CN1870974B - 注射用加巴喷丁组合物的生产方法 - Google Patents

Abstract

讨论了含加巴喷丁的注射用组合物及制备含加巴喷丁的无菌注射用组合物的方法。该方法包括加热组合物。加热增加了加巴喷丁内酰胺的产生，以前已证明其有毒。意外地，发现鞘内给予时，加热的含加巴喷丁的注射用组合物无毒性。因此，用于灭菌目的或确保无菌度的加热为生产含加巴喷丁的注射用组合物提供了可行的选择。

Description

注射用加巴喷丁组合物的生产方法

相关申请

本申请要求2003年10月23日提交的题为“注射用加巴喷丁组合物”的临时申请序列号60/513682，2003年10月23日提交的题为“鞘内给予加巴喷丁治疗疼痛和癫痫”的临时申请序列号60/513681，以及美国专利申请序列号10/808,113的优先权。所有上述申请的内容被纳入本文作为参考。

发明领域

本申请涉及含加巴喷丁的注射用组合物和试剂盒，并涉及其生产方法。

发明背景

加巴喷丁是一种模拟GABA(γ-氨基丁酸)作用的药剂，但加巴喷丁似乎不结合GABA受体(例如GABA_A和GABA_B受体)，也不影响GABA摄取。发现加巴喷丁可与电压门控钙通道的α-2-δ(α₂δ)亚单元相互作用。加巴喷丁的许多药理作用是由于其与电压门控钙通道的相互作用。认为加巴喷丁可降低钙离子流入神经元，神经元兴奋性降低。抑制突触前钙内流可防止神经递质的释放。因此，类似于GABA，加巴喷丁可缓解神经环路的活动过度。

目前可获得加巴喷丁的固体制剂如NEURONTIN，用于口服。口服加巴喷丁最初用于治疗癫痫，虽然标识外也用于治疗神经性疼痛且近来得到FDA批准用于治疗一类神经性疼痛，疱疹后神经痛。口服给予时一些加巴喷丁可进入CNS，因为加巴喷丁可转运通过肠和血-脑屏障。认为加巴喷丁通过活性和可饱和的L-氨基酸转运体转运通过血-脑屏障。因此，到达CNS作用部位的加巴喷丁的量有限。因为该转运体是可饱和的，即使升高血中加巴喷丁的浓度，其通过血-脑屏障的量不变。

在临床前动物实验中，临时制备了加巴喷丁溶液用于直接给予CNS。在一些研究中，单次推注或多次推注鞘内给予加巴喷丁溶液。然而，向CNS给予加巴喷丁溶液产生许多问题，包括严重感染的威胁。虽然这些问题在临床前动物实验中不是很重要，但在给予人体时是最重要的。

因此，不能轻率地对待含加巴喷丁溶液的无菌性，该溶液将被给予到CNS。一般，通过加热或过滤灭菌溶液。在含加巴喷丁溶液的情况下，通常不希望进行涉及热的灭菌过程。这是因为热将导致加巴喷丁的稳定性降低并增加具有通式(I)化学结构的加巴喷丁内酰胺的产生：

根据美国专利号6,054,482，“内酰胺显示某种毒性，因此必须尽可能避免，例如，加巴喷丁的毒性(LD₅₀，小鼠)大于8000mg/kg，而对应的内酰胺(VI)的毒性为300mg/kg。”第4栏，第50-53行。由于涉及热的灭菌过程可增加加巴喷丁内酰胺的水平，所以不建议在给予患者的CNS之前加热溶液。

发明概述

本发明的一个实施方式提供制备含加巴喷丁的药物注射用组合物的方法。该方法包括加热该注射用组合物。意外地，发明者们发现引入CNS时加热含加巴喷丁的注射用组合物不会导致过度毒性。

将加热含加巴喷丁的注射用组合物作为灭菌过程的一部分具有几个优点。例如，用热作为最终灭菌的方法使得可以有效的方式灭菌大量含加巴喷丁的组合物。另外，过滤灭菌后热处理可进一步确保含加巴喷丁组合物无菌至所需的F₀，给予患者的CNS或其它区域。通过阅读本说明书，本发明的这些和其它优点将显而易见。

