CN1843418B - 治疗胃肠炎的中药提取物、其制备方法及含有该提取物的中药组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及从牛耳枫和辣蓼中提取的、对于急、慢性胃肠炎具有治疗活性的中药提取物及其制备方法,以及含有该活性提取物的中药组合物。该中药提取物以及含有该提取物的中药组合物具有解痉、镇痛、抗炎的功效,并且无毒副作用。本发明中药组合物可以被制备成任何一种适于治疗胃肠疾病的口服制剂。
Description
技术领域
本发明涉及一种对于急、慢性胃肠炎具有治疗活性的中药提取物及其制备方法,以及含有该活性提取物的中药组合物,属于中药领域。
背景技术
牛耳枫为交让木科交让木属植物牛耳枫(Daphniphyllumcalycinum Benth.),以牛耳枫子、牛耳枫根、牛耳枫枝叶入药。性味辛、苦、凉,具清热解毒、活血舒筋的功效。
辣蓼为蓼科蓼属植物水蓼(Polygonum hydropiper L.),以全草入药。性味辛、温,具祛风利湿,散瘀止痛,解毒消肿,杀虫止痒的功效。用于治疗痢疾、胃肠炎、腹泻、风湿关节痛、跌打肿痛等。
临床上用牛耳枫的枝叶、辣蓼全草组方,采用水煎煮提取的方法得到清膏后加入辅料制成颗粒剂、片剂、硬胶囊剂等,用于治疗急、慢性胃肠炎,疗效确切。但该类产品均存在药效物质不明确,质量标准可控性差的缺点,难于满足中药“安全、有效、可控、稳定”的要求。目前,尽管有多种剂型方便了患者的使用,但该类制剂仅是简单的剂型转换,在技术上未有创新之处,尚不能用科学的方法揭示其作用机理,难于被国际市场所接受。
发明内容
为解决该类中成药存在的上述缺陷,本发明人对牛耳枫和辣蓼成方中的有效部位进行了提取。实验表明,使用本发明方法所提取的牛耳枫和辣蓼活性提取物,具有解痉、镇痛、抗炎的功效,且无毒副作用,对急、慢性胃肠炎具有确切的疗效。
因此,本发明的目的之一在于,提供一种牛耳枫和辣蓼的中药提取物,以及该中药提取物的制备方法。该中药提取物对急、慢性胃肠炎具有治疗作用。
本发明中所述的牛耳枫是交让木科交让木属植物牛耳枫(Daphniphyllum calycinum Benth.)的枝叶。
本发明中所述的辣蓼是蓼科蓼属植物水蓼(Polygonumhydropiper L.)的全草。
本发明的中药提取物的制备方法包括以下步骤:
a.使用可药用溶剂对牛耳枫与辣蓼进行提取,得粗提物;
b.提纯该粗提物,制得所述中药提取物。
优选通过以下步骤制得本发明中药提取物:
a.将牛耳枫与辣蓼合并、加水煎煮提取,得粗提物;
b.使用吸附树脂对所述粗提物进行柱层析,制得所述中药提取物。
所述步骤a中牛耳枫与辣蓼用量比为5~1∶1,优选3~1.5∶1,最为优选2∶1。
更为优选地,通过以下步骤制得本发明中药提取物:
将牛耳枫和辣蓼合并加水煎煮提取,提取液合并滤过后浓缩,静置、冷却后离心,取上清液减压浓缩,得粗提物(A)。使用吸附树脂层析该粗提物(A)。首先以水为洗脱剂进行洗脱,浓缩、干燥,得水洗脱部分(AA),然后以醇,优选乙醇为洗脱剂进行洗脱,对所得醇洗脱液减压、浓缩、干燥,得醇洗脱部分(AB),即为本发明中药提取物。
优选地,牛耳枫和辣蓼合并煎煮提取的次数为3次。每次合并煎煮的提取时间为0.5-3小时。优选的水洗脱剂的用量为药材量的10-20倍,优选醇洗脱剂的用量为药材量的10-30倍。
