CN1829527A - 细胞因子对嗜酸性粒细胞的抑制作用 - Google Patents
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Abstract
一种改变嗜酸性粒细胞功能和募集的组合物和方法。以药物可接受的剂量和制剂施用具有抑制嗜酸性粒细胞活性的过敏原诱导的趋化因子、干扰素γ诱导的单核因子(MIG)和/或IFN－γ－诱导型10kDa蛋白(IP－10)。该组合物可用于嗜酸性粒细胞嗜酸性粒细胞增多的疾病的预防和治疗，并可以施用给过敏患者和哮喘患者。
Description
按照由美国国立卫生研究院所授予的资助号RO1 AI42242-04XX和AI45898，美国政府对本发明有已付费的许可和在限定的情况下要求专利权人以规定的合理的条件许可他人的权利。
相关申请
本申请要求于2003年1月7日递交的申请序列号为60/438,412的美国临时专利申请的优先权，在此以其全文并入作为参考。
技术领域
本发明是关于化学引诱剂诱导改变嗜酸性粒细胞的功能和分布的组合物和方法。
背景技术
嗜酸性粒细胞是粒性白细胞(白细胞)或粒细胞的一种，它一般占外周血中全部白细胞的大约1-3％的浓度。嗜酸性粒细胞在组织中的存在一般主要限于肠胃黏膜。在多种疾病状态下，嗜酸性粒细胞在外周血和/或组织中增加，Rothenberg在Eosinophilia，N.Engl.J.Med.338，1592-1600(1998)中将病症命名为嗜酸性粒细胞增多，并描述了该病症。
嗜酸性粒细胞在外周血和组织中积聚是一些疾病的标志性特征。这些疾病包括过敏性紊乱如过敏性鼻炎、哮喘和湿疹；寄生虫感染；特定类型的恶性肿瘤；慢性炎症性紊乱如炎症性肠病；以及特定的综合征如嗜酸性胃肠炎、嗜酸性结肠炎、嗜酸性蜂窝组织炎(eosinophilic cellulitis)、嗜酸性食管炎、嗜酸性筋膜炎(eosinophilic fascitis)；以及系统性疾病如Churg Strauss综合征、嗜酸性肺炎和自发性嗜酸性粒细胞嗜酸细胞增多综合征。嗜酸性粒细胞在组织中积聚可以引起有效的促炎作用或组织重塑。
许多介质已经被确定为嗜酸性粒细胞化学引诱剂。这些介质包括不同的分子如脂质介质(血小板活化因子(PAF)、白三烯)以及最近的趋化因子，如趋化因子的嗜酸性细胞活化趋化因子(eotaxin)亚家族。趋化因子是由组织细胞和白细胞产生的小的分泌蛋白，其在体内平衡和炎症状态时调节白细胞的归巢(homing)。根据最初两个半胱氨酸的排列，可以区分两种主要的亚家族(CXC和CC趋化因子)，其中CXC的最初两个半胱氨酸被一个氨基酸分开，CC的最初两个半胱氨酸相邻。
发现了嗜酸性粒细胞通常只占循环细胞或组织常驻细胞(tissue dwellingcells)的少部分，并且在特定疾病的情况下嗜酸性粒细胞的数量明显地及选择性地增加，表明存在调节这些白细胞选择性生成和积聚的分子机制。因此，考虑到以嗜酸性粒细胞介导的病症的多样性，需要能够调节嗜酸性粒细胞功能的组合物。例如，儿科哮喘是嗜酸性粒细胞介导的病症，该病症的发病率在上升并成为造成小儿入院的主要诊断。通过改变嗜酸性粒细胞的功能可以缓解哮喘及其它嗜酸性粒细胞介导的病症。
发明简述
本发明的一个实施方案是关于抑制嗜酸性粒细胞功能的方法。将具有抑制嗜酸性粒细胞功能活性的分离细胞因子的药物组合物以药物有效量施用给患者来抑制嗜酸性粒细胞功能。该组合物可以抑制受体表达、受体内化(receptor internalization)、信号转导、迁移(transmigration)、脱敏(desensitization)、脱粒(degranulation)和/或介质释放。所述细胞因子可以为由干扰素γ诱导的单核因子(MIG)和/或IFN-γ-诱导型10kDa蛋白(IP-10)。
本发明的另一个实施方案是在气道、肺、气管、支气管肺泡灌洗液或血液中降低过敏原诱发的嗜酸性粒细胞嗜酸性粒细胞增多的方法。可以在由过敏影响的身体部分如眼睛、皮肤或消化道中降低嗜酸性粒细胞嗜酸性粒细胞增多。
本发明的另一个实施方案是通过施用含有有效量的抑制嗜酸性粒细胞的细胞因子的药物组合物来抑制嗜酸性粒细胞对化学引诱剂的反应的治疗方法。所述细胞因子可以为MIG和/或IP-10，细胞因子的施用剂量为大约10微克/千克-大约10毫克/千克，且所述化学引诱剂可以为嗜酸性细胞活化趋化因子-1、-2或-3，MCP-2、-3、-4或-5，RANTES和/或MIP-1a。该剂量可以系统性施用，例如，静脉内或口服。
本发明的另一个实施方案是姑息方法，该方法通过施用一定量的含有抑制嗜酸性粒细胞的分离细胞因子的药物组合物给可能或将要或已经暴露于过敏原的患者来减轻患者气道中的炎症。患者可能表现出鼻炎、哮喘和/或湿疹的症状。
本发明的另一个实施方案是抑制肺部嗜酸性粒细胞募集的方法，该方法通过施用一定量的于药物组合物中的MIG和/或IP-10来抑制肺部嗜酸性粒细胞募集。施用该组合物的患者可能患哮喘和/或过敏。
本发明的另一个实施方案是用于过敏患者的治疗方法，该方法施用含有至少一种能够负调节肺部炎症细胞的细胞因子的药物组合物。
本发明的另一个实施方案是用于患有嗜酸性粒细胞嗜酸性粒细胞增多的个体的治疗方法。MIG和/或IP-10以最多大约10毫克/千克的剂量施用来改变嗜酸性粒细胞迁移、组织募集、受体结合、信号转导、脱粒和/或介质释放。
本发明的另一个实施方案是缓解患者哮喘的方法。以药物组合物施用MIG，从而抑制患者的与白细胞介素(IL)-13相关的哮喘反应。
本发明的另一个实施方案是于药物可接受制剂中含有MIG和/或IP-10的药物组合物，并且MIG和/或IP-10的量足以在过敏原存在的情况下改变嗜酸性粒细胞活性。所述量使得可以施用大约10微克/千克-大约10毫克/千克的剂量。
本发明的另一个实施方案是含有抑制至少一种由嗜酸性粒细胞诱导的刺激因素引起的嗜酸性粒细胞功能应答的细胞因子的药物组合物。所述细胞因子可以为MIG和/或IP-10。所述刺激因素可以为过敏原、过敏反应、感染和/或趋化因子如嗜酸性细胞活化趋化因子、IL-13和/或血小板活化因子。另外，所述刺激因素可以为自发的(idiopathic)。
本发明的另一个实施方案是于药物可接受制剂中含有分离的与Th1相关的趋化因子的药物组合物，并且趋化因子的量足以在过敏原存在的情况下抑制嗜酸性粒细胞活性。
本发明的另一个实施方案是于药物可接受制剂中含有重组MIG和/或重组IP-10细胞因子的药物组合物，并且它的剂量足以抑制嗜酸性粒细胞功能。
通过下面的附图和详细描述，本发明的这些和其它优点将更加明显。
附图说明
该申请包括至少一个彩色附图。按照37C.F.R.§1.84的规定，在此单独递交一份请求书，要求接受这些彩色附图。
图1表示由细胞因子干扰素γ诱导的单核因子(MIG)和/或IFN-γ-诱导型10kDa蛋白(IP-10)的过敏原诱导。图1A和1B是微阵列杂交分析图，用来自对照和卵清蛋白过敏原攻击的肺的实验性哮喘来表示小鼠中的干扰素γ(MIG)诱导的单核因子(图1A)和IP-10(图1B)的诱导。图1C为暴露于过敏原之后在不同时间点来自对照和受攻击的肺的肺核糖核酸(RNA)的Northern印迹。图1D为对照和受到作为过敏原的曲霉攻击的肺的肺RNA的Northern印迹。图1E是表示转录因子STAT-6对受到曲霉攻击的野生型或敲除小鼠中的MIG诱导的作用的Northern印迹。图1F(A-D)用原位杂交表示受卵清蛋白攻击的肺中的MIG mRNA的表达模式。
