CN1806054A - 基因型对于对鱼油治疗的敏感性的影响 - Google Patents

基因型对于对鱼油治疗的敏感性的影响 Download PDF

Info

Publication number
CN1806054A
CN1806054A CNA2004800166798A CN200480016679A CN1806054A CN 1806054 A CN1806054 A CN 1806054A CN A2004800166798 A CNA2004800166798 A CN A2004800166798A CN 200480016679 A CN200480016679 A CN 200480016679A CN 1806054 A CN1806054 A CN 1806054A
Authority
CN
China
Prior art keywords
tnf
fish oil
genotype
treatment
isozygotys
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CNA2004800166798A
Other languages
English (en)
Inventor
罗伯特·F·格林布尔
菲利普·C·考尔德
威廉·M·豪厄尔
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
OF SONTHAMPTON, University of
Original Assignee
OF SONTHAMPTON, University of
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by OF SONTHAMPTON, University of filed Critical OF SONTHAMPTON, University of
Publication of CN1806054A publication Critical patent/CN1806054A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/56—Materials from animals other than mammals
    • A61K35/60—Fish, e.g. seahorses; Fish eggs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/106—Pharmacogenomics, i.e. genetic variability in individual responses to drugs and drug metabolism
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Marine Sciences & Fisheries (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明涉及评估个体对用饮食补充物的炎性疾病疗法的易感性的方法。本发明描述了以下认识：个体对于鱼油对TNF－α生成的炎症抑制效应的敏感性与遗传变异以及细胞的固有TNF－α生成水平相关，所述遗传变异由TNF－α，LT－α和/或IL－6单核苷酸多态性编码或与其相关。

