CN1702167A - 海洋微藻的培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及水产养殖领域采用柱筒形农用聚乙烯透明塑料薄膜袋，将塑料薄膜袋两边分别用绳封口，同时在两端各扎入一根聚乙烯硬管做为塑料薄膜袋内腔的出气孔，一端通入多个充气石，作充气用，将其漂浮放在盛有水的三级培养池中，聚乙烯硬管的端部用绳吊起，以防塑料薄膜袋的袋口沉入水中，向漂浮于培养池水面上的塑料薄膜袋内注入20ppm有效氯的NaClO消毒灭菌的海水，24小时后，向薄膜袋中加入Na2S2O3，充气5分钟后，从薄膜袋另一端口取水样监测余氯情况，以确保彻底中和余氯，然后加入营养盐制成培养基，最后直接向塑料薄膜袋中接入一级藻种进行培养，培养温度和光照时间、强度均随昼夜自然变化。
Description
技术领域
本发明涉及水产养殖领域，具体地说是一种海洋微藻的培养方法。
背景技术
在海珍品人工育苗中，海洋微藻作为重要的生物饵料，能否充足供应往往决定了苗种生产的成败。在微藻的生产性培养中，一般采用玻璃瓶进行一级保种，封闭性好，能够较好的杜绝微生物的污染，但二级扩种和三级生产性培养通常采用开放式的玻璃钢桶和大小水泥池，即使对海水进行了彻底的消毒，但在培养过程中，由于空气中的细菌、原生动物及杂藻孢子仍会不断落入，污染藻种，轻则生长缓慢，收获时密度不高，重则全军覆没，颗粒无收，再者现有的水泥池培养海洋微藻的方法，由于是敞开式结构、水温低、微藻的培养速度较慢。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是为了克服上述现有技术的不足，提供一种培养速度快、生产成本低、不易受污染的海洋微藻的培养方法。
本发明解决上述技术问题采用的技术方案是：采用柱筒形聚乙烯透明塑料薄膜袋，将塑料薄膜袋两端分别用绳封口，同时在两端各扎入一根聚乙烯硬管做为塑料薄膜袋内腔的出气孔，一端通入多个充气石，作充气用，以此作为微藻培养的容器，将其漂浮放在盛有水的三级培养池中，聚乙烯硬管的端部用绳吊起，以防塑料薄膜袋的袋口沉入水中，向漂浮于培养池水面上的塑料薄膜袋内注入20ppm有效氯的NaClO消毒灭菌的海水，24小时后，从塑料薄膜袋一侧的端口加入适量Na2S2O3，充气5分钟后，从塑料薄膜袋另一侧的端口取水样监测余氯情况，以确保彻底中和余氯，然后加入营养盐制成培养基，最后直接向塑料薄膜袋中接入一级藻种进行培养，营养盐的加入量为每立方水体NaNO360g，KH2PO45g，Na2SiO35g，FeC6H5O70.5g，培养温度和光照时间、强度均随昼夜自然变化。
本发明海洋微藻的培养方法生产成本低，微藻生长速度快，微藻不易被污染，具有良好的恒温性能，可以通过调节塑料薄膜袋外的池水温度使袋内温度保持相对恒定。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的描述：
采用周长200cm，长度约450cm的圆筒形农用聚乙烯透明塑料薄膜袋，两端口分别用绳封口，同时各扎入长约10cm，直径6cm的聚乙烯硬管做出气孔，一端通入3个充气石，作充气用，以此作为微藻培养的容器，将其漂浮放在盛有水的原三级培养池(长×宽×高＝600cm×400cm×900cm)中，两头出气孔用绳吊起，以防塑料薄膜袋端口沉入水中，向漂浮于培养池水面上的塑料薄膜袋内注入20ppm有效氯的NaClO消毒灭菌的海水，24小时后，从塑料薄膜袋一侧的袋口中加入适量Na2S2O