更为优选地,本发明所述中药提取物的制备方法包括以下步骤:
将牛耳枫2份、辣蓼1份(该比例与用于治疗急、慢性肠胃炎的市售的中成药-枫蓼肠胃康制剂处方中牛耳枫与辣蓼的比例相同)合并煎煮提取3次,每次加入水的用量为药材量的8-12倍,提取时间分别是2小时、1.5小时、1.0小时。提取液合并滤过,滤液减压浓缩,静置冷却6小时后,离心(3000r/h),取上清液再减压浓缩,得到粗提物(A);将该粗提物(A)进行大孔吸附树脂,优选AB-8大孔吸附树脂层析,先以10-20倍量的水为洗脱剂进行洗脱得水洗脱部分(AA);之后再以10-30倍量的60%-95%的乙醇为洗脱剂进行洗脱,收集该洗脱液,减压浓缩、干燥即得本发明中药提取物(AB)。
本发明中药提取物对于急、慢性胃肠炎的治疗活性通过下述动物药效学试验得到证明。
1.通过对兔肠平滑肌自主活动的抑制作用,以及对乙酰胆碱兴奋兔肠肌的拮抗作用对上述两种洗脱物治疗急、慢性胃肠炎的活性进行评价
1.1试验材料:
选本发明所述粗提物(A)(阳性对照药物,每克相当于生药材5.45g);水洗脱部分(AA)(每克相当于生药材10.31g);醇洗脱部分(AB)(每克相当于生药材29.41g);以上药物均配制成每1ml水溶液相当于1g生药材。乙酰胆碱溶液:0.0550mol/L。台氏液,充氧(含5%CO2)30分钟备用。
1.2试验仪器:BL-410生物机能实验系统
1.3试验方法:
标本的制作:取纯种家兔1只,体重2Kg左右,用木槌击打头部处死,立即剖开腹部,剪取回肠一段,立即放入冷台氏液中,分离肠系膜,以台氏液将回肠内容物冲洗干净后,剪成2-2.5cm长的小段,置冷台氏液中置冰箱中保存。实验时,取1小段回肠,于冷台氏液中,用缝线两端对称结扎好,固定在装有台氏液的恒温杯中,使肠肌张力约1g左右。
试验条件:
循环水温保持36.5±5℃,恒温杯中通O2量为2-3个气泡/min。
试验操作:
空白对照曲线的描绘:取1小段回肠,给药前先描绘一段平稳规则的曲线为空白对照曲线。
药物对肠平滑肌自主活动的抑制作用曲线的描绘:取1小段回肠,给药前先描绘一段正常曲线,然后给予治疗药物,描绘该药物的作用曲线,治疗药物作用时间约为4min。按以上操作方法分别描绘各治疗药物剂量分别为1ml、2ml时对肠平滑肌自主活动的抑制作用曲线。每次更换药物时,用台氏液将肠管冲洗3次,待收缩曲线恢复正常后再加第二种药物。
药物对乙酰胆碱兴奋肠肌的拮抗作用曲线的描绘:(1)取1小段回肠,描绘一段正常曲线后,给予20μl乙酰胆碱溶液,描绘一段乙酰胆碱的作用曲线作为对照曲线,作用时间约4min;(2)取1小段回肠,描绘一段正常曲线后,给予20μl乙酰胆碱溶液,乙酰胆碱作用后约30s给予治疗药物,描绘该药物的作用曲线,治疗药物作用时间约为3min。按以上操作方法分别描绘各治疗药物各剂量分别为1ml、2ml、3ml时对抗乙酰胆碱的作用曲线。每次更换药物时,用台氏液将肠管冲洗3次,待收缩曲线恢复正常后再加第二个药物。
应用BL-410生物机能实验系统软件对所取得的实验信号进行数据转换处理,并统计分析,结果见表1、表2。
1.4试验结果:
