CN1784406A - 扎来普隆的纯化方法和晶形 - Google Patents

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CN1784406A CN 02819356 CN02819356A CN1784406A CN 1784406 A CN1784406 A CN 1784406A CN 02819356 CN02819356 CN 02819356 CN 02819356 A CN02819356 A CN 02819356A CN 1784406 A CN1784406 A CN 1784406A
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E·费赫尔
F·科罗迪
C·辛格
E·马亚
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Teva Pharmaceutical Works PLC
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Biogal Gyogyszergyar Rt
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Abstract

本发明公开一种能够分离扎来普隆和扎来普隆位置异构体从而获得基本纯净的扎来普隆的提纯方法，所述扎来普隆位置异构体是在化学合成扎来普隆中容易生成的副产物。此外，用所述方法可获得扎来普隆的新晶形。

Description

扎来普隆的纯化方法和晶形
                  相关申请的交叉引用
本申请要求2002年6月12日申请的美国专利申请10/170,673的权益。本申请还要求以下美国临时专利申请的权益：2001年8月1日申请的60/309,391；2001年9月6日申请的60/317,907以及2002年6月12日申请的60/388,199。所有上述申请通过引用结合到本文。
                       发明领域
本发明涉及抗焦虑、抗癫痫、镇静、催眠和骨骼肌肉松弛的药物扎来普隆。更具体地讲，本发明涉及扎来普隆的后期处理以及其特殊晶形，通过调节后期处理很容易获得所述晶形。本发明进一步涉及扎来普隆的位置异构体N-[3-(3-氰基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基)苯基]-N-乙基乙酰胺(4)。本发明还涉及用于分析和测定扎来普隆的HPLC方法。
                       发明背景
扎来普隆具有抗焦虑、抗癫痫、镇静以及催眠特性。美国食品和药品管理局已经批准其用于短期治疗失眠症，并且可以获得商品名为Sonata_的处方药。扎来普隆的分子结构已知，可以如下表示：
Figure A0281935600091
扎来普隆的IUPAC命名为N-[3-(3-氰基吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基)苯基]-N-乙基乙酰胺。
美国专利4,626,538(“′538号专利”)提供制备扎来普隆和结构相关性化合物的一般制备方法。在′538号专利的实施例2中，N-(3-乙酰基苯基)乙酰胺1与二甲基甲酰胺二甲基缩醛反应生成N-[3-[3-(二甲基氨基)-1-氧代-2-丙烯基]苯基]-N-乙酰胺2。在′538号专利的实施例7中，乙酰胺2的伯酰胺用乙基碘烷基化生成N-[3-[3-(二甲基氨基)-1-氧代-2-丙烯基]苯基]-N-乙基乙酰胺3。扎来普隆在实施例14中如下制备：使乙基乙酰胺3和3-氨基-4-氰基吡唑4在回流下冰醋酸中稠合。如下逐步处理扎来普隆：将非挥发分在饱和碳酸氢钠和二氯甲烷间分配，干燥有机相，让有机相通过吸附剂(硅酸镁)，将己烷加入有机相，冷却有机相，收集有机相中形成的固体。报告该产物的熔点为186-187℃。整个合成方法在流程1中描述。′538号专利没指出任何在反应中生成的副产物或者解释如果有副产物生成，如何将其与扎来普隆分离。
                       流程1
(a)二甲基甲酰胺二甲基缩醛，refl.；(b)乙基碘，氢化钠，DMF；(c)冰醋酸，refl。
美国专利5,714,607(“′607号专利”)介绍了一种制备扎来普隆的改进方法。根据′607号专利，如果在′538号专利方法的最后步骤以约10％至约85％(v/v)将水加入醋酸溶剂，则扎来普隆可以有更高的产率和纯度。如′607号专利所指出的，改进条件缩短了反应时间约3-3.5h至约1-3.5h。根据′607号专利的表1，所得的扎来普隆产率为81.7-90％，HPLC检测纯度为98.77-99.4％。在所有实施例中，扎来普隆通过从反应混合物中结晶获得，所述反应混合物为水和醋酸的混合物。′538号专利没指出该方法的副产物或者解释如果有副产物生成，如何将其与扎来普隆分离。
共同转让的共同未决美国专利申请10/170,673公开了如下制备扎来普隆的方法：在包含水和水混溶性有机化合物的反应介质中，使N-乙基乙酰胺3和吡唑4或其酸加成盐稠合。
2002年6月12日申请的美国专利申请10/170,673通过引用将其全部内容结合到本文中。
为了获得市场许可的新药物，制造商必须递交符合规则的有力证据以证实产品用于人体是可接受的。除其它项目外，所递交证据还必须包括显示产物杂质特征的分析数据，以证明没有杂质或存在的杂质量可忽略不计。对于这样的证明，需要能够检测杂质的分析方法以及其鉴定和测定的参考标准。还需要这样的分析方法的参考标准。
美国食品和药品管理局药物评估和研究中心(CDER)已经颁布了推荐指导原则：新药和一般药物申请者应确定活性成分中有机杂质为0.1％或0.1％以上。“Guideline on Impurities in New DrugSubstances”61 Fed.Reg.371(1996)，“Guidance for Industry ANDAs：Impurities in Drug Substances”64 Fed.Reg.67917(1999)。除非杂质为人代谢产物、已经测试表明是安全的或为临床试验证明是安全的成分，否则CDER进一步推荐药物申请者减少活性成分中杂质量低于0.1％。因此，需要分离药物中杂质以便研究它们的药理学和毒物学特征。
各种晶型(包括多晶型和假多晶型)为具有相同结构式的独特固体，但是由于晶胞中分子构象和/或取向不同而具有不同的物理性质。一种在不同晶型之间不相同的物理性质是溶解性，它可能影响到药物的生物利用度。可以在实验室用粉末X-射线衍射光谱法鉴定化合物的晶型。对于晶型(即多晶型和假多晶型)以及多晶型的药学应用的一般性综述参见G.M.Wall，Pharm Manuf.3，33(1986)；J.K.Haleblian和W.McCrone，J.Pharm.Sci.，58，911(1969)；J.K.Haleblian，J.Pharm.Sci.，64，1269(1975)。
发现药用化合物的新晶型提供了新的改善药品作用特征的机会。此发现扩大了物质的性能，配方研制科学家可以设计例如药物的具有目标释放特征或其它特性的药用剂型。本发明提供扎来普隆的四种新晶型。
                       附图简介
图1为扎来普隆位置异构体的13CNMR谱。
图2为扎来普隆位置异构体的质谱。
图3为扎来普隆位置异构体的1H MR谱。
图4为扎来普隆晶型I的粉末X-射线衍射图。
图5为扎来普隆晶型II的粉末X-射线衍射图。
图6为扎来普隆晶型III的粉末X-射线衍射图。
