CN1778944A - 肌酐含量测定方法及肌酐诊断试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种测定肌酐含量的方法,同时本发明还涉及肌酐诊断试剂盒,属于医学检验测定技术领域。该试剂盒包括缓冲液、肌酐酶、肌酸酶、肌氨酸氧化酶、过氧化物酶、稳定剂,通过将样品与试剂按一定的体积比混合,使之发生酶偶联反应,再将最终反应物置于生化分析仪下,检测主波长吸光度变化的情况(速度),从而测算出肌酐的含量大小。采用本发明完全可以通过生化分析仪器得出所需的测定结果,并且灵敏度高、精确度好,不受内外源物质的污染,便于推广应用。
Description
技术领域
本发明涉及一种测定肌酐含量的方法,同时本发明还涉及用于实现该方法的肌酐诊断试剂盒,属于医学检验测定技术领域。
背景技术
测定肌酐主要有化学测定法(Jaffe法)、酶法、高效液相层析法和毛细管电泳法等。
化学测定法——成本低廉,操作简便,是目前国内测定肌酐最常用的方法之一。标本中的肌酐与苦味酸盐作用生成黄红色的苦味酸肌酐复合物。此法的缺点是特异性不高,因为维生素C、丙酮、乙酰乙酸、甲基多巴以及高浓度葡萄糖、蛋白质和一些抗生素如青霉素G、头孢西丁、头孢唑啉等也能与碱性苦味酸反应生成红色。
高效液相层析法(HPLC)——肌酐在弱酸性环境中带正电荷,通过阳离子交换层析柱可与其他成分很好分离,在234nm测定其光吸收。此法分析的精密度高、特异性好,但本法不适于大批量临床标本分析,通常仅作为肌酐测定的参考方法,用于评价市售肌酐测定的试剂盒和某些科研目的。
毛细管电泳法——血清标本用高速离心作预处理,尿液标本可用低速离心,除去有形成分,上清液用胶束动电毛细管电泳分离后测定235nm处吸光度。本法测定线性范围宽,操作较为简便,但需用特殊设备和进行血清标本的预处理,临床常规使用困难。
酶学测定法——主要有肌酐脱亚胺酶(Creatinine deiminase)和肌酐酶(Creatininase)两大类。检索发现,申请号为02139298.6、申请日为2002.11.15的专利申请公开了应用酶反应产物氧化型烟酰胺辅酶配制的测定试剂。该发明所指的酶法测定试剂并不加入测定反应所需的还原型烟酰胺辅酶或其类似物,而加入其反应产物氧化型烟酰胺辅酶或其类似物及其相应的生成还原型辅酶所需的酶和底物系统,通过在试剂内形成酶-底物-NAD或酶-底物-NADP等慢反应系统,将这类氧化型辅酶或其类似物缓慢循环还原为还原型烟酰胺辅酶或其类似物。当被还原的还原型烟酰胺辅酶或其类似物达到一定的浓度时,该发明所指的酶法试剂就可达到测定样本中丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、尿素、氨、肌酐和二氧化碳等的目的。该发明的特点在于为丙氨酸氨基转移酶试剂、天门冬氨酸氨基转移酶试剂、尿素养试剂、氨试剂、肌酐试剂和二氧化碳试剂等的测试提供一个内源合成丙氨酸氨基转移酶试剂、天门冬氨酸氨基转移酶试剂、尿素养试剂、氨试剂、肌酐试剂和二氧化碳试剂等反应所需要的底物—还原型烟酰胺辅酶。其缺点之一为,这个系统在生成反应所需要的还原型烟酰氨辅酶的同时,也抵消了部分丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、尿素、氨、肌酐和二氧化碳等的活性,造成试剂测试的准确性大大降低。其缺点之二是,该试剂在正式测试前必须事先反应一段时间,以便能够产生足够的还原型烟酰氨辅酶,这样一来就造成了缓不济急的结果,给测试带来很大的不便。
发明内容
本发明要解决的技术问题是:提出一种可以克服以上现有技术缺点的肌酐含量的测定方法,同时给出实现该方法的肌酐诊断试剂盒,采用该试剂盒中的试剂不仅可以在紫外/可见光分析仪或者半、全自动生化分析仪上进行肌酐含量测定,而且测定速度快、准确度高,因而可以得到切实的推广应用。
