CN1820018A - 由蛇毒腺分泌的肽的药物组合物制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明以制备用于开发Evasins及其结构和/或构型类似物在慢性退行性病变中的应用的药物组合物的方法为特征。本发明还以利用环糊精、其衍生物、脂质体以及可生物降解的聚合物和/或这些系统的混合物制备Evasins肽及其结构和/或构象类似物的药物组合物及相关产品的方法为特征。本发明也以鉴定与作用于缓激肽新陈代谢以及血管紧张素II形成的效应无关的、促成了这些肽在慢性退行性紊乱中的作用机制的新的生物化学和生理药理学机制为特征。在现有技术中，还未见有使用包含在环糊精、脂质体、生物可降解聚合物及其衍生物中的Evasins及其类似物用于研究和治疗的高血压或其它心血管或慢性退行性病变的应用。这使得本发明表现出了作为用于研究和治疗这些病理及其并发症的新的和更为有效的备选方案的特征。本发明还以包含在环糊精中的这些肽及其类似物在向大鼠给药时增强的效力为特征。这表现出这些肽及其类似物利用本发明的组合物增强的生物可处理性。

Description

由蛇毒腺分泌的肽的药物组合物制剂
本发明以用于开发在慢性退行性病变中的应用和/或相关产品的、由蛇毒腺特别是巴西具窍蝮蛇(Bothrops Jararaca)分泌的肽即血管肽酶(vasopeptidase)抑制剂肽Evasins、其类似物、衍生物的药物组合物及相关产品的制备方法为特征。
本发明的特征还在于包含在环糊精或其衍生物中、或者结合或包含在药理学上可接受的载体和/或赋形剂中的血管肽酶抑制剂肽即Evasins肽及其结构和/或构象类似物和衍生物的药物组合物和/或相关产品。本发明的另一个特征在于包含或不包含在环糊精中的Evasins、其类似物及衍生物在控释系统如脂质体和生物可降解的聚合物及其混合物中的微囊化。
本专利中所主张的药物组合物包括单独或者混合或结合了至少一种药理学活性制剂的、包含在环糊精或其衍生物中的Evasins、或者结合或包含在载体和/或药理学上可接受的赋形剂中的Evasins；或者在控释系统如脂质体和生物可降解的聚合物和/或其混合物中微囊化与否的、包含或不包含在环糊精中的Evasins。
本发明也包括鉴定在慢性退行性病变的研究和治疗中具有应用的Evasins的其它生物化学作用机制。
除Evasin 7a之外，Evasins、其类似物及衍生物的药物组合物以对中性内肽酶(微摩尔级的Ki)和血管紧张素I转换酶(纳摩尔级的Ki)不同的抑制活性为特征。其中，这些药物组合物另一个特征在于当包含在环糊精或其衍生物中时，Evasins效应的生物可处理性(biodisponibility)、持续时间和/或效力增大。
其中，当作为非限制性的实例通过口服或静脉路径给予时，所述药物组合物提供了包含在环糊精或其衍生物中的Evasins增大的生物可处理性、持续时间和/或效力。
在世界上的多数国家中，15％到25％的成年人口经历高血压(MacMahon，S.等Blood pressure，stroke，and coronary heart disease，Lancet335：765-774，1990)。心血管风险随着血压水平一起增加。血压越高，中风和冠状动脉事件的风险越高。高血压被视作冠状动脉、颅脑和肾脏血管病的主要风险因子，是导致成人死亡和伤残的主要原因。
世界范围内，心力衰竭是导致60到80岁年龄的患者入院的主要原因。人口自身老龄化构成了发生率增大的因素，尽管1％从25到54岁年龄的个体经历心力衰竭，然而在年长的个体中，此发生率高得多，对于超过75岁的那些，达到了大约10％(Kannel，W.B.等Changingepidemiological features of cardiac failure，Br.Hear J 1994；72(suppl)：S3-S9)。
依照其临床性征，心力衰竭为极限性的疾病；当恶化时，患者的生活质量下降，而在更为晚期的病例中，它具有恶性疾病的特征，第一年的死亡率水平超出60％，甚至现今也是如此(Oliveira，M.T.Características clínicas e prognóstico de pacientes cominsuficência cardíaca congestiva avancada，Faculdade de Medicina，USP 1999)。据当前估计工业社会中多于1500万的人患有此病；例如，仅在美国，据估计病例的数目自1973到1990年间增长了450％(Kannel，W.B.等Changing epidemiological features of cardiac failure，Br.Hear J 1994；72(suppl 3)：S3-S9)。
高血压是复杂、多因素并且是非常普遍的疾病，是造成多种毒副作用以及高发病率/死亡率的原因(Kaplan，N.M.Blood pressure as acardiovascular risk factor：prevention and treatment.JAMA.275：1571-1576，1996)。业已在一般人群和特定组别中进行了许多关于评价其控制效力的研究，旨在获得更好的理解。没有广泛的相关风险因子(糖尿病、肥胖、吸烟)的非药物和/或药物干预的血压控制可能降低或者甚至消除通常由冠状动脉疾病所致的血液高血压长期治疗的关乎死亡率减小的益处(Wilson，P.W.等Hypertension，the riskfactors and the risk of cardiovascular disease.Raven Press.94-114)。
高血压是心血管动脉硬化症主要的促成因素(The fifth Report ofthe Joint National Committee on detection，evaluation，andtreatment of High Blood Pressure.National Institute of Health(VJNC).Arch.Intern.Med.153：154-181，1994)。依据统计，每4个美国人中就有1人为或者将成为高血压患者；据估计478万人经历心力衰竭。每年诊断出40万个新病例，导致80万人入院；治疗花费178亿美元。
在巴西，来自SUS[联合卫生体系]的数据显示1997年心力衰竭是导致心脏病住院治疗的主因；政府在治疗上花费R$1亿5000万，此金额相当于卫生开支的4.6％(Filho，Albanesi F.Insuficiênciacardíaca no Brasil.Arq.Bras.Cardiol，71：561-562，1998)。
在生理和病理条件下，肾素-血管紧张素系统(RAS)都负责调节血压、心血管稳态和水电解质平衡(Santos，R.A.S.；Campagnole-Santos，M.J.；Andrade，S.P.Angiotens in-(1-7)：an update.RegulatoryPeptides，91：45-62，2000)。血管紧张素II(Ang II)是RAS的主要效应肽，具有血管加压、肾上腺类固醇合成刺激、增生(成纤维细胞、血管平滑肌)和肥大(心肌炎)作用。其形成路径包括肝脏中血管紧张素原的产生以及justaglomerular系统中肾素的产生。这些物质释放在血流中，在这里血管紧张素为肾素水解，从而形成Ang I，当处于肺中时，其将经历血管紧张素转换酶(ACE)的作用并产生Ang II。Ang II反过来将作用于远离其产生部位的靶器官(Santos，R.A.S.；Campagnole-Santos，M.J.；Andrade，S.P.Angiotensin-(1-7)：anupdate.Regulatory Peptides，91：45-62，2000)。
最近发现，除了产生循环Ang II的系统之外，不同的组织含独立的Ang II产生RAS系统，显然是局部作用的。组织RAS组分见于血管壁、子宫、胰腺的外分泌部分、眼睛、心脏、肾上腺皮质、睾丸、卵巢、脑下垂体前叶和间叶、松果体以及脑。这些组织SRA的功能尚不十分清楚(Ardaillou，R.；Michel，J.B.The relative roles of circulatingand tissue renin-angiotensin systems.Nephrol.Dial.Transplant.，14：283-286，1999)。RAS的局部作用可能发生在产肽的细胞中(内部分泌和自分泌功能)、邻近的细胞上(旁分泌功能)或在远离产生部位的位置上(内分泌功能)。
近来的评论表明RAS重要的外围和中心作用可由更小的血管紧张素肽序列介导，包括Ang III[Ang-(2-8)]、Ang IV[Ang-(3-8)]和Ang-(1-7)。我们可以认为Ang I[Ang-(1-10)]和Ang II[Ang-(1-8)]都可经历生物转化过程，从而产生了生物学活性的血管紧张素肽“家族”(Santos，R.A.S.；Campagnole-Santos，M.J.；Andrade，S.P.Angiotensin-(1-7)：an update.Regulatory Peptides，91：45-62，2000)。
Ang-(1-7)连同Ang II是主要的RAS效应因子。两个重要的特点将Ang-(1-7)与Ang II区分开来：第一个具有高度特异性的生物学作用，且其形成路径不依赖于ACE(Santos，R.A.S.；Campagnole-Santos，M.J.；Andrade，S.P.Angiotensin-(1-7)：an update.RegulatoryPeptides，91：45-62，2000)。Evasins通过增大Ang I的浓度并通过抑制ACE减小其代谢，将有利于Ang-(1-7)的形成。
治疗高血压的首要目的不仅在于减小开支，而且在于通过改变生活质量以及需要时药物的使用来预防靶器官的损伤(The Fifth Reportof The Joint National Committee on detection，evaluation，andtreatment of High Blood Pressure.National Institute of Health(VJNC).Arch.Intern.Med.153：154-181，1994)。
万一在为期3至6个月的生活方式改变之后无应答，还有万一靶器官受损，则指示了药物治疗(左心室肥大、心肌局部缺血、中风或高血压性视网膜病)。表现出收缩压超出160mmHg或舒张压超出100mmHg的所有患者都应当进行药理学治疗，而不论其它因素是否存在或不存在(Report the Canadian Hypertension Society.Consensus Conference.3.Pharmacological treatment of essential hypertension.Xan.Med.Assoc.J.149(3)：575-584，1993)。
