CN1739775A

CN1739775A - 一种治疗烧烫伤慢性溃疡的喷雾剂及其制备方法

Info

Publication number: CN1739775A
Application number: CN 200510094203
Authority: CN
Inventors: 黄志锋; 郑青; 李校堃; 吴晓萍; 许华
Original assignee: Wenzhou Medical College
Current assignee: Wenzhou Medical College
Priority date: 2005-08-30
Filing date: 2005-08-30
Publication date: 2006-03-01
Anticipated expiration: 2025-08-30
Also published as: CN100548370C

Abstract

本发明涉及一种使用以酸性成纤维细胞生长因子聚乙二醇化学修饰产物PEG－aFGF为主要药用成分的治疗烧烫伤慢性溃疡的喷雾剂及其制备方法。喷雾剂主要成分及含量为：1－100ug/mL的酸性成纤维细胞生长因子聚乙二醇化学修饰产物(PEG－aFGF)、1－100mg/mL温莪术油、0.001－0.05mg/mL保护剂、0.001－0.01mg/mL防腐剂、0.0001－0.001mg/mL稳定剂、0.01－0.2mg/mL矫味剂，其余为生理盐水或注射用水。该制剂具有稳定性好、生物半衰期长、安全性好等特点。

Description

一种治疗烧烫伤慢性溃疡的喷雾剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种主要用于治疗烧烫伤、新鲜创面、慢性溃疡、宫颈糜烂等疾病的液态或冻干粉另附溶剂的喷雾剂，具体是以酸性成纤维细胞生长因子聚乙二醇化学修饰产物PEG-aFGF为主要药用成份的液态或冻干另附溶剂的喷雾剂。

背景技术

酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)是第二个被分离纯化的FGFs家族成员，Thomas于1984年从牛脑中分离纯化得到一由两种大小的多肽(140Aa和134Aa)组成的混合物，它是一种广谱促分裂原，与从牛垂体中分离到的阳离子多肽bFGF有55％的氨基酸序列相同。aFGF主要分布于脑、垂体、神经组织、视网膜、肾上腺、心脏和骨等器官或组织内，其它组织含量很少，约为1/10~1/50，在血清和体液中以极低的浓度存在。体内体外实验均表明，aFGF的生物学效应包括促分裂效应与非促分裂激素样活性两大类，其中促分裂效应主要包括血管生成、组织发生、创伤修复和神经营养作用，而非促分裂激素样活性指低血压效应、调节细胞Ca²⁺平衡、激素分泌和参与中枢摄食调节。aFGF生物活性的多效性以及神经营养的广谱性，为其从基础走向临床提供了保证。目前，动物实验证实，aFGF在某些机体损伤修复及疾病冶疗方面疗效显著，如：aFGF可加速烧伤创面的愈合；能减轻急性缺血—再灌注对肝脏、肾脏、心脏等内脏器官的损伤；参与脊髓损伤的修复；可延缓和阻止耳蜗毛细胞在声损过程中的进一步损害；能促进侧枝循环的建立，但与其他蛋白质类药物一样，酸性成纤维细胞生长因子aFGF也存在稳定性差、体内半衰期短和易产生免疫原性等问题，通过聚乙二醇定点化学修饰方法，使上述缺陷得到了有效改善。aFGF一级结构中共含有三个半胱氨酸(Cys)残基，分别位于第31，98，132位，与许多含Cys的胞外蛋白一般都通过形成二硫键来稳定结构不同，aFGF的Cys残基间不形成二硫键，用中性氨基酸如：丝氨酸(Ser)、丙氨酸(Ala)取代Cys，能增加aFGF对热、酸及某些蛋白酶降解的稳定性，同时，对aFGF的分子结构及生物学活性的影响很小。由于FGF的活性部位主要位于C端，为减少修饰后对活性可能造成的影响，将第98，132位的Cys突变为Ser，构建了aFGF_Ser98，132突变体的高效表达工程菌，通过离子交换、肝素亲和两步层析纯化，获得了促Balb/c 3T3细胞增值活性与天然aFGF对照品相似的aFGF_Ser98，132突变体纯品，并用单甲氧基聚乙二醇(mPEG)5000-马来酸酰亚胺酯对其进行定点化学修饰，修饰产物除保留了生长因子的促分裂活性外，在热稳定性、抗胰蛋白酶水解能力、动物体内稳定性方面均有明显的改善，同时aFGF经过PEG化学修饰后，其免疫反应性和体内免疫原性均得到较大程度的降低，所以非常适用于治疗烧烫伤、新鲜创面、慢性溃疡、宫颈糜烂等疾病。由于喷雾剂型药物具有使用方便、药量易于控制，比起粉剂或膜剂型药剂易于吸收，以及对于不同大小面积的创面都能适用的特点，因此，为了很好地推广使用以酸性成纤维细胞生长因子聚乙二醇化学修饰产物PEG-aFGF为主要药用成份的治疗烧烫伤慢性溃疡的喷雾剂，亟待推出其喷雾剂型药物。