3，充气5分钟后，从塑料薄膜袋另一侧袋口中取水样监测余氯情况，以确保彻底中和余氯，然后加入营养盐制成培养基，塑料薄膜袋中培养基的加入量为1.0～1.2m3，最后直接向塑料薄膜袋中接入一级藻种进行培养，营养盐的加入量为每立方水体NaNO360g，KH2PO45g，Na2SiO35g，FeC6H5O70.5g，培养绿色巴夫藻、等边金藻8701还须加入VB1(维生素B1)100mg，VB12(维生素B12)0.5mg，培养温度和光照时间、强度均随昼夜自然变化，培养时通气，每个培养池中放置8个塑料薄膜袋。
以水泥池开放式培养作对照试验，水泥池的体积：长×宽×高＝600cm×400cm×90cm，培养水深65cm，均匀摆放24个充气石。
所培养海洋微藻的种类为：新月菱形藻、亚心形扁藻、绿色巴夫藻、等边金藻8701、牟氏角毛藻。
每天在同一时间(上午8:00-10:00)测定藻种密度一次，藻种密度用XB-K-25型血球记数板记数，薄膜袋以水泥池中8个袋样品计数平均值作为结果，水泥池在8个点均匀取样，以平均值作为结果。以K＝(lgNT-lgN0)×3.322/T公式计算5d的相对生长率。N0：接种时微藻细胞数，NT：培养T天细胞数，
T：藻种培养天数。
根据不同的藻种适宜温度范围分别在不同的季节进行一次性培养试验，以上午8时至下午4时测定的光照强度来确定其变化范围，光照5000-20000lx，试验结果见表1。
表1实验中6株海洋微藻的培养结果和相对生长率
| 藻种名称 | 温度(℃) | 培养方法 | 生长密度(104个细胞/ml) | 相对生长率 | |||||
| 0天 | 1天 | 2天 | 3天 | 4天 | 5天 | ||||
| 新月菱形藻牟氏角毛藻绿色巴夫藻等边金藻8701亚心形扁藻 | 18~2317~2228~3526~3322-~622~257~188~1622~2622~25 | 薄膜袋水泥池薄膜袋水泥池薄膜袋水泥池薄膜袋水泥池薄膜袋水泥池 | 121423252622272567 | 36405051454044451012 | 1327612882125701431361715 | 213138197103168931871672822 | 286183251982021012131984324 | 303218288742331052342045822 | 0.9320.7920.7290.3130.6330.4510.6230.6060.6550.330 |
由该表可以看出，所有藻种不论是接入薄膜袋还是水泥池都不经延缓期，直接进入指数生长期，培养1d的密度几乎都增长了1倍，然而，随着培养时间的增加，6株藻种在各自的温度范围内，薄膜袋和水泥池的藻种密度出现了明显的不同，6株藻种的相对生长率薄膜袋均高于水泥池，其中以牟氏角毛藻的差距最明显，薄膜袋藻种的相对生长率是水泥池的2.33倍。其次是亚心形扁藻，1.98倍。而等鞭金藻8701的相对生长率几乎没有差别，仅为1.03倍。
污染情况：
镜检时发现，水泥池出现污染原生动物大大早于薄膜袋，在高温季节尤为严重，又表中可以看到，牟氏角毛藻培养的前3天，水泥池中牟氏角毛藻的密度是持续增长的，但后2天密度下降，这正是由于原生动物的污染造成的。在培养等鞭金藻8701的低温季节，不论是水泥池还是薄膜袋，原生动物出现时间都很迟，种类也少。
