CN1672538A - 嗜酸乳杆菌奶片的制备工艺 - Google Patents
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Abstract
嗜酸乳杆菌奶片的制备工艺，采用诱变育种法选育抗高温突变型嗜酸乳杆菌菌株，即嗜酸乳杆菌LA201菌株；并从中草药的提取液和微生物培养液中发现能降低菌体死亡的物质，由于抗高温嗜酸乳杆菌菌株的成功选育和保护剂的发现，使得嗜酸乳杆菌奶片的生产，可采用普通奶粉生产的高温喷雾干燥设备，连续批量喷粉，然后按常规压片法压片成型，可制成含菌量大、菌活性高的嗜酸乳杆菌奶片。
Description
技术领域
本发明涉及一种奶片的制备工艺，特别涉及一种嗜酸乳杆菌奶片的制备工艺。
背景技术
近年来，益生菌乳制品在欧美日渐盛行，已应用于人类的益生菌主要有乳杆菌、乳球菌、肠杆菌、肠球菌、双歧杆菌等，但以嗜酸乳杆菌和双歧杆菌的健康效果最为显著，国外企业界一般以嗜酸乳杆菌和双歧杆菌作为益生菌的代名词。把含有活的益生菌，能够通过调节肠道微生态平衡来增进机体健康的乳品称为益生菌食品。将含有嗜酸乳杆菌和双歧杆菌的食品叫AB食品，在此基础上添加干酪乳杆菌生产的食品叫ABC食品，非常盛行。全世界益生菌食品已有90多种，其中多数为益生菌乳品。而在日本、德国、加拿大、意大利、波兰、英国、美国和澳大利亚等的生产量呈增长势头。我国起步较晚，20世纪90年代起才开始将双歧杆菌用于各种保健食品中，但由于技术问题，难于维持一定量的活菌数，保健功效失效快。因此，在乳品中几乎没有应用。而含有嗜酸乳杆菌的乳品有一定的生产，但主要以酸奶为主，且用的发酵剂均来自国外。目前国内尚无嗜酸乳杆菌奶片的报道。嗜酸乳杆菌和其他乳酸菌一样比较“娇气”，不仅营养要求苛刻，而且对外界不良因素抵抗力弱，对低温、高温均非常敏感。因此，研究的焦点是嗜酸乳杆菌在奶片中的存活问题。按奶片生产工艺，在鲜乳喷粉和粉体压片两个关键环节中，菌体易死亡。
发明内容
本发明的目的在于克服上述现有技术的缺点，提供了一种活菌数多、活性高、菌存活期长且贮运方便的嗜酸乳杆菌奶片的制备工艺。
为达到上述目的，本发明采用的制备工艺为：出发菌株的选择：首先以从自然界中分离筛选的嗜酸乳杆菌菌株作为出发菌株；分别称取鳖甲、白扁豆、小蓟、三七、蒺藜、蛤蚧、莲子、韭菜籽、山药、小茴香、槐花、佩兰、桑叶、木贼、黄芪、酸枣仁、筚芨、菊苣或北沙参按1∶10的质量比加入饮用水中，浸泡25-35分钟，煮沸，然后在100℃保持25-35分钟，用200目滤布过滤，得滤液I；再按1∶10的质量比将过滤得到的药渣加入饮用水中，煮沸，然后在100℃下保持25-35分钟，用200目滤布过滤，得滤液II；将滤液I和滤液II按1∶1的质量比混合，即可得到鳖甲、白扁豆、小蓟、三七、蒺藜、蛤蚧、莲子、韭菜籽、山药、小茴香、槐花、佩兰、桑叶、木贼、黄芪、酸枣仁、筚芨、菊苣或北沙参的单个煎煮液；菌悬液的制备：将出发菌株分别接种于上述单个煎煮液中，使其终浓度为1.0×106个/毫升，于37℃下培养2～3天，以7000转/分离心收集菌体，分别将得到的菌体与质量浓度为0.85％的无菌生理盐水混合，制成浓度为1.0×108个/毫升的菌悬液；诱变育种：分别将菌悬液用20W的紫外线灯预热20分钟后取10毫升置于带有磁棒的培养皿中，将培养皿放置于诱变箱的磁力搅拌器上，在磁力搅拌下，用20W的紫外线灯照射15～30秒；照射完后置于黑暗处0.5小时后分别取1毫升接入20毫升煎煮液中，在30℃温度下振荡培养过夜，再于65～85℃温度下保温5～60分种，涂布或划线平板，于37℃温度下培养，待菌落长出后，进行筛选；高温型嗜酸乳杆菌菌株的筛选：选择细胞杆形、短链或长链排列，革蓝氏染色阳性，菌落较小，微白色，湿润，圆形，直径为0.5mm，边缘似星状；生长温度范围为12～50℃，能发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、果糖产酸不产气，发酵糖的主要代谢产物为乳酸和微量的其他有机酸，属于同型乳酸发酵；能在4％氯化钠培养基中生长，耐酸耐胆汁盐，同时，所选菌株耐高温，即在65～85℃下能存活5～60分钟，能均匀凝固牛乳，凝乳组织细腻的高温型嗜酸乳杆菌1-2株；混合、干燥、压片：将得到的高温型嗜酸乳杆菌接种于固形物含量为40～50％的浓缩乳中，使高温型嗜酸乳杆菌最终浓度为1.0×108个/克，然后加入浓缩乳质量3％的糊精、0.005％的维生素B12及2％的葡萄糖，在进风温度125～135℃，塔温70～75℃，排风温度70～75℃的条件下进行喷雾干燥，得到含高温型嗜酸乳杆菌的乳粉，最后按质量比将50-60％的乳粉，20-30％的植脂末，5-10％的麦芽糊精和5-10％的鳖甲、白扁豆、小蓟、三七、蒺藜、蛤蚧、莲子、韭菜籽、山药、小茴香、槐花、佩兰、桑叶、木贼、黄芪、酸枣仁、筚芨、菊苣或北沙参的单个煎煮液混合，压片成型，即可制得含嗜酸乳杆菌和中草药的复合型奶片。
