CN1787993A - 盐酸s－[2－[(1－亚氨基乙基)氨基]乙基]－2－甲基－l－半胱氨酸马来酸盐结晶盐 - Google Patents

盐酸s－[2－[(1－亚氨基乙基)氨基]乙基]－2－甲基－l－半胱氨酸马来酸盐结晶盐 Download PDF

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Abstract

本发明揭示了一种S－[2－[(1－亚氨基乙基)氨基]乙基]－2－甲基－L－半胱氨酸的新混合盐。新混合盐，盐酸S－[2－[(1－亚氨基乙基)氨基]乙基]－2－甲基－L－半胱氨酸马来酸盐，可被制成晶体，其可排列成具体用于制备药物组合物的普遍有序堆积的附聚物。本发明还描述了其药物组合物，以及制备结晶的盐酸S－[2－[(1－亚氨基乙基)氨基]乙基]－2－甲基－L－半胱氨酸马来酸盐的方法和使用盐酸S－[2－[(1－亚氨基乙基)氨基]乙基]－2－甲基－L－半胱氨酸马来酸盐治疗那些特征在于一氧化氮合酶异构体诱导的一氧化氮过表达的病症的方法。

Description

盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基 -L-半胱氨酸马来酸盐结晶盐
发明领域
本申请要求序列号为60/453,496的美国临时申请的优先权，该申请在此作为参考文献引用。
本发明包括一种用于治疗疾病的新化合物，更具体而言，S-[2-(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸的新盐，并且更具体而言，新的结晶盐酸S-[2-(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐，以及其药物组合物，用于治疗与一氧化氮合酶异构体诱导的一氧化氮不适当的表达有关的疾病。
在共同转让的美国专利6,403,830中描述和要求保护S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸，该专利在此作为参考文献引用。
发明背景
一氧化氮(NO)是通过一氧化氮合酶的几个异构体的任意一个制备的生物活性自由基气体。后来被鉴定为NO的生理活性最初发现在1980年代初，当时发现乙酰胆碱导致的血管的舒张取决于血管的内皮的存在。来源于内皮的因子则称为内皮-衍生的松弛因子(EDRF)，其调节这种血管舒张是为现在所知的NO，该NO是通过NOS的一种异构体在血管内皮产生的。作为血管扩张剂的NO的活性已经为人熟知超过100年。另外，NO是衍生于已知的硝基血管扩张剂包括亚硝酸异戊酯和酸甘油酯的活性种类。一氧化氮还是可溶性鸟苷酸环化酶(cGMP)的内源刺激物，并且因此刺激cGMP的产生。当NOS被N-丙卡巴肼(L-NMMA)抑制时，cGMP的形成被完全地阻止。除内皮依赖的舒张外，NO已知涉及许多生物作用包括巨噬细胞的细胞毒性和中枢神经系统中细胞到细胞的通信。
识别NO为EDRF与NO通过NO合酶由L-精氨酸合成NO的生化途径的发现一致。至少有以下三种类型的NO合酶：
(i)组成型的，Ca++/调钙蛋白依赖的酶，位于脑中，释放NO应答受体或物质的刺激；
(ii)Ca++非依赖酶，130kD的蛋白质，在通过内毒素和细胞因子活化血管平滑肌、巨噬细胞、内皮细胞和多种其它细胞之后诱导的；以及
(iii)组成型的，Ca++/调钙蛋白依赖的酶，位于内皮中，释放NO应答受体或物质刺激。
一旦表达，诱导的一氧化氮合酶(以下为“iNOS”)连续地长期产生NO。临床研究表明，NO产生及iNOS表达增加，在多种慢性炎症疾病如在类风湿病和骨关节炎(见，例如McInnes I.B.et al.，J.Exp.Med.184：1519(1996))，炎症性肠病(见，例如Lundberg J.O.N.et al.，Lancet 344：1673(1994))，及哮喘(见，如Hamid，Q.et al.，La7zcet 342：1510(1993))中，并且iNOS在这些慢性的炎症疾病中涉及作为主要病理的因素。
因此，抑制iNOS产生过量的NO可能是抗炎的。然而，因为从eNOS和nNOS产生的NO涉及正常生理学，对于任何NOS抑制剂被用来治疗iNOS炎症可能是理想的，以便通过eNOS产生的NO进行血压的正常生理性调节，并且，非肾上腺素的、非胆碱能神经元的传递通过nNOS产生的NO可保持未受影响。
对于所有的药物化合物和组合物，药物化合物的化学和物理稳定性在药物商业性开发上是重要的。这种稳定性包括在环境条件下的稳定性，尤其是潮湿和在储藏条件下。需要提高在不同的储存条件下的稳定性以预测商业产品的在使用期限内不同的可能储藏条件。稳定的药物避免使用特别的储存条件以及频繁的替换库存。药物化合物还必须在制造过程中也是稳定的，在制造过程中常常要求碾磨药物以得到均匀粒度和表面面积的药物。不稳定的原料常常经历多形态的变化。因此，对于药物提高其稳定性方面的任何改进提供了相对于稳定性较小的物质有意义的优势。
几种已经描述过的iNOS抑制剂，如，例如，S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸，其在共同转让的U.S.Patent number 6,403,830中被描述和要求保护。然而，那种化合物是一种无定形固体。因此提供iNOS抑制剂如S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸的结晶性固体形式可能是理想的。
附图说明
图1显示从实施例9(上图)和实施例20(下图)得到的结晶盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐的粉末X射线衍射图；
图2显示结晶的盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐的样品(实施例11)的差示扫描量热法研究的曲线图；
图3显示结晶的盐酸S-[3-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-3-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐的样品(实施例11)的热解重量分析图；
图4显示结晶盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐的样品(实施例10)的水分吸附作用图；
图5显示从实施例20的样品得到的结晶盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐的拉曼光谱；
图6显示从实施例9得到的结晶盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐的显微照相；
图7是从实施例9得到的结晶盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L半胱氨酸马来酸盐的无规堆积附聚物(randomly packed agglomerates)的二个SEM图片，图7显示附聚物通常是无规则的形状，而图7B显示团块内部结晶的无规则堆积；
图8显示通过种晶QESD结晶法并从实施例20得到的结晶盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐的有序堆积附聚物的各种SEM图片；
图9显示通过原位种晶QESD结晶法并从实施例23得到的结晶盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L半胱氨酸马来酸盐的有序堆积附聚物的二个SEM图片，图9A显示附聚物通常的圆柱形状，而图9B显示通常有序的结晶；
图10是概念上的x-T图，用于三组分体系显示固定量抗溶剂的LLPS行为；
图11是显示在恒温下三组分体系的共存表面图；
图12显示盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐结晶的有序堆积附聚物的粒度分布图；
图13是与压缩力有关的片剂硬度图；
图14是与压缩力有关的片剂厚度图；以及
图15是片剂崩解时间图。
发明内容
本发明是针对S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸的新的结晶盐的形式、药物组合物、适应于制备新盐化合物期间的整体物理特性的四种机理上不同的新的结晶工艺流程设计、制备药物组合物的方法、以及使用所述新的混合结晶盐化合物和组合物在需要抑制或调解一氧化氮合成的受试者上通过给与化合物的盐来抑制或调整一氧化氮合成的方法，该化合物的盐对于一氧化氮合酶可诱导的同型异构体的抑制或调整作用优先于一氧化氮合酶组成的同型异构体。本化合物盐具有有用的一氧化氮合酶抑制活性，并且有望用于治疗或预防疾病或情况，其中一氧化氮的合成或过度合成形成起作用的部分。
按化学计算，该新盐是两分子S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸与一分子的马来酸和一分子的盐酸。
混盐的新晶体特征通过下列一些或所有物理测量来坚定：元素分析(如通过燃烧分析)、熔点和熔化热(差示扫描量热法和热解重量分析)、折射率(偏振光显微术)、X射线粉末衍射图、拉曼光谱和潮湿吸附作用(例如，DAlS湿度平衡)。
本新盐能用来治疗疾病包括软骨退化，其在某些条件下发生如关节炎。因此，其中有利于抑制NO从L-精氨酸产生的情况包括关节炎的情况如变形性关节炎、骨关节炎、痛风性关节炎、少年关节炎、脓毒性关节炎、脊椎关节炎、急性风湿性关节炎、肠病关节炎神经病性关节炎和化脓性关节炎。另外，在关节炎，具体是骨关节炎中，NO诱导的软骨细胞呼吸衰退能够调整基质的减少和继发性的软骨矿化。
本混盐可能有用的其他疾病，包括慢性或炎症性肠病、心血管局部缺血、糖尿病、充血性心力衰竭、心肌炎、动脉粥样硬化、偏头痛、青光眼、主动脉瘤、反流性食管炎、腹泻、过敏性肠综合征、囊性纤维化、肺气肿、哮喘、支气管扩张症、痛觉过敏、脑缺血、血栓性的中风、总体缺血(继发性的至心跳骤停)、多发性硬化及其他通过NO调解的中枢神经系统病症，例如帕金森氏症和阿尔茨海默氏症。NO抑制可能有用的更进一步的神经变性的病症，包括在如缺氧、低血糖、癫痫症和外伤(如脊髓和颅脑损伤)、高压氧惊厥和毒性、痴呆例如早老性痴呆和爱滋病相关痴呆、西登哈姆氏舞蹈病、亨廷顿病、肌萎缩外侧硬化症、Korsakoffs疾病、关于脑血管病症的愚痴、失眠、精神分裂症、抑郁症、与经前期综合征有关的抑郁或其他的症状(PMS)、焦虑和脓毒性休克的病症中神经退化及/或神经坏死。
本混盐也可用于一氧化氮抑制在治疗中也能起作用的疾病，如疼痛包括体因性的(感受伤害的或者神经性的)，急性和慢性的都包括。本混盐可被用于传统上给与常见的NSAID或鸦片样物质的任何情况。
而且，用本混盐通过抑制NO产生可治疗的其他的病症包括鸦片耐受性病人需要延长鸦片止痛，以及使用苯二氮杂类的病人的苯二氮杂耐受性，及其他上瘾行为，例如，烟碱和饮食失调症。本混盐也可用作抗菌剂。
更进一步的疾病，其中本混盐可用来抑制NO从L-精氨酸产生，包括与多种药物诱导的败血病/或中毒性休克有关的全身性低血压；用细胞因子如TNF、IL-1和IL-2治疗；以及作为在移植治疗时短期免疫抑制的辅药。
本混盐也可用于眼部疾病治疗(如眼高血压视网膜炎眼色素层炎)、全身性红斑狼疮(SLE)、肾小球性肾炎、再狭窄、病毒感染的炎症后遗症、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、氧化剂诱导的肺损伤、如癌症患者的IL2治疗、恶病质，免疫抑制如在移植治疗、胃肠动力性疾病、晒伤、湿疹、牛皮癣、齿龈炎、胰腺炎、感染引起的胃肠道损害、囊性纤维化，免疫系统功能障碍治疗如作为器官移植治疗中短期免疫抑制的辅药、引产术、腺瘤的多发性息肉、抑制肿瘤生长、化学疗法、化学预防和支气管炎。
本发明也针对药物组合物，用于治疗疼痛、哮喘及其他气道病症、癌症、关节炎、眼的病症包括视网膜病和青光眼、炎症相关病症包括过敏性肠综合征及其他病症，其中过量产生的一氧化氮起作用，该组合物含有治疗有效量的结晶的盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐和可药用的载体、稀释剂或载体。
除用于人的治疗之外，此形式也用于伴生种动物、外来动物和家畜，包括哺乳动物、啮齿类的兽医治疗等等。更优选的动物包括马匹、狗和猫。
发明详述
定义
在此使用的术语“治疗(treat)”、“治疗(treating)”和“治疗(treatment)”，包括预防、姑息疗法或恢复治疗。术语“有效量”表示有助于治疗的剂量。有效量可单个剂量给药，或在时间内分剂量给药。
术语“ACN”表示乙腈。
当应用于S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸时，此处术语“无定形的”指固态，其中S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基-2-甲基-L-半胱氨酸分子以无序排列存在并且不形成可区别的晶格或晶胞。当受到X射线粉末衍射时，无定形的S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸不产生任何特征晶体峰。
当应用于S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸时，此处术语“晶形”指固态形式，其中S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]-2-甲基-L-半胱氨酸分子排列形成可区别的晶格(i)包括可区别的晶胞，以及(ii)当受到X射线辐射时产生衍射峰。
术语“S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐I型”，“S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸I型”和“I型”都表示S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐结晶盐I型，在共同待决的U.S.Application Serial Number 60/453,796中更充分地描述，并在此全面引入作为参考。
术语“S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐II型”，和“S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸II型”和“II型”都表示S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐结晶盐II型，在共同待决的U.S.ApplIIcatIIon SerIIal Number 60/453,796中更充分地描述，并在此全面引入作为参考。
术语“盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐”，“盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐晶体，”和“混盐”都指盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐的晶体形式，对应0.5摩尔的马来酸和0.5摩尔HCI，含有化学计算的1摩尔的S-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸，在此更充分地描述。
此处使用的术语“结晶”可指结晶和/或重结晶，取决于关于制备S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸的开始材料的适用的环境。
此处使用的术语“API”表示活性药物成份。
此处使用的术语“二，”，表示N，N′-亚甲基-二-丙烯酰胺
此处使用的术语“DI水”表示去离子水。
此处使用的术语“DMF”表示N，N-二甲基甲酰胺。
术语“D/W/A”指N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、水和乙腈的三元溶剂体系。
此处使用的术语“S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸”，表示S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸本身，正如使用该术语上下文所限定的，并且可指未制剂的S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸或作为药物组合物的成份存在的S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸。
术语“DSC”表示差示扫描量热法。
术语“ΔHfus”或“ΔHfus”表示物质的融解焓，并且指在其熔点温度下(用千焦耳计算)要求熔化一克的物质的能量。
术语“HPLC”表示高压液相色谱法。
术语“IR”表示红外线。
术语“kN”表示千牛顿。
术语“kP”表示千克力。
此处所用术语“ρ”或rho，指密度。
术语“ρb”表示松密度。
术语“ρt”表示堆积密度。
术语“CI”表示压缩指数，正如下式所定义：
CI = 1 - ρ b ρ t
术语“NMR”表示核磁共振，并可适用于核磁共振色谱法。
术语“ml”表示毫升。
术语“mg”表示毫克。
术语“g”表示克。
术语“kg”表示公斤。
术语“μg”表示微克。
术语“μl”表示微升。
术语“min”表示分钟。
术语“MW”表示分子量。
在此所用的术语“晶核形成”，表示在溶液中形成晶体。
在此所用的术语“纯度”，除非另外限定，表示盐酸S-[2-[(1亚氨基乙基)氨基乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐晶体的化学纯度，根据传统的HPLC试验。
术语“PXRD表示粉末X射线衍射。
术语“rpm”表示每分钟转数。
在此所用的术语“种晶”，表示将晶体加到结晶体系中，以便开始或增强晶核形成或作为更进一步结晶的基质。
