₇H₃₄N₄O₂P的HRFAB MS，m+477.2419，实测值477.2400。

小规模溶解度测试显示该化合物(叔丁基-Dtp-OAt)在DMF中高度可溶，因此可用于自动肽合成仪。

如上所示，不希望受束缚，据信在使用脲或膦盐的肽合成期间，N-保护的羧酸首先与偶联剂反应形成活化的酯，然后与氨基部分反应得到相应的酰胺。因此，形成这种活化酯的速度是评价偶联剂效率的重要因素之一。如下文的化学方程式所述，以下选择的模型涉及N-苄氧基羰基-α-氨基异丁酸(CBZ-Aib-OH)在DMF和CDCl₃中转化为相应的活化酯。

偶联剂

该项研究比较了HOBt、HOAt与HODhbt的衍生物：

和和

NMR检测CBZ-Aib-OH(δ5.09)和活化酯(δ5.20)的苄型CH₂单元。真实(authentic)合成证实活化酯的峰分配在δ5.20。

由于Aib羧基的空间位阻，以上方程式中的活化比蛋白原性氨基酸情况中的慢，从而更精密地区分不同的偶联剂。

该方法描述于下文实施例19中。

实施例19

(a)二-邻-甲苯基氧膦基氧苯并三唑(DtpOBt).以类似于制备实施例16的产物的方法进行制备：在存在DIEA(0.21ml，1.2mmol)时，于10ml干燥CH₂Cl₂中用Dtp-Cl(0.267g，1mmol)处理HOBt(0.1251g，1mmol)5小时，后处理后得到0.24g(66％)白色固体。CH₂Cl₂-己烷重结晶得到0.18g酯的分析纯样品，为无色晶体：熔点198-200℃；1H-NMR(CDCl₃)：δ8.06(m，3)，7.30(m，6)，2.62(s，6)；IR(KBr)：3065(W)，1593(s)，1457(s)，1362(m)，1278(m)，1230(vs)，1151(s)，1084(sh，s)，812(vs)，774(sh，vs)，704(m)cm^-1。C₂₀H₁₈N₃O₂P的分析计算值：C，66.10；H，4.92；N，11.56。实测值：C，65.75；H，4.97；N，11.41。

(b)根据实施例14中所述制备DmppOAt的方法A使用HODhbt制备3-[二-邻-甲苯基氧膦基氧]-3，4-二氢-4-氧代-2，3-苯并三嗪](DtpODhbt)，HODhbt以类似于实施例4所述方法使用HOBt替代HOAt并用二-邻-甲苯基次膦酰氯制备。乙酸乙酯-乙醚重结晶后获得白色晶体的产物(76.5％)：熔点178-179℃(分解)；¹H-NMR(200MHz，CDCl₃)：δ2.58(s，6)，7.28(m，4)，7.487-7.570(m，2)，7.75(m，1)，7.90-8.15(m，4)，8.351(dd，1)；IR(KBr)：1709(C＝O)，1240(P＝O)cm^-1。C₂₁H₁₈N₃PO₃的分析计算值：C，64.45；H，4.64；N，10.74。实测值：C，64.49；H，4.54；N，10.69。

(c)形成活化酯.向0.5ml的0.1mmol CBZ-Aib-OH和0.1mmol合适偶联剂的CDCl₃或DMF溶液中加入0.1mmol DIEA。混合物立即转移至放在Hitachi R-1200(60MHz)NMR仪器的探测器(probe)上的NMR试管中。随着反应在探测温度(37℃)的进行，对δ5.1(酸)和5.2(活化酯)处的¹H-NMR峰进行积分可大致测定相对速率。结果示于表1，这些结果代表了表示至少两次测定的平均值。

偶联剂	t_1/2(DMF)，分钟	t_1/2(CDCl₃)，分钟
偶联剂	t_1/2(DMF)，分钟	t_1/2(CDCl₃)，分钟	DEPOAt	＜2	2-3
DPOPOAt	＜2	2-3	DEPOAt	＜2	2-3
DPOPOAt	＜2	2-3	DEPDBt	7-8	45-47
DPOPDBt	＜2	＜2	DEPDBt	7-8	45-47
DPOPDBt	＜2	＜2	DtpOBt	65-70	11-12小时
N-HATU	＜2	14-15	DtpOBt	65-70	11-12小时
N-HATU	＜2	14-15	N-HAPyU	＜2	＜2
HDTU	＜2	＜2	N-HAPyU	＜2	＜2
HDTU	＜2	＜2	N-HBTU	＜2	＞24小时

在以下实施例中，应理解氨基酸序列是以氨基到羧基，自左向右表示。

实施例20

为测试构型控制，制备三种不同的肽，CBZ-Phe-Val-Pro-NH₂、CBZ-Gly-Phe-Pro-NH₂和CBZ-Gly-Gly-Val-Ala-Gly-GlyOMe(SEQ ID NO：1)并测定偶联期间的构型丧失。以下给出了二肽的示范性方法：

A.CBZ-Phg-Pro-NH₂作为标准方案，于0℃用0.125mmol合适的偶联剂处理1ml DMF或其它溶剂配制的35.6mg(0.125mmol)CBZ-Phg-OH、14.3mg(0.125mmol)H-Pro-NH₂和0.25mmol碱。混合物于0℃搅拌1小时，然后于室温搅拌过夜。用25ml EtOAc稀释得到的混合物，用HCl(2×10ml)、10％NaHCO₃溶液(2×10ml)和盐水(2×10ml)洗涤，MgSO₄干燥。除去溶剂后得到油状肽残留物。油状残留物溶解于1ml CH₂Cl₂并加入20ml己烷。过滤得到白色固体。通常含有LL-和DL-形式的CBZ-Phg-Pro-NH₂的约5mg该粗产物溶解于4ml MeCN并如Wenschuh等在 J.Org.Chem.，1995， 62，405中所述通过HPLC直接分析，该文献的内容引作参考。

B.CBZ-Phe-Val-Pro-NH₂.按照上述CBZ-Phg-Pro-NH₂的方法制备。

C.CBZ-Gly-Phe-Pro-NH₂.按照上述CBZ-Phg-Pro-NH₂的方法制备。

D.CBZ-Gly-Gly-Val-Ala-Gly-Gly-OMe(SEQ ID NO 1.)如制备CBZ-Phg-Pro-NH₂所述，于0℃用0.125mmol合适的偶联剂处理45.6mg(0.125mmol)CBZ-Gly-Gly-Val-OH、31.7mg(0.125mmol)H-Ala-Gly-Gly-Ome·HCl和49.6μl(0.375mmol)TMP在1ml DMF中的溶液。得到的混合物于0℃搅拌1小时，然后于室温搅拌过夜。蒸发溶剂，然后使用MeOH/CHCl₃/HOAc(3∶7∶0.1)作为洗脱剂通过直接柱层析分离粗品六肽甲酯。柱上洗下含有LL-和DL-形式六肽的粗物质通过如Carpino，J.Org.Chem.， 1994，59，695所述的HPLC检测，该文献的内容引作参考。

结果示于表2

表2.偶联剂在使用2当量TMP作为碱，在DMF中进行[2+1]偶联(得到CBZ-Phe-Val-Pro-NH₂、CBZ-Gly-Phe-Pro-NH₂)和[3+3]偶联(得到CBZ-Gly-Gly-Val-Ala-Gly-Gly-OMe)过程中对构型丧失的作用。

偶联剂	CBZ-Phe-Val-Pro-NH₂	CBZ-Gly-Phe-Pro-NH₂	CBZ-Gly-Gly-Val-Ala-Gly-Gly-OMe
偶联剂	CBZ-Phe-Val-Pro-NH₂	CBZ-Gly-Phe-Pro-NH₂	CBZ-Gly-Gly-Val-Ala-Gly-Gly-OMe	DEPOAtDmppOAtDtpOAtN-HATUDEPDBtDtpODhbtHDTUDtpOBtN-HBTU	0.9(0.9)3.6(2.0)2.9(1.4)5.0(1.8)3.54.3(3.6)8.5(4.0)11.414.2	＜0.10.30.41.1(0.9)0.32.23.6	＜0.12.42.43.38.2

^a括号内的数字指用1当量的合适的HOXt，例如加入HOAt、HOBt或HODhbt进行的相同测定。

本文的数据证实本发明的新的基于磷的OAt衍生物在保持构型中比其它测试的试剂，包括N-HATU更有效。以前描述的最好的脲/胍盐(N-HAPyU)有时与新的磷酯的结果相同，但当观察到区别时，证实后者在迄今为止测试的每种情况中均更有效。

在涉及N-HAPyU的这些数据中获得的结果中发现，就新试剂DEPOAt和DPOPOAt而言，过量1当量的脯氨酸用作碱时，对于三肽CBZ-Phe-Val-Pro-NH₂，在DMF中观察到的最低差向异构化水平(0.5％LDL-异构体)。换用其它溶剂，在本发明的新磷试剂和相关的脲/胍盐之间发现甚至更大的区别。例如，在使用特定的结构破碎组合溶剂三氟乙醇/三氯甲烷(TFE，TCM，1∶3)中，对于DPOPOAt/TMP得到12.2％的LDL-形式，而NHATU/TMP是38.5％。在存在TMP时，在CH₂Cl₂中得到的2.2％(DEPOAt)和2.9％(DPOPOAt)明显好于胍试剂NHATU(9.3％)和N-HAPyU(5.3％)观察到的值。

为测定氯化二苯基偶磷氯化物(diphenylphosphorochloridate)(DPOPCl)的偶联效率，使用了各种偶联条件。注意到无添加剂时，对于二异丙基乙胺和三甲基吡啶，使用DPOPCl都得到极少量的所需肽。如果存在1当量的HOAt(1-羟基-7-氮杂苯并三唑)，结果尚可。实际上，含有DPOPOAt作为活性物质的混合物DPOPCl/HOAt/碱得到与单独使用试剂DPOPOAt相当的结果。

也选择三肽CBZ-Phe-Val-Pro-NH₂作为研究在固相条件下与使用本发明各种试剂相关的构型丧失的模型。与溶液中获得的结果相比，这些数据显示在固相方式中要维持构型有多困难。系统包括在存在8当量的DMF配制的三甲基吡啶时，在H-Pro-PAL-PEG-PS上偶联4当量的CBZ-Phe-Val-OH过夜，用三氟乙酸/H₂O(9∶1)在1小时期间从树脂上切割三肽并如对溶液系统所述分离非对映体。虽然在所有情况中均发生普遍的构型丧失，这些数据显示各种偶联剂的效果与在溶液中的顺序相同：偶联剂/LDL(％)：DEPOAt/11.6，N-HAPyU/13.0，N-HATU/13.6，DPOPODBt/19.4，DEPDBt/19.5，HDTU/24.2，N-HBTU/29.8。

实施例21

在固相上经分步偶联的ACP装配

为证实基于有机磷的偶联剂的适应性并比较其与相应的脲/胍类似物在固相合成中的性能，进行了多次ACP十肽片段65-74(H-Val-Gln-Ala-Ala-Asp-Tyr-Ile-Asn-Gly-NH₂)(SEQ.ID.NO.2)的合成。