本发明采用诱变育种法选育抗高温突变型嗜酸乳杆菌菌株，即嗜酸乳杆菌LA201菌株；并从中草药的提取液和微生物培养液中发现能降低菌体死亡的物质，由于抗高温嗜酸乳杆菌菌株的成功选育和保护剂的发现，使得嗜酸乳杆菌奶片的生产，可采用普通奶粉生产的高温喷雾干燥设备，连续批量喷粉，然后按常规压片法压片成型，可制成含菌量大、菌活性高的嗜酸乳杆菌奶片。
具体实施方式
实施例1：首先以从自然界中分离筛选的嗜酸乳杆菌菌株作为出发菌株；分别称取鳖甲、白扁豆、小蓟、三七、蒺藜、蛤蚧、莲子、韭菜籽、山药、小茴香、槐花、佩兰、桑叶、木贼、黄芪、酸枣仁、筚芨、菊苣或北沙参按1∶10的质量比加入饮用水中，浸泡25分钟，煮沸，然后在100℃保持25分钟，用200目滤布过滤，得滤液I；再按1∶10的质量比将药渣加入饮用水中，煮沸，然后在100℃下保持25分钟，用200目滤布过滤，得滤液II；将滤液I和滤液II按1∶1的质量比混合，即可得到鳖甲、白扁豆、小蓟、三七、蒺藜、蛤蚧、莲子、韭菜籽、山药、小茴香、槐花、佩兰、桑叶、木贼、黄芪、酸枣仁、筚芨、菊苣或北沙参的单个煎煮液；将出发菌株分别接种于上述单个煎煮液中，使其终浓度为1.0×106个/毫升，于37℃下培养3天，以7000转/分离心收集菌体，将分别得到的菌体与质量浓度为0.85％的无菌生理盐水混合，制成浓度为1.0×108个/毫升的菌悬液；分别将菌悬液用20W的紫外线灯预热20分钟后取10毫升置于带有磁棒的培养皿中，将培养皿放置于诱变箱的磁力搅拌器上，在磁力搅拌下，用20W的紫外线灯照射30秒；照射完后置于黑暗处0.5小时后分别取1毫升接入20毫升煎煮液中，在30℃下振荡培养过夜，再于65℃下保温60分种，涂布或划线平板，于37℃下培养，待菌落长出后，进行筛选；选择细胞杆形、短链或长链排列，革蓝氏染色阳性，菌落较小，微白色，湿润，圆形，直径约0.5mm，边缘似星状；生长温度范围为12～50℃，能发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、果糖产酸不产气，发酵糖的主要代谢产物为乳酸和微量的其他有机酸，属于同型乳酸发酵；能在4％氯化钠培养基中生长，耐酸耐胆汁盐，同时，所选菌株耐高温，即在65～85℃下能存活5～60分钟，能均匀凝固牛乳，凝乳组织细腻的高温型嗜酸乳杆菌1-2株；将得到的高温型嗜酸乳杆菌接种于固形物含量为40％的浓缩乳中，使高温型嗜酸乳杆菌最终浓度为1.0×108个/克，然后加入鲜乳质量3％的糊精、0.005％的维生素B12及2％的葡萄糖，在进风温度125～135℃，塔温70～75℃，排风温度70～75℃的条件下进行喷雾干燥，得到含高温型嗜酸乳杆菌的乳粉，最后按质量比将60％的乳粉，20％的植脂末，10％的麦芽糊精，10％的鳖甲、白扁豆、小蓟、三七、蒺藜、蛤蚧、莲子、韭菜籽、山药、小茴香、槐花、佩兰、桑叶、木贼、黄芪、酸枣仁、筚芨、菊苣或北沙参的单个煎煮液混合，压片成型，即可制得含嗜酸乳杆菌和中草药的复合型奶片。
实施例2：首先以从自然界中分离筛选的嗜酸乳杆菌菌株作为出发菌株；分别称取鳖甲、白扁豆、小蓟、三七、蒺藜、蛤蚧、莲子、韭菜籽、山药、小茴香、槐花、佩兰、桑叶、木贼、黄芪、酸枣仁、筚芨、菊苣或北沙参按1∶10的质量比加入饮用水中，浸泡35分钟，煮沸，然后在100℃保持32分钟，用200目滤布过滤，得滤液I；再按1∶10的质量比将药渣加入饮用水中，煮沸，然后在100℃下保持35分钟，用200目滤布过滤，得滤液II；将滤液I和滤液II按1∶1的质量比混合，即可得到鳖甲、白扁豆、小蓟、三七、蒺藜、蛤蚧、莲子、韭菜籽、山药、小茴香、槐花、佩兰、桑叶、木贼、黄芪、酸枣仁、筚芨、菊苣或北沙参的单个煎煮液；将出发菌株分别接种于上述单个煎煮液中，使其终浓度为1.0×106个/毫升，于37℃下培养2天，以7000转/分离心收集菌体，将分别得到的菌体与质量浓度为0.85％的无菌生理盐水混合，制成浓度为1.0×108个/毫升的菌悬液；分别将菌悬液用20W的紫外线灯预热20分钟后取10毫升置于带有磁棒的培养皿中，将培养皿放置于诱变箱的磁力搅拌器上，在磁力搅拌下，用20W的紫外线灯照射25秒；照射完后置于黑暗处0.5小时后，分别取1毫升接入20毫升煎煮液中，在30℃振荡培养过夜，再于72℃下保温5分种，涂布或划线平板，于37℃下培养，待菌落长出后，进行筛选；选择细胞杆形、短链或长链排列，革蓝氏染色阳性，菌落较小，微白色，湿润，圆形，直径约0.5mm，边缘似星状；生长温度范围为12～50℃，能发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、果糖产酸不产气，发酵糖的主要代谢产物为乳酸和微量的其他有机酸，属于同型乳酸发酵；能在4％氯化钠培养基中生长，耐酸耐胆汁盐，同时，所选菌株耐高温，即在65～85℃下能存活5～60分钟，能均匀凝固牛乳，凝乳组织细腻的高温型嗜酸乳杆菌1-2株；将得到的高温型嗜酸乳杆菌接种于固形物含量为50％的浓缩乳中，使高温型嗜酸乳杆菌最终浓度为1.0×108个/克，然后加入鲜乳质量3％的糊精、0.005％的维生素B12及2％的葡萄糖，在进风温度125～135℃，塔温70～75℃，排风温度70～75℃的条件下进行喷雾干燥，得到含高温型嗜酸乳杆菌的乳粉，最后按质量比将50％的乳粉，30％的植脂末，10％的麦芽糊精，10％的鳖甲、白扁豆、小蓟、三七、蒺藜、蛤蚧、莲子、韭菜籽、山药、小茴香、槐花、佩兰、桑叶、木贼、黄芪、酸枣仁、筚芨、菊苣或北沙参的单个煎煮液混合，压片成型，即可制得含嗜酸乳杆菌和中草药的复合型奶片。