本发明测定肌酐含量的方法步骤如下:
1)、将样品与主要由肌酐酶、肌酸酶、肌氨酸氧化酶、过氧化物酶、还原型色原体组合组成的试剂混合,使之发生如下原理的反应:
肌酐+水
肌酐酶 肌酸
肌酸+水
肌酸酶 肌氨酸+尿素
肌氨酸+氧+水
肌氨酸氧化酶 过氧化氢+甲醛
+甘氨酸
过氧化氢+还原型色原体组合
过氧化物酶 吲嗒胺色原
或醌亚胺色原+水
2)、检测最终反应物在主波长400-600nm吸光度上升的速度,测算出肌酐含量的大小。
通常步骤2)将最终反应物置于紫外/可见光分析仪或者半、全自动生化分析仪器下,检测主波长400--600nm吸光度上升的速度,测算出肌酐含量的大小。
以上样品与试剂的混合比例按体积为1/10到1/250,以上过程的测定温度控制在常规的20℃到50℃范围,反应时间控制在常规的2-30分钟。
本发明应用肌酐酶偶联肌酸酶、肌氨酸氧化酶、过氧化物酶反应连续监测法或比色法。肌酐酶将肌酐变成肌酸,再通过偶联肌酸酶、肌氨酸氧化酶、过氧化物酶等酶偶联反应以及还原型色原体(Chromogen)组合系统,将无色的还原型色原体组合氧化成有颜色的醌亚胺色原(Quioneimine)或者吲嗒胺色原(Indamine)染料,因此测量染料含量的高低(不同染料吸收波长不同,介于400--600nm之间)可以直接反映肌酐含量的大小。这个酶偶联反应系统的优点有:(1)它利用将无色的还原型色原体组合氧化成有颜色的醌亚胺色原或者吲嗒胺色原染料来反映肌酐含量,有精确度好的优点。(2)这个酶偶联反应系统组成的反应成分都是外加的,不受内、外源物质的污染,测试结果精确。
用于实现本发明方法的肌酐诊断试剂盒可以是单剂,包括:
缓冲液 40--200mmol/l
肌酐酶 1000--50000U/l
肌酸酶 1000--50000U/l
肌氨酸氧化酶 1000--20000U/l
过氧化物酶 500--50000U/l
稳定剂 10--80%(总体积)
还原型色原体组合 0.1--20mmol/l
以上还原型色原体组合可以是0.1-20mmol/l的3-甲基-2-苯噻唑酮腙(3-methyl-2-benzothiazolinone-hydrszone简称MBTH)或0.1-20mmol/l的4-氨基抗砒(4-aminoantipyrine)与0.1--20mmol/l以下十四种成分之一组合而成:
石碳酸(phenol)
N-乙基-N-(3-硫丙基)-m-噻啶胺(N-ethyl-N-(3-sulfopropyl)
-m-anisidine简称ESPAS)
N,N-双乙基-m-甲苯胺(N,N-Diethyl-m-toluidine)
2,4-双氯石碳酸(2,4-Dichloriphenol)
2,4,6-仨溴-3-羟基-苯磺酸(2,4,6-Tribromo-3-hydroxy-
benzenesulfonic acid简称TBHB)
3,5-双氯石碳酸磺酸(3,5-Dichlorophenolsulfonic acid)
3,5-双氯-2-羟基-苯磺酸(3,5-Dichloro-2-hydroxy-benzenesulfonic
acid简称DHBS)
N-乙基-N-(2-羟基-3-硫丙基)-m-甲苯胺钠盐(N-ethyl-N-
(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-m-toluidine sodium简称TOOS)
仨溴羟基苯甲酸(Tribromohydroxybenzoic acid)
双甲基苯胺(Dimethylaniline简称DMA)
N-乙基-N-(2-羟基-3-硫丙基)-m-甲苯胺(N-Ethyl-N-(2-hydroxy-
