CN1830998A - 一种甾体总皂苷提取物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

一种以穿山龙或盾叶薯蓣为原料制备的甾体总皂苷提取物，其特征在于它含有甾体总皂苷的重量百分数为 80％～98％。用它所制备的静脉注射液既能扩张冠脉血管、降低心肌耗氧量、溶解血栓、改善心肌缺血和微循环、改善血管内皮细胞功能、增加脑血流、对缺血性脑细胞损伤具有保护作用，还能降低血压、血脂、血糖；同时还具有抗炎、镇痛、镇咳、平喘、解除平滑肌痉挛、提高免疫力、抗变态反应等作用，从而达到治疗心脑血管疾病、风湿病、呼吸系统疾病的目的。本发明的药物中有效成分的剂量低，功效明显，起效快，生物利用度高，质量稳定可靠，具有很好的临床推广运用价值。

Description

一种甾体总皂苷提取物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及一种甾体总皂苷提取物及其制备方法和应用。

背景技术

中药穿山龙为薯蓣科植物穿龙薯蓣Dioscorea nipponica Makino的干燥根茎，别名为穿地龙、地龙骨、穿龙骨等。主产于东北、华北地区。中药盾叶薯蓣为薯蓣科植物盾叶薯蓣Dioscorea zingiberensis C.H.Wright的根茎，别名为黄姜、火藤根等。穿山龙和盾叶薯蓣均具有祛风湿、止痛、舒筋活血、止咳平喘祛痰之功效。临床用于治疗风湿性关节炎、腰腿疼痛、麻木、大骨节病、跌扑损伤、闪腰岔气、慢性支气管炎、咳嗽气喘等疾病。

化学药品地方标准上升国家标准第16册中薯蓣皂苷片(WS₁-XG-012-2000)为口服制剂，该方法制备的提取物不能直接作为静脉注射液的原料；部颁标准第17册中穿山龙注射液(WS₃-B-32)主要采用水煎煮提取、乙醇沉淀法制备，该方法得到的产品有效成分含量不高；名称为“一种穿山龙冻干粉针剂及其制备方法(申请号：200410086729.1)”的专利申请中采用超声水提取、乙醇沉淀、大孔树脂纯化的方法得到有效成份，加入药用辅料，制备成冻干粉针剂，该方法中采用超声提取大规模生产应用难度较大。目前，尚未查到关于以穿山龙或盾叶薯蓣为原料制备静脉注射用甾体总皂苷提取物的方法及应用的文献报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种甾体总皂苷提取物及其制备方法和在制备治疗心脑血管疾病、风湿病以及呼吸系统疾病的静脉注射剂中的应用，以弥补现有技术的上述不足。

一种甾体总皂苷提取物，其特征在于它含有甾体总皂苷的重量百分数为80％～98％。

上述甾体总皂苷提取物的制备方法，其特征在于将穿山龙或盾叶薯蓣或将二者混合，经水洗、切片后，在室温或加热条件下用水提取1～3小时，重复提取1～3次，过滤或离心分出药液，再通过大孔吸附树脂柱，先用0.05％～4％的碱溶液洗至流出液无色，再用水洗至流出液为中性，最后用乙醇或含水乙醇洗至流出液无色，收集洗脱液，回收洗脱液中的乙醇后浓缩至相对密度为1.15～1.20，加乙醇至含醇量达75％～90％，静置，过滤，回收乙醇，浓缩干燥，粉碎。