方案如下：用CH₂Cl₂(3×10ml)和DMF(3×10ml)洗涤装在配有特氟隆过滤器的10-ml一次性注射器中的150mg Fmoc-Gly-PAL-PEG-PS树脂(0.19mmol/g，0.0285mmol)，用DMF配制的20％哌啶(10ml)脱保护7分钟。脱保护的树脂用DMF(3×10ml)、CH₂Cl₂(3×10ml)洗涤，再用DMF(3×10ml)洗涤。在4-ml小瓶中的使用0.15ml DMF配制的25.5mg(0.04mmol，1.5当量)Fmoc-Asn(Trt)-OH、15.75mg(0.04mmol，1.5当量)DPOPOAt和14.89μl(0.09mmol，3当量)DIEA(二异丙基乙胺)预活化七分钟。在必需的预活化期间(7分钟)后，活化的氨基酸的溶液加入到树脂中。用0.04ml DMF洗涤小瓶，洗涤液也加入上述树脂。得到的树脂混合物于室温反应1.5分钟。DMF(3×10ml)洗涤上样的树脂，用10ml DMF配制的20％吡啶进行Fmoc基团脱保护7分钟。DMF(3×10ml)、CH₂Cl₂(3×10ml)和DMF(3×10ml)洗涤脱保护的树脂，然后用Fmoc-Ile-OH进行类似的偶联步骤。其它氨基酸类似偶联，在最终用Fmoc-Val-OH偶联并用DMF配制的20％吡啶脱去Fmoc保护基团后，用DMF(3×10ml)、CH₂Cl₂(3×10ml)、EtOH(5ml)和乙醚(5ml)洗涤上样的树脂。然后用10ml 90％三氟乙酸水溶液处理树脂2小时，用10ml CH₂Cl₂配制的10％三氟乙酸和10ml CH₂Cl₂在过滤器上洗涤树脂。合并的滤液蒸发至干。无水乙醚洗涤粗产物4次，离心分离。通过粗产物的重量计算产率。为了分析，将1mg粗产物溶解于1ml 0.1％三氟乙酸水溶液，直接注射到HPLC柱上分析。使用相同的偶联剂重复该方法直至制备得到SEQ ID NO：2所示肽。

使用表3所列每种偶联剂重复该方法来制备SEQ ID NO：2所示肽。结果示于表3。

表3.根据通过基于HOAt-和HODhbt-偶联剂的ACP(65-74)装配的HPLC分析确定的产物分布，包括各种缺失肽

条目	偶联方法	试剂当量	预活化时间(分钟)	偶联(分钟)	ACP(％)	-2Ile(％)	-Ile72(％)	-Ile69(％)	-Val(％)	-Ala(％)	-Asn(％)
条目	偶联方法	试剂当量	预活化时间(分钟)	偶联(分钟)	ACP(％)	-2Ile(％)	-Ile72(％)	-Ile69(％)	-Val(％)	-Ala(％)	-Asn(％)	123456789101112	DEPOAtDPOPOAtDEPDBtDPOPOBtN-HATUHDTUDEPOAtDPOPOAtDEPDBtDPOPOBtN-HATUHDTU	1.51.51.51.51.51.51.51.51.51.51.51.5	777777000000	1.51.51.51.51.51.51.51.51.51.51.51.5	848562385388681＜1^c298730	--921-15---17-15	22132611544-25319	21191912621-17122	12313-21-223	46-1--37----	53121051--364

^*反相C-18柱，在20分钟期间使用0.1％TFA的MeCN溶液和0.1％TFA(1∶19-1∶1)经线性梯度洗脱，流速1.0ml/分钟。^b在存在2当量的二异丙基乙胺/(当量Fmoc-氨基酸/偶联剂)时，在DMF中进行偶联。^c仅得到痕量的所需产物。

在该实验中，为了在所研究的各种试剂中产生差异，缩短了偶联时间并减少了试剂的过量。在这些条件下，检测到Asn到Gly上、Ile到Asn上、Ile到Asp上、Val到Gln上和Ala到Ala或Asp上的不完全加入。色谱图的分析表明，无论是否有预活化，新的基于HOAt的有机磷试剂在这些所谓的“1.5×1.5”条件下与N-HATU一样有效。在正常偶联条件下，例如过量4当量的氨基酸/30分钟偶联时间，除HDTU外所有试剂工作良好。

实施例22

在以下实施例中，在CDCl₃中研究了有位阻的活化酯CBZ-Aib-Oxt和对-氯苯胺(PCA)的反应。根据活化酯的苄型CH₂单元(δ5.2)的消失和产物的苄型CH₂残基(δ8.5)的出现通过质子NMR分析确定大致的半衰期。

CBZ-Aib-Oxt酯.为通过NMR方案跟踪氨基分解，将Z-Aib-Odhat和PCA的反应用作阐述所用标准方法的例子：向47.9mg(0.125mmol)CBZ-Aib-Odhat的0.5ml CDCl₃溶液中加入15.6mg(0.125mmol)对-氯苯胺(PCA)。混合物立即转移至放在Hitachi R-1200(60MHz)仪器的探测器上的NMR试管中。随着反应在NMR检测温度(37℃)的进行，对δ1.8(酯CBZ-Aib-Odhat的CH₃残基)和1.57(酰胺CBZ-Aib-PCA的CH₃残基)处的¹H-NMR峰[或δ5.2(酯CBZ-Aib-ODhat的苄型CH₂单元)和5.05(酰胺产物的苄型CH₂单元)处的峰]进行积分可大致测定相对速率。示于表4的结果代表了至少两次测定的平均值。

表4.存在对-氯苯胺时，CBZ-Aib-Oxt在CDCl₃中消失的大致半衰期

CBZ-Aib-OXt	t_1/2(分钟)
CBZ-Aib-OXt	t_1/2(分钟)	CBZ-Aib-ODhatCBZ-Aib-OAtCBZ-Aib-ODhbtCBZ-Aib-ODhadCBZ-Aib-OBt	8-99-1012-1370210

发现Odhat酯甚至比OAt酯略微更有效，而以前发现OAt酯是这些酯中最有效的衍生物。有趣的是，尽管HODhat，即3-羟基-4-氧代-3，4-二氢-5-氮杂苯并-1，2，3-三嗪和HODhad，即3-羟基-4-氧代-3，4-二羟基-5-氮杂苯并-1，3-二嗪之间结构类似，它们相应的活化酯的反应性极为不同。不希望受束缚，据信这可能是由于具有或没有2-位的氮原子取代促使存在或缺乏额外的相邻基团作用。另一方面，OBt和ODhad酯的比较证实相邻羰基的重要性。

实施例23

本实施例使用了第二种模型。在存在各种比较偶联剂时用苄胺和N-甲基苄胺处理新戊酰基酯，形成下式所示的酰胺：

XXV(a)：W＝H，W′＝苄基

XXV(b)：W＝甲基，W′＝苄基。

根据新戊酰基-Oxt的甲基峰(δ1.5)的消失和产物XXV_a(δ1.2)或XXV_b(δ1.3)的甲基峰的出现通过质子NMR分析确定这些反应的半衰期。该方案如下所示：

Me₃CCOOXt酯.如实施例22的情况一样，新戊酰基酯与N-甲基苄胺的反应用作阐述所用方法的例子：向31.0mg(0.125mmol)Me₃CCOODhat的0.5ml CDCl₃溶液中加入15.1mg(16.1μl，0.125mmol)PhCH₂NHMe。混合物立即转移至放在Hitachi R-1200(60MHz)仪器的探测器上的NMR试管中。随着反应在NMR检测温度(37℃)的进行，对δ1.5(酯Me₃CCOODhat的CH₃残基)和1.3(酰胺的CH₃残基)处的¹H-NMR峰进行积分可大致测定相对速率。示于表5的结果代表了至少两次测定的平均值。

结果制成表5。

表5.Me₃CCOODhat在CDCl₃中消失的大致半衰期

Me₃CCOOXt	t_1/2(PhCH₂NH₂)	t_1/2(PhCH₂NHMe))
Me₃CCOOXt	t_1/2(PhCH₂NH₂)	t_1/2(PhCH₂NHMe))	Me₃CCOODhatMe₃CCOOAtMe₃CCOODhbtMe₃CCOODhadMe₃CCOOBt	＜1分钟＜1分钟＜1分钟＜1分钟＜1分钟	＜2分钟7-8分钟18-20分钟35-40分钟4.5小时

用苄胺时，所有反应速度快，而用位阻更大的N-甲基衍生物时，观察到按照以下顺序的明显不同的反应性：ODhat＞OAt＞ODhbt＞ODhad＞OBt。再次观察到HODhat酯比衍生自HOAt的酯的反应性强。

实施例24

进行另一比较研究来比较偶联方法的相对速率，所述方法涉及在存在偶联剂时CBZ-Aib-OH与对-氯苯胺(PCA)的反应。由于中间体Z-Aib-OXt通常很快形成，除非另有指出，通过活化酯的苄型CH₂残基(δ5.2)的消失和产物CBZ-Aib-PCA的苄型CH₂单元(δ5.05)的出现来测定半衰期。该产物的制备方案与实施例23所述相同。大致的半衰期见表6。在该情况中测试了各种溶剂系统。

表5.在存在对-氯苯胺时，[CBZ-Aib-Oxt]在各种溶剂系统中消失的大致半衰期

偶联剂	t_1/2(CDCl₃)	t_1/2(CD₃CN)	t_1/2(DMF)	t_1/2(DMF/CDCI₃)^a
偶联剂	t_1/2(CDCl₃)	t_1/2(CD₃CN)	t_1/2(DMF)	t_1/2(DMF/CDCI₃)^a	HDATUN-HATUHDTUN-HBTU	＜3分钟18-24分钟20-25分钟3.5-4小时	70-75分钟90-95分钟4.5-5小时	75-85分钟6-7小时10-11小时^b	30-40分钟40-45分钟2.5-3小时

^aDMF/CDCl₃的1∶1混合物。^b在该情况中，通过酸Z-Aib-OH的消失和中间体活性酯和酰胺CBZ-Aib-PCA的出现测定半衰期。

有趣的是，在除DMF外的所测试的所有溶剂系统中，发现新偶联剂比N-HATU反应性更高。在CDCl₃中，HDATU是N-HATU的反应性的至少6倍，是HDTU的反应性的至少8倍。迄今为止，在每种情况中，所测试的HDATU显示明显比HDTU的反应性强。

实施例25

为测试添加剂HODhat和HODhad与偶联剂HDATU、HDADU、HDAPyU、HDPyU、PyDAOP和PyDOP的构型保持效果，检测了以下模型肽系统。这些系统包括一次[1+1]分步偶联、三次[2+1]和一次[3+3]片断偶联。

CBZ-Phg-Pro-NH₂，CBZ-Phe-Val-Pro-NH₂，CBZ-Gly-Phe-Pro-NH₂

XXVI XXVII XXVIII

CBZ-Gly-Gly-Val-Ala-Gly-Gly-OMe(SEQ ID NO 1)，和H-Gly-Leu-Phe-OBzl

XXIX XXX

如以前实施例22和L.A.Carpino等，J.Org.Chem.1990，61，2463所述进行测试偶联，其中对于CBZ-Phg-ProNH₂、CBZ-Phe-Val-Pro-NH₂、CBZ-Gly-Phe-Pro-NH₂和CBZ-Gly-Gly-Val-Ala-Gly-Gly-OMe取代该文献的表格和方案中的下文所列偶联剂，这些测试的结果引作参考。就Boc-Gly-Leu-Phe-OBzl(Bzl＝苄基)而言，60.6mg(0.21mmol)的Boc-Gly-Leu-OH、85.45mg(0.20mmol)的H-Phe-OBzl·pTsOH和0.22mmol合适的偶联添加剂(HOXt)溶解于1ml DMF或三氟乙醇/三氟甲烷(1∶3体积/体积)。向混合物中加入34.2mg(0.22mmol)EDC(1-乙基-3-3’-(二甲基氨基)-丙基)碳二亚胺的1ml DMF或三氟乙醇/三氟甲烷溶液，整个混合物于室温搅拌过夜。得到的混合物用25ml EtOAc稀释，1N HCl(2×10ml)、10％NaHCO₃(2×10ml)和盐水(2×10ml)洗涤，MgSO₄干燥。除去溶剂后，称重固体来测定产率。然后将固体与2ml 50％的三氟乙酸的二氯甲烷溶液搅拌2小时以脱去BOC保护基团。然后真空除去三氟乙酸和CH₂Cl₂，向油状残留物中加入20ml无水乙醚，混合物于室温保存过夜。过滤收集分离出的白色沉淀物并用乙醚洗涤。含有LL-和DL-形式的XXX的约5mg粗产物溶解于4ml MeCN并直接通过HPLC分析，所述HPLC使用反相Waters C-18柱，在20分钟期间以线性梯度(0.1％三氟乙酸的MeCN溶液和0.1％TFA水溶液，1∶9-11∶9)洗脱，流速1.0ml/分钟。LL-和DL-形式的XXX的保留时间分别是17.3和17.9分钟。结果如下：