结果表明:粗提物(A)在给药量为2g生药材时对肠平滑肌自主活动有非常显著的抑制作用,且对乙酰胆碱兴奋肠肌也有非常显著的拮抗作用;醇洗脱部分(AB)在给药量为1g和2g生药材时对肠平滑肌自主活动均有非常显著的抑制作用,但对乙酰胆碱兴奋肠肌的拮抗作用只有当给药量为3g生药材时才有显著性意义;水洗脱部分(AA)在实验剂量下对肠平滑肌自主活动的抑制作用和对乙酰胆碱兴奋肠肌的拮抗作用均无显著性意义。
观察结果见表1和表2。
表1 药物对肠平滑肌自主活动的抑制作用(x±SD)
注:给药组与空白曲线比较,**P≤0.01。
n为试验所用回肠片断数。
表2 药物对乙酰胆碱兴奋肠肌的拮抗作用(x±SD)
注:给药组与乙酰胆碱比较,**P≤0.01,*P≤0.0 5;乙酰胆碱与正常曲线比较,△△P≤0.01。
n为试验所用回肠片断数。
2.通过对二甲苯致鼠耳肿胀的抑制作用,对于上述两种洗脱物治疗急、慢性胃肠炎的活性进行评价
2.1试验材料:
选本发明所述粗提物(A)(阳性对照药物,每克相当于生药材5.45g);水洗脱部分(AA)(每克相当于生药材10.31g);醇洗脱部分(AB)(每克相当于生药材29.41g);以上各药物以0.5%CMC-Na溶液分别配制成每1ml含药量相当于2g生药材。二甲苯:分析纯,由汕头市光华化学厂提供。
2.2试验仪器:电子天平(北京瑞利,精度0.1mg);φ9mm打孔器;微量进样器(20μl);
2.3试验方法:
取昆明种小白鼠,体重20~22g,雌雄各半,随机分组,每组10只。给药组按0.5ml/只灌胃给药,空白对照组给同体积的0.5%CMC-Na溶液,1h后于小鼠右耳两面各浸润给致炎剂二甲苯0.01ml,左耳不涂为正常耳。2h后脱颈处死小鼠,用直径为9mm的打孔器在相同部位打下左耳和右耳的圆耳片,用电子天平称重,计算耳肿胀度及肿胀抑制率:
耳肿胀度(mg)=右耳重量-左耳重量
肿胀度抑制率(%)=(对照组肿胀度-给药组肿胀度)÷对照组肿胀度×100%
2.4试验结果:
结果表明:粗提物(A)、水洗脱部分(AA)及醇洗脱部分(AB)对二甲苯致小鼠耳肿胀均有非常显著的抑制作用,且醇洗脱部分(AB)对二甲苯致小鼠耳肿胀度的抑制率高于其它给药组。结果见表3。
表3 药物对二甲苯致小鼠耳肿胀的抑制作用
序值法检验:各给药组与对照组比较,**P≤0.01。
n为试验所用小鼠数目。
3.药物一次口服最大耐受量试验
3.1试验材料:
选本发明粗提物(A)(阳性对照药物,每克相当于生药材5.45g);水洗脱部份(AA)(每克相当于生药材10.31g);醇洗脱部分(AB)(每克相当于生药材29.41g);以上各药物以0.5%CMC-Na溶液分别配制成每1ml含药量相当于6.25g生药材。
3.2试验仪器:电子天平(北京瑞利,精度0.1mg);
3.3试验方法:取昆明种小白鼠,体重20~22g,随机分组,每组20只,雌雄各半,分笼饲养。给药前禁食14h,自由摄水,用电子天平称重后,给药组按0.8ml/只灌胃给药,空白对照组给同体积的0.5%CMC-Na溶液,并立即观察小鼠中毒情况。4h后给予饲料正常喂养,每隔4h观察一次,观察7d。主要观察指标有小鼠的体征、行为活动及粪便情况;对中途死亡及试验结束处死的小鼠立即剖检,主要观察其内脏(心、肺、肝、胰、肾、胃、肠等)有无异常,主要观察内容包括脏器的大小、颜色、硬度、表面光滑程度及胸腹腔有无积液等。并每天记录一次体重,观察小鼠体重变化情况。