发明详述

以下叙述阐明了本发明的各种实施方式。应理解不背离本发明的范围或精神，考虑并可实施本发明的其它实施方式。因此，以下说明不是限制性的。

除非另有说明，本申请中使用的所有科学和技术术语具有本领域常用的含义。本文提供的定义有利于对某些本文频繁使用的术语的理解，而不是为了限制本发明的范围。

在本发明的内容中，术语“治疗”、“疗法”等，当这些术语是指疾病时，应包括缓解、减缓进程、预防、减轻或治愈靶疾病的方法。

如本文所用，加热的注射用组合物指已在一些点加热的组合物。应理解在注射入对象之前，加热的注射用组合物可为基本室温，或任何其它所需温度。

如本文所用，术语“注射用药物组合物”指可输注或注射入对象的组合物，该组合物含有药物活性试剂并灭菌至F₀或等价形式，适合通过注射或输注给予人体患者。

本发明的实施方式提供含加巴喷丁的注射用组合物。根据本发明实施方式制备的含加巴喷丁的注射用组合物可用于需要加巴喷丁的研究和使用的任何目的。例如，可在研究中使用含加巴喷丁的注射用组合物以确定或阐明(a)加巴喷丁对分子、细胞、组织、器官、生物体或其组合的作用；(b)加巴喷丁的作用机制，(c)加巴喷丁、含加巴喷丁的溶液或其组合的性质，以及(d)等。也可使用含加巴喷丁的注射用组合物作为治疗响应加巴喷丁的疾病或病症如癫痫、疼痛、耳鸣、药物成瘾、双相型障碍、骨关节炎、偏头痛及包括社交恐怖症的焦虑症的疗法。

注射用组合物

本发明的一个实施方式提供含加巴喷丁的注射用组合物。如本文所用，加巴喷丁指1-(氨基甲基)环己烷乙酸及其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物和其多晶型物。1-(氨基甲基)环己烷乙酸是具有分子式C₉H₁₇NO₂、分子量171.24的γ-氨基丁酸(GABA)类似物。1-(氨基甲基)环己烷乙酸易溶于水及碱性和酸性水溶液。1-(氨基甲基)环己烷乙酸具有以下结构：

可从多种商业来源获得加巴喷丁，例如Shanghai Zhongxi InternationalTrading Co.，Shanghai，China；Hikal Limited，Bangalore，Karnaraka，India；Erregiene S.p.A.，San Paolo d’Argon(BG)，Italy；MediChem，SA，Sant Joan Despi(Barcelona)，Spain；Ranbaxy Laboratories，New Delhi，India；Procos S.p.A.，Cameri，Italy；Zambon Group，Milan，Italy；Hangzhuo Chiral Medicine Chemicals Co.，Hangzhuo，China；InterChemCorporation USA，Paramus，NJ；SST Corporation，Clifton，NJ；TevaPharmaceuticals USA，North Whales，PA；Plantex USA，Hakensack，NJ；和Sigma-Aldrich，St.Louis，MO，或合适的分销商。或者，可根据本领域已知方法合成和/或制备加巴喷丁。

注射用组合物包括溶液、混悬液、分散体等。可根据本领域公知技术，使用合适的分散剂、润湿剂和助悬剂，例如无菌油，包括合成的甘油单酯或甘油二酯、脂肪酸和油酸，配制注射用溶液、混悬液或分散体(例如，参见《雷明登药物科学》(Remington’s Pharmaceutical Sciences)，第43章，第14版，Mack Publishing Co.，Easton，Pa.)，。

含加巴喷丁的注射用组合物可制备在水、盐水、等张盐水、磷酸缓冲盐水、柠檬酸缓冲盐水等中，并任选地与无毒表面活性剂混合。分散体也可制备在甘油、液体聚乙烯、乙二醇、DNA、植物油、三醋汀等及其混合物中。在普通储存和使用条件下，这些制剂可含有防腐剂以防止微生物的生长。适合注射或输注的药物剂型包括含活性成分的无菌水溶液、混悬液或分散体、或无菌粉末，该无菌粉末适用于无菌注射用或输注用溶液或分散体的即时制剂。优选地，最终剂型是无菌液体，并在生产和储存条件下稳定。溶液、混悬液或分散体的液体载体或运载体可以是稀释剂或溶剂或液体分散体介质，例如水、乙醇、多元醇如甘油、丙二醇、或液体聚乙二醇等、植物油、无毒甘油酯、以及它们合适的混合物。例如，通过形成脂质体、对于分散体则通过维持所需粒径、或通过使用无毒表面活性剂，可维持溶液、混悬液或分散体的适当流动性。通过各种抗细菌和抗真菌剂如对羟基苯甲酸酯类、三氯叔丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞等来预防微生物的作用。在许多情况下，需要包含等张试剂如糖、缓冲剂或氯化钠。通过在组合物中掺入延迟吸收的试剂如单硬脂酸铝水凝胶和明胶，促使注射用组合物的延迟吸收。可加入增加溶解度的辅料如环糊精。