就氨基甲酸乙酯保护CBZ-Phg-OH和H-Pro-NH₂敏感性偶联得到XXVI而言，HDATU在保持构型方面比HDTU和N-HBTU更有效，但不如N-HATU。令人意外的是，该系统中使用碱二异丙基乙胺(DIEA)证明比2，4，6-三甲基吡啶(TMP)更令人满意，该结果在相应的片断偶联的情况中罕见。结果见表7。

表7.在通过[1+1]偶联形成XXVI期间，偶联剂、碱和溶剂对构型保持的作用

偶联剂(％)	添加剂	碱(当量)	溶剂	产率(％)	DL
偶联剂(％)	添加剂	碱(当量)	溶剂	产率(％)	DL	HDATUHDTUN-HATUN-HBTUHDATUHDTUN-HATUN-HBTUDCCDCCDCC	HODhat(1)HODhbt(1)HOAt(1)	DIEA(2)DIEA(2)DIEA(2)DIEA(2)TMP(2)TMP(2)TMP(2)TMP(2)TMP(1)TMP(1)TMP(1)	DMFDMFDMFDMFDMFDMFDMFDMFTFE/TCM^aTFE/TCM^aTFE/TCM^a	83.978.471.781.387.580.790.885.474.871.869.2	4.812.82.86.36.016.03.88.70.40.80.3

^a在该情况中，1.3ml三氟乙醇-氯仿(1∶3体积/体积)用作溶剂。

使用溶剂三氟乙醇/三氯甲烷配制的碳二亚胺试剂，HODhat甚至比HODhbt更有效。因此，EDC/HODhat得到0.5％的DL-异构体，而EDC/HODhbt得到1.3％的DL-同种型。在存在1当量的三甲基吡啶时，使用DCC/HODhat和DCC/HODhbt得到的数字分别为0.4％和0.8％。

获得三肽XXVII的CBZ-Phe-Val-OH与H-Pro-NH₂片断偶联已得到良好研究，其结果列于表8。

表8.在通过[2+1]偶联形成XXVII期间，偶联剂、碱和溶剂对构型保持的作用

偶联剂(％)	添加剂	碱(当量)	溶剂	产率(％)	LDL(％)
偶联剂(％)	添加剂	碱(当量)	溶剂	产率(％)	LDL(％)	HDATUHDTUHDADUN-HATUN-HBTUHDATUHDTUHDADUN-HATUN-HBTUHDATUHDTUN-HATU	HODhat(1)HODhbt(1)HOAt(1)	DIEA(2)DIEA(2)DIEA(2)TMP(2)TMP(2)TMP(2)TMP(2)TMP(2)	DMFDMFDMFDMFDMFDMFTMP(2)TMP(2)DMFDMFTMP(2)	85.481.072.4DIEA(2)DIEA(2)88.886.483.8DMFDMF68.065.0DMF	15.113.327.6DMFDMF8.78.518.680.181.27.34.0

^*DIEA＝二异丙基乙胺；TMP＝三甲基吡啶

就相当不敏感的Z-Gly-Phe-OH和H-Pro-NH₂的片断偶联情况而言，结果与XXVII类似。这些结果列于表9。

表9.在通过[2+1]偶联^a形成XXVIII期间，偶联剂、碱和溶剂对构型保持的作用

偶联剂	添加剂	碱性溶剂	溶剂	产率	LDL
偶联剂	添加剂	碱性溶剂	溶剂	产率	LDL	(当量)	(％)	(％)
HDATUHDTUHDADUN-HATUN-HBTUPyDAOPPyDOPHDATUHDTUHDADUN-HATUN-HBTUHDAPyUHDPyUPyDAOPPyDOPHDATUHDTUN-HATUDIC(碳二亚胺)DICDICDICEDC HClEDC HClEDC HClEDC HClEDC HClEDC HClEDCEDC	HODhat(1)HODhbt(1)HODhad(1)HOAt(1)HODhat(1)HODhad(1)HOAt(1)HODhat(1)HODhbt(1)HOAt(1)HODhat(1)HODhat(1)	DIEA(2)DIEA(2)DIEA(2)DIEA(2)DIEA(2)DIEA(2)DIEA(2)TMP(2)TMP(2)TMP(2)TMP(2)TMP(2)TMP(2)TMP(2)TMP(2)TMP(2)DIEA/TMP^bDIEA/TMP^bDIEA/TMP^bTMP(1)TMP(1)TMP(1)TMP(2)TMP(2)TMP(2)	DMFDMFDMFDMFDMFDMFDMFDMFDMFDMFDMFDMFDMFDMFDMFDMFDMFDMFDMFDMFDMFDMFDMFDMFDMFDMFDMFDMFDMFDMFTFE/TCM^c	96.582.092.886.084.889.994.394.198.386.696.588.278.880.984.390.485.884.876.486.281.474.382.394.085.289.390.186.191.088.880.2	0.51.57.20.85.90.80.71.01.78.41.13.61.21.41.81.70.81.50.90.50.88.20.41.82.23.32.81.61.73.42.5	(当量)	(％)	(％)

^a缩写如上所述。^b在这种情况中，1当量的DIEA和1当量的TMP联用作碱。^c1.3ml三氟乙醇-氯仿用作溶剂。

就制备三肽XXVIII而言，HDATU与N-HATU类似，甚至略微更有效。

就测试三肽XXX而言，在存在EDC/添加剂(偶联剂)时在各种溶剂中偶联H-Phe-OBzl TosOH和Boc-Gly-Leu-OH得到产物Boc-Gly-Leu-Phe-Obzl，该产物经50％TFA/CH₂Cl₂处理BOC-脱保护得到可直接用HPLC分析的粗品三肽。

在三氟乙醇/氯仿(1∶3体积/体积)中进行的EDC介导XXX合成中，发现3种添加剂HODhat、HODhbt、HOAt效果相同，均观察到低于0.1％的差向异构化。溶剂换作DMF，可注意到差异(虽然很小)。这些结果示于表10。

表10.在通过[2+1]偶联形成XXX期间，偶联剂、碱和溶剂对构型保持的作用

偶联剂	溶剂	产率	LDL
偶联剂	溶剂	产率	LDL	EDC/HODhatEDC/HODhbtEDC/HOAtEDC/HOBtEDC/HODhatEDC/HODhbtEDC/HOAtEDC/HOBt	DMFDMFDMFDMFTFE/TCMTFE/TCM^bTFE TCM^bTFE/TCM^b	76.288.590.677.498.696.298.290.0	0.200.250.330.43＜0.1＜0.1＜0.10.20

^b使用组合溶剂三氟乙醇-氯仿(1∶3体积/体积)。

用简单的二肽和三肽模型XXVI、XXVII、XXVIII和XXX进行初步研究后，装配测试肽XXIX。就偶联剂和碱的性质而言，偶联Z-Gly-Gly-Val-OH和H-Ala-Gly-Gly-OMe是敏感的测试。在存在三甲基吡啶时，在DMF中进行反应的结果总结于表11。发现HDATU比N-HATU和其它偶联剂更有效地防止缬氨酸处的构型丧失。按照以下顺序，注意到了达8.2％的DL-形差向异构化水平：HDATU＜N-HATU＜HDTU＜N-HBTU。

表11.在通过[3+3]偶联形成XXIX期间，偶联剂、碱和溶剂对构型保持的作用

偶联剂	碱	溶剂	产率(％)	LDL(％)
偶联剂	碱	溶剂	产率(％)	LDL(％)	HDATUHDTUN-HATUN-HBTU	TMP(3)TMP(3)TMP(3)TMP(3)	DMFDMFDMFDMF	98.495.096.685.6	0.83.32.48.2

实施例26

为证实新的基于HODhat的偶联剂HDATU的溶解度并比较其与相应的胍/脲类似物N-HATU和HDTU在固相合成中的性能，按照实施例22所述的Fmoc/叔丁基保护方案进行了30次ACP片断H-Val-Gln-Ala-Ala-Ile-Asp-Tyr-Ile-Asn-GlyNH₂，(SEQ.ID.No.2)的合成。携带Fmoc-甘氨酸的聚乙二醇-聚苯乙烯(PEGPS)树脂用作固体载体。为在所研究的各种偶联剂中造成差异，手工进行肽延伸，这样缩短了偶联时间并降低试剂过量。在这些条件下，检测到Asn到Gly上、Ile到Asn上、Ile到Asp上、Val到Gln上的不完全加入。在室温下用TFA-H₂O(9∶1)处理2小时将肽从树脂上切割下后，通过反相HPLC检测其纯度。结果见表12。

表12.根据基于HODhat-HOAt-和HODhbt-偶联剂^b的ACP装配的HPLC分析^a确定产物，包括各种缺失肽的分配

条目	偶联剂	溶剂	当量.^c	预活化(分钟)	偶联(分钟)	ACP(％)	-2Ile(％)	-Ile(％)	-Ile(％)	Val(％)	Asn(％)	未知^d(％)
条目	偶联剂	溶剂	当量.^c	预活化(分钟)	偶联(分钟)	ACP(％)	-2Ile(％)	-Ile(％)	-Ile(％)	Val(％)	Asn(％)	未知^d(％)	123456789101112131415161718192021222324252627282930	HDATUN-HATUHDTUHDATUN-HATUHDTUHDATUN-HATUHDATUN-HATUHDTUHDATUN-HATUHDTUHDATUN-HATUHDTUHDATUHDTUHDATUHDATUHDATUN-HATUHDTUDIC-HODbatDIC-HODhbtPfp^e-HODhatPfp^e-HODhbtPfp^e-HODhatPfp^e-HODhbt	DCMDCMDCMDCMDCMDCMDCMDCMDMFDMFDMFDMFDMFDMFDMFDMFDMFDMFDMFDMFDMFDMFDMFDMFDMFDMFDMFDMFDMFDMF	1.51.51.5444441.51.51.52221.51.51.54433444441.5^f1.5^g3^f3^g	7777777700000077777725777777777	1.51.51.533310101.51.51.55551.51.51.51.51.53330303030301.51.53030	472148678318881688730979481607731725764759586625529569087	7513--5--3-15--21-15-3---42-9----	975--7--10319118721559141-2----13	1612132426--17122-177-2631113-2----13	12625737322322113--2-321112--76	3233374-3174-21511518445112303--11	--------------1678214209--28-5----

^a反相C-18柱，在20分钟期间使用0.1％TFA的MeCN溶液和0.1％TFA水溶液(1∶19-1∶1)经线性梯度洗脱，流速1.0ml/分钟。^b在所有HDATU-或HODhat-介导的合成中，在氨基酸(除Ile和Val外)偶联期间，2-5分钟内观察到亮黄色向橙红色的变化。^c在存在2当量的二异丙基乙胺/(当量Fmoc-氨基酸/偶联剂)时，在DMF或CH₂Cl₂中进行偶联。^dHPLC曲线上在20分钟后出现的额外峰。^e五氟苯基酯。^f仅使用1当量的HODhat作为催化剂。g仅使用1当量的HODhbt作为催化剂。

图谱分析表明，HDATU在所有检测的条件下均远比HDTU有效，甚至在一些情况中比N-HATU更有效。发现二氯甲烷是特别适用于HDATU介导的ACP合成的溶剂。因此，在使用CH₂Cl₂的所谓“1.5×1.5”条件下，HDATU得到纯度为47％的十肽，而N-HATU和HDTU分别仅得到纯度为21％和4％的所需产物。当采用4当量过量的试剂和3分钟偶联时间时，用HDATU得到(纯度)86％的酰基载体蛋白(ACP)，而用N-HATU和HDTU分别得到78％和31％。