实施例3：首先以从自然界中分离筛选的嗜酸乳杆菌菌株作为出发菌株；分别称取鳖甲、白扁豆、小蓟、三七、蒺藜、蛤蚧、莲子、韭菜籽、山药、小茴香、槐花、佩兰、桑叶、木贼、黄芪、酸枣仁、筚芨、菊苣或北沙参按1∶10的质量比加入饮用水中，浸泡28分钟，煮沸，然后在100℃保持30分钟，用200目滤布过滤，得滤液I；再按1∶10的质量比将药渣加入饮用水中，煮沸，然后在100℃下保持32分钟，用200目滤布过滤，得滤液II；将滤液I和滤液II按1∶1的质量比混合，即可得到鳖甲、白扁豆、小蓟、三七、蒺藜、蛤蚧、莲子、韭菜籽、山药、小茴香、槐花、佩兰、桑叶、木贼、黄芪、酸枣仁、筚芨、菊苣或北沙参的单个煎煮液；将出发菌株分别接种于上述单个煎煮液中，使其终浓度为1.0×106个/毫升，于37℃下培养2天，以7000转/分离心收集菌体，将分别得到的菌体与质量浓度为0.85％的无菌生理盐水混合，制成浓度为1.0×108个/毫升的菌悬液；分别将菌悬液用20W的紫外线灯预热20分钟后取10毫升置于带有磁棒的培养皿中，将培养皿放置于诱变箱的磁力搅拌器上，在磁力搅拌下，用20W的紫外线灯照射15秒；照射完后置于黑暗处0.5小时后，分别取1毫升接入20毫升煎煮液中，在30℃振荡培养过夜，再于85℃下保温30分种，涂布或划线平板，于37℃下培养，待菌落长出后，进行筛选；选择细胞杆形、短链或长链排列，革蓝氏染色阳性，菌落较小，微白色，湿润，圆形，直径约0.5mm，边缘似星状；生长温度范围为12～50℃，能发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、果糖产酸不产气，发酵糖的主要代谢产物为乳酸和微量的其他有机酸，属于同型乳酸发酵；能在4％氯化钠培养基中生长，耐酸耐胆汁盐，同时，所选菌株耐高温，即在65～85℃下能存活5～60分钟，能均匀凝固牛乳，凝乳组织细腻的高温型嗜酸乳杆菌1-2株；将得到的高温型嗜酸乳杆菌接种于固形物含量为43％的浓缩乳中，使高温型嗜酸乳杆菌最终浓度为1.0×108个/克，然后加入鲜乳质量3％的糊精、0.005％的维生素B12及2％的葡萄糖，在进风温度125～135℃，塔温70～75℃，排风温度70～75℃的条件下进行喷雾干燥，得到含高温型嗜酸乳杆菌的乳粉，最后按质量比将60％的乳粉，30％的植脂末，5％的麦芽糊精，5％的鳖甲、白扁豆、小蓟、三七、蒺藜、蛤蚧、莲子、韭菜籽、山药、小茴香、槐花、佩兰、桑叶、木贼、黄芪、酸枣仁、筚芨、菊苣或北沙参的单个煎煮液混合，压片成型，即可制得含嗜酸乳杆菌和中草药的复合型奶片。
实施例4：首先以从自然界中分离筛选的嗜酸乳杆菌菌株作为出发菌株；分别称取鳖甲、白扁豆、小蓟、三七、蒺藜、蛤蚧、莲子、韭菜籽、山药、小茴香、槐花、佩兰、桑叶、木贼、黄芪、酸枣仁、筚芨、菊苣或北沙参按1∶10的质量比加入饮用水中，浸泡32分钟，煮沸，然后在100℃保持35分钟，用200目滤布过滤，得滤液I；再按1∶10的质量比将药渣加入饮用水中，煮沸，然后在100℃下保持30分钟，用200目滤布过滤，得滤液II；将滤液I和滤液II按1∶1的质量比混合，即可得到鳖甲、白扁豆、小蓟、三七、蒺藜、蛤蚧、莲子、韭菜籽、山药、小茴香、槐花、佩兰、桑叶、木贼、黄芪、酸枣仁、筚芨、菊苣或北沙参的单个煎煮液；将出发菌株分别接种于上述单个煎煮液中，使其终浓度为1.0×106个/毫升，于37℃下培养2天，以7000转/分离心收集菌体，将分别得到的菌体与质量浓度为0.85％的无菌生理盐水混合，制成浓度为1.0×108个/毫升的菌悬液；分别将菌悬液用20W的紫外线灯预热20分钟后取10毫升置于带有磁棒的培养皿中，将培养皿放置于诱变箱的磁力搅拌器上，在磁力搅拌下，用20W的紫外线灯照射20秒；照射完后置于黑暗处0.5小时后，分别取1毫升接入20毫升煎煮液中，在30℃振荡培养过夜，再于70℃下保温45分种，涂布或划线平板，于37℃下培养，待菌落长出后，进行筛选；选择细胞杆形、短链或长链排列，革蓝氏染色阳性，菌落较小，微白色，湿润，圆形，直径约0.5mm，边缘似星状；生长温度范围为12～50℃，能发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、果糖产酸不产气，发酵糖的主要代谢产物为乳酸和微量的其他有机酸，属于同型乳酸发酵；能在4％氯化钠培养基中生长，耐酸耐胆汁盐，同时，所选菌株耐高温，即在65～85℃下能存活5～60分钟，能均匀凝固牛乳，凝乳组织细腻的高温型嗜酸乳杆菌1-2株；将得到的高温型嗜酸乳杆菌接种于固形物含量为48％的浓缩乳中，使高温型嗜酸乳杆菌最终浓度为1.0×108个/克，然后加入鲜乳质量3％的糊精、0.005％的维生素B12及2％的葡萄糖，在进风温度125～135℃，塔温70～75℃，排风温度70～75℃的条件下进行喷雾干燥，得到含高温型嗜酸乳杆菌的乳粉，最后按质量比将58％的乳粉，25％的植脂末，8％的麦芽糊精，9％的鳖甲、白扁豆、小蓟、三七、蒺藜、蛤蚧、莲子、韭菜籽、山药、小茴香、槐花、佩兰、桑叶、木贼、黄芪、酸枣仁、筚芨、菊苣或北沙参的单个煎煮液混合，压片成型，即可制得含嗜酸乳杆菌和中草药的复合型奶片。