在一个实施方式中，含加巴喷丁的注射用组合物是一种包含水性溶剂的注射用组合物。溶剂可以是水或盐水。盐水可以是例如0.9％(w/v)的氯化钠或是加入刚好足以使最终注射用组合物等张的氯化钠的溶液。盐水可以是无菌盐水。

根据本发明多种实施方式，注射用组合物中可存在加巴喷丁的任何浓度。例如，溶液、混悬液或分散体中可存在的加巴喷丁的浓度约为0.1-100mg/mL。在一个实施方式中，溶液、混悬液或分散体中存在的加巴喷丁的浓度约为10-90mg/mL。在一个实施方式中，溶液、混悬液或分散体中存在的加巴喷丁的浓度约为20-80mg/mL。在一个实施方式中，溶液、混悬液或分散体中存在的加巴喷丁的浓度约为30-100mg/mL。在一个实施方式中，溶液、混悬液或分散体中存在的加巴喷丁的浓度约为80mg/mL。在一个实施方式中，注射用组合物包含约10-50mg/ml的加巴喷丁。例如，该组合物可包含约20-40mg/ml，或约30mg/ml的加巴喷丁。根据本发明的实施方式，含加巴喷丁的注射用组合物包含的加巴喷丁的量可有效治疗响应加巴喷丁的疾病。在一个实施方式中，鞘内给予时，加巴喷丁的量可有效治疗响应加巴喷丁的疾病。

在本发明的一个实施方式中，含加巴喷丁的注射用组合物的pH约为4-9，约为5-7，约为5.5-6.5，或约为6。用药学上可接受的酸、碱、缓冲剂或其组合可调节注射用加巴喷丁组合物的pH。在一个实施方式中，用盐酸或氢氧化钠调节pH。盐酸或氢氧化钠可以是任何合适的形式，例如1N溶液。

在一个实施方式中，本发明提供含加巴喷丁的注射用组合物，该组合物与对象的生理溶液基本等张。例如，注射用溶液可与对象的血液或脑脊液等张。脑脊液的渗透性通常约为305mOsm。因此，本发明实施方式提供渗透性约为290-320mOsm的注射用加巴喷丁组合物。当含加巴喷丁的注射用组合物的渗透性低于约290-320mOsm时，可通过加入渗透性增强剂如氯化钠提高渗透性。如本文所用，“渗透性增强剂”指增加组合物渗透性的化合物或组合物。然而，加巴喷丁组合物常常不能达到该约290-320mOsm的渗透性。例如，溶解在水中浓度80mg/ml的加巴喷丁，渗透性约为500mOsm。当注射用组合物中加巴喷丁的浓度使组合物相对于对象的生理溶液高渗时，优选组合物中加入极少或不加入渗透性增强剂。然而，应理解组合物中需加入一种或多种添加的化合物，即使该添加的化合物的加入将进一步增加注射用加巴喷丁溶液的渗透性。例如，组合物中需加入附加的治疗剂、稳定剂、防腐剂、增溶剂、缓冲剂等，即使将增加渗透性。

在本发明的一个实施方式中，注射用加巴喷丁组合物基本上不含防腐剂，基本上不含缓冲剂，或基本上不含防腐剂和缓冲剂。

通过将在合适的稀释剂或溶剂中的所需量的加巴喷丁与上文列出的各种其它成分按需混合，然后灭菌，来制备含加巴喷丁的无菌注射用组合物。可使用任何灭菌方法。例如，可通过加热、过滤、无菌技术等或其组合完成灭菌过程。用于灭菌的加热可以是用于最终灭菌的加热，或者可以是与过滤和/或无菌技术有关的热处理，以达到所需的灭菌水平。在一个实施方式中，可通过高压灭菌达到加热。如本文所用“高压灭菌”及其类似形式指一种类型的加热。通常在121.1℃、15psig下进行高压灭菌。在一些情况下，需要获得用于制备无菌注射用溶液的无菌粉末。可通过真空干燥和冷冻干燥技术制备这种无菌粉末，得到预先无菌过滤溶液中存在的活性成分和任何其它所需成分的粉末。