3-sulfopropyl)-m-toluidine简称EHSPT)
2,2′-AZINO-双(3-乙基苯噻唑-6-磺酸)(2,2′-azino-bis(3-
ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid)简称ABTS
4-羟基-3-甲氧基苯甲酸(Vanillic acid(4-hydroxy-3-
methoxybenzoic acid)简称HMB)
3-甲基-乙基-羟基苯胺(3-methyl-ethyl-hydroxyaniline简称
MEHA)
也可以将以上单剂配成如下双剂,更有利于消除内、外源肌酸污染:
试剂I
缓冲液 40--200mmol/l
肌酸酶 1000--50000U/l
肌氨酸氧化酶 1000--20000U/l
过氧化物酶 500--50000U/l
稳定剂 10--80%(总体积)
还原型色原体组合(一) 0.1--20mmol/l
还原型色原体组合(一)可以是0.1-20mmol/l的3-甲基-2-苯噻唑酮腙或0.1-20mmol/l的4-氨基抗砒二者中之一。
试剂II
缓冲液 40--200mmol/l
肌酐酶 1000--50000U/l
稳定剂 10--80%(总体积)
还原型色原体组合(二) 0.1--20mmol/l
还原型色原体组合(二)可以是0.1--20mmol/l以下十四种成分之一:石碳酸、N-乙基-N-(3-硫丙基)-m-噻啶胺、N,N-双乙基-m-甲苯胺、2,4-双氯石碳酸、2,4,6-仨溴-3-羟基-苯磺酸、3,5-双氯石碳酸磺酸、3,5-双氯-2-羟基-苯磺酸、N-乙基-N-(2-羟基-3-硫丙基)-m-甲苯胺钠盐、仨溴羟基苯甲酸、双甲基苯胺、N-乙基-N-(2-羟基-3-硫丙基)-m-甲苯胺、2,2′-AZINO-双(3-乙基苯噻唑-6-磺酸)、4-羟基-3-甲氧基苯甲酸、3-甲基-乙基-羟基苯胺。
双剂的配方不仅限于上述配方,还原型色原体组合(一)及(二)可以互换位置。其中的试剂I的成分,肌酸酶、肌氨酸氧化酶、过氧化物酶等可以放在试剂II,试剂II其中的成分,肌酐酶等也可以放在试剂I,如此可以形成多种配方,不在此一一详述。
还可以将试剂配成如下三试剂,不但更有利于消除内、外源肌酸污染,还更有利于试剂的稳定:
试剂I
缓冲液 40--200mmol/l
稳定剂 10--80%(总体积)
还原型色原体组合(一) 0.1--20mmol/l
还原型色原体组合(一)可以是0.1-20mmol/l的3-甲基-2-苯噻唑酮腙或0.1-20mmol/l的4-氨基抗砒二者中之一。
试剂II
缓冲液 40--200mmol/l
肌酸酶 1000--50000U/l
肌氨酸氧化酶 1000--20000U/l
过氧化物酶 500--50000U/l
稳定剂 10--80%(总体积)
试剂III
缓冲液 40--200mmol/l
肌酐酶 1000--50000U/l
稳定剂 10--80%(总体积)
还原型色原体组合(二) 0.1--20mmol/l
还原型色原体组合(二)可以是0.1--20mmol/l以下十四种成分之一:石碳酸、N-乙基-N-(3-硫丙基)-m-噻啶胺、N,N-双乙基-m-甲苯胺、2,4-双氯石碳酸、2,4,6-仨溴-3-羟基-苯磺酸、3,5-双氯石碳酸磺酸、3,5-双氯-2-羟基-苯磺酸、N-乙基-N-(2-羟基-3-硫丙基)-m-甲苯胺钠盐、仨溴羟基苯甲酸、双甲基苯胺、N-乙基-N-(2-羟基-3-硫丙基)-m-甲苯胺、2,2′-AZINO-双(3-乙基苯噻唑-6-磺酸)、4-羟基-3-甲氧基苯甲酸、3-甲基-乙基-羟基苯胺。