不过，在70年代和80年代期间，抗高血压药成为高血压治疗中的重要工具(Ménard，J.Anthology of renin-angiotensin system：A onehundred reference approach to angiotensin II antagonist.J.Hypertension 11(suppl 3)：S3-S11，1993)。在最近的四十年间，药理学研究产生了新型的治疗高血压的药物：60年代期间的利尿剂，70年代的β-阻滞剂，钙通道阻滞剂，血管紧张素I I受体拮抗剂以及血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂。
利尿剂可划分为三类：噻嗪类、袢利尿剂以及潴钾利尿剂。噻嗪类等包括氯噻嗪和氢氯噻嗪，其在治疗第一天内使血压降低大约10到15％，此降低与二代胞外容积的下降以及利尿和利尿钠的增强有关。然后，在6个月后，血浆容量和心搏量回复正常值，而血压的下降与周围血管阻力的下降有关(Frolich，E.Current approaches in thetreatment of hypertension，405-469)。它们常用作为单一疗法，在黑人患者以及低剂量时在老年患者中表现出提高的应答。发现如下的副作用：对胰岛素的外周抗性增加、甘油三酸酯增加、LDL增加、低血钙症、高尿酸血。速尿(Furosemide)、布美他尼(Bumetamide)和氨苯蝶啶(Trianterene)在袢利尿剂中表现出比噻嗪类利尿药更高的效力。它们主要地作用于亨利氏袢的髓质和皮质部分。它们表现噻嗪类利尿剂相同的副作用。潴钾利尿剂是具有微弱利尿作用的药物，很少单独使用。其中，可举出的有阿米洛利(Amiloride)、氨苯蝶啶(Trianterene)和螺内酯(Spirolactone)。
β-阻滞剂，包括阿替洛尔(Atenolol)和Naolol在内，被分类为β-1和β-2。抗高血压作用的机制尚不完全清楚，不过，这基本上得到了β-阻滞剂抑制突触前β受体，从而防止去甲肾上腺素的释放的证据的支持。副作用包括：通过降低肾流，对胰岛素的应答改变，低血糖昏迷延长，甘油三酸酯增加以及肌酸酐增加。
钙通道阻滞剂已用了至少25年(Frolich，E.D.CurrentApproaches in the Treatment of Hypertension，405-469，1994)。根据其药理学作用，它们可被划分为两大类：对于刺激传导具有增强作用的那些阻滞剂如异搏定(Verapamil)和地尔硫卓(Diltiazem)，以及具有突出的血管扩张作用的那些阻滞剂如二氢吡啶衍生物(硝苯地平(Nifedipine)等)(Frolich，E.D.，Hypertension.Adult ClinicalCardiology Self Assessment Program(ACCSAP)，6：3-19，1995)。副作用包括下肢浮肿和心动过速。
转换酶抑制剂主要地通过抑制血管紧张素I转换为血管紧张素II而起作用。因而，本质上使得血管紧张素II的血管收缩作用最小化。初步研究表明第一个临床使用的抑制剂壬肽抗压素(Evasin-9a)当静脉内给药时具有抗高血压活性，然而当口服给予时，它是无活性的，因此限制了其用途。我们目前已知ACE是具有多重作用的酶，也就是说，它作用于数个底物。除了作为二肽酶作用于血管紧张素I和缓激肽，它也能够破坏利尿钠肽的肽链，表明该酶能够作用于若干组织。ACE在循环及组织Ang-(1-7)的失活中也具有重要作用。这种循环肽的浓度类似于Ang II的浓度并在ACE抑制后上升。这种上升可以是前体(Ang I)增加以及ACE降解下降的结果(Santos，R.A.S.；Campagnole-Santos，M.J.；Andrade，S.P.Angiotensin-(1-7)：an update.RegulatoryPeptides，91：45-62，2000)。
现有技术中找到如下涉及奥帕曲拉(omapatrilat)活性的专利：US2002013307-A1，Kothari和Desai；US2002004500-A1(WO200174348-A2，AU200187289-A)，Bristol-Myers Squibb Co(BRIM)和Reeves等；US6166227-A(WO200003981-A2，AU9948528-A)，Bristol-Myers Squibb Co(BRIM)和Godfrey等。然而，该血管肽酶抑制剂化合物及其类似物因为对中性内肽酶(NEP)的高抑制活性而表现出相关副作用(血管性水肿和咳嗽)。
当作为单一疗法给药时，ACEI很出色，因为ACE抑制剂导致60到70％的高血压患者血压相对快速地降低(Ganong，W.Neuropeptides incardiovascular control.J.Hypertens 2(suppl 3)：15-22，1984)。它们一般可被很好地耐受，然而其使用可能导致副作用和不良反应，其中有些相对严重，并且包括血管神经性水肿、皮疹和干咳(8到10％)、血液不凝以及阳痿。
血管紧张素I转换酶抑制剂或血管肽酶抑制剂业已用于或建议用于预防或治疗许多疾病，包括肿瘤、急性心肌梗塞、中风、左心室肥大、糖尿病性血管病、周围局部缺血、心肌梗死和动脉粥样硬化后的心绞痛和渐进性心力衰竭、糖尿病和血管发生(Yasumaru M，Tsuji S，TsujiiM，Irie T，Komori M，Kimura A，Nishida T，Kakiuchi Y，Kawai N，Murata H，Horimoto M，Sasaki Y，Hayashi N，Kawano S，HoriInhibition of angiotensin II activity enhanced the antitumoreffect of cyclooxygenase-2inhibitors via insulin-like growthfactor I receptor pathway；Cancer Res.2003 Oct 15；63(20)：6726-34；Kinuya S，Yokoyama K，Kawashima A，Hiramatsu T，Konishi S，ShukeN，Watanabe N，Takayama T，Michigishi T，Tonami N.Pharmacologicintervention with angiotensin II and kininase inhibitor enhancedefficacy of radioimmunotherapy in human colon cancerxenografts.J Nucl Med.2000 Jul；41(7)：1244-9.；Volpert OV，WardWF，Lingen MW，Chesler L，Solt DB，Johnson MD，Molteni A，Polverini PJ，Bouck NP.Captopril inhibits angiogenesis and slowsthe growth of experimental tumors in rats.J Clin Invest.1996Aug1；98(3)：671-9.；Kowalski J，Herman ZS.Captopril augmentsantitumor activity of cyclophosphamide in mice.Pol J Pharmacol.1996May-Jun；48(3)：281-5.；Kowalski J，Belowski D，Madej A，Herman ZS.Effects of thiorphan，bestatin and captopril on theLewis lung carcinoma metastases in mice.Pol J Pharmacol.1995Sep-Oct；47(5)：423-7.；Kowalski J，Belowski D，Wielgus J，GabryelB，Klin M，Herman ZS.Effect of captopril and thiorphan on theproliferation of human neoplastic cell lines and their influenceon cytostatic activity of interferon alpha or cytotoxic activityof doxorubicin.Arch Immunol Ther Exp(Warsz).1995；43(1)：47-50。然而，现有技术中尚未发现任何要求保护应用于退行性变慢性病研究和治疗的包含在环糊精中或否的、与药理学上可接受的载体或赋形剂配制的Evasins的药物组合物的专利。
开发Ang II拮抗剂的首次尝试始于70年代初，且集中于Ang II-类似肽的开发。首先是肌丙抗增压素(saralasin)，即1-肌氨酸，8-异亮氨酸血管紧张素II，然后是其它肽。然而，它们不为临床所接受，因为它们表现出部分激动剂活性。1982年，开发出了头两个AT1受体和非肽拮抗剂(S-8307和S-8308)，但，尽管具有高特异性且无激动剂活性，表现出对Ang II受体的弱结合。在这两个母体化合物的分子结构历经数次改变旨在改善强度、保持选择性和实现药代动力学性能之后，开发出了新的强效且高特异性的口服产品即洛沙坦(Losartan)。自那以后，开发出了若干其它非肽拮抗剂，如坎地沙坦(landesartan)、依贝沙坦(Irbesartan)、缬沙坦(Valsartan)、替米沙坦(Telmisartan)、依普沙坦(Eprosartan)、他索沙坦(Tasosartan)和佐拉沙坦(Zolasartan)。本发明的药物组合物和制剂以使用药学上组合的且可接受的赋形剂、Evasins及类似物的混合物为特征。制剂可用赋形剂或其混合物制备。赋形剂的实例包括水、生理盐水、磷酸缓冲液、Ringer’s液、葡萄糖液、Hank’s液、含聚乙二醇与否的生物相容性盐溶液。其它有用的制剂包括增粘剂，如羧甲基纤维素钠、山梨糖醇或葡聚糖。赋形剂液可以含有低量的添加剂，如提高等渗性和化学稳定性的物质或缓冲液。缓冲液的实例包括磷酸缓冲液、碳酸氢盐缓冲液和Tris缓冲液；防腐剂的实例包括硫柳汞、间甲酚或邻甲酚、福尔马林和苯甲醇。标准试剂可以是液体或固体。从而，在非液体制剂中，赋形剂可包括葡萄糖、人血清白蛋白、防腐剂等，给药前可向其中加入水或无菌生理盐水。
本发明还以制备含Evasins、其类似物及衍生物的控释系统为特征。满意的控释系统包括但不限于，环糊精、生物相容性的聚合物、生物可降解的聚合物、其它聚合物基质、胶囊、微胶囊、微粒、丸剂、渗透泵、扩散装置、脂质体、脂球体以及经皮给药系统。本发明的其它控释组合物包括在向动物给药后原位形成固体和凝胶的液体。
US4598070(CA1215359，DK356684，EP135044，ES8506757，GR82322，JP60025967)Mashiro，Kawahara等(1986)建立了涉及Tripudine(抗高血压药)和环糊精(α-环糊精及β-环糊精)之间的包含化合物的发明。曲帕胺在水中微溶，从而使用环糊精允许获得更为可溶的化合物。该发明也采用了一些表征技术，例如：差异扫描量热法(DSC)和X-射线衍射。