加热作为灭菌一部分或完成灭菌

在本发明的一个实施方式中，加热含加巴喷丁的注射用组合物。加热可用于灭菌注射用组合物或可用于确保无菌制备的注射用组合物的无菌度。因为温度升高可导致加巴喷丁转化为其相应内酰胺的增加(通常认为内酰胺的毒性大于加巴喷丁)，所以期望制备含加巴喷丁的组合物时应避免高温。意外地，可热处理或高压灭菌含加巴喷丁的组合物，提供合适的无菌注射用加巴喷丁组合物。可在任何温度和时间的组合下进行加热，无论是否通过高压灭菌，灭菌含加巴喷丁的组合物或确保无菌制备组合物的无菌度。仅仅加热就足以灭菌注射用组合物。或者，热处理可与另一形式的灭菌和/或无菌技术联合进行。例如，热处理可在过滤之后。可将注射用加巴喷丁组合物过滤通过能够提高组合物无菌度的滤器。例如，可将含加巴喷丁的注射用组合物过滤通过孔径约0.2μm或约0.22μm的滤器。以非限制性例子的方式，组合物可经受大于或等于约105℃的热。在另一个实施例中，组合物可经受温度大于或等于约105℃下、大于或等于约2分钟的热。在另一个实施例中，含加巴喷丁的注射用组合物可经受温度大于或等于约105-140℃下、大于或等于约2-60分钟的热，约121℃下约24分钟，约130℃下约4分钟，约121℃下约6-8分钟。在一个实施方式中，在温度约121℃下进行加热。应理解温度越高，热应用的持续时间越长，形成加巴喷丁内酰胺的可能性将增加。为防止过度形成内酰胺，可将热应用的时间和温度调节至减少内酰胺形成的组合，仍继续提供含加巴喷丁的无菌注射用组合物。为达到合适的灭菌水平，除过滤和/或无菌技术外还可施加热。

在本发明的各种实施方式中，加热的含加巴喷丁的注射用组合物还包含小于或等于约10％的加巴喷丁内酰胺(通式I)，小于或等于约5％的加巴喷丁内酰胺，小于或等于约3％的加巴喷丁内酰胺，小于或等于约2％的加巴喷丁内酰胺，或小于或等于约1％的加巴喷丁内酰胺。加热的含加巴喷丁的注射用组合物可还包含约0.5％-10％的加巴喷丁内酰胺，约0.5％-5％的加巴喷丁内酰胺，约0.5％-3％的加巴喷丁内酰胺，约0.5％-2％的加巴喷丁内酰胺，或约0.5％-1％的加巴喷丁内酰胺。上述内酰胺水平适合注射入对象的CNS，因而适用于药物组合物。应理解，加热期间可形成加巴喷丁内酰胺和其它降解产物。在加热组合物之前可加入附加的加巴喷丁以补偿降解。例如，如果需要含80mg/ml加巴喷丁的注射用组合物，并且如果已知加热期间约3％的加巴喷丁降解，那么加热之前注射用组合物中可存在80mg/ml加上附加的3％加巴喷丁。

在本发明各种实施方式中，在约1或更大，约2或更大，约3或更大，约4或更大，约5或更大，约6或更大，约7或更大，约8或更大，约9或更大，约10或更大，约12或更大，约18或更大，约24或更大的F₀下，加热含加巴喷丁的注射用组合物。F₀是特定加热灭菌过程效率的量度，采用121℃时的分钟时间作为参照。例如，在121℃、8分钟时将生物体破坏至相同程度的加热灭菌过程具有F₀为8。换句话说，F₀是121℃下为灭菌目的而传递至容器的等价时间。F₀的转换在本领域技术人员的能力范围内，可根据《灭菌过程的微生物学和工程学》(Microbiology and Engineering of SterilizationProcesses)，第7版1990，Irving J.Pflug，Parenteral Drug Association，Inc Technical Monograph 1《灭菌过程的微生物学和工程学》(“Microbiologyand Engineering of Sterilization Processes”)2000再版所述进行，其内容被纳入本文作为参考。