实施例5：首先以从自然界中分离筛选的嗜酸乳杆菌菌株作为出发菌株；分别称取鳖甲、白扁豆、小蓟、三七、蒺藜、蛤蚧、莲子、韭菜籽、山药、小茴香、槐花、佩兰、桑叶、木贼、黄芪、酸枣仁、筚芨、菊苣或北沙参按1∶10的质量比加入饮用水中，浸泡30分钟，煮沸，然后在100℃保持28分钟，用200目滤布过滤，得滤液I；再按1∶10的质量比将药渣加入饮用水中，煮沸，然后在100℃下保持26分钟，用200目滤布过滤，得滤液II；将滤液I和滤液II按1∶1的质量比混合，即可得到鳖甲、白扁豆、小蓟、三七、蒺藜、蛤蚧、莲子、韭菜籽、山药、小茴香、槐花、佩兰、桑叶、木贼、黄芪、酸枣仁、筚芨、菊苣或北沙参的单个煎煮液；将出发菌株分别接种于上述单个煎煮液中，使其终浓度为1.0×106个/毫升，于37℃下培养3天，以7000转/分离心收集菌体，将分别得到的菌体与质量浓度为0.85％的无菌生理盐水混合，制成浓度为1.0×108个/毫升的菌悬液；分别将菌悬液用20W的紫外线灯预热20分钟后取10毫升置于带有磁棒的培养皿中，将培养皿放置于诱变箱的磁力搅拌器上，在磁力搅拌下，用20W的紫外线灯照射28秒；照射完后置于黑暗处0.5小时后，分别取1毫升接入20毫升煎煮液中，在30℃振荡培养过夜，再于80℃下保温52分种，涂布或划线平板，于37℃下培养，待菌落长出后，进行筛选；选择细胞杆形、短链或长链排列，革蓝氏染色阳性，菌落较小，微白色，湿润，圆形，直径约0.5mm，边缘似星状；生长温度范围为12～50℃，能发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、果糖产酸不产气，发酵糖的主要代谢产物为乳酸和微量的其他有机酸，属于同型乳酸发酵；能在4％氯化钠培养基中生长，耐酸耐胆汁盐，同时，所选菌株耐高温，即在65～85℃下能存活5～60分钟，能均匀凝固牛乳，凝乳组织细腻的高温型嗜酸乳杆菌1-2株；将得到的高温型嗜酸乳杆菌接种于固形物含量为45％的浓缩乳中，使高温型嗜酸乳杆菌最终浓度为1.0×108个/克，然后加入鲜乳质量3％的糊精、0.005％的维生素B12及2％的葡萄糖，在进风温度125～135℃，塔温70～75℃，排风温度70～75℃的条件下进行喷雾干燥，得到含高温型嗜酸乳杆菌的乳粉，最后按质量比将59％的乳粉，28％的植脂末，6％的麦芽糊精，7％的鳖甲、白扁豆、小蓟、三七、蒺藜、蛤蚧、莲子、韭菜籽、山药、小茴香、槐花、佩兰、桑叶、木贼、黄芪、酸枣仁、筚芨、菊苣或北沙参的单个煎煮液混合，压片成型，即可制得含嗜酸乳杆菌和中草药的复合型奶片。
实施例6：首先以从自然界中分离筛选的嗜酸乳杆菌菌株作为出发菌株；分别称取鳖甲、白扁豆、小蓟、三七、蒺藜、蛤蚧、莲子、韭菜籽、山药、小茴香、槐花、佩兰、桑叶、木贼、黄芪、酸枣仁、筚芨、菊苣或北沙参按1∶10的质量比加入饮用水中，浸泡26分钟，煮沸，然后在100℃保持26分钟，用200目滤布过滤，得滤液I；再按1∶10的质量比将药渣加入饮用水中，煮沸，然后在100℃下保持28分钟，用200目滤布过滤，得滤液II；将滤液I和滤液II按1∶1的质量比混合，即可得到鳖甲、白扁豆、小蓟、三七、蒺藜、蛤蚧、莲子、韭菜籽、山药、小茴香、槐花、佩兰、桑叶、木贼、黄芪、酸枣仁、筚芨、菊苣或北沙参的单个煎煮液；将出发菌株分别接种于上述单个煎煮液中，使其终浓度为1.0×106个/毫升，于37℃下培养2天，以7000转/分离心收集菌体，将分别得到的菌体与质量浓度为0.85％的无菌生理盐水混合，制成浓度为1.0×108个/毫升的菌悬液；分别将菌悬液用20W的紫外线灯预热20分钟后取10毫升置于带有磁棒的培养皿中，将培养皿放置于诱变箱的磁力搅拌器上，在磁力搅拌下，用20W的紫外线灯照射17秒；照射完后置于黑暗处0.5小时后，分别取1毫升接入20毫升煎煮液中，在30℃振荡培养过夜，再于75℃下保温16分种，涂布或划线平板，于37℃下培养，待菌落长出后，进行筛选；选择细胞杆形、短链或长链排列，革蓝氏染色阳性，菌落较小，微白色，湿润，圆形，直径约0.5mm，边缘似星状；生长温度范围为12～50℃，能发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、果糖产酸不产气，发酵糖的主要代谢产物为乳酸和微量的其他有机酸，属于同型乳酸发酵；能在4％氯化钠培养基中生长，耐酸耐胆汁盐，同时，所选菌株耐高温，即在65～85℃下能存活5～60分钟，能均匀凝固牛乳，凝乳组织细腻的高温型嗜酸乳杆菌1-2株；将得到的高温型嗜酸乳杆菌接种于固形物含量为41％的浓缩乳中，使高温型嗜酸乳杆菌最终浓度为1.0×108个/克，然后加入鲜乳质量3％的糊精、0.005％的维生素B12及2％的葡萄糖，在进风温度125～135℃，塔温70～75℃，排风温度70～75℃的条件下进行喷雾干燥，得到含高温型嗜酸乳杆菌的乳粉，最后按质量比将55％的乳粉，27％的植脂末，9％的麦芽糊精，9％的鳖甲、白扁豆、小蓟、三七、蒺藜、蛤蚧、莲子、韭菜籽、山药、小茴香、槐花、佩兰、桑叶、木贼、黄芪、酸枣仁、筚芨、菊苣或北沙参的单个煎煮液混合，压片成型，即可制得含嗜酸乳杆菌和中草药的复合型奶片。