US 4666705De Crosta，Mark.T.等(1987)报道了基于高血压药控释的发明。使用的是卡托普利，一种ACE抑制剂(非肽类活性定点ACE抑制剂)，因为该抑制剂表现出快速吸收和2小时的半寿期。为了延缓释放，该发明建立在含卡托普利连同聚合物或共聚物的片剂的基础上。所用的聚合物为聚乙烯吡咯烷酮(PVP)，且技术为干法制粒。所获得的结果是药物在体内的留置时间增长(4到16小时)。
US5519012Fercej-Temeljoov，Darja等(1996)建立了基于抗高血压药即1，4-二氢吡啶和甲基-(β-环糊精及其它衍生物如(羟基化β-环糊精)的新包含化合物的发明。
US 5728402Chen，Chih-Ming等(1998)公开了基于通过包含由卡托普利和水凝胶组成的内相以及另一外层胃中不可溶相的药物组合物的方式控释药物的发明。该发明旨在提高药物的吸收时间，当单独给药时，其为1小时。
US 5834432(AU5990796，CA2221730，EP0828505，WO09639164，JP115073625)Rodgers，Katlen Elizabeth等(1998)使用AT2受体激动剂以加速创伤治愈。
US6087386(WO9749392A1)Chen，Tzyy-Show H.等(2000)公开了存在于含依那普利(ACE抑制剂)和洛沙坦(AII拮抗剂)的药物组合物中的发明，其包括一层洛沙坦钾和另一层依那普利马来酸盐。该发明旨在改善药理学作用，减小副作用以及提高吸收时间。
US6178349 Kieval，Roberts S.等(2001)建立了基于通过神经刺激释放药物用于治疗心血管疾病的装置。该装置包括与神经相连的电极，可植入的脉冲发生器以及包含待给药物的贮器。使用期间，电极和药物释放刺激神经，其反过来又影响对心血管系统的控制。
药物可经化学修饰以释放其性能，例如生物分布、药代动力学和溶解度。业已使用多种方法来提高药物的溶解度和稳定性，包括使用有机溶剂、乳化剂、脂质体、pH调整、化学变化以及药物与合适胶囊剂如环糊精、脂质体的复合和在生物可降解聚合物中的微囊化。
环糊精由Vilers于1891年作为受软化芽孢杆菌(Bacillusmacerans)淀粉酶作用的淀粉降解产物首次分离。1904年，Schardinger将其表征为环状寡糖。1938年，Frudenberg等报道环糊精包含通过(α1→4)键合相连的葡萄糖单位。1948年，Freudenberg及同事观察到环糊精能够形成包含化合物或复合物，并且后来如French等制备了纯环糊精的合成方法。自1954年起，Cramer等对环糊精与其它化合物的复合物的形成进行了系统研究。从1955到1960年，进行了有关环糊精与药物的包含化合物形成的首例研究。这些研究正在日本、匈牙利、法国、意大利及其它国家深入地持续着。
环糊精是通过淀粉的酶促降解获得的。所述方法包括如下阶段：酶的生产和纯化，淀粉的酶促转化，以及环糊精的回收和分离。所涉及的酶为环糊精糖基转移酶(CGT)。该酶是从数种微生物得到的，但主要是软化芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌(B.megatherium)、嗜热脂肪芽孢杆菌(B.stereothermophilus)以及肺炎克雷伯氏菌(Klebsiellapneumoniae)(Korolkovas，A. molecular e cyclodextrinas：propriedades e terapêuticas．ENLACE Farmalab，2/91，Ano 5，Vol.II，p.6-15)。
环糊精为包括6、7或者8个glucopiranose单位的环状寡糖。由于空间相互作用，环糊精即CDs形成具有内部非极性腔的截顶圆锥体形状的环状结构。它包括可被区域选择性地修饰的化学上稳定的化合物。环糊精(主体)与多种疏水分子(客体物质)形成复合物，完全或部分地将其包含在腔中。如Szejtli，J.，Chemica1 Reviews，(1998)，98，1743-1753.Szejtli，J.，J.Mater.Chem.，(1997)，7，575-587所述，CDs业已用于药物、香水及芳香剂的增溶和封装。根据[Rajewski，R.A.，Stella，V.，J.Pharmaceutical Sciences，(1996)，85，1142-1169]中描述的对环糊精详细的毒性、诱变性、致畸性和致癌性研究，它们具有低毒性，尤其是羟丙基-(-环糊精，如Szejtli，J.Cyclodextrins：Properties and applications.Drug Investig.，2(suppl.4)：11-21，1990中所报道的那样。要不是高浓度的有些衍生物破坏红血球，这些产品一般不构成健康风险。将环糊精作为食品中添加剂使用已在诸如日本和匈牙利等国家中得到批准，而在法国和丹麦可用于更多的具体应用。所有这些特征都意味着渐增的发现新应用的动机。
除环糊精之外，也使用生物可降解的聚合物，其通过控释装置降低体内的药物吸收速度。在这些系统中，药物被掺入到聚合物基质中，它是药物在微球体或纳米球体中封装时建立起来的，所述微球体或纳米球体在体内成日、成月或者甚至成年地以小且可控的日常剂量释放药物。
早已在控释系统中试验过多种聚合物。它们中有许多是其物理性能的函数，例如：聚(氨基甲酸酯)是由于其弹性，聚(硅氧烷)或硅树脂为良好的分离剂，聚(甲基-甲基丙烯酸酯)是由于其物理强度，聚(乙烯醇)是由于其疏水性和阻力，聚(乙烯)是因为其硬度和不渗透性(Gilding，D.K.Biodegradable polymers.Biocompat.Clin.Implat.Mater.2：209-232，1981)。
然而，为用于人类，材料应当是化学惰性的且不含杂质。释放系统中使用的有些材料包括：聚(2-羟基-乙基甲基丙烯酸酯)，聚丙烯酰胺，基于乳酸的聚合物(PLA)和基于乙醇酸的聚合物(PGA)以及相应的共聚物(PLGA)，以及聚(酸酐)，例如基于癸二酸的聚合物(PSA)以及与疏水聚合物的共聚物。
现有技术涉及多个关于制备脂质体的专利[美国专利4,552,803，Lenk；美国专利4,310,506，Baldeschwieler；美国专利4,235,871，Papahadjopoulos；美国专利4,224,179，Schneider；美国专利4,078,052，Papahadjopoulos；美国专利4,394,372，Alfaiate；美国专利4,308,166，Marchetti；美国专利4,485,054，Mezei；以及美国专利4,508,703，Redziniak；Woodle和Papahadjopoulos，MethodsEnzymol.171：193-215(1989)]。
单层脂质体具有单层膜，其含有水性容积[Huang，Biochemistry8：334-352(1969)]，而多层脂质体具有若干层同心膜[Bangham et Col.，J.Mol.Biol.13：238-252(1965)]。基于脂质体的载体被提出用于许多种药理学活性的物质，包括抗生素、激素和抗肿瘤制剂[Medicalapplications of liposomes(D.D.Lasic，D.Papahadjopoulos Ed.)，Elsevier Science B.V.，Holland，1998]。
已在现有技术中找到脂质体的其它制备方法[有关综述，参见例如Cullis等，in：Liposomes，From Biophysics to Therapeutics(M.Ostro，ed.)，Marcel Dekker(New York)，1987，pp.39-72；Woodle和Papahadjopoulos，Methods Enzymol.171：193-215(1989)；Liposome technology(G.Gregoriadis ed.)，CRC Press，Boca Raton，FL，1993]。
Bangham的方法[J.Mol.Biol.13：238-252(1965)]产生“普通的多层脂质体”(MLVs)。该“普通”MLVs在水性区室间可具有不等的溶质分布，从而在所述区室间表现出渗透压差异。Lenk et Col.(美国专利4,522,803；US 5,030,453和US 5,169,637)、Fountain等(美国专利4,588,578)、Cullis等(美国专利4,975,282)以及Gregoriadis等(专利WO99/65465)发现了用于制备在区室间具有基本上相等的溶质分布的多层脂质体的方法。不同区室间相等的溶质分布意味着更大的药物封装效率，以及更低的渗透压差异，于是使得这些MLVs比普通MLVs更为稳定。
单层脂质体可通过MLVs的超声处理[见Paphadjopoulos等(1968)]或通过经由聚碳酸酯膜挤出[Cullis et Col.(美国专利5,008,050)和Loughrey et Col.(美国专利5,059,421)]生产。例如，满意的脂质包括磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油、心磷脂、胆固醇、磷脂酸、鞘脂、糖脂、脂肪酸、固醇、磷脂酰乙醇胺、其公认的聚合或非聚合形式的可聚合磷脂、以及它们的混合物。
本发明的脂质体组合物以囊泡的修饰为特征，从而提供针对器官或细胞的特异性。脂质体定向基于解剖学因素和所涉及的机制而分类。解剖学分类是建立在例如器官特异、细胞特异或细胞器特异的选择性水平的基础上的。从机制的观点来看，定向可归类为被动或主动。
被动定向利用了传统脂质体为含窦状毛细血管(sinusoidalcapillaries)的器官中网状内皮系统的细胞所俘获的天然倾向。本发明的脂质体是作为改善的药物载体通过(LEE)法在空间上建立的(也称之为“PEG-脂质体”)，这是因为其在血流中的清除速度下降[Lasic和Martin，Stealth Liposomes，CRC Press，Inc.，Boca Raton，Fla.(1995)]。LEE为脂质体，其表面覆盖有聚合物，该聚合物优选为聚乙二醇(PEG)，与其中一个磷脂共价缀合，并在囊泡双层外侧产生疏水云团。该位阻屏障延缓了调理素对脂质体的识别，并允许LEE在血流中保留比传统脂质体更长的时间[Lasic和Martin，Stealth Liposomes，CRCPress，Inc.，Boca Raton，Fla.(1995)；Woodle et Col.，Biochim.Biophys.Acta 1105：193-200(1992)；Litzinger et Col.，Biochim.Biophys.Acta 1190：99-107(1994)；Bedu Addo，et Col.，Pharm.Res.13：718-724(1996)]，且提高了封装制剂的药理学功效，如有些化疗药物[Lasic和Martin，Cautela Liposomes，CRC Press，Inc.，Boca Raton，Fla.(1995)]以及生物活性肽[Allen T.M.In：Liposomes，New Systems，New Trends in their Applications(F.Puisieux，P.Couvreur，J.Delattre，J.-P.Devissaguet Ed.)，Editions de la Santé，