三剂的配方不仅限于上述配方,还原型色原体组合(一)及(二)可以分开放在试剂I、II或III的任何位置。试剂II的成分,肌酸酶、肌氨酸氧化酶、过氧化物酶等可以放在试剂I或试剂III中。试剂III其中的成分,肌酐酶也可以放在试剂I或试剂II中,如此可以形成多种配方,就不在此一一详述。
缓冲剂的pH范围可以是6.0~11.0。缓冲剂可以是三(羧甲基)氨基甲烷-盐酸(Tris-HCl)缓冲液磷酸盐(Phosphate)缓冲液、三乙醇胺(Triethanolamine)缓冲液、2-氨基-2-甲基-1-丙醇(2-Amino-2-methyl-l-propanol)缓冲液、咪唑(Imidazole)缓冲液或双甘氨肽(Glycylglycine)缓冲液等,但不仅限于这些缓冲液(例如还可以是咪唑/盐酸缓冲液6.2-7.8;磷酸氢二钠 柠檬酸缓冲液5.0-8.0;柠檬酸 柠檬酸钠缓冲液5.0-6.6;磷酸盐缓冲液6.0-8.0;磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液6.0-8.0;磷酸二氢钾 氢氧化钠缓冲液6.0-8.0;巴比妥钠-盐酸缓冲液6.8-9.6;Tris盐酸缓冲液7.0-9.0;硼酸 硼砂缓冲液7.4-9.0;甘氨酸-氢氧化钠缓冲液8.6-10.6;砂-氢氧化钠缓冲液9.2-10.0;碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液8.8-10.6(Ca2+、Mg2+存在时不得使用);PBS缓冲液7.0-7.6等)。
此外,为了减少各试剂成分之间的交叉影响、保持试剂的稳定性,以便长期储存,以上单剂、双剂的试剂I、试剂II或三剂的试剂I、试剂II、试剂III中通常加入稳定剂10~80%或者10~50mmol/l,稳定剂可以是乙二醇、丙二醇、甘油、聚糖、聚醇、硫酸胺或盐等中的一种或一种以上,还可以在硫基乙醇、腺苷二磷酸、牛血清白蛋白、碳酸盐、胆酸盐、葡聚糖、乙二胺四乙酸、黄素腺嘌呤二核苷酸、黄素单核苷酸、葡萄糖、谷氨酸盐、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化钠、丁二酸盐等中选择。
实验表明,从测定结果的准确性和配制成本的经济性两方面综合考虑,无论是单剂、双剂还是三剂,如下配方成分关系的本发明肌酐诊断试剂盒较为理想:
缓冲液 80--120mmol/l
肌酐酶 8000--20000U/l
肌酸酶 8000--20000U/l
肌氨酸氧化酶 6000--10000U/l
过氧化物酶 10000--20000U/l
稳定剂 20--50%(总体积)
还原型色原体组合 0.1--10mmol/l
由于本发明是完全利用酶学方法,酶解反应具有特异性高的特点,不易受到内、外源其他物质的干扰。酶法方法简便、易于操作。酶解反应的特异性促使测试结果精确。酶解反应都是在缓冲液条件下进行,没有污染环境问题。酶法方法不需要特殊、额外的仪器,测试成本低廉。因此可以保证具有较高的测试准确性,更便于推广应用。
此外,本发明的显著特色之一是可以消除内、外源肌酸的污染,消除内、外源肌酸的作用发生在整个反应时间段的前半部分,在后半段时间受污染的内、外源肌酸已经被消耗殆尽,而在后半段时间测试肌酐含量所需要的肌酸都是产生于肌酐的作用。
具体实施方式
下面结合实施例子对本发明作进一步的说明。
实施例一(单剂)
本实施例的肌酐诊断试剂盒包括:
缓冲液 80mmol/l
肌酐酶 8000U/l
肌酸酶 8000U/l
肌氨酸氧化酶 6000U/l
过氧化物酶 10000U/l
稳定剂 50%(总体积)
4-氨基抗砒 2mmol/l
石碳酸 10mmol/l
在全自动生化分析仪上设定:温度37℃,反应时间10分钟,测试主波长495~505nm,测试副波长600nm以上,被测肌酐样品与试剂的体积比例为1/25,反应方向为正反应。