在一个实施方式中，本发明提供制备含加巴喷丁的注射用组合物的方法。该组合物可以是适合药用的组合物。该方法包括制备含加巴喷丁的注射用组合物，及加热该组合物以灭菌该组合物或确保该组合物的无菌度。可制备具有上述性质的注射用组合物。在一个实施方式中，将固体形式的加巴喷丁如干粉加入到稀释剂或溶剂中，以形成注射用组合物。可加入其它辅料。可通过例如加热、无菌过滤等或其组合将注射用组合物灭菌。可将灭菌的组合物置于容器中。在本发明的一个实施方式中，以无菌的方式将灭菌的组合物置于容器中。容器可以是任何能够容纳注射用组合物的容器。优选容器与注射用组合物相容。在一个实施方式中，容器是小瓶、安瓿等。可用翻转的密封将小瓶、安瓿等膈膜致动和加盖。通过加热容纳组合物的容器，最终加热灭菌组合物。

给药

将本发明已经受加热的注射用组合物通过任何药理学上可接受的途径给予对象。例如，例如通过输注或注射，静脉内、皮下、肌内、动脉内、关节内、鞘内、硬膜外、实质内、腹膜内、脑室内等给予组合物。

在本发明的一个实施方式中，含加巴喷丁的注射用组合物适用于鞘内给予。鞘内给予加巴喷丁可绕过可饱和的L-氨基酸主动转运系统和血-脑屏障，同时降低伴随的全身性或棘上药物水平，提供达到加巴喷丁的有效脊柱浓度的方法，可鞘内给予任何有效量的加巴喷丁。例如，可以日剂量约0.1-200mg鞘内给予加巴喷丁。应理解可调节日剂量需要以适应CSF容积、CSF生产率和加巴喷丁从CSF的清除率的易变性。本领域技术人员将理解这种易变性部分由于例如性别和/或年龄。

以下专利申请通常与注射用加巴喷丁及其用途相关：

2004年3月24日提交的题为“鞘内给予加巴喷丁治疗疼痛”(INTRATHECALGABAPENTIN FOR TREATMENT OF PAIN)的美国专利申请序列号10/807,828；

2004年3月24日提交的题为“注射用加巴喷丁组合物”(GABAPENTINCOMPOSITIONS)的美国专利申请序列号10/808,129；

2004年3月24日提交的题为“鞘内给予加巴喷丁治疗癫痫”(INTRATHECALGABAPENTIN FOR TREATMENT OF EPILEPSY)的美国专利申请序列号10/807,827；以及

2004年3月24日提交的题为“含注射用加巴喷丁组合物的泵系统”(PUMPSYSTEMS INCLUDING IINJECTABLE GABAPENTIN COMPOSITIONS)的美国专利申请序列号10/808,054。

本文引用的所有专利、专利申请、技术文献或其它出版物各自分别被纳入本文作为参考。如本领域普通技术人员通过阅读本说明书容易理解的那样，根据本发明公开可进一步改进本文引用的专利和出版物中叙述的至少一些组合物、装置和方法。

实施例

提供以下实施例以阐明本发明的具体实施方式，不应解释为限制本发明的范围。

实施例1：经加热注射用加巴喷丁组合物的稳定性

将浓度80mg/ml的加巴喷丁溶解在注射用无菌水USP(批号1)、50mM磷酸钠(批号2)或50mM柠檬酸钠(批号3)中。用1N NaOH和/或1N HCl将所得溶液的pH调节至6.0±0.2。将4.5ml所得pH调节的溶液置于3.5ml小瓶中，高压灭菌。121℃、15psig高压灭菌12分钟(F₀＝12)，18分钟(F₀＝18)，和24分钟(F₀＝24)。HPLC测定高压灭菌溶液的加巴喷丁和加巴喷丁内酰胺浓度。结果如表1所示。

表1：加热注射用加巴喷丁组合物的降解

批号	F<sub>0</sub>	加巴喷丁(％靶水平)*	％加巴喷丁内酰胺(w/v)
				1	12	98.2	1.54

批号	F<sub>0</sub>	加巴喷丁(％靶水平)*	％加巴喷丁内酰胺(w/v)
				1	18	97.6	2.12
1	24	97.0	2.81
				2	12	97.4	2.80
2	18	96.8	3.84
				2	24	96.0	4.93
3	12	99.1	2.87
				3	18	97.2	3.84
3	24	95.8	5.06