术语“附聚物”，泛指无规则或有序地在单元内填充独立晶体，单元在积极地温和操作如固体转化期间不容易地被破坏。
术语“SEM”表示扫描电子显微术。
术语“TGA”表示热解重量分析。
术语“Tm”表示熔化温度。
术语“两性离子”或“ZW”表示带有正和负电荷的分子。术语“自由两性离子”表示分子的净电荷为零的两性离子。除非另有陈述，在此所用的术语“两性离子”或“ZW”，表示S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2甲基-L-半胱氨酸两性离子。
盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐结晶盐将用于治疗，其中包括治疗受试者的炎症或治疗其他的一氧化氮合酶介导的病症，如，在治疗疼痛和头痛时，或作为解热剂治疗发烧。例如，盐酸S-[2-[(I-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐结晶盐可用于治疗关节炎，包括但不限于风湿性关节炎、脊椎关节病、痛风性关节炎、骨关节炎、全身性红斑狼疮、少年关节炎、急性风湿性关节炎、enteropathic关节炎、神经病性关节炎、牛皮癣关节炎和化脓性关节炎。其中盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐结晶盐将提供益于抑制NO从L-精氨酸产生的疾病包括关节炎的疾病。
盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐结晶盐将更进一步地用于治疗哮喘、支气管炎、月经痛性痉挛(例如，痛经)、早产、腱炎、粘液囊炎、皮肤相关疾病如牛皮癣、烧伤、晒伤、皮炎、胰腺炎、肝炎和术后炎症包括眼外科手术如白内障手术和屈光的手术。盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-半胱氨酸马来酸盐结晶盐也可用于治疗胃肠的疾病如炎症性肠病、克罗恩氏病、胃炎、过敏性肠综合征和溃疡性结肠炎。
盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐结晶盐可用于癌症的预防或治疗，如结肠直肠的癌症和乳癌、肺癌、前列腺癌、膀胱癌、颈癌和皮肤癌。本发明的盐酸S-[2-[(I-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐结晶盐可用于治疗这类疾病的炎症和组织损伤，如血管疾病、偏头痛、结节性动脉周围炎、甲状腺炎、再生障碍性贫血、何杰金病、硬化病、风湿热、I型糖尿病、神经肌肉接头病包括重症肌无力、白质病包括多发性硬化、结节病、肾病综合征、白塞氏综合征、多肌炎、齿龈炎、肾炎、超敏性、损伤之后出现肿胀、心肌缺血等等。盐酸S-[2-[(I-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐结晶盐也可用于治疗眼科的疾病，如青光眼、视网膜炎、视网膜病、眼色素层炎、眼的畏光以及与眼组织急性损伤有关的炎症和疼痛。其中使用本发明的盐酸S-[2-[(I-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐结晶盐特别有效的是治疗青光眼，尤其其中青光眼的症状是由一氧化氮的产生引起的，如一氧化氮介导的神经损伤。
盐酸S-[2-[(I-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐结晶盐也可用于治疗肺部的炎症，如与病毒感染和囊性纤维化有关的。该结晶盐也可用于治疗某些中枢神经系统病症，如脑痴呆包括阿尔茨海默氏病，以及中风、缺血和外伤导致的中枢神经系统损害。
盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-半胱氨酸马来酸盐结晶盐用作抗炎药，例如治疗关节炎，并显著地具有较少不良副作用的额外利益。
盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-半胱氨酸马来酸盐结晶盐也可用于治疗过敏性鼻炎，呼吸窘迫综合征、内毒素休克综合征和动脉粥样硬化。
盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-半胱氨酸马来酸盐结晶盐也可用于治疗疼痛，包括而不是限于手术后的疼痛、牙痛、肌肉疼痛和由癌症引起的疼痛。盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-半胱氨酸马来酸盐结晶盐可用于预防痴呆，如阿尔茨海默氏病。
除用于治疗人之外，盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-半胱氨酸马来酸盐结晶盐也用于伴生种动物、外来动物和家畜的兽医治疗，包括哺乳动物、啮齿类等等。更优选的动物包括马、狗和猫。
本盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-半胱氨酸马来酸盐结晶盐也可用于共同治疗，局部地或完全地，代替其他的传统的抗炎疗法，如和类固醇、NSAIDs、COX-2选择性抑制剂、5-脂氧合酶抑制剂、LTB4拮抗剂和LTA4水解酶抑制剂联用。
本发明盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-半胱氨酸马来酸盐结晶盐将利于抑制NO的其他疾病包括心血管缺血、糖尿病(I型或II型)、充血性心力衰竭、心肌炎动脉粥样硬化、偏头痛、青光眼、主动脉瘤、反流性食管炎、腹泻、过敏性肠综合征、囊性纤维化、肺气肿、哮喘、支气管扩张症、痛觉过敏(异常性疼痛)、脑缺血(病灶的缺血、血栓性的中风)和整体缺血(例如，继发性的心跳骤停)、多发性硬化及其他通过NO调解的中枢神经系统病症，例如帕金森氏症。NO抑制可能有用的更进一步神经变性的病症，包括在诸如缺氧、低血糖、癫痫症中和在中枢神经系统(CNS)外伤(如脊髓和颅脑损伤)、高压氧惊厥和毒性、痴呆例如早老性痴呆和爱滋病相关痴呆、恶病质、西登哈姆氏舞蹈病、亨廷顿病、肌萎缩外侧硬化症、Korsakoffs疾病、关于脑血管病症的愚痴、失眠、精神分裂症、抑郁症、与经前期综合征(PMS)有关的抑郁或其他的症状、焦虑和脓毒性休克中的神经退化及/或神经坏死。
本发明的盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-半胱氨酸马来酸盐结晶盐也将用于治疗疼痛包括体因性的(感受伤害的或神经性的)，急性和慢性都包括。盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-半胱氨酸马来酸盐结晶盐用于任何包括传统上给予常见的NSAID或鸦片类止痛剂的神经性的疼痛的疾病。
通过本发明的盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-半胱氨酸马来酸盐结晶盐，可有效治疗其他的病症或疾病包括治疗或预防鸦片耐受性病人需要延长鸦片止痛剂、苯(并) 杂
Figure A20048001289600132
耐受性病人服用苯(并)二氮杂、及其他上瘾的行为，例如，尼古丁成瘾性、酒精中毒和嗜食症。
本发明的盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-半胱氨酸马来酸盐结晶盐也将用于治疗或预防药物戒断症状，例如，药物戒断症状，例如治疗或预防鸦片、乙醇或烟草成瘾性的戒断症状。
盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐结晶盐当与抗菌剂或抗病毒剂联合治疗时也可用于预防组织损伤。
本发明的盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐结晶盐也将用于抑制NO从L-精氨酸产生包括通过多种药物诱导的与败血病及/或毒性出血性休克有关的全身性低血压；用细胞因子治疗如TNF、IL-1和IL-2；以及作为移植治疗短期免疫抑制的辅药。
本发明更进一步地针对本发明的盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐结晶盐用于治疗和预防瘤形成。将用盐酸S-2-[(亚氨基乙基)氨基]乙基-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐结晶盐和本发明的方法能治疗的或可预防的瘤形成包括脑癌、骨癌、白血病、淋巴瘤、上皮细胞衍生的瘤形成(上皮癌)如基底细胞癌、腺癌、胃肠的癌症如唇癌、口癌、食管(esophogeal)癌症、小肠癌和胃癌、结肠癌、肝癌、膀胱癌、胰腺癌、卵巢癌症、颈癌、肺癌、乳癌和皮肤癌、如扁平细胞和基底细胞癌症、前列腺的癌、肾细胞癌，及其他影响遍及全身的上皮细胞的已知的癌症。优选地，被治疗的瘤形成选自胃肠的癌、肝癌、膀胱癌、胰腺癌、卵巢癌、前列脲癌、颈癌、肺癌、乳癌和皮肤癌、如扁平细胞和基底细胞癌症。本发明的盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐结晶盐II型和方法还可以用来治疗放射疗法发生的纤维化。本盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐结晶盐和方法可用于治疗有腺瘤性息肉的对象，包括那些有家族性腺瘤多发性息肉(FAP)的人。另外，盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐结晶盐和方法可用于预防有FAP危险的患者形成息肉。
本发明的盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐结晶盐与另外的抗肿瘤药联合治疗将产生协同效应或减少与化学疗法有关毒副作用，通过减少导致副作用的药物疗效所需的治疗剂量或通过直接减少导致副作用药物的毒副作用症状。本发明盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐结晶盐将更进一步地用作放射疗法的辅助药物以减少副作用或增强效应。
在本发明中，能与本发明的盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐结晶盐联合治疗的另外药物，包括能够抑制环加氧酶-2(“COX-2”)任何治疗药物。优选地上述COX-2抑制剂相对于该酶的环加氧酶-1(“COX-1”)选择性抑制COX-2。上述COX-2抑制剂被称为“COX-2选择性的抑制剂”。用于与本发明的盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐结晶盐联合治疗的COX-2选择性的抑制剂，包括塞来考昔，伐地考昔，地拉考昔，艾托考昔、罗非考昔，ABT-963(2-(3，4-二氟苯基)-4-(3-羟基-3-甲基-1-丁氧基)-5-[4-(甲磺酰)苯基-3(2H)-哒嗪酮；在PCT Patent Application No.WO 00/24719中被描述)，或美洛昔康。本发明的盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐结晶盐还可以有利地用于与COX-2选择性的抑制剂的前体药物联合治疗，例如帕瑞考昔。
可选择将与本发明盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐结晶盐联合使用的另外的化疗剂，例如，从下列非全面的和非限制的表中选择：
α-二氟甲基鸟氨酸(DFMO)、5-FU-纤维蛋白原、acanthifolic酸、氨基噻二唑、布喹那钠、卡莫氟、Ciba-Geigy CGP 30694、环戊基胞嘧啶、磷酸阿糖胞苷硬脂酸盐、阿糖胞苷轭合物(cytarabine conjugates)、Lilly DATHF、Merrel Dow DDFC、地扎呱宁、双脱氧胞苷、二脱氧肌苷、didox、Yoshitomi DMDC、去氧氟尿苷、Wellcome EHNA、Merck & Co.EX-015、法扎拉滨、5-氟脱氧尿苷、磷酸氟达拉滨、5-氟尿嘧啶N-(2′-呋喃基(furanidyl))-5-氟尿嘧啶、Daiichi Seiyaku FO-152、异丙基吡咯尼群、Lilly LY-188011、Lilly LY-264618、methobenzaprim、氨甲蝶呤、WellcomeMZPES、norspermidine、NCI NSC-127716、NCI NSC-264880、NCI NSC-39661、NCI NSC-612567、Warner-Lambert PALA、喷司他丁、吡曲克辛、金霉酸、AsahiChemical PL-AC、Takeda TAC-788、巯基鸟嘌呤、噻唑呋林、Erbamont TIF、曲美沙特、酪氨酸激酶抑制剂、酪氨酸蛋白激酶抑制剂、Taiho UFT、uricytin、Shionogi254-S、醛固酮磷酰胺类似物、六甲密胺、阿那昔酮、Boehringer Mannheim BBR-2207、bestrabucil、布多替钛、Wakunaga CA-102、卡铂、亚硝脲氮芥、Chinoin-139、Chinoin153、苯丁酸氮芥、cisplatin、环磷酰胺、American Cyanamid CL-286558、SanofiCY-233、cyplatate、Degussa D-19-384、Sumimoto DACHP(Myr)2、二苯基螺内酯、diplatinum细胞生长抑制剂、Erba偏端霉素衍生物、Chugai DWA-2114R、IT1 E09、依莫司汀、Erbamont FCE-245 17、雌氮芥磷酸钠、福莫司汀、Unimed G-6-M、ChinoinGYKI-17230、hepsul-fam、异磷酰胺、异丙铂、环己亚硝脲、马磷酰胺、二溴卫矛醇、Nippon Kayaku NK-121、NCI NSC-264395、NCI NSC-342215、奥沙利铂、UpjohnPCNU、松龙苯芥、Proter PTT-119、雷莫司汀、甲基环己亚硝脲、SmithKline SK &F-10 1772、Yakult Honsha SN-22、螺莫司汀、Tanabe Seiyaku TA-077、牛碘莫司汀、替莫唑胺、替罗昔隆、四铂、trimelamol、Taiho 4181-A、阿柔比星、放线菌素D、actinoplanone、Erbamont ADR-456、aeroplysinin衍生物、Ajinomoto AN-201-11、Ajinomoto AN 3、Nippon Soda茴香霉素、蒽环类抗生素、连氮基霉菌素-A、bisucaberin、Bristol-Myers BL-6859、Bristol-Myers BMY-25067、Bristol-MyersBMY-2555 1、Bristol Myers BMY-26605、Bristol-Myers BMY-27557、Bristol-MyersBMY-28438、硫酸博来霉素、苔藓抑素-1、Taiho C-1027、calichemycin、chromoximyein、更生霉素、柔红霉素、Kyowa Hakko DC-102、Kyowa Hakko DC-79、Kyowa Hakko DC-88A、Kyowa HaEo DC89-A1、Kyowa Hakko DC92-B，ditrisarubicin B、Shionogi DOB-41、阿霉素、阿霉素-纤维蛋白原、elsamicin-A、表柔比星、癌基因抑活药、依索比星、esperamicin-Al、esperamicin-Alb、Erbamont FGE-21954、Fujisawa FK-973、福司曲星、Fujisawa FR-900482、glidsbactin、gregatin-A、grincamycin、除莠霉素、伊达比星、隐杯伞霉素、kazusamycin、kesarirhodins、KyowaHa & o KM、kazusamycin、kesarirhodins、Kyowa Hakko KM-5539、Kirin BreweryKKN 8602、Kyowa Hakko KT-5432、Kyowa Hakko KT-5594、Kyowa Hakko KT-6149、American Cyanamid LL-D49194、Meiii Seika ME 2303、美诺立尔、丝裂霉素、米托蒽醌、SmithKline M-TAG、neoenactin、Nippon Kayaku NK-313、Nippon Kayaku NKT01、SRI International NSC-357704、溶菌素、oxaunomycin、派来霉素、pilatin、吡柔比星、porothramycin、pyrindamycin A、Tobishi RA-I、雷帕霉素、根霉素、罗多比星、西班米星、siwenmycin、Sumitomo SM-5887、Snow Brand SN-706、Snow BrandSN-07、sorangicin-A、司帕霉素、SS Pharmaceutical SS 21020、SS Pharmaceutical SS73 13B、SS Pharmaceutical SS-98 16B、司替霉素B、Taiho 4181-2、他利霉索、TakedaTAN-868A、terpentecin、thrazine、tricrozarin A、Upjohn U-73975、Kyowa HakkoUCN-10028A、Fuiisawa WF-3405、Yoshitomi-25024、佐柔比星、α-胡萝卜素、α-二氟甲基-精氨酸、阿昔曲丁、Biotec AD-5、Kyorin AHC-52、鸡骨常山碱、氨萘非特、苯丙氨乙茶碱、安吖啶、Angiostat、ankinomycin、抗瘤酮A10、抗瘤酮A2、抗瘤酮A3、抗瘤酮A5、抗瘤酮AS2-1、Henkel