在使用DMF的“1.5×1.5”条件下，无论是否有预活化，HDATU的性能可能不如N-HATU有效。此外，就制备含有位阻大的Aib-Aib单元的模型五肽H-Tyr-Aib-Aib-Phe-Leu-NH₂(SEQ ID NO：3)而言，HDATU无论在DCM或DMF中均不能得到与用N-HATU相当的结果。例如采用4当量过量的氨基酸、7分钟预活化和30分钟偶联时间，HDATU在DMF中得到纯度为31％的肽，而用N-HATU得到纯度为91％的肽。

然而，在正常条件下发现HDATU总体上是更好的试剂。因此，当采用2-当量过量的试剂，无预活化的5分钟偶联时，使用HDATU得到纯度97％的ACP，而用N-HATU和HDTU得到的相应纯度为94和81％。采用4当量/30分钟偶联条件以及7分钟预活化时间，使用HDATU获得优秀的纯度(95％)，而用N-HATU和HDTU得到的ACP纯度分别为86和62％。

使用DIC/HODhat作为偶联剂也得到了满意的结果。虽然HODhat在苛刻条件下(“1.5×1.5”)不合适，它可在正常条件下的Fmoc-氨基酸五氟苯基(Pfp)酯偶联中用作优秀的催化剂和指示剂。使用HODhbt观察到比亮黄色-淡黄色更明显的亮黄色-橙红色颜色变化。在包括3当量五氟苯基酯和30分钟偶联时间的条件下，HODhat和HODhbt在DMF中均得到纯度超过85％的所需ACP产物。

实施例27

Fmoc-Ile-Odhat

方法A.在干燥N₂气氛中，Fmoc-Ile-OH(0.3534g，1mmol)、HODhat(0.1805g，1.1mmol)和SOCl₂(0.73ml，10mmol)的8ml干燥CH₂Cl₂悬液回流过夜。蒸发CH₂Cl₂和过量的SOCl₂得到黄色固体，该固体通过短硅胶柱以EtOAc-CH₂Cl₂(1∶1体积/体积)混合物作为洗脱剂经快速层析纯化，CH₂Cl₂-苯-乙醚-己烷重结晶两次后得到0.42g(81％)白色固体的分析纯酯：熔点160.5-162℃；¹H NMR(CDCl₃)：δ9.15(dd，1)，8.58(dd，1)，7.96(dd，1)，7.76(dd，2)，7.61(dd，2)，7.27-7.44(m，4)，5.20(d，1)，4.88(q，1)，4.49(d，2)，4.26(t，1)，2.21(m，1)，1.70(m，1)，1.34(m，1)，1.15(d，3)，1.05(t，3)；IR(KBr)：1811(s，COO)，1738(vs，CONN)，1692(vs，NHCO)cm^-1。C₂₇H₂₅N₅O₅的分析计算值为：C，64.91；H，5.04；N，14.02。实测值：C，64.77；H，5.23；H，13.94。

方法B.在干燥N₂气氛中，在0℃将0.1854g(0.5mmol)Fmoc-Ile-Cl加入HODhat(0.0821g，0.5mmol)和DIEA(95.8μl，0.55mmol)的10mlCH₂Cl₂溶液，同时搅拌。在0℃继续搅拌30分钟，然后于室温搅拌5小时。得到的淡黄色溶液用CH₂Cl₂稀释至30ml并用冰冷的盐水(2×15ml)快速洗涤。MgSO₄干燥后除去溶剂，CH₂Cl₂-乙醚-己烷重结晶淡黄色粘性固体两次得到白色固体的分析纯的上述酯：熔点161-162℃；NMR和IR图谱与方法A所获得样品的相同。

实施例28

采用Carpino等， J.Org.Chem.， 1995，60，3561的文章(其内容引作参考)中表2的脚注a所述方法来检测使用各种偶联剂偶联CBZ-Phe-Val-OH和H Pro-NH₂形成CBZ-Phe-Val-Pro-NH₂。所用的一些偶联剂是本领域其它地方所述的，而其它使用的是本发明的偶联剂。更具体地说，就碳二亚胺偶联而言，0.105mmol Z-Phe-Val-OH、0.1mmol H-Pro-NH₂和0.11mmol本文下表所示的偶联剂溶解于1mL DMF或1.3mL TFE/TCM(三氟乙醇/氯仿)(1∶3)，溶液在冰浴中冷却并用0.11mmol EDC、EDC-HCl或DCC处理。如果加入碱，则要给出当量值。混合物在0℃搅拌1小时，然后于室温搅拌过夜。混合物用25mL EtOAc稀释，用1N NCl(2×5mL)、1NNaHCO₃(2×5mL)和饱和的NaCl(2×5mL)萃取，MgSO₄干燥，除去溶剂，粗品肽直接通过HPLC分析。就盐偶联而言，在0℃用0.125mmol偶联剂处理1ml DMF配制的0.125mmol酸、0.125mmol酰胺和0.25mmol碱，反应混合物在0℃搅拌1小时，再于室温搅拌搅拌2-3小时，然后进行本文所述的后处理。当使用添加剂时，可加入一当量或多当量(括号中)的碱。测定以LDL差向异构体的存在表示的构型丧失的量。这些结果列于表13。

表13.溶液中的[2+1]片断偶联(CBZ-Phe-Val-OH+H-Pro-NH₂)

偶联剂	碱	溶剂	LDL差向异构体％
偶联剂	碱	溶剂	LDL差向异构体％	O-HATU	DCHMA^b(2当量)	DMF	7.91
叔丁基-Dtp-OAt	DIEA^b(2当量)	DMF	13.59	O-HATU	DCHMA^b(2当量)	DMF	7.91
叔丁基-Dtp-OAt	DIEA^b(2当量)	DMF	13.59	叔丁基-Dtp-OAt	DCHMA^b(2当量)	DMF	15.81
O-HATU	DIEA(2当量)	DMF	10.07	叔丁基-Dtp-OAt	DCHMA^b(2当量)	DMF	15.81
O-HATU	DIEA(2当量)	DMF	10.07	Dtp-OAt	TMP(2当量)	DMF	1.77
Dtp-OAt	TMP(2当量)/HOAt(1当量)	DMF	1.9	Dtp-OAt	TMP(2当量)	DMF	1.77
Dtp-OAt	TMP(2当量)/HOAt(1当量)	DMF	1.9	叔丁基-Dtp-OAt	TMP(2当量)	DMF	1.63
O-HATU	DB(DMAP)(2当量)	DMF	1.59	叔丁基-Dtp-OAt	TMP(2当量)	DMF	1.63
O-HATU	DB(DMAP)(2当量)	DMF	1.59	O-HATU	质子海绵(sponge)(2当量)	DMF	2.78
Dtp-OAt	DIEA(2当量)	DMF	16.04	O-HATU	质子海绵(sponge)(2当量)	DMF	2.78
Dtp-OAt	DIEA(2当量)	DMF	16.04	O-HATU	DIEA/TMP(1/1当量)	DMF	10.17

实施例29

使用Carpino等， Tetrahedron 1999，55，6813的文章(其内容引作参考)所述的方法进行Fmoc-Asp(叔丁基)-Phe-OH和F-moc-Lys(BOC)-PAL-PEG的偶联以形成Fmoc-Asp-(叔丁基)-Phe-Lys(-Boc)-PAL-PEG。所用的一些偶联剂是本领域其它地方所述的，而其它使用的是本发明的偶联剂。偶联反应如下进行：通过用20％哌啶/DMF处理7分钟对50mgH-Lys(Boc)-PAL-PEG-PS树脂脱保护，用DMF、DCM和DMF(每种3×5mL)洗涤树脂，然后加入5倍过量(5-fold excess)(0.0475mmol)的Fmoc-Asp(O-叔丁基)-Phe-OH(26.5mg)、5倍过量的表14所示的偶联剂和11.5mg(0.095mmol)TMP或12.3mg DIEA(10倍过量)的碱(如果有的话)。在每种情况中，偶联剂和碱溶解于0.2mL溶剂，得到的溶液加入用作反应器的小注射器中的树脂。溶解需要约1分钟(或不到)，每样物质溶解后立即小心地加入溶液。该方法称为“低预活化方法”。预活化开始即计时。每10分钟用特氟隆棒轻柔搅拌混合物，共进行约1小时，然后静置12小时再用DMF和DCM(每种3×5mL)洗涤树脂并通过在室温下用3ml TFA/H₂O(9∶1)处理1.5小时来脱保护。真空除去溶剂，残留物溶解于CH₃-CN并直接注射到以下条件的HPLC柱上：4μ60A，C18 Waters Nova-pak柱，3.9×150mm；流速1mL/分钟；Waters 996 PDA检测器；在20分钟内用CH₃CN/H₂O/0.1％ TFA以线性梯度10/30洗脱，然后以等溶剂(isocratic)30/70洗脱20分钟；Rt(LLL-)28.5分钟，(LDL-)30.5分钟。测定以LDL差向异构体的存在表示的构型丧失的量。这些结果列于表14。

表14.固相条件⁶下的[2+1]片断偶联(FmocAsp(叔丁基)-Phe-OH+H-Lys(BOC)-PAL-PEG)

偶联剂	碱	溶剂	LDL差向异构体％
偶联剂	碱	溶剂	LDL差向异构体％	N-HATU	TMP(2当量)	DMF	18.88
N-HATU	TMP(2当量)	DCM	35.95	N-HATU	TMP(2当量)	DMF	18.88
N-HATU	TMP(2当量)	DCM	35.95	Dtp-OAt	TMP(2当量)	DCM	14.70
叔丁基-Dtp-OAt	TMP(2当量)	DCM	12.94	Dtp-OAt	TMP(2当量)	DCM	14.70
叔丁基-Dtp-OAt	TMP(2当量)	DCM	12.94	Dtp-OAt	TMP(2当量)	DMF	42.82
				Dtp-OAt	TMP(2当量)	DMF	42.82

实施例30

采用实施例29的方法，使用本发明的叔丁基-DtP-OAt和O-HATU偶联CBZ-Gly-Gly-Val-OH和H-Ala-Gly-Gly-PAL-Peg形成CBZ-Gly-Gly-Val-Ala-Gly-GlyPAL-PEG(序列ID 4)。测定形成的LDL差向异构体的量来确定构型丧失的量。这些结果列于下表15。

表15.固相条件下的[3+3]片断偶联(CBZ-Gly-Gly-Val-OH+H-Ala-Gly-Gly-PAL-PEG)

偶联剂	碱	溶剂	LDL差向异构体％
偶联剂	碱	溶剂	LDL差向异构体％	叔丁基-Dtp-OAt	TMP	DMF	1.99
O-HATU	TMP	DMF	2.09	叔丁基-Dtp-OAt	TMP	DMF	1.99

用所谓的“1.5×1.5”方案通过固相合成ACP十肽强调了本发明的偶联剂，包括叔丁基-Dtp-OAt的高偶联效率。在这些所要求的条件下不难得到各种偶联剂的偶联效率。在存在3当量碱时，使用1.5当量过量的受保护氨基酸和1.5当量的偶联剂进行1.5分钟的偶联。

就采用1.5×1.5方案的手工固相合成ACP而言，利用Carpino等，J.Chem.Soc.Chem.Comm，1994，201(其内容引作参考)的方法并使用O-HATU、Dtp-OAt和叔丁基-Dtp-OAt分别得到纯度为76％、60％和74％的粗品肽。因此，鉴于以前所述最佳的试剂，新的基于磷的偶联剂至少与O-HATU效率相当。

给出以上优选的实施方案和实施例是为了说明本发明的范围和构思。这些实施方案和实施例使得本领域技术人员不难想出其它实施方案和实施例。这些其它实施方案在本发明的考虑范围内。因此，本发明仅受限于附加的权利要求。

序列表

<110>L.A.卡尔皮诺(Carpino，Louis A.)