图7为扎来普隆晶型IV的粉末X-射线衍射图。
图8为扎来普隆晶型V的粉末X-射线衍射图。
图9为用本发明方法得到的扎来普隆的HPLC色谱图。
图10为用本发明方法得到的位置异构体的HPLC色谱图。
                       发明概述
美国专利申请10/170,673中公开的反应缩合步骤生成的次要副产物为具有下式结构的N-[3-(3-氰基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基)苯基]-N-乙基乙酰胺5：
Figure A0281935600131
此化合物在以前的化学文献中是未知的，如下文阐述，它可以用作分析扎来普隆的参考标准。化合物5是扎来普隆的位置异构体，与扎来普隆的区别在于N-乙基-N-乙酰基氨基苯基在稠合杂环环系上的位置。生成位置异构体5可以解释为因为(1)氰基吡唑4的3-氨基的1，2加成反应并脱水以及所述吡唑的2-氮原子与共轭C＝C双键的Michael加成反应，或者(2)所述吡唑的2-氮原子的Michael加成反应以及3-氨基与酮基环化。无论何种机制的位置异构体5构型，显而易见的是它是在商业制备扎来普隆中不需要的次要副产物。
在专利申请10/170,673说明的条件下，位置异构体5形成的量通常为相对于所需异构体的约0.2-0.5％。
因此在一个方面，本发明涉及N-[3-(3-氰基吡唑并[1，5a]嘧啶-5-基)苯基]-N-乙基乙酰胺，它被称为扎来普隆位置异构体。
另一方面，本发明涉及制备N-[3-(3-氰基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基)苯基]-N-乙基乙酰胺的方法，该方法包括以下步骤：在水与至少一种没有羧酸基团的水混溶性有机化合物的液体反应介质中，使N-[3-[3-(二甲基氨基)-1-氧代-2-丙烯基]苯基]-N-乙基乙酰胺、3-氨基-4-氰基吡唑和强酸的混合物反应，中和反应混合物得到沉淀粗制产物，然后用氯仿和丙酮混合物作为洗脱剂通过硅胶柱色谱法将N-[3-(3-氰基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基)苯基]-N-乙基乙酰胺与粗制产物的其它组分分离，其中强酸摩尔量至少为N-[3-[3-(二甲基氨基)-1-氧代-2-丙烯基]苯基]-N-乙基乙酰胺摩尔量或3-氨基-4-氰基吡唑摩尔量的10倍，后两者中任意一个过量，或者如果后两者大约等摩尔量则强酸摩尔量为任何一个摩尔量的至少10倍。
另一方面，本发明涉及制备N-[3-(3-氰基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基)苯基]-N-乙基乙酰胺的方法，该方法包括以下步骤：在水与至少一种没有羧酸基团的水混溶性有机化合物的液体反应介质中，使N-[3-[3-(二甲基氨基)-1-氧代-2-丙烯基]苯基]-N-乙基乙酰胺、3-氨基-4氰基吡唑和强酸的混合物反应，中和反应混合物，从而沉淀出粗制产物，然后用氯仿和丙酮混合物作为洗脱剂通过硅胶柱色谱法将N-[3-(3-氰基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基)苯基]-N-乙基乙酰胺与粗制产物的其它组分分离，其中强酸摩尔量为N-[3-[3-(二甲基氨基)-1-氧代-2-丙烯基]苯基]-N-乙基乙酰胺摩尔量或3-氨基-4-氰基吡唑摩尔量的至少20倍，后两者无论哪一种过量；或者如果后两者使用量为大约等摩尔量，则强酸摩尔量为任何一种的摩尔量的至少20倍。
因为扎来普隆和位置异构体5的结构类似，所以很难将它们分离。药学领域需要一种纯化含其位置异构体的扎来普隆混合物的方法。本发明满足了这种需要，本发明需要有效分离所述两种化合物的沉淀方法。应当理解的是本发明纯化扎来普隆的方法也有效减少或消除许多其它杂质。
因此，另一方面，本发明提供一种纯化可能混有扎来普隆位置异构体和其它杂质的扎来普隆(例如粗制扎来普隆)的方法，该方法为从用任何来源的粗制扎来普隆形成的溶液中沉淀出富集扎来普隆的固体。所述溶液可以如下形成：在高温下将任何来源的粗制扎来普隆溶于有机溶剂。通过冷却高温溶液、用反溶剂或者用反溶剂并冷却可以使纯化的扎来普隆从所述溶液中沉淀出来。在所述方法的一个实施方案中，在高温下将反溶剂加入所述溶液中。通过所述纯化方法，可以获得基本没有位置异构体的扎来普隆。
另一方面，本发明提供一种纯化可能混有扎来普隆位置异构体和其它杂质的扎来普隆的方法，该方法为从用任何来源的粗制扎来普隆形成的溶液中沉淀出富集扎来普隆的固体。所述溶液可以通过将粗制扎来普隆溶于高温有机溶剂形成，其中所述有机溶剂选自以下物质：醇、酮、醚、羧酸、羧酸酯、腈、芳香烃、卤化烃、它们的任何混合物以及一种或多种上述溶剂与水的混合物。通过冷却高温溶液、用反溶剂或者用反溶剂并冷却可以使纯化的扎来普隆从所述溶液中沉淀出来。在所述方法的一个实施方案中，在高温下将反溶剂加入所述溶液中。通过所述纯化方法，可以获得基本没有位置异构体和其它杂质的扎来普隆。
在又一方面，本发明提供一种纯化可能混有扎来普隆位置异构体和其它杂质的扎来普隆的方法，该方法为从用任何来源的粗制扎来普隆形成的溶液中沉淀出富集扎来普隆的固体。所述溶液可以通过将粗制扎来普隆溶于高温有机溶剂形成，其中所述有机溶剂选自以下化合物：甲醇、乙醇、2-丙醇、丙酮、甲基乙基酮、甲基异丁基酮、四氢呋喃、乙醚、甲基叔丁基醚、乙酸、丙酸、乙酸乙酯、乙酸异丁酯、乙腈、丙烯腈、苯、甲苯、二甲苯、二氯甲烷和氯仿。通过冷却高温溶液、用反溶剂或者用反溶剂并冷却可以使纯化的扎来普隆从所述溶液中沉淀出来。在所述方法的一个实施方案中，在高温下将反溶剂加入所述溶液中。通过所述纯化方法，可以获得基本没有位置异构体和其它杂质的扎来普隆。
另一方面，本发明提供一种纯化可能混有扎来普隆位置异构体和其它杂质的扎来普隆的方法，该方法为从粗制扎来普隆形成的溶液中沉淀出富集扎来普隆的固体。所述溶液可以通过将粗制扎来普隆溶于高温有机溶剂形成，并且其浓度为约100mM至约1M。通过冷却高温溶液、用反溶剂或者用反溶剂并冷却可以使纯化的扎来普隆从所述溶液中沉淀出来。
由此，另一方面，本发明提供一种纯化可能混有扎来普隆位置异构体和其它杂质的扎来普隆的方法，该方法为从用任何来源的粗制扎来普隆形成的溶液中沉淀出富集扎来普隆的固体。所述溶液可以通过将粗制扎来普隆溶于高温有机溶剂(尤其是乙酸、甲醇、乙醇、2-丙醇、四氢呋喃、乙腈或丙酮)形成。反溶剂(尤其是水)在所述溶液为高温时加入。通过冷却高温溶液、用反溶剂或者用反溶剂并冷却可以使纯化的扎来普隆从所述溶液中沉淀出来。在所述方法的一个实施方案中，在高温下将反溶剂加入所述溶液中。
在又一方面，本发明提供一种纯化可能混有扎来普隆位置异构体和其它杂质的扎来普隆的方法，该方法为从用任何来源的粗制扎来普隆形成的溶液中沉淀出富集扎来普隆的固体。所述溶液可以通过将粗制扎来普隆溶于高温有机溶剂形成。通过冷却高温溶液、用反溶剂或者用反溶剂并冷却可以使纯化的扎来普隆从所述溶液中沉淀出来。在所述方法的一个实施方案中，在高温下将反溶剂加入所述溶液中。通过所述提纯方法，所得扎来普隆中含有的扎来普隆位置异构体与本方法中用作初始原料的粗制扎来普隆相比减少至少约50％以及减少达到约70％。
另一方面，本发明提供一种纯化可能混有扎来普隆位置异构体和其它杂质的扎来普隆的方法，该方法为从用任何来源的粗制扎来普隆形成的溶液中沉淀出富集扎来普隆的固体。所述溶液可以通过在高温下将粗制扎来普隆溶于选自乙腈和乙醇的有机溶剂而形成。反溶剂在所述溶液为高温时加入。乙腈为溶剂时，则水为反溶剂。乙醇为溶剂时，则己烷为反溶剂。通过冷却高温溶液可以使纯化的扎来普隆从所述溶液中沉淀出来。
