CN1813884A - 光果翠雀植物在制备镇痛、止血、抗肿瘤药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种新的药用植物，即毛茛科翠雀属植物光果翠雀(Delph－inium grandiflorum L.var.leiocarpum W.T.Wang)全草的医药用途，尤其是其在制备镇痛、止血及抗肿瘤药物中的应用。实验证明：毛茛科翠雀属植物光果翠雀的镇痛效果比扑热息痛更佳；其止血效果与云南白药基本相当，同时具有明显的抗肿瘤活性，未见其它毒副作用。
Description
技术领域
本发明涉及一种天然植物的开发与应用，尤其涉及一种以毛茛科翠雀属植物光果翠雀(Delphinium grandiflorum L.var.1eiocarpum W.T.Wang)全草(包括地上部分和根)或其提取物为原料在制备镇痛、止血和抗肿瘤药物中的应用。
背景技术
翠雀属Delphinium L.是毛茛科的重要属之一，全世界约300种以上，分属于3个亚属，广布于北温带，我国约113种，除台湾、海南岛外。各省区均有分布，尤以云南北部、四川西部和西藏东部的高山地带为多见。
光果翠雀(Delphinium grandiflorum L.var.leiocarpum W.T.Wang)由于其分布范围较窄，在医药中很少得以应用，目前尚未见国内外有关文献和专利报道。我们结合多年中医药临床实践发现光果翠雀是一味具有多方面治疗作用的天然药物。多年的临床应用表明该药在镇痛、止血和抗肿瘤等方面的作用尤为突出。
发明内容
本发明的目的是为了提供毛茛科翠雀属植物光果翠雀(Delphiniumgrandiflorum L.var.leiocarpum W.T.Wang)全草的医药用途，尤其是其在制备镇痛、止血和抗肿瘤药物中的应用。
本发明毛茛科翠雀属植物光果翠雀的镇痛、止血和抗肿瘤作用的药理活性可以从以下实验中体现：
一、光果翠雀的镇痛作用：
1、实验目的：应用小鼠热板法和醋酸扭体法研究光果翠雀的镇痛作用。
2、实验条件：三级动物实验室，室温20～25℃，空调恒温。
3、实验对象：动物BalB/C小鼠80只，体重20±2g，由兰州生物制品研究所提供。
4、药材与仪器：光果翠雀水提取物由实验室自制，扑热息痛(西北制药厂，20020709)。
5、实验方法
5.1、热板法研究光果翠雀镇痛活性：健康小白鼠40只，雌性，体重19±2g，热板法(55℃)测定痛阈值2次，挑选平均痛阈值不超过30秒者为试验对象。动物随机分为4组，每组10只，分别设为(1)生理盐水组、(2)扑热息痛组(0.2g/kg)、(3)光果翠雀水提取物高剂量组(相当于原植物0.5g/kg)、(4)光果翠雀水提取物低剂量组(相当于原植物0.125g/kg)，分别腹腔注射给药0.5小时、1小时后用热板法(55℃)测定痛阈值，结果如表1：
5.2醋酸扭体法研究光果翠雀镇痛活性：健康小白鼠40只，雌性，体重19±2g，每组10只，雌雄各半，腹腔注射给药，每10g体重0.2ml。分别设为(1)生理盐水组、(2)扑热息痛组(0.2g/kg)、(3)光果翠雀水提取物高剂量组(相当于原植物0.5g/kg)、(4)光果翠雀水提取物低剂量组(相当于原植物0.125g/kg)，给药后30min，腹腔注射0.6％醋酸0.2ml/只，观察20分钟内各组动物由醋酸引起的扭体次数。结果如表2：
6.镇痛实验结果：
表1口服光果翠雀对小鼠痛阈值的影响
| 组别 | n | 给药前时间(s) | 给药后0.5小时(s) | 给药后1小时(s) |
| 生理盐水扑热息痛组(0.2g/kg)高剂量组(0.5g/kg)低剂量组(0.125g/kg) | 10101010 | 19.7±2.319.4±4.119.4±4.720.1±2.9 | 21.8±6.526.0±6.5*24.9±5.6*24.7±5.5* | 19.0±2.723.0±5.528.0±5.1*27.9±7.5* |
*P＜0.05与给药前比较
表1结果表明：光果翠雀水提取物0.5g/kg、0.25g/kg腹腔给药对小鼠具有明显的镇痛作用。
表2口服光果翠雀对小鼠醋酸引起的扭体次数影响
| 组别 | 只数 | 扭体次数(n) | P值 |
| 生理盐水扑热息痛组(0.2g/kg)高剂量组(0.5g/kg)低剂量组(0.125g/kg) | 10101010 | 28.5±10.514.5±7.6**6.2±1.9**9.7±6.2** | 0.010.010.01 |
**P＜0.05与给药前比较
表2结果表明：扑热息痛组、光果翠雀水提取物高、低剂量组与空白对照组比较均能明显的抑制醋酸引起的小鼠扭体次数(P＜0.01)；光果翠雀水提取物高剂量组与扑热息痛组比，镇痛效果更佳。光果翠雀水提取物有明显的止痛作用。