夏举松(Xia，Jusong)

张重武(Zhang，Chongwu)

C.D.斯弗迪恩(Sferdean，Calin Dan)

<120>肽合成的新偶联剂

<130>P11588

<160>4

<170>PatentIn version 3.3

<210>1

<211>6

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽，氨基末端的Gly被CBZ保护；Gly的甲酯位于羧基末端

<400>1

Gly Gly Val Ala Gly Gly

1 5

<210>2

<211>9

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽，Gly的酰胺位于羧基末端

<400>2

Val Gln Ala Ala Asp Tyr Ile Asn Gly

1 5

<210>3

<211>5

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽，两种情况中Xaa均是Aib；Leu的酰胺位于羧基末端

<220>

<221>misc_feature

<222>(2)..(3)

<223>Xaa是Aib

<400>3

Tyr Xaa Xaa Phe Leu

1 5

<210>4

<211>6

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽，氨基末端的Gly被CBZ保护；羧基末端的Gly与固相树脂相连

<400>4

Gly Gly Val Ala Gly Gly

1 5

Claims

1.一种从氨基化合物和羧酸的酰基化衍生物之间的反应制备肽键的方法，所述氨基化合物是氨基酸或肽，所述羧酸是N-末端氨基受保护的氨基酸或N-末端氨基受保护的肽，改进之处包括向所述反应加入有效量的下式所示化合物：

或其N-氧化物或其盐，其中

R₁和R₂与和它们相连的碳原子结合在一起，形成芳基或杂芳基环，其中所述芳基环含有6-14个环碳原子，所述杂芳基环是含有氧、硫或氮的杂芳香族，其含有3-13个环碳原子和1-4个选自氧、氮和硫的杂原子，所述芳基和杂芳基环可各自独立是未取代的或被低级烷基或供电子基团取代；

Y是O、NR₄或CR₄R₅；

R₅是氢或低级烷基；

R₄是氢或低级烷基；

X是CR₆R₇或NR₆；

R₆和R₇独立为氢或低级烷基，或者R₆和R₇结合在一起，形成氧代；

Q是CR₈R₉或NR₈；

n是0或1；

R₈和R₉独立为氢或低级烷基，或者R₇和R₈与和它们相连的碳原子结合在一起形成芳环；或者R₈与R₄结合在Q和Y之间形成键，或者R₈可与R₆结合在Q和X之间形成键；前提是X和Q与Q和Y之间不同时具有双键；或者当Y是NR₄或CR₄R₅并且当Q不存在时，R₄和R₆可在X和Y之间形成键；

R₃是

R₁₁是OR₁₃、低级烷基、芳基、芳基低级烷基、低级环烷基、杂环基、杂环基低级烷基、低级环烷基低级烷基、低级环烯基或低级环烯基低级烷基；

且R₁₀和R₁₁可通过选自O、S、NR₃₀或(CHR₃₀)_m的桥连基团任选相连，其中每个R₃₀独立为低级烷基或氢，m是1-3；

T是O、S、NR₃₁或(CHR₃₁)；

R₃₁是氢或低级烷基；

环A₁和B独立为含有6-14个环碳原子的芳环或含有5-14个环碳原子的环烯基或环烷基；和

R_b1、R_c1、R_b2和R_c2独立为氢、低级烷基或供电子基团；T是CH₂、O、S或NR₃₀，其中R₃₀是氢或低级烷基。

2.一种从有机胺和羧酸的酰化衍生物之间的反应形成酰胺的方法，改进之处包括向所述反应加入有效量的下式所示化合物：

或其N-氧化物或其盐，其中

R₁和R₂与和它们相连的碳原子结合在一起，形成芳基或杂芳基环，其中所述芳基环是含有6-14个环碳原子的芳香环，所述杂芳基环是含有氧、硫或氮的杂芳香族，其含有3-13个环碳原子和1-4个选自O、S和N的杂原子，所述芳基和杂芳基环可各自独立是未取代的或被低级烷基或供电子基团取代；

Y是O、NR₄或CR₄R₅；

R₅是氢或低级烷基；

R₄是氢或低级烷基；

X是CR₆R₇或NR₆；

Q是CR₈R₉或NR₈；

n是0或1；

R₃是

且R₁₀和R₁₁可通过选自S、O、NR₃₀或(CHR₃₀)_m的桥连基团任选相连，其中每个R₃₀独立为低级烷基或氢，m是1-3；

R₁₂和R₁₃独立为低级烷基、芳基、芳基低级烷基、低级环烷基、低级环烷基低级烷基、杂环基、杂环基低级烷基、低级环烯基或低级环烯基低级烷基；

T是O、S、NR₃₁或(CHR₃₁)；

R₃₁是氢或低级烷基；和

R_b1、R_c1、R_b2和R_c2独立为氢、低级烷基或供电子基团。

3.一种肽合成方法，其中第一Nα-氨基受保护的氨基酸与固相肽合成树脂共价偶联，切除Nα-氨基保护基团，得到的游离氨基经肽键与第二Nα-氨基受保护的氨基酸的羧基偶联，重复该循环直至获得所需肽，然后从所述树脂上切下肽，改进之处包括向偶联步骤加入有效量的下式所示化合物：

或其N-氧化物或其盐，

其中

R₁和R₂与和它们相连的碳原子结合在一起形成芳基或杂芳基环，其中所述芳基环是含有6-14个环碳原子的芳香环，所述杂芳基环是含有氧、硫或氮的杂芳香族，其含有3-13个环碳原子和1-4个选自氧、氮和硫的杂原子，所述芳基和杂芳基环可各自独立是未取代的或被低级烷基或供电子基团取代；

Y是O、NR₄或CR₄R₅；

R₅是氢或低级烷基；

R₄是氢或低级烷基或

X是CR₆R₇或NR₆；

Q是CR₈R₉或NR₈；

n是0或1；

R₃是

R₁₁是OR₁₃、低级烷基、芳基、芳基低级烷基、低级环烷基、杂环基、杂环基低级烷基、低级环烯基或低级环烯基低级烷基；

R₁₂和R₁₃独立为低级烷基、低级环烷基、芳基、芳基低级烷基、低级环烷基低级烷基、杂环基、杂环基低级烷基、低级环烯基或低级环烯基低级烷基；

R_b1、R_c1、R_b2和R_c2独立为氢、低级烷基或供电子基团；

T是(CHR₃₁)、O、S或NR₃₁和

R₃₁是氢或低级烷基。

4.如权利要求1-3中任一项所述的改进的方法，其特征在于，所述化合物具有下式：

或其N-氧化物或其盐。

5.如权利要求1-4中任一项所述的改进的方法，其特征在于，所述R₁和R₂与和它们相连的碳原子结合在一起形成苯环或杂芳基环，其中所述杂芳基环是含有氧、硫或氮的杂芳香族，其含有3-13个环碳原子，至少一个硫环原子或至少1个氧环原子或至少两个氮环原子，所述杂芳基环可以是未取代的或被低级烷基或供电子基团取代。

6.如权利要求1-5中任一项所述从氨基化合物和羧酸的酰化衍生物之间的反应制备肽键的方法，其特征在于，所述氨基化合物是氨基酸或肽，所述羧酸是N-末端氨基受保护的氨基酸或N-末端氨基受保护的肽，改进之处包括向所述反应加入有效量的下式所示化合物：

或其N-氧化物或其盐，

其中

R₁和R₂与和它们相连的碳原子结合在一起，形成芳基或杂芳基环，其中所述芳基环含有6-14个环碳原子，所述杂芳基环是含有氧、硫或氮的杂芳香族，其含有3-13个环碳原子，所述芳基和杂芳基环可各自独立是未取代的或被低级烷基或供电子基团取代；

Y是O、NR₄或CR₄R₅；

R₅是氢或低级烷基；

R₄是氢或低级烷基；

X是CR₆R₇或NR₆；

n是0或1；

R₃是

R₁₁是OR₁₃、低级烷基、芳基、芳基低级烷基、低级环烷基杂环基、杂环基低级烷基、低级环烯基或低级环烯基低级烷基；

R_b1、R_b2、R_c1和R_c2独立为氢、低级烷基或供电子基团；

T是(CHR₃₁)、O、S或NR₃₁；和

R₃₁是氢或低级烷基。

7.如权利要求1-5中任一项所述从氨基化合物和羧酸的酰化衍生物之间的反应制备肽键的方法，其特征在于，所述氨基化合物是氨基酸或肽，所述羧酸是N-末端氨基受保护的氨基酸或N-末端氨基受保护的肽，改进之处包括向所述反应加入有效量的下式所示化合物：

或其N-氧化物或其盐，

其中

R₁和R₂与和它们相连的碳原子结合在一起，形成芳基或杂芳基环，其中所述芳基环是含有6-14个环碳原子的芳香环，所述杂芳基环是含有氧、硫或氮的杂芳香族，其含有3-13个环碳原子，所述芳基和杂芳基环可各自独立是未取代的或被低级烷基或供电子基团取代；

Y是N或CR₅；

R₅是氢或低级烷基；

X是CR₇或N；

R₇是氢或低级烷基；

R₃是

R_b1、R_b2、R_c1和R_c2独立为氢、低级烷基或供电子基团；

T是(CHR₃₁)、O、S或NR₃₁；和

R₃₁是氢或低级烷基。

8.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其特征在于，所述R₁₀是OR₁₂、低级烷基、芳基或芳基低级烷基；R₁₁是OR₁₃、低级烷基、芳基或芳基低级烷基或者R₁₀和R₁₁可通过选自O、S、NH或(CH₂)_m的桥连基团任选相连，和

R₁₂和R₁₃独立为低级烷基、芳基或芳基低级烷基。

9.如权利要求1-8中任一项所述的方法，其特征在于，R₁₃是

其中R₁₂和R₁₁独立为低级烷基或芳基。

10.如权利要求1-8中任一项所述的方法，其特征在于，R₁₃是

其中R₁₂和R₁₃独立为低级烷基或芳基。

11.如权利要求1或2所述从氨基化合物和羧酸的酰化衍生物之间的反应制备肽键的方法，其特征在于，所述氨基化合物是氨基酸或肽，所述羧酸是N-末端氨基受保护的氨基酸或N-末端氨基受保护的肽，改进之处包括向所述反应加入有效量的下式所示化合物：

或其N-氧化物或其盐，

其中

R₃是

T是O、S、NR₃₁或(CHR₃₁)；

R₃₁是氢或低级烷基；

Rb₁、Rb₂、Rc₁和Rc₂独立为氢、低级烷基或供电子基团；

12.如权利要求11所述的方法，其特征在于，所述R₃是

其中R₁₀是低级烷基或芳基或OR₁₂；

R₁₁是低级烷基或芳基或OR₁₃；

R₁₂是低级烷基和

R₁₃是低级烷基。

13.如权利要求12所述的方法，其特征在于，所述化合物如下式所示；

14.如权利要求11所述的方法，其特征在于，T是(CH₂)、O、S或NH。

15.如权利要求14所述的方法，其特征在于，T是CH₂或O。

16.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述羧酸的酰化衍生物是BLK-AA-M，其中BLK是氨基保护基团；AA是氨基酸，M是OH、卤素或

每个R_a独立为卤素、低级烷基或吸电子基团，b是0-5。

17.如权利要求16所述的方法，其特征在于，所述BLK是FMOC、BOC、TEOC、Aoc、Adoc、Bpoc、Azoc、Ddz、Poc、Foc、Moz、Nps、Dts、Cbz、Bspoc、Bsmoc、NPS、甲酰基、乙酰基或三氟乙酰基。

18.如权利要求17所述的方法，其特征在于，所述BLK是Cbz、Bspoc或BOC。

19.如权利要求16所述的方法，其特征在于，R_a是氰基或硝基。

20.一种如下式所示化合物：

或其N-氧化物或其盐，其中

R₁和R₂与和它们相连的碳原子结合在一起，形成芳基或杂芳基环，其中所述芳基环是含有6-14个环碳原子的芳香族，所述杂芳基环是含有氧、硫或氮的杂芳香族，其含有3-13个环碳原子和1-4个选自氧、氮和硫的杂原子，所述芳基和杂芳基环可各自独立是未取代的或被低级烷基或供电子基团取代；