*％靶水平＝[加巴喷丁浓度/(80mg/ml)]x100

实施例2：加热的注射用加巴喷丁组合物是无毒的

大鼠用含有各种浓度加巴喷丁的溶液鞘内输注。给予前加热溶液，观察到输注的溶液无毒性作用。

材料与方法

制备含80mg/ml加巴喷丁的注射用溶液并加热至F₀＝24灭菌，如实施例所述。将加热灭菌的80mg/ml加巴喷丁溶液稀释在无菌注射用水，USP(AbbottLaboratories；North Chicago，Illinois)中，制备加巴喷丁浓度为1.67、4.17和37.5mg/ml的溶液，如表2所示。

表2：加巴喷丁溶液的稀释

组	所需浓度(mg/ml)	加巴喷丁的体积(ml)*	运载体的体积(ml)*
				1(对照)	0	0	40.0
2(低)	1.67	0.84	39.16
				3(中)	4.17	2.09	37.91
4(高)	80.0	40.0	0
				5(中-高)	37.5	18.75	21.25

组	所需浓度(mg/ml)	加巴喷丁的体积(ml)*	运载体的体积(ml)*
				6(对照)	0	0	40.0

*形成40ml所需的加巴喷丁(80mg/ml)和运载体(无菌注射用水，USP)的体积。

对于组1和6，渗透微泵(

型2ML4)填充有约2ml的无菌水，对于组2-5则填充有约2ml的适当试验制剂。注入渗透微泵之前，用0.22μm滤器过滤所有制剂。

根据表3所示研究试验设计将雄性和雌性Crl：

(SD)IGS BR大鼠分组。动物得自Charles River Laboratories；Raleigh，North Carolina。供应商在腰椎下方的鞘内空腔中对动物进行插管。插管由连接于7cm聚氨酯管(0.025ID×0.040OD)片的1.3cm PE-10管构成，总的死体积约为23.5□l。第1天(基于性别交错)，麻醉动物并将预充满的渗透泵/动物无菌皮下插入动物背部。插管填充有无菌水或适当的试验制剂，泵连接于鞘内导管。在第1天开始，使用渗透微泵，通过鞘内输注，以剂量体积约60.96□l/天、24小时/天对动物给药，直到在第29天尸体剖检。开始给药时，动物为8-9周龄，其体重为264-340g(雄性)和191-264g(雌性)。

表3：实验设计和动物分配

根据致死率、临床观察、眼科检查、体重、食物消耗、临床病理学和解剖病理学评价毒性。开始处理前和第4周期间进行眼科检查。进行间接检眼镜检查法，包括但不限于，眼球附属器和前结构(如角膜、前房、晶状体)的粗略检查和眼底详细检查。处理前、第1天、以后每周，测定体重。每周测定食物消耗。按计划处死，取样用于血液学、凝固作用和临床化学。可能的话，从非计划间隔处死的动物收集。从组1和4以及每只非计划间隔处死的动物取出组织。从组2、3和5每只动物收集脊髓。处理并用显微镜检查组织和脊髓。处理并用显微镜检查来自组2、3和5的动物肉眼可见的损伤。将来自组1和4每只动物的脊髓切片埋入石蜡中，切片，用卢克索固蓝染色，显微镜检查。将来自组1和4每只动物在石蜡中的脊髓免疫组织化学切片进行切片，用抗胶质酸性原纤维蛋白(Dako；Carpinteria，California)染色；来自Vector Laboratories；Burlingame，California的兔IgG用作阴性对照，并检查。

进行以下血液学试验：红细胞(红血球)计数、血红蛋白、血细胞比容、红细胞平均容量、平均红细胞血红蛋白浓度、血小板计数、白细胞(白血球)计数以及分化的血细胞计数。进行以下凝血试验：凝血酶原时间和活化的部分凝血激酶时间。获得以下方面的临床化学数据：葡萄糖、尿素氮、肌酸酐、总蛋白、白蛋白、球蛋白、白蛋白/球蛋白比率、胆固醇、甘油三酯、总胆红素、丙氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶、γ谷氨酰转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、钙、无机磷、钠、钾和氯。处死时收集以下组织并称重：肾上腺、脑、附睾、心、肾、肝、肺、卵巢、脑垂体、前列腺、唾腺(下颌骨的)、精囊、脾、睾丸、胸腺、带甲状旁腺的甲状腺和子宫。将受损器官如肾上腺、附睾、肾、卵巢等一起称重。计算器官-体重百分比和器官-脑百分比。将以下组织储存在10％中性缓冲福尔马林中：肾上腺、脑、盲肠、结肠、十二指肠、附睾、食管、眼、带骨髓的股骨(远端的关节面)、哈德腺、心、回肠、输注和插管部位及泵、空肠、肾、泪腺(眶外)、损伤、肝、带支气管主干的肺、淋巴结(肠系膜的)、乳腺(雌性)、视神经、卵巢、胰腺、垂体腺、前列腺、直肠、唾腺(下颌)、坐骨神经、精囊、骨骼肌、皮肤、脊髓(颈、胸和腰的)、脾、带骨髓的胸骨、胃、睾丸、胸腺、带甲状旁腺的甲状腺、舌、气管、膀胱、子宫和阴道。