Figure A20038010818700231
1995，pp.125]所显示的那样。
该领域的研究证明不同的因素影响LEE的循环半寿期，并且理想地，囊泡直径应当低于200nm，其中5％比例的PEG具有大约2,000Da的分子量[Lasic和Martin，Cautela Liposomes，CRC Press，Inc.，BocaRaton，Fla.(1995)；Woodle et Col.，Biochim.Biophys.Acta1105：193-200(1992)；Litzinger et Col.，Biochim.Biophys.Acta1190：99-107(1994)；Bedu Addo et Col，Pharm.Res.13：718-724(1996)]。
主动定向涉及通过其与结合剂如单克隆抗体、糖、糖脂、蛋白、聚合物的结合改变脂质体，或者通过改变脂质体的组成或大小以使之定向于不同于传统脂质体积聚部位的器官和细胞。例如，参见Remington′sPharmaceutical Sciences，Gannaro，A.R.，ed.，Mack Publishing，18th edition，pp.1691-1693。
现有脂质体应用技术中见到的延长肽效应的实例是制备含Ang-(1-7)(LAng)的脂质体，单侧微注射(到吻腹侧髓质(RVLM))。自4天前起始到12天后结束，通过遥测每10分钟对自由运动的镇定大鼠测量血压10秒钟。LAng微注射在上午阶段产生显著的增压效应，并维持5天。在第3天测量到最高的MBP(114±4mmHg)，其显著有别于第0天所测量到的(100±3mmHg)。正如所预期的那样，Lvaz中MBP并不显著改变(第3天的94±5mmHg相对于第0天的90±5mmHg)。另外，在第1、2和3天，Lang组中的上午MBP显著高于Lvaz组。与上午MBP相反，夜晚MBP并不显著受LAng微注射的影响。早先的研究(Fontes MA，Pinge MC，Naves V，Campagnole-Santos MJ，Lopes OU，Khosla MC，Santos RAS Cardiovascular effects produced bymicroinjection of angiotensins and angiotensin antagonists intothe ventrolateral medulla of freely moving rats.Brain Res.1997Mar 7；750(1-2)：305-10)确定在BRVL侧微注射相似剂量(25到50ng)的游离Ang-(1-7)(未封装)，导致大约10分钟的15mmHg的增加。此效应的短时长度是由于肽在体内的高度代谢[Silva-Barcellos et Col.，Hypertension，38(6)：1266-71(2001)。
本发明以使用见于巴西具窍蝮蛇毒液和组织中的至少21个缓激肽增强肽(通常称为BPPs或缓激肽增强肽)为特征，其氨基酸序列已通过质谱确定或已由在此蛇的非毒腺组织中表达的这些分子的母体化合物的cDNA推断(称为Evasins或内源血管肽酶抑制剂)。
            命名                         序列
ID 1        EVASIN-5a                    ＜EKWAP
ID 2        EVASIN-5b                    ＜EWPRP
ID 3        EVASIN-5c             ＜EKFAP
ID 4        EVASIN-6a             ＜ESWPGP
ID 5        EVASIN-7a             ＜EDGPIPP
ID 6        EVASIN-9a             ＜EWPRPQIPP
ID 7        EVASIN-9b             ＜ESWPGNIPP
ID 8        EVASIN-10a            ＜ESWPGPNIPP
ID 9        EVASIN-10b            ＜ENWPRPQIPP
ID 10       EVASIN-10c            ＜ENWPHPQIPP
ID 11       EVASIN-10d            ＜ESWPEPNIPP
ID 12       EVASIN-11a            ＜EWPRPTPQIPP
ID 13       EVASIN-11b            ＜EGRAPGPPIPP
ID 14       EVASIN-11c            ＜EGRAPHPPIPP
ID 15       EVASIN-11d            ＜EGRPPGPPIPP
ID 16       EVASIN-11e            EARPPHPPIPP
ID 17       EVASIN-12a            ＜EGWAWPRPQIPP
ID 18       EVASIN-12b            ＜EWGRPPGPPIPP
ID 19       EVASIN-13a            ＜EGGWPRPGPEIPP
ID 20       EVASIN-13b            ＜EGGLPRPGPEIPP
ID 21       EVASIN-13c            ＜EGGWPRPGPQIPP
这些肽多数具有C-末端PX1X2PP结构基序，其中X1可以是任何氨基酸，而X2典型地是异亮氨酸(I)残基，且N-末端氨基酸通常是因焦谷氨酸(＜E)的存在而被封闭。相应的合成肽被测试为重组ACE的C位点和N位点抑制剂，并且是由豚鼠分离的回肠中缓激肽收缩活性以及大鼠中降压活性两者的增强因子。作为由豚鼠分离的回肠中缓激肽收缩作用以及大鼠中血压降压作用的增强因子，最具选择性和有效的是含5到13个氨基酸残基、具有在500和1700道尔顿之间的质量的那些肽。所述活性分子被化学修饰，从而得到在品质上具有相似特征的其它肽。
其中以化学式表示的Evasins即5到13个氨基酸的寡肽，是下文所述的那些：
化学式  序列                                                      命名
I       ＜E1aa2aa3aa4P5                                      Evasin-5a，b，…，n
II      ＜E1aa2aa3aa4aa5P6                                  Evasin-6a，b，…，n
III     ＜E1aa2aa3aa4aa5P6P7                               Evasin-7a，b，…，n
IV      ＜E1aa2aa3P4aa5aa6P7P8                            Evasin-8a，b，…，n
V       ＜E1aa2aa3aa4aa5aa6aa7P8P9                       Evasin-9a，b，…，n
VI      ＜E1aa2aa3aa4aa5P6aa7aa8P9P10                   Evasin-10a，b，…，n
VII     ＜E1aa2aa3aa4aa5aa6P7aa8aa9P10P11              Evasin-11a，b，…，n
VIII    ＜E1aa2aa3aa4aa5aa6aa7P8aa9aa10P11P12         Evasin-12a，b，…，n
IX      ＜E1aa2aa3aa4aa5aa6aa7aa8P9aa10aa11P12P13    Evasin-13a，b，…，n
其中：
P总是脯氨酸。其它的可以是由三字母或一字母代码表示的L-或D-氨基酸及衍生物。
天门冬氨酸(Asp，D)                 谷氨酸(Glu，E)
丙氨酸(Ala，A)                     精氨酸(Arg，R)
天门冬酰胺(Asp，D)                 苯丙氨酸(Phe，F)
甘氨酸(Gly，G)                     谷氨酰胺(Gln，Q)
组氨酸(His，H)                     异亮氨酸(Ile，I)
亮氨酸(Leu，L)                     赖氨酸(Lys，K)
脯氨酸(Pro，P)                     丝氨酸(Ser，S)
酪氨酸(Tyr，Y)                     苏氨酸(Thr，T)
色氨酸(Trp，W)                     缬氨酸(Val，V)
氨基丁酸(Abu)                      氨基异丁酸(Aib)
二氨基丁酸(Dab)                    二氨基丙酸(Dpr)
己酸(ε-Ahx)                       异哌啶酸(Isonipecotic acid)(Isn)
焦谷氨酸(Pyr，＜E)
四氢异喹啉-3-羧酸(Tic)
丁基-甘氨酸环己基丙氨酸(Cha)
瓜氨酸(Cit)                        抑制素和衍生物(Sta)
苯基甘氨酸(Phg)                羟脯氨酸(Hyp)
高丝氨酸(Hse)                  正亮氨酸(Nle)
正缬氨(Nva)                    鸟氨(Orn)
青霉素丙氨(Pen)                肌氨酸(Sar)
iethylalanine(Thi)[SIC]
＜E1焦谷氨酸为N-末端氨基酸；
aa2是氨基酸，对于化学式I和II，典型地为W、S或K，对于化学式III，典型地为D，而对于化学式IV至IX，典型地为A、W、S、G或N；
aa3对于化学式I至III，典型地为W、P、F或G，而对于化学式IV至IX，典型地为A、P、G、W或R；
aa4是氨基酸，对于化学式I至III，典型地为P、A或R，而对于化学式IV至IX，典型地为P、L、Q、A、R或W；
aa5是氨基酸，对于化学式II和III，典型地为G、R或I，而对于化学式IV至IX，典型地为T、P、G、H、R、W或E；
aa6是氨基酸，对于化学式V、VII、VIII和IX，典型地为Q、N、P、T、H、R或G；对于化学式IV，其通常为I、A、T或Y；
aa7是氨基酸，对于化学式VI、VIII和IX，典型地为P、N、Q、G或R，而对于化学式V，通常为I、A、T或Y；
aa8是氨基酸，对于化学式VII和IX，典型地为Q、P或G；对于化学式VI，其通常为I、A、T或Y；
aa9是氨基酸，对于化学式VIII，典型地为P、Q、N或G，而对于化学式VII，通常为I、A、T或Y；