另一方面，本发明涉及一种纯化扎来普隆的方法，该方法包括以下步骤：形成包含扎来普隆的固体的乙醇溶液；用水作反溶剂，沉淀出相对用于形成所述溶液的含扎来普隆的固体的富集扎来普隆的固体；分离富集扎来普隆的固体沉淀；形成前一步骤的富集扎来普隆的固体沉淀的乙醇溶液；在没有反溶剂辅助下，从前一步骤的溶液中沉淀出进一步富集扎来普隆的固体；然后分离前一步骤中进一步富集扎来普隆的固体。
对用所述纯化方法获得的基本纯净的扎来普隆表征，发现某些方法的实施方案产生扎来普隆的新晶型，这样本发明进一步提供扎来普隆的新晶型，用适当选择的溶剂、反溶剂和/或其它条件通过所述纯化方法逐步操作很容易获得这些新晶型。
由此，在一个方面，本发明提供扎来普隆晶型II，其特征为在粉末X-射线衍射图中在7.9、10.7、12.5、14.9、16.9、17.9、21.3、24.0、25.2、25.9、27.0和27.5±0.2度2θ有衍射峰。
另一方面，本发明提供扎来普隆晶型III，其特征为在粉末X-射线衍射图中在154、18.1、21.1、26.8和27.5±0.2度2θ有衍射峰。
另一方面，本发明提供扎来普隆晶型III，其特征为在粉末X-射线衍射图中在15.4、18.1、21.1、26.8和27.5±0.2度2θ有衍射峰以及进一步特征为在11.6、17.6、19.0、20.0和22.2度2θ有X-射线衍射线峰(反射)。
另一方面，本发明提供扎来普隆晶型IV，其特征为在粉末X-射线衍射图中在8.1、14.5、17.3、21.3±0.2度2θ有衍射峰。
另一方面，本发明提供扎来普隆晶型IV，其特征为在粉末X-射线衍射图中在8.1、14.5、17.3、21.3±0.2度2θ有衍射峰以及进一步特征为在10.6、11.1、14.1、15.6、18.0、18.2、20.1、20.3、24.3、25.0、25.9、26.7、27.9和29.5±0.2度2θ有X-射线衍射峰。
另一方面，本发明涉及扎来普隆晶型V，其特征为在8.0、14.8和17.0±0.2度2θ有X-射线衍射峰。
另一方面，本发明涉及扎来普隆晶型V，其特征为在8.0、14.8和17.0±0.2度2θ有X-射线衍射峰以及进一步特征为在10.7、11.0、12.5、15.4、16.5、17.7、21.3、25.7和26.5±0.2度2θ有X-射线衍射峰。
另一方面，本发明提供一种制备扎来普隆晶型II的方法，该方法包括以下步骤：用水混溶性或有相当水溶性的有机溶剂形成扎来普隆溶液；使所述溶液与水接触引起扎来普隆结晶；然后从有机溶剂和水中分离扎出来普隆晶型II。
另一方面，本发明提供一种制备扎来普隆晶型II的方法，该方法包括以下步骤：用水混溶性或有相当水溶性的有机溶剂形成扎来普隆溶液；使所述溶液与其三倍体积的水接触并任选冷却至约0℃，引起扎来普隆结晶；然后从有机溶剂和水中分离出扎来普隆晶型II。
另一方面，本发明提供一种制备扎来普隆晶型III的方法，该方法包括以下步骤：形成扎来普隆的乙腈溶液；将水加入高温下的所述溶液；冷却溶液使其沉淀出扎来普隆；然后从乙腈和水中分离出扎来普隆晶型III。
另一方面，本发明提供一种制备扎来普隆晶型IV的方法，该方法包括以下步骤：用选自2-丙醇和四氢呋喃与水的混合物的溶剂体系形成扎来普隆溶液；从所述溶液中沉淀出扎来普隆；然后溶剂体系中分离出扎来普隆晶型IV。
本发明进一步提供制备的扎来普隆已知晶型的新方法。
由此，在一个方面，本发明提供一种制备扎来普隆晶型I的方法，该方法包括以下步骤：在高温液体中形成扎来普隆的悬浮液，所述液体可以为沸水或高沸点烃(仅举两个例子)；冷却悬浮液；然后从所述液体中分离出扎来普隆晶型I。
另一方面，本发明提供提供一种制备扎来普隆晶型I的方法，该方法包括以下步骤：熔化扎来普隆；冷却固化扎来普隆；研磨固化的扎来普隆获得扎来普隆晶型I。
在又一个方面，本发明提供一种制备扎来普隆晶型I的方法，该方法包括以下步骤：加热使扎来普隆溶于有机溶剂；在所得溶液中任选加入非极性有机反溶剂；冷却引起扎来普隆沉淀；然后分离出扎来普隆晶型I。
在又一个方面，本发明涉及一种制备扎来普隆晶型I的方法，该方法包括以下步骤：加热使扎来普隆溶于有机溶剂；在所述溶液中加入非极性有机反溶剂；冷却引起扎来普隆沉淀；然后分离出扎来普隆晶型I。
本发明还提供包含本文所述扎来普隆的任何晶型(单独或任何组合)的药用组合物，使用任何这些药用组合物治疗例如失眠症的方法。
另一方面，本发明提供分析和检测扎来普隆的HPLC方法。
另一方面，本发明提供检测扎来普隆的HPLC方法，该方法包括以下步骤：将扎来普隆样品溶于乙腈∶水(1∶1)稀释剂；注射样品溶液(约10μ1)到100mm×4mm，3μm RP-18 HPLC柱；使用乙腈(28vol-％)和甲酸铵缓冲液(72vol-％，0.005M，pH＝4)的混合物作为洗脱剂以1ml/min从以上柱洗脱样品；在245nm波长用UV检测器检测相关样品的扎来普隆含量。
                     优选实施方案的说明
本发明提供一种尤其适合提高可能混有扎来普隆位置异构体和其它杂质的粗制扎来普隆的纯度的方法。本发明还提供一种用于富集所述混合物中位置异构体(5)的方法，因此在本发明又一实施方案中促进位置异构体的分离。
可用于多个本发明实施方案中的粗制扎来普隆可以提供为浓缩的未纯化或部分纯化的化学合成终产物，例如以下文献中的终产物：美国专利4,626,538，5,714,607和美国专利申请10/170,673，或来自任何来源。
化合物N-[3-(3-氰基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基)苯基]-N-乙基乙酰胺(5)为扎来普隆的位置异构体，发现它是用3-氨基-4-氰基吡唑和N-[3-[3-(二甲基氨基)-1-氧代-2-丙烯基]苯基]-N-乙基乙酰胺作初始原料合成扎来普隆中的主要杂质。在美国临时专利申请60/297,635公开的反应条件下，粗制产物中位置异构体杂质含量为约0.2-0.5％(HPLC)。杂质含量很大程度上取决于反应条件，如下所述，可以控制反应条件以最大化生成的位置异构体含量，由此促进其分离和表征。
由此，在另一个实施方案中，本发明提供一种制备新N-[3-(3-氰基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基)苯基]-N-乙基乙酰胺(5)的方法，该方法包括在酸的水溶液或者酸的水混溶性有机溶剂溶液存在下，用3-氨基-4-氰基吡唑和N-[3-[3-(二甲基氨基)-1-氧代-2-丙烯基]苯基]-N-乙基乙酰胺开始反应。在合成中使用高浓度强酸可以使位置异构体(5)的产量增加达5％(HPLC)。这促进了此新化合物的分离和表征。
以上反应可以在20-30℃或可达水沸点的更高温度下进行。温度优选为20-30℃。为极性质子溶剂(例如乙酸、甲醇、乙醇、异丙醇)或极性质子惰性溶剂(例如乙腈、四氢呋喃、二甲基甲酰胺)的水混溶性有机溶剂都可以使用。酸可以使用无机酸(例如盐酸、硫酸、磷酸)和有机酸(例如乙酸、三氟乙酸、甲磺酸)，优选酸为盐酸。
在一个优选实施方案中，所述反应在盐酸存在下在水中于约25℃进行。可以通过蒸发、过滤、萃取或上述方法的任何组合方式进行扎来普隆和其位置异构体(5)的混合物的分离。
在一个特别优选的实施方案中，在反应完成后，将反应混合物用水稀释，过滤移出扎来普隆沉淀。然后将滤液中和以沉淀出扎来普隆及其位置异构体5的混合物。可以用水混溶性有机溶剂(例如乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿等)萃取水相进一步收获所述混合物。