APD、阿非迪霉素甘氨酸盐、天冬酰胺酶、阿瓦醇、燕茜素、batracylin、benfluron、氯苯酰色氨酸、Ipsen-BeaufourBIM-23015、比山群、头孢匹林-Myers、BMY-40481、Vestar硼-10、bromofosfamide、Wellcome BW-502、Wellcome BW-773、卡醋胺、carmethizole盐酸盐、AjinomotoCDAF、chlorsulfaquinoxalone、Chemex CHX-2053、Chemex CHX-100、Warner-Lambert  CI-921、Warner-LambertCI-937、Warner-Lambert CI 941、Warner-Lambert CI-958、克兰氟脲、claviridenone、ICN化合物1259、ICN化合物4711、Contracan、Yakult Honsha CPT-11、克立那托、curaderm、细胞分裂抑素B、阿糖胞苷、cytocytin、Merz D-609、DABIS马来酸、氮烯唑胺、datelliptinium、代代宁B、dihaematoporphyrin醚、氢吗啡醇、地那林、偏端霉素、Toyo Pharmar DM-341、Toyo Pharmar DM-75、Daiichi Seiyaku DN-9693、elliprabin、elliptinium醋酸盐、Tsumura EPMTC、麦角胺、依托泊苷、阿维A酯、芬维A胺、Fujisawa FR-57704、硝酸镓、芫花烯、Chugai GLA-43、GlaxoGR-63178、灰树花多糖NMF 5N、十六烷胆碱磷酸、Green CrossHO-221、高三尖杉酯碱、羟基脲、BTGICRF-187、伊莫福新、异谷氨酰胺、异维甲酸、Otsuka JI-36、Ramot K-477、Otsuak K-76COONa、Kureha Chemical K-AM、MECT CorpKI-8110、American Cyanamid L-623、白细胞调节素、氯尼达明、Lundbeck LU-23-112、Lilly LY-186641、NCI(US)MAP、marycin、Merrel Dow MSL-27048、Medco MEDR-340、merbarone、部花青衍生物、甲苯胺吖啶、Molecular Genetics MGI-136、minactivin、胺硝萘酞胺、迷托醌、莫匹达谋、甲苯壬四酰胺、Zenyaku Kogyo MST-16、N-(retinoyl)氨基酸、Nisshin Flour MillingN-021、N-酰化-脱氢丙氨酸、那法扎琼、TaishoNCU-190、诺考达唑衍生物、精氨酸血红素、NCI NSC-145813、NCINSC-361456、NCI NSC-604782、NCI NSC-95580、奥曲肽、Ono ONO-112、oquizanocine、Akzo Org-10172、pancratistatin、帕折普汀、Warner-Lambert PD-111707、Warner-Lambert PD-115934、Warner-LambertPD-131141、Pierre Fabre PE-1001、ICIPT peptide D、吡罗蒽醌、polyhaematoporphyrin、polypreic acid、月见草油卟啉、probimane、甲基苄肼、丙谷胺、Invitron微管连接蛋白酶I、Tobishi RA-700、丙亚胺、Sapporo Breweries、RBS、restrictin-P、瑞替普汀、视黄酸、Rhone-Poulenc RP-49532、Rhone-Poulenc RP-56976、SmithKline SK& F-104864、Sumitomo SM-108、Kuraray SMANCS、SeaPhann SP 10094、spatol、spirocyclopropane衍生物、螺旋锗、Unimed，SS Pharmaceutical SS-554、Strypoldinone、棕叶藻酮、Suntory SUN 0237、Suntory SUN 2071、过氧化物歧化酶、Toyama T-506、Toyama T-680、红豆杉醇、Teijin TEI-0303、替尼泊苷、thaliblastine、Eastman KodakTJB-29、生育三烯酚、Topostin、Teijin TT-82、Kyowa Hakko UCN-01、Kyowa HakkoUCN-1028、ukrain，Eastman Kodak USB 006、硫酸长春碱、长春新碱、去乙酰长春酰胺、vinestramide、长春瑞滨长春曲醇、长春利定、睡茄交酯、Yamanouchi YM-534、uroguanylin、考布他汀、多拉司他汀、伊达比星、表柔比星、雌氮芥、环磷酰胺、9-氨基-2-(S)-喜树碱、托泊替康、依立替康(盐酸伊立替康和山梨醇注射剂)、依西美坦、曲普瑞林(tryptorelin)或ω-3脂肪酸。
可用于与本发明的盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐结晶盐II型联用的放射防护剂的实例包括AD-5、adchnon、阿密磷定类似物、detox、地美司钠、1-102、MM-159、N-酰化-脱氢丙氨酸、TGF-Genentech、噻丙莫特、阿密磷定WR-151327、FUT-187、经皮吸收的酮洛芬、萘普酮、过氧化物歧化酶(Chiron)和过氧化物歧化酶Enzon。
本发明的盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐盐结晶盐也将用于治疗或预防血管发生相关病症或疾病，例如，肿瘤生长、转移、黄斑变性和动脉粥样硬化。
在更进一步的实施方案中，本发明也提供联合治疗以治疗或预防眼科的病症或疾病如青光眼。例如发明的盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸结晶盐将有利地用于联合治疗，与减少患有青光眼的患者的眼睛内压的药物联用。上述减少眼内压的药物不限制地包括拉坦前列素、曲伏前列素、比马前列素或乌诺前列酮。本发明的盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐结晶盐加上减少内压药物的联合治疗将有用，因为各自通过影响不同的机制达到其效果。
在本发明的其他联用中，本发明的盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐盐结晶盐能用于与抗高血脂药或降胆固醇药物如苯并噻吩或苯并噻氮类抗高血脂药药物联合治疗。苯并噻氮抗高血脂药物用于本发明的联合治疗的实例可见于U.S.Patent No.5,994,391，在此引入作为参考。一些苯并噻氮类抗高血脂药物在WO 93/16055中被描述。或者，抗高血脂药或降胆固醇药物用于与本发明的化合物联用可为HMG辅酶A还原酶抑制剂。用于本联合治疗的HMG Co-A还原酶抑制剂的实例分别地包括，苯氟雷司、氟伐地汀、洛弗斯特丁、provastatin、辛伐他汀、阿伐他汀、西立伐他汀、柏伐他汀、ZD-9720(描述于PCT Patent Application No.WO 97/06802)、ZD-4522(CAS No.147098-20-2钙盐；CAS No.147098-18-8钠盐(描述于European PatentNo.EP 521471)、BMS 180431(CAS No.129829-03-4)，或NK-104(CAS No.141750-63-2)。本发明的盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸结晶盐加抗高血脂药或降胆固醇药物的联合治疗将有用，例如，在减少血管形成动脉粥样硬化病变的危险方面。例如，动脉粥样硬化病变常常开始于血管的炎症位置。已证实，抗高血脂药或降胆固醇药物通过降低血液中的脂类水平减少动脉粥样硬化病变形成的危险。本发明不限于单一的作用机制，据信盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐结晶盐的联用一方面将有助于提供动脉粥样硬化病变的改善，通过，例如，减少血管的炎症同时降低血脂水平。
在本发明的其他实施方案中，本发明的盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐结晶盐能与其他的化合物或疗法联用，治疗中枢性神经疾病或病症如偏头痛。例如，本盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸结晶盐用于与咖啡因联用，一种5-HT-1B/1D激动剂(例如，曲坦(triptan)如舒马曲坦、那拉曲坦、佐米曲坦、利扎曲坦、阿莫曲坦或夫罗曲普坦)，一种多巴胺D4拮抗剂(如索奈哌唑)、乙酰水杨酸、醋氨酚、布洛芬、消炎痛、甲氧萘丙酸钠、握克丁、二氯醛比林、布他比妥，一种麦角生物碱(例如，麦角胺、二氢麦角胺、溴麦角环肽、麦角新碱或甲基麦角新碱)，一种三环的抗抑郁药(例如，阿米替林或去甲替林)，一种5-羟色胺拮抗剂(例如二甲麦角新碱或盐酸二苯环庚啶)，一种β-andrenergic拮抗剂(例如，心得安、噻吗洛尔、阿替洛尔、纳多洛尔或美托洛尔)，或一种单胺氧化酶抑制剂(例如，苯乙肼或异卡波肼)。
更进一步的实施方案提供本发明的盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐结晶盐与鸦片类化合物联合治疗。用于此联合的鸦片类化合物没有限制地包括吗啡、美沙酮、氢吗啡酮、氧吗啡酮、左吗南、左洛啡烷、可待因、二氢可待因、二氢羟基可待因酮、镇痛新、二氢可待因酮、羟考酮、纳美芬、羟戊甲吗啡、左吗南、芬太尼、舒芬太尼、DAMGO、布托啡诺、丁丙诺啡、纳洛酮、纳曲酮、CTOP、二丙诺啡、β-funaltrexamine、纳洛肼、纳洛芬、镇痛新、环丁甲羟氢吗啡、纳洛酮、苯酰基腙(benzoylhydrazone)、布马佐辛、乙基氧代环唑星、U50、488、U69、593、螺朵林、nor-binaltorphimine、naltrindole、DPDPE、[D-la2、glu4]δ啡肽、DSLET、met-脑啡肽、leu-脑啡肽、β-内啡肽、强啡肽A、强啡肽B和α-新内啡肽。本发明的盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐结晶盐与鸦片类化合物联用的优势为本发明的盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸结晶盐将能减少鸦片类化合物的剂量，从而减少鸦片类副作用的危险或严重性，如鸦片类成瘾性。
更进一步的实施方案提供四种机制上独特的新的结晶法，为制备本发明的盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸结晶盐设计，用合适的大量的粉剂特征便于制备包括盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐结晶盐和可药用的载体的药物组合物。
说明实施例
制备盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐的方法熟知和被描述于共同转让的U.S.patent number6 403,830，在此引入作为参考。S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸游离两性离子被描述于共同待决的U.S.Application Serial Number 60/453,798，在此引入作为参考。晶体S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐I型被描述于共同待决的U.S.Application Serial Number 60/453,796，在此引入作为参考。晶体S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐II型被描述于共同待决的U S.Application Serial Number 60/453,782，在此引入作为参考。
盐酸S-[2[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐的特征
当通过偏振光显微镜分析时，本发明的盐酸S-[2[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐晶体是具有正延性的双折射的。盐酸S-[2[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐结晶盐具有超过150mg ml-1的水溶性。
图1为本发明的盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐的两个样品(实施例9和20)的粉末X射线图。二衍射图都建立特征峰用于表现盐酸S-[2[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐晶体的特征。
图2为本发明的盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐晶体的样品的差示扫描量热法研究图。显示在197.30℃的以及焓为134.92 J grams-1的单一熔化/分解热量的情况。因为单一的热量的情况为盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐晶体中的马来酸的热降解和残留结晶固体熔化的复合，两个峰温度和焓的变化可取决于分析的情况如样品大小、加热速率和样品制备方法。图3为盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐晶体的样品的热解重量分析(TGA)图。TGA显示在40-180℃温度范围内大约失重1％。
图4为盐酸S-[4-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-4-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐晶体的水分吸附作用研究图。盐酸S-[4-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-4-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐晶体的25℃潮湿吸附作用，通过DV-S湿度平衡，显示在0和70％之间的相对湿度(R.H.)间的湿度校正大约为1.5％。在70和9％ R.H.之间，固体吸附另外的58％水分。推测在90％ R.H.晶体结构被破坏以产生高度吸湿性的无定形的固体。在解吸附作用循环期间(从90到30％R.H.)，这些固体转化成S-[2-[(亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐晶体II型和具有过量的盐酸的无定形的两性离子的混合物。随后的解吸附作用和再吸附作用行为与S-[4-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-4-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐晶体II型很相似。在实验的结尾，固体的粉末X射线分析证实S-[4-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-4-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐晶体II型和无定形的固体都存在。
图5显示实施例20中的盐酸S-[4-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-4-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐晶体的拉曼光谱。简要地说拉曼光谱为分子或复杂系统的振动标记。起因在于分子和光子间的非弹性碰撞，光子为组成光束的的粒子。分子和光子间的碰撞导致能量交换与随之而来的能量变化及进而光子波长的变化。因此，拉曼光谱为一组通过入射光照射对象分子发出的很窄的光谱线。各光谱线宽强烈地受入射光的谱宽的影响，并因此使用单色光源如激光。各拉曼谱线的波长可以表示为相对于入射光的波数移动，其为拉曼谱线和入射光的波长倒数之间的差。拉曼谱线的波数-移位，不是独立的波长，对于具体的分子中的具体原子团是特异的。拉曼光谱测量其分子结构决定的分子振动态。
盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐的晶体
在此报告的混盐结晶实施例的不同选择由三个主要小节组成。第一小节，实施例1-6，存在没能产生多晶形的纯结晶盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐的实验报告。在大多数这些实验中，得到S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐I型的混合物。关于无法得到多形的纯结晶盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐的理由的简短的讨论也包括在小节的末尾。
混盐的外部晶形定义了其次两个主要小节。此具体产物的属性通过以下独特的结晶机制得到并且主要涉及药物组合物随后的开发，该药物组合物包括盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐以及可药用的载体。用于本发明目的的两个独特的形状此后被称为是“无规堆积的附聚物”，通常但不是必须全部出现非球形和“有序堆积的附聚物”通常但不是必须地全部出现球形。通常，当与制备无规堆积附聚物的初结晶相比时，制备有序堆积的附聚物的初结晶具有较小长宽比。用于本发明的目的，长宽比被定义为长带(ferret)对短带的比例。