图2表示对比受体表达数据。图2(A-D)表示来自流式细胞术分析的数据。图2E是表示MIG对体外嗜酸性粒细胞迁移的作用的趋化性分析。
图3表示MIG预处理对嗜酸性粒细胞对体外嗜酸性细胞活化趋化因子-2的趋化反应的抑制作用。
图4表示MIG预处理对嗜酸性粒细胞在体内迁移到肺部的作用。图4A表示MIG预处理对嗜酸性粒细胞对嗜酸性细胞活化趋化因子-2的反应的作用。图4B表示增加MIG剂量的作用。图4C表示嗜酸性细胞活化趋化因子-1预处理对嗜酸性粒细胞对嗜酸性细胞活化趋化因子-2的反应的作用。图4D(1-2)表示由抗MBP免疫组织化学法检测的具有嗜酸性粒细胞的肺部组织。图4E表示MIG对嗜酸性细胞活化趋化因子诱导嗜酸性粒细胞转移到血液的作用。
图5表示在卵清蛋白诱导的实验性哮喘中，MIG对嗜酸性粒细胞募集到肺部的作用。图5A表示MIG预处理对由过敏原卵清蛋白引起的嗜酸性粒细胞募集应答的作用。图5B表示在卵清蛋白攻击之前，使用对照或抗MIG抗体中和MIG的作用。
图6表示体内嗜酸性粒细胞中的MIG对嗜酸性粒细胞的作用。图6A(1-2)表示MIG对嗜酸性粒细胞的特异性结合。图6B(1-2)表示MIG引起的CCR3的内化缺乏。图6C(1-2)表示在MIG预处理存在和不存在的情况下，暴露于嗜酸性细胞活化趋化因子-2的嗜酸性粒细胞的Western印迹，其中表示了磷酸化的和总的Erk1和Erk2的水平。图6D表示MIG对超氧化物生成的作用。
图7表示MIG对嗜酸性粒细胞趋向于非CCR3配体的趋化性的作用。
图8表示MIG对细胞因子IL-13诱导的白细胞募集到肺部的作用。
发明详述
本发明公开了特异性改变嗜酸性粒细胞功能的趋化因子，以及其药物应用的方法。所述趋化因子包括由干扰素γ诱导的单核因子(MIG)和IFN-γ-诱导型10kDa蛋白(IP-10)。本发明还公开了所述趋化因子在治疗与嗜酸性粒细胞相关的疾病中的作用，以及趋化因子的作用机制。本领域的技术人员可以理解在此使用的术语细胞因子涵盖趋化因子。
趋化因子通过与G蛋白偶联的七次跨膜结构域受体诱导信号，所述受体也分成对于CXC和CC趋化因子的两个主要亚家族，分别记做CXCR6和CCR。嗜酸性细胞活化趋化因子(CCL11；现在记做嗜酸性细胞活化趋化因子-1)是对嗜酸性粒细胞具有选择性活性的CC趋化因子，在调节嗜酸性粒细胞基本归巢中起到主要作用，并且在过敏原诱导的炎症反应过程中有助于调节嗜酸性粒细胞组织募集。已经在编码具有嗜酸性粒细胞选择性的化学引诱剂活性的CC趋化因子的基因组中鉴别出其它的趋化因子，记做嗜酸性细胞活化趋化因子-2(在人和小鼠中)和嗜酸性细胞活化趋化因子-3(只在人中)。
通过嗜酸性细胞活化趋化因子受体CCR3在嗜酸性粒细胞上的选择性表达来介导嗜酸性细胞活化趋化因子-1、-2和-3的特定活性。CCR3为泛主受体(promiscuous receptor)，与多种配体相互作用，所述配体包括巨噬细胞趋化蛋白(MCP)-2、-3和-4，RANTES(当激活表达和分泌的正常T细胞时来调节(regulated upon activation normal T-cell expressed and secreted))，以及HCC-2(MIP-5，leukotactin)；但是，只通过该受体传递信号的配体只有嗜酸性细胞活化趋化因子-1、-2和-3，说明嗜酸性细胞活化趋化因子的细胞选择性。由于CCR3配体通常为更有效的嗜酸性粒细胞化学引诱剂，因此CCR3似乎起到主要的嗜酸性粒细胞趋化因子受体功能。另外，CCR3的特异性抑制性单克隆抗体阻断RANTES的活性，所述RANTES为能够通过CCR1或CCR3在嗜酸性粒细胞中传递信号的趋化因子。其它参与过敏反应的细胞、Th2细胞、嗜碱性粒细胞、肥大细胞以及呼吸上皮细胞可能也表达CCR3；但是，CCR3表达在这些细胞中的重要性不如在嗜酸性粒细胞中的清楚。
在诱导与嗜酸性粒细胞相关的过敏性气道炎症的过程中，白细胞组织募集与趋化因子的协同诱导相互配合。集中到嗜酸性粒细胞，出现了在嗜酸性粒细胞活性趋化因子的诱导中涉及Th2细胞因子的范例。例如，IL-4和IL-13是体外嗜酸性细胞活化趋化因子和MCP的有效的诱导物。当Th2细胞因子过表达或施用到肺部时，出现明显的嗜酸性细胞活化趋化因子诱导，以及强烈的嗜酸性粒细胞肺部募集。
相反地，Th1细胞因子如干扰素-γ(IFN-γ)诱导一系列不同的趋化因子(例如，称作IP-10或CXCL10的IFN-γ-诱导型10kDa蛋白；称作MIG或CXCL9的由干扰素诱导的单核因子；以及称作I-TAC或CXCL11的IFN-可诱导T细胞α化学引诱物)。这些趋化因子是独特的，这是因为它们通过CXCR3选择性地传递信号，所述CXCR3在激活的T细胞、NK细胞以及相当大一部分循环CD4和CD8T细胞上表达。考虑到最近有出版物指出人CXCR3配体为人CCR3拮抗剂，其抑制CCR3配体对体外CCR3+细胞的作用(Loetscheret al.，J.Biol.Chem.276：2986(2001))，这种二分法可能会更复杂。
使用在Clara细胞10启动子(由Dr.Jeffrey Whitsett赠送)调控下过表达鼠IL-4的小鼠来检查MIG的诱导(Rankin et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.93：7821(1996))。所有的小鼠都在特定的无病原体条件下并且依照设定的指导进行喂养。IL-5转基因小鼠用作血液和脾脏嗜酸性粒细胞的来源。
哮喘是在小鼠中使用卵清蛋白(OVA)诱导的和烟曲霉(Aspergillusfumigatus)诱导的哮喘模型而实验性诱导的。这些模型在Mishra et al.，J.Clin.Invest.107：83(2001)有所描述，该文献在此全部并入作为参考。简而言之，对于OVA诱导哮喘，在第0天和第14天给小鼠腹腔内注射OVA和氢氧化铝(明矾)(1毫克)佐剂，接着在第24天进行鼻内OVA或生理盐水攻击。对于曲霉菌诱导哮喘，小鼠在三周的时间内接受重复的鼻内施用烟曲霉。
使用Rothenberg et al.，Molec.Med.2：334(1996)中所述的方法，施用嗜酸性细胞活化趋化因子-2或IL-13来诱导嗜酸性粒细胞嗜酸性粒细胞增多，该文献在此全部并入作为参考。小鼠接受3微克重组嗜酸性细胞活化趋化因子-2(来自Peprotech，Rocky Hill NJ)或者4毫克和10毫克IL-13，通过气管内输送直接到肺部。简而言之，氯胺酮(ketamine)(5毫克/100微升)将小鼠麻醉，然后垂直放置，再用吸液管(Pipetman，Gilson，Middleton WI)将20微升重组嗜酸性细胞活化趋化因子-2、IL-13或生理盐水(对照)输入到气管中。
为了输送MIG，在气管内或鼻内施用嗜酸性细胞活化趋化因子-2之前30分钟和/或在鼻内攻击施用OVA之前30分钟，将200微升(1微克)重组趋化因子(Peprotech)注射到侧部尾静脉中。