进行统计学分析如下。进行Levene检验，测试方差齐性。当方差齐性为p≤0.05时，利用转换稳定方差。采用单向方差分析(ANOVA)，用于分析连续临床病理学值、器官重量数据、食物消耗和体重数据。如果存在显著性差异，则进行Dunnett t检验，配对比较处理组和对照组。如果ANOVA显示第1周时体重显著性，则采用单向共变量分析(ANCOVA)分析体重，以最初体重作为共变量。如果ANCOVA是显著性的，则采用校正的共变量平均值分析比较对照组和处理组。以5.0％双尾概率水平评价组比较(组2-5与组1)。只对第一天处理或第一天处理以后收集的数据进行统计学分析。组6数据的评估仅限于计算平均值和标准偏差。

结果

观察到处理组(组2-5)和对照组1之间具有轻微或偶然的差异。

1.观察

在第11天，观察到一个给予4.8mg/天、限于后肢使用的雄性动物，暴露渗透泵，插管似乎未连接；濒死状态时处死该动物。在第17天，观察到一个给予2.25mg/天、限于后肢使用的雄性动物；濒死状态时处死该动物。在第20和21天，观察到一个给予无菌水(组6)、右腹面腹区上黑色皮肤且右侧腹区上疮/痂的雌性动物；在第21天处死该动物。所有这些非计划死亡归因于鞘内输注系统的继发并发症。所有存活的其它动物按计划处死。

存活到按计划处死的动物没有与试验品给药相关的明显观察结果。进行许多临床观察，但这些观察不显示任何剂量关系而认为是偶然的。

观察到一个给予0.1mg/天(组2)和雌性动物和一个给予4.8mg/天(组4，左眼)的雌性动物的不透光的眼。进一步检查时，证实这两只动物的眼睛患有角膜炎。诊断一个给予4.8mg/天(组4，左眼)的雄性动物患有角膜炎，一个给予2.25mg/天(组5，左眼)的雄性雌性动物患有角膜溃疡。认为几个角膜炎的发生和一个角膜溃疡的发生是手术操作的结果，与试验品给药无关。

与组1对照组相比，给予2.25mg/天(组5)的雌性动物第1-3周的体重显著性降低，但该降低的平均体重与并行对照(组6)似乎无差别且认为是偶然的，由于组5动物的体重在开始时就比组1动物的体重低。平均体重、体重变化或食物消耗方面不存在明显的试验品相关作用。

2.临床和解剖病理学

鞘内给予最终加热灭菌的加巴喷丁对临床病理学试验结果没有明显作用或副作用。对照和处理动物的临床病理学试验结果(即给予2.25mg/天的雄性和雌性动物的γ谷氨酰转移酶较低)之间仅有的统计学差异认为是偶然的，因为给予4.8mg/天的动物没有类似的影响。对于3个由于健康差而在非计划间隔时处死的动物，包括组6的对照雌性动物，最突出的发现是绝对嗜中性粒细胞计数和球蛋白浓度升高，及白蛋白浓度降低。这些发现与炎性反应一致并认为是偶然的，因为与剂量无关且存活至按计划处死的动物不显示相似的发现。

48个动物中，插管端位于蛛网膜下隙的L3和L6之间；3个动物中，插管位于硬膜外。肉眼观察或显微镜观察，不存在试验品相关器官重量差异。一些观察结果与输注仪器和插管有关。在一些动物中，插管放置区域中存在神经根的神经变性。变性常常伴随胶质增生。在没能存活至按计划处死的动物中，输注或插管部位或输注泵周围存在炎性过程，包括脓肿和脓肉芽肿。