首先，关于“无规堆积附聚物”结晶的实例，在实施例7-19中论述。继之以关于下面的针对具体的晶形形成的结晶机制的讨论。也包括用于本发明目的的“相分离”的详细定义。
最后，实施例20-30，概述带有“有序堆积的附聚物”的步骤的不同变化的各种实验报告。
原料定义：
两性离子；在此报告的所有实施例中使用S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸得到的是无定形的冻干的固体或者DMF中的溶液。
固体S-[2-[(-亚氨基乙基)氨基]乙基-2-甲基-L-半胱氨酸此后可称为无定形的冻干的S-[2-[(-亚氨基乙基)氨基]乙基-2-甲基-L-半胱氨酸。在大多数情况下，无定形的冻干的S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2甲基-L-半胱氨酸包含一些氢氯化物(HCl)。对于用来结晶盐酸S-[2-[(-亚氨基乙基)氨基]乙基-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐的精确量的无定形的冻干的S-[2-[(-亚氨基乙基)氨基]乙基-2-甲基-L-半胱氨酸，HCl相对于S-[2-[(-亚氨基乙基)氨基]乙基-2-甲基-L-半胱氨酸的摩尔当量将在各实施例中指定。
第一种DMF/S-[2[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸储备液大致成分为：S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2甲基-L-半胱氨酸11.7％ w/w；水0.2％ w/w；马来酸12.4％ w/w；和氯化物1.0％。这种溶液的各组分预期有10％的可变性。溶液中的马来酸和氯化物的上述浓度分别代表对于每当量的S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2甲基-L-半胱氨酸大约为2.0和0.5摩尔当量。此后，这种水溶液可称为S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2甲基-L-半胱氨酸初级DMF溶液。
其他的S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2甲基-L-半胱氨酸DMF储备液具有大致成分：S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2甲基-L-半胱氨酸11.7％ w/w；水2.83％ w/w；马来酸14.88％ w/w；和氯化物1.0％。溶液中马来酸和氯化物上述浓度表示大约分别2.2和0.5摩尔当量，对于每当量的S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2甲基-L-半胱氨酸。此后，这种水溶液被称为S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2甲基-L-半胱氨酸二级DMF溶液。
关于多晶形纯度失败实验的实施例
6个不同实验制备盐酸S-[2-[(-亚氨基乙基)氨基]乙基-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐晶体与盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2甲基-L-半胱氨酸马来酸盐晶体I型的混合物。小量的后者通过DSC分析轻易地检测。
实施例1
[0122]在实施例1中，将614mg的含有无定形的冻干的S-[2-[(-亚氨基乙基)氨基]乙基-2-甲基-L-半胱氨酸(包含大约10％的水)的0.25eq.HCl，648mg的马来酸，988mg的DI水和2460.7mg的DMF加到25ml装有磁力搅拌器的闪烁管中。将混悬液搅拌至澄清液。在50分钟期间，将16ml的乙腈以每份1.0ml慢慢地加到溶液中，。在完成加入时，混浊完全地沉淀。将小瓶在室温下搅拌17小时并在40分钟后将其加热至60℃。在此温度将其搅拌40小时然后加入2毫升的乙腈。将浆状物在60℃再搅拌1小时然后在1小时内冷却至25℃并搅拌4小时。将浆状物在精细的烧结玻璃漏斗上排出。将滤饼用2ml的乙腈冲洗并风干半小时。在55℃和28英寸Hg，将固体置于真空干燥箱24小时。产物的PXRD分析没有显示S-[2-[(-亚氨基乙基)氨基]乙基-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐I型混入盐酸S-[2-[(-亚氨基乙基)氨基]乙基-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐中任何可评估的量，然而DSC分析显示一些S-[2-[(-亚氨基乙基)氨基]乙基-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐I型存在于产品中。
实施例2
[0123]实施例2包括将201mg的包含无定形的冻干的S-[2-[(-亚氨基乙基)氨基]乙基-2-甲基-L-半胱氨酸(包含大约10％的水)的0.25eq.HCl，209mg的马来酸和1120mg的DMF加到12ml装有磁力搅拌器的小瓶中。将混悬液搅拌至澄清液。在50分钟期间，将5ml的乙腈以每份1.0ml慢慢地加到溶液中。混浊没有完全地沉淀，仍将7mg的S-[2-[(-亚氨基乙基)氨基]乙基-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐I型加入作为晶种。将小瓶在室温下搅拌6小时然后40分钟内加热至60℃。将其在此温度搅拌40小时。将浆状物在精细的烧结玻璃漏斗上排出。将滤饼用2ml的乙腈冲洗并且风干半小时。在55℃和28英寸Hg将固体置于真空干燥箱24小时。产物的PXRD分析没有显示S-[2-[(-亚氨基乙基)氨基]乙基-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐I型混入盐酸S-[2-[(-亚氨基乙基)氨基]乙基-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐中任何可评估的量，然而DSC分析显示一些S-[2-[(-亚氨基乙基)氨基]乙基-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐I型存在于产品中。
实施例3
实施例3的目的是确定是否用S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐的I型种晶有助于实施例2中的多晶形不纯的混合产物。将203mg包含0.25eq.HCl的无定形的冻干的S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸(包含大约10％的水)、208mg的马来酸和1137mg的DMF加到12ml装有磁力搅拌器的小瓶中。将混悬液搅拌至澄清液。在50分钟期间，将4ml的乙腈以每份1.0ml慢慢地加到溶液中。在完成还原的乙腈加入时，混浊完全地沉淀。小瓶在室温下搅拌六小时然后40分钟后加热至60℃。在此温度搅拌40小时然后冷却至室温。将浆状物在精细的玻璃料烧结玻璃漏斗上排出。将滤饼用2ml的乙腈冲洗并且风干半小时。在55C和28英寸Hg将固体置于真空干燥箱中24小时。产物的PXRD分析没有显示混入盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐中的S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐的I型任何可评估的的量，然而DSC分析表明S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐的I型存在于产物中。
实施例4
[0125]实施例4的目的是研究低于环境温度的结晶行为。将201mg包含无定形的冻干的S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸(包含大约10％的水)的0.25eq.HCl，209mg的马来酸和1141毫克的DMF加到12ml装有磁力搅拌器的小瓶中。将混悬液搅拌至澄清液。在50分钟期间将4ml的乙腈以每份1.0ml慢慢地加到溶液中。在完成加入时，混浊完全地沉淀。将小瓶冷却至-5℃并且搅拌24小时。溶液转为很浓的“胶状的”结晶固体浆状物。将4ml的乙腈加到浆状物中以稀释它。然后将其加热至25℃并搅拌4小时。将浆状物在精细的玻璃料烧结玻璃漏斗上排出。将滤饼用2ml的乙腈冲洗并且风干半小时。在55℃和28英寸Hg将固体置于真空干燥箱24小时。产物的PXRD分析没有显示混入盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐中的S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐的I型任何可评估的的量，然而DSC分析表明S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐的I型存在于产品中。
实施例5
[0126]在实施例5中，体系中的马来酸量被减少25％。包括将304mg包含0.25eq.HCl的无定形的冻干的S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸(包含大约10％的水)，241mg的马来酸和1659mg的DMF加到12ml装有磁力搅拌器的瓶中。搅拌混悬液至澄清液。在50分钟期间将4ml的乙腈以每份1.0ml慢慢地加到溶液中。在乙腈加入完成之后体系的混浊在瓶底变为固体的粘稠物。40分钟后，将小瓶加热至60℃。在60℃的两个半小时内，在瓶中可观察到固体。然而，它们似乎粘在瓶壁上并因此用刮勺敲碎并用溶液重悬浮。在此温度搅拌浆状物19小时然后在精细的玻璃料烧结玻璃漏斗上排出。滤饼很湿。用2ml的乙腈重悬浮然后冲洗。滤饼风干半小时。然后将固体在开放的结晶盘中风干2小时。产物的PXRD分析显示了混入盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐中的S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐I型可评估的量。DSC分析证实了PXRD的结果。
实施例6
实施例6的目的为增加收率，通过使用类似于实施例5水平的乙腈改良加入法。包括将301mg的包含无定形的冻干的S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-胱氨酸(包含大约10％水)的eq.HCl，241mg的马来酸和1660mg的DMF加到12ml装有磁力搅拌器的小瓶中。将混悬液搅拌至澄清液。在50分钟期间，将3ml的乙腈以每份1.0ml慢慢地加到溶液中。在乙腈加入完成后，体系的混浊沉淀并在30分钟内观察到晶体。在室温下搅拌浆状物3小时然后加入1毫升的乙腈。在室温下再继续搅拌19小时。将浆状物在精细的玻璃料烧结玻璃漏斗上排出。将滤饼用2ml的乙腈冲洗并且风干半小时。然后将固体在开放的结晶盘中风干2小时。产物PXRD分析没有显示混入盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐中的S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐I型的任何可评估量，然而DSC分析表明S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐I型存在于产物中。
实施例1-6的讨论
上述报告实验的各种阶段期间回收的中间体固体样品的热分析表明，S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐的I型在冷却或延长的保持期间，在上述报告的任何保持温度结晶。这提示在结晶的后期，S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐的I型第二次晶核形成。不希望被任何理论约束，据信这解释为因为在保持期间，通过盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐晶体的形成，体系的HCl被完全地耗尽。然而，在体系中仍有0.5当量的S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸和1.75当量的马来酸，浓度可能高于S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐I型的溶解度。当体系尝试更进一步地通过冷却、加入抗溶剂、保持周期或减少马来酸含量去饱和时，关于S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐I型的超饱和被耗尽，通过其在盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐晶体提供的所有多相的表面结晶。
总之，对于HCl不足的情况下的实验，在加入抗溶剂、冷却或减少马来酸含量的任何阶段，增加系统的超饱和的任何尝试可导致产物的多形纯度的失控。在DMF/乙腈体系中，在上述盐酸盐不足的状态下，与S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐I型的混合物是可预期的。
无规则填充附聚物的实施例
实施例7、8和9具有与S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]2-甲基-L-半胱氨酸相关的化学计算的HCl量以结晶盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐。实施例7和8表示在低水平的水和乙腈下进行实验。实施例9为在标准含水和乙腈量实施的实验。
在实施例10到19记录的实验旨在证明盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐在关于S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸的HCl摩尔当量的很宽取值范围内可被结晶和分离。
实施例10、11、12和13全部在26％的HCl需要量进行，HCl的量是与S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸结晶盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐有关。实施例13涉及针对盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐的沉淀，而实施例10到12涉及S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐I型或者II的沉淀，继之以通过加热与/或在选择温度下延长的保持周期介导换相至盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐晶体的溶液。
实施例14、15和16全部在50％的需要量进行，HCl的量是关于S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸结晶盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐。实施例14和15包括针对盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐的沉淀，而实施例14包括S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐的I型或者II的沉淀，继之以通过加热与/或选择温度的延长的保持周期介导换相至盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐晶体的溶液。
实施例17、18和19全部在高于化学计算考虑需要的量的HCl水平进行，以转换S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]2-甲基-L-半胱氨酸到盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐晶体。
实施例7
在126.1克的S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸的初级DMF溶液中，加入1.46克的去离子水以便使S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]2-甲基-L-半胱氨酸的初级DMF溶液中的水的含量为1.63％。将125.5克的这种水溶液装入500ml带有354rpm的搅拌装置的夹套反应器中。在两个小时内用泵按每分钟1.4ml的速率将总量126.58克的乙腈加到反应器中。在加入期间形成晶体。搅拌体系总共53小时然后排出浆状物并在精细的玻璃料烧结玻璃漏斗上过滤。过滤是极快速的。将滤饼用83ml的乙腈冲洗并风干24小时。称重为13.48克。
实施例8
在7.5克的S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸的初级DMF溶液中，加入109微升的去离子水以便使S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸的初级DMF溶液中的水的含量为1.63％。将这种溶液装入25ml的圆底烧瓶并用磁珠搅拌。在54分钟期间将总量7.85克乙腈以每3分钟0.5ml加到烧瓶中。搅拌体系总共72小时然后排出浆状物并在15ml精细的玻璃料烧结玻璃漏斗上过滤。