Description

基因型对于对鱼油治疗的敏感性的影响
技术领域
本发明涉及评估个体对利用饮食补充物的炎性疾病疗法的易感性的方法。
背景技术
人体内的炎性疾病由肿瘤坏死因子-α(TNF-α)介导。TNF-α是一组在感染和损伤之后迅速出现的促炎细胞因子(Beutler et al.，Crit Care Med21：423-35(1993)和Lin et al.，Surgery 127：117-26(2000))。TNF-α具有广泛的效应：其导致瘦肉和脂肪组织丢失，体温升高，减小胃口并刺激多种免疫调节性细胞因子和氧化剂分子的生成(Grimble，Clin Sci 91：121-30(1996))。这些效应产生不利入侵病原体的环境，从内源来源提供免疫系统广的底物，并增加和改变免疫系统的活性。因此TNF-α在允许机体耐受病原入侵中具有关键作用。
然而，过量或过早生成的TNF-α在败血症(van der Poll et al.，Infect DisClin North Am.13：413-26(1999))，脑膜炎(Westendorp et al.，Lancet 349：170-3(1997))和疟疾(Knight et al.，Proc Assoc Am Physicians 111：290-8(1999))的死亡率和病死率中起主要作用。TNF-α也在炎性疾病诸如类风湿性关节炎(Maini et al.，Ann Rev Med 51：207-29(2000))和炎性肠病(Murch et al.，Gut32：913-7(1991))，动脉硬化斑块形成(Ross，Nature 362：801-91993))以及移植的组织的排异(Kutukculer et al.，Transpl Int.8：45-50(1995))的病理中起主要作用。
富含n-3多不饱和脂肪酸(n-3PUFA)的鱼油在多种炎症动物模型中显示抗炎效应(Calder，Ann Nutr Metab 41：203-341997)和Grimble，Proc Nutr Soc.57：535-421998))，并在类风湿性关节炎(Calder&Zurier Curr Opin Clin NutrMetab Care 4：115-21(2001))，克隆氏病(Belluzi et al.，N Engl J Med334：1557-616(1996))和银屑病(Mayser et al.，J Am Acad Dermatol 38：539-47(1998))中产生抗炎效应。包囊化的鱼油通常作为饮食补充物而被服用。
一种报道的鱼油的抗炎作用是通过外周血单核细胞(PBMC)来减少TNF-α生成(Endres et al.，N EnglJ Med 320：265-71(1989))。然而，在鱼油被作为抗炎剂而研究的研究中，没有发现鱼油在所有个体中有效。例如，在研究鱼油对健康个体PBMC的TNF-α生成的影响的11项研究中(Endres etal.，N Engl J Med 320：265-71(1989)；Schmidt et al.，Scand J ClinLab Med56：87-92(1996)；Cooper et al.，Clin Nutr 12：321-8(1993)；Blok et al.，Eur J ClinInvest 27：1003-8(1997)；Meydani et al.，J Clin Invest 92：105-13(1993)；Molviget al.，Scan J Immunol 34：399-410(1991)；Meydani et al.，J Nutr 121：547-55(1991)；Caughey et al.，Am J Clin Nutr 63：116-22(1996)；Yaqoob et al.，Eur JClin Nutr 30：399-410(2000)；Gallai et al.，J Neuroimmunol 56：143-53(1995)and Kelley et al.，Lipids 34：317-24(1999))，只有六项报道了抑制效应(Endres et al.，N Engl J Med 320：265-71(1989)；Meydani et al.，J Clin Invest92：105-13(1993)；Meydani et al.，J Nutr 121：547-55(1991)；Caughey et al.，AmJ Clin Nutr 63：116-22(1996)；Gallai et al.，J Neuroimmunol 56：143-53(1995)and Kelley et al.，Lipids 34：317-24(1999))。
健康男性和停经后女性中，PBMC的TNF-α生成显示与显示特征性细胞因子生成水平的每个个体明显一致(Jacob et al.，PNAS 87：1233-7(1990))。然而，个体的TNF-α生成有很大差异。推定TNF-α和淋巴毒素-α(LT-α，也已知为TNF-β)基因的启动子区中的多态性影响炎性刺激后生成的TNF-α的量(Wilson et al.，J Inflamm 45：1-12(1995))。这显示具有临床意义。例如，TNF-α-308(TNF2)等位基因纯合个体的疟疾相关病死率以及严重神经症状发生率是更为常见的TNF1等位基因的杂合或纯合个体的7倍(Mc Guire etal，Nature 371：508-11(1994))。出现败血症的LT-α+252(TNFB2)等位基因纯合子手术患者的死亡率比TNFB1等位基因纯合个体的高3.5倍，比杂合个体高2.4倍(Stuber et al.，Crit Care Med 24：381-4(1996))。
其它细胞因子，细胞因子-6(IL-6)的水平也被推定以测定个体对鱼油治疗的反应。根据文献(Fishman et al.，J.Clin Invest 102：1369-1376(1998)和Villuendas et al.，J.Clin Endocrinol Metab 87：1134-1141(2002))，其IL-6基因具有位置-174的GG碱基对的个体产生升高水平的IL-6，而在该位置具有CC碱基对的个体产生低水平IL-6。体内IL-6生成对个体的炎症总水平有贡献。然而，现有技术没有将位置-174的具体基因型与TNF生成相联系。对-174位置的基因型，炎症水平以及TNF生成之间的关系的分析将使得鱼油更准确地靶向很可能对鱼油有反应的那些个体。
有关鱼油对TNF-α生成的影响的所有研究都报道了TNF-α生成中存在较大标准偏差，其提示研究群体中基因型是混合的。对于TNF-α，LT-α和IL-6基因中的多态性是否影响鱼油抑制TNF-α生成的能力是未知的。对这些相互作用的理解可解释文献中的不一致性，并允许将鱼油治疗更为特异地靶向炎性疾病。
鱼油是炎性疾病的廉价治疗。然而，如果作为每日的饮食补充物应用可消耗大量金钱而不会保证成功，优选将鱼油靶向很可能获益的那些患者，而不是向每名患者建议他们应当服用该补充物以“看看是否有帮助”。
发明内容
本发明人认识到个体对于鱼油对TNF-α生成的炎症抑制效应的敏感性与TNF-α-308，LT-α+252和IL-6-174单核苷酸多态性(SNP)编码或相关的遗传变异有关联。鱼油对TNF-α生成的炎症抑制效应与细胞固有TNF-α生成水平相关。
因此，本发明第一方面提供了评估个体对利用鱼油进行的炎性疾病疗法的易感性的方法，包括测定所述个体与TNF-α-308，LT-α+252和/或IL-6-174等位基因的多态性相关的基因型；和由此判断所述个体是否对鱼油治疗有良好反应。
第二方面，本发明提供了评估个体对利用鱼油进行的炎性疾病疗法的易感性的方法，包括：
a)测定个体的固有TNF-α状态；和
b)测定所述个体与TNF-α-308，LT-α+252和/或IL-6-174等位基因的
  多态性相关的基因型；和
由此判断所述个体是否对鱼油治疗有良好反应.
另一方面，本发明提供了治疗患者中的炎性疾病的方法，包括评估个体对利用鱼油进行的炎性疾病疗法的敏感性，所述评估包括：
a)测定所述个体与TNF-α-308，LT-α+252和/或IL-6-174等位基因多态性相关的基因型；
b)由此判断所述个体是否对鱼油治疗有良好反应；和
用适量的鱼油治疗所述个体.
另一方面，本发明提供了治疗患者中的炎性疾病的方法，包括评估个体对利用鱼油进行的炎性疾病疗法的易感性，所述评估包括：
a)测定个体的固有TNF-α状态；
b)测定所述个体与TNF-α-308，LT-α+252和/或IL-6-174等位基因多态性相关的基因型；
c)由此判断所述个体是否对鱼油治疗有良好反应；和
用适量的鱼油治疗所述个体。
发明内容
第一方面，本发明需要测定所述个体与TNF-α-308，LT-α+252和/或IL-6-174等位基因多态性相关的基因型。
TNF-α(TNF1，TNF2)基因和LT-α(TNFB1，TNFB2)基因中的多态性将导致每种情况中的三种基因型，纯合TNF1/1或TNFB1/1，或纯合TNF2/2和TNFB2/2，或杂合TNF1/2和TNFB1/2。在类似的方式中，关于IL-6基因，个体可为纯合CC或GG或杂合CG。因此，本发明中，个体可具有以下基因型之一：
纯合TNF1/1：纯合TNFB1/1：纯合IL-6CC
纯合TNF1/1：纯合TNFB1/1：纯合IL-6GG
纯合TNF1/1：纯合TNFB1/1：杂合IL-6CG
纯合TNF1/1：纯合TNFB2/2：纯合IL-6CC
纯合TNF1/1：纯合TNFB2/2：纯合IL-6GG
纯合TNF1/1：纯合TNFB2/2：杂合IL-6CG
纯合TNF1/1：杂合TNFB1/2：纯合IL-6CC
纯合TNF1/1：杂合TNFB1/2：纯合IL-6GG
纯合TNF1/1：杂合TNFB1/2：杂合IL-6CG
纯合TNF2/2：纯合TNF1/1：纯合IL-6CC
纯合TNF2/2：纯合TNFB1/1：纯合IL-6GG
纯合TNF2/2：纯合TNFB1/1：杂合IL-6CG
纯合TNF2/2：纯合TNFB2/2：纯合IL-6CC
纯合TNF2/2：纯合TNFB2/2：纯合IL-6GG
纯合TNF2/2：纯合TNFB2/2：杂合IL-6CG
纯合TNF2/2：杂合TNFB1/2：纯合IL-6CC
纯合TNF2/2：杂合TNFB1/2：纯合IL-6GG
纯合TNF2/2：杂合TNFB1/2：杂合IL-6CG
杂合TNF1/2：纯合TNFB1/1：纯合IL-6CC