发明内容

本发明目的在于提供一种使用以酸性成纤维细胞生长因子聚乙二醇化学修饰产物PEG-aFGF为主要药用成份的治疗烧烫伤慢性溃疡的喷雾剂及其制备方法。

本发明提供的治疗烧烫伤慢性溃疡的喷雾剂，其特征在于其主要包含成份及含量为：1-100ug/mL的酸性成纤维细胞生长因子聚乙二醇化学修饰产物(PEG-aFGF)、1-100mg/mL温莪术油、0.001-0.05mg/mL保护剂、0.001-0.01mg/mL防腐剂、0.0001-0.001mg/mL稳定剂、0.01-0.2mg/mL矫味剂，溶剂为生理盐水或注射用水。

治疗烧烫伤慢性溃疡的喷雾剂的制备方法，其特征在于由以下步骤构成：

①：取适量的酸性成纤维细胞生长因子聚乙二醇化学修饰产物、保护剂、防腐剂和稳定剂单独或混合后用生理盐水或注射用水溶解，然后过滤除菌；

②：取适量的温莪术油和矫味剂溶解于注射用水或生理盐水中，形成均一溶液；

③：将第①步获得的混合溶液与第②步获得的溶液进行充分混合，直至混匀制得液态喷雾剂成品；

喷雾剂的制备方法还可以由以下步骤构成：

①：取适量的酸性成纤维细胞生长因子聚乙二醇化学修饰产物、保护剂、防腐剂和稳定剂单独或混合后用注射用水或生理盐水溶解，然后过滤、除菌；

②：将第①步所得物在-50℃～-30℃条件下冷冻干燥制成冻干粉；

③：取适量的温莪术油和矫味剂溶解于注射用水中；

④：将冻干粉溶解于生理盐水或注射用水，并与第③步获得的溶液混匀，过滤除菌制得冻干粉另附溶剂的喷雾剂成品。

其中保护剂可以是白蛋白、甘露醇、甲壳素多糖中的一种或一种以上的混合物；防腐剂可以是苯甲酸钠、山梨醇、尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丁酯中的一种或一种以上的混合物；稳定剂为EDTA-2Na；矫味剂可以是桂皮糖浆、橙皮糖浆、木糖醇、山梨醇、甘露醇、苹果香精、香蕉香精、甜叶菊、赤鲜醇、甘油、甜蜜素、阿司帕坦、果糖、三氯半乳蔗糖、柠檬、醋酸内酯钾、缩二碳酸基酰胺、天冬酰胺、醋酸内酯盐中的一种或一种以上的混合物，保护剂、防腐剂、稳定剂及矫味剂任何一类中的一种或一种以上组份的混合物可与其他任何一类中的一种或一种以上组份的混合物配合使用。

本发明喷雾剂的主要药用成份为PEG-aFGF，另外还含有中药温莪术油，温莪术系“浙八味”之一，是传统的道地药材，莪术油系温莪术根茎经蒸馏得到的挥发油，莪术油具有消炎、止痛、活血化瘀、去腐生肌增强机体免疫力、抗病毒、抗癌等作用，其功能主治为行气活血、消积止痛，主要适应症有：妇科炎症、皮炎、白癜风、白斑、皮肤烧伤、冻疮、风湿痛、病毒感染，用于瘀血经闭、食积胀痛、早期宫颈癌。该剂型继承了PEG-aFGF稳定性好、生物利用度高、无免疫原性等特点，同时具备了抗炎、抗病毒和提高人体免疫力等特点，是治疗烧烫伤、新鲜创面、慢性溃疡、宫颈糜烂等疾病的新剂型药物。

具体实施方式

实施例1：

(1)取酸性成纤维细胞生长因子聚乙二醇化学修饰产物(PEG-aFGF)1mg，白蛋白50mg，尼泊金乙酯5mg，EDTA-2Na 0.1mg，用10mL注射用水或生理盐水，最好是生理盐水溶解，溶解完全后过滤、除菌；(2)温莪术油1g和桂皮糖浆100mg溶于990mL注射用水或生理盐水中，最好是注射用水中，过滤除菌；(3)将上述PEG-aFGF溶液与温莪术油溶液充分混合均匀，过滤除菌，备用。