3.4实验结果:
一般症状及死亡情况:给药当天,除空白对照组小鼠活动正常外,其它各给药组小鼠均表现为活动减少、竖毛、多尿、粪便不成形且颜色变深棕色、有粘肛现象,个别小鼠俯卧、腹部膻动。水洗脱部份(AA)给药组给药后30min时,即有小鼠惊阙死亡,给药后60min时,雌雄各组各死亡9只;粗提物(A)给药组给药60min后,雌性小鼠死亡1只;醇洗脱部分(AB)给药组试验过程无死亡小鼠。给药第一天,各给药组小鼠活动正常,粪便恢复成形,但颜色仍显深棕色,且多尿;第二天以后,各给药组小鼠的活动症状与对照组比较无差异。
各药物对小鼠体重的影响,结果见表4。
结果表明,粗提物(A)及醇洗脱部分(AB)给药组小鼠的体重变化与空白对照组比较无显著差异。
剖检:对给药当天死亡的小鼠进行剖检,见胃胀大,内有气泡;肠管舒张;其它内脏未见异常。实验结束,对处死的小鼠立即剖检,肉眼观察主要脏器(心、肺、肝、胰、肾、胃、肠等)无异常。
小鼠最大耐受量倍数
市售的枫蓼肠胃康制剂成人日用量为15.53g生药材。各给药组耐受药量为5g/只(以生药材计),按下式计算小鼠最大耐受量倍数:
每只小鼠的耐受药量(g)/20g×50000g/15.53g=804(倍)
3.5结论:
实验结果表明:当给药量为5g/只(以生药材计)时,水洗脱部份(AA)的毒性最大,粗提物(A)次之,小鼠对粗提物(A)最大耐受量倍数小于804倍;而醇洗脱部分(AB)最为安全,小鼠对其最大耐受量倍数大于804倍。
上述药理实验结果表明:上述醇洗脱部分(AB)具有解痉、镇痛、抗炎的功能,且无毒副作用,故可以确定醇洗脱部分(AB)为用于治疗急、慢性胃肠炎的牛耳枫和辣蓼制剂的有效部位。
经提取分离和结构分析确认,本发明粗提物(A)、醇洗脱部分(AB)中均含有下述式I化合物芦丁(Rutin)、式II化合物槲皮素(Quercetin)、式III化合物3,5,7,4′-四羟基黄酮、式IV化合物5,7,4′-三羟基黄酮和式V化合物3,5,7,4′-四羟基黄酮醇-3-O-葡萄糖-鼠李糖苷:
本发明的另一个目的在于提供一种治疗急、慢性胃肠炎的中药组合物,以及该中药组合物的制备方法。本发明的中药组合物含有本发明所述的中药提取物,以及可药用载体。
本发明中药组合物的制备方法包括,将本发明所述的中药提取物与可药用载体混合。
本发明所述的中药组合物可以被制成各种剂型,例如散剂、片剂、丸剂、分散剂、胶囊剂。
根据本发明所公开的技术内容,本领域技术人员将很清楚本发明的其它实施方案,下述实施例仅作为示例。在不违反本发明主旨及范围的情况下,可对本发明进行各种改变和改进。这些改变和改进均应在本发明的保护范围之内。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的详细描述。
实施例1牛耳枫、辣蓼中药提取物的制备例
按2∶1的比例取牛耳枫及辣蓼共6800克,合并煎煮提取3次,每次加入水的用量为药材量的9.5倍,提取时间分别是2小时、1.5小时、1.0小时。提取液合并滤过,滤液减压浓缩,静置冷却6小时后,离心(3000r/h),取上清液再减压浓缩,得到粗取物(A)1072克;将该粗提物(A)进行AB-8型大孔吸附树脂层析,先以14倍量的水为洗脱剂进行洗脱,将水洗脱物浓缩、干燥,得680克水洗脱部分(AA);之后再以21倍量的60%-95%的醇为洗脱剂进行洗脱,收集该洗脱液,减压浓缩、回收醇、干燥即得醇洗脱部分(AB)256克,该醇洗脱部分(AB)即为牛耳枫、辣蓼的有效提取物。