在OVA或生理盐水的单独攻击之前24小时，腹膜内注射500微升(500微克)抗鼠MIG(来自Joshua M.Farber)，以在OVA敏化的小鼠中诱导MIG中和(neutralization)。对照组用同种型相配的(isotope-matched)对照抗体注射。
在攻击18小时后，收集来自受过敏原攻击的小鼠的支气管肺泡灌洗液(BALF)和/或肺组织。小鼠通过吸入CO2安乐死，形成中线颈切口，并进行气管插管。用1.0毫升含有1％胎牛血清(FCS)和0.5mM乙二胺四乙酸(EDTA)的磷酸盐缓冲液(PBS)将肺部灌洗两次。将回收的BALF离心(4℃下400xg 5分钟)并重悬浮到200微升含有1％FCS和0.5mM EDTA的PBS中。使用血细胞计数器计数总的细胞数目。使用Giemsa-Diff-Quick(Dade Diagnostics ofP.R.，Inc.，Aguada PR)将Cytospin制备物染色并确定分化细胞的数目。按照厂家的说明，使用Trizol试剂从肺部提取核糖核酸(RNA)。Trizol纯化后，用酚-氯仿萃取法和乙醇沉淀法将RNA重新纯化。
在Children′s Hospital Medical Center(Cincinnati OH)由Affymetrix GeneChip Core设备进行微阵列杂交。简而言之，首先使用Agilent生物分析仪(Agilent Technologies，Palo Alto CA)评定RNA的质量。只有28S/18S的比例为1.3-2的mRNA才继续使用。用Superscript的cDNA合成方案(Invitrogen，Carlsbad CA)将RNA转变成cDNA，然后使用Enzo High Yield RNA Transcript标记试剂盒(Enzo Diagnostics，Farmingdale NY)转变成生物素化的cRNA。与鼠U74Av2 GeneChip(Affymetrix，Santa Clara CA)杂交以后，使用射流系统自动冲洗所述芯片并用链霉抗生物素-藻红蛋白染色。所述芯片用HewlettPackard GeneArray Scanner扫描。每个芯片用一只小鼠进行分析(每个过敏原攻击情况n＝3，每个生理盐水攻击情况n＝2)。
使用Microarray Analysis Suite Version 4软件(Affymetrix)中的算法，由数据图像文件确定基因转录水平。由总体尺度上(global scaling)比较芯片与芯片间的水平；因此，使每个芯片根据一个任意值(1500)被标准化(normalize)。每个基因一般都由16-20个探针对的探针组来表示。每个探针对由完美匹配的寡核苷酸和错配的寡核苷酸组成，其中错配的寡核苷酸在中心位置含有一个错配的碱基。使用两种测定方法测定基因表达，即绝对呼叫(absolute call)和平均差异(average difference)。绝对呼叫是定性测定，其中根据RNA与探针组的杂交，把每个基因分为存在(present)响应、少量(marginal)响应或者无(absent)响应。平均差异法是基因表达水平的定量测定，通过取每个探针对的错配和完美匹配之间的差值并计算整个探针组的差值的平均值来测定。还使用GeneSpring软件(Silicon Genetics，RedwoodCity CA)来测定由生理盐水处理的与OVA处理的小鼠间的差值。将每个过敏原攻击时间点的数据根据生理盐水处理的小鼠的平均值进行标准化。由结果得到基因列表，所述结果具有p＜0.05并且大于2倍的变化。
使用4％多聚甲醛的磷酸盐缓冲液(pH 7.4)固定肺部组织样品，包埋到石蜡中，切成5微米的切片并固定到带正电荷的载玻片上。为了分析粘液产物，按照生产厂家的推荐，使用高碘酸Schiff(Poly Scientific R&D Corp.)对组织进行染色。特别的是，使用1.0×1.0厘米的栅格目镜来确定产粘液的上皮细胞的百分数。随机地计数500个线性等级(gradation)(代表6.25毫米的上皮)，并将结果表示为产粘液细胞与总的肺部上皮细胞的比例。为了在组织中进行嗜酸性粒细胞染色，如Matthews et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.95：6273(1998)所述，使用抗鼠主要碱性蛋白(抗MBP)的抗血清，该文献在此全部并入作为参考。简而言之，使用0.3％过氧化氢的甲醇溶液猝灭内源性过氧化物酶，接着使用正常的山羊血清进行非特异性蛋白封闭。然后用兔抗鼠MBP抗体(1∶2500，来自J.Lee，Mayo Clinic，Scottsdale AZ)将组织切片在4℃下孵育过夜，接着用生物素化的山羊抗兔IgG二级抗体(1∶200稀释)和抗生物素蛋白-过氧化物酶复合物(Vector Laboratories)各孵育30分钟。用二氨基联苯胺镍-氯化钴溶液进一步处理载玻片以形成黑色沉淀，并用核固红(nuclear fast red)进行对比染色。如Mishra et al.，J.Clin.Invest.107：83(2001)所述，用形态测量分析(Metamorph Imaging System，Universal ImagingCorporation，West Chester PA)定量免疫反应性细胞。从每组小鼠的相同位置取得肺部切片，并且每个小鼠至少分析4-5个随机切片。使用数字图像捕捉器定量分析与中等大小的细支气管或血管相关的组织区域，计算相对于总组织面积的总MBP+细胞单位。计算的嗜酸性粒细胞水平表示为细胞个数/平方毫米。
如Zimmermann et al.，J.Immunol.164：1055(2000)所述，通过穿过呼吸上皮细胞的迁移来确定趋化反应，该文献在此全部并入作为参考。简而言之，A549细胞(American Type Tissue Culture Collection，Rockville MD)在细胞培养瓶的DMEM培养基(Dulbecco’s modified Eagle’s medium，Gibco BRL)中长成单层，所述培养基添加了10％FCS、青霉素和链霉素。将细胞单层用胰蛋白酶作用、离心并在Transwell组织培养平板(Corning Costar Corp.，Cambridge MA)中的渗透性过滤材料(孔径为3微米的聚碳酸酯过滤材料)上进行培养之前，重悬到新鲜培养基中。100微升的细胞(1.5×105)在过滤材料的上表面铺满生长两天，并用10纳克/毫升TNFα处理18小时。将Hank’s平衡盐溶液(HBSS)和0.5％牛血清蛋白(BSA，low endotoxin，Sigma)中的白细胞(1.5×106)放入上室，并将趋化因子(在HBSS和0.5％BSA中)放入下室。使用来自IL-5转基因小鼠的脾细胞获得嗜酸性粒细胞。进行1.5小时的迁移。使用血细胞计数器计数下室中的细胞，细胞离心，用Giemsa-Diff-quick(DadeDiagnostics of P.R.，Inc.，Aguada PR)染色，并用显微法进行分化白细胞分析。