实施例2：

(1)取酸性成纤维细胞生长因子聚乙二醇化学修饰产物(PEG-aFGF)100mg，甘露醇1mg，苯甲酸钠10mg，EDTA-2Na 0.5mg，用10mL注射用水或生理盐水，最好是生理盐水溶解，溶解完全后过滤、除菌；(2)温莪术油20mg和木糖醇10mg溶于990mL注射用水或生理盐水中，最好是注射用水中，过滤除菌；(3)将上述PEG-aFGF溶液与温莪术油溶液充分混合均匀，过滤除菌，备用。

实施例3：

(1)取酸性成纤维细胞生长因子聚乙二醇化学修饰产物(PEG-aFGF)50mg，甲壳素多糖30mg，山梨醇1mg，EDTA-2Na 1mg，用10mL注射用水或生理盐水，最好是生理盐水溶解，溶解完全后过滤、除菌；(2)温莪术油100mg和苹果香精200mg溶于990mL注射用水或生理盐水中，最好是注射用水中，过滤除菌；(3)将上述PEG-aFGF溶液与温莪术油溶液充分混合均匀，过滤除菌，备用。

实施例4：

(1)取酸性成纤维细胞生长因子聚乙二醇化学修饰产物(PEG-aFGF)80mg，白蛋白10mg、甘露醇5mg、甲壳素多糖10mg，尼泊金甲酯7mg，EDTA-2Na 0.3mg，用10mL注射用水或生理盐水，最好是生理盐水溶解，溶解完全后过滤除菌，将所得物在-45℃条件下冷冻干燥制成冻干粉；(2)温莪术油50mg和甜蜜素50mg溶于990mL注射用水或生理盐水中，最好是注射用水中，过滤、除菌；(3)将上述冻干粉与温莪术油溶液充分混合均匀，过滤除菌，备用。

实施例5：

(1)取酸性成纤维细胞生长因子聚乙二醇化学修饰产物(PEG-aFGF)60mg，甘露醇20mg、甲壳素多糖20mg，苯甲酸钠2mg、山梨醇4mg、尼泊金甲酯2mg，EDTA-2Na 0.2mg，用10mL注射用水或生理盐水，最好是生理盐水溶解，溶解完全后过滤除菌，将所得物在-45℃条件下冷冻干燥制成冻干粉；(2)温莪术油30mg和醋酸内酯钾80mg溶于990mL注射用水或生理盐水中，最好是注射用水中，过滤、除菌；(3)将上述冻干粉与温莪术油溶液充分混合均匀，过滤除菌，备用。

实施例6：

(1)取酸性成纤维细胞生长因子聚乙二醇化学修饰产物(PEG-aFGF)30mg，白蛋白20mg，尼泊金丁酯4.5mg，EDTA-2Na0.6mg，用10mL注射用水或生理盐水，最好是生理盐水溶解，溶解完全后过滤除菌，将所得物在-45℃条件下冷冻干燥制成冻干粉；(2)温莪术油60mg和果糖120mg溶于990mL注射用水或生理盐水中，最好是注射用水中，过滤、除菌；(3)将上述冻干粉与温莪术油溶液充分混合均匀，过滤除菌，备用。

实施例7：

(1)取酸性成纤维细胞生长因子聚乙二醇化学修饰产物(PEG-aFGF)75mg，白蛋白35mg，尼泊金乙酯3mg，EDTA-2Na 0.8mg，用10mL注射用水或生理盐水，最好是生理盐水溶解，溶解完全后过滤、除菌；(2)温莪术油40mg和甜叶菊150mg溶于990mL注射用水或生理盐水中，最好是注射用水中，过滤除菌；(3)将上述PEG-aFGF溶液与温莪术油溶液充分混合均匀，过滤除菌，备用。

实施例8：

(1)取酸性成纤维细胞生长因子聚乙二醇化学修饰产物(PEG-aFGF)55mg，白蛋白48mg，尼泊金乙酯6mg，EDTA-2Na 0.7mg，用10mL注射用水或生理盐水，最好是生理盐水溶解，溶解完全后过滤、除菌；(2)温莪术油45mg和缩二碳酸基酰胺180mg溶于990mL注射用水或生理盐水中，最好是注射用水中，过滤除菌；(3)将上述PEG-aFGF溶液与温莪术油溶液充分混合均匀，过滤除菌，备用。