按照本发明的制备方法制成的嗜酸乳杆菌奶片是一种含有大量活的益生菌——嗜酸乳杆菌的奶片。本发明是先将新鲜牛乳按喷雾干燥工艺制成粉状，再加辅料和菌体保护剂调配后，压片成型制成奶片。与市售的普通不含活菌奶片一样，老少皆宜，可以长期食用。因其含有大量活的嗜酸乳杆菌，该菌和双歧杆菌一样是益生菌的代表菌之一，在食品中添加，经常食用有利于身体健康。
利用该法生产的嗜酸乳杆菌奶片，活菌数多(乳酸菌活菌数≥1.0×106CFU/g)，活性高，菌存活期长(12个月)，贮运方便，食用方便。
Claims (7)
1、一种嗜酸乳杆菌奶片的制备工艺，其特征在于：
1)出发菌株的选择
首先以从自然界中分离筛选的嗜酸乳杆菌菌株作为出发菌株；
2)分别称取鳖甲、白扁豆、小蓟、三七、蒺藜、蛤蚧、莲子、韭菜籽、山药、小茴香、槐花、佩兰、桑叶、木贼、黄芪、酸枣仁、筚芨、菊苣或北沙参按1∶10的质量比加入饮用水中，浸泡25-35分钟，煮沸，然后在100℃保持25-35分钟，用200目滤布过滤，得滤液I；
再按1∶10的质量比将过滤得到的药渣加入饮用水中，煮沸，然后在100℃下保持25-35分钟，用200目滤布过滤，得滤液II；
将滤液I和滤液II按1∶1的质量比混合，即可得到鳖甲、白扁豆、小蓟、三七、蒺藜、蛤蚧、莲子、韭菜籽、山药、小茴香、槐花、佩兰、桑叶、木贼、黄芪、酸枣仁、筚芨、菊苣或北沙参的单个煎煮液；
3)菌悬液的制备
将出发菌株分别接种于上述单个煎煮液中，使其终浓度为1.0×106个/毫升，于37℃下培养2～3天，以7000转/分离心收集菌体，分别将得到的菌体与质量浓度为0.85％的无菌生理盐水混合，制成浓度为1.0×108个/毫升的菌悬液；
4)诱变育种
分别将菌悬液用20W的紫外线灯预热20分钟后取10毫升置于带有磁棒的培养皿中，将培养皿放置于诱变箱的磁力搅拌器上，在磁力搅拌下，用20W的紫外线灯照射15～30秒；照射完后置于黑暗处0.5小时后分别取1毫升接入20毫升煎煮液中，在30℃温度下振荡培养过夜，再于65～85℃温度下保温5～60分种，涂布或划线平板，于37℃温度下培养，待菌落长出后，进行筛选；
5)高温型嗜酸乳杆菌菌株的筛选
选择细胞杆形、短链或长链排列，革蓝氏染色阳性，菌落较小，微白色，湿润，圆形，直径为0.5mm，边缘似星状；生长温度范围为12～50℃，能发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、果糖产酸不产气，发酵糖的主要代谢产物为乳酸和微量的其他有机酸，属于同型乳酸发酵；能在4％氯化钠培养基中生长，耐酸耐胆汁盐，同时，所选菌株耐高温，即在65～85℃下能存活5～60分钟，能均匀凝固牛乳，凝乳组织细腻的高温型嗜酸乳杆菌1-2株；
6)混合、干燥、压片
将得到的高温型嗜酸乳杆菌接种于固形物含量为40～50％的浓缩乳中，使高温型嗜酸乳杆菌最终浓度为1.0×108个/克，然后加入浓缩乳质量3％的糊精、0.005％的维生素B12及2％的葡萄糖，在进风温度125～135℃，塔温70～75℃，排风温度70～75℃的条件下进行喷雾干燥，得到含高温型嗜酸乳杆菌的乳粉，最后按质量比将50-60％的乳粉，20-30％的植脂末，5-10％的麦芽糊精和5-10％的鳖甲、白扁豆、小蓟、三七、蒺藜、蛤蚧、莲子、韭菜籽、山药、小茴香、槐花、佩兰、桑叶、木贼、黄芪、酸枣仁、筚芨、菊苣或北沙参的单个煎煮液混合，压片成型，即可制得含嗜酸乳杆菌和中草药的复合型奶片。
2、根据权利要求1所述的嗜酸乳杆菌奶片的制备工艺，其特征在于：首先以从自然界中分离筛选的嗜酸乳杆菌菌株作为出发菌株；分别称取鳖甲、白扁豆、小蓟、三七、蒺藜、蛤蚧、莲子、韭菜籽、山药、小茴香、槐花、佩兰、桑叶、木贼、黄芪、酸枣仁、筚芨、菊苣或北沙参按1∶10的质量比加入饮用水中，浸泡25分钟，煮沸，然后在100℃保持25分钟，用200目滤布过滤，得滤液I；再按1∶10的质量比将药渣加入饮用水中，煮沸，然后在100℃下保持25分钟，用200目滤布过滤，得滤液II；将滤液I和滤液II按1∶1的质量比混合，即可得到鳖甲、白扁豆、小蓟、三七、蒺藜、蛤蚧、莲子、韭菜籽、山药、小茴香、槐花、佩兰、桑叶、木贼、黄芪、酸枣仁、筚芨、菊苣或北沙参的单个煎煮液；将出发菌株分别接种于上述单个煎煮液中，使其终浓度为1.0×106个/毫升，于37℃下