过滤是缓慢的。将滤饼用4ml的乙腈冲洗并风干24小时。圆底烧瓶的壁上已经有一些固体结晶出来。将其分别地分离。所有分离的固体上质量平衡表明壁上的固体代表全部产物65％。浆状物和壁上的固体的SEM显微照相确认此实验产生盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐晶体的“无规堆积附聚物”形态。
实施例9
实施例9以不包含任何HCl的无定形的冻干的S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸(包含大约10％的水)进行。过程包括将565mg的无定形的冻干的S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸(包含大约10％的水)，599mg的马来酸和105mg的37％l浓盐酸(水)和2969mg的DMF加到12ml装有磁力搅拌器的小瓶中。将混悬液搅拌至澄清液。在25分钟期间，将7.5ml的乙腈以每份0.5ml慢慢地加到溶液中。在加入乙腈期间出现明显的结晶。在此在室温下搅拌小瓶22小时然后在精细的玻璃料烧结玻璃漏斗上过滤。将滤饼用4ml的乙腈冲洗并且风干半小时。在55℃和28英寸Hg将固体置于真空干燥箱24小时。
图6显示产物的显微照相。看起来固体为由微细的或许亚微米初结晶制备的无规堆积附聚物。从此实验的烤干的固体所有分析数据确认其作为盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐晶体的同一性。更充分地如下描述的图1，显示了此实施例中得到的盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐晶体粉末X射线衍射图(上图)。图7显示了此实施例中的产物的无规堆积附聚物的SEM图片。
实施例10
在实施例10中，将301mg包含无定形的冻干的S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸(包含大约10％的水)的0.13eq.HCl，317mg的马来酸，1239mg的DMF和457mg的DI水加到12ml装有磁力搅拌器的小瓶中。搅拌混悬液至澄清的溶液。将8ml的乙腈以每份0.5ml缓慢地加入。在室温下搅拌体系24小时至结晶出来。然后将小瓶的温度增加至55C并将其保持此温度48小时。刚加热之前和升高温度48小时之后浆状物样品的显微照相确认已经出现至盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐晶体的变相。在55℃将浆状物在30ml精细的玻璃料烧结玻璃漏斗上很快地过滤并将滤饼用1ml的乙腈冲洗。然后将固体风干2小时。关于此产物的分析数据确认其为盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐。质子核磁共振分析表明产物在每摩尔的盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐中含有0.06摩尔残存的DMF。
实施例11
在实施例11中，将313mg包含无定形的冻干S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸(包含大约11％的水)的0.13eq.HCl，313mg的马来酸，1247mg的DMF和453mg的DI水加到12ml装有磁力搅拌器的小瓶中。将混悬液搅拌至澄清液。将8ml的乙腈以每份1.0毫升缓慢地加入。随着7.5ml的乙腈的加入看来已经发生了结晶。完成加入至8ml并且在室温下搅拌浆状物24小时以去饱和。然后将小瓶的温度增加至56℃并将其保持此温度24小时。刚加热之前和升高温度24小时之后浆状物样品的显微照相确认已经出现至盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐晶体的变相。在56℃将浆状物在30ml精细的玻璃料烧结玻璃漏斗上很快地过滤并且滤饼用1ml的乙腈冲洗。然后将固体风干2小时。此产物的分析数据确认其为盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐晶体。质子核磁共振分析表明DMF没有被产物俘获。
实施例12
进行实施例12以确认是否盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐通过在升高的温度开始结晶过程可直接地形成晶核，以及是否可避免将热的浆状物过滤。将302mg包含无定形的冻干的S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸(包含大约10％的水)的0.13eq.HCl，321mg的马来酸和1223mg的DMF和453mg的水加到12ml装有磁力搅拌器的小瓶中。将混悬液加热至60℃并搅拌至澄清液。在60℃将8ml的乙腈以每份1ml缓慢地加到溶液中。在加入过程期间没有观察到结晶，然而在加入乙腈完成20分钟内的确形成了晶体。在60℃将浆状物搅拌25小时。将2ml的乙腈加入以降低体系的水分活性。在60℃再搅拌浆状物20小时然后自然地冷却至室温并在精细的玻璃料烧结玻璃漏斗上过滤前搅拌2小时。将滤饼用2ml的乙腈冲洗并且风干20分钟。此产物的分析数据确认其为盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐晶体。
实施例13
实施例13在DMF/乙腈中进行，以简化溶剂体系。步骤包括将202mg的包含无定形的冻干的S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸包含(包含大约10％的水)的0.13eq.HCl，213mg的马来酸和1139mg的DMF加到12ml装有磁力搅拌器的小瓶中。将混悬液加热至60℃并搅拌至澄清液。在60℃20分钟期间将4ml的乙腈以每份1ml缓慢地加到溶液中。在乙腈加入完成的20分钟内观察到晶体。在60℃将浆状物搅拌24小时然后用45分钟冷却至25℃。在25℃将其搅拌2小时然后在精细的玻璃料烧结玻璃漏斗上过滤。将滤饼用1ml的乙腈冲洗并且风干20分钟。然后在40℃28英寸Hg将固体于真空干燥箱中干燥24小时。然而烘干之前的固体的质子核磁共振分析，表明在固体中没有残存DMF。因此烘干是不必要的。此实验的风干和真空干燥固体的所有分析数据确认固体为盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐晶体。
实施例14
在实施例14中，将311mg包含无定形的冻干的S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸(包含大约14％的水)的0.25eq.HCl，321mg的马来酸，1231mg的DMF和451mg的DI水加到12ml装有磁力搅拌器的小瓶中。将混悬液搅拌至澄清液。将8ml的乙腈以每份0.5毫升缓慢地加入。在室温下将其搅拌24小时以去饱和。将小瓶的温度增至57℃并继续再搅拌24小时。在57℃将浆状物在30ml精细的玻璃料烧结玻璃漏斗上很快地过滤并且滤饼用1ml的乙腈冲洗。将固体风干30分钟然后置于真空干燥箱中在40℃和28英寸Hg真空干燥24小时。此产物的分析数据确认其为盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐晶体。质子核磁共振分析表明风干和真空干燥的固体都没有残存DMF。
实施例15
实施例15在DMF/乙腈中进行，以简化溶剂体系。步骤包括将608mg的包含无定形的冻干的S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸包含(包含大约10％的水)的0.25eq.HCl，648mg的马来酸和3320mg的DMF加到25ml装有磁力搅拌器的小瓶中。将混悬液搅拌至澄清液。在20分钟期间，将10ml的乙腈以每份2ml慢慢地加到溶液中。在乙腈加入的20分钟内观察到晶体并在4小时内观察到广泛的沉淀。将浆状物搅拌19小时然后回收固体样品用于进行中检查。样品的热分析表明可能包含一些S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐的I型。因此将浆状物加热至50℃以便选择性地溶解S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐的I型。在到达50C之后30分钟回收固体样品，表明S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐的I型的确已从目的固体中被除去。在到达升高的温度之后2小时，在50℃将4ml的乙腈加到浆状物中。将浆状物在50℃再保持1小时，然后用线性温度变化灯在5个半小时后冷却至0℃。在0℃将其搅拌40小时然后在精细的玻璃料烧结玻璃漏斗上过滤。过滤是极缓慢的。将滤饼用4ml的乙腈冲洗并且风干1小时。风干的滤饼称重为198mg。然而这不能反映步骤的真实收益率，因为在此实验中五个步骤中每个取多至30mg的固体样品。风干的固体的质子核磁共振分析表明在固体中有0.035摩尔当量的DMF。冷却至0℃前和保持此温度19小时后的母液的浓度分析表明这种操作无助于更进一步地使体系去饱和。然而这可能是由于即使在将体系冷却前，HCl也完全耗尽。此产物的分析数据确认其为盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐晶体。
实施例16
进行实施例16以优化乙腈体积，估计马来酸的量减少25％(以改善收率)并减少及将保持时间合理化。将304mg的包含无定形的冻干的S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸(包含大约10％的水)的0.25eq.HCl，240mg的马来酸和1662mg的DMF加到12ml装有磁力搅拌器的闪烁瓶中。将混悬液搅拌至澄清液。在20分钟期间，将3ml的乙腈以每份0.5ml缓慢地加到溶液中。在乙腈加入的2小时内观察到晶体。搅拌小瓶22小时然后在精细的玻璃料烧结玻璃漏斗上过滤。将滤饼用2ml的乙腈冲洗并且风干半小时。在55℃28英寸Hg将固体置于真空干燥箱24小时。风干的固体质子核磁共振分析表明在固体中有0.03摩尔当量的DMF。滤液的浓度分析表明此方法的摩尔的收率接近50％。然而这可能仍然由于完全的HCl耗尽而抑制。此产物的分析数据确认其为盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐晶体。
实施例17
实施例17的目的为研究在0.63摩尔当量HCl(0.13摩尔过量)中的盐酸S-[4-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐的结晶。将220mg的包含无定形的冻干的S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸(包含大约10％的水)的0.13eq.HCl，232mg的马来酸，31.98mg的37％浓HCl(含水)和1164mg的DMF加到12ml装有磁力搅拌器的小瓶中。将混悬液搅拌至澄清液。在25分钟期间，将3.0ml的乙腈以每份0.5ml缓慢地加到溶液中。在加入完成时混浊完全地沉淀，然而在瓶壁上可见一些油状的残留物。将小瓶在此在室温下搅拌17小时然后在精细的玻璃料烧结玻璃漏斗上过滤。将滤饼用2ml的乙腈冲洗并且风干半小时。滤饼压的很紧地并且很难从漏斗移开。在55Cand28英寸Hg将固体置于真空干燥箱中24小时。滤液分析表明摩尔的收率大约为75％。此产物的分析数据确认其为盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐晶体。
实施例18
以每摩尔的S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸用0.63摩尔当量的HCl(过量0.13摩尔)与1摩尔的丁醇进行实验18。研究丁醇的掺加，因为它可能是给料S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸中的潜在杂质。将210mg的包含无定形的冻干的S-[2-(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-胱氨酸(包含大约10％的水)的0.13eq.HCl，232mg的马来酸，72mg的丁醇，36.0mg的37％a浓HCI(含水)和1186mg的DMF加到12ml装有磁力搅拌器的小瓶中。将混悬液搅拌至澄清液。在25分钟期间，将3.0ml的乙腈以每份0.5ml缓慢地加到溶液中。将小瓶在此室温下搅拌17小时然后在精细的玻璃料烧结玻璃漏斗上过滤。将滤饼用2ml的乙腈冲洗并且风干半小时。在55C和28英寸Hg将固体置于真空干燥箱24小时。滤液分析表明大约60％的摩尔的收率。此实验的产物的分析数据确认盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐晶体的形成并表明丁醇的存在不导致任何对于晶体质量不利的影响。然而本步骤收率被降低。
实施例19
实施例19是在0.88摩尔当量的HCl(过量0.33摩尔)中进行的。将221mg的包含无定形的冻干的S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸(包含大约10％的水)的0.13eq.HCl，233mg的马来酸，54.0mg的37％浓HCl(含水)和1196mg的DMF加到12ml装有磁力搅拌器的小瓶中。将混悬液搅拌至澄清液。在25分钟期间将3.0ml的乙腈以每份0.5ml缓慢地加到溶液中。在加入完成时混浊完全地沉淀，然而在瓶壁上可见一些油状的残留物。将瓶在此在室温下搅拌17小时然后在精细的玻璃料烧结玻璃漏斗上过滤。将滤饼用2ml的乙腈冲洗并且风干半小时。滤饼压的很紧并且很难从漏斗移开。在55℃和28英寸Hg将固体置于真空干燥箱中24小时。
滤液分析表明大约58％的摩尔的收率，其显著地低于在HCl浓度接近化学计算的实验中观测到的75％。因此看来体系中的HCl的过量和不足趋向降低收率。此产物的分析数据确认盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐晶体的形成。
无规堆积附聚物实施例的讨论
从实施例10到19，证明盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐可在关于S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸的HCl严重的不足或过量的情况下被结晶，所有这些实施例表示盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐的结晶的次优化条件。该讨论因此将限于通过实施例7到9最佳获得的盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐结晶的更优化的过程。
实施例7和8仅仅在提供给体系的搅拌类型方面不同。前者采用连接到杆的高架马达和“半月形”浆叶，其不接触结晶烧瓶的任何表面，而后者使用和结晶烧瓶底面接触的磁珠。珠子由于磁性的平板被搅动。研究这些实施例中的差异，证明在实施例8中得到的无规堆积附聚物的形态没有被使用的磁珠破坏，其在延长的保持期已经显示了将有序的填充附聚物转换至无规堆积附聚物的倾向(见实施例26)。对于每摩尔的S-[4-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-4-甲基-L-半胱氨酸，两个实施例都使用2.0摩尔当量的马来酸和0.5摩尔当量的HCl。体系的含水量保持在1.63％(在加入乙腈前测量)，而在重量/重量基位上乙腈对DMF的比例为1.4。在实施例9中，在加入乙腈前体系的含水量保持在2.3％，而在重量/重量基位上乙腈对DMF的比例为1.98。S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸和盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐都高度溶于水，因此在实施例9中利用额外的水使乙腈对DMF比例增加到1.98，在加入乙腈期间甚至没有更明显的结晶。
这三个实验特征在于：a)在导致体系的迅速去饱和的乙腈加入期间，盐酸S-[2-[1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐的快速晶核形成和显著的结晶；b)最快生长晶面的加速增长导致更大的长宽比；以及c)在乙腈加入完成期间或刚一完成时，没有持续的相分离的可见的或其他的的指示。相分离详细定义、讨论以及意义将预留到下一小节QESD结晶技术的讨论。因该讨论起见，充分说明了相分离的缺乏也有助于在这三个实施例中观测到的快速结晶
缺少相分离时，快速结晶或者导致微细的针状晶体形成，如果大部分去饱和通过溶液中晶核形成而发生，或者稍微延长的针状晶体，如果更多去饱和通过沿着长的晶体尺寸迅速的晶体成长而发生。如果给予高速搅拌(例如，实施例7中大于350rpm)，任一的情况均可通过压实过滤期间或甚至结晶烧瓶中的滤饼而导致无规堆积附聚物。
相分离的详细定义
在本发明，相分离定义为包括超过一个液相与/或不是晶体的固体的结晶体系的任何状态。这些非晶体固体可类似在视觉上可见的粘性的块，通常而非必须是完全无定形的，而第二种液相可类似可见的与/或显微镜下可见的乳剂，可见的与/或显微镜下不可见的乳剂(例如由于不适当的取样)，可见的与/或显微镜下可见的在包括结晶烧瓶中晶体的表面上的“油状涂层(oily coating)”，和可见的与/或显微镜下不可见的在包括结晶烧瓶中晶体表面上的“油状涂层”(例如由于厚度不够)。
相分离似乎是在包括DMF、乙腈、水、马来酸和HCI的结晶体系中的S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基L-半胱氨酸的“类似乳化剂”性质的表现形式。其出现在当S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸以特异的含水量、马来酸和HCl浓度在给定DMF-乙腈组合物的溶液中在盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐沉淀之前或期间得到某种浓度时。相分离的程度是除搅拌强度、有效表面和乙腈的加入速率这些变量之外，还有所有这些内在过程参数的强函数。