为了进行流式细胞术分析，用FACS缓冲液(含有2％BSA和0.1％叠氮化钠的PBS)洗涤脾细胞并与下列物质中的一种在4℃下孵育20分钟：150纳克(1.5微克/毫升)藻红蛋白偶联的抗鼠CCR-3抗体(R&D Systems，Minneapolis MN)，300纳克(3微克/毫升)抗鼠CXCR3(来自Merck ResearchLaboratories)，1微克(10微克/毫升)FITC偶联的抗鼠CD4(BD BiosciencesPharmingen，San Diego CA)，或者同种型相配的对照IgG。在FACS缓冲液中洗涤两次后，CXCR3染色的细胞与0.3微克FITC偶联的同种型特异性二抗(Pharmingen)在4℃下在暗处孵育20分钟。两次洗涤以后，在FACScan流式细胞仪(Becton Dickinson)上对标记细胞进行流式细胞术并使用CELLQuest软件(Becton Dickinson)进行分析。如Zimmermann et al，J.Biol.Chem.274：12611(1999)所述对表面CCR3的内化进行分析，所述文献在此以其全文并入参考。简而言之，细胞与0或者100纳克/毫升鼠嗜酸性细胞活化趋化因子-2或1-1000纳克/毫升鼠MIG在4℃或者37℃孵育15分钟。暴露于趋化因子后，细胞立即置于冰上并用至少两倍体积的冷FACS缓冲液洗涤。
为了MIG结合，在4℃将细胞(5×105)与100nM-1000nM鼠MIG孵育15分钟。趋化因子暴露以后，对细胞进行洗涤，用2％多聚甲醛固定，洗涤，然后在4℃下用500纳克(5微克/毫升)抗鼠MIG(R&D Systems)孵育15分钟。使用藻红蛋白偶联的二抗对细胞进行染色。为了嗜酸性细胞活化趋化因子结合，在4℃将细胞(1×106)暴露于0μM-10μM的MIG或嗜酸性细胞活化趋化因子-2中5分钟，然后与20nM生物素化的嗜酸性细胞活化趋化因子(Sigma)或JE(R&D Systems)孵育。使用FITC-偶联的抗生物素蛋白(R&D Systems)检测趋化因子结合。
按照生产厂家的指示，使用Dynabeads Mouse pan B(B220)和pan T(Thy 1.2)将T和B细胞耗尽以后，从来自IL-5转基因小鼠的脾细胞中纯化嗜酸性粒细胞进行信号转导研究。将纯化的(85％)嗜酸性粒细胞(1×106)在37℃在RPMI培养基1640(Invitrogen Corporation，Carlsbad CA)中孵育15分钟，然后在37℃用10nM嗜酸性细胞活化趋化因子-2和/或50nM-500nM MIG刺激2或10分钟。用含有2mM原钒酸钠(Sigma)的冷PBS终止反应。将细胞裂解在25微升裂解缓冲液中(5mM EDTA，50mM NaCl，50mM NaF，10mMTris-HCl pH 7.6，1％Triton-X，0.1％BSA)。将相同体积的样品缓冲液加入到各个裂解物中，然后沸腾5分钟。在NuPAGE 4-12％Bis-Tris SDS凝胶(Invitrogen)上将样品分离。使用电印迹(electroblotting)将蛋白转移到硝化纤维膜(Invitrogen)上。使用抗体探测印迹，所述抗体对phospho-p44/42 Map激酶(Cell Signaling Technologies，Beverly MA)具有特异性(1∶1000)。所述膜在50℃在剥离(stripping)缓冲液(100mM 2-巯基乙醇，2％SDS，62.5mMTris-HCl pH 6.7)中孵育30分钟而被剥离(stripped)，然后用抗体进行重新探测，所述抗体对p44/42(Cell Signaling Technologies)具有特异性(1∶1000)。用(1∶1500)抗兔IgG HRP(Cell Signaling Technologies)孵育所述膜以后，使用ECL系统(Amersham Pharmacia Biotech，Piscataway NJ)使蛋白显色。
除非特别说明，数据都表示为平均值±标准误差。使用Student’s t-检验确定不同组小鼠之间差异的统计学显著性。
在实验性哮喘中鉴定CXCR3配体
鉴定在完全建立的哮喘模型中分化表达的基因。为了诱导哮喘，在佐剂明矾存在的条件下，间隔14天分两次用过敏原OVA对小鼠进行腹腔内敏化。然后，间隔3天分两次用OVA或对照生理盐水对重复的小鼠进行鼻内攻击。每次过敏原攻击之后3和/或18个小时，使用含有寡核苷酸探针组的Affymetrix chip U74Av2对肺部RNA进行微阵列分析，所述探针组代表12,423个遗传元件，这是可商业获得的特征化鼠基因的最大集合。
过敏原攻击的小鼠与生理盐水攻击的小鼠的比较显示出在不同时间点在2-6％的基因中出现＞2倍的变化(数据未给出)。在过敏原诱导的这些基因中，编码趋化因子的基因代表大的亚型(subset)。例如，微阵列芯片含有代表29种趋化因子基因的寡核苷酸；与生理盐水攻击的对照小鼠相比，这些趋化因子基因的10种是过敏原诱导的。几种诱导的趋化因子基因之前与过敏性肺反应不相关。例如，有强的IFN-γ-可诱导趋化因子MIG和IP-10的诱导。
图1表示MIG和IP-10 mRNA在卵清蛋白(OVA)或烟曲霉诱导的哮喘模型中的表达。图1A表示MIG在生理盐水攻击的小鼠(对照)和OVA攻击的小鼠中的杂交信号的平均差值(平均值和平均值的标准误差)。图1B表示在一次攻击3小时(3H)后和18小时(18H)后IP-10的结果，以及在两次攻击18小时(18H)后IP-10的结果(2C)。图1C表示MIG和IP-10 mRNA在生理盐水攻击的小鼠和OVA攻击的小鼠中的表达。图1D表示生理盐水或曲霉攻击后MIG和IP-10 mRNA的表达。图1E表示生理盐水或曲霉攻击后MIG mRNA在野生型和STAT-6缺陷型小鼠中的表达。表示了18S RNA的位置；用溴化乙锭对RNA凝胶进行染色。每个泳道代表来自单个小鼠的RNA。
与生理盐水对照相比，在第一次过敏原攻击之后18小时，MIG mRNA增加了＞10倍(图1A，18H)，在第二次过敏原攻击后，MIG mRNA的增加＞＞10倍(图1A，2C)。与生理盐水对照相比，在第一次过敏原攻击之后18小时，IP-10mRNA增加了＞10倍(图1B，18H)，在第二次过敏原攻击后IP-10 mRNA的增加＞10倍(图1B，2C)。
为了验证微阵列数据所反映的基因诱导，进行Northern印迹分析。如图1C所示，在过敏原攻击之后，MIG和IP-10 mRNA是强烈可诱导的。在第一次攻击后18小时，出现MIG mRNA的带，并且在第二次攻击后更加强烈。在第一次攻击后3小时，以及第一次攻击后18小时和第二次攻击后出现IP-10 mRNA的带。因此，Northern印迹分析证实了微阵列数据。
为了确定MIG和IP-10的诱导是否限于OVA诱导的实验性哮喘模型，使用重复鼻内剂量的抗原烟曲霉在幼鼠(
mice)中诱导实验性哮喘。九次鼻内施用烟曲霉的最后一次后的18小时，肺RNA进行Northern印迹分析来分析MIG和IP-10。结果如表1D所示。
与受九次剂量鼻内生理盐水攻击的小鼠相比，用烟曲霉攻击的小鼠的MIG和IP-10的表达显著。因此，由过敏原攻击诱导的MIG和IP-10并不特异于所使用的抗原。
MIG表达的调节
