CN1818620A - 改良的细胞内活性氧检测方法 - Google Patents
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Abstract
一种改良的细胞内活性氧检测方法。培养细胞长满单层后，置于37℃、50mL/L CO2/950mL/L空气的培养箱，24h后加入不同浓度的刺激物，继续孵育1小时；去掉刺激物，加入DCFH－DA，加入的DCFH－DA浓度应根据实际观察到细胞浓度进行调整；去掉DCFH－DA，用PBS洗涤2次，检测细胞荧光强度。本发明的特点是加入的DCFH－DA浓度根据实际观察到细胞浓度进行调整。
Description
技术领域：
本发明涉及一种改良的细胞内活性氧检测方法。
技术背景：
细胞内活性氧(ROS)的检测是生命科学研究中常用的一种方法，ROS的产生通过DCFH-DA(2’，7’二氯荧光素二乙酸酯)荧光染料进行检测。但由于ROS产生后存在时间较短而且不稳定，而且在各种研究中采用的细胞种类不同，所以在检测中结果经常不理想。本发明提供一种改良的细胞内活性氧检测方法，可提高检测的稳定性和重复性。
技术方案：
本发明是以下技术方案进行的：
1、培养细胞长满单层后，用胰蛋白酶消化并混悬于含100mL/L FCS的DMEM培养液中，调整细胞数为2×107/L，以每孔100μL加入96孔培养板中。
2、置于37℃、50mL/L CO2/950mL/L空气的培养箱，24h后加入不同浓度的刺激物，并设对照组加入等量DMEM，继续孵育1小时。
3、去掉刺激物，加入DCFH-DA，注意：加入的DCFH-DA浓度应根据实际观察到细胞浓度进行调整。
4、去掉DCFH-DA，用PBS洗涤2次，检测细胞荧光强度。激发波长488nm，发射波长530nm。
特征：加入的DCFH-DA浓度根据实际观察到细胞浓度进行调整。
Claims (2)
1、一种改良的细胞内活性氧检测方法。其特征在于，该方法按下列步骤顺序进行：
(1)培养细胞长满单层后，用胰蛋白酶消化并混悬于含100mL/L FCS的DMEM培养液中，调整细胞数为2×107/L，以每孔100μL加入96孔培养板中。
(2)置于37℃、50mL/L CO2/950mL/L空气的培养箱，24h后加入不同浓度的刺激物，并设对照组加入等量DMEM，继续孵育1小时。
(3)去掉刺激物，加入DCFH-DA，注意：加入的DCFH-DA浓度应根据实际观察到细胞浓度进行调整。
(4)去掉DCFH-DA，用PBS洗涤2次，检测细胞荧光强度。激发波长488nm，发射波长530nm。
2、根据权利要求1所述的改良的细胞内活性氧检测方法，其特征在于加入的DCFH-DA浓度根据实际观察到细胞浓度进行调整。
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Cited By (5)
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|---|---|---|---|---|
| CN102589942A (zh) * | 2012-01-18 | 2012-07-18 | 山东省农业科学院作物研究所 | 一种小麦组织活性氧荧光标记方法 |
| CN101855538B (zh) * | 2007-11-13 | 2012-08-08 | 蒂埃里·帕特里斯 | 测量样品耐受活性氧物质(ros)的能力的方法 |
| CN103808703A (zh) * | 2014-02-27 | 2014-05-21 | 湖南大学 | 测定处理废水后黄孢原毛平革菌菌体内活性氧水平的方法 |
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2006
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