可以用色谱法分离化合物5。可使用柱色谱法、制备型TLC或HPLC。优选柱色谱法。可以使用硅胶或氧化铝作为柱填料。优选的柱填料为硅胶。可以使用各种有机溶剂或它们的混合物作为洗脱剂。优选二氯甲烷和丙酮的混合物作为柱洗脱剂。特别优选3∶1(v∶v)二氯甲烷∶丙酮的混合物作为洗脱剂。
表征分离出的5，它的结构通过1H-NMR和13C-NMR光谱以及质谱分析证实。
图1显示5的13C NMR谱。图2为位置异构体5的低分辨率EI质谱。图3为位置异构体5的1H NMR。以下给出1H和13C NMR峰的分配。
Figure A0281935600211
           表1 1H NMR共振分配
 化学位移(ppm)   多重性   强度   分配
 1.143   三重峰   3H   4″-CH3(Et)
 1.876   单峰   3H   1″-CH3
 3.804   四重峰   2H   3″-CH2(Et)
 7.361   双峰   1H   4′-CH
 7.532   双峰   1H   6-CH
 7.613   三重峰   1H   5′-CH
 8.018   单峰   1H   2′-CH
 8.159   双峰   1H   6′-CH
 8.375   单峰   1H   2-CH
 8.805   双峰   1H   7-CH
    表2 13C共振分配
 化学位移(ppm)   分配
 12.89   4″-CH3
 22.68   1″-CH3
 43.84   3″-CH2
 83.17   3-C
 107.71   6-CH
 112.84   CN
 127.17   6′-CH
 127.48   2′-CH
 130.62   5′-CH
 131.63   4′-CH
 136.67   7-CH
 137.46   1′-C
 144.1   3′-C
 148.31   2-CH
 149.99   9-C
 158.6   5-C
 169.9   2″-CO
根据本发明另一个实施方案，扎来普隆通过在控制条件下从溶液中析出提纯，所述溶液用可能包含扎来普隆位置异构体的粗制扎来普隆制备。可以将不纯的粗制扎来普隆重复进行一次所述过程以获得更高纯度的扎来普隆，或者可以反复进行上述过程以获得可达到的任何需要纯度的扎来普隆，包括基本没有位置异构体的扎来普隆。
本发明的纯化方法中，富集扎来普隆的固体从包含有机溶剂的溶液中析出。有机溶剂包括醇，例如甲醇、乙醇和2-丙醇；酮，例如丙酮，甲基乙基酮和甲基异丁基酮；醚，例如四氢呋喃(THF)、乙醚和甲基叔丁基醚；羧酸，例如乙酸和丙酸；羧酸酯，例如乙酸乙酯和乙酸异丁酯；腈，例如乙腈和丙烯腈；芳香烃，例如苯、甲苯和二甲苯；卤化烃，例如二氯甲烷和氯仿；以及它们的混合物。任选水可以与有机溶剂混合。应当理解的是有机溶剂根据其凝固点和进行上述处理时的温度来选择以使溶剂不凝固。通常，优选的有机溶剂为乙酸、甲醇、乙醇、2-丙醇、四氢呋喃(THF)、乙腈、丙酮、乙酸乙酯、甲苯和二氯甲烷。
溶液中扎来普隆的最佳浓度通常为约100mM至约1M，更优选约100mM至约700mM。有机溶剂可以加热至高温以获得粗制扎来普隆混合物的均匀溶液。本文使用的术语“高温”是指温度高于约25℃。为了方便起见使用在所需温度沸腾的有机溶剂。从在形成所述溶液的温度的饱和扎来普隆溶液分离扎来普隆和位置异构体5与从不饱和溶液分离的效果相当。优选形成饱和溶液。
在粗制扎来普隆完全溶剂后，可以通过冷却引起富集扎来普隆的固体从溶液中析出。冷却既包括放置外部散热器的主动冷却，这样在溶液和冷却器间产生热交换，又包括中止主动加热的被动冷却。优选溶液冷却至低温，更优选至约5-10℃。也可以加入反溶剂并任选冷却引起沉淀。本文使用的术语“低温”是指温度低于约20℃。
冷却引起相对粗制扎来普隆/位置异构体混合物富集扎来普隆的固体析出。
在富集扎来普隆的固体从溶液中析出后，将固体从已没有扎来普隆的溶液中分离获得纯净的扎来普隆。可以通过将固体从液体移出的任何常规技术实现分离，例如通过过滤或倾析。更进一步，分离过程任选包括常规的固体洗涤和干燥，如同实施例的描述。
在纯化过程的一个实施方案中，将反溶剂加入所述溶液中。本文使用的术语反溶剂是指扎来普隆在其中只有很小的溶解度并且在所述过程不会形成单独液相的任何液体。优选的反溶剂包括脂族烃和水，更优选戊烷、己烷、庚烷、辛烷、石油醚和水，最优选己烷和水。反溶剂与有机溶剂的比例优选为约1∶1至约4∶1，更优选约1∶1至约2∶1。
使用脂族烃反溶剂时，优选的有机溶剂为乙酸、甲醇、乙醇、2-丙醇、THF、乙腈、丙酮、乙酸乙酯、甲苯和二氯甲烷。反溶剂为水时，优选的有机溶剂为乙酸、甲醇、乙醇、2-丙醇、THF、乙腈和丙酮。
使用反溶剂时，优选在较低浓度范围操作。准备加入反溶剂时，扎来普隆在有机溶剂中的优选浓度为约100mM至约400mM。反溶剂优选在出现混浊或沉淀之前加入，更优选在高温时加入反溶剂。
反溶剂可以用于协助形成饱和或接近饱和溶液，而无需除去过量不溶固体。在有机溶剂中形成扎来普隆和位置异构体的不饱和溶液。将反溶剂加入溶液直到扎来普隆开始沉淀。然后升高温度和/或加入额外有机溶剂直到扎来普隆沉淀再次溶于溶液，通过扎来普隆从如此形成的溶液中析出继续纯化过程。
在特别优选的实施方案中，重复一次纯化过程可以减少粗制扎来普隆中位置异构体含量的50％或50％以上，甚至70％或70％以上。考虑到扎来普隆和位置异构体5的结构类似性，这样的减少量是相当有效的。重复一次纯化过程可以降低位置异构体的比例从占粗制扎来普隆的约0.2％至占富集扎来普隆固体的约0.03％，相当于除去84％的位置异构体。可以反复重复纯化过程从而进一步减少位置异构体的含量。
使用反溶剂能够增加扎来普隆回收量，而不会大大缩小分离度。如实施例所证实，使用反溶剂并结合使用代表性有机溶剂均匀增加扎来普隆回收量。
通过发明纯化过程，可以获得位置异构体含量少于0.033％的扎来普隆(根据本发明HPLC方法)。
因此，本发明另一个实施方案提供纯度至少约98.5％的扎来普隆，最优选至少约99％。本文使用的纯度百分数是指本文说述HPLC方法确定的面积纯度百分数。由此，纯度99％的扎来普隆(99％纯净扎来普隆)是指扎来普隆的HPLC峰面积与所有HPLC峰面积之和的比例乘以100为99。
发现所述提纯过程的某些实施方案产生扎来普隆的新晶型。纯化过程的逐步操作可以用于从纯净或不纯扎来普隆制备新的晶型。新的晶型也可以很容易通过任何其它技术根据经验获得。
新晶型与可获得的Sonate_扎来普隆的区别在于它们的X-射线衍射图的特征。本文中规定Sonate_扎来普隆为晶型I。扎来普隆晶型I在其X-射线衍射图(图4)中在10.5、14.5、16.8、17.3、18.0(强峰)、19.0、20.1、21.3、24.4、25.9、26.7、29.4、30.7±0.2度2θ有特征峰。
扎来普隆晶型II可以使用冰水作为反溶剂以及水混溶性或基本水溶性有机溶剂通过提纯过程的逐步操作制备。特别地，扎来普隆晶型II可以通过将扎来普隆溶于选自前述的基本水溶性或水混溶性有机溶剂制备。生产扎来普隆晶型II的优选有机溶剂为乙酸、甲醇、乙醇、2-丙醇、THF、乙腈和丙酮。扎来普隆晶型II可以在任何温度沉淀，但是该温度适合在室温或高温。为了最优化扎来普隆回收量，优选在高温使扎来普隆在有机溶剂中饱和。然后将冰水加入混合物。有机溶剂和冰水的比例可以为约1∶2至约1∶5(v/v)，优选为约1∶3(v/v)。尽管加入冰水将冷却混合物，但是如果需要优选进一步将有机溶剂/水混合物冷却至约5-10℃。在加入水以及冷却混合物时应该搅拌混合物。在优选条件下，晶型II的结晶在约1小时或更少时间内基本完成，于是可以分离，包括任选洗涤和干燥，获得扎来普隆晶型II。