确定了已知在哮喘肺中过表达的细胞因子如IL-4和IL-13对MIG表达的诱导作用。特别地，确定了过表达IL-4的转基因小鼠中的MIG表达；IL-4过表达没有诱导MIG表达(数据未给出)。还确定了通过鼻内途径往肺部施用IL-13的小鼠中的MIG表达；施用IL-13没有诱导MIG表达(数据未给出)。相反，在相同情况下，IL-4和IL-13诱导嗜酸性细胞活化趋化因子-1和嗜酸性细胞活化趋化因子-2表达。
IL-4和IL-13共享受体信号通路，所述通路涉及一般依赖于转录因子STAT-6的受体后(post-receptor)事件。因此，通过在STAT-6野生型小鼠和STAT-6基因缺失型小鼠中诱导实验性哮喘，确定了蛋白STAT-6对MIG诱导的作用。结果如图1E所示。与STAT-6野生型小鼠相比，过敏原诱导的MIG在STAT-6敲除小鼠中得到增强。这些结果与嗜酸性细胞活化趋化因子-1和嗜酸性细胞活化趋化因子-2的诱导相反，其完全依赖于STAT-6(数据未给出)。
图1F表示在过敏原攻击的肺部的MIG mRNA表达。在OVA攻击的肺部有突出的MIG RNA的血管周围表达和支气管周围表达。这是由MIGmRNA的原位杂交亮视野(图1F(a))和暗视野(图1F(b))(放大倍数为10)得出的。图1F(c)和1F(d)分别用原位杂交亮视野和暗视野(放大倍数为40)表示在来自OVA攻击的肺的肺淋巴结中MIG表达。
鼠MIG为体外嗜酸性粒细胞的抑制剂
已经有报道称人嗜酸性粒细胞表达MIG的受体CXCR3。为了确定过敏原诱导的MIG表达是否可至少部分与嗜酸性粒细胞在肺部的募集有关，首先确定鼠嗜酸性粒细胞是否表达CXCR3。图2的结果表示其表面缺乏CXCR3的鼠嗜酸性粒细胞不能向MIG迁移。图2A表示来自表达CXCR3的IL-5转基因小鼠的淋巴细胞；在嗜酸性粒细胞的表面没有可检测到的CXCR3。填充的柱状图为同种型相配的对照，实线为CCR3、CXCR3或CD4。图2B表示响应于所示的MIG剂量的脾衍生的嗜酸性粒细胞的有代表性的迁移结果(n＝3)。响应于MIG和嗜酸性细胞活化趋化因子-2，细胞(1.5×106)迁移。1.5小时后计数下室中的细胞数。数据表示迁移过呼吸上皮细胞层的嗜酸性粒细胞数的平均值和标准差。
图2A中的柱状图表示嗜酸性粒细胞和淋巴细胞的流式细胞术数据。CD4+淋巴细胞在细胞表面表达CXCR3受体。相反，通过其特征光散射和嗜酸性细胞活化趋化因子受体CCR3的表达鉴定，嗜酸性粒细胞没有可检测到的MIG受体CXCR3表达。与CCR3在嗜酸性粒细胞中的强烈表达相反，通过使用一定剂量范围的抗体(0.5-30μg/ml)没有重新得到CXCR3染色。作为对照，在CD4+T细胞中鉴定了CXCR3。
接下来确定MIG是否能够在体外诱导嗜酸性粒细胞迁移。图2B表示了对肺嗜酸性粒细胞的有代表性的迁移分析。与缺少CXCR3表达相一致，当受到一定剂量范围的MIG(1pg/ml-10,000pg/ml)时，鼠嗜酸性粒细胞没有迁移。作为阳性对照，嗜酸性粒细胞对1000pg/ml的嗜酸性细胞活化趋化因子-2的反应强烈。这些数据意味着MIG不是鼠嗜酸性粒细胞的刺激性趋化因子。
但是，MIG是CCR3配体诱导的嗜酸性粒细胞体外化学诱导物的功能抑制剂。评估了由MIG预处理的嗜酸性粒细胞以及它们随后对有力的CCR3配体、嗜酸性细胞活化趋化因子-2的趋化反应。结果如图3所示。
图3表示了响应于嗜酸性细胞活化趋化因子-2的嗜酸性粒细胞迁移数据；在体外，MIG抑制嗜酸性粒细胞向嗜酸性细胞活化趋化因子-2迁移。用缓冲液、MIG或嗜酸性细胞活化趋化因子-2预处理后，细胞得以迁移。数据(平均值和标准差)来自朝1ng/ml嗜酸性细胞活化趋化因子-2迁移的嗜酸性粒细胞的有代表性的试验(n＝3)。
用MIG预处理嗜酸性粒细胞抑制了响应于嗜酸性细胞活化趋化因子-2的嗜酸性粒细胞迁移。通过1pg/ml-10,000pg/ml(0.8pM-820pM)的抑制活性可以看出，这种作用是剂量依赖性的；MIG 1pg/ml时p＝0.03，100pg/ml时p＝0.01及10,000pg/ml时p＝0.008。作为阳性对照，使用1ng/ml(0.1nM)的嗜酸性细胞活化趋化因子-2预处理嗜酸性粒细胞也抑制嗜酸性粒细胞迁移。作为阴性对照，使用10ng/ml(0.7nM)的MCP-1(JE，CCL2)预处理嗜酸性粒细胞没有抑制嗜酸性粒细胞迁移(数据未给出)。通过存活染料(台盼蓝)排除确定并且即使MIG存在，IL-5也能促进嗜酸性粒细胞存活的能力确定MIG对嗜酸性粒细胞没有毒性(数据未给出)。
MIG对CCR3内化的作用
受体接合兴奋剂之后，CCR3配体诱导受体内化。MIG诱导的CCR3内化解释了MIG抑制由嗜酸性细胞活化趋化因子诱导的嗜酸性粒细胞迁移的能力。
图4表示剂量依赖性的MIG对趋化因子诱导的嗜酸性粒细胞在肺部募集的抑制。图4a表示趋向于嗜酸性细胞活化趋化因子-2而迁移到气道中的嗜酸性粒细胞的平均值和标准差。使用生理盐水或1微克MIG对IL-5转基因小鼠进行静脉内处理30分钟，然后使用3微克嗜酸性细胞活化趋化因子-2或生理盐水进行气管内攻击。数据表示三个独立的试验，每组使用2-6只小鼠。图4B表示在用嗜酸性细胞活化趋化因子-2攻击之前，用所示剂量的生理盐水或MIG处理小鼠。数据(平均值和标准差)表示代表性实验的气道嗜酸性粒细胞，每个实验的每组使用4只小鼠。
如图6B所示，用1ng/ml、100ng/ml或1000ng/ml(82pM-82nM)MIG对嗜酸性粒细胞预处理没有明显影响CCR3的水平。作为对照，用100ng/ml(9.7nM)嗜酸性细胞活化趋化因子-2对嗜酸性粒细胞预处理诱导明显的CCR3表达内化。当在4℃进行预孵育时，没有看到嗜酸性细胞活化趋化因子-2的作用，验证了该试验是检测受体内化而不是表位阻断。
MIG抑制嗜酸性细胞活化趋化因子和IL-13诱导的嗜酸性粒细胞在肺部的募集
确定了MIG作为体内嗜酸性粒细胞抑制剂的作用。评价了MIG抑制由嗜酸性细胞活化趋化因子-2或IL-13诱导的嗜酸性粒细胞在肺部募集的能力。在气管内施用嗜酸性细胞活化趋化因子-2之前30分钟，静脉内施用1微克MIG对小鼠进行预处理抑制了＞90％嗜酸性粒细胞向肺部转移(图4A)。在0.1微克MIG-1.0微克MIG之间，MIG证实了剂量依赖性抑制(图4B)。
气管内给IL-5转基因小鼠施用嗜酸性细胞活化趋化因子-2诱导了显著的嗜酸性粒细胞在肺部的募集。例如，参看图4A，嗜酸性细胞活化趋化因子-2处理后3小时，BALF中的嗜酸性粒细胞水平从1.9±2.3×103(n＝2只小鼠)增加到7.2±5.4×105(n＝6只小鼠)。但是，与静脉内注射生理盐水相比，在气管内施用嗜酸性细胞活化趋化因子-2之前30分钟对小鼠静脉内注射MIG降低了嗜酸性粒细胞募集(p＜0.02)。
在鼻内施用嗜酸性细胞活化趋化因子-2之前30分钟，静脉内施用MIG仪剂量依赖性方式抑制嗜酸性粒细胞在肺部的募集。参看图4B，静脉内给IL-5转基因小鼠施用100纳克MIG使嗜酸性粒细胞在BALF中的募集减少了21％。静脉内施用500纳克MIG使嗜酸性粒细胞在BALF中的募集减少了51％(p＝0.02)。静脉内施用1000纳克MIG使嗜酸性粒细胞在BALF中的募集减少了88％(p＝0.01)。为了证实MIG特异性负责抑制活性，在鼻内施用嗜酸性细胞活化趋化因子-2之前，用不同的趋化因子、鼠MCP-1(还称作JE)(1微克)处理小鼠。趋化因子JE对由嗜酸性细胞活化趋化因子诱导的嗜酸性粒细胞在肺中的募集不起作用(数据未给出)。为了对比，在鼻内施用嗜酸性细胞活化趋化因子-2之前，静脉内给小鼠施用1微克嗜酸性细胞活化趋化因子-1，并测定在反应中嗜酸性粒细胞到肺部的迁移。如图4C所示，MIG和嗜酸性细胞活化趋化因子-1的抑制活性差不多。数据表示在有代表性的实验(n＝2)中，肺或气道嗜酸性粒细胞的平均值±标准差(*p≤0.04)，每次试验每组使用4只小鼠。