上述的甾体总皂苷提取物在制备治疗冠心病、心绞痛、心肌缺血、心衰、心律失常、脑梗塞、脑缺血、病毒性心肌炎或动脉血管粥样硬化疾病的静脉注射液中的应用。

上述的甾体总皂苷提取物在制备治疗哮喘、急慢性支气管炎或肺气肿疾病的静脉注射液中的应用。

上述的甾体总皂苷提取物在制备治疗风湿性关节炎、类风湿病、痛风、骨性关节炎、糖尿病关节炎或强直性脊柱炎疾病的静脉注射液中的应用。

本发明的甾体总皂苷提取物使用时作为有效成分的剂量低，通常按成人计算，其优选的临床用量为0.5mg～10mg/kg/日/人。用甾体总皂苷提取物所制备的注射液既能扩张冠脉血管、降低心肌耗氧量、溶解血栓、改善心肌缺血和微循环、改善血管内皮细胞功能、增加脑血流、对缺血性脑细胞损伤具有保护作用，还能降低血压、血脂、血糖；同时还具有抗炎、镇痛、镇咳、平喘、解除平滑肌痉挛、提高免疫力、抗变态反应等作用，从而能达到治疗心脑血管疾病、风湿病、呼吸系统疾病的目的。该静脉注射液的功效明显，起效快，生物利用度高，质量稳定可靠，具有很好的临床推广运用价值。

具体实施方式

实施例1：穿山龙甾体总皂苷提取物的制备

称取穿山龙10公斤，用水洗净、切片后加水120升，煎煮提取1.5小时，向滤渣加水80升，煎煮提取1小时，过滤。合并两次滤液，并使其通过HPD₁₀₀型大孔吸附树脂柱，先用2％(重量百分浓度，下同)碳酸钠水溶液洗至流出液无色，再用水洗至流出液为中性，最后用75％乙醇水溶液洗至流出液无色，收集洗脱液，回收洗脱液中的乙醇后浓缩至相对密度为1.15(60℃测)，加乙醇至含醇量达85％，静置，滤过，回收乙醇，浓缩干燥，粉碎，得170克穿山龙甾体总皂苷提取物，其穿山龙甾体总皂苷含量为总重量的92％。

实施例2：盾叶薯蓣甾体总皂苷提取物的制备

称取盾叶薯蓣10公斤，用水洗净、切片后加水100升，80℃下提取2小时，向滤渣加水80升，80℃下提取1.5小时，过滤。合并两次滤液，使其通过D₁₀₁型大孔吸附树脂柱，先用3％碳酸氢钠水溶液洗至流出液无色，再用水洗至流出液为中性，最后用80％乙醇水溶液洗至流出液无色，收集洗脱液，回收洗脱液中的乙醇后浓缩至相对密度为1.20(60℃测)，加乙醇至含醇量达90％，静置，过滤，回收乙醇，浓缩干燥，粉碎，得208克盾叶薯蓣甾体总皂苷提取物，其盾叶薯蓣甾体总皂苷含量为总重量的89％。

上述制备方法中，所述的提取次数可为1～3次，提取时间可为1～3小时，加水量可为药材重量的4～16倍；所述的大孔吸附树脂可为非极性树脂、弱极性树脂或极性树脂；所述的碱溶液可为碳酸钠、碳酸氢钠或氢氧化钠水溶液，浓度可为0.05％～4％；所述的洗脱剂乙醇的浓度可为30～95％；所述的相对密度可为1.15～1.20(60℃测)。

可用辅料氯化钠、葡萄糖、丙二醇或聚乙二醇将本发明的甾体总皂苷提取物制成多种规格的静脉注射液。

实施例3：穿山龙甾体总皂苷氯化钠注射液的制备

称取穿山龙甾体总皂苷提取物2g，加入氯化钠9g，加注射用水至1000ml，用10％氢氧化钠水溶液调pH值至7.0～7.5，冷藏，用G3垂熔漏斗过滤，分装，灌封，100℃流通蒸气下灭菌30分钟即得。

实施例4：盾叶薯蓣甾体总皂苷葡萄糖注射液的制备

称取盾叶薯蓣甾体总皂苷提取物2g，加入葡萄糖50g，加注射用水至1000ml，再加入0.2g活性炭，煮沸30分钟，放冷，过滤，用10％氢氧化钠调pH值至7.0～7.5，冷藏，用G3垂熔漏斗过滤，分装，灌封，110℃流通蒸气下灭菌30分钟即得。