根据定义当出现二元相分离时，形成含不同组合物的两个相。对于S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸/马来酸/HCI/水/DMF/乙腈体系，当可见的或显微镜下可见的经典的乳剂由相分离步骤引起，连续相成为稀有相，比原有的单相溶液有较高的乙腈百分比和较低的S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸浓度。相反地，不连续的分散相成为浓相，与连续的稀相或者原有的单相溶液相比有较低的乙腈百分比和较高的S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸浓度。当代替地可见的或显微镜下可见的“油状涂层”由相分离步骤引起，二相的完全分析变得困难。然而，连续相的分析的确显示了比原有的单相溶液较高的乙腈百分比和较低的S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸浓度。事实上，这些相的特征能被用作分析试验以确定稳定相分离体系形成的开始，尤其在经典的乳剂或可见的“油状涂层”可能难以可见地或显微镜下检出的情况下。
理论上的结晶模型
虽然理论在本发明中不起作用，下列机制的描述将使本领域的技术人员更好地了解本发明的方法。
基于QESD的结晶
基于QESD的结晶过程使用的二元溶剂混合物的特征在于溶剂和抗溶剂之间的相反的相互作用(去-混合)。典型溶剂联用包括水-丙酮、水-乙腈、乙醇-环己烷和水-乙酸乙酯。
溶剂趋向对于溶解物具有很高的溶解度，而抗溶剂常常以对于溶解物可以忽略的溶解度为特征。已经报告溶解物在溶剂中的溶解度高达1.92g/g。事实上选择高溶解度的溶剂使溶解物和溶剂间的相互作用达到最大。乳化剂(表面活性剂)通常溶于抗溶剂中以促进乳化过程。抗溶剂对溶剂的比例可高达50比1。
步骤开始于在溶剂中溶解溶解物并以可控制的比例将这种水溶液加到抗溶剂和乳化剂溶液中。在溶剂和抗溶剂溶液之间常常也保持温差，后者处于较低的温度。当加入溶剂溶液时，产生稳定乳状液，其中溶剂溶液为分散相并且抗溶剂溶液为连续相。超饱和的产生是通过传热(温差)和更重要的质量传递(溶剂和抗溶剂出入分散相液滴的反向扩散)。分散相通过在分散相中结晶化去饱和。在采集点，仅仅有一个液相通过已经描述的反向扩散质量转移过程形成。
在QESD结晶过程中，由于轻微的超饱和，仅仅一小部分溶解物沉淀析出，超饱和常常而不总是通过使用的温差产生的，其于过程的早期保持在溶剂和抗溶剂溶液间。换言之，初期的通过温差产生的超饱和仅仅为中度的(在文献中报告的最大量的初期的超饱和为～40％)甚至当抗溶剂和溶剂的反向扩散开始时，产生超饱和的速率是缓慢的，因为越过小滴边界缓慢的传递。从而，这种过程大部分持续时间在相对轻微的残留超饱和下进行，因此以减慢整体去饱和速率为特征。这种过程的另一常见特征是溶解物在连续相中的浓度事实上增加了，虽然仅仅稍微地增加，因为溶解物的溶解度通过溶剂从分散相的扩散，在富抗溶剂相增加了。
基于高度超饱和诱导LLPS的结晶
越来越多的证据显示，超饱和溶液，尤其那些蛋白质、蛋白质类分子和制成胶体溶液的体系的溶液，可经历进一步的超饱和，诱导分离成不同组分的两个亚稳定“非平衡”液相。粗略看来相分离的起始或去混合类似结晶过程的典型浊点，然而，显微镜方法等技术容易显示浊度不是由于结晶固体的形成。去混合过程内在地产生更超饱和相，同时存在较小的超饱和或甚至未饱和相。结晶最初开始于较高的超饱和相，对于某些情况其可类似在前面小节描述的类型的乳剂或准乳剂(quasi-emulsion)中典型的分散相。类似图8所示的类聚集的形态，也有以诱导LLPS的超饱和为基础的过程的报导。
已知两个二元的和单一溶剂体系显示LLPS类型的特性。任何情况下，溶解物在选择的溶剂体系中的溶解度为中度(至高的量不大于200mg/gram)，这与用于QESD类型设计的溶剂溶液形成了鲜明的对照。
关于超饱和条件下显示LLPS的体系的溶液性质存在很多重要的文献。除典型的转换如液相线下凝固外，相图也显示了非典型的液-液相分离，也称为凝聚，其中亚稳定溶液形成二个明显的有不等浓度的溶解物的非平衡液相。图上的共存曲线表示共存的富溶质和贫溶质液相的浓度，当通过持续地从液相线垂直地向下移动，产生了溶质的逐步更超饱和溶液。
建立共存曲线的实验技术包括二个很简单的步骤：浊点和温度骤冷方法。简要地，前者，对各固定的溶质浓度，浑浊化温度是确定的，而后者，将超饱和溶液冷却至相分离温度以下的固定温度然后分析二个共存相浓度。对于二元体系(溶质和单一溶剂)，共存曲线的最高温度称作相分离的临界温度而对应的浓度被称为临界浓度。
临界浓度对建立二个相的“形态”起关键的作用。在浓度小于临界浓度的体系，观察到球形的、包含富溶质相的均匀大小的液滴的晶核形成和生长。在浓度大于临界浓度的体系，经常再次观察到球形的、均匀大小的液滴的晶核形成和生长。在这种情况下，然而，液滴包含贫溶质相。在极端情况下，代替相分离，当将温度降低于液相线以下时，也可以观察到凝胶化。晶体域可常常观察到，当将包含此胶体相(通常无定形体)体系冷却至共存曲线以下的温度时。在浓度非常接近于临界浓度的浓度体系，出现两个内连通域(inter-connected domains)。
对于包括溶质、溶剂和抗溶剂的三元体系，共存面(见图10)表示对于浓度c2的抗溶剂的固定量，LLPS温度是关于溶质c1的函数。在固定温度，体系的LLPS性质通过不等温的共存曲线(见图11)描述，其给出在由抗溶剂的量固定而溶质浓度不同的溶液开始产生的两个共存相I和II中的浓度(c1，c2)1和(c1，c2)11。二个相的分配可通过连接恒温绘制的共存曲线上点I和II的结线(见图11)最好地得到。对于三元体系，临界点(c1，c2)c被定义为在共存曲线上的点，其满足条件(c1，c2)I等于(cy，02)II。该点位置作为温度的函数，被描述于共存面上的临界线。如图10所示，加入固定量的抗溶剂或沉淀剂(如聚乙二醇)到溶质-溶剂溶液中的净效应(net effect)为整体共存曲线向液线的向上偏移(液相线可能本身向上移动但不是共存曲线向上移动同样的程度)，除曲线本身对称的形状的一些变形外。后者对二个相的组合物和其相关的部份有重要意义。
当更多的沉淀剂或更强的沉淀剂被引入溶质溶剂溶液时，移位变得更显著并且曲线更不对称。此移位的净效应是液相线和共存曲线间的间隙减少，LLPS温度增加并且因此LLPS出现在甚至更低的超饱和。由于不对称而移动至溶质的较低浓度的临界点与相分离液相的形态有关。
LLPS温度在临界点作为抗溶剂浓度函数的斜率、临界温度和抗溶剂的浓度可实际上通过文献15展开的数学模型用来计算没有抗溶剂的LLPS温度。当由于体系凝固或溶质结晶先于达到LLPS温度或者超饱和，溶质溶剂体系的LLPS不易取得时，这是极有吸引力的。此外，图11的结线结线的斜率与溶质溶解度少量的减少成比例，是由于存在给定浓度的抗溶剂或沉淀剂。换言之，结线的斜率以溶质沉淀剂如抗溶剂的效力为特征。因此，此信息可用于预计在抗溶剂存在情况下的液相线。
对二元体系，类似于主要溶质的第二种溶质(如结构上相关的杂质)的效应通常限于共存曲线沿着温度轴的垂直位移(通常向下，即LLPS温度减少)18。在位移期间，曲线保持其形状，不同于在沉淀剂或抗溶剂存在下遇到的情况。然而，如果第二种溶质或杂质与主要溶质相异，那么除沿着温度轴垂直位移(再次通常向下)外，共存曲线的形状也扭曲了。曲线变得愈加不对称，临界点转变到较高的主要溶质浓度，而同时最高LLPS温度移至较低的主要溶质浓度。看起来第二种溶质的净效应为需要更超饱和以观察包含第二种溶质相如杂质的三元体系中的LLPS。
在基于LLPS的设计的情况下，溶质种类间的相异性最好地通过识别二元体系中所有种类的临界点的差异获得，二元体系包括该溶质和在调查研究中所有种类所共用的溶剂。通过相异的第二种溶质如杂质的存在导致的共存曲线不对称，再次与在LLPS上得到的二个液相的相关部份和形态有重要意义。
通过LLPS表面循环可显著地减少大大高于LLPS温度(＞2.0℃)的晶核形成的诱导期。已报告在大于LLPS温度1-1.5℃的温度成核速度增加超过6倍。对于此显著的成核速度增大假定二个理由。第一为ΔGnuc减少，由于系统接近正好在LLPS温度的双节点上的拐点。在拐点区密度波动高于附近任何其他的点并且这进而导致ΔGnuc减少。此外，因为ΔGnuc减少，分子数目需要有效地制成稳定的晶核形成前液滴串。第二，在接近LLPS温度时，近于通过高溶质浓度液体湿润晶核表面的现象也可以提高成核速度。当体系进入LLPS状态时，成核速度减回到经典的成核速度表现的预计。使用适当的经典的晶核形成模型能从富溶质和贫溶质相的各自超饱和以一定精度估计速率。
通过在LLPS表面下结晶得到的晶体形态似乎是关于临界点的起始单相溶质浓度相关。这进而与在临界点任何一边富溶质的和贫溶质液相的实际“形态”相关。如前所述，在浓度小于临界浓度的体系，观察到了球形的、均匀大小的包含富溶质相的液滴晶核的形成和生长。结晶开始于高度超饱和富溶质的液滴，通过在液滴的中心复成核，从而将其转化多晶体固相。新的晶体从多晶体中心形成并向外放射状地增长不但耗费液滴中的残留溶质而且耗费贫溶质相中的溶质，其由于贫溶质连续相中的低超饱和，通常不能独立地沉淀。
在浓度大于临界浓度的体系，常常再次观测到球形的均匀大小的液滴的晶核形成和生长。在这种情况下，然而，液滴包含贫溶质相。有微细的初级粒子的不规则的多晶体固体从这些体系得到。然而，如果浓度显著高于临界浓度，凝胶化(由于无定形固体的形成)可能被观测到，即使在接近LLPS温度以前。当这种体系在LLPS曲线以下产生时，结晶在凝胶基质内部形成。然而，从包含胶体相的体系至完全结晶物质的转变速率，显著慢于包含高浓度液滴的对应体系。胶体相中缓慢转化的理由与可动性由于凝胶的形成被抑制的事实相关，进而延迟晶核化速率。
总之进行于共存曲线下和临界点左侧的基于LLPS的结晶过程可产生类似于盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐晶体观察到的形态(见图8)。在这种过程中，富溶质的分散相中的超饱和通常很高。当整个系统结晶出来时，贫溶质的连续相中的溶质浓度的分析也显示不断的减少。总之，基本的观察和数据、全部结晶过程特征化资料和观察到的晶体形态与在共存曲线下和临界点左侧进行的基于LLPS的结晶过程的一般特征相同。因此将该方案设计被建议作为将盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐的结晶描述为有序堆积附聚物的模型。
所有三个盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐的结晶过程为产生有序堆积附聚物的设计，采取实施例7到9报告的关于无规堆积附聚物的过程作为起点。主要的修改包括在马来酸水平、含水量和乙腈对DMF的比例的变化。乙腈对DMF在重量/重量基位上的比例从1.4或1.8放松到在盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐晶体沉淀的早期之前或者期间达到相分离所必需的任何值。关于S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸的马来酸摩尔当量从2.0增加到至少2.2并且在加入乙腈之前体系的含水量在重量基位上最小为2.83％。马来酸和水的水平增加，提高了S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸在溶剂溶液中的溶解度，并因此有助于保证S-[2-(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸的浓度在特异的含水量、马来酸和HCl强度在给定DMF乙腈组合物溶液中不低于相分离需要特定水平，相分离的显示是可见的或显微镜下呈乳状或者可见的或显微镜下可见的或者甚至不可见的表面的“油状涂层”，包括可能在加入抗溶剂期间形成的通过少数晶体提供的那些。全部三个设计涉及将抗溶剂溶液加到溶剂溶液中并在相对轻微水平的搅拌下进行。
在盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐外部种晶的结晶过程中，将抗溶剂溶液(乙腈)用可某种控制的方式加到溶剂溶液中(通过前述定义的S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸的二级DMF溶液最佳描述)，使得总加入时间优选地超过大约30分钟而更优选的还是大约90分钟。抗溶剂溶液可连续加入，例如使用特定的加入速率的泵，或优选地间歇地在给定时间间隔将抗溶剂溶液体积总量的等分用量加入。当连续的等分用量加入之间的持续时间足够长以保证刚加入一等分用量时立即形成的混浊(不稳定相分离的表现形式)大部分有充足的时间沉淀，这些间隔是最佳的。直到由加入的各等分用量引起的混浊或者没有完全地沉淀或沉淀，但留下很细微的油状涂层仅见于表面如搅拌杆、搅拌浆叶、反应器壁或者结晶烧瓶挡板，将抗溶剂溶液加入。此时将很小量的晶种加到体系中。晶种优选地是盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐的微细晶体，如实施例7到9中制备的。成功的外部种晶结晶过程，通常需要不超过溶于溶剂溶液中的S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸原始重量的重量基位上1％的这些晶种。晶种充当显示其为乳剂或油状涂层的不连续相的底物。在体系完全地去饱和前，过程常常很缓慢并花费超过48小时。然而过程可被促进，例如通过增加晶种的数量。从外部种晶的结晶过程中获得有序堆积附聚物在外形上常常是球形并且大小类似。
晶种也可以在加入抗溶剂溶液期间原位产生。当相分离时，这些晶体能充当显示为乳剂或者油状涂层的不连续相的底物。晶种的晶核形成可在相分离之前的溶剂和抗溶剂的混合物中被促进，例如通过稍微减少溶剂溶液含水量或稍微减少马来酸的量或优选地通过改变超饱和产生的速率，而保持其它一切与外部种晶的结晶过程相同。后者，例如可通过改变抗溶剂溶液的加入速率达到。
溶剂和抗溶剂溶液的热过程改进还可以用作改变结晶动力学，同时不改变体系的总成分。原位种晶的结晶的主要优势源自不必外部地加入晶种并且其加入不必如外部种晶的结晶过程的情况那样与可观察到的相分离紧密相关。增加的复杂性源于以下事实，晶种形成导致的体系的去饱和必须控制在足够低的水平以保证给定的组合物的溶剂和抗溶剂溶液混合物中S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸的残留浓度，不低于显示为可见的或显微镜下呈乳状或者可见的或显微镜下可见的或甚至不可见的表面“油状涂层”的相分离需要的水平。此外，对于原位种晶的结晶的最佳设计，如果原位晶种尺寸小或具有小的长宽比可能是优选的。这有助于保证在一定程度上类似于底物种晶的形状的有序堆积附聚物的最后形状，与用小晶体作为晶种的外部种晶结晶过程得到的相似。在更具体的水平，这种对小尺寸或短长宽比的原位种晶优选使通过主要的结晶晶核形成过程达到前述的低程度的去饱和成为必要，这与较少的核晶体成长为大尺寸形成对比。后者可导致大的针状晶种的形成，其用不连续相覆盖和控制结晶形成有序堆积附聚物的随后反向扩散，可导致与球形相比更拉长的总体形状。主要通过大量小晶体的晶核形成达到去饱和的低水平，对于盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐结晶是困难的。因此，很可能与球面不同的总体形状可能从盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐的原位种晶结晶过程得到。取决于去饱和的程度和得到的底物表面，原位种晶结晶过程总结晶时间能明显短于外部种晶的QESD结晶过程。因为原位种晶和外部种晶结晶过程都提供丰富的晶体作为不连续相覆盖的表面，盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐，通过粘附它们的不连续相的凝固，在结晶烧瓶的壁及其他表面上结晶为硬壳的可能性明显地由于可用于覆盖这些非晶体的表面的不连续相的部份的减少而减少。
作为有序堆积附聚物的盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐晶体的结晶的最终设计方法，将在相分离之前、期间或之后除去晶体底物(种晶)。除保证在溶剂和抗溶剂溶液混合期间没有结晶出现外，显微镜下或优选地视觉上可见的乳剂产生。这必须发生，即使在达到乳化状态之前观察到油状涂层。对于盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐的体系，得到视觉上可见的乳剂最简单的方法是进一步增加乙腈对DMF的比例。超过用于上述外部种晶或原位种晶结晶过程的乙腈的量的110％的乙腈水平(按重量计算)已经经证明足够得到视觉上可见的乳剂。然而，这种状态常常伴随结晶烧瓶的壁上及其他外表面如搅拌轴、浆叶和挡板(如果存在)上的油状涂层。而有序堆积附聚物，球形的总体形状中可在至少48小时之后从这种结晶过程的浆状物中获得，结晶烧瓶壁上的油状涂层通常在壁上结晶为类似无规堆积附聚物的硬壳。如果浆状物不仔细地从结晶烧瓶中取出，无规堆积附聚物和有序堆积附聚物都可见于产物中。结成硬壳的程度似乎是，连同其它变量一道，与用来产生视觉上可见的乳剂多余的乙腈的量相关。
总之，三个结晶设计方法都能够产生有序堆积附聚物。差别在于附聚物的质量以及可操作性和可控性的容易程度。根据这三个因素，外部种晶结晶方法为优选的。证明所有三个方法的实施例如下。
有序堆积附聚物的实施例
实施例20、21和22表示前述小节描述的外部种晶结晶体系，而实施例23和24表示原位种晶结晶体系，以及实施例25证明非种晶的结晶过程。实施例26，证明有序堆积附聚物可在某些搅拌条件下被破坏。在此操作之后固体具有许多无规堆积附聚物的特征。