加入样品和试剂后,使之混合,发生以下反应:
肌酐+水
肌酸酐酶 肌酸
肌酸+水
肌酸酶 肌氨酸+尿素
肌氨酸+氧+水
肌氨酸氧化酶 过氧化氢+甲醛
+甘氨酸
过氧化氢+还原型色原体组合
过氧化物酶 吲嗒胺色原
或醌亚胺色原+水
将最终反应物置于生化分析仪器下,检测主波长495~505nm吸光度上升的速度,从而测算出肌酐的含量大小。
本实施例应用肌酐酶偶联肌酸酶、肌氨酸氧化酶、过氧化物酶反应连续监测法或比色法。肌酐酶将肌酐变成肌酸,再通过偶联肌酸酶、肌氨酸氧化酶、过氧化物酶等酶偶联反应以及还原型色原体(Chromogen)组合系统,将无色的还原型色原体组合氧化成有颜色的醌亚胺色原(Quioneimine)或者吲嗒胺色原(Indamine)染料,因此测量染料含量的高低(不同染料吸收波长不同,介于400--600nm之间)可以直接反映肌酐含量的大小。
实施例二(双剂)
本实施例的肌酐诊断试剂有:
试剂I
缓冲液 100mmol/l
肌酸酶 14000U/l
肌氨酸氧化酶 8000U/l
过氧化物酶 15000U/l
稳定剂 50%(总体积)
4-氨基抗砒 1mmol/l
试剂II
缓冲液 100mmol/l
肌酐酶 14000U/l
稳定剂 50%(总体积)
2,4,6-仨溴-3-羟基-苯磺酸 1mmol/l
测定肌酐含量时,温度控制在30℃,反应时间15分钟,测试主波长546nm,测试副波长630nm以上,被测肌酐样品与试剂的体积比例为1/25,反应方向为正反应。
具体测定步骤为:
肌酐+水
肌酸酐酶 肌酸
肌酸+水
肌酸酶 肌氨酸+尿素
肌氨酸+氧+水
肌氨酸氧化酶 过氧化氢+甲醛
+甘氨酸
过氧化氢+还原型色原体组合
过氧化物酶 吲嗒胺色原
或醌亚胺色原+水
将最终反应物置于生化分析仪器下,检测主波长546nm吸光度上升的速度,从而测算出肌酐的含量大小。
各反应步骤的反应时间控制在15分钟。
实施例三(三剂)
本实施例的肌酐诊断试剂为三剂,有:
试剂I
缓冲液 120mmol/l
稳定剂 20mmol/l
3-甲基-2-苯噻唑酮腙 2mmol/l
试剂II
缓冲液 120mmol/l
肌酸酶 20000U/l
肌氨酸氧化酶 10000U/l
过氧化物酶 20000U/l
稳定剂 50%(总体积)
试剂III
缓冲液 120mmol/l
肌酐酶 20000U/l
稳定剂 50%(总体积)
双甲基苯胺 2mmol/l
在全自动生化分析仪上设定:温度25℃,反应时间20分钟,测试主波长578nm,测试副波长700nm以上,被测肌酐样品与试剂的体积比例为1/25,反应方向为正反应。
具体测定步骤为:
肌酐+水
肌酸酐酶 肌酸
肌酸+水
肌酸酶 肌氨酸+尿素
肌氨酸+氧+水
肌氨酸氧化酶 过氧化氢+甲醛
+甘氨酸
过氧化氢+还原型色原体组合
过氧化物酶 吲嗒胺色原
或醌亚胺色原+水
将最终反应物置于生化分析仪器下,检测主波长578nm吸光度上升的速度,从而测算出肌酐的含量大小。
各反应步骤的反应时间控制在10分钟。
实施例四
本实施例的肌酐诊断试剂有:
试剂I
缓冲液 100mmol/l
稳定剂 20mmol/l
4-氨基抗砒 1mmol/l
试剂II
缓冲液 100mmol/l
肌酐酶 10000U/l
肌酸酶 10000U/l
肌氨酸氧化酶 10000U/l
过氧化物酶 12000U/l
稳定剂 50%(总体积)
双甲基苯胺 2mmol/l
测定肌酐含量时,温度控制在30℃,反应时间10分钟,测试主波长578nm,测试副波长700nm以上,被测肌酐样品与试剂的体积比例为1/25,反应方向为正反应。
加入样品和试剂后,使之混合,发生以下反应:
肌酐+水
肌酸酐酶 肌酸
肌酸+水
肌酸酶 肌氨酸+尿素
肌氨酸+氧+水
肌氨酸氧化酶 过氧化氢+甲醛
+甘氨酸
过氧化氢+还原型色原体组合