实施例5：本发明的药物对结扎冠状动脉引起的大鼠急性心肌缺血的影响取昆明种大鼠40只，雌雄各半，分为4组：模型对照组、穿山龙甾体总皂苷氯化钠注射液组(用实施例3所制备的样品，简称CSN氯化钠注射液组)、盾叶薯蓣甾体总皂苷葡萄糖注射液组(用实施例4所制备的样品，简称DYSY葡萄糖注射液组)、葛根素氯化钠注射液组。以上4组动物，除正常对照组动物外，其余3组动物均于每天上午尾静脉给药一次，连续7天。各组动物于最后1次给药后30min，乌拉坦110g/kg，腹腔注射麻醉，固定，接动物呼吸机，同时监测心电图(肢体II导联)，经胸骨左缘开胸，暴露心脏，撕开心包膜，在肺动脉圆锥与左心耳间的冠状静脉下，用5/0带线缝合针结扎左冠状动脉，以心电图T波显著升高作为结扎成功指标，闭紧胸腔(排尽胸腔内空气)，稳定呼吸约10min，去除呼吸机恢复自主呼吸。结扎4h后，处死动物，取出心脏染色，进行缺血面积测定。结果见表1。

表1.本发明的药物对结扎冠状动脉引起的大鼠急性心肌缺血面积的影响(n＝10， x±s)

组别	剂量(mg/kg)	缺血区心肌重量(g)	心室肌总重量(g)	缺血区比例(％)
					模型组葛根素氯化钠注射液组CSN氯化钠注射液组DYSY葡萄糖注射液组	202020	0.200±0.0650.161±0.0270.155±0.0280.144±0.034	0.628±0.0780.650±0.0200.652±0.0190.644±0.024	31.6±6.924.8±4.2*23.8±4.7**22.4±5.6料

*P＜0.05，**P＜0.01与模型组相比。

表1的结果表明，模型组动物缺血部分心肌为31.6％，而葛根素氯化钠注射液20mg/kg能使缺血面积明显缩小，缺血区比例为24.8％(P＜0.05)。穿山龙甾体总皂苷氯化钠注射液20mg/kg、盾叶薯蓣甾体总皂苷葡萄糖注射液20mg/kg也可显著减少缺血面积，缺血区比例分别为23.8％和22.4％(P＜0.01)。说明本发明的药物对心脑血管疾病有明显的治疗作用。

附录：缺血面积的测定

取出大鼠心脏，去除心房，心室用生理盐水洗净血后于-20℃冷冻10min，徒手刀片切成1～2mm的心肌片，置于pH7.4PBS配制的1％TTC溶液中，37℃温育10min染色，心肌片上正常的心肌被染为深红色，缺血心肌呈灰白色。将染色后心肌片上正常和缺血部分心肌分别称重，以缺血部分心肌所占全部心室肌重量的比例作为缺血指标。

实施例6：本发明的药物对小鼠醋酸致痛的镇痛作用

取昆明种小鼠40只，雌雄各半，分为4组：生理盐水组、穿山龙甾体总皂苷氯化钠注射液组(用实施例3所制备的样品，简称CSN氯化钠注射液组)、盾叶薯蓣甾体总皂苷葡萄糖注射液组(用实施例4所制备的样品，简称DYSY葡萄糖注射液组)、盐酸曲马多注射液组(取2ml盐酸曲马多注射液溶于50ml生理盐水，此时盐酸曲马多的含量为1mg/ml)。每日小鼠尾静脉给药1次，给药3天；生理盐水组给药容量0.5ml/只，每天1次，给药3天，于末次给药后1小时，腹腔注射1％醋酸致痛，观察记录20min内各组小鼠出现扭体动物数及扭体反应次数，与对照组比较，作显著性测定。结果见表2。

                       表2小鼠扭体次数比较(n＝10  x±s)

组别	剂量(mg/kg)	扭体动物(％)	扭体次数(次)	抑制率(％)
					生理盐水CSN氯化钠注射液DYSY葡萄糖注射液盐酸曲马多注射液	-202010	100100100100	47.9±8.322.5±3.5**22.2±4.2**23.2±4.7**	-53.053.751.6

注：*P＜0.05，**P＜0.01与模型组相比。

表2结果表明，穿山龙甾体总皂苷氯化钠注射液20mg/kg、盾叶薯蓣甾体总皂苷葡萄糖注射液20mg/kg均可显著抑制小鼠扭体反应，抑制率分别为53.0％和53.7％(P＜0.01)。说明本发明的药物具有明显的镇痛作用。