Y是O、NR₄或CR₄R₅；

R₅是氢或低级烷基；

R₄是氢或低级烷基或

X是CR₆R₇或NR₆；

Q是CR₈R₉或NR₈；

n是0或1；

R₃是

R₁₀是OR₁₂、低级烷基、芳基、芳基低级烷基、低级环烷基、低级环烷基低级烷基、杂环基低级烷基、低级环烯基或低级环烯基低级烷基；

R_b1、R_b2、R_c1和R_c2独立为氢、低级烷基或供电子基团；

T是(CHR₃₁)、O、S或NR₃₁；

R₃₁是氢或低级烷基。

21.如权利要求20所述的如下式所示化合物或其N-氧化物或其盐，

其特征在于，

R₁和R₂与和它们相连的碳原子结合在一起，形成芳基或杂芳基环，其中所述芳基环是含有6-14个环碳原子的芳香族，所述杂芳基环是含有氧、硫或氮的杂芳香族，其含有3-13个环碳原子，所述芳环和杂芳环可各自独立是未取代的或被低级烷基或供电子基团取代；

Y是O、NR₄或CR₄R₅；

R₅是氢或低级烷基；

R₄是氢或低级烷基；

X是CR₆R₇或NR₆；

Q是CR₈R₉或NR₈；

R₈和R₉独立为氢或低级烷基，或者R₇和R₈与和它们相连的碳原子结合在一起形成芳环；或者R₈与R₄结合在Q和Y之间形成键，或者R₈可与R₆结合在Q和X之间形成键；前提是X和Q与Q和Y之间不同时具有双键；

R₃是

R_b1、R_b2、R_c1和R_c2独立为氢、低级烷基或供电子基团；

T是(CHR₃₁)、O、S或NR₃₁；和

R₃₁是氢或低级烷基。

22.如权利要求20和21所述的化合物，其特征在于，所述R1和R2与和它们相连的碳原子结合在一起，形成芳环或杂芳环，其中所述芳环是苯基或萘基，所述杂芳环是含有3-13个环碳原子的含氧、硫或氮的杂芳香族，并且含有至少1个硫环原子或至少1个氧环原子或至少2个氮环原子，所述芳环或杂芳环可各自为未取代的或被低级烷基或供电子基团取代。

23.如权利要求20所述的如下式所示化合物或其N-氧化物或其盐，

其特征在于，

R₁和R₂与和它们相连的碳原子结合在一起，形成芳基或杂芳基环，其中所述芳基环是含有6-14个环碳原子的芳香环，所述杂芳基环是含有氧、硫或氮的杂芳香族，其含有3-13个环碳原子，所述芳环和杂芳环可各自独立是未取代的或被低级烷基或供电子基团取代；

Y是O、NR₄或CR₄R₅；

R₅是氢或低级烷基；

R₄是氢或低级烷基；

X是CR₆R₇或NR₆；

n是0或1；

R₃是

R_b1、R_b2、R_c1和R_c2独立为氢、低级烷基或供电子基团；

T是(CHR₃₁)、O、S或NR₃₁；和

R₃₁是氢或低级烷基。

24.如权利要求20所述的如下式所示化合物或其N-氧化物或其盐，

其特征在于，

Y是N或CR₅；

R₅是氢或低级烷基；

X是CR₇或N；

R₇是氢或低级烷基；

R₃是

R_b1、R_b2、R_c1和R_c2独立为氢、低级烷基或供电子基团；

T是(CHR₃₁)、O、S或NR₃₁；和

R₃₁是氢或低级烷基。

25.如权利要求20-24中任一项所述的化合物，其特征在于，所述R₁₀是OR₁₂、低级烷基、芳基或芳基低级烷基；R₁₁是OR₁₃、低级烷基、芳基或芳基低级烷基；且R₁₀和R₁₁可通过选自O、S、NH或(CH₂)_m的桥连基团任选相连；且R₁₂和R₁₃独立为低级烷基、芳基或芳基低级烷基。

26.如权利要求25所述的化合物，其特征在于，所述R₃是

其中R₁₀和R₁₁独立为低级烷基或芳基。

27.如权利要求25所述的化合物，其特征在于，所述R₃是

其中R₁₂和R₁₃独立为低级烷基或芳基。

28.如权利要求20所述的如下式所示化合物或其N-氧化物或其盐：

29.如权利要求28所述的化合物，其特征在于，所述R₃是

其中R₁₀是低级烷基或芳基或OR₁₂；

R₁₁是低级烷基或芳基或OR₁₀；

R₁₂是低级烷基和

R₁₃是低级烷基。

30.如权利要求29所述的化合物，其特征在于，所述化合物如下式所示：

31.如权利要求28所述的化合物，其特征在于，所述化合物是：

其中Rb₁、Rb₂、Rc₁和Rc₂独立为氢或低级烷基，T是O、S、NH或CH₂。

32.一种从氨基化合物和羧酸的酰基化衍生物之间的反应制备肽键的方法，所述氨基化合物是氨基酸或肽，所述羧酸是N-末端氨基受保护的氨基酸或N-末端氨基受保护的肽，改进之处包括向所述反应加入有效量的下式所示化合物或其阳离子部分如下式所示的盐：

其中

R₁和R₂与和它们相连的碳原子结合在一起，形成杂芳环，其中所述杂芳环是含有氧、硫或氮的杂芳香族，其含有3-13个环碳原子和1-4个选自O、S和N的杂原子，所述杂芳环可独立为未取代的或被低级烷基或供电子基团取代；

Y₁是N或CR₁₅；

R₁₅是H或低级烷基；

Q₁是N或CR₁₆；

R₁₆是H或低级烷基；

R₁₄是氢、带正电荷的吸电子基团、

R₁₇是芳基、芳基低级烷基或低级芳基烷基；

AA₁是在N-末端少一个氢原子和在C-末端少一个OH的氨基酸或肽；

BLK₁是氨基保护基团；

R_b1、R_b2、R_c1和R_c2独立为氢、低级烷基或供电子基团；

T是(CHR₃₁)、O、S或NR₃₁；和

R₃₁是氢或低级烷基。

33.一种从有机胺和羧酸的酰基化衍生物之间的反应形成酰胺的方法，改进之处包括向所述反应加入有效量的下式所示化合物或含有如下式所示阳离子部分的盐：

其中

Y₁是N或CR₁₅；

R₁₅是H或低级烷基；

Q₁是N或CR₁₆；

R₁₆是H或低级烷基；

R₁₄是

氢、带正电荷的吸电子基团、SO₂R₁₇、低级烷基羰基、芳基羰基、低级烷基芳基或BLK₁-AA₁；

R₁₇是芳基、芳基低级烷基或低级烷基；

BLK₁是氨基保护基团；

R_b1、R_b2、R_c1和R_c2独立为氢、低级烷基或供电子基团；

T是(CHR₃₁)、O、S或NR₃₁；和

R₃₁是氢或低级烷基。

34.一种肽合成方法，其中第一Nα-氨基受保护的氨基酸与固相肽合成树脂共价偶联，切除Nα-氨基保护基团，得到的游离氨基经肽键与第二Nα-氨基受保护的氨基酸的羧基偶联，重复该循环直至然后从所述树脂上切下所需肽，改进之处包括向偶联步骤加入有效量的下式所示化合物或含有下式所示阳离子部分的盐：

其中

Y₁是N或CR₁₅；

R₁₅是H或低级烷基；

Q₁是N或CR₁₆；

R₁₆是H或低级烷基；

R₁₄是氢、带正电荷的吸电子基团、

SO₂R₁₇、低级烷基羰基、芳基羰基、芳基低级烷基或BLK₁-AA₁；

R₁₇是芳基、芳基低级烷基或低级烷基；

BLK₁是氨基保护基团；

R_b1、R_b2、R_c1和R_c2独立为氢、低级烷基或供电子基团；

T是(CHR₃₁)、O、S或NR₃₁；和

R₃₁是氢或低级烷基。

35.如权利要求32-34中任一项所述的方法，其特征在于，额外存在脱水剂。

36.如权利要求35所述的方法，其特征在于，所述脱水剂是DCC或EDC。

37.如权利要求32或33所述的方法，其特征在于，所述羧酸的酰化衍生物是BLK-AA-M，

其中BLK是氨基保护基团；

AA是氨基酸；

M是OH、卤素或

R_a独立为卤素、低级烷基、氢或吸电子基团；

b是0-5。

38.如权利要求37所述的方法，其特征在于，所述BLK是Fmoc、BOC、TEOC、Aoc、Adoc、Bpoc、Azoc、Ddz、Poc、Foc、Moz、Nps、Dts、Cbz、Bspoc、Bsmoc、Nps、甲酰基、乙酰基或三氟乙酰基。

39.如权利要求38所述的方法，其特征在于，所述BLK是Cbz、Bspoc、Bsmoc或BOC。

40.如权利要求37所述的方法，其特征在于，所述吸电子基团是硝基或氰基。

41.如权利要求32-34中任一项所述的方法，其特征在于，所述供电子基团是低级烷基氨基、二低级烷基氨基、氨基、低级烷氧基、芳氧基、merchant、低级烷硫基或羟基。

42.如权利要求41所述的方法，其特征在于，所述供电子基团是二低级烷基氨基或低级烷氧基。

43.如权利要求42所述的方法，其特征在于，所述供电子基团是OMe或Me₂N。

44.如权利要求32-34中任一项所述的方法，其特征在于，所述R₁₄是如下式所示的带正电荷的吸电子基团：

其中

R₁₈、R₁₉、R₂₀、R₂₁、R₂₂、R₂₃和R₂₄独立为氢、低级烷基、低级烷氧基低级烷基；或者R₁₈和R₁₉与和它们相连的原子结合在一起，形成含有最多6个环原子和最多共5个碳环原子的环；或者R₂₀和R₂₁与和它们相连的氮原子结合在一起，形成含有最多共5个碳环原子的5或6元含氮杂环基环；或者R₁₈和R₂₀可与和它们相连的氮原子和碳原子结合在一起，形成杂环基环；或者R₂₂和R₂₃与和它们相连的原子结合在一起，形成含有最多6个环原子和最多共5个碳原子的环；或者R₂₄和R₂₅与和它们相连的碳原子结合在一起，形成含有最多6个环原子和最多共5个环碳原子的环。

45.如权利要求44所述的方法，其特征在于，所述R₁₄是

其中R₁₉、R₂₀和R₂₁、R₂₄和R₂₅独立为氢、低级烷基或低级烷氧基低级烷基；n₁是0或1。

46.如权利要求45所述的方法，其特征在于，所述R₁₉和R₂₁或R₂₄和R₂₅是相同的。

47.如权利要求44所述的方法，其特征在于，所述R₁₄是

其中R₁₈、R₁₉、R₂₀、R₂₁、R₂₂、R₂₃、R₂₄和R₂₅独立是氢、甲基、乙基、丙基、丁基、戊基或CH₂CH₂OCH₂CH₃。

48.如权利要求47所述的方法，其特征在于，所述R₂₃、R₂₂、R₂₀、R₂₁、R₂₄、R₂₅是相同的，或者R₁8、R₁₉和R₂₀是相同的，或者R₁₉和R₂₁是相同的。

