CN1731187A

CN1731187A - 铕标记巨细胞病毒感染早期诊断试剂盒

Info

Publication number: CN1731187A
Application number: CN 200510060369
Authority: CN
Inventors: 尚世强; 赵正言; 俞锡林
Original assignee: Zhejiang University ZJU
Current assignee: Zhejiang University ZJU
Priority date: 2005-08-12
Filing date: 2005-08-12
Publication date: 2006-02-08

Abstract

本发明提供铕标记巨细胞病毒感染早期诊断试剂盒，由盒体1、包被板2、衬垫3、铕标记抗体4、阴性质控品5、阳性质控品6、稀释用缓冲液7、反应缓冲液8、洗涤缓冲液9、增强液10、操作说明书11组成。本发明提供的试剂盒，以铕标记技术取代酶标记技术，增强了荧光信号测量的特异性，利用延时测量方法消除杂质荧光干扰，提高了实验检测灵敏度；标记物可在1－2年内使用，不受环境温度及pH的影响，稳定性好，检测时间短快速，检测方法特异、敏感、准确。试剂盒设计合理，制备简便，成本低。

Description

铕标记巨细胞病毒感染早期诊断试剂盒

技术领域

本发明涉及一种指示巨细胞病毒早期感染的检测试剂，能鉴别是由于巨细胞活动性感染状态。

背景技术

目前，市场上多用酶联免疫吸附检测试剂来判断巨细胞病毒感染，当人体被巨细胞病毒感染后，先产生IgM抗体，该抗体在体内呈现先升高后降低的浓度曲线。酶标记技术多采用如辣根过氧化物酶，容易受环境温度及PH值的影响，且酶本身属于大分子蛋白，对被标记的蛋白有占位影响，导致方法灵敏度低，稳定性差。

发明内容

本发明的目的是为克服现有技术存在的灵敏度低及稳定性差的不足之处，采用铕标记技术，提供铕标记巨细胞病毒感染早期诊断试剂盒，以提高方法灵敏度及稳定性。

本发明是由盒体、包被板、衬垫，铕标记抗体、阴性质控品、阳性质控品、稀释用缓冲液、反应缓冲液、洗涤缓冲液、增强液组成，衬垫上设有容器孔，分别放置铕标记抗体、阴性质控品、阳性质控品、稀释用缓冲液、反应缓冲液、洗涤缓冲液、增强液。

本发明还由盒体、包被板、衬垫，铕标记抗体、阴性质控品、阳性质控品、稀释用缓冲液、反应缓冲液、洗涤缓冲液、增强液及操作说明书组成，衬垫上设有容器孔，分别放置铕标记抗体、阴性质控品、阳性质控品、稀释用缓冲液、反应缓冲液、洗涤缓冲液、增强液。

本发明所用的包被板为特异性CMV重组抗原包被的板。

本发明的试剂组成为：铕标记抗体、阴性质控品、阳性质控品、稀释用缓冲液、反应缓冲液、洗涤缓冲液、增强液。

所用的反应缓冲液为Tris反应缓冲液(50mmol/L Tris-HCl，含0.9％NaCl，0.5％BSA溶液)；所用的铕标记抗体为IgM抗体(～0.2mg/ml)；增强液为荧光增强液。

本发明的有益效果是：以铕标记技术取代酶标记技术，铕为镧系元素的一种，激发光与发射光之间有一个较大的Stokes位移，通过排除激发光源和非特异荧光物的干扰，增强了荧光信号测量的特异性，所产生的荧光寿命长，比普通荧光高5-6个数量级，利用延时测量方法消除杂质荧光干扰，提高了实验检测灵敏度；镧系元素离子不易脱落，标记物可在1-2年内使用，不受环境温度及PH的影响，稳定性好。本发明检测时间短快速，检测方法特异、敏感、准确，试剂稳定性好，保存时间长达1年之久。试剂盒设计合理，制备简便，成本低。