二、光果翠雀的止血作用
1、实验目的：应用兔耳中动脉创伤出血法研究光果翠雀的止血作用。
2、实验条件：三级动物实验室，室温20～25℃，空调恒温。
3、实验对象：新西兰大白兔7只，体重2.5±0.2kg，由兰州生物制品研究所提供。
4、药材与仪器：光果翠雀根粉由实验室自制，云南白药(云南白药集团股份有限公司，批号20030803)。
5、实验方法与结果
新西兰白兔7只，每只戊巴比妥钠(30mg/kg，iv)麻醉后，于耳中动脉较粗分枝距离分叉约3cm处切断动脉血管，血液流出后立即外敷0.5g光果翠雀并施以200g压力，每30秒观察一次，除去压力120秒钟不出血即为止血。以云南白药在另一只耳上以同样的方法做阳性对照。结果见表3：
表3光果翠雀对兔耳中动脉创伤出血时间的影响
| 组别 | 给药剂量 | n | 止血时间(秒) |
| 光果翠雀云南白药 | 0.5g0.5g | 77 | 145.14±29.28158.57±78.83 |
实验结果表明：光果翠雀局部外用对由于创伤所导致的动脉出血具有良好的止血作用，其止血效果与云南白药基本相当。
三、光果翠雀的抗肿瘤活性
1、实验目的：应用体外细胞培养MTT法和体内接种法测定光果翠雀体外、体内抗肿瘤活性。
2、实验条件：三级动物实验室，室温20～25℃，空调恒温。
3、实验对象：人胃癌细胞SGC-7901、人肝癌细胞BEL-7402、人白血病细胞HL-60和H22腹水瘤细胞均引自中国科学院上海细胞生物研究所的细胞库。BalB/C小鼠50只，体重20±2g，由兰州军区总医院动物实验科提供，合格证号：甘肃省医动字第1402-0201号
4、药材与仪器：光果翠雀乙醇提取物由实验室自制，注射用环磷酰胺(上海华联制药有限公司，批号030306)
5、实验方法
5.1 MTT比色法测定光果翠雀体外抗肿瘤活性：准确称取光果翠雀乙醇提取物25.0mg后，加入1m1DMSO溶液充分溶解，试样原初浓度为25.0mg/ml，用DMSO按倍比稀释制备5个浓度：25.0mg/ml，12.5mg/ml，6.25mg/ml，3.13mg/ml和1.56mg/ml。将生长旺盛的SGC-7901和BEL-7402细胞用0.25％胰蛋白酶消化后，悬浮于含10％小牛血清RMPI-1640培养液中，HL-60细胞直接加入含10％小牛血清RMPI-1640培养液，用玻璃吸管轻轻吹打成单细胞悬液；取少许悬液加0.4％台盼蓝染液染色，显微镜下计数活细胞，调整细胞浓度为2×105个/ml；取96孔细胞培养板，每孔加入调好的细胞悬液195μl，置于37℃，5％CO2相对湿度100％培养箱中培养4h后，加入测试药液5μl/孔，继续培养44h后每孔加10μl，5mg/ml MTT溶液(用生理盐水配制)，在培养箱中温育4h；完成后，HL-60细胞需2000rpm离心10min，然后仔细吸取上清，每孔加入200μl DMSO，于微量振荡器振荡以使甲瓒完全溶解，最后用酶标仪在570nm波长处测OD值。细胞增殖抑制率Ir(％)＝(OD对照-OD药物)/OD对照×100，剂量对数线性回归法计算IC50值。
5.2光果翠雀乙醇提取物体内抗肿瘤活性研究
取体重22g～28g的Balb/c♂小鼠50只，于左侧腋窝下接种制备好的瘤液：0.2ml/只。接种前应用碘酒、酒精消毒接种部位的皮肤，然后将动物按体重随机分成5组并给药：给予光果翠雀乙醇提取物组(400，200，100mg/kg)，阳性对照组给予环磷酰胺(20mg/kg)，空白组给予生理盐水。腹腔注射给药，给药量为0.2ml/20g体重，每日一次，连续给药7天。停药后1天处死动物，记录每只鼠接种、处死时的体重，剥离瘤体、脾脏，分别称重，求出抑瘤率、脾指数并进行t检验。结果见表1、2、3。
6实验结果：
线性回归法计算光果翠雀乙醇提取物对不同肿瘤细胞的IC50值，分别为78.25μg/ml(SGC-7901)，113.25μg/ml(BEL-7402)，121.00μg/ml(HL-60)，均与环磷酰胺的活性相当，说明光果翠雀乙醇提取物具有明显的体外抗肿瘤活性。
表2光果翠雀乙醇提取物体外抑制肿瘤细胞生长IC50(μg/ml)值
| SGC-7901 | BEL-7402 | HL-60 | |
| 光果翠雀乙醇提取物环磷酰胺 | 78.2556.42 | 113.2589.75 | 121.00123.46 |
光果翠雀乙醇提取物腹腔注射给药7天后，能显著提高鼠的脾脏指数，抑制H22肿瘤细胞的生长，高剂量组(400mg/kg)与环磷酰胺组(20mg/kg)的活性相当。结果见表
表1光果翠雀乙醇提取物腹腔注射给药对小鼠H22肿瘤细胞的抑瘤率及脾指数
| 组别 | 例数 | 结束时体重(g) | 平均脾重(g) | 平均瘤重(g) | 平均脾指数％ | 抑瘤率％ |
| 空白对照组NS环磷酰胺组(CTX)20mg/kg高剂量组(400mg/kg)中剂量组(200mg/kg)低剂量组(100mg/kg) | 91010910 | 23.22±1.2022.20±2.0423.80±1.9321.44±1.67×20.40±1.96×× | 0.318±0.0860.250±0.063×0.341±0.0840.318±0.0600.309±0.084 | 1.373±0.4240.754±0.243××0.907±0.297××0.897±0.531××1.122±0.545× | 13.62±3.4011.34±3.00××14.43±3.77△△14.84±2.57△△15.08±3.93△△ | 45.0833.9834.7018.34 |
×与空白对照组比较P＜0.05，××与空白对照组比较P＜0.01；△与环磷酰胺组比较P＜0.05，△△与环磷酰胺组比较P＜0.01
本发明可以毛茛科翠雀属植物光果翠雀全草或其提取物为原料制成单方或复方药物。
本发明可将毛茛科翠雀属植物光果翠雀全草或其提取物，配以药用铺料，按制剂学常规方法制备成药剂学上的任何一种剂型。
具体实施方式
实施例一：光果翠雀镇痛、止血散的制备：
选取光果翠雀植物的根，洗净、干燥后，将其超微粉碎，使其粒度达300目，辐照灭菌，分包装、密闭保存即得。
实施例二：光果翠雀镇痛、止血、抑瘤片的制备：
将光果翠雀全草，用75％乙醇提取后，加入药用淀粉，滑石粉等常用药剂辅料，按常规方法压片得光果翠雀片，用于镇痛、止血、消化道，妇科等肿瘤的治疗。
实施例三：光果翠雀镇痛、止血喷雾剂的制备：
将光果翠雀全草，用75％乙醇提取物后，按喷雾剂制备方法制备用于创伤后镇痛、止血治疗的喷雾剂。
实施例四：光果翠雀止痛搽剂的制备：
将光果翠雀提取物，溶于50％乙醇溶液，配成10g原药材/100ml的搽剂，用于跌打损伤、扭挫伤等的局部镇痛治疗。
实施例五：光果翠雀镇痛、止血抗肿瘤滴丸剂的制备：
光果翠雀提取物，加入PEG等作为赋型剂，按滴丸剂制备方法制备用于创伤后镇痛、止血和各种肿瘤治疗的滴丸剂。
实施例六：光果翠雀复方镇痛、止血散的制备：
取光果翠雀植物根细粉(300目)，加入独一味，大黄等细粉，过筛，辐照灭菌，分包装、密闭保存即得。
实施例七：光果翠雀活血止痛酊的制备：
将光果翠雀提取物，和当归、丹参、白芷等提取物，溶于50％乙醇溶液，配成10g原药材/100ml的酊剂，用于跌打损伤、扭挫伤等的局部活血、镇痛治疗。
Claims (9)
1、毛茛科翠雀属植物光果翠雀在制备镇痛药物中的应用。
2、如权利要求1所述的毛茛科翠雀属植物光果翠雀在制备镇痛药物中的应用，其特征在于：以毛茛科翠雀属植物光果翠雀全草或其提取物为原料制成单方或复方药物。
3、如权利要求1或2所述的毛茛科翠雀属植物光果翠雀在制备镇痛药物中的应用，其特征在于：是将毛茛科翠雀属植物光果翠雀全草或其提取物，配以药用铺料应用制剂学方法制备成药剂学上的任何一种剂型。
4、毛茛科翠雀属植物光果翠雀在制备止血药物中的应用。
5、如权利要求4所述的毛茛科翠雀属植物光果翠雀在制备止血药物中的应用，其特征在于：以毛茛科翠雀属植物光果翠雀全草或其提取物为原料制成单方或复方药物。
6、如权利要求4所述的毛茛科翠雀属植物光果翠雀在制备止血药物中的应用，其特征在于：是将毛茛科翠雀属植物光果翠雀全草或其提取物，配以药用铺料应用制剂学方法制备成药剂学上的任何一种剂型。
7、毛茛科翠雀属植物光果翠雀在制备抗肿瘤药物中的应用。
8、如权利要求7所述的毛茛科翠雀属植物光果翠雀在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于：以毛茛科翠雀属植物光果翠雀全草或其提取物为原料制成单方或复方药物。
9、如权利要求7所述的毛茛科翠雀属植物光果翠雀在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于：是将毛茛科翠雀属植物光果翠雀全草或其提取物，配以药用铺料应用制剂学方法制备成药剂学上的任何一种剂型。
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|---|---|---|---|---|
| CN107375446A (zh) * | 2017-09-05 | 2017-11-24 | 张可池 | 一种用于妇女调经止血的复方藏药 |
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