49.如权利要求44所述的方法，其特征在于，所述R₁₄是

低级烷基羰基、低级芳基烷基羰基、芳基羰基、

其中U是 CH₂或O。

50.如权利要求32-34中任一项所述的方法，其特征在于，所述R₁₄是

51.如权利要求50所述的方法，其特征在于，所述R₁₀是OR₁₂、低级烷基、芳基或芳基低级烷基；R₁₁是OR₁₃、低级烷基、芳基或芳基低级烷基；

且R₁₀和R₁₁可通过选自O、S、NH和(CH₂)_m的桥连基团任选相连，

m是1-3；与

R₁₂和R₁₃独立为低级烷基、芳基或芳基低级烷基。

52.如权利要求51所述的方法，其特征在于，R₁₄是

其中R₁₂和R₁₁独立为低级烷基或芳基。

53.如权利要求51所述的方法，其特征在于，R₁₃是

R₁₄是

其中R₁₂和R₁₃独立为低级烷基或芳基。

54.如权利要求44所述的方法，其特征在于，所述化合物是其阳离子部分如下式所示的盐：

55.如权利要求32-34所述的方法，其特征在于，所述化合物如下式所示：

其中R_b、R_b1、R_c和R_c1独立为低级烷基或氢；T是CH₂、NH、O或S。

56.一种化合物或盐，其中所述化合物或所述盐的阳离子如下式所示：

其中

Y₁是N或CR₁₅；

R₁₅是H或低级烷基；

Q₁是N或CR₁₆；

R₁₆是H或低级烷基；

R₁₄是带正电荷的吸电子基团、

R₁₇是芳基、芳基低级烷基或低级烷基；

BLK₁是氨基保护基团；

且R₁₀和R₁₁可通选自过O、S、NR₃₀或(CHR₃₀)_m的桥连基团任选相连，其中每个R₃₀独立为低级烷基或氢，m是1-3；

环A₁和环B独立为含有6-14个环碳原子的芳环或含有5-14个环碳原子的环烯基或环烷基；

R_b1、R_c1、R_b2、R_c2独立为氢、低级烷基或供电子基团；

T是CHR₃₁、O、S或NR₃₀；和

R₃₁是氢或低级烷基。

57.如权利要求56所述的盐，其特征在于，R₁₄是带正电荷的吸电子基团。

58.如权利要求57所述的盐，其特征在于，所述R₁₄是如下式所示的吸电子基团：

其中

R₁₈、R₁₉、R₂₀、R₂₁、R₂₂、R₂₃和R₂₄独立为氢、低级烷基、低级烷氧基低级烷基；或者R₁₈和R₁₉与和它们相连的原子结合在一起，形成含有最多6个环原子和最多共5个碳环原子的环；或者R₂₀和R₂₁与和它们相连的氮原子结合在一起，形成含有最多共5个环碳环原子的5或6元含氮杂环基环；或者R₁₈和R₂₀可与和它们相连的氮原子和碳原子结合在一起形成杂环基环；或者R₂₂和R₂₃与和它们相连的原子结合在一起，形成含有最多6个环原子和最多共5个碳原子的环；或者R₂₄和R₂₅与和它们相连的碳原子结合在一起，形成含有最多6个环原子和最多共5个碳原子的环。

59.如权利要求58所述的盐，其特征在于，R₁₄是

其中R₁₉、R₂₀、R₂₁、R₂₄和R₂₅独立为氢、低级烷基或低级烷氧基低级烷基，n₁＝0或1。

60.如权利要求59所述的盐，其特征在于，所述R₁₉和R₂₁或R₂₄和R₂₅是相同的。

61.如权利要求56所述的盐，其特征在于，所述R₁₄是

62.如权利要求61所述的盐，其特征在于，所述R₂₃、R₂₂、R₂₀、R₂₁、R₂₄、R₂₅是相同的，或者R₁₈、R₁₉和R₂₀是相同的，或者R₁₉和R₂₁是相同的。

63.如权利要求56所述的化合物或盐，其特征在于，所述R₁₄是

低级烷基羰基、低级芳基烷基羰基、芳基羰基、

其中U是 CH₂或O。

64.如权利要求56所述的化合物，其特征在于，所述R₁₄是

65.如权利要求64所述的化合物，其特征在于，所述R₁₀是OR₁₂、低级烷基、芳基或芳基低级烷基；R₁₁是OR₁₃、低级烷基、芳基或芳基低级烷基；且R₁₀和R₁₁可通过选自O、S、NH和(CH₂)_m的桥连基团任选相连；m是1-3；且

R₁₂和R₁₃独立为低级烷基、芳基或芳基低级烷基。

66.如权利要求56所述的化合物，其特征在于，R₁₄是

其中R₁₀和R₁₁独立为低级烷基或芳基。

67.如权利要求56所述的化合物，其特征在于，R₁₄是

R₁₄是

其中R₁₂和R₁₃独立为低级烷基或芳基。

68.如权利要求56所述的化合物或盐，其特征在于，所述化合物或盐的阳离子部分如下式所示：

69.如权利要求56所述的化合物或盐，其特征在于，所述化合物或盐的阳离子部分如下式所示：

70.如权利要求56所述的化合物，其特征在于，所述化合物或盐的阳离子部分如下式所示：

其中

A是N或CR₂₄；

D是CR₂₅或N；

E是CR₂₆或N；

G是CR₂₇或N；

R₂₄、R₂₅、R₂₆和R₂₇独立为氢或低级烷基或供电子基团，或者R₂₅和R₂₆或R₂₄和R₂₅或R₂₆和R₂₇与和它们分别相连的碳原子结合在一起，形成芳环；

其中A、D、E、G中至少一个是N；

Y₁是N或CR₁₅；

R₁₅是H或低级烷基；

Q₁是N或CR₁₆；

R₁₆是H或低级烷基；

R₁₄是带正电荷的吸电子基团、

R₁₇是芳基、芳基低级烷基或低级烷基；

BLK₁是氨基保护基团；

R_b1、R_c1、R_b2、R_c2独立为氢、低级烷基或供电子基团；

T是(CHR₃₁)、O、S或NR₃₁；和

R₃₁是氢或低级烷基。

71.一种化合物或盐，其中所述化合物或盐的阳离子部分如下式所示：

其中D是CR₂₅或N；

E是CR₂₆或N；

J是NR₂₈、O、CR₂₈R₂₉或S(O)p；

R₂₅和R₂₆独立为氢或低级烷基或供电子基团，或者R₂₅和R₂₆与和它们分别相连的碳原子结合在一起，形成芳环；

R₂₈是氢或低级烷基或供电子基团；

R₂₉是氢或低级烷基；

p是0、1或2；

Y₁是N或CR₁₅；

R₁₅是H或低级烷基；

Q₁是N或CR₁₆；

R₁₆是H或低级烷基；

R₁₄是氢、带正电荷的吸电子基团、

SO₂R₁₇、低级烷基羰基、芳基羰基、低级烷基或BLK₁-AA₁；

R₁₇是芳基、芳基低级烷基或低级烷基；

BLK₁是氨基保护基团；

R_b1、R_c1、R_b2、R_c2独立为氢、低级烷基或供电子基团；

T是(CHR₃₁)、O、S或NR₃₁；和

R₃₁是氢或低级烷基。

72.如权利要求70所述的化合物或盐，其特征在于，所述化合物或阳离子部分如下式所示：

其中

A是N或CR₂₄；

D是CR₂₅或N；

E是CR₂₆或N；

G是CR₂₇或N；

R₂₄、R₂₅、R₂₆和R₂₇独立为氢或低级烷基；

其中A、D、E、G中至少一个是N；

Y₁是N或CR₁₅；

R₁₅是H或低级烷基；

Q₁是N或CR₁₆；

R₁₆是H或低级烷基；

R₁₄是带正电荷的吸电子基团、

R₁₇是芳基、芳基低级烷基或低级烷基；

BLK₁是氨基保护基团；

R_b1、R_c1、R_b2、R_c2独立为氢、低级烷基或供电子基团；

T是(CHR₃₁)、O、S或NR₃₁；和

R₃₁是氢或低级烷基。

73.如权利要求72所述的化合物，其特征在于，所述R₁₄是

其中

R₁₀和R₁₁、R_b1、R_b2、R_c1、R_c2独立为氢或低级烷基，T是O、CH₂、NH或S，环A₁和环B独立为芳香环。

74.如权利要求56所述的化合物，其特征在于，所述R₁₄是

其中

R₁₂、R₁₃、Rb₁、Rb₂、Rc₁和Rc₂独立为氢或低级烷基；

环A₁和环B独立为苯基；和

T是CH₂、O、S或NH。

75.如权利要求56所述的化合物，其特征在于，所述化合物是盐，其阳离子部分如下式所示：

76.如权利要求56所述的化合物，其特征在于，所述化合物如下式所示：

其中R_b、R_b1、R_c、R_c1独立为低级烷基或氢；T是CH₂、NH、O或S。

77.一种从氨基化合物和羧酸的酰化衍生物之间的反应制备肽键的方法，所述氨基化合物是氨基酸或肽，所述羧酸是N-末端氨基受保护的氨基酸或N-末端氨基受保护的肽，改进之处包括向所述反应加入有效量的下式所示化合物或其阳离子部分如下式所示的盐：

其中

R₁和R₂与和它们相连的碳原子结合在一起，形成芳环或杂芳环，其中所述芳环是含有6-14个环碳原子的芳香环，所述杂芳环是含有氧、硫或氮的杂芳香族，其含有3-13个环碳原子和1-4个选自O、S和N的杂原子，所述芳环和杂芳环可独立为未取代的或被低级烷基或供电子基团取代；

Y₁是N或CR₁₅；

R₁₅是H或低级烷基；

Q₁是N或CR₁₆；

R₁₆是H或低级烷基；

R₁₄是氢、带正电荷的吸电子基团、

SO₂R₁₇；

R₁₇是芳基、芳基低级烷基或低级芳基烷基；

R₁₁是低级烷基、芳基、芳基低级烷基、低级环烷基、杂环基、杂环基低级烷基、低级环烯基或低级环烯基低级烷基；

R₁₂是低级烷基、低级环烷基、低级环烷基低级烷基、杂环基、杂环基低级烷基、低级环烯基或低级环烯基低级烷基；

R_b1、R_c1、R_b2、R_c2独立为氢、低级烷基或供电子基团；

T是CHR₃₁、O、S或NR₃₁；和

R₃₁是氢或低级烷基。

78.如权利要求77所述的方法，其特征在于，额外存在脱水剂。

79.如权利要求78所述的方法，其特征在于，所述脱水剂是DCC或EDC。

80.如权利要求77所述的方法，其特征在于，所述结合在一起的R₁和R₂是芳香环。

81.如权利要求80所述的方法，其特征在于，所述R₁₄是如下式所示带正电荷的吸电子基团：

其中

R₁₈、R₁₉、R₂₀、R₂₁、R₂₂、R₂₃和R₂₄独立为氢、低级烷基、低级烷氧基低级烷基；或者R₁₈和R₁₉与和它们相连的原子结合在一起，形成含有最多6个环原子和最多共5个碳环原子的环；或者R₂₀和R₂₁与和它们相连的氮原子结合在一起，形成含有最多共5个碳环原子的5或6元含氮杂环基环；或者R₁₈和R₂₀可与和它们相连的氮原子和碳原子结合在一起形成杂环基环；或者R₂₂和R₂₃与和它们相连的原子结合在一起形成含有最多6个环原子和最多共5个碳原子的环；或者R₂₄和R₂₅与和它们相连的碳原子结合形成含有最多6个环原子和最多共5个碳原子的环。

82.如权利要求81所述的方法，其特征在于，R₁₄是

83.如权利要求82所述的方法，其特征在于，所述R₁₄是

84.如权利要求83所述的方法，其特征在于，所述R₁₄是

低级烷基羰基、低级芳基烷基羰基、芳基羰基、

其中U是

CH₂或O。

85.如权利要求77所述的方法，其特征在于，所述R₁₄是

86.如权利要求85所述的方法，其特征在于，所述R₁₀是OR₁₂、低级烷基或芳基低级烷基；R₁₁是低级烷基、芳基或芳基低级烷基；且R₁₀和R₁₁可通过选自O、S、NH和(CH₂)_m的桥连基团任选相连；

m是1-3；且

R₁₂是低级烷基、芳基或芳基低级烷基。

87.如权利要求86所述的方法，其特征在于，R₁₄是

其中R₁₂和R₁₁独立为低级烷基或芳基。

88.如权利要求77所述的方法，其特征在于，所述化合物是盐，其阳离子部分如下式所示：

89.一种从氨基化合物和羧酸的酰化衍生物之间的反应形成酰胺的方法，改进之处包括向所述反应加入有效量的下式所示化合物或含有如下式所示阳离子部分的盐：

其中

Y₁是N或CR₁₅；

R₁₅是H或低级烷基；

Q₁是N或CR₁₆；

R₁₆是H或低级烷基；

R₁₄是氢、带正电荷的吸电子基团、

SO₂R₁₇；

R₁₇是芳基、芳基低级烷基或低级芳基烷基；

R_b1、R_c1、R_b2、R_c2独立为氢、低级烷基或供电子基团；

T是CHR₃₁、O、S或NR₃₁；和

R₃₁是氢或低级烷基。

90.如权利要求89所述的改进的方法，其特征在于，所述R₁和R₂与和它们相连的碳原子结合在一起形成芳基。

91.如权利要求89所述的改进的方法，其特征在于，所述R₁和R₂与和它们相连的碳原子结合在一起形成苯基。

92.一种肽合成方法，其中第一Nα-氨基受保护的氨基酸与固相肽合成树脂共价偶联，切除Nα-氨基保护基团，得到的游离氨基经肽键与第二Nα-氨基受保护的氨基酸的羧基偶联，重复该循环直至从所述树脂上切下所需肽，改进之处包括向偶联步骤加入有效量的下式所示化合物或含有下式所示阳离子部分的盐：