扎来普隆晶型II通过粉末X-射线衍射图(图5)表征，所述衍射图在7.9(强峰)、10.7、12.5、14.9、16.9、17.9、21.3、24.0、25.2、25.9、27.0和27.5±0.2度2θ有特征峰。附图中显示的此PXRD图以及其它PXRD图是由以下仪器产生：X’TRA型Scintag X-射线粉末衍射计，配备铜阳极管和固态检测器。在玛瑙研钵中轻轻地充分研磨以减少优选取向，从而制备样品。注意到研磨制备的样品没有结晶度损失。将粉末样品倾入样品容器的圆形腔，用玻璃板压制成光滑表面。从2到40°2θ以3°min-1连续扫描。考虑报告的峰位置精确到±0.05°内。X-射线结晶学领域熟练技术人员能够理解不同仪器确定的峰位置可能变化达±1°。
扎来普隆晶型III可以通过如下制备：将扎来普隆溶于回流下的乙腈，将水加入回流下的溶液，所加水量相对乙腈为约2∶1(v/v)至约4∶1(v/v)、优选约3∶1(v/v)，然后在没有搅拌下冷却混合物至约5-10℃。
扎来普隆晶型III通过PXRD光谱表征，发现衍射图(图6)在15.4、18.1、19.0、21.1、26.8和27.5±0.2度2θ有特征峰。
扎来普隆晶型III可以进一步被在11.6、17.6、19.0、20.0和22.2±0.2度2θ有X-射线衍射峰表征。
规定为晶型IV的扎来普隆新晶型可以如下制备：在回流下的水和THF的1∶1(v/v)混合物中形成扎来普隆溶液，然后在没有搅拌下冷却溶液至室温。分离析出的固体获得扎来普隆晶型IV。晶型IV也可以如下制备：在回流下形成扎来普隆的2-丙醇溶液，在没有搅拌下冷却溶液至5-10℃，然后分离析出的固体。
扎来普隆晶型IV通过PXRD光谱表征，发现衍射图(图7)在8.1、14.5、17.3、21.3、24.3、25.0、25.9、26.7、27.9、29.5±0.2度2θ有特征峰。
扎来普隆晶型IV可以进一步被X-射线衍射图在10.6、11.1、14.1、15.6、18.0、18.2、20.1、20.3、24.3、25.0、25.9、26.7、27.9和29.5±0.2度2θ的峰表征。
扎来普隆的另一种新晶型V可以按照美国专利申请10/170,673的实施例制备，通过引用将该专利申请全部内容结合到本文中。
扎来普隆晶型V通过PXRD光谱表征，发现衍射图(图8)在8.0、14.8和17.0±0.2度2θ有特征峰。
扎来普隆晶型V可以进一步被在10.7、11.0、12.5、15.4、16.5、17.7、21.3、25.7和26.5±0.2度2θ有X-射线衍射峰表征。
本发明进一步提供制备已知扎来普隆晶型I的新方法。在一种制备扎来普隆晶型I的方法中，扎来普隆悬浮于水中并回流。然后将悬浮液冷却至室温。滤出晶体并干燥获得扎来普隆晶型I。
根据另一种制备扎来普隆晶型I的方法，扎来普隆在高沸点烃中成浆状。烃选自甲苯、二甲苯、四氢化萘等。合适的温度可以为约100℃至扎来普隆熔点。在高温处理后，然后冷却悬浮液液至室温。滤出晶体并干燥获得扎来普隆晶型I。
根据另一种制备扎来普隆晶型I的方法，熔化扎来普隆，将熔化的扎来普隆冷却至室温，研磨获得扎来普隆晶型I。
扎来普隆的新晶型II、III、IV和V可用于将扎来普隆给予患有失眠症的患者的胃肠道、粘液膜和循环系统。它们可以配制为类似Sonata_或其它剂型的药品。
本发明的药用组合物包含扎来普隆晶型II、III、IV和V，任选混合其它晶型或无定形扎来普隆和/或其它活性成分。除了活性成分外，本发明药用组合物还可以包含一种或多种赋形剂。各种赋形剂加入组合物中用于不同的目的。
稀释剂增加固体药用组和物的体积，并且可以使患者和护理者更容易使用包含所述组合物的药用剂型。用于固体组合物的稀释剂包括例如微晶纤维素(例如Avicel_)、微细纤维素、乳糖、淀粉、预胶化淀粉、碳酸钙、硫酸钙、糖、葡萄糖结合剂、糊精、葡萄糖、磷酸氢钙二水合物、三碱基磷酸钙、高岭土、碳酸镁、氧化镁、麦芽糖糊精、甘露糖醇、聚甲基丙烯酸酯(例如Eudragit_)、氯化钾、粉状纤维素、氯化钠、山梨糖醇和滑石粉。
压制成片剂样剂型的固体药用组合物可以包括这样的赋形剂，该赋形剂的功能包括在压缩后辅助活性成分与其它赋型剂粘合在一起。用于固体药用组合物的粘合剂包括阿拉伯胶、海藻酸、卡波姆(例如聚羧乙烯)、羧甲基纤维素钠、糊精、乙基纤维素、明胶、瓜尔胶、氢化植物油、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素(例如Klucel_)、羟丙基甲基纤维素(例如Methocel_)、液体葡萄糖、硅酸铝镁、麦芽糖糊精、甲基纤维素、聚甲基丙烯酸酯、聚维酮(例如Kollidon_、Plasdone_)、预胶化淀粉、藻酸钠和淀粉。
压制固体药用组合物在患者胃内的溶解速率可以通过在组合物中加入崩解剂而提高。崩解剂包括藻酸、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠(例如Ac-Di-Sol_，Primellose_)、胶体二氧化硅、交联羧甲纤维素钠、交聚维酮(例如Kollidon_，Polyplasdone_)、瓜尔胶、硅酸铝镁、甲基纤维素、微晶纤维素、聚克立林钾、粉状纤维素、预胶化淀粉、藻酸钠、淀粉羟乙酸钠(例如Explotab_)和淀粉。
助流剂可以增加非压制固体组合物的流动特性并且改善剂量的精确性。可以用作助流剂功能的赋形剂包括胶体二氧化硅、三硅酸镁、粉状纤维素、淀粉、滑石粉和三碱基磷酸钙。
当片剂等剂型通过压缩粉状组合物制备时，组合物受到冲压机和冲模的压力。某些赋形剂和活性成分可能粘附在冲压机和冲模表面，这将使得产品产生点蚀和其它表面不规则现象。可以在组合物中加入润滑剂减少粘附并且容易从冲模取出产品。润滑剂包括硬脂酸镁、硬脂酸钙、甘油单硬脂酸酯、甘油棕榈酸硬脂酸酯、氢化蓖麻油、氢化植物油、矿物油、聚乙二醇、苯甲酸钠、十二烷基硫酸钠、硬脂酰基延胡索酸钠、硬脂酸、滑石粉和硬脂酸锌。
调味剂和鲜味剂使得剂型对患者有更好的适口性。可包含在本发明组合物中的药品常用调味剂和鲜味剂包括麦芽酚、香草醛、乙基香草醛、薄荷柠檬酸、富马酸、乙基麦芽酚和酒石酸。
固体和液体组合物也可以用任何药学上可接受的着色剂染色以改善它们的外观和/或有利于患者识别产品或单位剂量水平。
在本发明液体药用组合物中，晶型II、III、IV和V与任何其它固体赋形剂溶于或悬浮于液体载体，例如水、植物油、乙醇、聚乙二醇、丙二醇或甘油。
液体药用组合物可以包含乳化剂以使不能溶于液体载体的活性成分或其它赋形剂均匀分散于整个组合物。可用于本发明液体组合物的乳化剂包括例如明胶、蛋黄、酪蛋白、胆固醇、阿拉伯胶、西黄蓍胶、角叉菜属、果胶、甲基纤维素、卡波姆、十六醇十八醇混合物和鲸蜡醇。
本发明液体药用组合物还可以包含粘性增强剂以改善产品的口感和/或保护胃肠道上皮。这样的试剂包括阿拉伯胶、藻酸膨润土、卡波姆、羧甲基纤维素钙或钠、十六醇十八醇混合物、甲基纤维素、乙基纤维素、明胶瓜尔胶、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、麦芽糖糊精、聚乙烯醇、聚维酮、碳酸丙二酯、藻酸丙二酯、藻酸钠、淀粉羟乙酸钠、淀粉西黄蓍胶和黄原胶。
可以加入甜味剂改善味道，例如山梨糖醇、糖精、糖精钠、蔗糖、阿司帕坦、果糖、甘露糖醇和转化糖。
可以加入摄入安全量的防腐剂和螫合剂以改善贮藏稳定性，例如乙醇、苯甲酸钠、丁化羟基甲苯、叔丁对甲氧酚和乙二胺四乙酸。
本发明的液体组合物还可包含缓冲剂例如葡糖酸、乳酸、柠檬酸或乙酸、葡糖酸钠、乳酸钠、柠檬酸钠或醋酸钠。