本发明聚乙烯薄膜袋与背景技术水泥池培养出现上述结果的主要原因是：接种初期，细胞密度小，光照在水中的衰减小，薄膜袋和水泥池中的细胞生长几乎都不受光照限制，两者间的差异较小。但随着细胞密度的增加，光照成为单细胞藻生长的限制因子，光照面积大的薄膜袋中的细胞生长速度与水泥池的差异就越来越大。
其次，原生动物的污染也是影响单细胞藻生长重要因素，这在高温季节表现更突出，潮湿的空气中存在大量的原生动物(或孢子)，是对敞开式的水泥池污染的重要原因，薄膜袋可阻止原生动物的落入，如果对充入的空气过滤净化，能够更加有效的避免污染。
本发明还具有如下优点：
(1)有效地避免了塑料薄膜袋的破损漏水问题。培养单细胞藻的塑料薄膜袋破损漏水的主要是因为装有藻液的薄膜袋内外压力不平衡，薄膜受到了强大的张力，操作中稍有不慎，就会造成破漏。浮式法的薄膜袋内外压力均衡，薄膜几乎不受张力，且薄膜袋在水中漂浮，自由相对较大，因而大大方便了操作过程，由表面张力不均或操作不慎(只要不是有意的戳扎)造成的破损漏水几乎不存在。
(2)能够更有效地使藻种分布均匀。在单细胞藻的生长中，往往会因为多种原因引起下沉，从而影响单细胞藻的生长状况和质量。充气的方法在帮助单细胞藻的上浮中具有一定的作用，但往往会受到充气量和充气面积的限制。薄膜袋浮式法可利用袋体在水中的自由飘浮，将其翻转晃动，结合充气使单细胞藻分布充分均匀。
(3)具有良好的恒温性能。可以通过调节薄膜袋外的池水温度使袋内温度保持相对恒定，低温季节，浮式薄膜袋阻碍了池水的上下对流，其良好的保温性能使上层薄膜袋的温度明显高于开放的水泥池表层，且不影响水泥池底层暖气管升温向其传递的热量；高温季节，采取在薄膜袋上铺冰块或以较低温度的水循环促使薄膜袋降温。
(4)可直接由封闭培养的一级藻种向三级培养的塑料袋中接种，避免了多次接种操作造成的污染和浪费机会。浮式薄膜袋培养由于能够有效的避免污染，因此单细胞藻的接种密度不必很高，培养周期可以适当延长，可以根据需要调整浮式薄膜袋的接种密度。在低温季节，也可用浮式薄膜袋进行二级培养，并在原池中接种进行三级培养[8]，生产效果效果好，且可大大降低成本。
(5)化整为零、调控灵活。浮式薄膜袋培养法对于一些培养池过大的生产单位尤其适用。可根据培养池的情况选用不同大小的薄膜袋，再根据需要来确定每池吊挂薄膜袋的个数，每个袋中培养的种类，从而有效解决了因培养池过大，单细胞藻培养无法灵活掌握的弊端。
本发明浮式塑料薄膜袋培养微藻的方法可以用于任何能够存水的池子，不论是室内池还是室外池，水泥池还是土池，只要能充气，固定袋口，就能进行培养，因此大大扩展了单细胞藻培养的空间。
Claims (1)
1、一种海洋微藻的培养方法，其技术特征是，采用柱筒形聚乙烯透明塑料薄膜袋，将塑料薄膜袋两端分别用绳封口，同时在两端各扎入一根聚乙烯硬管做为塑料薄膜袋内腔的出气孔，一端通入多个充气石，作充气用，以此作为微藻培养的容器，将其漂浮放在盛有水的三级培养池中，聚乙烯硬管的端部用绳吊起，以防塑料薄膜袋的袋口沉入水中，向漂浮于培养池水面上的塑料薄膜袋内注入20ppm有效氯的NaClO消毒灭菌的海水，24小时后，从塑料薄膜袋一侧的端口加入适量Na2S2O3，充气5分钟后，从塑料薄膜袋另一侧的端口取水样监测余氯情况，以确保彻底中和余氯，然后加入营养盐制成培养基，最后直接向塑料薄膜袋中接入一级藻种进行培养，营养盐的加入量为每立方水体NaNO3 60g，KH2PO4 5g，Na2SiO3 5g，FeC6H5O7 0.5g，培养温度和光照时间、强度均随昼夜自然变化。
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