通过组织学检验和抗MBP染色，评估肺组织中的嗜酸性粒细胞水平。鼻内输送嗜酸性细胞活化趋化因子-2之前，进行静脉内MIG处理后抑制嗜酸性粒细胞迁移。图4D的结果表示在鼻内施用嗜酸性细胞活化趋化因子-2之前，进行静脉内生理盐水或MIG处理，通过抗MBP免疫组织化学法测定的肺部嗜酸性粒细胞。在施用嗜酸性细胞活化趋化因子-2之前，鼻内施用MIG(1微克)没有明显抑制嗜酸性粒细胞募集(数据未示出)。因此，MIG活性似乎依赖于系统施用而不是局部施用。与MIG对BALF或肺组织的嗜酸性粒细胞募集的抑制作用相反，血液中的嗜酸性粒细胞水平不受任何施用剂量的MIG的影响。
MIG对体内嗜酸性粒细胞趋化因子反应的抑制能力并不限于嗜酸性细胞活化趋化因子-2；MIG还抑制嗜酸性细胞活化趋化因子-1的作用。用1微克MIG预处理将嗜酸性细胞活化趋化因子-1诱导的BALF嗜酸性粒细胞从2.6±0.42×106降低到4.0±1.6×105个细胞(n＝3只小鼠/组)。MIG还抑制由嗜酸性细胞活化趋化因子诱导的嗜酸性粒细胞到血液的流动。静脉内施用1微克嗜酸性细胞活化趋化因子-1后，嗜酸性细胞活化趋化因子-1诱导流通的嗜酸性粒细胞水平快速增加。结果如图4E所示。当与嗜酸性细胞活化趋化因子-1一起施用1微克MIG时，嗜酸性细胞活化趋化因子诱导的嗜酸性粒细胞流动显著降低(*p＜0.0001)(3次试验，每组12只小鼠)。
MIG抑制由IL-13诱导的粒细胞在体内向肺部移动。用生理盐水或MIG对由IL-13处理的小鼠进行静脉内处理，30分钟后进行第二次剂量的IL-13处理。结果如图8所示，数据表示处理后BALF中的嗜酸性粒细胞和嗜中性粒细胞的平均值和标准差，以及代表性实验(n＝2)。
气管内施用给幼Balb/c小鼠IL-13也诱导明显的嗜酸性粒细胞在肺部的募集。IL-13的施用剂量为4微克。两天后，给小鼠静脉内注射MIG(1微克)，然后是第二次剂量的IL-13(10微克)，再次是气管内施用。三天后，测定BALF的细胞含量。
参看图8，与用生理盐水预处理的小鼠(对照，Sal IV/IL-13IT)相比(17.8±5.0×103(n＝4只小鼠))，用MIG(MIG IV/IL-13 IT)预处理的由IL-13处理的小鼠的BALF的嗜酸性粒细胞降低(4.2±2.7×103(n＝4只小鼠))(p＝0.003)。与用生理盐水预处理的小鼠(对照，Sal IV/IL-13 IT)相比(13.2±3.6×104(n＝4只小鼠))，用MIG处理后用IL-13处理的小鼠的BALF的嗜酸性粒细胞也降低(5.1±3.7×104(n＝4只小鼠))(p＝0.02)。这些数据表明静脉内MIG抑制由多种刺激引起的嗜酸性粒细胞到肺部的募集应答。发现MIG还抑制肺中嗜中性粒细胞的水平，表明了MIG阻断白细胞运动(trafficking)更具体地为粒细胞向肺部的移动的普遍能力。由于IL-13被认为是哮喘发病机理中的中心和关键的细胞因子，因此MIG阻断IL-13作用的能力具有医疗优势。
MIG抑制由OVA诱导的嗜酸性粒细胞在肺部的募集
为了确定在OVA诱导的实验型哮喘模型中药物施用MIG是否可以下调嗜酸性粒细胞在肺部的募集，对OVA敏化的小鼠进行一次鼻内OVA或生理盐水攻击。确定在过敏原攻击前30分钟静脉内施用的MIG对抑制白细胞在肺部募集的能力。图5表明MIG抑制由过敏原诱导的嗜酸性粒细胞在肺部的募集，并在体内起到嗜酸性粒细胞抑制剂的作用。图5a表示在鼻内OVA攻击之前30分钟用静脉内生理盐水或MIG(1微克)处理的OVA攻击的小鼠的代表性实验(n＝2)，每次实验每组中有4只小鼠。图5B表示MIG中和增加了抗原诱导的嗜酸性粒细胞在肺部的募集。用腹膜内注射500微克抗MIG抗体或同种型相配的对照抗体(Ctl-Ab)对OVA攻击的小鼠进行处理。结果来自有代表性的实验(n＝2)，每次试验每组有2-4只小鼠。图5A和5B的数据代表气道嗜酸性粒细胞的平均值和标准差。
由OVA攻击的对照小鼠(注射盐水)表明BALF中总的白细胞数增加。BALF中的嗜酸性粒细胞从9.1±4.0×102(IV盐水，IN盐水)增加到1.7±0.4×104(IV盐水，IN OVA)(p＝0.08)。BALF中的总白细胞从5.3±0.7×104(n＝3)增加到10.2±2.1×104(n＝4)。BALF中的嗜中性粒细胞从8.1±4.4×103增加到4.7±1.4×104(p＝0.05)。
在OVA攻击之前30分钟施用MIG的小鼠降低了BALF中的嗜酸性粒细胞。与在OVA攻击之前接受生理盐水的小鼠(IV盐水，IN OVA)相比，在OVA攻击之前接受MIG的小鼠(IV MIG，IN OVA)表明BALF中的嗜酸性粒细胞降低了70％(p＝0.0009)。这种减少特异于嗜酸性粒细胞，在OVA攻击之前接受MIG的小鼠没有减少BALF嗜中性粒细胞或淋巴细胞(数据未给出)。这种减少还特异于MIG；与在OVA攻击之前接受生理盐水的小鼠相比，在OVA攻击之前接受细胞因子JE(1微克)的小鼠没有任何变化(数据未给出)。
与药物施用MIG抑制体内嗜酸性粒细胞迁移对比，评估了内源性表达的MIG的能力。可以预料如果MIG减少或不存在，OVA攻击的小鼠将表明嗜酸性粒细胞在BALF的募集增加。在鼻内OVA攻击之前24小时，给OVA敏化的小鼠施用抗鼠MIG(500微克)。然后评估嗜酸性粒细胞在BALF的募集。结果示于图5B。
用OVA攻击的IgG对照处理的小鼠增加了嗜酸性粒细胞在气道的募集。对照小鼠中的BALF中的嗜酸性粒细胞为5.0±4.5×102(IP生理盐水，IN生理盐水)，接受对照抗体的小鼠中的BALF中的嗜酸性粒细胞为1.2±0.2×104(IP CTL-Ab，IN OVA)。用抗MIG抗体处理的小鼠的BALF中的嗜酸性粒细胞比用同种型对照处理的小鼠的多两倍。OVA攻击之后，用同种型对照处理的小鼠的BALF中的嗜酸性粒细胞为1.2±0.2×104，而用抗MIG处理的小鼠的BALF中的嗜酸性粒细胞为3.3±0.4×104。
MIG直接结合到鼠嗜酸性粒细胞
通过评估MIG是否体外结合到嗜酸性粒细胞来确定MIG对嗜酸性粒细胞作用的本质。从IL-5转基因小鼠的脾脏制备嗜酸性粒细胞制备物；这些小鼠的脾脏中具有大量的嗜酸性粒细胞，并作为鼠嗜酸性粒细胞的便利来源。将脾细胞暴露于四种剂量(100nM-1μM)MIG中的一种。通过使用抗MIG抗血清，用流式细胞术评估MIG对脾细胞嗜酸性粒细胞的结合。如图6A所示，MIG结合到嗜酸性粒细胞的表面并削弱嗜酸性细胞活化趋化因子-2信号转导。MIG以剂量依赖性方式结合到IL-5转基因小鼠的鼠嗜酸性粒细胞表面。相比，阴影柱状图表示趋化因子不存在时没有结合。图6B表示MIG没有诱导CCR3内化。用缓冲液(实线)、嗜酸性细胞活化趋化因子-2(点划线)或MIG(破折线)孵育后，分析在嗜酸性粒细胞上的表面CCR3。阴影柱状图表示来自同种型相配的对照的结果。图6C表示在MIG预处理之后，由嗜酸性细胞活化趋化因子-2诱导的嗜酸性粒细胞中的p44/42(Erk1和Erk2)的磷酸化增强。在指定的时间和剂量的缓冲液、MIG和/或嗜酸性细胞活化趋化因子-2孵育细胞。通过Western印迹分析测定p44/42的磷酸化。结果来自有代表性的试验(n＝2)。