实施例7：本发明的药物对小鼠引咳潜伏期、咳嗽次数的影响

取昆明种小鼠40只，雌雄各半，分为4组：生理盐水组、穿山龙甾体总皂苷氯化钠注射液组(用实施例3所制备的样品，简称CSN氯化钠注射液组)、盾叶薯蓣甾体总皂苷葡萄糖注射液组(用实施例4所制备的样品，简称DYSY葡萄糖注射液组)、止喘灵注射液组。实验前各组小鼠禁食12小时，尾静脉给药1小时后，将小鼠放入250ml广口瓶内，注入二氧化硫观察小鼠咳嗽潜伏期(从注入二氧化硫至发生咳嗽所需时间)及2分钟内咳嗽的次数。结果见表3。

表3各组小鼠引咳潜伏期、咳嗽次数比较(n＝10  X±s)

组别	剂量(ml/kg)	咳嗽潜伏期(秒)	止咳率(％)	咳嗽次数
					生理盐水组CSN氯化钠注射液组DYSY葡萄糖注射液组止喘灵多注射液组	5555	16.25±5.5345.47±15.68**44.81±17.36**44.32±16.45**	280276273	10.15±3.404.62±1.87**4.58±1.69**5.47±2.03**

注：与生理盐水组比：料P＜0.01

从表3可以看出，穿山龙甾体总皂苷氯化钠注射液5ml/kg、盾叶薯蓣甾体总皂苷葡萄糖注射液5ml/kg均能明显延长引咳潜伏期，与生理盐水对照组比较有显著性差异(P＜0.01)；穿山龙甾体总皂苷氯化钠注射液5ml/kg、盾叶薯蓣甾体总皂苷葡萄糖注射液5ml/kg均能明显减少小鼠2分钟内咳嗽次数，与生理盐水组比较有显著性差异(P＜0.01)。说明本发明的药物对呼吸系统疾病有明显的治疗作用。

附录：二氧化硫引咳法

用250ml侧口烧瓶，侧口用橡皮管通过三通管依次连接球胆、装有水并标有刻度的U形管、气球、5ml注射器、250ml广口瓶，侧口烧瓶内放无水硫酸钠，烧瓶塞上装有一滴定管，内加入50％硫酸。产生的气体储于球胆和气球中，调整压力保持在4cm水柱，每次抽取4ml以供引咳用。

通过上述具体实施方式，充分说明本发明的甾体总皂苷提取物所制备的注射液对心脑血管疾病、风湿病、呼吸系统疾病有显著的治疗作用，为临床提供了一种新的用药选择。

Claims (5)

1.一种甾体总皂苷提取物，其特征在于它含有甾体总皂苷的重量百分数为80％～98％。

2.权利要求1所述的甾体总皂苷提取物的制备方法，其特征在于将穿山龙或盾叶薯蓣或将二者混合，经水洗、切片后，在加热条件下用水提取1～3小时，重复提取1～3次，过滤或离心分出药液，再通过大孔吸附树脂柱，先用0.05％～4％的碱溶液洗至流出液无色，再用水洗至流出液为中性，最后用乙醇或含水乙醇洗至流出液无色，收集洗脱液，回收洗脱液中的乙醇后浓缩至相对密度为1.15～1.20，加乙醇至含醇量达75％～90％，静置，过滤，回收乙醇，浓缩干燥，粉碎。

3.权利要求1所述的甾体总皂苷提取物在制备治疗冠心病、心绞痛、心肌缺血、心衰、心律失常、脑梗塞、脑缺血、病毒性心肌炎或动脉血管粥样硬化疾病的静脉注射液中的应用。

4.权利要求1所述的甾体总皂苷提取物在制备治疗哮喘、急慢性支气管炎或肺气肿疾病的静脉注射液中的应用。

5.权利要求1所述的甾体总皂苷提取物在制备治疗风湿性关节炎、类风湿病、痛风、骨性关节炎、糖尿病关节炎或强直性脊柱炎疾病的静脉注射液中的应用。