实施例9：

(1)取酸性成纤维细胞生长因子聚乙二醇化学修饰产物(PEG-aFGF)40mg，甘露醇5mg、甲壳素多糖10mg，尼泊金乙酯10mg，EDTA-2Na 0.4mg，用10mL注射用水或生理盐水，最好是生理盐水溶解，溶解完全后过滤、除菌；(2)温莪术油75mg和醋酸内酯盐130mg溶于990mL注射用水或生理盐水中，最好是注射用水中，过滤除菌；(3)将上述PEG-aFGF溶液与温莪术油溶液充分混合均匀，过滤除菌，备用。

实施例10：

(1)取酸性成纤维细胞生长因子聚乙二醇化学修饰产物(PEG-aFGF)55mg，白蛋白48mg，尼泊金乙酯6mg，EDTA-2Na 0.7mg，用10mL注射用水或生理盐水，最好是生理盐水溶解，溶解完全后过滤、除菌；(2)温莪术油45mg和甘油110mg溶于990mL注射用水或生理盐水中，最好是注射用水中，过滤除菌；(3)将上述PEG-aFGF溶液与温莪术油溶液充分混合均匀，过滤除菌，备用。

实施例11：

(1)取酸性成纤维细胞生长因子聚乙二醇化学修饰产物(PEG-aFGF)80mg，白蛋白10mg、甘露醇5mg、甲壳素多糖10mg，尼泊金甲酯7mg，EDTA-2Na 0.3mg，用10mL注射用水或生理盐水，最好是生理盐水溶解，溶解完全后过滤除菌，将所得物在-45℃条件下冷冻干燥制成冻干粉；(2)温莪术油50mg和橙皮糖浆50mg、甘露醇50mg、香蕉香精50mg溶于990mL注射用水或生理盐水中，最好是注射用水中，过滤、除菌；(3)将上述冻干粉与温莪术油溶液充分混合均匀，过滤除菌，备用。

实施例12：

(1)取酸性成纤维细胞生长因子聚乙二醇化学修饰产物(PEG-aFGF)50mg，甲壳素多糖30mg，山梨醇1mg，EDTA-2Na 1mg，用10mL注射用水或生理盐水，最好是生理盐水溶解，溶解完全后过滤、除菌；(2)温莪术油100mg和阿司帕坦170mg溶于990mL注射用水或生理盐水中，最好是注射用水中，过滤除菌；(3)将上述PEG-aFGF溶液与温莪术油溶液充分混合均匀，过滤除菌，备用。

实施例13：

(1)取酸性成纤维细胞生长因子聚乙二醇化学修饰产物(PEG-aFGF)20mg，白蛋白50mg，尼泊金乙酯5mg，EDTA-2Na 0.1mg，用10mL注射用水或生理盐水，最好是生理盐水溶解，溶解完全后过滤、除菌；(2)温莪术油1g和山梨醇35mg、赤鲜醇100mg溶于990mL注射用水或生理盐水中，最好是注射用水中，过滤除菌；(3)将上述PEG-aFGF溶液与温莪术油溶液充分混合均匀，过滤除菌，备用。

实施例14：

(1)取酸性成纤维细胞生长因子聚乙二醇化学修饰产物(PEG-aFGF)60mg，甘露醇20mg、甲壳素多糖20mg，苯甲酸钠2mg、山梨醇4mg、尼泊金甲酯2mg，EDTA-2Na 0.2mg，用10mL注射用水或生理盐水，最好是生理盐水溶解，溶解完全后过滤除菌，将所得物在-45℃条件下冷冻干燥制成冻干粉；(2)温莪术油30mg和三氯半乳蔗糖30mg、柠檬80mg、天冬酰胺20mg溶于990mL注射用水或生理盐水中，最好是注射用水中，过滤、除菌；(3)将上述冻干粉与温莪术油溶液充分混合均匀，过滤除菌，备用。

以下为本发明喷雾剂实验实例

1、制剂药动学特点

采用新西兰白兔为实验对象，观察该发明制剂体表用药后在兔体内的药动学特点，实验时将上述例1至6中任意一种的喷雾剂反复均匀喷于破损皮肤模型上，喷完略干后，用一块大于涂药面积的塑料薄膜包裹用药皮肤，以保持湿润，6h后揭开，并于兔的耳缘静脉取血离心，采用放射同位素标记法检测血药浓度，分析药动学参数，结果表明，该制剂具有稳定性好、生物半衰期长、安全性好等特点，相比目前在临床使用的酸性成纤维细胞生长因子喷雾剂，生物半衰期提高将近5倍，具有很好的市场应用前景。