配制技术人员很容易基于其经验以及考虑本领域的标准方法和参考文献确定赋形剂的选择和用量。
本发明固体组合物包括粉末状、颗粒状、聚集和压缩的组合物。剂型包括适合以下给药方式的剂型：口服、含服、直肠、胃肠外(包括皮下、肌内和静脉内)、吸入和眼部用药。尽管在任何给定情况中最合适的途径取决于所治疗疾病的性质和严重程度，但是本发明的最优选途径是口服。剂型适合为单位剂型，通过药学领域众所周知的任何方法制备。
剂型包括固体剂型如片剂、散剂、胶囊剂、栓剂、小药囊、糖锭和锭剂以及液体糖浆剂、混悬剂和酏剂。
活性成分和赋形剂可以根据本领域已知方法配制成组合物和剂型。
胶囊剂、片剂和锭剂和其它固体单位剂型优选包含剂量为约5至约20mg、更优选约5mg至约10mg扎来普隆。
在另一个实施方案中，本发明提供新的梯度洗脱HPLC方法，用于确定扎来普隆杂质特征，也就是通过面积百分数定量扎来普隆样品中杂质含量。在此实施方案中，适合使扎来普隆(1)峰与结构非常类似的化合物(5)的峰以及其它杂质完全拆分(分离)，本发明提供一种HPLC方法，该方法包括以下步骤：
a.将扎来普隆样品溶于乙腈∶水(1∶1)稀释剂，
b.注射样品溶液(约10μl)到250mm×4.6mm，5μl RP-18 HPLC柱，
c.用乙腈(A)和甲酸铵缓冲液(B，0.005M，pH＝4)的混合物以1ml/min根据下表梯度洗脱：
            HPLC梯度
 时间(min)   洗脱剂A(％)洗脱剂B(％)
 0   20         80
 11   32         68
 17   40         60
 30   40         60
 31   20         80
 35   20         80
d.在245nm波长用UV检测器以及合适的记录仪检测各种杂质的含量。
在以上方法中，扎来普隆的保留时间为约17min。使用此方法的典型HPLC色谱图见图9。
在另一个实施方案中，其适合检测包含扎来普隆的药物和药用组合物中的扎来普隆及其主要杂质5，本发明提供一种无梯度HPLC检测方法，该方法包括以下步骤：
a.将扎来普隆样品溶于乙腈∶水(1∶1)稀释剂，
b.注射样品溶液(约10μl)到100mm×4mm，3μl RP-18，HPLC柱，
c.用乙腈(28Vol-％)和甲酸铵缓冲液(72vol-％，0.005M，pH＝4)的混合物作为洗脱剂以1ml/min从以上柱洗脱样品，
d.在245nm波长用UV检测器以及合适的记录仪检测扎来普隆含量。
在此方法中，扎来普隆的保留时间为约5min。
碳13NMR谱和质子NMR谱用Brucker Model DRX分光计分别在125MHz和500MHz获得。检测温度为27℃。
低分辨率EI质谱用VG-7035质谱仪(VG Analytical，Manchester，England)获得。离子化能量为70eV，离子电流为200μA。源温度为150°。理论MW＝305.127；m/Z实测值＝305.128。
上文描述了本发明的不同方面，以下非限制性实施例提供示例性的具体实施方案。
                         实施例
总则
原样使用Precise Chemipharma PVT.Ltd.的乙基乙酰胺3。原样使用Precise Chemipharma PVT.Ltd.的氨基-4-氰基吡唑4。原样使用Aldrich Chemical Co.的磷酸(85％)。原样使用各种有机溶剂和反溶剂。
粗制扎来普隆(即初始混合物)和析出产物中的扎来普隆和位置异构体5在254nm用UV检测器通过HPLC定量，在所述波长扎来普隆及其位置异构体5的响应因子相同。
                         制备1
            制备扎来普隆和位置异构体5的混合物
将乙基乙酰胺3(260g，1mol)和3-氨基-4-氰基吡唑4(108g，1mol)溶于水(7L)和乙醇(4L)的混合物。加入85％磷酸水溶液(67ml，1mol)，将混合物在室温下搅拌8h。然后将反应混合物冷却至5℃，收集形成的结晶产物，用水洗涤，在60℃干燥获得扎来普隆(275g，90.2％)，它的纯度为99.36(HPLC)，包含0.21％位置异构体5。
                       实施例1-8
                  通过沉淀纯化扎来普隆
将制备1的扎来普隆和位置异构体5的混合物(4g)溶于回流下的有机溶剂。在扎来普隆完全溶解后，让溶液冷却至室温，然后进一步冷却至6℃，在该温度保持1天。过滤回收所得结晶固体，用冷的新有机溶剂(晶体从中析出的溶剂)洗涤，然后在60℃真空干燥。表1中记录了用不同有机溶剂实现的分离。
                           表3
  Ex.   溶剂 溶剂体积(ml) 产率(％)       析出产物的成分(HPLC面积％) 除去的位置异构体5(g)
  扎来普隆 位置异构体 5
  12345678   甲醇乙醇2-丙醇乙腈丙酮THF乙酸乙酯甲苯   4040402020206035   81.388.386.355.852.054.871.587.5   99.79099.70699.66199.88199.87199.83399.80299.552 0.0770.1220.1080.0330.0420.0850.0790.13   6342498480606238
                        实施例9-21
                    用反溶剂析出扎来普隆
将制备1的扎来普隆和位置异构体5的混合物(4g)溶于回流下的有机溶剂。在扎来普隆完全溶解后，将反溶剂缓慢加入回流下的溶液。在加入结束后，将混合物冷却至5℃。过滤回收所得结晶固体，用冷的新有机溶剂(晶体从中析出的溶剂)洗涤，然后在60℃真空干燥。表2中记录了用不同有机溶剂和反溶剂的组合实现的分离。
                                              表4
Ex. 溶剂 溶剂体积(ml)   反溶剂   反溶剂体积(ml)   产率(％)      析出产物的成分(HPLC面积％)   除去的位置异构体 5(％)
  扎来普隆 位置异构体 5
  9101112131415161718192021   乙基乙醇乙腈丙酮THF2-丙醇乙酸甲醇乙醇乙腈2-丙醇丙酮THF   60502020204020404020402020   己烷己烷己烷己烷己烷己烷水水水水水水水   120804040408040808040804040   94.387.562.591.891.591.583.895.893.590.087.889.883.0   99.53399.73799.67299.66899.50399.64599.71999.70299.69099.75299.74799.68399.731 0.1380.1110.0910.0940.1520.1360.0540.0800.0840.0400.0560.0800.051   34475755283574626081736276
                       实施例22
                   制备扎来普隆晶型I
在搅拌下使扎来普隆(10g)溶于回流乙醇(100ml)。将己烷(200ml)滴加到回流溶液。然后在搅拌下约4h内将混合物冷却至5℃。过滤收集沉淀获得扎来普隆晶型I(8.9g，89％)。
                       实施例23
                   制备扎来普隆晶型II