培养3天，以7000转/分离心收集菌体，将分别得到的菌体与质量浓度为0.85％的无菌生理盐水混合，制成浓度为1.0×108个/毫升的菌悬液；分别将菌悬液用20W的紫外线灯预热20分钟后取10毫升置于带有磁棒的培养皿中，将培养皿放置于诱变箱的磁力搅拌器上，在磁力搅拌下，用20W的紫外线灯照射30秒；照射完后置于黑暗处0.5小时后分别取1毫升接入20毫升煎煮液中，在30℃下振荡培养过夜，再于65℃下保温60分种，涂布或划线平板，于37℃下培养，待菌落长出后，进行筛选；选择细胞杆形、短链或长链排列，革蓝氏染色阳性，菌落较小，微白色，湿润，圆形，直径约0.5mm，边缘似星状；生长温度范围为12～50℃，能发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、果糖产酸不产气，发酵糖的主要代谢产物为乳酸和微量的其他有机酸，属于同型乳酸发酵；能在4％氯化钠培养基中生长，耐酸耐胆汁盐，同时，所选菌株耐高温，即在65～85℃下能存活5～60分钟，能均匀凝固牛乳，凝乳组织细腻的高温型嗜酸乳杆菌1-2株；将得到的高温型嗜酸乳杆菌接种于固形物含量为40％的浓缩乳中，使高温型嗜酸乳杆菌最终浓度为1.0×108个/克，然后加入鲜乳质量3％的糊精、0.005％的维生素B12及2％的葡萄糖，在进风温度125～135℃，塔温70～75℃，排风温度70～75℃的条件下进行喷雾干燥，得到含高温型嗜酸乳杆菌的乳粉，最后按质量比将60％的乳粉，20％的植脂末，10％的麦芽糊精，10％的鳖甲、白扁豆、小蓟、三七、蒺藜、蛤蚧、莲子、韭菜籽、山药、小茴香、槐花、佩兰、桑叶、木贼、黄芪、酸枣仁、筚芨、菊苣或北沙参的单个煎煮液混合，压片成型，即可制得含嗜酸乳杆菌和中草药的复合型奶片。
3、根据权利要求1所述的嗜酸乳杆菌奶片的制备工艺，其特征在于：首先以从自然界中分离筛选的嗜酸乳杆菌菌株作为出发菌株；分别称取鳖甲、白扁豆、小蓟、三七、蒺藜、蛤蚧、莲子、韭菜籽、山药、小茴香、槐花、佩兰、桑叶、木贼、黄芪、酸枣仁、筚芨、菊苣或北沙参按1∶10的质量比加入饮用水中，浸泡35分钟，煮沸，然后在100℃保持32分钟，用200目滤布过滤，得滤液I；再按1∶10的质量比将药渣加入饮用水中，煮沸，然后在100℃下保持35分钟，用200目滤布过滤，得滤液II；将滤液I和滤液II按1∶1的质量比混合，即可得到鳖甲、白扁豆、小蓟、三七、蒺藜、蛤蚧、莲子、韭菜籽、山药、小茴香、槐花、佩兰、桑叶、木贼、黄芪、酸枣仁、筚芨、菊苣或北沙参的单个煎煮液；将出发菌株分别接种于上述单个煎煮液中，使其终浓度为1.0×106个/毫升，于37℃下培养2天，以7000转/分离心收集菌体，将分别得到的菌体与质量浓度为0.85％的无菌生理盐水混合，制成浓度为1.0×108个/毫升的菌悬液；分别将菌悬液用20W的紫外线灯预热20分钟后取10毫升置于带有磁棒的培养皿中，将培养皿放置于诱变箱的磁力搅拌器上，在磁力搅拌下，用20W的紫外线灯照射25秒；照射完后置于黑暗处0.5小时后，分别取1毫升接入20毫升煎煮液中，在30℃振荡培养过夜，再于72℃下保温5分种，涂布或划线平板，于37℃下培养，待菌落长出后，进行筛选；选择细胞杆形、短链或长链排列，革蓝氏染色阳性，菌落较小，微白色，湿润，圆形，直径约0.5mm，边缘似星状；生长温度范围为12～50℃，能发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、果糖产酸不产气，发酵糖的主要代谢产物为乳酸和微量的其他有机酸，属于同型乳酸发酵；能在4％氯化钠培养基中生长，耐酸耐胆汁盐，同时，所选菌株耐高温，即在65～85℃下能存活5～60分钟，能均匀凝固牛乳，凝乳组织细腻的高温型嗜酸乳杆菌1-2株；将得到的高温型嗜酸乳杆菌接种于固形物含量为50％的浓缩乳中，使高温型嗜酸乳杆菌最终浓度为1.0×108个/克，然后加入鲜乳质量3％的糊精、0.005％的维生素B12及2％的葡萄糖，在进风温度125～135℃，塔温70～75℃，排风温度70～75℃的条件下进行喷雾干燥，得到含高温型嗜酸乳杆菌的乳粉，最后按质量比将50％的乳粉，30％的植脂末，10％的麦芽糊精，10％的鳖甲、白扁豆、小蓟、三七、蒺藜、蛤蚧、莲子、韭菜籽、山药、小茴香、槐花、佩兰、桑叶、木贼、黄芪、酸枣仁、筚芨、菊苣或北沙参的单个煎煮液混合，压片成型，即可制得含嗜酸乳杆菌和中草药的复合型奶片。