2、修复效力实验

采用小型猪为实验对象，用特制致伤器造成小型猪背部规则形创面，实验时将上述例1至6中任意一种的喷雾剂喷于创伤模型上，以后隔天换药一次，按不同时间段采用创面照像、透明膜描记称量法记录创面面积，经福尔马林固定后常规染色，重点观察创面肉芽组织生长(包括毛细血管生长，胶原沉积)与再上皮化变化，结果表明，该发明喷雾剂可促进创面肉芽组织生长、诱导毛细血管胚芽形成与再上皮化，对创面修复有明显的促进作用。

3、抗菌效力实验

取培养好的金黄色葡萄球菌菌液200uL均匀涂布于固体SCDLP平板上。用无菌镊子将已灭菌的小滤纸片轻置于平板上，然后用10uL的上述例1至6中任意一种的喷雾剂分别滴加于滤纸片上，待样品完全渗透后，将培养皿置于37℃培养箱中培养6-8小时，取出培养皿，观察抑菌圈大小。结果显示上述观察样品均可见直径8-10mm的抑菌圈，而且抑菌圈的多少和清晰程度和温莪术油的含量具有很好的相关性。

Claims

1、一种治疗烧烫伤慢性溃疡的喷雾剂，其特征在于其主要包含成份及含量为：1-100ug/mL的酸性成纤维细胞生长因子聚乙二醇化学修饰产物(PEG-aFGF)、1-100mg/mL温莪术油、0.001-0.05mg/mL保护剂、0.001-0.01mg/mL防腐剂、0.0001-0.001mg/mL稳定剂、0.01-0.2mg/mL矫味剂，溶剂为生理盐水或注射用水。

2、根据权利要求1所述的治疗烧烫伤慢性溃疡的喷雾剂，其特征在于：所述保护剂可以是白蛋白、甘露醇、甲壳素多糖中的一种或一种以上的混合物。

3、根据权利要求1所述的治疗烧烫伤慢性溃疡的喷雾剂，其特征在于：所述防腐剂可以是苯甲酸钠、山梨醇、尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丁酯中的一种或一种以上的混合物。

4、根据权利要求1所述的治疗烧烫伤慢性溃疡的喷雾剂，其特征在于：稳定剂为EDTA-2Na。

5、根据权利要求1所述的治疗烧烫伤慢性溃疡的喷雾剂，其特征在于：所述矫味剂可以是桂皮糖浆、橙皮糖浆、木糖醇、山梨醇、甘露醇、苹果香精、香蕉香精、甜叶菊、赤鲜醇、甘油、甜蜜素、阿司帕坦、果糖、三氯半乳蔗糖、柠檬、醋酸内酯钾、缩二碳酸基酰胺、天冬酰胺、醋酸内酯盐中的一种或一种以上的混合物。

6、根据权利要求1所述的治疗烧烫伤慢性溃疡的喷雾剂，其特征在于：所述保护剂可以是白蛋白、甘露醇、甲壳素多糖中的一种或一种以上的混合物；所述防腐剂可以是苯甲酸钠、山梨醇、尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丁酯中的一种或一种以上的混合物；稳定剂为EDTA-2Na；所述矫味剂可以是桂皮糖浆、橙皮糖浆、木糖醇、山梨醇、甘露醇、苹果香精、香蕉香精、甜叶菊、赤鲜醇、甘油、甜蜜素、阿司帕坦、果糖、三氯半乳蔗糖、柠檬、醋酸内酯钾、缩二二碳酸基酰胺、天冬酰胺、醋酸内酯盐中的一种或一种以上的混合物。

7、一种根据权利要求1所述的治疗烧烫伤慢性溃疡的喷雾剂的制备方法，其特征在于由以下步骤构成：

③：将第①步获得的混合溶液与第②步获得的溶液进行充分混合，直至混匀制得成品。

8、一种根据权利要求1所述的治疗烧烫伤慢性溃疡的喷雾剂的制备方法，其特征在于由以下步骤构成：

③：取适量的温莪术油和矫味剂溶解于注射用水中；

④：将冻干粉溶解于生理盐水或注射用水，并与第③步获得的溶液混匀，过滤除菌制得成品。