aa10是氨基酸，对于化学式IX，典型地为Q和E，而对于化学式VIII，通常为I、A、T或Y；
aa11对于化学式IX通常为I、A、T或Y；
本发明的另一个特点在于通过包括如下的化学改变来修饰既作为血管肽酶抑制剂、又作为对内皮细胞和血管平滑肌的有所作用的所有EVASINs分子的可能性，目的是改善其药代动力学和对参与心血管病理学的不同靶分子的作用特异性性能：
1)局部构象改变：通过用D-型氨基酸取代L-型氨基酸，导致引入反向β-“转角”结构(“发夹”)，或者通过引入α-取代的氨基酸，从而使得多肽链轴向于α-螺旋结构或延展构象或β-“转角”，例如引入α-氨基异丁酸。也提供了α-氨基酸的N-甲基取代，从而限制酰胺键的行动，消除氢键的形成，影响主多肽链的扭转角度，并允许形成顺式肽键。另一种修饰是用非酰胺共价键取代肽酰胺键，从而保护此键抗蛋白酶的作用。
2)整体构象改变：通过环化，从而稳定二级结构。选择被半胱氨酸或其它含有例如各自带有β，β-二甲基青霉素丙氨酸类似物的巯基的有机化合物取代的两个氨基酸，可以是EVASINs序列或其类似物中的任何氨基酸残基，它们彼此被至少两个多肽链氨基酸残基分隔开。例如，则两巯基残基之间有利于S-S键的形成，从而形成环肽。环化也可以通过在不含羧基和氨基的多肽之间形成内酰胺键或肽键，或者通过有利于肽环化的任何其它化学操作实现。
3)氨基酸侧链的改变(χ-“约束”(χ-“constraints”))：α-氨基酸侧链扭转角度的确定可能允许更好地调整多肽到其结合位点上的拓扑变化，例如，用β-甲基-2’，6’-二甲基酪氨酸(TMT)取代酪氨酸，其能够限定针对互作位点的优选构象。建议的改变在Victor J.Hruby发表于Nature，1，847-858，2002上的综述中谈及并举例说明。
本发明以利用减小胃肠道(GIT)降解的环糊精及其衍生物获得寡肽释放系统EVASINs为特征，导致肽在生物系统中的生物利用度提高，口服制剂尤为如此。另外，存在其它施用形式象：静脉内、肌内、局部、肺部吸入、鼻内、口内或利用生物可降解的聚合物如PLA和PLGA或不加限制的这些实例的混合物作为控释的反底片(diapositive)。
本发明还以使用提高肽生物利用度的脂质体的寡肽Evasins控释系统为特征。脂质体为脂质囊泡，其在此分子中包括内部水性区室，例如，药物可封装于其中，目的是在向个体给药脂质体后实现缓慢的药物释放。
以前没有描述过包含在环糊精或其衍生物中、微囊化到如PLA或PLGA的生物可降解的聚合物或其混合物中以及脂质体中的寡肽Evasins或其结构和/或构象类似物的应用。本发明以使用三种不同的技术为特征，即寡肽Evasins及其类似物分子封装到环糊精中、以及微囊化到生物可降解的聚合物或脂质体和/或其混合物中，当与未配制的相比时，口服组合物和制剂中Evasins的生物可处理性增加。
以前没有描述过Evasins及其结构类似物和/或构象类似物的药物组合物和/或制剂，其特征在于利用Evasins 7a、10c、11e、12b及其各自的类似物和衍生物作为分子模型用于开发基于肽化合物和/或非肽化合物的药物和/或药物组合物或制剂。
本发明的另一个特点是根据研究和治疗温血(hot blood)动物高血压、其它心血管疾病及其并发症(非限制性的实例：急性心肌梗塞、中风、左心力衰竭、糖尿病性血管病、周围局部缺血、心绞痛和心肌梗死后的渐进性心力衰竭和动脉粥样硬化)、肿瘤、糖尿病、精子游动性、精子发生的阻滞、肾病、阳痿、胃肠以及妇科疾病、血管发生、毛发损失、血液病和血管成形术(血管成形术后的再狭窄、血管内protese)的用途，使用Evasins及其类似物和衍生物的药物组合物和/或制剂，特征在于在控释系统如脂质体和生物可降解聚合物PLA、PLGA和/或混合物中微囊化与否的、Evasins及其类似物和衍生物与环糊精、其衍生物间的包含和/或结合化合物。
其中要求保护的药物组合物包括包含在环糊精或其衍生物中的Evasins，或单独或者至少混合或结合了一种药理学活性制剂的、结合或包含在药学上可接受的载体和/或赋形剂中的Evasins、其类似物及衍生物，或者包含在环糊精中与否的、在控释系统如脂质体和PLA、PLGA生物可降解聚合物和/或其混合物中微囊化与否的Evasins、其类似物及衍生物。本发明也包括鉴定在慢性退行性病变的研究和治疗中具有应用的Evasins的其它生物化学作用机制。
除Evasin 7a之外的Evasins及其类似物和衍生物的药物组合物，其中特征在于提供对中性内肽酶(微摩尔级的Ki)和血管紧张素I转换酶(纳摩尔级的Ki)不同的抑制活性。这些药物组合物和制剂的另一个特征在于当包含在环糊精中时，例如是口服制剂，提高所述肽效应的生物可处理性、持续时间和/或效力。
根据如下非限制性的实施例，可更好地理解本发明。
实施例1：EVASIN的合成、纯化和表征以及确定其对血管紧张素I转换酶催化部位的选择性抑制的酶促测定
该实施例描述了Evasins的合成、纯化、表征及对ECA C或N-末端位点的选择性抑制。寡肽根据方法学的现有技术合成。Boc策略是以Barany，G.& Merrifield，R.B.(Gross，E.& Meinhofer，J.，Eds.)(1980)，The Peptides：Analysis，Synthesis and Biology，vol.II，1，Academic Press，New York.2-Stewart，J.M.& Young，J.D.(1984)，Solid Phase Peptide Synthesis，Pierce Chemical Company，Rockford中描述的数据为基础的。
寡肽根据现有技术的方法学修饰。建议的改变在Victor J.Hruby发表于Nature杂志，1，847-858，2002上的综述中谈及并举例说明。
合成的Evasins在HPLC系统中纯化，且洗脱物质通过质谱分析。
纯化中所用的溶剂都是HPLC等级的，且所用的水是通过在Milli-Q系统中蒸馏和过滤获得的，其配备于滤筒上以保留盐和有机化合物。
对来自纯化的级分进行质谱分析，以确认纯化后Evasins的摩尔质量。
用于重组ACE抑制的酶测定利用底物Mca-Ala-Ser-Asp-Lys-DpaOH于25℃在50mM Hepes缓冲液(pH 6.8)、200mM NaCl和10μM ZnCl2中进行。反应通过在荧光计中测定λem＝390nm(λex＝340nm)处因ACE对底物的切割(S＝Km，40μM)提供的荧光增加予以持续监控。Evasins与酶在底物添加前预温育。
表1：Evasins对血管紧张素I转换酶C和N-末端催化部位活性抑制的测定
         ECA(nM)-Ki
  肽   C-末端   N-末端
  EVASIN-5a   1280   399
  EVASIN-7a   40000   70000
  EVASIN-9a   1   100
  EVASIN-10a   33   130
  EVASIN-10c   0，5   200
  EVASIN-11b   57   3000
  EVASIN-11c   40   2000
  EVASIN-11e   300   100
  EVASIN-12a   25   25
  EVASIN-12b   150   5
  EVASIN-13a   50   50
Evasins对ACE抑制的Ki值结果为nM的数量级。多数Evasins为C-末端位点的选择性抑制剂，例如Evasin-10c表现出0.5nM的Ki值，也就是说，对于此结构域的选择性要高400倍。而其它Evasins对N-末端位点表现出选择性抑制，例如利用Evasin-12b获得的Kis值对于N-末端和C-末端位点分别为5nM和150nM。
考虑到现有技术，证明了具有血管紧张素I转换酶遗传缺失的小鼠是不育的((Esther CR Jr，Howard TE，Marino EM，Goddard JM，Capecchi MR，Bernstein KE.Mice lacking angiotensin-convertingenzyme have low blood pressure，renal pathology，and reduced malefertility.Lab Invest.1996May；74(5)：953-65)且睾丸ACE对应于机体ACE的N-末端位点(Ramaraj P，Kessler SP，Colmenares C，Sen GCSelective restoration of male fertility in mice lackingangiotensin-converting enzymes by sperm-specific expression ofthe testicular isozyme.J Clin Invest.1998Jul 15；102(2)：371-8)，Evasin、其类似物及衍生物的药物组合物具有作为男性避孕药使用的潜力。因而，本发明也以环糊精有机-水或固体溶液混合物、或者来自烷基(alquil)、羟烷基(hydroxialquil)、羟丙基(hydroxipropil)及酰基的具有交联键的环糊精衍生物、或环糊精聚合物与待用作为男性避孕药的Evasins和/或其类似物的有机-水或固体溶液的混合为特征。在另一方面，对C-末端位点具有选择性的Evasins可能代表了有别于非选择性或对N位点选择性的抑制剂所代表的独特特征。
实施例2：用于确定EVASINS诱导的NEP抑制的酶测定
用于重组NEP抑制的荧光测定利用底物Abz-RL-EDDnp于37℃在50mM Tris-HCl缓冲液，pH 7.5中进行。反应通过在荧光计中测定λem＝418nm(λex＝318nm)处因NEP对底物的切割(Km＝8.4μM)提供的荧光增加予以持续监控。Evasins与酶在底物添加前预温育。
Evasins并非极强的NEP抑制剂，Evasins诱导的NEP抑制的Ki值结果为μM的数量级。最佳的抑制剂之一为Evasin-9a，其表现出86μM的Ki值。
表2：Evasin作用对中性内肽酶活性抑制的测定
  肽   NEP(μM)-Ki
  EVASIN-5a   550
  EVASIN-7a   492
  EVASIN-9a   86
  EVASIN-10c   253
  EVASIN-11b   476
  EVASIN-11c   589
  EVASIN-12a   106
  EVASIN-12b   150
  EVASIN-13a   473
抑制常数(Ki)值通过表观抑制常数(Ki(app))与底物Km之比确定(Salvesen and Nagase，1990).In：Proteolytic enzymes a praticalaproach.，Beynon和Bond编辑，Oxford University Press，England，87-88)。
上述结果证明所述物质对NEP的低亲和力，提示与本技术领域相关的血管肽酶抑制剂(例如奥帕曲拉)相比，间接效应如血管性水肿和咳嗽可能减少。
实施例3：EVASINS缓激肽增强活性试验-豚鼠分离的回肠中的生物学测定