实施例20
在实施例20，将54克的无定形的冻干的S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸(包含大约10％水)，57.5克的马来酸，287克的DMF和10.1克的37％浓HCl(含水)加到1.2升加套的反应器中。在350rpm搅拌下S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸转为稠密的粘性物质并使用1小时进行溶解，虽然溶剂体系中有好的溶解性。在45分钟期间将750ml的乙腈以每份20ml加到澄清溶液中。加入710ml，溶液变得浑浊并如此保持；尽管如此，仍然完成加入乙腈。加完后1小时，大部分混浊已经沉淀，然而，油状的残留物形成于反应器壁上。将1克37％浓HCI(含水)加到反应器中以助于溶解油。此加入没有成功地减少出油的程度因此将27.2克DMF加到反应器中以增加体系的溶解性。几乎所有的壁上的油状的残留物，在第二次加入DMF15分钟内重新溶解。溶液在350rpm搅拌过夜。在保持期间没有结晶，因此400mg的晶种(即盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐晶体)用来诱导晶核形成。将体系再搅拌48小时然后在350ml精细的玻璃料烧结玻璃漏斗上以每份300ml排出浆状物。
过滤极其快速。将滤饼用100ml的乙腈冲洗并且风干1小时。称重为46.64克。在50℃和28英寸Hg真空将固体置于真空干燥箱24小时。烘干固体称重42.96克。
这表示回收大约89％重量和65％摩尔。对于滤液的两性离子和HCl浓度分析有助于结束质量平衡并证实整个结晶的HCl是化学计算的。图8显示产物的各种SEM图片。从图8很明显看出，实验产生有序堆积附聚物的几乎单分散群，在外形上是球形。图1显示此实施例制备的固体与先前报告的无规堆积附聚物的PXRD比较。上面的粉末X射线衍射图来自于实施例9，而下面的X射线衍射图来自于实施例20。似乎二个固体间的形状差别对峰型或强度没有任何影响。表1概括此实施例产物的分析数据。图5显示实施例20样品中得到的盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐晶体的拉曼光谱。
实施例21
实施例21的目的是使DMF和HCl加入步骤合理化并识别在过程早期，溶解S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L半胱氨酸的最佳混合条件。
将45.78克的马来酸，251克的的DMF和8.82克的37％浓HCl(含水)加到1.2升夹套反应器中。在275rpm搅拌下体系至澄清溶液。将43.3克的无定形的冻干的S-2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸(包含大约10％水)加到反应器中并且在50rpm搅拌2小时以完全地溶解所有的固体。将搅拌增回至275rpm并在90分钟期间将612ml的乙腈以每份15ml加到溶液中。在完成乙腈加入时，溶液保持几乎澄明。将429mg的晶种(即盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐晶体)加到溶液中并且将其搅拌45小时。在350ml精细的玻璃料烧结玻璃漏斗上以每次200ml将浆状物排出。
过滤极其快速。将滤饼用60ml的乙腈冲洗并且风干半小时。称重为36.50克。在50℃和28英寸Hg真空将固体置于真空干燥箱24小时。烘干固体称重为36.42克。这表示回收大约94％重量和70％摩尔。滤液的两性离子和HCl浓度分析有助于结束聚集平衡和证实整个结晶的HCl是化学计算的。晶体的全部形状与实施例20中所见的相同。表1概括了此实施例产物的分析数据。
实施例22
实施例22的目的是建立系统可不失控地容许有序堆积附聚物的形成的HCl当量的上限。体系的HCl含量的总量大约是0.73摩尔当量，与典型的0.5摩尔当量相对比。
将55.97克的马来酸，307克的的DMF和10.78克的37％浓HCl(水)加到1.2升夹套反应器中。在275rpm将体系搅拌至澄清液。搅拌减为50rpm然后将52.2克的包含无定形的冻干的[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸(包含大约10％水)的0.23当量HC加到反应器中。所有S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸在20分钟内溶解并将搅拌器速度增加回至275rpm。在加入的750ml的乙腈中，在溶液转为混浊不会轻易地沉淀的浑浊点前，在90分钟期间以每份20ml加入695ml。在搅拌1小时后，混浊减少，但棕色油状的残留物形成于反应器的底部。将10.2克DMF加到反应器中以溶解油状的残留物，然后体系用533mg的晶种种晶(即盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐晶体)。将其搅拌24小时。在此期间发生显著的沉淀。从原有的加入的残留的55ml的乙腈，加上30ml以补偿多余的DMF，将其加到反应器中并再搅拌20小时。该方法的此阶段的母液浓度与0.5当量的HCI中大规模的结晶的代表值相比高45％。将70ml的乙腈加到浆状物中并再搅拌4小时。将浆状物在350ml精细的玻璃料烧结玻璃漏斗上以每份200ml排出。过滤是极快速的。将滤饼用80ml的乙腈冲洗并风干半小时。称重为10克。在50℃和28英寸Hg真空将固体置于真空干燥箱24小时。烘干固体称重36.75克。这表示回收大约78％重量和56％摩尔。在第三次乙腈加入前和4小时之后母液样品的浓度分析，显示溶液中的S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸浓度净减少15％。滤液中的氯离子分析有助于证实HCl当量在起始时为0.73，在有0.23当量S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸的参加时。
晶体的全部形状似乎类似于前述实验所见，然而粉末的松密度似乎稍低。
表1概括此实施例产物的分析数据。
表1：实施例20-22的固体状态特征
  实施例   C   H   N   S   CL   Tm   ΔH fus   DMFNMR   马来酸NMR
  理论的   40.64   6.65   14.22   10.85   6.00   N/A   N/A   0.000   0.500
  20   40.29   6.53   14.03   10.79   6.06   193.91   140.18   0.019   0.525
  21   40.41   6.77   14.31   10.86   6.11   199.17   N/A   0.027   0.490
  22   40.42   6.87   140.26   10.77   6.19   199.50   130.48   N/A   N/A
实施例23
实施例23的主要目标是认识和建立适当的初次结晶的条件，用于形成用作有序堆积附聚物底物的原位种晶并减少总的结晶时间。将乙腈增加实施例19和20使用量的10％并且在乙腈加入完成时不进行种晶。
在加到50ml的夹套反应器中前，将15.00克的S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸初级DMF溶液，233.3mg的马来酸和413微升的去离子水加到50ml锥形瓶中并且搅拌至澄清。将反应器在153rpm搅拌。在39分钟期间将18.2ml的乙腈(从总量27.7ml)以每份1.3ml的加到溶液中。加入此量的乙腈，在反应器中观察到针状晶体(形状和结晶度被偏振光显微术证实)。在3分钟期间，将残留的9.5ml的乙腈以每份1.5ml加入。在加入27.7ml的乙腈60分钟之后，加入另外的2.77ml的乙腈(这表示超过在实施例19和20上使用量的10％)。搅拌增至254rpm 2小时然后减回到150rpm。体系总共搅拌24小时然后在30ml精细的玻璃料烧结玻璃漏斗上排出浆状物。
过滤极其快速。将滤饼用6ml的乙腈冲洗两次并且风干1个半小时。固体称重为1.05克。，当通过扫描电子显微术分析时晶体具有有序堆积附聚物的大部分主要的特征，但是与实施例20、21和22中所见相比，全部形状似乎为圆柱状的(图9)。差别归于作为底物晶体的晶种的形状，对于此实施例是针状的。
实施例24
实施例24的主要目的是在50升反应器中大规模的进行实施例23。
将9.5kg的S-[4-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-4-甲基-L-半胱氨酸的第二级DMF溶液加到50升加套反应器中。反应器在125rpm搅拌。在36分钟期间将11.04升的乙腈(从总量18.45升)以每份840ml加到溶液中。加入此量的乙腈期间，在反应器中观察到针状晶体(形状和结晶性结晶度被偏振光显微术证实)。在9分钟期间将4.97升的乙腈以每份1.65升加入，并且从原有的乙腈加入的起始48分钟后，将剩余2.42升加入。将体系搅拌总共6小时然后在过滤器上排出。
过滤是快速的并且仅仅使用8分钟。将滤饼用2.0kg的乙腈冲洗两次并风干24小时。固体称重为1.08kg。当通过扫描电子显微术分析时晶体具有有序堆积附聚物的大部分主要特征。但是全部形状似乎类似于实施例23得到的并且不同于实施例20、21和22的球形。此差别归于底物晶体的形状，对于此实施例是针状的。
实施例25
实施例25的主要目的是增加在实施例20和21中使用量的20％乙腈的量，并且研究在相分离之前、期间和随后除去盐酸S-[2-[(I-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐外部和原位种晶的可能性。将25.01克的S-[4-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-4-甲基-L-半胱氨酸的初级DMF溶液和687mg的去离子水加到125毫升夹套反应器中。346mg的马来酸加到反应器中并将体系在173rpm搅拌至澄清液。在60分钟期间，将56ml的乙腈以每份3ml加到澄清溶液中。随着加入最后部分的乙腈溶液变得非常浑浊，然而，大部分混浊在15分钟内沉淀，在反应器壁上留下稀少的油状涂层(oily coating)。将反应器加热至55℃(套的温度)以便确定是否油状涂层可溶解。操作没有取得成功并将反应器冷却回室温。搅拌体系48小时然后在150ml精细的玻璃料烧结玻璃漏斗上排出浆状物。
过滤是快速的。将滤饼用10ml的乙腈冲洗并风干一个半小时。固体称重为1.57克并且当通过扫描电子显微术分析时具有有序堆积附聚物的全部主要的特征。
观察到一些固体粘贴在反应器壁上。这硬壳通过在25ml的乙腈中变成浆状物除去然后在150ml精细的玻璃料烧结玻璃漏斗上过滤。将固体风干1小时并称重1.01克。这些固体具有类似于无规堆积附聚物的形状特征。
实施例26
实施例26的目的是确定是否有序堆积附聚物可变为小晶体，进而将其压缩为无规堆积附聚物。
将实施例20中制备的200mg的盐酸S-[2-[(I-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐晶体的有序堆积附聚物加到8ml小瓶中。将实施例23中的3.95克的滤液和磁珠加到小瓶中并通过磁板以最大速度将得到的浆状物搅拌4天。每天将浆状样品回收用显微镜照相检查法检测是否将有序堆积附聚物在搅拌磁珠和瓶底部之间的很窄的狭隙中磨碎。
照相显微镜分析显示至少需要72小时(或3天)以完成磨碎有序堆积附聚物。这些磨碎的晶体过滤压缩为无规堆积附聚物。
替换的溶剂体系
实施例27：甲醇/丙酮结晶
甲醇是盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐晶体在其中显示中度溶解性(6.2wt％)的几种有机溶剂之一。另外，过量的马来酸的存在显著地增加了溶解性。发现在有1.5eq.过量的马来酸存在的情况下，盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐晶体容易溶解，每克盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐溶解在仅仅4g甲醇中。对所说明的DMF/乙腈结晶过程仅仅做微小的调整，在1L的规模上展示和证明下述甲醇/丙酮结晶过程。
将马来酸(23.57g-1.5Eq.)加到500mL圆底烧瓶中。将甲醇(160g-4g/克)加入并搅拌烧瓶形成澄清液。然后将盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐(40.00g)加入圆底烧瓶并溶解形成澄清液。将这种水溶液加到夹套的1L反应器中，在室温下操作。搅拌设置在225rpm。
称出丙酮(544g-17mL/克)，并且将蠕动泵校准至每分钟传递大约9mL。丙酮加入的15分钟内，溶液转为稍微浑浊但增加搅拌后澄清。在加入(加入剩余的44.68g丙酮)之后1小时20分钟，结晶混合物明显地浑浊。停止加入丙酮，并且将400mg的晶种加入。搅拌设置在240rpm并搅拌过夜。在17小时后结晶混合物是浓浆状物。将固体过滤并用丙酮洗两次并在过滤器上干燥。收率是74.8％。
实施例28：1-丁醇/丙酮结晶
1-丁醇被选为最佳溶剂以研究应用高沸点溶剂的可能性，高沸点溶剂可容易地与上游水色谱精制过程的水互换。而盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐没有显示在1-丁醇(0.05wt％)中的高溶解度，过量的马来酸的加入大大地增加了其溶解性。此过程再次设计成很类似于DMF/乙腈的过程。下面是1L的规模上进行初始过程的说明。
盐酸将S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐(38g)、DI水(200mL)、1-丁醇(500mL)和马来酸(29.46g-1.5eq.)加到夹套的1L反应器中。将混合物搅拌至形成澄清液。将此水溶液在真空(135torr)、温度53-67℃下蒸馏至200mL。将1-丁醇(250mL)加入并在135torr和70℃继续蒸馏直到体积减为200mL。将温度调至50℃。将DI水(2.5ml)和1-丁醇(475mL)加入。将盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐种晶(1.5g)加入并用1-丁醇(25mL)冲入反应器。将丙酮(300mL)在3小时期间通过针筒注入加到结晶混合物中。在丙酮加入完成一个小时之后，在10小时期间将结晶混合物冷却至10℃。在丙酮加入完成之后将结晶混合物过滤14小时。结晶混合物很容易地过滤而且没有观察到滤饼碎裂。将丙酮冲洗液(300mL)加入反应器并且在滤饼上冲洗。将固体在50℃，24英寸Hg在真空箱中过夜干燥。产物质量为40.45g，表示收率为78％。
DSC分析表明两个产物固态形式为盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐晶体。表2显示在50℃真空过夜干燥后各产物溶剂含量。
表2：残留溶剂含量
  实施例号   甲醇   丁醇   丙酮
  27(甲醇/丙酮)   0.64％   N/A   1.37％
  28(丁醇/丙酮)   N/A   0.39％   1.10％
1-丁醇/丙酮体系可为优选的，当两者都为III级(Class III)溶剂时。
倒数第二的步骤为SMB色谱法精制，其最容易在水溶液中进行。从水到1-丁醇的溶剂转换可容易地达到，但从甲醇体系完全脱水是不可能的。这也使1-丁醇/丙酮体系优于甲醇/丙酮体系。
工艺过程开发
类似于DMF/乙腈结晶，1-丁醇/丙酮结晶具有几个能影响结晶的参数。内在参数包括：1)温度，2)盐酸含量，3)马来酸含量，4)含水量，5)加入的化合物，和6)丙酮量。外在参数包括：1)种晶，2)反应器几何学，3)丙酮加入步骤和4)混合。这些参数的每一个以下更详细地论述。
内在参数
1.温度
实施例29
马来酸(0.59g-1.5eq)在50mL圆底烧瓶中被称出。将1-丁醇(8g)加入并搅拌混合物形成澄清溶液。将盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐(1.00g)和水(1000uL)加入并搅拌混合物形成澄明的无色的溶液。将溶液在50℃旋转蒸发。将1-丁醇(6g)加入并继续旋转蒸发。将1-丁醇(8g)加入制备易流动的溶液。将1-丁醇(2.89g)和水(130μL)加入使溶液达到期望的初始条件：0.5Eq.HCL、2.0Eq.马来酸、14体积1-丁醇/Kg盐酸S-[2[(1-亚氨基乙基)-氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐，KF＝1.5％。滴加丙酮(6mL)。在丙酮加入期间没有观察到晶核形成。将盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐晶种(10mg)加入随后加入丙酮(0.5mL)。将结晶混合物在室温下搅拌而且在几个小时之后出现浓的浆状物。结晶表现得在某种意义上和DMF/乙腈结晶非常相似。将浆状物在5mL精细的玻璃料烧结玻璃漏斗上过滤。将滤饼用15mL丙酮冲洗两次并铺开干燥。
微量分析、DSC和PXRD显示固体为盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐晶体。微量分析和DSC数据在表3中概述。
表3恒定的室温结晶数据
  微量分析   DSC
  实施例   说明   C   H   N   Cl   温度(C)   焓
  29   室温   40.46   13.90   6.81   5.85   200.15   148.1J/g
  理论   40.64   14.22   6.65   6.06.