实施例2本发明中药组合物散剂的制备
将实施例1所制得的中药提取物研成细粉、过筛,取已过筛的该中药提取物细粉1份,加入淀粉3.5份、乳糖粉6.5份按等量递加混合法混合均匀,按容量法分剂量制得散剂。
实施例3本发明中药组合物硬胶囊剂的制备
将实施例1所制得的中药提取物粉碎,过60-100目筛,取已过筛的该中药提取物细粉1份,加入干淀粉1.1份作为充填剂,加入1-3%滑石粉作助流剂,混合均匀后用空心胶囊充填,制得硬胶囊剂。
实施例4本发明中药组合物片剂的制备:
将实施例1所制得的中药提取物粉碎过60-100目筛,取已过筛的该中药提取物细粉1份,加入羟丙基纤维素1.1份作崩解剂,加入药用糊精0.4份作粘合剂,加入适量50-95%的乙醇作润湿剂,湿法制粒、干燥、整粒后加入1-3%的润滑剂混合均匀、压制成片剂。
实施例5本发明中药组合物分散片的制备:
将实施例1所制得的中药提取物1份和载体材料(PVP或甘露醇)4份共同溶于50-95%的乙醇中,用喷雾干燥法(或冷冻干燥法)干燥后,过筛,加入1.9份的微晶纤维素作崩解剂,加入适量微粉硅胶作助流剂,混合均匀后将粉末直接压制成片剂,即制得分散片。
Claims (11)
1.一种用于解痉、镇痛或抗炎的中药提取物,通过以下步骤制得:
a.将牛耳枫与辣蓼合并、加水煎煮提取,浓缩提取液并离心;取离心后上清液浓缩,得粗提物;
b.使用吸附树脂对所述粗提物进行柱层析,首先以水为洗脱剂进行洗脱,然后以醇进行洗脱,获得醇洗脱提取物。
2.根据权利要求1的中药提取物,其特征在于,通过以下步骤制得:
a.将牛耳枫与辣蓼合并、加水煎煮提取,浓缩提取液并离心;取离心后上清液浓缩,得粗提物;
b.使用吸附树脂将所述粗提物进行柱层析,首先以水为洗脱剂进行洗脱,然后以醇进行洗脱;并对所得醇洗脱液减压浓缩、干燥。
3.根据权利要求1或2的中药提取物,其特征在于,所述步骤a中牛耳枫与辣蓼用量比为5~1∶1。
4.根据权利要求3的中药提取物,其特征在于,所述步骤a中牛耳枫与辣蓼用量比为3~1.5∶1。
5.根据权利要求3的中药提取物,其特征在于,所述步骤a中牛耳枫与辣蓼用量比为2∶1。
6.根据权利要求1或2的中药提取物,其特征在于,所述步骤a中提取的次数为3次,每次提取时间为0.5-3小时。
8.一种中药提取物的制备方法,该方法包括以下步骤:
a.将牛耳枫与辣蓼合并、加水煎煮提取,浓缩提取液并离心;取离心后上清液再浓缩,得粗提物;
b.使用吸附树脂将所述粗提物进行柱层析,首先以水为洗脱剂进行洗脱,然后以醇进行洗脱;
c.对所得醇洗脱液减压、浓缩、干燥,制得所述中药提取物。
9.一种中药组合物,含有权利要求1-7中任一项所述的中药提取物,以及可药用载体。
10.根据权利要求9的组合物,其特征在于所述组合物制成片剂、胶囊剂或散剂。
11.根据权利要求10的组合物,其特征在于所述片剂为分散片。
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