利用缓激肽诱导的平滑肌收缩活性测试了合成肽的增强活性，并利用豚鼠分离的回肠制备物测定了UP值。UP相当于能够将单次缓激肽剂量的应答效应转变成等价的双倍剂量的Evasin浓度(nmol/mL制备物)。
利用了雌性豚鼠。在开始测定之前，将回肠保存在Tyrode溶液中。其次，于37℃将该回肠节段的一端长1.5至2.0cm束紧，放至含Tyrode盐水的玻璃杯底部所含的半环中，利用毛细管鼓入恒氧；另一端固定到事先校准过的杠杆上。维持压为1g，并记录豚鼠分离的回肠的收缩。以便确定样品对缓激肽的增强效应，绘制缓激肽作用于豚鼠分离的回肠的对数剂量应答曲线。缓激肽活性通过测量豚鼠分离的回肠的收缩测定，并且增强活性依据Shimuta等，Eur.J.pharmacol.70(4)，551-554(1981)就对标准缓激肽剂量的组织应答的增加表达。
在添加单次缓激肽剂量之前对Evasins单独进行测试和掺合(spiked)。样品稀释液利用去离子水在用前制备。将所测的应答插入到对数剂效曲线的线性部分，从而获得就对标准缓激肽剂量的制备物应答的增强而言的增强活性。TYRODE溶液：贮液I 20mL，贮液II 40mL，二苯胺溶液(1mg/mL)1ml，阿托品溶液(1mg/mL)1mL，5.60mM D-葡萄糖和H2O q.s.1L。该测定中所用的所有试剂都是分析级试剂。
所有增强了缓激肽在豚鼠分离的回肠中的收缩作用的Evasins，在从0.22到30nmols的浓度范围内使缓激肽的收缩效应加倍。
实施例4：EVASINs对麻醉大鼠血压的作用
在麻醉大鼠中测试了对缓激肽降压效应的增强活性。利用戊巴比妥钠(Hypnol_Cristália，50mg/kg，腹膜内)麻醉正常血压的雄性大鼠(WKY)，并置于控温板上，以维持体温在36.5℃和37℃之间。利用了偶联于生理学传感器的多种波动描记器。血压变动范围数值通过对由基线血压限定的面积进行积分获得，并将其与由对照测定获得的数值进行比较。在体内测定中，观察了Evasins对麻醉大鼠血压的缓激肽降压效应的增强活性。确定两个参数用于比较对麻醉大鼠血压的缓激肽增强效应(n＝5)：
1)对麻醉大鼠血压的缓激肽降压活性的增强效应的强度：此数值定义为在输注200nmol的增强剂后，由单次剂量的缓激肽所致的低压百分比(％)增长。2)增强效应时长：使对单次剂量缓激肽的增强效应降低50％所需的时间。
在麻醉大鼠中，通过静脉内注射稳定浓度的200nmole Evasin/大鼠，Evasins在40到340％的范围内增强了缓激肽的降压效应。观察到10分钟的最小时长，并且为将原始增强效应降低50％甚至要超过120分钟。
表3：Evasins对缓激肽作用于麻醉大鼠血压的降压效应的增强
  肽   Bk增强(％)   持续时间
  EVASIN-5a   102.5   10
  EVASIN-7a   41，8   120
  EVASIN-10c   195   95
  EVASIN-11b   164，3   90
  EVASIN-11c   67   28
  EVASIN-11e   41   35
  EVASIN-12b   340   40
  EVASIN-13a   45   30
实施例5：β-环糊精及其衍生物与EVASINS及其类似物之间的包含化合物的制备
该实施例代表了HP-β环糊精和比如非限制性的实例evasin 5a之间的包含化合物的特征描述。制剂以摩尔比的β-环糊精及其衍生物和Evasins及其类似物的水溶液制备(1∶1和1∶2)。对溶液混合物进行持续搅拌，以完全溶出β-环糊精。随后，在液氮温度下冰冻混合物，并进行24小时的冻干加工。利用物理化学技术描述如此获得的固体的特征。核磁共振是提供关于相互作用的主体/客体的相关信息的技术。
制剂以等摩尔比的环糊精和肽制备。下表显示了这样制备的包含化合物。对这些系统进行了生物学试验。
表4：进行生物学试验的环糊精和Evasins之间的包含化合物
  EVASIN   环糊精
  EVASIN-5a   β-环糊精
  EVASIN-7a   β-环糊精
  EVASIN-9a   β-环糊精
  EVASIN-10c   β-环糊精
  EVASIN-5a   HP-β-CD
  EVASIN-7a   HP-β-CD
  EVASIN-9a   HP-β-CD
  EVASIN-10c   HP-β-CD
  EVASIN-12b   HP-β-CD
在HB-β-CD和肽的溶液制备和NMR1H及13C谱模拟后，是包含化合物HB-β-CD/BPP-5a以及游离BPP-5a和游离HB-β-CD的NMR表征步骤。针对环糊精和主体分子BPP-5a的结构阐释的氢-1H NMR；针对BPP-5a结构的结构阐释的COSY、TOCSY、13C-DEPT135、HMQC；化学位错的变量分析-δ；纵向弛豫的时间测量RMN T1及NOESY实验(核磁欧氏效应光谱学)，旨在验证包含。δ和T1研究仅利用主体分子的氢元素作为探针，因为环糊精的氢信号是重叠的。
为对戊肽BPP-5a进行RMN结构阐释，采用特定游离氨基酸的RMN1H谱作为参照(THE SADTLER STANDARD SPECTRA.Sadtler ResearchLaboratories.1972)。由于分子以及其光谱的复杂性，有必要使用许多诸如一维诸如二维的RNM技术，也有必要使用400MHz的光谱仪。样品被溶于D2O中，它们一经转变为溶剂的氘原子，基于氢核磁共振的光谱作为羟基、酰胺基和氨基氢信号缺失的函数被极为简化。
根据有关Evasin-5a的相应模拟，分析了纯化合物的实际光谱，赋值(assign)如下：
1)由于氘化溶剂中杂质“H2O”的存在，NMR1H谱以及COSY，在4.8ppm处表现出强烈的信号。
2)“CH”基氢仅次于水信号；这些氢为肽键和官能团氨基酸之间的链键。
3)“CH2”基存在于包含在2.8-3.7ppm化学置换之间的区域内，这些基团与紧邻肽键的“CH”基键合。
4)在大约1.3-2.5ppm之间，可见到涉及属于若干官能团的“CH2”的多重谱。
5)在1.2ppm处，可见到涉及氨基酸丙氨酸片段的CH3基的双重谱。利用COSY，可观察到该基团与“CH”在4.6ppm处的标量耦合(四重谱)。
6)包含在从7.7到7.1ppm的范围内的化学置换之间的区域被赋值为芳基自旋体系(对应于氨基酸色氨酸片段)。
HP-β-CD谱表现出高度复杂性，难以赋值，即使是根据模拟光谱的时候也是如此。不过，有可能对下文提及的某些信号赋值：
在3.3到4.3ppm处的化学置换之间，由于“CH”基的碳原子与羟基键合，看到复杂的多重谱。在1.1到1.8ppm之间的化学置换区间内，可发现涉及羟丙基的信号。
关于包含化合物的NMR测定，比较了纯Evasin-5a谱，观察到清晰分离的谱线，在芳基区(δ≈7.7-7.1)内具有必然的化学置换变化。这是HP-β-CD与此肽该区相互作用的强指征。此现象是因无环糊精C1-01-C4氧原子配体的电子所致，其可导致肽中芳基电子分布的混乱。该结果提示芳基可能被封装到HP-β-CD腔中。
至于Evasin-5a，示于表1和2中(T1值)，观察到，一旦此核的T1变化比每次测量中所获得的标准偏差大得多，则仅有氢16和19具有显著变化。其它的氢分析提供的T1变化若与每次测量的标准偏差相比则是可疑的。
分析下表，观察到主体分子芳基氢驰豫时间T1的减少。这种改变提示在主体分子包含在环糊精腔中之后，客体分子的可动性减小，对称变化以及慢旋动力学。
表5：于200MHz测量的纯BPP-5a肽中某些1H核的纵向驰豫时间值
  组号   化学置换   驰豫时间(T1)
  19   7,5052ppm   0,7603±0,0078s
  16   7,4068ppm   1,2927±0,0122s
  21   4,3592ppm   0,4147±0,0343s
  14   3,1657ppm   0,1778±0,0031s
  24   2,8750ppm   0,5969±0,0025s
  9或10   1,8857ppm   0,2864±0,0090s
表6：于200MHz测量的HP-β-CD/BPP-5a系统中某些1H核的纵向驰豫时间值
  组号   化学置换   T1/s   ΔT1/s
  19   7,5353ppm   0,5342±0,0046   -0,2261
  16   7,4063ppm   0,7127±0,0043   -0,5800
  21   4,3760ppm   0,3533±0,0670   -0,0614
  14   3,2020ppm   0,1518±0,0129   -0,0260
  24   2,8890ppm   0,5182±0,0011   -0,0787
  9或10   1,6040ppm   0,2634±0,0046   -0,0230
利用β-CD或BPP-5a/HP-β-CD NOESY实验，与其它RNM数据相加，有可能确定客体分子在环糊精腔内部的空间排布。以D8＝650ms对BPP-5a进行NOESY实验。此为独特的观察到表明HP-β-CD和作为非限制性实例的BPP-5a氢之间的空间邻近性的交叉相互关系的D8值。
实施例6：EVASINs对非麻醉高血压大鼠血压的影响
在测定前一天，对动物进行股动脉和静脉插管外科手术。用乙醚麻醉大鼠，并以仰卧位置于外科手术板上。切开小的皮肤切口，从而分离肌肉组织以定位股血管神经束。将插管通过股静脉插入到下腔静脉中以给药药物，并通过股动脉插入到腹动脉中以记录心血管参数。插入后，利用手术线将插管系到股血管神经束上。其次，借助于套管针将插管在皮下定向于肩胛骨腰，此处将其从腹膜中取出，并用缝线系住。动脉插管用于记录心血管参数而静脉插管用于给药药物。
在股动脉和静脉插管一天后记录血压和心率。测定用自由运动的非麻醉动物进行。通过计算机利用数据采集系统(BIOPAC)监控大鼠的脉搏动脉压(PAP)、平均动脉压(MAP)和心率(HR)。在所有的实验期间收集数据。
在药物给药前，监控大鼠的PBP、MBP和HR。在快速注射(bolusinjection)总量为0.2mL(0.9％NaCl液)的Evasin之后，监控所得的降压效应和效应时长。在此测定法中，测试了每种肽的标准剂量(70nmol/100g体重)(n＝4)。Evasin-10c为最有效的肽，具有最佳的降压效应，引起平均血压降低-29.5±9.50mmHg，然后是Evasin-9a，MBP降低-27.0±1.50mmHg。Evasin-5a和Evasin-7a引起最高的MBP降低，分别为-19.17±4.36mmHg和13.00±2.78mmHg。
当比较效应时长时，观察到Evasin-7a为表现出持续长于100分钟的降压效应的肽。Evasin-9a和Evasin-10c就分别为84和94分钟的效应时长而言是类似的。Evasin-5a的效应时长短；给药37分钟后，MAP回复至基线值。
实施例7：封装在环糊精中的EVASINs对清醒高血压大鼠血压的影响