1-丁醇/丙酮结晶在室温下进行，正如所料在加入种晶之前没有晶核形成。产物为盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基L-半胱氨酸马来酸盐晶体。
2.盐酸
HCl对结晶行为起作用。在体系中具有化学计算量(0.5eq)HCl是理想的。当HCl成为限制试剂时，低于此目标量可导致收率减少，或导致盐酸S-[2-(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐和1∶1的马来酸盐(S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L半胱氨酸马来酸盐，II型)的混合物。体系中过量的HCl由于增加溶解性将导致收率的减少和物理性质差的固体，。
3.马来酸
实施例30
已知以利用DMF/乙腈结晶的操作为基础，需要过量的马来酸，而且开始实验的目标量为2.0当量。有1.75当量马来酸的结晶混合物产生的初始条件：0.5eq.HCI、1.75Eq.马来酸、14体积1-BuOH/g盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐，1.5％KF。
当这种水溶液冷藏过夜时，观察到固体以沉淀析出。因此似乎仅仅1.75当量的马来酸导致能轻易地沉淀出来的不稳定过饱和溶液。
3个并行的结晶(实施例30A、30B和30C)分别用2.0、2.25和2.50eq马来酸进行，以评价对结晶的影响。将马来酸(1.78g-1.5eq)加入100mL圆底烧瓶。将1-丁醇(34.0g-14vols)加入并搅拌溶解。然后将盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐(3.00g)加到溶液中。将水加入(3200μL)并搅拌混合物形成澄清液。将溶液在55℃真空下旋转蒸发。将1-丁醇(24g)加回到混合物中并继续旋转蒸发直到KF为1.00％。将丁醇(23.29g)和水(0.434g)加入以得到溶液14体积1-丁醇/盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐并且KF为1.5％。溶液被分成3部分(各12.9g)并标记“A”、“B”和“C”。将98mg马来酸(0.25eq)加入烧瓶B而197mg马来酸(0.5eq)被加到烧瓶C并且各自搅拌形成澄清溶液。
在35分钟期间将丙酮(6mL)以每份1mL滴加到各烧瓶。在丙酮加入期间各实验观察到形成晶核；用低马来酸含量(2.0eq.)观察到最大量固体以及用最高的马来酸含量(2.50eq.)观察到最小的固体。在丙酮加入的结尾，将10mg晶种加入各烧瓶并且实验在室温下保持一周。各实验在15mL精细的玻璃料烧结玻璃漏斗上过滤，并将滤饼用15mL丙酮冲洗两次。将滤饼在过滤器上铺开干燥。
从各实验分离的固体的微量分析和DSC数据在表3中概述。在所有3个实验中，微量分析的数据和盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐的理论预计的情况相匹配。所有组的DSC结果也显示接近200℃的强吸热反应，其相当于盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐的熔点。在实施例30A中，在54℃有微小的反应，其可对应少量的S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐，II型。在此具体的实施例中这可能由于在丙酮加入期间出现相当大量的失控的晶核形成。因为晶核形成出现在丙酮加入期间，甚至在2.50eq.马来酸存在的情况下，即使程度较小，看来丙酮加入的速率过快。在仅仅存在2.0eq.马来酸中形成的小量S-[2-(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐，II型，因此不大可能直接地归因于降低马来酸水平，但可能用减慢丙酮加入速率避免。
表4：微量分析和DSC数据-改变马来酸
  微量分析   DSC
  实施例   说明   C   H   CL   T(℃)   焓
  30A   2.0 Eq.马来酸   40.27   13.95   6.64   5.93   54.28199.52   7.3J/g156.9J/g
  30B   2.25 Eq.马来酸   40.50   13.98   6.70   5.91   201.11   148.4J/g
  30C   2.50 Eq.马来酸   40.47   13.91   6.61   5.84   199.75   159.4J/g
  理论   40.64   14.22   6.65   6.00
在表3中概述的各实验的母液的分析显示，正如所希望的，S-2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸的浓度随着马来酸增加而增加。因此，降低结晶体系的马来酸含量，期望增加收率。
表5：母液分析
  实施例   说明   S-2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸(Wt％)
  30A   2.0 Eq.马来酸   0.84％
  30B   2.25 Eq.马来酸   0.90％
  30C   2.50 Eq.马来酸   1.09％
以此实施例为基础，马来酸含量在2.0-2.5范围内导致盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐形成，在加丙酮期间的丙酮加入速率没有导致相当多的晶核形成。如果延长保持时间，马来酸低至1.75eq.可导致能轻易地破坏的非稳定过饱和溶液。因此，将晶体系统中的马来酸范围定为2.0至2.25eq.是理想的。
4.含水量
在25℃，水的水平为或低于4％，盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐为稳定型。在4％以上，盐酸S-[2-(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐和S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐，II型的混合物被观察到。因此将体系的含水量定为低于4％对形成盐酸S-[2-(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐是优选的。
5.加入化合物
在14体积1-丁醇进行操作看来导致最大量的控制结晶，而增加体积没有表现不利地影响收率。因此，每克盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐应用14体积的1-丁醇是优选的。
6.丙酮量
典型地，每克盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐使用6体积的丙酮。在加入的末尾，可观测到随着每滴丙酮的加入溶液中涌出白色固体。固体特有地消散，但在完全加入6体积时，溶液常常是微混的。这些观察结果提示在这一位置上体系是高度过饱和的而且加入明显超过6体积的丙酮可导致过强的(over-stressing)相分离。或者，加入明显较少的丙酮，可以不使体系达到相分离。这不仅仅妨害球形聚集形态而且对收率有负面影响。
外在参数
1.种晶
简要地，在相分离的时候加入晶种可有助于控制结晶。在相分离的时候大量存在的固体提供分散相能沉淀和结晶成附聚物的底物。通过与大量晶核形成相对的控制晶种加入来控制底物的尺寸和形状对于控制附聚物的总体形状可能也是重要的。整个开发过程，加到1-丁醇/丙酮体系中的晶种的量变化范围为从本批中盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基L-半胱氨酸马来酸盐总量的1％至3％。结晶的行为没有观察到显著的差别。
在使用的1-丁醇丙酮的开始过程中，将晶种(3％)在丙酮加入之前加入。为了保证单分散的粒度分布，加入晶种尽可能接近于相分离的时间是优选的。在开始加入丙酮之前加入晶种可在加入期间引起晶核在不同时期形成，结果呈多重模态分布。
类似于用于DMF/乙腈结晶的步骤在1-丁醇/丙酮结晶中可为优选的。在大量(-90％)加入溶剂之后，将大约剩余10％的一半的种晶浆加入。剩余溶剂可用作冲洗晶种容器和加入管道。
2.反应器特征
基于DMF/乙腈体系的实验，反应器几何条件也可影响结晶的性能，最直接地以收率的方式。在大的长宽比和大的表面容积比的结晶器中进行结晶不是有利的，如在小的圆柱状的瓶中。在相分离的时候，分散相可能在壁上沉淀而不是晶种上。在极端情况下，不在细瓶中种晶进行的小规模的结晶导致结晶全在壁上而实际上没有大量固体。当1-丁醇/丙酮结晶也是相分离系统时，预期使用相对小的长宽比和小的表面容积之比反应器是最理想的。
3.丙酮加入
丙酮加入步骤从少至35分钟到长达3小时45分钟变化。如在4.1.3部分表明的，丙酮的加入太快能导致大量粘性的固体过早的晶核形成，其能导致终产物中盐的混合物。在3小时45分钟期间加入丙酮实际上不优于加入时间2小时或1小时。在加入的末尾，在任何情况下溶液都是混浊的并且如期望的那样进行结晶，导致高质量盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐。因此表现为，当太快地加入丙酮可导致缩短诱导期并在丙酮加入期间固体过早的晶核形成，对于最大加入时间没有明显的限制。2小时的目标加入时间可为优选的，其是在可接受的范围内。
4.混合
混合是关于液-液相分离结晶的重要的参数。搅拌应该充分的以便形成的稠密附聚物在搅拌的盲区不会沉淀。在大规模中，可用于通过底阀(bottom vale)轻轻地向上吹氮气以使盲区减到最小。
看来似乎在延长的搅拌期间球状的附聚物相当坚固而且不容易破碎，并且在搅拌11天后，附聚物看来是完好的。
如果将色谱法结合到盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐的合成过程，建议将色谱分析的产物在进行最终结晶之前很好地表征。为色谱分离作准备，将盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐粗品溶于水和稍微过量的(-0.2eq.)的马来酸。精制的水溶液是最终的1-丁醇/丙酮结晶的原材料。
建议将精制水溶液根据浓度、马来酸含量以及HCl含量在用于1-丁醇/丙酮结晶前很好地表征。不知是否HCl部分在色谱分析中可被除去。在前面的工作中，用离子色谱测定氯离子浓度。如果氯含量显著地低于0.5eq(＜0.45)，推荐加入HCl以达到所需的体积。
用只是微微过量的马来酸进行色谱分析。因此可将马来酸加到精制溶液中以达到目标2.0当量。另外，盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸游离碱(free base)的浓度应该根据加入的酸准确地定量。马来酸和S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸游离碱浓度都用HPLC进行定量。
如果从合成中除去色谱分析，达到合适的初始条件的溶剂交换可简单化为通过使用1-丁醇作为主要的溶剂并增加刚好充足的水(～8％KF)以得到澄明的无色的溶液。然后将此溶液只蒸馏短的时间以达到KF小于1.5％。
盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐结晶的球状的有序堆积附聚物的粉末特征
实施例20中制备的盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐结晶有序堆积附聚物被研究以确定其粉末特征，该特征与盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐连同可药用载体的药物组合物的开发有关。在测试之前，将固体通过相当于177微米孔径的80目筛网以破碎有序堆积附聚物的一些很大的松散聚集体。检验的性质包括粉末流动特征、粉末粒度分布、粉末松散性和松密度以及粉末压缩性和实密度。
粉末流动性使用孔隙流动性测定仪进行评价，测量粉末自由地流过的最小的孔径。通过6-mm开放的孔隙成功地重复了粉末流动性试验。6mm的粉末流动性被认为有利于盐酸S-[6-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-6-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐晶体的制剂开发。然而通过狭窄的4mm孔径地流动性成功的重现取决于如何将粉末导入检测器。对于盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐结晶的这些有序堆积附聚物，计算的17.8％的压缩指数也表明达到了良好的流动特性。
粉末的粒度分布使用筛析(sieve analysis)测量。平均粒度分布使用几何平均数方法计算。图12为粒度分布数据。这些有序堆积附聚物显示134微米的平均粒度(此后称为μm)。只有1.63％的原料被认为是优良的，小于75μm，超过90％的在105-250μm。超过75％的原料是在105-150μm。有序堆积附聚物的粉末粒度分布严格范围在100和200μm之间，这对于开发盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐和可药用载体的药物组合物非常理想。
疏松粉末密度用50ml量筒内的原料物质进行评价。摇实的粉末密度在平衡点计算，在此处增加拍打不改变粉末体积。有序堆积附聚物显示疏松的粉末密度0.41g/ml，以及摇实的密度为50g/ml。
粉末在没有任何赋形剂而直接受压下被测定。100mg重的压紧物是使用8/32inch(6.35mm)圆的凹面工具制造的。将片剂在各种的压力下压缩并评价强度、厚度和崩解。图13表现的是盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐结晶有序堆积附聚物的直接压缩图。该盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐结晶有序堆积附聚物表现出不使用赋形剂的良好压缩性。硬如11kP的相对坚固的小片(8/32inch)，900和1000kg之间的压力是可能的。片剂强度达到明显最大的900和1000kg之间的压力。在压缩实验期间观察到对冲床和模壁较小的粘合。然而，粘着被认为是较小的问题并且可容易地通过使用合适的润滑剂解决。在图14中表现了片剂厚度的效果为压缩力的函数。也评价了对于盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐结晶的有序堆积附聚物的压紧物的片剂崩解时间。将三个片剂用对于此原料相当于8kP片剂硬度的500和600之间的压力压缩。全部的片剂显示小于2分钟的迅速崩解时间并低于目标的10分钟(见图15)。
总之，盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐结晶的有序堆积附聚物对于药物组合物的开发，如片剂含有盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐和可药用的载体，显示非常理想的性质。
药物组合物
该发明内也包含一类药物组合物，包括盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐晶体与一种或多种无毒的、可药用的载体及/或稀释剂及/或辅药(以下总称为“载体”原料)，以及其它需要的活性成分联合。本发明的盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐晶体可用任何合适的途径给药，优选的以药物组合物适合的途径形式，以及打算治疗的有效量。活性S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐及组合物，例如，可口服、静脉内、腹膜内、皮下、肌内注射或局部给药。
对于口服，药物组合物可用，例如，片剂、胶囊剂、混悬液或液体形式。药物组合物优选地用包含特定量的活性成分的剂量单位形式制备。这种剂量单位的实例是片剂或胶囊剂。活性成分可同时通过注射作为组合物给药，其中，例如，可用生理盐水、葡萄糖或水作为合适的载体。
给予的治疗活性化合物的量，以及用该发明化合物及/或组合物治疗疾病症状的剂量方案依赖多种的因素，包括对象的年龄、体重、性别以及医疗条件，疾病的严重性、给药的途径和频率，以及使用的具体的化合物，因此可广泛地变化。药物组合物可包含大约0.1到2000mg范围内的活性成分，优选的在0.5到500mg范围内，而且最优选的在大约1和100mg之间。大约0.01到100mg/kg体重的日剂量，优选的在大约0.5和大约20mg/kg体重之间，最优选地在大约0.1到10mg/kg体重，可能是合适的。日剂量可给药每日1至4剂。
盐酸S-[6-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-6-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐晶体还可以通过经皮装置给药。优选地局部的给药可使用储液器(reservoir)和多孔膜类的或固体基质种类的膜片完成。不论是哪种情况，连续地通过薄膜从储存孔或微胶囊递送活性剂到活性剂可渗透的粘合剂中，其与接受者的皮肤或者粘膜接触。如果活性剂经皮吸收，将可控的和预定流量的活性剂给予接受者。在微胶囊情况下，包封剂也可起膜的作用。
本发明的乳剂的油相可用已知的方法由已知的成分组成。虽该相可仅包含乳化剂时，但其可包含至少一种含有脂、油或脂和油两者的乳化剂。优选地，亲水的乳化剂与作为稳定剂的亲脂性的乳化剂一起被包括。并且油和脂两者都包括的也是优选的。有或者没有稳定剂的乳化剂制备所谓的乳化蜡，并且蜡和油脂一起制备形成乳膏剂的油分散相的所谓的乳化软膏基质。适用于本发明的制剂的乳化剂和乳液稳定剂，包括Tween 60、Span 80、十六/十八烷醇、十四烷醇、单硬脂酸甘油酯、和十二烷基硫酸钠。
选择制剂合适的油类或脂肪以达到想要的化妆品性质为基础，因为活性化合物在可能用于药物乳剂制剂的大多数油类中的溶解性是很低的。因此，乳膏剂优选地应为非油脂的、不着色的和可洗的具有合适浓度的产品，以避免从管或其它的容器渗漏。直或支链，单或二盐基的烷基酯如二异己二酸盐(di-isoadipate)、异十六(烷)基硬脂酸盐、可可脂肪酸丙二醇二酯、豆蔻酸异丙酯、癸基油酸盐、棕榈酸异丙酯、硬脂酸丁酯、2-乙基己基棕榈酸或混合的支链酯可被使用。根据所需的性质这些可单独使用或联合使用。或者，高熔点脂类如白色软石蜡及/或液体石蜡或其它的矿物油能被使用。
适用于局部眼部给药的制剂也包括滴眼剂，其中将活性成分溶解或悬浮在合适的载体中，尤其是活性成分的水溶剂。活性成分优选地以0.5到20％的浓度存在于这种制剂中，有利地0.5到10％并且具体而言大约为1.5％w/w。
为了治疗的目的，盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐通常与一种或多种适合于指定的给药途径的辅药联合。如果口服给药，化合物可与乳糖、蔗糖、淀粉、链烷酸的纤维素酯、纤维素烷基酯、滑石、硬脂酸、硬脂酸镁、氧化镁、磷酸和硫酸的钠和钙盐、明胶、阿拉伯树胶、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮及/或聚乙烯醇混合，然后压片或包封以方便地给药。这种胶囊剂或片剂可包含控释制剂，以羟丙基甲基纤维素中的活性化合物的分散液提供。肠胃外给药制剂可用水或无水的等渗无菌注射液或混悬液的形式。这些溶液和混悬液可从具有一个或多个用于口服制剂的载体或稀释剂的无菌的粉末或颗粒制备。可将盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐晶体溶于水、聚乙二醇、丙二醇、乙醇、玉米油、棉花子油、花生油、芝麻油、苯甲醇、氯化钠及/或各种的缓冲液中。其它的辅药和给药方法是本药学的领域熟知和普遍认识的。
尽管如此描述本发明，很明显同样的本发明可在多方面变化。这种变化不被认为是背离本发明的实质和范围，并且所有这种可能对本领域的技术人员是熟知的变化和等价物，确定为包括在所附权利要求的范围内。

Claims (15)

1.盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐的晶形，其特征在于至少以下之一：基本上如图1所示的X射线粉末图谱；在大约40℃到大约180℃温度范围内质量损失大约1％；基本上如图5所示的拉曼光谱；和基本上如表1所示的元素分析。
2.权利要求1的盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐的晶型，其中大量晶体聚积为附聚物。
3.权利要求2的盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐的晶型，其中所述大量晶体聚积为普遍有序堆积的附聚物。
4.一种药物组合物，包括权利要求1的盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐以及可药用的载体。
5.一种治疗疾病的方法，其中在需要这种治疗的患者中形成一部分高病理性产物，该方法包括给予患者有效量的权利要求1的结晶盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐。
6.制备权利要求3的普遍有序堆积附聚的结晶盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐的方法，应用结晶过程包括将抗溶剂加到溶解了盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐的溶剂溶液中，从而形成包括二个相的体系，并且沉淀普遍有序堆积附聚的结晶盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐。
7.权利要求6的方法，其中将抗溶剂溶液加到溶解盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐的溶剂溶液中，随后加入晶种到体系中。
8.权利要求6的方法，其中抗溶剂包括丙酮。
9.权利要求6的方法，其中溶剂溶液包括1-丁醇和盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐。
10.权利要求6的方法，其中抗溶剂溶液包括乙腈，并且溶剂溶液包括N，N-二甲基甲酰胺和盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐。
11.权利要求6的方法，其中抗溶剂溶液包括丙酮，并且溶剂溶液包括1-丁醇和盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐。
12.权利要求7的方法，其中引入不少于体系中的盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐总量的大约1重量％作为添加的晶种。
13.权利要求6的方法，其中在反应容器中将足够量的抗溶剂加到包含盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐的溶剂溶液中形成反应体系，直到明显可见a)混浊或b)所述反应容器表面上的油状涂层，并添加晶种到所述体系中。
14.权利要求7的方法，其中所述的晶种通过至少下列之一的步骤而原位产生：减少溶剂溶液的含水量；减少马来酸的数量；或改变超饱和产生的速率。
15.权利要求6的方法，其中体系中不加入晶种，并且加到体系中的抗溶剂的比例超出溶解盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐的溶剂溶液比例大约110重量％，该数值相当于加入了晶种的体系中所用的抗溶剂与溶剂的比例，以沉淀普遍有序堆积附聚的结晶盐酸S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸马来酸盐。
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