其中

Y₁是N或CR₁₅；

R₁₅是H或低级烷基；

Q₁是N或CR₁₆；

R₁₆是H或低级烷基；

R₁₄是氢、带正电荷的吸电子基团、

SO₂R₁₇；

R₁₇是芳基、芳基低级烷基或低级芳基烷基；

R_b1、R_c1、R_b2、R_c2独立为氢、低级烷基或供电子基团；

T是CHR₃₁、O、S或NR₃₁；和

R₃₁是氢或低级烷基。

93.如权利要求92所述的改进的方法，其特征在于，所述R₁和R₂与和它们相连的碳原子结合在一起形成芳基。

94.如权利要求93所述的改进的方法，其特征在于，所述R₁和R₂与和它们相连的碳原子结合在一起形成苯基。

95.一种化合物或盐，其中所述化合物或所述盐的阳离子部分如下式所示：

其中

R₁和R₂与和它们相连的碳原子结合在一起形成芳环或杂芳环，其中所述芳环是含有6-14个环碳原子的芳香环，所述杂芳环是含有氧、硫或氮的杂芳香族，其含有3-13个环碳原子和1-4个选自O、S和N的杂原子，所述芳环和杂芳环可独立为未取代的或被低级烷基或供电子基团取代；

Y₁是N或CR₁₅；

R₁₅是H或低级烷基；

Q₁是N或CR₁₆；

R₁₆是H或低级烷基；

R₁₄是氢、带正电荷的吸电子基团、

SO₂R₁₇；

R₁₇是芳基、芳基低级烷基或低级芳基烷基；

R_b1、R_c1、R_b2、R_c2独立为氢、低级烷基或供电子基团；

T是CHR₃₁、O、S或NR₃₁；和

R₃₁是氢或低级烷基。

96.如权利要求95所述的化合物或盐，其特征在于，所述结合在一起的R₁和R₂是芳基。

97.如权利要求96所述的化合物或盐，其特征在于，所述结合在一起的R₁和R₂是苯基。

98.如权利要求96所述的盐，其特征在于，R₁₄是带正电荷的吸电子基团。

99.如权利要求98所述的盐，其特征在于，所述R₁₄是如下式所示带正电荷的吸电子基团：

其中

R₁₈、R₁₉、R₂₀、R₂₁、R₂₂、R₂₃和R₂₄独立为氢、低级烷基、低级烷氧基低级烷基；或者R₁₈和R₁₉与和它们相连的原子结合在一起，形成含有最多6个环原子和最多共5个碳环原子的环；或者R₂₀和R₂₁与和它们相连的氮原子结合在一起，形成含有最多共5个碳环原子的5或6元含氮杂环基环；或者R₁₈和R₂₀可与和它们相连的氮原子和碳原子结合在一起形成杂环基环；或者R₂₂和R₂₃与和它们相连的原子结合在一起，形成含有最多6个环原子和最多共5个碳原子的环；或者R₂₄和R₂₅与和它们相连的碳原子结合在一起，形成含有最多6个环原子和最多共5个碳原子的环。

100.如权利要求99所述的盐，其特征在于，R₁₄是

101.如权利要求100所述的盐，其特征在于，所述R₁₄是

102.如权利要求96所述的化合物或盐，其特征在于，所述R₁₄是

低级烷基羰基、低级芳基烷基羰基、芳基羰基、

其中U是

CH₂或O。

103.如权利要求96所述的化合物，其特征在于，所述R₁₄是

104.如权利要求96所述的化合物，其特征在于，所述R₁₀是OR₁₂、低级烷基、芳基或芳基低级烷基；R₁₁是低级烷基、芳基或芳基低级烷基；且R₁₀和R₁₁可通过选自O、S、NH和(CH₂)_m的桥连基团任选相连；

m是1-3；与

R₁₂是低级烷基、芳基或芳基低级烷基。

105.如权利要求103所述的化合物，其特征在于，R₁₄是

106.如权利要求104所述的化合物，其特征在于，R₁₄是

107.如权利要求77所述的化合物或盐，其特征在于，所述化合物或盐的阳离子部分如下式所示：

108.如权利要求107所述的下式所示化合物或盐：

其特征在于，T是CH₂、NH、O或S。

109.一种如下式所示的化合物或其阳离子部分如下式所示的盐，：

或其N-氧化物或盐

其中Y₁或Q之一是CR₁₅，另一个是N或CH；

Y₁是H或低级烷基；

R₁₄是氢、带正电荷的吸电子基团、

R₁₇是芳基、芳基低级烷基或低级芳基烷基；

BLK₁是氨基保护基团；

R_b1、R_c1、R_b2、R_c2独立为氢、低级烷基或供电子基团；

T是(CHR₃₁)、O、S或NR₃₁；和

R₃₁是氢或低级烷基。

110.如权利要求109所述的化合物或盐，其特征在于，所述R₁和R₂与和它们相连的碳原子结合在一起形成芳环。

111.如权利要求109所述的化合物或盐，其特征在于，所述R₁和R₂与和它们相连的碳原子结合在一起形成杂芳环。

112.如权利要求109所述的盐，其特征在于，R₁₄是带正电荷的吸电子基团。

113.如权利要求112所述的盐，其特征在于，所述带正电荷的吸电子基团如下式所示：

其中

R₁₈、R₁₉、R₂₀、R₂₁、R₂₂、R₂₃和R₂₄独立为氢、低级烷基、低级烷氧基低级烷基；或者R₁₈和R₁₉与和它们相连的原子结合在一起，形成含有最多6个环原子和最多共5个碳环原子的环；或者R₂₀和R₂₁与和它们相连的氮原子结合在一起，形成含有最多共5个碳环原子的5或6元含氮杂环基环；或者R₁₈和R₂₀可与和它们相连的氮原子和碳原子结合在一起，形成杂环基环；或者R₂₂和R₂₃与和它们相连的原子结合在一起，形成含有最多6个环原子和最多共5个碳原子的环；或者R₂₄和R₂₅与和它们相连的碳原子结合在一起，形成含有最多6个环原子和最多共5个碳原子的环。

114.如权利要求113所述的盐，其特征在于，R₁₄是

115.如权利要求114所述的盐，其特征在于，所述R₁₄是

116.如权利要求114所述的盐，其特征在于，所述R₁₄是

低级烷基羰基、低级芳基烷基羰基、芳基羰基、

其中U是

CH₂或O。

117.如权利要求109所述的化合物，其特征在于，所述R₁₄是

118.如权利要求117所述的化合物，其特征在于，所述R₁₀是OR₁₂、低级烷基、芳基或芳基低级烷基；R₁₁是OR₁₃、低级烷基、芳基或芳基低级烷基；且R₁₀和R₁₁可通过选自O、S、NH和(CH₂)_m的桥连基团任选相连；

m是1-3；与

R₁₂和R₁₃独立为低级烷基、芳基或芳基低级烷基。

119.如权利要求118所述的化合物，其特征在于，所述R₁₂和R₁₁独立为低级烷基或芳基。

120.如权利要求118所述的化合物，其特征在于，R₁₄是

其中R₁₂和R₁₁独立为低级烷基或芳基。

121.如权利要求118所述的化合物，其特征在于，所述R₁₄是

其中R₁₂和R₁₃独立为低级烷基或芳基。

122.如权利要求109所述的化合物，其特征在于，所述化合物如下式所示或所述盐的阳离子部分如下式所示：

其中

A是N或CR₂₄；

D是N或CR₂₅；

E是N或CR₂₆；

G是N或CR₂₇；

R₂₄、R₂₅、R₂₆和R₂₇独立为氢或低级烷基或供电子基团；或者R₂₅和R₂₆或R₂₄和R₂₅或R₂₆和R₂₇与分别和它们相连的碳原子结合在一起形成芳环。

123.如权利要求109所述的化合物，其特征在于，所述化合物或所述盐的阳离子部分如下式所示：

其中

D是CR₂₅或N；

E是CR₂₆或N；

J是NR₂₈、O、CR₂₈R₂₉或S(O)p；

R₂₅和R₂₆独立为氢或低级烷基或供电子基团，或者R₂₅和R₂₆与和它们分别相连的碳原子结合在一起形成芳环；

R₂₈是氢或低级烷基或供电子基团；

R₂₉是氢或低级烷基；和

p是0、1或2。

124.一种从氨基化合物和羧酸的酰化衍生物之间的反应制备肽键的方法，所述氨基化合物是氨基酸或肽，所述羧酸是N-末端氨基受保护的氨基酸或N-末端氨基受保护的肽，改进之处包括向所述反应加入有效量的下式所示化合物或其阳离子部分如下式所示的盐：

或其N-氧化物或盐

其中Y₁或Q之一是CR₁₅，另一个是N或CH；

Y₁是H或低级烷基；

R₁₄是氢、带正电荷的吸电子基团、

R₁₇是芳基、芳基低级烷基或低级芳基烷基；

BLK₁是氨基保护基团；

R_b1、R_c1、R_b2、R_c2独立为氢、低级烷基或供电子基团；

T是CHR₃₁、O、S或NR₃₁；和

R₃₁是氢或低级烷基。

125.一种从有机胺和羧酸的酰化衍生物之间的反应形成酰胺的方法，改进之处包括向所述反应加入有效量的下式所示化合物或含有下式所示阳离子部分的盐：

或其N-氧化物或盐

其中Y₁或Q之一是CR₁₅，另一个是N或CH；

Y₁是H或低级烷基；

R₁₄是氢、带正电荷的吸电子基团、

R₁₇是芳基、芳基低级烷基或低级芳基烷基；

BLK₁是氨基保护基团；

R_b1、R_c1、R_b2、R_c2独立为氢、低级烷基或供电子基团；

T是CHR₃₁、O、S或NR₃₁；和

R₃₁是氢或低级烷基。

126.一种肽合成方法，其中第一Nα-氨基受保护的氨基酸与固相肽合成树脂共价偶联，切除Nα-氨基保护基团，得到的游离氨基经肽键与第二Nα-氨基受保护的氨基酸的羧基偶联，重复该循环直至从所述树脂上切下所需肽，改进之处包括向偶联步骤加入有效量的下式所示化合物或含有下式所示阳离子部分的盐：

或其N-氧化物或盐

其中Y₁或Q之一是CR₁₅，另一个是N或CH；

Y₁是H或低级烷基；

R₁₄是氢、带正电荷的吸电子基团、

R₁₇是芳基、芳基低级烷基或低级芳基烷基；

BLK₁是氨基保护基团；

R_b1、R_c1、R_b2、R_c2独立为氢、低级烷基或供电子基团；

T是CHR₃₁、O、S或NR₃₁；和

R₃₁是氢或低级烷基。

127.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述R₁₀和R₁₁含有芳基或杂芳基或它们的组合，并且所述芳基或杂芳基中至少一个被叔丁基或叔戊基取代。

128.如权利要求20所述的化合物，其特征在于，所述R_b1、R_c1、R_b2或R_c2中至少一个是叔丁基或戊基。

129.如权利要求128所述的方法，其特征在于，所述R₁₀和R₁₁中与

相连的芳环或杂芳环被叔丁基或叔戊基取代。