在50℃搅拌使扎来普隆(10g)溶于乙酸(50ml)。将所得溶液倾入冰-水(150ml)立即引起沉淀。过滤收集沉淀获得扎来普隆晶型II(8.5g，85％)。
                       实施例24
                   制备扎来普隆晶型III
在搅拌下使扎来普隆(10g)溶于回流乙腈(50ml)。将水(150ml)滴加到以上回流溶液。然后在没有搅拌下将澄清溶液冷却至5℃。过滤收集沉淀获得扎来普隆晶型III(9.1g，91％)。
                       实施例25
                   制备扎来普隆晶型IV
在搅拌下使扎来普隆(10g)溶于回流2-丙醇(150ml)。在没有搅拌下将澄清溶液冷却至5℃。过滤收集沉淀获得扎来普隆晶型IV(8.6g，86％)。
                       实施例26 
                   制备扎来普隆晶型I
将扎来普隆(26.8g)溶于回流温度的乙醇和水(210和210cm3)的混合物，然后用木炭(2.7g，10m/m％)处理。将溶液在回流温度搅拌30min，然后过滤。木炭用乙醇和水(30∶30cm3)的热混合物洗涤。将溶液在6小时内冷却至25℃，并在此温度保持2h。滤出晶体，用乙醇和水(20∶20cm3)的混合物洗涤，在60℃真空干燥8h获得扎来普隆晶型I(22.8g，85％)
                     实施例27
                 制备扎来普隆晶型I
将扎来普隆(22.8g)溶于回流温度的乙醇(230cm3)，然后用木炭(2.3g，10m/m％)处理。搅拌溶液10min，然后过滤。木炭用热乙醇(20cm3)洗涤。将溶液在6小时内冷却至25℃，并在此温度保持2h。滤出晶体，用乙醇(30cm3)洗涤。在60℃真空干燥产物8h获得获得扎来普隆晶型I(18.7g，82％)。
                     实施例28
制备N-[3-(3-氰基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基)苯基]-N-乙基-乙酰胺
将N-[3-[3-(二甲基氨基)-1-氧代-2-丙烯基]苯基]-N-乙基乙酰胺(5.2g，0.02mol)和3-氨基-4-氰基吡唑(2.16g，0.02mol)溶于水(50ml)和浓盐酸(40ml)的混合物，在室温下搅拌混合物8h。然后将反应混合物冷却至5℃，过滤移出沉淀。滤液用浓氨水溶液中和至析出380mg扎来普隆及其位置异构体5的混合物，过滤收集沉淀。滤液用100ml乙酸乙酯萃取，在蒸发后获得100mg上述两种化合物的混合物。合并两次的产物放入硅胶柱(100g)，洗脱采用氯仿和丙酮3∶1(v/v)的溶剂混合物获得5的第二批产物240mg(4％)；mp 194-196℃；1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.143(t，3H)，1.876(s，3H)，3.804(q，2H)，7.361(d，1H)，7.532(d，1H)，7.613(t，1H)，8.018(s，1H)，8.159(d，1H)，8.375(s，1H)，8.805(d，1H)；13C-NMR(CDCl3)δ(ppm)12.89，22.68，43.84，83.17，107.71，112.84，127.17，127.48，130.62，131.63，136.67，137.46，144.10，148.31，149.99，158.60，169.90；MS(EI，70EV)m/z(％)305(M+，18)，248(59)。
                      实施例29
         基本没有扎来普隆位置异构体的纯净扎来普隆
将制备1的粗制扎来普隆(4g)溶于回流乙腈(20mL)。在扎来普隆完全溶解后，让溶液冷却至约20℃-25℃。然后将所得混合物冷却至约6℃，并在此温度保持约24h。过滤回收富集扎来普隆的固体沉淀，用新的冷乙腈洗涤。
将回收的富集扎来普隆的固体沉淀(约2.3g)溶于回流乙腈(约10mL)。让溶液冷却至约20℃-25℃。然后将所得混合物冷却至约6℃，并在此温度保持约24h。过滤回收沉淀，用新的冷乙腈洗涤，然后在60℃真空干燥。
进一步纯化的扎来普隆的回收沉淀物通过本发明梯度HPLC法分析，发现纯度＞99％。用本发明梯度HPLC法没有检测到位置异构体。所得扎来普隆基本没有位置异构体。

Claims (62)

1.一种纯化扎来普隆的方法，该方法包括以下步骤：
(a)在至少一种有机溶剂或至少一种有机溶剂和水的混合物中形成包含扎来普隆的固体的溶液，
(b)沉淀出相对用于形成所述溶液的所述含扎来普隆固体而富集扎来普隆的固体，
(c)分离出富集扎来普隆的固体沉淀。
2.权利要求1的方法，其中用于形成所述溶液的包含扎来普隆的固体进一步包含位置异构体。
3.权利要求1的方法，其中所述有机溶剂选自以下物质：醇、酮、醚、羧酸、羧酸酯、腈、芳香烃、卤化烃以及它们的任何混合物。
4.权利要求3的方法，其中所述有机溶剂选自以下化合物：甲醇、乙醇、2-丙醇、丙酮、甲基乙基酮、甲基异丁基酮、四氢呋喃、乙醚、甲基叔丁基醚、乙酸、丙酸、乙酸乙酯、乙酸异丁酯、乙腈、丙烯腈、苯、甲苯、二甲苯、二氯甲烷、氯仿以及它们的任何混合物。
5.权利要求4的方法，其中所述有机溶剂选自以下化合物：乙酸、甲醇、乙醇、2-丙醇、四氢呋喃、乙腈、丙酮、乙酸乙酯、甲苯和二氯甲烷。
6.权利要求1的方法，其中所形成的溶液的浓度为约100mM至约1M。
7.权利要求1的方法，其中所述溶液在高温下形成。
8.权利要求7的方法，其中通过冷却高温溶液引起沉淀形成。
9.权利要求8的方法，其中所述冷却一直冷却到低温。
10.权利要求9的方法，其中所述有机溶剂为2-丙醇，分离的沉淀为扎来普隆晶型IV。
11.权利要求8的方法，其中将反溶剂加入所述高温溶液。
12.权利要求11的方法，其中所述反溶剂为脂族烃。
13.权利要求12的方法，其中所述脂族烃为己烷，所述有机溶剂为乙醇。
14.权利要求11的方法，其中所述有机溶剂选自以下化合物：乙酸、甲醇、乙醇、2-丙醇、四氢呋喃、乙腈、丙酮、乙酸乙酯、甲苯和二氯甲烷。
15.权利要求12的方法，其中所述脂族烃为己烷。
16.权利要求15的方法，其中所述有机溶剂为乙醇，分离出的沉淀为扎来普隆晶型I。
17.权利要求11的方法，其中所述反溶剂为水。
18.权利要求17的方法，其中所述有机溶剂选自以下化合物：乙酸、甲醇、乙醇、2-丙醇、四氢呋喃、乙腈和丙酮。
19.权利要求18的方法，其中所述有机溶剂为乙腈。
20.权利要求19的方法，其中所述反溶剂加入量为有机溶剂体积的约1倍至约3倍。
21.权利要求1的方法，其中富集扎来普隆的固体沉淀中扎来普隆位置异构体的含量相对于用于制备所述溶液的包含扎来普隆的固体减少至少约50％。
22.权利要求21的方法，其中富集扎来普隆的固体沉淀中扎来普隆位置异构体的含量相对于用于制备所述溶液的包含扎来普隆的固体减少至少约70％。
23.权利要求1的方法，该方法进一步包括重复进行步骤(a)、(b)和(c)。
24.权利要求1的方法，该方法进一步包括重复进行步骤(a)、(b)和(c)至少一次，其中所述有机溶剂为乙醇。
25.一种纯化扎来普隆的方法，该方法包括以下步骤：
(a)形成包含扎来普隆的固体的乙醇溶液，
(b)用反溶剂水沉淀出相对用于形成溶液的所述含扎来普隆固体而富集扎来普隆的固体，
(c)分离出富集扎来普隆的固体沉淀。
(d)形成步骤(c)中富集扎来普隆的固体沉淀的乙醇溶液，