与没有暴露于MIG或其它细胞因子的嗜酸性粒细胞相比，增加MIG剂量使更多的MIG结合到嗜酸性粒细胞表面。将嗜酸性粒细胞暴露于500nM和1μM MIG，结果表明MIG结合以剂量依赖性方式增加。作为阴性对照，嗜酸性粒细胞暴露于细胞因子JE，所述JE是鼠嗜酸性粒细胞非正常表达的CCR2的配体。即使没有检测到CXCR3在鼠嗜酸性粒细胞表面表达，MIG与嗜酸性粒细胞的结合也大于JE与嗜酸性粒细胞的结合(数据未给出)。
为了确定在嗜酸性粒细胞中CCR3是否为MIG受体，测定MIG与生物素化的嗜酸性细胞活化趋化因子-1竞争性结合嗜酸性粒细胞的能力。虽然未标记的嗜酸性细胞活化趋化因子-1或者嗜酸性细胞活化趋化因子-2能够与生物素化的嗜酸性细胞活化趋化因子-1竞争结合嗜酸性粒细胞，但是剂量高达10μM的未标记MIG不能抑制结合CCR3配体(数据未给出)。由于MIG和CCR3的相互作用导致MIG与具有CCR3内化的嗜酸性粒细胞的结合降低嗜酸性粒细胞，因此在促进明显的CCR3内化的情况下，用由嗜酸性细胞活化趋化因子-2预处理的嗜酸性粒细胞测定MIG结合的作用。在这种情况下，MIG结合没有被抑制(数据未给出)。因此，与Loetscher et al.(J.Biol.Chem.276：2986(2001)给出的提议相反，MIG抑制嗜酸性粒细胞反应的能力不仅仅与CCR3的竞争性拮抗作用有关。
趋化因子激活受体引起了一连串细胞内信号转导和多个磷酸化事件。在将人嗜酸性粒细胞暴露于CCR3配体之后，促分裂原活化蛋白(MAP)激酶被磷酸化并被激活。因此，可以确定MIG对CCR3配体诱导的信号转导的作用。特别地，在用MIG预处理或不用MIG预处理的情况下，在暴露于嗜酸性细胞活化趋化因子-2的嗜酸性粒细胞中分析了两种MAP激酶(p44 MAP激酶磷酸化Erk1和p42 MAP激酶磷酸化Erk2)的磷酸化活性。结果如图6C所示的Western印迹。
在对照嗜酸性粒细胞中(暴露于嗜酸性细胞活化趋化因子-2而没有MIG预处理)，p44和p42引起的磷酸化在2分钟时达到最大，然后嗜酸性细胞活化趋化因子-2暴露10分钟后下调。只暴露于MIG(而不暴露于嗜酸性细胞活化趋化因子-2)时，在任何剂量(50nM-100nM)MIG下，p44和p42都没有引起磷酸化。图6C表示用50nM MIG预处理的作用。与暴露于嗜酸性细胞活化趋化因子-2的嗜酸性粒细胞相比，暴露于嗜酸性细胞活化趋化因子-2之前用MIG预处理的嗜酸性粒细胞显示出Erk1和Erk2磷酸化均增加。
MIG抑制嗜酸性粒细胞中的功能性反应
用MIG对嗜酸性粒细胞进行预处理，然后用嗜酸性细胞活化趋化因子-1(10nM)进行处理。嗜酸性粒细胞的嗜酸性细胞活化趋化因子激活使四唑氮蓝(nitrobluetetrazolium)阳性(NBT+)细胞增加，所述(NBT+)细胞显示超氧阴离子及相关的活性氧。如图6D所示，MIG(100nM)预处理抑制了94％由嗜酸性细胞活化趋化因子诱导的(NBT+)嗜酸性粒细胞。结果表示阳性细胞的百分率，其中误差bars表示平均值±标准差，n＝3。
MIG抑制嗜酸性粒细胞对不同化学引诱剂的反应
考虑到近期发现用OVA敏化和攻击后CCR3缺陷型小鼠的BALF嗜酸性粒细胞嗜酸性粒细胞增多降低约50％，MIG对由过敏原诱导的肺部嗜酸性粒细胞嗜酸性粒细胞增多的抑制是出入意料的。因此，除了抑制嗜酸性粒细胞中的CCR3介导的通路，MIG还能抑制通过其它通路传送信号的化学引诱剂。由于IL-13诱导多种嗜酸性粒细胞化学引诱剂，因此这与MIG还阻断由IL-13诱导的嗜酸性粒细胞肺部募集的结果是一致的。
评估了MIG改变嗜酸性粒细胞向非CCR3配体的趋化性的能力。用100ng/ml或10000ng/ml剂量的MIG对嗜酸性粒细胞进行预处理。接着评价它们对血小板活化因子(PAF)(1μM)的趋化反应。图7表明MIG在体内抑制嗜酸性粒细胞向PAF迁移。用缓冲液或MIG预处理后，细胞能够向PAF迁移。数据(平均值和标准差)来自有代表性的实验(n＝2)，并表示朝1μm PAF迁移的嗜酸性粒细胞。
如图7所示，MIG预处理抑制由PAF引起的嗜酸性粒细胞迁移应答(p＝0.007)。因此，MIG诱导的抑制不限于CCR3配体，并改变嗜酸性粒细胞对多种化学引诱剂的反应。这些数据表明MIG诱导嗜酸性粒细胞的功能性无反应性(non-responsiveness)。由于不能归于特定的理论，这种无反应性可能是由于异源受体脱敏作用。
该组合物可以施用给哺乳动物如人，预防或应答特定的症状或疾病。例如，可以将该组合物施用给具有哮喘症状和/或过敏症状的病人。该组合物可以非系统地施用，如通过吸入、气雾剂、滴剂等；可以通过肠道或非肠道途径系统地施用，包括但不限于静脉注射、皮下注射、肌内注射、腹膜内注射、以液态或固态形式(片剂(可咀嚼的、可溶的等)、胶囊(硬质或软质凝胶)、丸剂、糖浆、酏剂、乳剂、悬浮剂等)口服。本领域技术人员所公知的是，该组合物可以含有赋形剂，所述赋形剂包括但不限于药学上可接受的缓冲剂、乳化剂、表面活性剂、电解质如氯化钠；肠内制剂可以含有触变剂(thixotropic agents)、矫味剂以及其它用于增强感观质量的成分。
组合物中施用给哺乳动物的MIG的剂量为大约10微克/千克-大约10毫克/千克。施用给哺乳动物的IP-10的剂量为大约10微克/千克-大约10毫克/千克。在一个实施方案中，施用的MIG或IP-10的剂量为大约30微克/千克。剂量依赖于施用途径。例如，静脉内施用可以是连续的或不连续的；注射施用可以间隔进行，如每天、每周、每月等；肠内制剂可以每天施用一次或两次等。可以依据施用计划或“需要”基础指定施用指导。
对于本领域普通技术人员来说，明显可以从上述附图和描述得出本发明的其它变体或实施方案。例如，还可以施用与MIG和/或IP-10同源的线性肽，所述线性肽展现出与MIG和/或IP-10(MIG和/或IP-10的类似物)相似的功能活性。因此，不能将以上实施方案理解为对本发明范围的限制。
Claims (50)
1、一种抑制嗜酸性粒细胞募集或嗜酸性粒细胞功能中的至少一种的方法，该方法包括将包含药物有效量的具有嗜酸性粒细胞募集抑制活性或嗜酸性粒细胞功能抑制活性的分离的细胞因子的药物组合物给患者施用来抑制嗜酸性粒细胞募集或嗜酸性粒细胞功能，所述嗜酸性粒细胞功能选自由受体表达、受体内化、信号转导、迁移、脱敏、脱粒、介质释放、氧化酶活性及其组合所组成的组中。
2、根据权利要求1所述的方法，其中所述分离的细胞因子选自由干扰素γ诱导的单核因子(MIG)、IFN-γ-诱导型10kDa蛋白(IP-10)及其组合所组成的组中。
3、根据权利要求1所述的方法，其中所述分离的细胞因子为从MIG或IP-10得到的肽。
4、根据权利要求1所述的方法，其中所述分离的细胞因子为与MIG或IP-10同源的蛋白。
5、根据权利要求1所述的方法，其中所述组合物施用给患有嗜酸性粒细胞增多的个体。