本实施例描述了Evasin-5a和羟丙基-β-环糊精(HPβCD)之间的包含化合物对高血压大鼠血压的给药效应。在测定前一天，对动物进行股动脉和静脉插管外科手术。用乙醚麻醉大鼠，并以仰卧位置于外科手术板上。切开小的皮肤切口，从而分离肌肉组织以定位股血管神经束。将插管通过股静脉插入到下腔静脉中以给药药物，并通过股动脉插入到腹动脉中以记录心血管参数。插入后，利用手术线将插管系到股血管神经束上。其次，借助于套管针将插管在皮下定向于肩胛骨腰，此处将其从腹膜中取出，并用缝线系住。
在股动脉和静脉插管一天后记录血压和心率。测定用自由运动的非麻醉动物进行。通过计算机利用数据采集系统(BIOPAC)监控大鼠的脉搏动脉压(PAP)、平均动脉压(MAP)和心率(HR)。在所有的实验期间收集数据。
在药物给药前，为期60分钟监控大鼠的PBP、MBP和HR。在快速注射总量为0.2mL(0.9％NaCl液)的Evasin之后，监控所得的降压效应和效应时长。此测定中使用了0,071nmol/100g体重的标准剂量，n＝6。
当比较由游离Evasin-5a以及包含在HPβCD中的Evasin-5a给药所获得的结果时，在游离或封装形式的戊肽给药之间没有观察到最高降压效应的差异，MAP降低分别为23±4.2mmHg和22±3.3mmHg。我们观察到效应时长的显著差异，其中封装的Evasin-5a能够使游离肽的效应时长比游离肽的持续时间提高大于4倍，分别为140和38分钟。
实施例8：EVASINS对清醒高血压大鼠(SHR和TGR(mREN2)L27血压的比较效应
本实施例非限制性地描述了Evasin-5a对不同株系高血压大鼠血压的输注效应。
在测定前一天，对动物进行股动脉和静脉插管外科手术。用乙醚麻醉大鼠，并以仰卧位置于外科手术板上。切开小的皮肤切口，从而分离肌肉组织以定位股血管神经束。将插管通过股静脉插入到下腔静脉中以给药药物，并通过股动脉插入到腹动脉中以记录心血管参数。插入后，利用手术线将插管系到股血管神经束上。其次，借助于套管针将插管在皮下定向于肩胛骨腰，此处将其从腹膜中取出，并用缝线系住。
在股动脉和静脉插管一天后记录血压和心率。测定用自由运动的非麻醉动物进行。通过计算机利用数据采集系统(BIOPAC)监控大鼠的脉搏动脉压(PAP)、平均动脉压(MAP)和心率(HR)。在所有的实验期间收集数据。
在药物给药前，为期60分钟监控大鼠的PBP、MBP和HR。在900μg/100g体重/小时溶于0.9％NaCl液的Evasin 5a输注期间和之后(n＝6)，登记心血管参数。两株系中evasin-5a的给药都引起同样的MAP下降，SHR和TGR(mREN2)L27分别为28±2.7mmHg和34±0.9mmHg。然而，观察到输注后时间持续效应中的相关差异，SHR中阻滞超过6小时，而TGR中仅为1小时。这些差异表明了Evasins 5a作用的生物化学机制的重要变化，具有不同程度的肾素血管紧张素系统激活。
实施例9：通过遥测术系统测量的EVASINs急性给药对SHR血压的影响
遥测术系统被用于测量收缩和舒张压、平均血压和心率。该监控系统包含可植入的射频装置、感受器面板、基质以及具有用于数据采集和分析的软件的计算机(Braga等，2002)。
使用雄性SHR大鼠。在外科手术前动物保持禁食24小时。在2.5％2，2，2-三溴乙醇(1mL/100g体重)麻醉下，将大鼠以仰卧位置于外科手术板上，剪开腹侧腹部区，并用碘酒无菌清洗。在中腹线处切开大约2cm的切口，以取得对髂骨(iliac)分叉区的良好视角。取出肠从而允许完全接近腹部血管。借助于棉签和纱布巧妙地取出沿血管床的脂肪和结缔组织，直至腹主动脉能够得以确认并从腔静脉中适当地分离出来。用以生理盐水弄湿的粗丝线绕住主动脉，从而防止血流，并用以90°角弯曲的针(25×8)切开小切口。其次，利用辅助钳将接受生物相容性凝胶的聚乙烯导管装置插入到动脉中。清洗并干燥导管进口区，并施用微量的组织胶。在组织胶上方放置小块纤维素纸，以将导管固定在主动脉中。用磁铁开启装置电池，并利用AM收音机(未调制)记录主动脉中导管位置的典型声音。缝合腹部的肌肉组织，通过其硅树脂卡固定装置。其次，缝合皮肤。利用碘酒进行无菌处理，然后肌内给药0.1mL的pentabiotic。将动物置于单个的笼内，并保持在温暖条件下，直至完全由麻醉恢复。恢复后，将动物取到遥感间中适应25℃的气候，并维持12hr/12hr的明/暗周期(白天6:00a.m.到6:00p.m.，而夜晚6:00p.m.到6:00a.m.)。随意提供水和食物。
在进行测定前，将动物置于单个的笼(15cm×12cm×6cm)内，并保持8天，直至遥感图表明血压和心率恢复止。进行每10分钟10秒/24小时的数据取样。
封装在β-环糊精中强饲的Evasin-7a和Evasin-10c口服给药获得结果证明这两种肽在自发高血压大鼠中发挥降压活性。Evasin-7a表现出9小时的时长，5小时后MAP最高下降20mmHg，且在肽给药后和第5小时分别在8mmHg之内。Evasin-10c具有5小时的最高降压效应，且在给药后两小时最高下降13mmHg。
实施例10：EVASINs的生物分布
根据氯胺T法在小鼠中静脉内给药125I标记的Evasins证明这些肽引入注目地集中于肾中。例如非限制性地，静脉内注射125I-Evasin10c显示，在15分钟后，此肽在肾中具有比在肺和肝中大约两倍高(每克组织)的浓度。在其它组织及血液中，放射性肽的浓度显著更低。当与其它组织比较时，肾中的这种差异增大，30分钟后达到峰浓度，在组织中迅速下落，而在肾中要低得多，这里在给药3小时后观察到它们维持在大约50％的峰浓度。当放射性肽与卡托普利以比肽浓度高10倍的摩尔浓度共同给药时，看到相同的分布特征，与不含卡托普利所达到的峰浓度相比，放射性肽所达到的峰浓度降低大约30％。
Evasins在肾脏中的生物分布和留置时间都表明它们对肾脏具有较大的选择性，并且与卡托普利相比，在更长的时间阶段内保持与该组织结合。在另一方面，下降30％的Evasins肾结合为血管紧张素转换酶的配基。

Claims (31)

1.由蛇毒腺特别是巴西具窍蝮蛇(Bothrops Jararaca)分泌的肽即血管肽酶抑制剂Evasins、其类似物及衍生物的药物组合物，特征在于包含：
a)5-13个氨基酸的寡肽   化学式   序列  命名   IIIIIIIVVVIVIIVIIIIX   ＜E1aa2aa3aa4P5＜E1aa2aa3aa4aa5P6＜E1aa2aa3aa4aa5P6P7＜E1aa2aa3P4aa5aa6P7P8＜E1aa2aa3aa4aa5aa6aa7P8P9＜E1aa2aa3aa4aa5P6aa7aa8P9P10＜E1aa2aa3aa4aa5aa6P7aa8aa9P10P11＜E1aa2aa3aa4aa5aa6aa7P8aa9aa10P11P12＜E1aa2aa3aa4aa5aa6aa7aa8P9aa10aa11P12P13  Evasin-5a，b，...nEvasin-6a，b，...nEvasin-7a，b，...nEvasin-8a，b，...nEvasin-9a，b，...nEvasin-10a，b，...nEvasin-11a，b，...nEvasin-12a，b，...nEvasin-13a，b，...n
其中：
P总是脯氨酸，其它的可以是由三字母和一字母代码表示的L-或D-氨基酸及衍生物
天门冬氨酸(Asp，D)                  谷氨酸(Glu，AND)
丙氨酸(Ala，A)                      精氨酸(Arg，R)
天门冬酰胺(Asp，D)                  苯丙氨酸(Phe，F)
甘氨酸(Gly，G)                      谷氨酰胺(Gln，Q)
组氨酸(His，H)                      异亮氨酸(Ile，I)
亮氨酸(Leu，L)                      赖氨酸(Lys，K)
脯氨酸(Pro，P)                      丝氨酸(Ser，S)
酪氨酸(Tyr，Y)                      苏氨酸(Thr，T)
色氨酸(Trp，W)                      缬氨酸(Val，V)
氨基丁酸(Abu)                       氨基异丁酸(Aib)
二氨基丁酸(Dab)                     二氨基丙酸(Dpr)
己酸(ε-Ahx)                       异哌啶酸(Isn)
焦谷氨酸(Pyr，＜E)
四氢异喹啉-3-羧酸(Tic)
丁基-甘氨酸环己基丙氨酸(Cha)
瓜氨酸(Cit)                        抑制素和衍生物(Sta)
苯基甘氨酸(Phg)                    羟脯氨酸(Hyp)
高丝氨酸(Hse)                      正亮氨酸(Nle)
正缬氨酸(Nva)                      鸟氨酸(Orn)
青霉素丙氨酸(Pen)                  肌氨酸(Sar)
tiethylalanine(Thi)
＜E1焦谷氨酸为N-末端氨基酸；
aa2是氨基酸，对于化学式I和II，典型地为W、S或K，对于化学式III，典型地为D，而对于化学式IV至IX，典型地为W、S、G或N；
aa3对于化学式I至III，典型地为W、P、F或G，而对于化学式IV至IX，典型地为P、G、W或R；
aa4是氨基酸，对于化学式I至III，典型地为P、A或R，而对于化学式IV至IX，典型地为P、A、R或W；
aa5是氨基酸，对于化学式II和III，典型地为R或I，而对于化学式IV至IX，典型地为T、P、G、H、R、W或E；
aa6是氨基酸，对于化学式V、VII、VIII和IX，典型地为Q、N、P、T、H、R或G；对于化学式IV，其通常为I、A、T或Y；
aa7是氨基酸，对于化学式VI、VIII和IX，典型地为N、Q、G或R，而对于化学式V，通常为I、A、T或Y；
aa8是氨基酸，对于化学式VII和IX，典型地为Q、P或G；对于化学式VI，其通常为I、A、T或Y；
aa9是氨基酸，对于化学式VIII，典型地为Q、N或G，而对于化学式VII，通常为I、A、T或Y；
aa10是氨基酸，对于化学式IX，典型地为Q和E，而对于化学式VIII，通常为I、A、T或Y；
aa11对于化学式IX通常为I、A、T或Y；
b)单独或者至少与另一种活性药理学制剂混合或结合的Evasins、其类似物或衍生物在环糊精或其衍生物中的、或者结合或包含在药学上可接受的载体和/或赋形剂中的包含化合物；
c)在控释系统如脂质体和生物可降解的聚合物和/或混合物中微囊化与否的、包含在环糊精中与否的Evasins、其类似物及衍生物。
2.Evasins、其类似物及衍生物的药物化合物，特征在于利用Evasins 7a、10c、11e、12b、其类似物及衍生物作为分子模型用于开发基于肽化合物和/或非肽血管肽酶抑制剂的药物和/或制剂。
3.Evasins、其类似物及衍生物的药物组合物，特征在于利用Evasins 7a、10c、11e、12b、其类似物及衍生物作为分子模型用于开发基于结合于膜的血管紧张素转换酶的肽化合物和/或非肽配基激动剂和拮抗剂的药物和/或制剂。