4、根据权利要求1所述的嗜酸乳杆菌奶片的制备工艺，其特征在于：首先以从自然界中分离筛选的嗜酸乳杆菌菌株作为出发菌株；分别称取鳖甲、白扁豆、小蓟、三七、蒺藜、蛤蚧、莲子、韭菜籽、山药、小茴香、槐花、佩兰、桑叶、木贼、黄芪、酸枣仁、筚芨、菊苣或北沙参按1∶10的质量比加入饮用水中，浸泡28分钟，煮沸，然后在100℃保持30分钟，用200目滤布过滤，得滤液I；再按1∶10的质量比将药渣加入饮用水中，煮沸，然后在100℃下保持32分钟，用200目滤布过滤，得滤液II；将滤液I和滤液II按1∶1的质量比混合，即可得到鳖甲、白扁豆、小蓟、三七、蒺藜、蛤蚧、莲子、韭菜籽、山药、小茴香、槐花、佩兰、桑叶、木贼、黄芪、酸枣仁、筚芨、菊苣或北沙参的单个煎煮液；将出发菌株分别接种于上述单个煎煮液中，使其终浓度为1.0×106个/毫升，于37℃下培养2天，以7000转/分离心收集菌体，将分别得到的菌体与质量浓度为0.85％的无菌生理盐水混合，制成浓度为1.0×108个/毫升的菌悬液；分别将菌悬液用20W的紫外线灯预热20分钟后取10毫升置于带有磁棒的培养皿中，将培养皿放置于诱变箱的磁力搅拌器上，在磁力搅拌下，用20W的紫外线灯照射15秒；照射完后置于黑暗处0.5小时后，分别取1毫升接入20毫升煎煮液中，在30℃振荡培养过夜，再于85℃下保温30分种，涂布或划线平板，于37℃下培养，待菌落长出后，进行筛选；选择细胞杆形、短链或长链排列，革蓝氏染色阳性，菌落较小，微白色，湿润，圆形，直径约0.5mm，边缘似星状；生长温度范围为12～50℃，能发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、果糖产酸不产气，发酵糖的主要代谢产物为乳酸和微量的其他有机酸，属于同型乳酸发酵；能在4％氯化钠培养基中生长，耐酸耐胆汁盐，同时，所选菌株耐高温，即在65～85℃下能存活5～60分钟，能均匀凝固牛乳，凝乳组织细腻的高温型嗜酸乳杆菌1-2株；将得到的高温型嗜酸乳杆菌接种子固形物含量为43％的浓缩乳中，使高温型嗜酸乳杆菌最终浓度为1.0×108个/克，然后加入鲜乳质量3％的糊精、0.005％的维生素B12及2％的葡萄糖，在进风温度125～135℃，塔温70～75℃，排风温度70～75℃的条件下进行喷雾干燥，得到含高温型嗜酸乳杆菌的乳粉，最后按质量比将60％的乳粉，30％的植脂末，5％的麦芽糊精，5％的鳖甲、白扁豆、小蓟、三七、蒺藜、蛤蚧、莲子、韭菜籽、山药、小茴香、槐花、佩兰、桑叶、木贼、黄芪、酸枣仁、筚芨、菊苣或北沙参的单个煎煮液混合，压片成型，即可制得含嗜酸乳杆菌和中草药的复合型奶片。
5、根据权利要求1所述的嗜酸乳杆菌奶片的制备工艺，其特征在于：首先以从自然界中分离筛选的嗜酸乳杆菌菌株作为出发菌株；分别称取鳖甲、白扁豆、小蓟、三七、蒺藜、蛤蚧、莲子、韭菜籽、山药、小茴香、槐花、佩兰、桑叶、木贼、黄芪、酸枣仁、筚芨、菊苣或北沙参按1∶10的质量比加入饮用水中，浸泡32分钟，煮沸，然后在100℃保持35分钟，用200目滤布过滤，得滤液I；再按1∶10的质量比将药渣加入饮用水中，煮沸，然后在100℃下保持30分钟，用200目滤布过滤，得滤液II；将滤液I和滤液II按1∶1的质量比混合，即可得到鳖甲、白扁豆、小蓟、三七、蒺藜、蛤蚧、莲子、韭菜籽、山药、小茴香、槐花、佩兰、桑叶、木贼、黄芪、酸枣仁、筚芨、菊苣或北沙参的单个煎煮液；将出发菌株分别接种于上述单个煎煮液中，使其终浓度为1.0×106个/毫升，于37℃下培养2天，以7000转/分离心收集菌体，将分别得到的菌体与质量浓度为0.85％的无菌生理盐水混合，制成浓度为1.0×108个/毫升的菌悬液；分别将菌悬液用20W的紫外线灯预热20分钟后取10毫升置于带有磁棒的培养皿中，将培养皿放置于诱变箱的磁力搅拌器上，在磁力搅拌下，用20W的紫外线灯照射20秒；照射完后置于黑暗处0.5小时后，分别取1毫升接入20毫升煎煮液中，在30℃振荡培养过夜，再于70℃下保温45分种，涂布或划线平板，于37℃下培养，待菌落长出后，进行筛选；选择细胞杆形、短链或长链排列，革蓝氏染色阳性，菌落较小，微白色，湿润，圆形，直径约0.5mm，边缘似星状；生长温度范围为12～50℃，能发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、果糖产酸不产气，发酵糖的主要代谢产物为乳酸和微量的其他有机酸，属于同型乳酸发酵；能在4％氯化钠培养基中生长，耐酸耐胆汁盐，同时，所选菌株耐高温，即在65～85℃下能存活5～60分钟，能均匀凝固牛乳，凝乳组织细腻的高温型嗜酸乳杆菌1-2株；将得到的高温型嗜酸乳杆菌接种于固形物含量为48％的浓缩乳中，使高温型嗜酸乳杆菌最终浓度为1.0×108个/克，然后加入鲜乳质量3％的糊精、0.005％的维生素B12及2％的葡萄糖，在进风温度125～135℃，塔温70～75℃，排风温度70～75℃的条件下进行喷雾干燥，得到含高温型嗜酸乳杆菌的乳粉，最后按质量比将58％的乳粉，25％的植脂末，8％的麦芽糊精，9％的鳖甲、白扁豆、小蓟、三七、蒺藜、蛤蚧、莲子、韭菜籽、山药、小茴香、槐花、佩兰、桑叶、木贼、黄芪、酸枣仁、筚芨、菊苣或北沙参的单个煎煮液混合，压片成型，即可制得含嗜酸乳杆菌和中草药的复合型奶片。