杂合TNF1/2：纯合TNFB1/1：纯合IL-6GG
杂合TNF1/2：纯合TNFB1/1：杂合IL-6CG
杂合TNF1/2：纯合TNFB2/2：纯合IL-6CC
杂合TNF1/2：纯合TNFB2/2：纯合IL-6GG
杂合TNF1/2：纯合TNFB2/2：杂合IL-6CG
杂合TNF1/2：杂合TNFB1/2：纯合IL-6CC
杂合TNF1/2：杂合TNFB1/2：纯合IL-6GG；或
杂合TNF1/2：杂合TNFB1/2：杂合IL-6CG.
尽管在文献中，上述是所有可能的基因组合，实际上，并非所有组合都会出现。一些组合的形成可能被阻止，例如由于一些基因的连接，导致连锁不平衡。此外，基因TNF2/2非常少见，出现在少于10％的群体中。
在本发明优选实施方案中，优选LT-α基因的基因型是杂合TNFB1/2。
本发明另一优选实施方案中，优选IL-6基因的基因型是纯合GG。
本发明更为优选的实施方案中，优选LT-α和IL-6基因的基因型分别是杂合TNFB1/2和IL-6GG。
在本发明该方面的优选实施方案中，测定了TNF-α，LT-α和IL-6等位基因之一的基因型。但更优选，测定了TNF-α，LT-α和IL-6等位基因中的两种或多种的基因型，最优选测定了LT-α和IL-6等位基因的基因型。
第二方面，本发明需要测定个体的固有TNF-α状态。
个体固有TNF-α状态是该个体白细胞生成TNF的能力的测定。无病或基本无病状态个体的固有TNF-α状态显示了明显的一致性。TNF-α的生成通常不受个体年龄或性别影响。无病或基本无病指所述个体不患有任何类型或明显水平的炎性疾病。个体的固有TNF-α状态因此优选在所述个体不患有任何类型或明显水平的炎性疾病的情况下测定。
个体固有TNF-α状态的测定可通过利用本领域技术人员已知的方法进行。通常收集全血样品，从其中分离外周血单核细胞(PBMC)。分离PBMC的技术是已知的，并包括例如用肝素锂处理全血，然后离心分离PBMV，随后可利用诸如EASIAELISA试剂盒(Biosource International，Nivelles，Belgium)等标准方法测定TNF-α浓度。
TNF-α生产者可根据它们的PBMC产生的TNF-α浓度分成多组并由此限定它们的固有TNF-α状态。通常为本发明的目的，优选所述生产者可分成三组，例如，高，中或低生产者。尽管PBMC产生的TNF-α的确切量对于限定上述三组并非必须的，通常优选高生产者具有的TNT-α浓度约850-2500ng/L来自1×109细胞的保温物，中等生产者的TNF-α浓度为2500-5000ng/L来自1×109细胞保温物，高生产者的TNF-α浓度为约5000-14000ng/L来自1×109细胞保温物。
下表1举例证实了鱼油对TNF-α生成的影响。
表1
  Tertile   受试者数目   TNF-α-ng/L浓度
  补充前   补充后
低中高   111373737   4821±41771458±6003728±9369277±4338   4643±33383809±2571*4796±32705323±3941*
*与补充前的值有明显差异(P＜0.05；Student’s成对t-检验)。
TNF-α生成在鱼油补充前后的差异利用Student’s成对t-检验测定。从上述结果明显可见，对给予鱼油的敏感性受到补充前TNF-α生成或固有TNF-α生成的影响。在最高tertile中，平均TNF-α生成降低43％。TNF-α生成在中间tertile中降低，但降低的量较不明显，在最低tertile中，TNF-α生成增加160％。
考虑到上述结果，本发明人确定其固有TNF-α生成导致他们成为“低产量生产者”类别的个体，即具有约850-2500ng TNF-α/L来自1×109细胞的保温物的个体，很可能对鱼油治疗反应良好。
适合用于所述方法的基因组样品可分离自任何适宜的委托人或患者细胞样品。为方便，优选所述DNA分离自面颊(颊)细胞。这使得能够容易并无痛地收集细胞。
细胞可利用具有塑料或纸质基质“刷”的一次性刮擦器械例如C.E.P.SwabTM(LifeTechnologies Ltd.，UK)从口腔内侧分离。细胞经对颊内侧面的轻柔摩擦可沉积在所述基质上，导致收集到大约2000个细胞(Aron，Y.et al(1994)Allergy 49(9)：788-90)。随后可将纸质刷放置到完全干燥，从置于微离心管中的把手中拆出，储存备分析用。
细胞样品的基因组DNA可利用常规方法分离。例如，DNA可固定在滤纸，柱基质或磁性珠上。可使用各种商业试剂盒，诸如Qiagen QIAamp试剂盒(Qiagen，Crawley，UK)。简而言之，所述细胞样品可置于微离心管中并与蛋白酶K在一起，混合，允许其保温使细胞裂解。随后加入乙醇并将裂解物转移到QIAamp旋转柱，数次洗涤后从所述柱洗脱出DNA。
通过所用具体方法分离的DNA的量可被定量以保证足够的DNA可用于试验以及测定达到PCR扩增所需DNA浓度的稀释度。例如，所需靶DNA浓度可为50ng-150ng。该范围以外的DNA浓度可影响各个等位基因的PCR扩增，并由此影响所述多态性测定步骤的敏感性和选择性。
获自样品的DNA的质量可利用任何适宜技术确定。所述技术是本领域技术人员已知的，包括UV(Maniatis T.，Fritsch E.F.，和Sambrook J.，(1982)Molecular Cloning A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory，ColdSprings Harbor，NY)或基于荧光的方法。由于UV法可由于污染物质诸如核苷酸，RNA，EDTA和苯酚等而使吸光度受到影响，并且该技术的动态范围和敏感度不像荧光法那样大，荧光法是优选的。可购得基于荧光的试剂盒诸如PicoGreen dsDNA Quantification(Molecular Probes，Eugene，Oregon，USA)。
检测样品以前，样品中的核酸可选择性扩增，例如利用聚合酶链反应(PCR)，如美国专利4,683,202和4,683,195所述。
优选用于本发明的引物长度为18-23核苷酸，无内部同源性或引物-引物同源性。
此外，为保证目的区被扩增以及特异性，采用ARMS-PCR或等位基因特异性PCR法。由此，在每个PCR反应中，一种引物的3’末端恰好位于SNP位点，使得扩增仅在对应一种具体等位基因的核苷酸碱基存在的情况下出现。每个SNP进行两次PCR反应，每次反应对一种等位基因特异。一种引物对于两种PCR反应是共同的，而对于每次反应加入分离的等位基因特异性引物，例如所述共同引物可为“正向的”，等位基因1(反应1)或等位基因2(反应2)则加入作为“反向”引物，或反之。
该方法基于最初的发现，即PCR反应中的特异性有赖于PCR引物的3’末端与其靶DNA序列的精确配对。利用该方法，利用单种属(single generic)引物结合分别的PCR反应中两种反义引物之一，点突变可与野生型序列区分。一种反义引物与所述野生型序列在其3’末端精确配对，而第二种引物与突变序列在其3’末端精确配对。因此，一次PCR反应仅扩增野生型序列而另一次仅扩增突变序列。该方法(最初称为“扩增抵抗型突变系统(amplification refractory mutation system)-PCR”(ARMS-PCR)(Newton et al1989)有赖于这样的事实，Taq DNA聚合酶缺乏3′到5′的核酸外切校对活性，使得引物-模板双链体3末端的Watson-Crick错配不能被校正，这导致误引发(mispriming)。成功应用ARMS-PCR法需要严格的条件使PCR反应中的引物退火。该方法的重要组分是包含第二引物对，其扩增第二基因序列，作为试管内阳性对照而在该试管内进行成功或失败的PCR扩增。
用于分析TNF-α，LT-α和IL-6基因的引物对的优选实例连同用于扩增来自人白细胞抗原DRB1的第三内含子的序列的对照引物示于表2，后者作为成功PCR的内部对照。
表2
  SNP   引物名称   引物序列(5’-3’)   Seq ID   产物大小(BPs)
  TNF-α-308LT-α+252IL-6-174对照引物   TNF308共同TNF308GTNF308ALT252共同LT252GLT252AIL6174共同IL6174GIL6174C6364   TCTCGGTTTCTTCTCCATCGATAGGTTTTGAGGGGCATGGATAGGTTTTGAGGGGCATGAAGATCGACAGAGAAGGGGACACATTCTCTGTTTCTGCCATGGCATTCTCTGTTTCTGCCATGATTTGTTGGAGGGTGAGGGTGGTTCCCCCTAGTTGTGTCTTGCGTTCCCCCTAGTTGTGTCTTGCCTGCCAAGTGGAGCACCCAAGCATCTTGCTCTGTGCAGAT   1234567891011   18494108796
获得DNA样品后(所述DNA优选具有目的扩增区)，个体多态性可得以鉴定。多态性标记的鉴定包括区分性检测TNF-α，LT-α和IL-6基因的等位基因形式，所述等位基因形式由于具有分别在位置-308，+252和/或-174的核苷酸取代而不同。
检测已知核苷酸差异的存在的方法是本领域技术人员已知的。这些方法包括，但不限于：
-与等位基因特异性寡核苷酸(ASO)杂交，(Wallace，R.B.et al(1981)Nucleic Acids Research.9：879-894；Ikuta，S.et al(1987)Nucleic AcidsResearch.15：797-811；Nickerson，D.et al(1990)PNAS USA 87：8923-8927，Verlaan-de Vries，M et al(1986)Gene.50：313-320，Saiki，R.K.et al(1989)PNAS.USA 86：6230-6234和Zhang，Y.et al(1991)Nucleic Acids Research.19：3929-3933)。
-等位基因特异性PCR，(Newton，C.R.et al(1989).Nucleic Acids Research.17：2503-2516，Gibbs，R.A.et al(1989)Nucleic Acids Research.17：2437-2448)。
以下对比文件详细描述了所用TNF alpha/LT alpha基因分型系统：
-Howell WM，Bateman AC，Turner SJ，Theaker JM(2002).Influence of TNFα和LTαsingle nucleotide polymorphisms on susceptibility to and prognosis incutaneous malignant melanoma in the British population European Journal ofImmunogenetics，29，17-23。
一些详述通过ARMS-PCR进行的细胞因子基因分型的其它实例包括：
-McCarron SL，Edwards S，Evans PR，Gibbs R，Dearnaley DP，Dowe A，Southgate C，The CRC/BPG UK Familial Prostate Cancer Study Collaborators，Easton  DF，Eeles RA，Howell WM (2002)Influence of cytokine genepolymorphisms on the development of prostate cancer.Cancer Research，62，3369-3372.
-Howell WM，Turner SJ，Bateman AC，Theaker JM(2001).IL-10promoterpolymorphisms influence tumour development in cutaneous malignant melanoma.Genes and Immunity，2，25-31.
-Poole KL，Gibbs PJ，Evans PR，Sadek SA，Howell WM(2001)Influence ofpatient and donor cytokine Genotypes on renal allograft rejection：evidence from asingle study.Transplant Immunology，8，259-265.
其它目的对比文件包括：
-固相显微测序(Solid-phase minisequencing)(Syvanen，A.C.et al(1993)Am.J.Human Gene t.52：46-59).
-寡核苷酸连接测定法(Oligonucleotide ligation assay)(OLA)(Wu，D.Y.，etal(1989)Genomics.4：560-569，Barany，F.(1991)PNAS USA 88：189-193，Abravaya，K.et al 1995.Nucleic Acids Research.23：675-682).
-5’荧光团核酸酶测定法(The 5’fluorogenic nuclease assay)(Lee，E.et al J.Toxicol.Soc.23：140-142，(1998)，US4,683,202，US4,683,195，US5,723,591和US5,801,155).
-限制片段长度多态性(Restriction fragment length polymorphism)(RFLP)，(Donis-Keller H.et.al.(1987)Cell，51，319-337)。
优选实施方案中，三个基因的基因座可通过用于检测多态性的特定类型的PCR评估，所述PCR通常称为Taqman实验和并利用AB7700或7900HT装置(Applied Biosystems，Warrington，UK)进行。在该方法中，合成与含有所述多态性的目的区域杂交的探针。所述探针含有三种修饰：荧光报道分子，荧光猝灭分子，以及小沟结合化学物质，以促进与基因组DNA链的结合。所述探针可与DNA的任何一条链结合。例如，在与编码链结合的情况下，当Taq聚合酶开始从5’上游引物合成DNA时，所述聚合酶将遇到探针并利用5’-3’核酸外切酶活性从所述探针移除碱基，每次一个。当与荧光报道物分子结合的碱基被移除，所述荧光分子不再被猝灭分子猝灭，而将开始发荧光。这种类型的反应仅能在所述探针与配对的基因组序列完全杂交时发生。由于扩增以连续循环的方式进行，即更多的探针和引物与反应混合物中的DNA结合，荧光的量将增加并检测到阳性结果。如果基因组DNA不具有与探针完全匹配的序列，检测不到荧光信号。
遗传多态性分析的结果可与生产者的固有TNF-α生成水平的测定结果相结合使用，以允许测定个体对鱼油治疗的易感性。下表3表明了TNF-α。LT-α和IL-6基因型在研究群体中的分布与固有TNF-α生产者状态的关系。
表3
  Tertile   TNF-α基因型   LT-α基因型(B) IL-6基因型
  1/1   1/2   2/2   1/1   1/2   2/2   GG   GC   CC
  所有低中高   76252526   33111111   2110   21885   59231917   3161015*   49161419   45111816   171052
*表示LT-α和IL-6基因型的分布明显区别于TNF-α生成的低tertile(P＜0.001：x2检验)。
从上表可见，属于TNF1/1，TNF1/2和TNF2/2基因型的个体的百分比分别为大约68％，30％和2％。基因型为TNFB1/1，TNFB1/2和TNFB2/2的个体的百分比分别为19％，53％和28％，基因型为IL-6GG，IL-6GC和IL-6CC的个体分别为53％，56％和29％。TNTNFF-α基因型似乎与TNF-α生成无关，这是由于TNF 1和TNF2等位基因的分布对于所有补充前TNF-α生成的tertile中的受试者而言几乎相同。TNFB2/B2和IL-6GG基因型的频率与TNF-α生成正相关，在TNFB2/2的情况下从最低tertile中的19％增加到最高tertile中的48％，在IL-6的情况下增幅较小，为从最低tertile中的33％增加到最高tertile中的39％。随固有TNF-α生成增加，TNFB1/B2基因型和IL-6CC基因型的频率降低。
基因型对鱼油降低LPS刺激外周血单核细胞导致的TNF-α生成的能力的影响也显示在表4中。从该表明显可见，单独的IL-6GG或TNFB 1/2多态性的存在导致具有这些基因型之一的个体对鱼油给药后降低TNF-α生成的有益效应更为易感。此外，TNFB 1/2和IL-6GG基因型的结合很可能增强鱼油降低TNF生成的效果，如56％具有该基因型的受试者显示给予鱼油后TNF-α生成减少这一事实所示(表4)。
表4
基因型对鱼油(6g/d，12周)降低LPS刺激人外周血单核细胞的TNF-α生成的能力的影响
  基因型组合   受试者总数   补充鱼油后显示TNF降低的人数   补充鱼油后没有TNF变化或升高的人数   具有在补充鱼油后显示TNF下降的基因型的受试者的百分比
  TNFB11&IL-6GG   12   4   8   33
  TNFB12&IL-6GG   45   25   20   56
  TNFB22&IL6GG   32   15   16   47
  TNFB11&IL-6GC   12   4   8   33
  TNFB12&IL-6GC   41   19   22   46
  TNFB22&IL-6GC   34   15   19   44
  TNFB11&IL-6CC   5   1   4   20
  TNFB12&IL-6CC   18   6   12   33
  TNFB22&IL-6CC   9   1   8   11
  TNFB11   29   9   20   31
  TNFB12   104   51   53   49
  TNFB22   75   31   44   41
  IL-6GG   89   44   45   49
  IL-6GC   87   38   49   44
  IL-6CC   32   8   24   25
  不考虑基因型   208   90   118   43
如果给予鱼油后的值比给予鱼油前的值降低＞10％，认为受试者的TNF-α生成降低。
TNF-β+252和IL-6-174单核苷酸多态性表征的。
10-10-2002
为本发明的目的，将鱼油从含有至少28％n-3PUFA的新鲜鱼肉和器官中提取出来，其中约60％是二十碳五烯酸，约40％是二十二碳六烯酸。所述鱼油可提取自任何鱼油来源。在这方面具体适合的是鲭鱼(mackerel)，西鲱(sprat)，鲱鱼(herring)，金枪鱼(tuna)和野生鲑鱼(wild salmon)，这些鱼富含n-3PUFA。鱼油的其余组分通常是饱和脂肪酸与单不饱和脂肪酸的混合物，其不具有鱼油的任何活性。
适宜的炎性疾病包括需要减轻炎症的任何疾病，包括炎性皮肤疾病诸如异位性皮炎(atopic dermatitis)，接触性皮炎(contact dermatitis)，湿疹(eczema)，银屑病(psoriasis)以及其它炎性疾病，诸如肛周克隆氏病(PerianalCrohn’s disease)和关节炎，例如类风湿性或银屑病性关节炎。鱼油治疗被发现对于治疗类风湿性关节炎特别有益。
一些实施方案中，方法可包含进一步将鱼油给药个体的步骤。鱼油可单独给药或与一或多种维生素B12/B6以及抗氧化剂诸如维生素C，维生素E，蕃茄红素β-类胡萝卜素和矿物质诸如镁，锰，硒和锌等联用。
诸如片剂或丸剂，其例如包含活性组分以及适宜的赋形剂，或者为富含鱼油的食物。适宜的食物将包括含油鱼(oily fish)诸如鲭鱼(mackerel)，西鲱(sprat)，鲱鱼(herring)，金枪鱼(tuna)和野生鲑鱼。
方法可包括进一步为所述个体提供饮食方案，所述方案包括含有升高水平的一或多种叶酸，维生素B6/B12和维生素C的食品。
本发明另一方面提供包含鱼油的组合物在制备用于治疗个体中炎性疾病的药物中的用途，所述个体对于一或多种TNF-α-308，LT-α+252和IL-6-174多态性而言是多态的。
本文术语“治疗”指治疗疾病，通常指治疗和疗法，无论是人或是动物(例如在兽医应用中)的，其中获得一些所需的治疗效果，例如炎性疾病进展的抑制，并包括进展速率的减慢，进展速率的停滞，炎性疾病的缓解，以及炎性疾病的治愈。包括作为预防措施的治疗(即防病)。
本文术语“治疗有效量”指活性化合物或物质，包含活性化合物的组合物或剂型的量，其对于产生一些所需的治疗效果有效，同时伴有合理的受益/风险比例。
鱼油或含有鱼油的药用组合物可通过任何方便的给药途径给予受试者，包括但不限于口服给药(即通过摄入)，或胃肠外给药，例如经皮下，肌内或静脉内注入。
所述受试者可为真核生物，动物，脊椎动物，哺乳动物，啮齿动物，鼠，犬，猫，马，牛，绵羊或人。
虽然鱼油可单独给药，优选将其作为药物组合物(例如配制剂)，其包含至少鱼油以及一或多种可药用载体、佐剂、赋形剂、稀释剂、过滤物、缓冲剂、稳定剂、防腐剂、润滑剂以及其它本领域技术人员已知的物质，并可选包括其它治疗或预防药剂。
因此，本发明还提供如上述的药物组合物，以及制备药物组合物的方法，包括将鱼油与本文所述一或多种可药用载体、赋形剂、缓冲剂、佐剂、稳定剂或其它物质进行混合。
本文术语“可药用”指在合理的医学判断范围内，适合与受试者的组织接触而不导致过度的毒性、刺激性、过敏反应或其它问题或并发症，并具有合理的受益/风险比例的化合物、物质、组合物和/或剂型。每种载体、赋形剂等在与配制剂的其它组分相容的意义上也必须是“可接受的”。适宜的载体，赋形剂等可见于标准药等教科书，例如Remington’s PharmaceuticalSciences，18th edition，Mack Publishing Company，Easton，Pa.，1990。
所述配制剂可方便地存在单位剂量形式中，并通过药物领域技术人员已知的任何方法制备。所述方法包括将活性化合物与构成一或多种辅助成分的载体结合的步骤。通常，使活性化合物与液体载体和/或粉碎的固体载体均一并紧密地结合，并按需使所得产品成型来制备所述配制剂。
配制剂可以是液体，溶液，悬液，乳液，酏剂，糖浆，片剂，糖锭，颗粒，粉末，胶囊，扁囊，丸剂，安瓿，油，栓剂，弹丸或持续释放的配制剂的形式。
适于口服(例如通过摄入)给药的配制剂可作为离散单位存在诸如胶囊，扁囊或片剂中，每种都含有预定量的活性化合物；作为粉末或颗粒；作为含水或非含水液体中的溶液或悬液；或作为水包油液体乳剂或油包水液体乳剂；作为药团；作为药糖剂(electuary)；或作为贴剂。
片剂可通过常规方法制备，例如压缩或模制，可选具有一或多种辅助成分。压缩片剂可通过在适宜机器中对自由流动形式诸如粉末或颗粒的活性化合物加压来制备，所述活性化合物可选与以下物质混合：一或多种黏合剂(例如聚烯吡酮，凝胶，阿拉伯胶，山梨糖醇，黄蓍胶，羟基丙基甲基纤维素)；填充剂或稀释剂(例如乳糖，微晶纤维素，磷酸氢钙)；润滑剂(例如硬脂酸镁，滑石，二氧化硅)；崩解剂(例如淀粉甘醇酸钠(sodium starchglycolate)，交联的聚烯吡酮，交联的羧甲基纤维素钠)；表面活性剂或分散剂或湿润剂(例如十二烷基硫酸钠)；以及防腐剂(例如甲基p-羟基苯甲酸盐(酯)，山梨酸)。成型的片剂可通过在适宜的机器中使得利用惰性液体稀释剂湿润的粉末化合物的混合物成型来制备。所述片剂可选被包被或刻痕，并配制成缓慢或受控制地释放其中的活性物质，所述配制利用例如不同比例的羟基丙基甲基纤维素以提供所需的释放图谱。片剂可选具有肠包衣，以便在除胃以外的内脏部分中释放。
胃肠外给药的特征通常在于注射，其可为皮下，肌内，或静脉内。可注射物可以以常规形式制备，其可作为液体溶液或悬液，适合在注射前溶解或悬于液体中的固体形式，或乳剂。适宜的赋形剂为，例如水，盐水，葡萄糖，甘油，乙醇等。此外，如果需要，待给药的药物组合物可含有少量非毒性辅助物质诸如湿润或乳化剂，pH缓冲剂等，诸如乙酸钠，山梨聚糖单月桂酸酯(盐)，油酸三乙醇胺，三乙醇胺乙酸钠等。
最近设计的胃肠外给药方法利用缓慢释放或持续释放系统的植入，使得保持剂量水平恒定。见例如美国专利3,710,795。
所述胃肠外组合物中所含活性化合物的百分比高度依赖于其具体性质，以及化合物的活性和患者需要。然而，溶液中0.1％-10％的活性组分百分比是可用的，并且如果所述组合物是固体，可稀释到上述百分比，则所述百分比可以更高。优选所述组合物含有的活性组分为溶液的0.2-2％。
将理解所述活性化合物，以及包含所述活性化合物的组合物的适当剂量对于不同患者而言是不同的。最优剂量的确定将通常包括治疗益处相对于本发明治疗的任何风险或有害负作用的平衡。所选剂量水平将有赖于多种因素，包括但不限于，具体化合物的活性，给药途径，给药时间，化合物排出速率，治疗持续时间，其它药物，化合物和/或联用的物质，以及所述患者的年龄，性别，体重，病情，一般健康以及病史。化合物的量以及给药途径最终由医师决定，但通常所述剂量将使得在作用位点的局部浓度可实现所需效应但不导致本质上有害或不良副效应。
在治疗过程中，可在一次剂量、连续或间断给药(例如在适当的间隔时间以分离的剂量)中实现体内给药。测定最有效给药途径和剂量的方法是本领域技术人员已知的，并随以下因素而不同：用于治疗的配制剂，治疗目的，被治疗靶细胞，以及被治疗的受试者。单次或多次给药可利用治疗师所选的剂量水平和模式进行。
通常，适宜的鱼油剂量为每天约4g-约8g，更优选每天约6g。其可为单次药团剂量的形式或更优选多次给药或持续释放制剂的形式。诸如年龄，体重性别，其它非炎性疾病的存在或缺失等因素通常对适宜的鱼油日剂量没有影响。
实施本发明方法的确切模式可利用常规技术和知识，由本领域技术人员以不同方式进行。
当然，本领域熟练技术人员将设计任何适合的对照试验，用来比较本发明方法所得结果。
本发明的方面将参照以下试验和结果举例说明，仅作为实例而并非限制。其它方面和实施方案对于本领域普通技术人员而言是明显的。
说明书中包括的所有文献都包含在此作为参考。
试验
1.受试者以及试验设计
健康男性受试者(n＝111)募集自Southampton区，其年龄28±8(20-57)，体重77±11kg(50-103kg)，体重指数24±4kg/m2(18-34kg/m2)。吸烟者以及患有炎性疾病的个体或服用抗炎药物的个体从本研究中排除。受试者继续他们的正常生活方式和饮食，还服用6g/d鱼油胶囊(提供1.8ng n-3PUFAs/天)(Maxepa，Seven Seas Ltd，Hull，UK)12周。提供血液前，受试者禁食过夜，至少12小时。分别在鱼油补充期间开始以及完成时连续取三次分离的血样。用含有肝素锂的真空管保存第一次的20ml血液；该血液用于制备PBMC。然后用无抗凝剂的真空管取5ml血液；该血液用于制备血清以测定C反应蛋白(CRP)浓度。最后用含有EDTA的真空管取5ml血液；该血液用于制备用于基因分型的DNA。
测定血清CRP浓度以检测取样时受试者中的感染或炎症的存在。任一血样中CRP浓度＞100mg/L的个体从本研究中排除。
2.TNF-α诱导和测定
PBMC通过在Histpaque-1077(Sigma Chemical Co.，Poole，UK)(Yaqoobet al，.Eur J Clin Nutr 30：399-410(2000))上离心肝素化的血液而分离，并重悬于含有2mmol/L谷氨酰胺和50ml/l自体血浆的RPMI培养基中。PBMC(2×106)在24孔组织培养板上，在存在终培养体积2ml中的终浓度为15mg/l的大肠杆菌0111：B4内毒素(Sigma Chemical Co.，Poole，UK)的条件下培养。在37℃、5％CO2/95％空气中、24小时后，离心所述培养板并将上清冻于-80℃用于分析。TNF-α浓度利用EASIAELISA试剂盒(Biosource International，Nivelles，Belgium)测定。试验间和试验内变异系数＜10％，检测限为3ng/l。
3.TNF-α和LT-α等位基因的基因分型
已经收集到EDTA中的血液等分试样对于TNF-α-308(TNF1，TNF2)和LT-α+252(TNFB 1，TNFB2)单核苷酸多态性(SNP)进行基因分型。这些SNP由于它们与TNF-α生成的公知但可变的关系而被选出(Kroeger et al.，Cytokine 12：110-119(2000)和Warzocha et al.，Blood 91：3564-81(1998))。基因组DNA通过盐析法提取(Miller et al.，Nucleic Acid Res 16：1215(1988))。利用两种反应扩增抵抗型突变系统聚合酶链反应(ARMS-PCR)法基于以前公开的方法检测每种SNP(Howell WM et al.，European Journal of Immunogenetics，29：17-23(2002)；Perrey et al.，TransplImmunol 7：127-8(1999))。在该方法中，对每种SNP进行两次分离的PCR反应。每次PCR反应还含有另外的PCR引物对，将序列从人白细胞抗原DRB1基因的内含子进行扩增，作为成功PCR的内部对照。所有PCR反应以反应体积10μl进行，终试剂浓度如下：1×AS反应缓冲液(Abgene，Epsom，UK)，200μmol/l每种dNTP，120g/l蔗糖，200μmol/l甲酚红，1μmol/l每种特异性或共同引物，0.2μmol/l每种内部对照引物，0.25单位ThermoprimePLUS DNA聚合酶(Abgene，Epsom，UK)，1.75mmol/l MgCl2和25-100ng DNA。每种SNP扩增子的PCR引物序列和产物大小如表2所示。PCR反应条件利用Primus 96Plus热循环仪(MWG Biotech，Germany)根据以下循环条件进行：96℃、60s，然后以96℃、15s，65℃、50s，72℃、40s循环10次；然后以96℃、190s，60℃、50s，72℃、40s循环20次。PCR产物直接加样于含有0.5g/l溴化乙锭的2％琼脂糖，进行电泳并在UV透射下显像。
4.血浆磷脂脂肪酸组合物
对食用鱼油治疗的依从性通过测定血浆磷脂的脂肪酸组合物来评估。利用氯仿/甲醇(2∶1v/v)从血浆提取总脂质，并利用己烷/乙醚/乙酸(90∶30∶1v/v/v)混合物作为洗脱相通过薄层色谱法分离磷脂。脂肪酸甲基酯通过与10g/l三氟化硼在甲醇中于80℃保温60分钟制备。脂肪酸甲基酯通过溶剂提取分离，干燥并在配置了30m×0.32mm BPX70毛细管柱，膜厚度0.25μm的Hewlett-Packard 6890气相色谱仪(Hewlett Packard，Avondale，PA)中通过气相色谱分离。利用1.0ml/min的氦作为载体气体，并利用分流/非分流比例为20∶1的分流/非分流注射器。注射器和检测仪温度为275℃。样品注入后，柱型烘箱温度保持在170℃、12min，并程控为以5℃/min从170增至210℃，然后保持在210℃15min。所述分离用HP GC Chem Station软件(HewlettPackard，Avondale，PA)记录。脂肪酸甲基酯通过与以前的标准操作相比较而得以鉴定。
5.统计学分析
除非另有说明，值均表示为均值±SD。鱼油补充前，TNF-α和LT-α基因型在TNF-α生成tertile中的分布利用x2检验来检测。鱼油补充前后，TNF-α生成值以及血浆磷脂中各种脂肪酸比例的差异利用Students成对t检验测定。鱼油补充前后，不同基因型TNT-α生成的差异通过单因子ANOVA测定。基因型、补充前TNF-α生成的tertile以及它们对于鱼油对TNF-α生成影响的相互作用的影响通过双因子ANOVA测定。在所有的情况中，显著性水平定为0.05，并利用Bonferonni校正进行多重比较。所有统计学比较利用SPSS Version 10(SPSS Inc，Chicago，IL)进行。
结果
1.血浆磷脂脂肪酸组合物
所有受试者显示，补充期末，其血浆磷脂中的二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸比例增加，分别平均增加370和94(表5)。鱼油来源的n-3PUFA的增加伴随血浆磷脂中花生四烯酸比例的明显降低。
表5
  脂肪酸   总脂肪酸wt的％
  补充前   补充后
  二十碳五烯酸(20:5n-3)二十碳六烯酸(22:6n-3)花生四烯酸(20:4n-6)   0.72±0.091.97±0.277.66±0.69   3.34±0.29*3.68±0.27*5.23±0.79*
*表示与补充前的值有明显差异(P＜0.01；Student成对t-检验)
基因型在研究群体中的分布以及与TNF-α生成的关系和鱼油对TNF-α生成的影响如上所述。
2.TNF-α，LT-α和IL-6基因型对于对鱼油的反应的影响
高TNF-α生产者中鱼油的抑制效应的出现与TNF-α，LT-α或IL-6基因型无关(表6)。然而，在鱼油补充后TNF-α生成降低程度的测定中，存在TNF-α基因型和固有TNF-α生成之间的明显相互作用(相互作用的P＝0.035；双因子ANOVA)。
表6
  TNF-α基因型   LT-α基因型
  1/1   1/2   B1/B1   B1/B2   B2B2
固有TNF-α生成的Tertile最低FO前改变中等FO前改变最高FO前改变 1479±6022483±2543a3655±962658±3066b8653±3126923±4429c 1294±7132365±3040a3883±9531238±3365a10748±6127-6388±8297*b 1132±5562704±13453910±10662040±255811570±4391-7161±742 1562±5922088±29723544±964203±33987553±1791-3475±2954 187±7573442±26023884±7901049±268010464±5507-3246±7800
进一步分析显示，如果补充前TNF-α生成最高tertile中的个体具有TNF1/2基因型，其TNF-α生成的减少明显高于所述个体具有TNF1/1基因型的情况(P＝0.02)(表6)。在鱼油补充后TNF-α生成减少程度的测定中，LT-α基因型和固有TNF-α生成之间的相互作用不能达到统计学显著性(相互作用的P＝0.062；双因子ANOVA)。鱼油能够抑制固有TNF-α生成的最低和中等tertile中一些个体的细胞的TNF-α生成。TNFB 1/B2等位基因对于测定这些个体对鱼油的敏感性是重要的。因此，对鱼油治疗表现TNF-α生成降低的固有TNF-α生成最低的tertile中的所有8名个体均具有TNFB 1/B2基因型。在固有TNF-α生成中等的tertile中，16名以此种方式反应的受试者中有12名具有TNFB1/B2基因型。在固有TNF-α生成最高的tertile中，TNFB1/B2基因型仅仅为对鱼油治疗表现TNF-α生成降低的受试者中一半(32名中有16名)的特征。
讨论
我们的数据提示，个体对于n-3PUFA对TNF-α生成的抑制效应的敏感性与补充前个体细胞的细胞因子固有生成水平以及TNF-α-308，LT-α+252和IL-6-174SNP编码或相关的遗传变异相关。矛盾的是，鱼油促进一些受试者中的TNF-α生成，具体是补充前生成的最低tertile中的个体。鱼油促进而不是降低TNF-α生成的能力是意料之外的。在炎性过程中，磷脂酶A2水解膜磷脂，由此使得花生四烯酸可用于制备促炎性类十二烷酸前列腺素E2(PGE2)和白三烯B4(LTB4)。体外研究显示，PGE2和LTB4对促炎细胞因子生成具有对抗效果，前者具有抑制效果而后者具有刺激效应(Endres et al.，N Eng J Med 320：265-71(1989)和Choi et al.，Cell Immunol 170：178-84(1996))。鱼油可改变细胞膜中的原花生四烯酸。所述效果将降低PGE2和LTB4生成并增加PGE3和LTB5生成。这些类十二烷酸的生物活性低于PGE2和LTB4。因此，对TNF-α生成的总体效应(抑制或刺激)有赖于从花生四烯酸以及二十碳五烯酸产生的不同的刺激和抑制性类十二烷酸之间的平衡。
如前所述，遗传影响在影响TNF-α生成中是重要的。本研究中TNF1，TNF2，TNFB1，TNFB2，IL-6GG和IL-6CC等位基因的频率与对健康英国人和其它欧洲受试者的研究公开的值接近(Perrey et al.，Transpl Immunol6：193-7(1998)，Fanning et al.，Tissue Antigens 50：23-31(1997)和Brinkman etal.，Br J Rheumatol 36：516-21(1997))，并与来自我们实验室的独立研究的结果非常接近(Howell et al.，Eur J Immunogenet 29：17-23(2002))。因此本发明研究的受试者的组代表获取其的群体，至少对于所检测的TNF-α，LT-α和IL-6基因型的频率而言如此。观察到TNFB2纯合性和固有TNF-α生成之间的阳性关系证实了Stuber et al.，Crit Care Med 24：381-4(1996)和Pociot etal.，Eur J Immunol 23：224-31(1993)的发现。然而，我们没有确定TNF-α-308基因型和TNF-α生成之间的关系。当检测固有TNF-α生成的三种tertile中个体的遗传特征与鱼油降低固有TNF-α生成的能力的相关性时，复杂的相互作用是明显的。本研究的结果提示，首先大多数(在这种情况下86％)具有高TNF-α生成固有水平的个体对鱼油的抗炎效果敏感，其次，中等与高固有TNF-α生成与对TFNB2等位基因的纯合性相关，第三，具有中等或低固有TNF-α生成水平的个体很可能经历鱼油抗炎效果，条件是所述个体是TNFB等位基因杂合的，第四，具有IL-6-174CC基因型与对鱼油抗炎效果的低水平反应性(就TNF生成而言)相关。此外，TNFB2/B2个体经历鱼油的抗炎效应的可能性较低，与他们的固有TNF-α生成水平无关。
本研究是科学文献中目前报道的关于饮食鱼油补充对人PBMC离体TNF-α生成的影响的最大研究(Calder et al.，Nutr Res 21：309-41(2001))。来自本研究的数据在被集合而不考虑每个个体的固有离体TNF-α生成，或TNF-α、LT-α或IL-6基因型的情况下，与提示鱼油对所述生成不显示调节作用的其它研究一致(Schmidt et al.，Scand J Clin Lab Med 56：87-92(1996)；Cooper at al.，Clin Nutr 12：321-8(1993)；Blok et al.，Eur J Clin Invest 27：1003-8(1997)；Molvig et al.，Scand J Immunol 34：399-410(1991)和Yaqoob et al.，Eur JClin Nutr 30：399-410(2000))。鱼油的大的剂量范围已经用于类似的研究中(0.55-6g n-3PUFA/d)。鱼油对TNF-α生成的抑制效应总体上已经在采用高于本研究所用n-3PUFA剂量的研究中得以证实(Endres et al.，N Engl J Med320：265-71(1989)；Gallai et al.，J Neuroimmunol 56：143-53(1995)和Kelley etal.，Lipids 34：317-24(1999))。然而，这并不是普遍的情况，一些研究利用更高剂量，但却显示对TNF-α生成没有影响(Blok et al.，Eur J Clin Invest27：1003-8(1997)；Molvig et al.，Scand JImmunol 34：399-410(1991)和Yaqoobet al.，Eur J Clin Nutr 30：399-410(2000))。在5项研究中(Schmidt et al.，Scand JClin Lab Med 56：87-92(1996)；Cooper at al.，Clin Nutr 12：321-8(1993)；Bloket al.，Eur J Clin Invest 27：1003-8(1997)；Meydani et al.，J Clin Invest92：105-13(1993)和Molvig et al.，Scand J Immunol34：399-410(1991))，仅仅Meydani et al的研究证实了鱼油对TNF-α生成的抑制效应。然而，在后一研究中，鱼油被给予食用低脂饮食的受试者。在这一饮食情况下，来自饮食中的n-6PUFA与来自用于掺入细胞结构的补充物的n-3PUFA之间的竞争将低于本发明中的情况。
本研究的结果，以及关于鱼油补充对TNF-α生成的影响的其它研究的结果，表明n-3PUFA摄入以及细胞因子生物学之间的相互作用是复杂的。当所给予的鱼油的剂量可决定鱼油对TNF-α生成的抑制性作用是否可在全体群体水平显示时，我们的数据提示个体对鱼油效应的不同敏感性(TNF-α-308，LT-α+252和IL-6-174SNP编码或相关的遗传变异)可限制鱼油作为抗炎剂的适宜剂量的有效性。对本发明提供的鱼油的敏感性的决定因素的确切性质的理解越多，将使得鱼油补充可比本发明的情况更为精确地用于影响炎症。

Claims (10)

1.评估个体对利用鱼油进行的炎性疾病疗法的敏感性的方法，包括测定该个体与TNF-α-308，LT-α+252和/或IL-6-174等位基因多态性相关的基因型；由此判断所述个体是否对鱼油治疗有良好反应。
2.权利要求1的方法，还包括测定所述个体的固有TNF-α状态。
3.权利要求1的方法，其中测定LT-α+252和IL-6-174等位基因的基因型。
4.权利要求1或2的方法，其中LT-α基因的基因型是杂合TNFB1/2。
5.权利要求1或2的方法，其中IL-6基因的基因型是纯合GG。
6.权利要求1或2的方法，其中LT-α和IL-6基因的基因型分别是杂合TNFB1/2和IL-6GG。
7.评估个体对利用鱼油进行的炎性疾病疗法的敏感性的方法，包括：
a)测定所述个体的固有TNF-α状态；和
b)测定所述个体与TNF-α-308，LT-α+252和/或IL-6-174等位基因多态性相关的基因型；和
由此判断所述个体是否对鱼油治疗有良好的反应。
8.治疗患者中的炎性疾病的方法，其包括评估个体对利用鱼油进行的炎性疾病疗法的易感性，所述评估包括：
a)测定所述个体与TNF-α-308，LT-α+252和/或IL-6-174等位基因多态性相关的基因型；和
b)由此判断所述个体是否对鱼油治疗有良好反应；和
用适量的鱼油治疗所述个体。
9.权利要求8的方法，还包括测定个体的固有TNF-α状态.
10.权利要求1-9之一的方法，其中所述炎性疾病选自以下疾病组成的组：炎性皮肤病，肛周克隆氏病或关节炎。
CNA2004800166798A 2003-04-22 2004-04-21 基因型对于对鱼油治疗的敏感性的影响 Pending CN1806054A (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US46433603P 2003-04-22 2003-04-22
US60/464,336 2003-04-22