附图说明

图1为本发明的结构示意图。

图2为反应步骤图。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明作进一步说明。

实施例1

参见图1，本发明由盒体1、包被板2、衬垫3、铕标记抗体4、阴性质控品5、阳性质控品6、稀释用缓冲液7、反应缓冲液8、洗涤缓冲液9、增强液10、操作说明书11组成，衬垫3上设有容器孔，分别放置铕标记抗体4、阴性质控品5、阳性质控品6、稀释用缓冲液7、反应缓冲液8、洗涤缓冲液9、增强液10。

试剂组成：由特异性CMV重组抗原包被的板、Tris反应缓冲液(50mmol/LTris-HCl，含0.9％NaCl，0.5％BSA溶液)、样本稀释用缓冲液、铕标记抗IgM抗体(～0.2mg/ml)、洗板用洗涤液、荧光增强液、阴阳性质控品。

使用时，将试剂恢复到室温后，用样本稀释缓冲液将标本及质控品按100∶1稀释，各取100ul加入到包被板的微孔中，室温下慢振30分钟后，洗板6次，加标记物100ul每孔，室温下慢振30分钟后，洗板6次，加增强液200ul每孔，室温下慢振5分钟后，在特定仪器下读数测定，根据与质控品的荧光值比较判断，总反应时间仅1小时，反应步骤参见图2，图2中：a代表特异性重组抗原包被的微孔板；b代表样本中能与重组抗原特异性结合的IgM抗体；c代表特异性重组抗原-IgM结合复合物；d代表铕标记的抗IgM抗体；e代表特异性重组抗原-IgM-铕标记的抗IgM抗体结合复合物；f代表荧光增强液；g代表产生荧光。本发明包被的特异性重组抗原是针对活动性感染产生的IgM而选的，特异性强，本发明采用铕标记技术，提高了检测灵敏度和稳定性。

实施例2

本发明试剂与进口欧蒙试剂一起对2000例血清标本进行了临床检测，结果见下表：

	阳性病例	阴性病例	可疑病例	阳性检出率
	阳性病例	阴性病例	可疑病例	阳性检出率	进口欧蒙试剂检测结果	156	1778	66	7.8％
本新型试剂检测结果	178	1728	94	8.9％	进口欧蒙试剂检测结果	156	1778	66	7.8％

结果显示：本发明试剂盒灵敏度高，能更早期查出是否感染。

无需进一步详细阐述，相信采用前面所公开的内容，本领域技术人员可最大限度地应用本发明。因此，前面的实施方案应理解为仅是举例说明，而非以任何方式限制本发明的范围。

Claims

1.铕标记巨细胞病毒感染早期诊断试剂盒，其特征是：由盒体(1)、包被板(2)、衬垫(3)、铕标记抗体(4)、阴性质控品(5)、阳性质控品(6)、稀释用缓冲液(7)、反应缓冲液(8)、洗涤缓冲液(9)、增强液(10)组成，衬垫(3)上设有容器孔，分别放置铕标记抗体(4)、阴性质控品(5)、阳性质控品(6)、稀释用缓冲液(7)、反应缓冲液(8)、洗涤缓冲液(9)、增强液(10)。

2.根据权利要求1所述的铕标记巨细胞病毒感染早期诊断试剂盒，其特征是：由盒体(1)、包被板(2)、衬垫(3)、铕标记抗体(4)、阴性质控品(5)、阳性质控品(6)、稀释用缓冲液(7)、反应缓冲液(8)、洗涤缓冲液(9)、增强液(10)及操作说明书(11)组成。

3.根据权利要求1或2所述的铕标记巨细胞病毒感染早期诊断试剂盒，其特征是：包被板为特异性抗原包被板。

4.根据权利要求1或2所述的铕标记巨细胞病毒感染早期诊断试剂盒，其特征是：所用的反应缓冲液为50mmol/L Tris-HCl、含0.9％NaCl、0.5％BSA溶液的Tris反应缓冲液，所用的铕标记抗体为～0.2mg/ml的IgM抗体，所用的增强液为荧光增强液。