对照组和高剂量组动物之间脊髓切片的胶质细胞原纤维酸性蛋白免疫染色中无显著性差异。

讨论

虽然由于加热加巴喷丁组合物而使加巴喷丁内酰胺浓度升高，但以剂量水平0、0.10、0.25、2.25和4.8mg/天传递加巴喷丁能很好耐受且鞘内给予时无毒性。临床观察、体重、体重变化、食物消耗、眼科检查或临床或解剖病理学观察无明显作用。

Claims (34)

1.一种制备含加巴喷丁的引入CNS的注射用药物组合物的方法，所述方法包括：

制备含加巴喷丁和药学上可接受的运载体的注射用组合物；和

加热所述注射用组合物以产生注射用药物组合物，所述加热包括在105-140℃下将所述注射用组合物加热2-60分钟。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述加热使组合物灭菌。

3.如权利要求1所述的方法，还包括过滤所述注射用组合物。

4.如权利要求3所述的方法，还包括将经过滤的组合物无菌放置于容器中以产生装有经过滤的组合物的容器。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述加热包括加热所述装有组合物的容器。

6.如权利要求1所述的方法，还包括调节所述注射用组合物的pH。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述加热包括高压灭菌。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述加热包括在大于或等于121℃，到140℃下将所述注射用组合物加热24分钟。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述加热包括在大于或等于130℃，到140℃下将所述注射用组合物加热4分钟。

10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述加热包括在大于或等于118℃，到140℃下将所述注射用组合物加热6-8分钟。

11.如权利要求1所述的方法，其特征在于，将所述注射用组合物加热至F₀为1或更大。

12.如权利要求11所述的方法，其特征在于，将所述注射用组合物加热至F₀为2或更大。

13.如权利要求12所述的方法，其特征在于，将所述注射用组合物加热至F₀为3或更大。

14.如权利要求13所述的方法，其特征在于，将所述注射用组合物加热至F₀为4或更大。

15.如权利要求14所述的方法，其特征在于，将所述注射用组合物加热至F₀为8或更大。

16.如权利要求15所述的方法，其特征在于，将所述注射用组合物加热至F₀为12或更大。

17.如权利要求16所述的方法，其特征在于，将所述注射用组合物加热至F₀为18或更大。

18.如权利要求17所述的方法，其特征在于，将所述注射用组合物加热至F₀为24或更大。

19.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述注射用药物组合物包含小于或等于10％(w/v)的加巴喷丁内酰胺。

20.如权利要求19所述的方法，其特征在于，所述注射用药物组合物包含小于或等于5％(w/v)的加巴喷丁内酰胺。

21.如权利要求20所述的方法，其特征在于，所述注射用药物组合物包含小于或等于2％(w/v)的加巴喷丁内酰胺。

22.如权利要求21所述的方法，其特征在于，所述注射用药物组合物包含小于或等于1％(w/v)的加巴喷丁内酰胺。

23.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述注射用药物组合物包含0.5-10％(w/v)的加巴喷丁内酰胺。

24.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述注射用药物组合物包含0.1-100mg/ml的加巴喷丁。

25.如权利要求24所述的方法，其特征在于，所述注射用药物组合物包含30-100mg/ml的加巴喷丁。

26.如权利要求25所述的方法，其特征在于，所述注射用药物组合物包含80mg/ml的加巴喷丁。

27.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述注射用药物组合物包含10-50mg/ml的加巴喷丁。

28.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述注射用药物组合物包含20-40mg/ml的加巴喷丁。

29.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述注射用药物组合物包含30mg/ml的加巴喷丁。

30.如权利要求6所述的方法，其特征在于，通过将氢氧化钠、盐酸或两者都加入到所述注射用组合物中来调节pH。

31.一种制备含加巴喷丁的引入CNS的注射用药物组合物的方法，所述方法包括：

制备含加巴喷丁和药学上可接受的运载体的注射用组合物；

调节所述注射用组合物的pH；

过滤所述经pH调节的注射用组合物；

将所述过滤除菌的组合物无菌放置于容器中；以及

加热所述容纳组合物的容器，以产生所述注射用药物组合物，所述加热包括在105-140℃下将所述注射用组合物加热2-60分钟。

32.如权利要求31所述的方法，其特征在于，所述过滤包括将所述经pH调节的注射用组合物过滤通过孔径0.22μm的滤器。

33.如权利要求31所述的方法，其特征在于，通过所述方法产生的组合物的无菌度水平等于加热至F₀为8或更大的组合物。

34.如权利要求31所述的方法，其特征在于，通过所述方法产生的组合物的无菌度水平等于加热至F₀为24或更大的组合物。