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN1806054A true CN1806054A (zh) 2006-07-19

Family

ID=33310874

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNA2004800166798A Pending CN1806054A (zh) 2003-04-22 2004-04-21 基因型对于对鱼油治疗的敏感性的影响

Country Status (7)

Country Link
US (3) US20060246454A1 (zh)
EP (1) EP1616030A1 (zh)
JP (1) JP4171512B2 (zh)
CN (1) CN1806054A (zh)
AU (1) AU2004233299B2 (zh)
CA (1) CA2523377A1 (zh)
WO (1) WO2004094665A1 (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060246454A1 (en) * 2003-04-22 2006-11-02 Grimble Robert F Influence of genotype on susceptibility to treatment with fish oil
DE102005005086A1 (de) * 2005-02-03 2006-08-10 Flavin-Koenig, Dana F., Dr. Naturheilmittel-Nahrungsergänzungs-Kombinationspräparat
US20140112913A1 (en) * 2011-02-10 2014-04-24 Genqual Corporation Methods of prognosing and administering treatment for inflammatory disorders

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060246454A1 (en) * 2003-04-22 2006-11-02 Grimble Robert F Influence of genotype on susceptibility to treatment with fish oil

Also Published As

Publication number Publication date
US20060246454A1 (en) 2006-11-02
WO2004094665A1 (en) 2004-11-04
AU2004233299B2 (en) 2008-10-02
JP2006525009A (ja) 2006-11-09
US20100183734A1 (en) 2010-07-22
US20160298190A1 (en) 2016-10-13
CA2523377A1 (en) 2004-11-04
AU2004233299A1 (en) 2004-11-04
EP1616030A1 (en) 2006-01-18
JP4171512B2 (ja) 2008-10-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11739385B2 (en) Discovery of a somatic mutation in MYD88 gene in lymphoplasmacytic lymphoma
Tiwari et al. Detection of benzimidazole resistance in Haemonchus contortus using RFLP-PCR technique
Krogdahl et al. Removal of three proteinaceous antinutrients from soybean does not mitigate soybean-induced enteritis in Atlantic salmon (Salmo salar, L)
JP7109794B2 (ja) Ｔｈ１細胞誘導性細菌に対する抗菌組成物
KR20140101730A (ko) 글라티라머 아세테이트에 대한 임상 반응을 예측하는 데 유용한 단일 뉴클레오티드 다형성
CN1739027A (zh) 预测动物行为
Pineda et al. Gene expression profile induced by ovariectomy in bone marrow of mice: a functional approach to identify new candidate genes associated to osteoporosis risk in women
CN101166833A (zh) 神经精神障碍的生物标志的检测
JP2022113834A (ja) カロリー制限およびカロリー制限模倣物の同定用マーカー
US20200017921A1 (en) Gene expression markers for predicting overall survival in subjects treated with sipuleucel-t
Borm et al. A major quantitative trait locus on mouse chromosome 3 is involved in disease susceptibility in different colitis models
CN1806054A (zh) 基因型对于对鱼油治疗的敏感性的影响
Chen et al. IL-10 promoter SNPs and susceptibility to leprosy in ethnic groups from southwest China
Wang et al. Research Note: Association of LEPR gene polymorphism with growth and carcass traits in Savimalt and French Giant meat-type quails
Marrakchi et al. Interleukin 10 promoter region polymorphisms in inflammatory bowel disease in Tunisian population
AL-Obaedi et al. Assessment of Cholesteryl Ester Transfer Protein Gene Taq1B Polymorphism and Its Relationship with Lipid Levels of Hypertensive Iraqi Patients
Udenze et al. Gene-Environment Interaction of Interleukin 10 Gene Polymorphism, rs1800896, with Lifestyle on Cardiovascular Risk in Type 2 Diabetes
Fan et al. Host's P85α genotype restructures the gut microbiota and regulates fat metabolism in gibel carp
CN101029337A (zh) 多态性位点基因型预测5－羟色胺再摄取抑制剂类药物作用效果的用途和方法
Yang et al. Depression: an adaptive disease?
CN1231599C (zh) 一种精神分裂症相关基因synapsin Ⅱ及其多态性位点及其应用
WO2017018542A1 (ja) フコキサンチンを含有する抗糖化組成物
Navalta et al. Relationship of the Epigenetic Marker Global DNA Methylation with Body Composition and Cardiorespiratory Measures: 691 Board# 106 May 28, 2: 00 PM-3: 30 PM
Barberio et al. Unique Visceral Adipose Tissue Transcriptomic Signature In Obese Hispanic Females: 692 Board# 107 May 28, 2: 00 PM-3: 30 PM
Titski et al. Polymorphism β3-adrenergic Receptor Influence In Metabolic Syndrome And Physical Fitness In Adolescents: 693 Board# 108 May 28, 2: 00 PM-3: 30 PM

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Open date: 20060719