(e)在没有加入反溶剂下，从步骤(d)的溶液中沉淀出相对于步骤(c)中富集扎来普隆的固体的进一步富集扎来普隆的固体，
(f)分离出步骤(e)中进一步富集扎来普隆的固体。
26.扎来普隆晶型II，其特征在于粉末X-射线衍射图在7.9、10.7、12.5、14.9、16.9、17.9、21.3、24.0、25.2、25.9、27.0和27.5±0.2度2θ有衍射峰。
27.权利要求26的制备扎来普隆的方法，该方法包括：
(a)在水混溶性或很大水溶性的有机溶剂中形成扎来普隆溶液，
(b)使以上溶液与水接触引起扎来普隆结晶，
(c)从所述有机溶剂和水中分离出扎来普隆晶型II。
28.一种药用组合物，该组合物包含权利要求26的扎来普隆。
29.权利要求27的方法，其中所述扎来普隆溶液与所接触的水的体积比为约1∶3。
30.权利要求29的方法，其中所述扎来普隆溶液所接触的水的温度为约0℃。
31.一种治疗失眠症的方法，该方法为给予权利要求28的药用组合物。
32.扎来普隆晶型III，其特征在于粉末X-射线衍射图在15.4、18.1、21.1、26.8和27.5±0.2度2θ有衍射峰。
33.权利要求32的扎来普隆晶型III，其进一步特征为在11.6、17.6、19.0、20.0和22.2度2θ有X-射线衍射峰。
34.一种制备权利要求32的扎来普隆的方法，该方法包括以下步骤：
(a)形成扎来普隆的乙腈溶液，
(b)将水加入高温下的所述溶液，
(c)通过冷却从所述溶液沉淀出扎来普隆，
(d)从乙腈和水中分离出扎来普隆晶型III。
35.一种药用组合物，该组合物包含权利要求32的扎来普隆。
36.一种治疗失眠症的方法，该方法为给予权利要求35的药用组合物。
37.扎来普隆晶型IV，其特征在于粉末X-射线衍射图在8.1、14.5、17.3、21.3±0.2度2θ有衍射峰。
38.权利要求37的扎来普隆晶型IV，其进一步的特征为在10.6、11.1、14.1、15.6、18.0、18.2、20.1、20.3、24.3、25.0、25.9、26.7、27.9和29.5±0.2度2θ有X-射线衍射峰。
39.一种制备权利要求37的扎来普隆的方法，该方法包括以下步骤：
(a)在选自2-丙醇以及四氢呋喃与水的混合物的溶剂体系中形成扎来普隆溶液，
(b)从所述溶液中沉淀出扎来普隆，
(c)从所述溶剂体系分离出扎来普隆晶型IV。
40.一种药用组合物，该组合物包含权利要求37的扎来普隆。
41.一种治疗失眠症的方法，该方法为给予权利要求40的药用组合物。
42.扎来普隆晶型V，其特征在于粉末X-射线衍射图在8.0、14.8、17.0±0.2度2θ有衍射峰。
43.权利要求42的扎来普隆晶型V，其进一步的特征为在10.7、11.0、12.5、15.4、16.5、17.7、18.2、21.3、25.7、26.5±0.2度2θ有X-射线衍射峰。
44.一种药用组合物，该组合物包含权利要求43的扎来普隆。
45.一种治疗失眠症的方法，该方法为给予权利要求44的药用组合物。
46一种制备扎来普隆晶型I的方法，该方法包括以下步骤：
(a)在高温液体中形成扎来普隆的悬浮液，
(b)冷却悬浮液，
(c)从所述液体中分离出扎来普隆晶型I。
47.权利要求46的制备扎来普隆晶型I的方法，其中所述液体为沸水。
48.权利要求46的制备扎来普隆晶型I的方法，其中所述液体为高沸点烃。
49.一种制备扎来普隆晶型I的方法，该方法包括以下步骤：
(a)熔化扎来普隆，
(b)通过冷却固化扎来普隆，
(c)研磨固化的扎来普隆获得扎来普隆晶型I。
50.一种制备扎来普隆晶型I的方法，该方法包括以下步骤：
(a)加热使扎来普隆溶于有机溶剂，
(b)通过冷却引起扎来普隆沉淀，
(c)分离扎来普隆晶型I。
51.一种制备扎来普隆晶型I的方法，该方法包括以下步骤：
(a)加热使扎来普隆溶于有机溶剂，
(b)在溶液中加入非极性有机反溶剂，
(c)通过冷却引起扎来普隆沉淀，
(d)分离扎来普隆晶型I。
52.一种制备扎来普隆晶型I的方法，该方法包括以下步骤：
(a)将扎来普隆溶于水混溶性有机溶剂，
(b)在此溶液中加入水，但仍然为澄清溶液，
(c)通过缓慢冷却引起扎来普隆沉淀，
(d)分离扎来普隆晶型I。
53.纯度至少约98.5％的纯净扎来普隆。
54.权利要求53的纯净扎来普隆，其中纯度用3μm PR-18柱以及含乙腈和甲酸铵缓冲液的洗脱剂通过HPLC检测。
55.纯度至少约99％的纯净扎来普隆。
56.权利要求55的纯净扎来普隆，其中纯度用3μm PR-18柱以及含乙腈和甲酸铵缓冲液的洗脱剂通过HPLC检测。
57.权利要求56的纯净扎来普隆，其基本不含位置异构体。
58.N-[3-(3-氰基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基)苯基]-N-乙基乙酰胺。
59.一种制备N-[3-(3-氰基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基)苯基]-N-乙基乙酰胺的方法，该方法包括以下步骤：
a.在水与至少一种没有羧酸基团的水混溶性有机化合物的液体反应介质中，使N-[3-[3-(二甲基氨基)-1-氧代-2-丙烯基]苯基]-N-乙基乙酰胺、3-氨基-4氰基吡唑和强酸的混合物反应，
b.中和反应混合物，从而沉淀出粗制产物，
c.用氯仿和丙酮的混合物作为洗脱剂通过硅胶柱色谱法将N-[3-(3-氰基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基)苯基]-N-乙基乙酰胺与粗制产物的其它组分分离，
其中强酸摩尔量为N-[3-[3-(二甲基氨基)-1-氧代-2-丙烯基]苯基]-N-乙基乙酰胺摩尔量或3-氨基-4-氰基吡唑摩尔量的至少10倍，其中后两者中任意一个过量，或者如果后两者大约等摩尔量则强酸摩尔量为任何一个摩尔量的至少10倍。
60.权利要求59的方法，其中强酸摩尔量为N-[3-[3-(二甲基氨基)-1-氧代-2-丙烯基]苯基]-N-乙基乙酰胺摩尔量或3-氨基-4-氰基吡唑摩尔量的至少20倍，后两者无论哪一种过量；或者，如果后两者使用量为大约等摩尔量，则强酸摩尔量为任何一种的摩尔量的至少20倍。
61.一种检测扎来普隆的HPLC方法，该方法包括以下步骤：
a.将扎来普隆样品溶于乙腈∶水(1∶1)稀释剂，
b.注射样品溶液(约10μl)到100mm×4mm，3μm RP-18HPLC柱，
c.使用乙腈(28vol-％)和甲酸铵缓冲液(72vol-％，0.005M，pH＝4)的混合物作为洗脱剂以1ml/min从以上柱洗脱样品，
d.在245nm波长用UV检测器检测相关样品的扎来普隆含量。
62.一种定量扎来普隆中杂质含量的HPLC方法，该方法包括以下步骤：
a.将扎来普隆样品溶于乙腈∶水(1∶1)稀释剂，
b.注射样品溶液(约10μl)到250mm×4.6mm，5μm RP-18HPLC柱，
c.用乙腈(A)和甲酸铵缓冲液(B，0.005M，pH＝4)的混合物以1ml/min根据下表梯度洗脱样品：
              HPLC梯度   时间(min)  洗脱剂A(％)  洗脱剂B(％)   0  20  80   11  32  68   17  40  60   30  40  60   31  20  80   35  20  80
d.在245nm波长用UV检测器以及合适的记录仪检测各种杂质的含量。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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