过氧化物酶 吲嗒胺色原
或醌亚胺色原+水
将最终反应物置于生化分析仪器下,检测主波长578nm吸光度上升的速度,从而测算出肌酐的含量大小。
各反应步骤的反应时间控制在10分钟。
Claims (10)
1.一种肌酐含量测定方法,步骤如下:
1)、将样品与主要由肌酐酶、肌酸酶、肌氨酸氧化酶、过氧化物酶、还原型色原体组合组成的试剂混合,使之发生如下原理的反应:
肌酐+水
肌酐酶肌酸
肌酸+水
肌酸酶肌氨酸+尿素
肌氨酸+氧+水
肌氨酸氧化酶过氧化氢+甲醛
+甘氨酸
过氧化氢+还原型色原体组合
过氧化物酶吲嗒胺色原
或醌亚胺色原+水
2)、检测最终反应物在主波长400-600nm吸光度上升的速度,测算出肌酐含量的大小。
2.根据权利要求1所述肌酐含量测定方法,其特征在于:所述步骤2)为:将最终反应物置于紫外/可见光分析仪或者半、全自动生化分析仪下,检测主波长400-600nm吸光度上升的速度,测算出肌酐的含量。
3、根据权利要求1或2所述肌酐含量测定方法,其特征在于:温度控制在20℃到50℃范围,反应时间控制在2-30分钟。
4、根据权利要求1或2所述肌酐含量测定方法,其特征在于:被测肌酐样品与试剂的比例控制在1/10到1/500。
5.一种肌酐诊断试剂盒,由以下成分组成:
缓冲液 40--200mmol/l
肌酐酶 1000--50000U/l
肌酸酶 1000--50000U/l
肌氨酸氧化酶 1000--20000U/l
过氧化物酶 500--50000U/l
稳定剂 10--80%(总体积)
还原型色原体组合 0.1--20mmol/l
6.根据权利要求5所述肌酐诊断试剂盒,其特征在于:所述试剂配成单剂、双剂或三剂。
7.根据权利要求5或6所述肌酐诊断试剂盒,其特征在于:所述稳定剂为乙二醇、丙二醇、甘油、聚糖、聚醇、硫酸铵或盐中的至少一种。
8.根据权利要求5或6所述肌酐诊断试剂盒,其特征在于:所述缓冲剂的pH范围是6.0-11.0,所述缓冲剂是三(羧甲基)氨基甲烷-盐酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、三乙醇胺缓冲液、2-氨基-2-甲基-1-丙醇缓冲液、咪唑缓冲液或双甘氨肽缓冲液中的一种。
9、根据权利要求5或6所述肌酐诊断试剂,其特征在于:所述还原型色原体为0.1-20mmol/l的3-甲基-2-苯噻唑酮腙与0.1-20mmol/l以下十四种成分之一组合而成:石碳酸、N-乙基-N-(3-硫丙基)-m-噻啶胺、N,N-双乙基-m-甲苯胺、2,4-双氯石碳酸、2,4,6-仨溴-3-羟基-苯磺酸、3,5-双氯石碳酸磺酸、3,5-双氯-2-羟基-苯磺酸、N-乙基-N-(2-羟基-3-硫丙基)-m-甲苯胺钠盐、仨溴羟基苯甲酸、双甲基苯胺、N-乙基-N-(2-羟基-3-硫丙基)-m-甲苯胺、2,2′-AZINO-双(3-乙基苯噻唑-6-磺酸)、4-羟基-3-甲氧基苯甲酸、3-甲基-乙基-羟基苯胺。
10、根据权利要求5或6所述肌酐诊断试剂,其特征在于:所述还原型色原体组合为由0.1-20mmol/l的4-氨基抗砒与0.1-20mmol/l以下十四种成分之一组合而成:石碳酸、N-乙基-N-(3-硫丙基)-m-噻啶胺、N,N-双乙基-m-甲苯胺、2,4-双氯石碳酸、2,4,6-仨溴-3-羟基-苯磺酸、3,5-双氯石碳酸磺酸、3,5-双氯-2-羟基-苯磺酸、N-乙基-N-(2-羟基-3-硫丙基)-m-甲苯胺钠盐、仨溴羟基苯甲酸、双甲基苯胺、N-乙基-N-(2-羟基-3-硫丙基)-m-甲苯胺、2,2′-AZINO-双(3-乙基苯噻唑-6-磺酸)、4-羟基-3-甲氧基苯甲酸、3-甲基-乙基-羟基苯胺。
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