6、根据权利要求1所述的方法，其中信号传导激酶功能被扰乱。
7、根据权利要求1所述的方法，其中Erk1或Erk2被扰乱。
8、根据权利要求1所述的方法，其中在肺、气管、气道、支气管肺泡灌洗液、心脏或皮肤中的至少一个中的迁移被改变。
9、一种减轻由过敏原诱导的哺乳动物嗜酸性粒细胞嗜酸性粒细胞增多的方法，该方法包括将药物组合物施用给暴露于过敏原的哺乳动物来减轻由过敏原诱导的嗜酸性粒细胞嗜酸性粒细胞增多，所述药物组合物包含药物有效量的分离的干扰素γ诱导的单核因子(MIG)和/或IFN-γ-诱导型10kDa蛋白(IP-10)。
10、根据权利要求9所述的方法，其中气道、肺、气管、支气管肺泡灌洗液或血液中的嗜酸性粒细胞增多减少。
11、根据权利要求9所述的方法，其中受过敏影响的身体部分中的嗜酸性粒细胞增多减少。
12、根据权利要求11所述的方法，其中所述身体部分选自由皮肤、眼睛、鼻、消化道及其组合所组成的组中。
13、根据权利要求9所述的方法，其中所述哺乳动物为人。
14、一种治疗方法，该方法包括施用给个体含有有效量的足以抑制嗜酸性粒细胞对化学引诱剂的反应的分离的嗜酸性粒细胞抑制性细胞因子的药物组合物嗜酸性粒细胞。
15、根据权利要求14所述的方法，其中所述细胞因子选自由干扰素γ诱导的单核因子(MIG)、IFN-γ-诱导型10kDa蛋白(IP-10)及其组合所组成的组中。
16、根据权利要求14所述的方法，其中所述化学引诱剂选自由嗜酸性细胞活化趋化因子-1、嗜酸性细胞活化趋化因子-2、嗜酸性细胞活化趋化因子-3、MCP-2、MCP-3、MCP-4、MCP-5、RANTES、MIP-1a及其组合所组成的组中。
17、根据权利要求14所述的方法，其中所述细胞因子的施用剂量为大约10微克/千克-大约10毫克/千克。
18、根据权利要求14所述的方法，其中所述细胞因子的施用剂量为大约30微克/千克。
19、根据权利要求14所述的方法，其中所述细胞因子被系统施用。
20、根据权利要求14所述的方法，其中所述细胞因子的施用途径选自由静脉内、鼻内、气管内、皮下、肌肉内、口服、腹膜内及其组合所组成的组中。
21、一种缓解方法，该方法包括将包含一定量的抑制嗜酸性粒细胞的分离细胞因子的药物组合物施用给暴露于过敏原或具有嗜酸性细胞综合征的患者来减轻患者气道或组织中至少一种中的炎症。
22、根据权利要求21所述的方法，其中所述抑制嗜酸性粒细胞的细胞因子为干扰素γ诱导的单核因子(MIG)和/或IFN-γ-诱导型10kDa蛋白(IP-10)。
23、根据权利要求21所述的方法，其中所述过敏原导致的症状选自由过敏性鼻炎、哮喘、湿疹及其组合所组成的组中。
24、一种抑制肺部嗜酸性粒细胞募集的方法，该方法包括施用给哺乳动物包含药物有效量的分离的干扰素γ诱导的单核因子(MIG)和/或IFN-γ-诱导型10kDa蛋白(IP-10)的药物组合物来抑制肺部嗜酸性粒细胞募集。
25、根据权利要求24所述的方法，其中预防性施用给患哮喘的个体。
26、根据权利要求24所述的方法，其中治疗性施用给患哮喘的个体。
27、一种治疗方法，该方法包括给患者服用药物组合物制剂，所述药物组合物含有至少一种能够负向调节患者肺部炎症细胞的细胞因子。
28、根据权利要求27所述的方法，其中所述患者患哮喘、过敏或高嗜酸性粒细胞嗜酸性粒细胞疾病。
29、一种治疗方法，该方法包括施用给患嗜酸性粒细胞嗜酸性粒细胞增多的个体以药物可接受制剂的最高剂量为大约10毫克/千克的细胞因子，所述细胞因子选自由干扰素γ诱导的单核因子(MIG)、IFN-γ-诱导型10kDa蛋白(IP-10)及其组合所组成的组中。
30、根据权利要求29所述的方法，其中细胞因子改变的嗜酸性粒细胞功能选自由迁移、组织募集、受体结合、信号转导、脱粒、介质释放及其组合所组成的组中。
31、根据权利要求29所述的方法，其中募集是对过敏原和/或趋化因子的反应。
32、根据权利要求29所述的方法，其中MIG或IP-10施用给哮喘患者。
33、根据权利要求29所述的方法，其中MIG或IP-10施用给过敏患者。
34、一种缓解患者哮喘的方法，该方法包括施用给哮喘患者含有干扰素γ诱导的单核因子(MIG)的药物组合物，从而抑制患者的与IL-13有关的哮喘反应。
35、一种药物组合物，该药物组合物包含于药物可接受制剂中的分离的干扰素γ诱导的单核因子(MIG)和/或IFN-γ-诱导型10kDa蛋白(IP-10)，并且MIG和/或IP-10的量足以在过敏原存在的情况下改变嗜酸性粒细胞活性。
36、根据权利要求35所述的组合物，其中所述量为大约10微克/千克-大约10毫克/千克的剂量。
37、一种药物组合物，该药物组合物包含抑制至少一种由嗜酸性粒细胞诱导的刺激因素引起的嗜酸性粒细胞功能应答的细胞因子。
38、根据权利要求37所述的组合物，其中所述细胞因子选自由嗜酸性粒细胞干扰素γ诱导的单核因子(MIG)、IFN-γ-诱导型10kDa蛋白(IP-10)或其组合组成的组中。
39、根据权利要求37所述的组合物，其中所述刺激因素选自由过敏原、趋化因子、细胞因子或其组合所组成的组中。
40、根据权利要求37所述的组合物，其中所述刺激因素选自由嗜酸性细胞活化趋化因子-1、嗜酸性细胞活化趋化因子-2、嗜酸性细胞活化趋化因子-3、血小板活化因子及其组合所组成的组中。
41、根据权利要求37所述的组合物，其中所述刺激因素是过敏反应、感染、自发性嗜酸性粒细胞嗜酸性粒细胞增多及其组合。
42、一种药物组合物，该药物组合物包含于药物可接受制剂中的分离的与Th1有关的趋化因子，并且趋化因子的量足以在过敏原存在的情况下改变嗜酸性粒细胞活性。
43、一种药物组合物，该药物组合物含有于药物可接受制剂中的细胞因子，所述细胞因子选自由干扰素γ产生的重组单核因子(MIG)、重组的IFN-γ-诱导型10kDa蛋白(IP-10)及其组合所组成的组中，并且细胞因子的量足以抑制嗜酸性粒细胞功能。
44、一种降低体内嗜酸性粒细胞化学引诱的方法，该方法包括施用给患者细胞因子的药物可接受制剂，所述细胞因子基本上没有嗜酸性粒细胞化学引诱活性并对嗜酸性粒细胞化学引诱或嗜酸性粒细胞活化活性中的至少一种有负面影响。
45、如权利要求44所述的方法，其中所述基本上没有嗜酸性粒细胞化学引诱活性的细胞因子为Th1细胞因子。
46、如权利要求44所述的方法，其中所述基本上没有嗜酸性粒细胞化学引诱活性的细胞因子为MIG和IP-10中的至少一种。
47、如权利要求44所述的方法，其中Th2细胞因子被负面影响。
48、如权利要求44所述的方法，其中嗜酸性细胞活化趋化因子-1、嗜酸性细胞活化趋化因子-2、嗜酸性细胞活化趋化因子-3、MCP-1、MCP-2、IL-4、IL-13和血小板活化因子(PAF)中的至少一种被负面影响。
49、一种选择性治疗患者的与嗜酸性粒细胞有关的疾病的方法，该方法包括施用给患者Th1相关的趋化因子，从而抑制嗜酸性粒细胞募集或嗜酸性粒细胞功能。
50、如权利要求49所述的方法，其中所述Th1相关的趋化因子为MIG或IP-10。
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Cited By (3)
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