4.根据权利要求1和2的除Evasin-7a之外的Evasins、其类似物及衍生物的组合物，特征在于提供对中性内肽酶(微摩尔级的Ki)和血管紧张素I转换酶(纳摩尔级的Ki)不同的抑制活性。
5.根据权利要求1和2的Evasins、其类似物及衍生物的药物组合物，特征在于提供对血管紧张素I转换酶C-末端结构域的选择性抑制活性，对C-结构域比对N-结构域强50到400倍。
6.根据权利要求1和2的Evasins、其类似物及衍生物的药物组合物，特征在于提供对血管紧张素I转换酶C-末端结构域的选择性结合，对C-结构域比对N-结构域强50到400倍。
7.根据权利要求1和2的Evasin-7a、其类似物及衍生物的药物组合物，特征在于提供对中性内肽酶和血管紧张素I转换酶类似的抑制活性。
8.Evasins 7a、10c、11e、12b、其类似物及衍生物作为分子模型用于开发基于肽化合物和/或非肽化合物的药物和/或制剂的用途，特征在于提供血管舒张和/或血管保护活性。
9.根据权利要求1至3的Evasins、其类似物及衍生物的药物组合物，应用于动脉高血压和其它心血管疾病及其并发症的研究和治疗，特征在于利用了在控释系统例如象脂质体和生物可降解的聚合物和/或混合物中微囊化与否的Evasins、其类似物及衍生物与环糊精及其衍生物的包含化合物或结合。
10.根据权利要求1至6的Evasins、其类似物及衍生物的药物组合物，可用于研究和治疗温血动物急性心肌梗塞、左心室肥大、糖尿病性血管病、周围局部缺血、心绞痛、心肌梗死后渐进性的心力衰竭、动脉粥样硬化症、肿瘤、糖尿病、精子游动性、精子发生的阻滞、肾病、性机能障碍、胃肠以及妇科疾病、血管发生、毛发损失、血液病、血管成形术(血管成形术后的再狭窄、endoluminal protese)，特征在于利用了在控释系统如脂质体和生物可降解的聚合物和/或混合物中微囊化与否的Evasins、其类似物及衍生物与环糊精及其衍生物的包含化合物或结合。
11.根据权利要求1和2的药物组合物，特征在于环糊精、或选自含烷基、羟烷基、羟烷基、羟丙基及酰基的组的环糊精衍生物、或具有交联键的环糊精、或环糊精聚合物的有机-水性固体或溶液与Evasins、其类似物及衍生物的溶液1∶1或1∶2摩尔比的混合物。
12.Evasins、其类似物及衍生物的药物组合物，特征在于使用了环糊精或其它控释体系，包括脂质体、生物可降解的聚合物、生物可降解聚合物的衍生物或者这些系统的混合物。
13.Evasins作为分子模型用于开发根据权利要求4的对中性内肽酶和血管紧张素I转换酶具有不同抑制活性的药物和/或制剂的用途，特征在于对中性内肽酶提供更低的抑制活性，因此发生副作用如咳嗽以及血管神精性水肿的可能性更小。
14.用于研究和治疗动脉高血压和其它心血管疾病及其并发症的药物组合物，特征在于环糊精、或选自含烷基、羟烷基、羟丙基及酰基的组的环糊精衍生物、或具有交联键的环糊精、或环糊精聚合物的有机-水性或固体溶液与Evasins、其类似物及衍生物的水性或固体溶液的混合物。
15.用于研究和治疗温血动物急性心肌梗塞、左心室肥大、糖尿病性血管病、周围局部缺血、心绞痛、心肌梗死后渐进性的心力衰竭、动脉粥样硬化症、肿瘤、糖尿病、精子游动性、精子发生的阻滞、肾病、性机能障碍、胃肠以及妇科疾病、血管发生、毛发损失、血液病、血管成形术(血管成形术后的再狭窄、endoluminal protese)的药物组合物，特征在于环糊精、或选自含烷基、羟烷基、羟丙基及酰基的组的环糊精衍生物、或具有交联键的环糊精、或环糊精聚合物的有机-水性或固体溶液与Evasins、其类似物及衍生物的水性或固体溶液的混合物。
16.待用作为男性避孕药的药物组合物，特征在于环糊精、或选自含烷基、羟烷基、羟丙基及酰基的组的环糊精衍生物、或具有交联键的环糊精、或环糊精聚合物的有机-水性或固体溶液与Evasins、其类似物及衍生物的水性或固体溶液的混合物。
17.根据权利要求1、2和3的Evasins、其类似物及衍生物的药物组合物，特征在于当单独或者混合地包含在环糊精或其衍生物中、或者结合或包含在药学上可接受的载体和/或赋形剂中时，所述Evasins生物可处理性增大。
18.根据权利要求1和2的Evasins、其类似物及衍生物的药物组合物，特征在于当单独或者混合地包含在环糊精或其衍生物中、或者结合或包含在药学上可接受的载体和/或赋形剂中时，Evasins、其类似物及衍生物效应的持续时间和/或效力增大。
19.待用于高血压紧急情况治疗的根据权利要求1、2、3和4的Evasins、其类似物及衍生物的口服药物组合物，特征在于使用了与包括水、盐溶液、缓冲液、Ringer液、葡萄糖溶液、Hank液、生物相容的盐溶液在内的含或不含聚乙二醇的药学上可接受的赋形剂的混合物。
20.口服的根据权利要求1至4的Evasins、其类似物及衍生物的药物组合物，特征在于当单独或者混合地包含在环糊精或其衍生物中、或者结合或包含在药学上可接受的载体和/或赋形剂中时，所述Evasins的生物可处理性增大。
21.口服的根据权利要求1和2的Evasins、其类似物及衍生物的药物组合物，特征在于当单独或者混合地包含在环糊精或其衍生物中、或者结合或包含在药学上可接受的载体和/或赋形剂中时，Evasins、其类似物及衍生物效应的持续时间和/或效力增大。
22.用于肌内、皮下、局部、吸入(肺部、鼻内、口内)给药或作为能够植入或注射的装置的根据权利要求1至4的Evasins、其类似物及衍生物的组合物和制剂，特征在于当单独或者混合地包含在环糊精或其衍生物中、或者结合或包含在药学上可接受的载体和/或赋形剂中时，所述Evasins、其类似物及衍生物的生物可处理性增大。
23.用于肌内、皮下、局部、吸入(肺部、鼻内、口内)给药或作为能够植入或注射的装置的根据权利要求1至4的Evasins、其类似物及衍生物的组合物和制剂，特征在于当在控释系统如脂质体和生物可降解的聚合物和/或混合物中微囊化与否地、单独或以混合物或者混合或结合了至少另一种药理学活性的制剂地包含在环糊精或其衍生物中、或者结合或包含在药学上可接受的载体和/或赋形剂中时，所述Evasins、其类似物及衍生物的生物可处理性增大。
24.用于肌内、皮下、局部、吸入(肺部、鼻内、口内)给药以及作为能够植入或注射的装置的根据权利要求1至4的Evasins、其类似物及衍生物的组合物和制剂，特征在于当单独或者混合地包含在环糊精或其衍生物中、或者结合或包含在药学上可接受的载体和/或赋形剂中时，所述Evasins、其类似物及衍生物的持续时间和/或效力增大。
25.用于肌内、皮下、局部、吸入(肺部、鼻内、口内)给药或作为能够植入或注射的装置的、用于研究和治疗动脉高血压和其它心血管疾病及其并发症的根据权利要求1至4的Evasins、其类似物及衍生物的组合物和制剂，特征在于使用了在控释系统如脂质体和生物可降解的聚合物和/或其混合物中微囊化与否的、单独或以混合物形式结合了至少另外的药理学活性制剂的、包含在环糊精或其衍生物中、或者结合或包含在药学上可接受的载体和/或赋形剂中的Evasins、其类似物及衍生物。
26.用于肌内、皮下、局部、吸入(肺部、鼻内、口内)给药或作为能够植入或注射的装置的、用于研究和治疗温血动物急性心肌梗塞、左心室肥大、糖尿病性血管病、周围局部缺血、心绞痛、心肌梗死后渐进性的心力衰竭、动脉粥样硬化症、肿瘤、糖尿病、精子游动性、精子发生的阻滞、肾病、性机能障碍、胃肠以及妇科疾病、血管发生、毛发损失、血液病、血管成形术(血管成形术后的再狭窄、endoluminalprotese)的根据权利要求1至4的Evasins、其类似物及衍生物的组合物和制剂，特征在于使用了在控释系统如脂质体和生物可降解的聚合物和/或其混合物中微囊化与否的、单独或以混合物形式结合了至少另外的药理学活性制剂的、包含在环糊精或其衍生物中、或者结合或包含在药学上可接受的载体和/或赋形剂中的Evasins、其类似物及衍生物。
27.用于肌内、皮下、局部、吸入(肺部、鼻内、口内)给药或作为能够植入或注射的装置的根据权利要求1和2的Evasins、其类似物及衍生物的药物组合物，特征在于当在控释系统如脂质体和生物可降解的聚合物和/或混合物中微囊化与否地、单独或者混合或结合了至少另外的药理学活性制剂地、包含在环糊精或其衍生物中、或者结合或包含在药学上可接受的载体和/或赋形剂中时，所述Evasins、其类似物及衍生物的生物可处理性增大。
28.用于肌内、皮下、局部、吸入(肺部、鼻内、口内)给药或作为能够植入或注射的装置的根据权利要求1至4的Evasins、其类似物及衍生物的药物组合物和制剂，特征在于当单独或者混合地包含在环糊精或其衍生物中、或者结合或包含在药学上可接受的载体和/或赋形剂中时，Evasins、其类似物及衍生物效应的持续时间和/或效力增大。
29.肌内、皮下、局部、吸入(肺部、鼻内、口内)的或作为能够植入或注射的装置的根据权利要求1至4的Evasins、其结构和构象类似物的药物组合物，特征在于当单独或混合了至少另外的药理学活性制剂和/或在控释系统如脂质体和生物可降解的聚合物和/或其混合物中微囊化与否地包含在环糊精或其衍生物中、或者结合或包含在药学上可接受的载体和/或赋形剂中时，Evasins、其类似物及衍生物效应的持续时间和/或效力增大。
30.用于肌内、皮下、局部、吸入(肺部、鼻内、口内)给药或作为能够植入或注射的装置的、用于研究和治疗动脉高血压和其它心血管疾病及其并发症的根据权利要求1至4的Evasins、其类似物及衍生物的药物组合物，特征在于使用了单独或以混合物形式结合了至少另外的药理学活性制剂的、在控释系统如脂质体和生物可降解的聚合物和/或其混合物中微囊化与否的、包含在环糊精或其衍生物中、或者结合或包含在药学上可接受的载体和/或赋形剂中的Evasins、其类似物及衍生物。
31.用于肌内、皮下、局部、吸入(肺部、鼻内、口内)给药或作为能够植入或注射的装置的、用于研究和治疗温血动物急性心肌梗塞、中风、左心室肥大、糖尿病性血管病、周围局部缺血、心绞痛、心肌梗死后渐进性的心力衰竭、动脉粥样硬化症、肿瘤、糖尿病、精子游动性、精子发生的阻滞、肾病、性机能障碍、胃肠以及妇科疾病、血管发生、毛发损失、血液病、血管成形术(血管成形术后的再狭窄、endoluminalprotese)的根据权利要求1至4的Evasins、其类似物及衍生物的药物组合物，特征在于使用了单独或以混合物形式结合了至少另外的药理学活性制剂的、在控释系统如脂质体和生物可降解的聚合物和/或其混合物中微囊化与否的、包含在环糊精或其衍生物中、或者结合或包含在药学上可接受的载体和/或赋形剂中的Evasins、其类似物及衍生物   ID号   命名   序列   ID1ID2ID3ID4ID5ID6ID7ID8ID9ID10ID11   EVASIN-5aEVASIN-5bEVASIN-5cEVASIN-6aEVASIN-7aEVASIN-9aEVASIN-9bEVASIN-10aEVASIN-10bEVASIN-10cEVASIN-10d   ＜EKWAP＜EWPRP＜EKFAP＜ESWPGP＜EDGPIPP＜EWPRPQIPP＜ESWPGNIPP＜ESWPGPNIPP＜ENWPRPQIPP＜ENWPHPQIPP＜ESWPEPNIPP
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