6、根据权利要求1所述的嗜酸乳杆菌奶片的制备工艺，其特征在于：首先以从自然界中分离筛选的嗜酸乳杆菌菌株作为出发菌株；分别称取鳖甲、白扁豆、小蓟、三七、蒺藜、蛤蚧、莲子、韭菜籽、山药、小茴香、槐花、佩兰、桑叶、木贼、黄芪、酸枣仁、筚芨、菊苣或北沙参按1∶10的质量比加入饮用水中，浸泡30分钟，煮沸，然后在100℃保持28分钟，用200目滤布过滤，得滤液I；再按1∶10的质量比将药渣加入饮用水中，煮沸，然后在100℃下保持26分钟，用200目滤布过滤，得滤液II；将滤液I和滤液II按1∶1的质量比混合，即可得到鳖甲、白扁豆、小蓟、三七、蒺藜、蛤蚧、莲子、韭菜籽、山药、小茴香、槐花、佩兰、桑叶、木贼、黄芪、酸枣仁、筚芨、菊苣或北沙参的单个煎煮液；将出发菌株分别接种于上述单个煎煮液中，使其终浓度为1.0×106个/毫升，于37℃下培养3天，以7000转/分离心收集菌体，将分别得到的菌体与质量浓度为0.85％的无菌生理盐水混合，制成浓度为1.0×108个/毫升的菌悬液；分别将菌悬液用20W的紫外线灯预热20分钟后取10毫升置于带有磁棒的培养皿中，将培养皿放置于诱变箱的磁力搅拌器上，在磁力搅拌下，用20W的紫外线灯照射28秒；照射完后置于黑暗处0.5小时后，分别取1毫升接入20毫升煎煮液中，在30℃振荡培养过夜，再于80℃下保温52分种，涂布或划线平板，于37℃下培养，待菌落长出后，进行筛选；选择细胞杆形、短链或长链排列，革蓝氏染色阳性，菌落较小，微白色，湿润，圆形，直径约0.5mm，边缘似星状；生长温度范围为12～50℃，能发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、果糖产酸不产气，发酵糖的主要代谢产物为乳酸和微量的其他有机酸，属于同型乳酸发酵；能在4％氯化钠培养基中生长，耐酸耐胆汁盐，同时，所选菌株耐高温，即在65～85℃下能存活5～60分钟，能均匀凝固牛乳，凝乳组织细腻的高温型嗜酸乳杆菌1-2株；将得到的高温型嗜酸乳杆菌接种于固形物含量为45％的浓缩乳中，使高温型嗜酸乳杆菌最终浓度为1.0×108个/克，然后加入鲜乳质量3％的糊精、0.005％的维生素B12及2％的葡萄糖，在进风温度125～135℃，塔温70～75℃，排风温度70～75℃的条件下进行喷雾干燥，得到含高温型嗜酸乳杆菌的乳粉，最后按质量比将59％的乳粉，28％的植脂末，6％的麦芽糊精，7％的鳖甲、白扁豆、小蓟、三七、蒺藜、蛤蚧、莲子、韭菜籽、山药、小茴香、槐花、佩兰、桑叶、木贼、黄芪、酸枣仁、筚芨、菊苣或北沙参的单个煎煮液混合，压片成型，即可制得含嗜酸乳杆菌和中草药的复合型奶片。
7、根据权利要求1所述的嗜酸乳杆菌奶片的制备工艺，其特征在于：首先以从自然界中分离筛选的嗜酸乳杆菌菌株作为出发菌株；分别称取鳖甲、白扁豆、小蓟、三七、蒺藜、蛤蚧、莲子、韭菜籽、山药、小茴香、槐花、佩兰、桑叶、木贼、黄芪、酸枣仁、筚芨、菊苣或北沙参按1∶10的质量比加入饮用水中，浸泡26分钟，煮沸，然后在100℃保持26分钟，用200目滤布过滤，得滤液I；再按1∶10的质量比将药渣加入饮用水中，煮沸，然后在100℃下保持28分钟，用200目滤布过滤，得滤液II；将滤液I和滤液II按1∶1的质量比混合，即可得到鳖甲、白扁豆、小蓟、三七、蒺藜、蛤蚧、莲子、韭菜籽、山药、小茴香、槐花、佩兰、桑叶、木贼、黄芪、酸枣仁、筚芨、菊苣或北沙参的单个煎煮液；将出发菌株分别接种于上述单个煎煮液中，使其终浓度为1.0×106个/毫升，于37℃下培养2天，以7000转/分离心收集菌体，将分别得到的菌体与质量浓度为0.85％的无菌生理盐水混合，制成浓度为1.0×108个/毫升的菌悬液；分别将菌悬液用20W的紫外线灯预热20分钟后取10毫升置于带有磁棒的培养皿中，将培养皿放置于诱变箱的磁力搅拌器上，在磁力搅拌下，用20W的紫外线灯照射17秒；照射完后置于黑暗处0.5小时后，分别取1毫升接入20毫升煎煮液中，在30℃振荡培养过夜，再于75℃下保温16分种，涂布或划线平板，于37℃下培养，待菌落长出后，进行筛选；选择细胞杆形、短链或长链排列，革蓝氏染色阳性，菌落较小，微白色，湿润，圆形，直径约0.5mm，边缘似星状；生长温度范围为12～50℃，能发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、果糖产酸不产气，发酵糖的主要代谢产物为乳酸和微量的其他有机酸，属于同型乳酸发酵；能在4％氯化钠培养基中生长，耐酸耐胆汁盐，同时，所选菌株耐高温，即在65～85℃下能存活5～60分钟，能均匀凝固牛乳，凝乳组织细腻的高温型嗜酸乳杆菌1-2株；将得到的高温型嗜酸乳杆菌接种于固形物含量为41％的浓缩乳中，使高温型嗜酸乳杆菌最终浓度为1.0×108个/克，然后加入鲜乳质量3％的糊精、0.005％的维生素B12及2％的葡萄糖，在进风温度125～135℃，塔温70～75℃，排风温度70～75℃的条件下进行喷雾干燥，得到含高温型嗜酸乳杆菌的乳粉，最后按质量比将55％的乳粉，27％的植脂末，9％的麦芽糊精，9％的鳖甲、白扁豆、小蓟、三七、蒺藜、蛤蚧、莲子、韭菜籽、山药、小茴香、槐花、佩兰、桑叶、木贼、黄芪、酸枣仁、筚芨、菊苣或北沙参的单个煎煮液混合，压片成型，即可制得含嗜酸乳杆菌和中草药的复合型奶片。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |