CN1658893A

CN1658893A - 用于改善动脉粥样硬化的g类多肽

Info

Publication number: CN1658893A
Application number: CN038126680A
Authority: CN
Inventors: 艾伦·M·福格尔曼; 莫哈马德·内瓦布
Original assignee: University of California
Current assignee: University of California
Priority date: 2002-04-05
Filing date: 2003-04-01
Publication date: 2005-08-24
Anticipated expiration: 2023-04-01
Also published as: US20060258839A1; AU2003262142A1; ATE516811T1; CA2480217C; JP2005536456A; WO2003086326A2; AU2003262142C1; EP1496930A2; EP1496930A4; US6930085B2; AU2003262142B2; CN1658893B; HK1072896A1; CA2480217A1; JP4361809B2; WO2003086326A3; US20030191057A1; US7638494B2; EP1496930B1

Abstract

本发明提供能改善动脉粥样硬化或炎症应答的特征性其它疾病一种或多种症状的新肽。在某实施方案中，该肽类似于G^*两亲性螺旋的载脂蛋白J。所述肽高度稳定并且易于口服给药。

Description

用于改善动脉粥样硬化的G类多肽

相关申请的交叉参考

本申请要求2002年4月5日提交的USSN10/120,508的利益，并以其为优先权，在此整体引入作为参考以用于所有目的。

对于由联邦政府赞助进行引入的研究和开发所做出的发明权利声明

本工作部分地得到了美国公共卫生部的国家心，肺和血液研究所(theNational Heart Blood Lung Institute of the National Institute of Health)所授予的编号HL30568的赞助。美国政府拥有明确的对本发明的权利。

发明领域

本发明涉及动脉粥样硬化领域。具体地说，本发明涉及通过口服给药，而且能改善动脉粥样硬化或炎症应答的特征性其它疾病的一种或多种症状的一类肽的鉴定。

发明背景

抑制素的引入(如Mevacor，Lipitor)在心脏病发作和中风方面降低了死亡率约1/3。但是，心脏病发作和中风仍然是死亡和残疾的主要原因，尤其是在美国和西欧国家。心脏病发作和中风是慢性炎症疾病的结果，其被称作动脉粥样硬化。

心血管疾病的形成中涉及到一些病原性因素，包括疾病的遗传性因素，性别，生活方式因素如吸烟和饮食，年龄，高血压和高血脂症，包括高胆固醇血症。其中一些因素，尤其是高血脂症和高胆固醇血症(高血液胆固醇浓度)提供了与动脉粥样硬化相关的重要危险因子。

胆固醇在血液中以游离状态和脂蛋白颗粒内的酯化胆固醇存在，通常称为乳糜颗粒，极低密度脂蛋白(VLDLs)，低密度脂蛋白(LDLs)和高密度脂蛋白(HDLs)。血液中总胆固醇的浓度受下列因素的影响：(1)从消化道中吸收的胆固醇，(2)从饮食成分如碳水化合物，蛋白质，脂肪和乙醇中合成的胆固醇，和(3)通过组织，尤其是肝脏从血液中去除胆固醇，并随后将胆固醇转化为胆汁酸，类固醇激素和胆汁胆固醇。

血液胆固醇浓度的维持受遗传和环境因素的影响。遗传因素包括胆固醇生物合成中的限速酶浓度，肝脏中低密度脂蛋白的受体浓度，胆固醇胆汁酸转化的限速酶浓度，脂蛋白的合成和分泌速率以及人的性别。影响人体中血液胆固醇浓度的环境因素包括饮食结构，吸烟的频率，身体活动和各种药剂的使用。饮食变量包括脂肪的含量和类型(饱和的和多不饱和脂肪酸)，胆固醇的含量，纤维的含量和类型，和可能的维生素如维生素C和D以及矿物质如钙的量。

动脉粥样硬化的致病与低密度脂蛋白(LDL)的氧化密切相关。已经发现高密度脂蛋白(HDL)能防止LDL被氧化，但是在一些实例中发现加速了LDL氧化。动脉粥样硬化中的重要起始因子包括LDL-衍生的氧化磷脂产物。

正常的HDL能防止这些氧化磷脂的形成，而且一旦它们形成也能使其失活。但是，在一些情况下，HDL能从一种抗炎分子转化为实际上促进了这些氧化磷脂形成的前炎症分子。

已经表明HDL和LDL为先天免疫系统的部分(Navab et al.(2001)Arterioscler Thromb Vasc Biol.21：481-488)。已经使用模拟HDL，载脂蛋白A-I(apoA-1)的主要蛋白质的A类两亲性螺旋多肽获得了抗炎症HDL(见如WO，02/15923)。

发明概述

本发明提供了改善动脉粥样硬化和其它炎症疾病如类风湿性关节炎，狼疮红斑，结节性多动脉炎(polyarteritis nodosa)，骨质疏松症，阿尔茨海默病(Altzheimer′s disease)和病毒性疾病如A型流感的症状的新的组合物和方法。

本发明的某些实施方案中提供了“分离的”多肽，该多肽改善了动脉粥样硬化或与炎症应答相关的其它病变的症状，和/或包含该多肽的组合物。该多肽典型地包含一种在多肽的极性表面具有带电荷残基，而且具有宽大的非极性表面的两亲性螺旋多肽。该多肽长度一般至少为约10个氨基酸，和/或长度大约为40个或更小的多肽。多肽典型优选含有G^*两亲性螺旋。在某些实施方案中，多肽显示与apo J有大于约50％，优选大于约75％，更优选大于约85％的序列同一性(在与所述多肽相同长度的结构域之上)。本发明多肽优选防止磷脂(例如，1-棕榈酰-2-花生四烯酰(arachidonoyl)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(PAPC)，1-硬脂酰-2-花生四烯酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(SAPC)，1-硬脂酰-2-花生四烯酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(SAPE)被氧化剂(例如13(S)-HPODE，15(S)-HPETE，HPODE，HPETE，HODE和HETE)所氧化。尤其优选含有或由下面氨基酸序列中的一个或多个所组成的多肽：

LLEQLNEQFNWVSRLANLTQGE(SEQ ID NO：1)，LLEQLNEQFNWVSRLANL(SEQ ID NO：2)，NELQEMSNQGSKYVNKEIQNAVNGV(SEQ IDNO：3)，IQNAVNG VKQIKTLIEKTNEE(SEQ ID NO：4)，RKTLLSNLEEAKKKKEDALNETRESETKLKEL(SEQ ID NO：5)，PGVCNETMMALWEECK(SEQ ID NO：6)，PCLKQTCMKFYARVCR(SEQ ID NO：7)，ECKPCLKQTCMKFYARVCR(SEQ ID NO：8)，LVGRQLEE FL(SEQ IDNO：9)，MNGDRIDSLLEN(SEQ ID NO：10)，QQTHMLDV MQD(SEQ IDNO：11)，FSRASSIIDELFQD(SEQ ID NO：12)，PFLEM IHEAQQAMDI(SEQID NO：13)，PTEFIREGDDD(SEQ ID NO：14)，RMKDQCDKCREILSV(SEQID NO：15)，PSQAKLRRELDESLQVAE RLTRKYNELLKSYQ(SEQ ID NO：16)，LLEQLNEQFNWVSRLANLT EGE(SEQ ID NO：17)，DQYYLRVTTVA(SEQ ID NO：18)，PSGVTEV VVKLFDS(SEQ ID NO：19)，PKFMETVAEKALQEYRKKHRE(SEQ ID NO：20)，WDRVKDLATVYVDVLKDSGRDYVSQF(SEQ ID NO：21)，VATVMWDYFSQLSNNAKEAVEHLQK(SEQ ID NO：22)，RWELALGRFWDYLRWVQTLSEQVQEEL(SEQ ID NO：23)，LSSQVTQELRALMDETMKELKELKAYKSELEEQLT(SEQ ID NO：24)，ARLSKELQAAQARLGADMEDVCGRLV(SEQ ID NO：25)，VRLASHLRKLRKRLLR DADDLQKRLA(SEQ ID NO：26)，PLVEDMQRQWAGLVEKVQA(SEQ IDNO：27)，MSTYTGIFTDQVLSVLK(SEQ ID NO：28)，和LLSFMQGYMKHATKTAKDALSS(SEQ ID NO：29)。在某些实施方案中，多肽是这些氨基酸序列中两种和多种的多联体(concatamer)，和/或这些氨基酸序列中的一种或多种与apo A-I序列或其模拟物的多联体(见如PCT公开WO02/15923与apo A-I相关的多肽/模拟物)。本发明的多肽含有保护基团(如在氨基和/或羧基末端的保护基团)。保护基团优选包括，但不限于乙酰基，酰胺(amide)，3到20个碳原子的烷基，Fmoc，t-boc，9-芴乙酰基，1-芴羧基，9-芴羧基，9-芴酮-1-羧基，苄氧羰基，呫吨基(Xan)、三苯甲基(Trt)，4-甲基三苯甲基(Mtt)，4-甲氧基三苯甲基(Mmt)，4-甲氧基-2，3，6-三甲基-苯磺酰(Mtr)，1，3，5-三甲基苯(Mesitylene)-2-磺酰(Mts)，4，4-二甲氧基二苯甲基(Mbh)，甲苯磺酰基(Tos)，2，2，5，7，8-五甲基苯并二氢吡喃(chroman)-6-磺酰(Pmc)，4-甲苄基(MeBzl)，4-甲氧基苄基(MeOBzl)，苄氧基(BzlO)，苄基(Bzl)，苯甲酰基(Bz)，3-硝基-2-吡啶磺酰基(sulphenyl)(Npys)，1-(4，4-dimentyl-2，6-二偶氮亚环己基)乙基(Dde)，2，6-二氯苄基(2，6-DiCl-Bzl)，2-氯苄氧基羰基(2-Cl-Z)，2-溴苄氧基羰基(2-Br-Z)，苄氧基甲基(Bom)，t-丁氧基羰基(Boc)，环己氧基(cHxO)，t-丁氧基甲基(Bum)，t-丁氧基(tBuO)，t-丁基(tBu)，乙酰基(Ac)，苯甲酰基，苄氧羰基，丙基，丁基，戊基，己基和三氟乙酰基(TFA)。在某些实施方案中，该多肽含有一个与氨基末端偶联的保护基团，而且该氨基末端保护基团是一种如苯甲酰基，乙酰基，丙烯基(propeonyl)，苄氧羰基，丙基，丁基，戊基，己基或3到20个碳烷基。在某些实施方案中，多肽含有与羧基末端偶联的保护基团，而且该羧基末端保护基团为酰胺。

在特别优选的实施方案中，本发明的多肽含有一个或多个右旋“D”氨基酸。在某些实施方案中，本发明的多肽含有至少2个，优选至少4，最优选所有的“D”氨基酸。

在某些实施方案中，这里描述的多肽共价偶联到磷脂上(例如溶血磷脂酰胆碱)。在特别优选的实施方案中，多肽偶联到磷脂的sn-1或sn-2位置上(例如丙酰基，丁酰基，戊酰基，己酰基，庚酰基，辛酰基，壬酰基，癸酰基，十一烷酰基(undcanoyl)，月桂酰基，十三烷酰基，肉豆蔻酰基，十五烷酰基，棕榈酰基，十七烷酰基，硬脂酰基，十九烷酰基(nonadecanoyl)，花生四烯酰，Heniecosanoyl，二十二烷酰基(behenoyl)，Trucisanoyl，二十四烷酰基(lignoceroyl)，肉豆蔻脑酰基(myristoleoyl)(9-顺式)，Myristelaidoyl(9-反式)，棕榈油酰基(9-顺式)，Palmitelaidoyl(9-反式)等等)。

本发明的多肽可与药理学上可接受的赋形剂制成制剂(如用于口服给药，直肠给药，鼻给药，注射，等等的单位剂量)。

在另一个实施方案中，本发明提供了一种适于口服给药的组合物，其能改善动脉粥样硬化或炎症应答的其它特征性疾病的症状。该组合物包含一种含有本文所述的两亲性螺旋(例如，G^*螺旋)的多肽，其中该多肽包含一个或多个本文所述的“D”氨基酸，而且如本文所述该多肽在氨基末端和羧基末端被封闭。

在某些实施方案中，本发明提供了药物制剂(组合物)。药物包括在药学上可接受的赋形剂中的如本文所述的多肽。该制剂通常为单位剂量(如用于给哺乳动物如人进行口服，直肠，鼻或注射给药)。

本发明也提供了一种改善哺乳动物中动脉粥样硬化，或炎症应答的其它特征性疾病的症状的方法。该方法包括用本文所述的多肽或含有在多肽的极性表面具有带电荷残基并具有大的非极性表面的两亲性螺旋多肽的多肽多联体对哺乳动物(如人)给药。在某些实施方案中，哺乳动物为人(例如，诊断为患有或处于动脉粥样硬化的风险中，中风或与炎症应答相关的其它疾病的人)。在某些实施方案中，哺乳动物为非人类的哺乳动物(例如，犬，猫，牛，马，猪等)。

在另一个实施方案中，本发明提供了一种改善炎症应答的特征性疾病的症状的方法(例如类风湿性关节炎，狼疮红斑，结节性多动脉炎，骨质疏松症，阿尔茨海默病和病毒性疾病如A型流感等)该方法涉及用本文所述的多肽或含有在多肽的极性表面具有带电荷残基并具有宽的非极性表面的两亲性螺旋多肽多肽多联体对哺乳动物(如人)给药。

本发明还提供了改善动脉粥样硬化或炎症应答的其它特征性病变症状的试剂盒。该试剂盒典型地包括含有一种或多种本文所述的多肽的容器。该多肽能与药学上可接受的赋形剂组合(例如在用于口服，鼻，直肠，注射给药的单位剂量中)。该试剂盒还包括教导将多肽用于改善动脉粥样硬化或炎症应答的特征性病变的一种或多种症状的说明材料。

在另一个实施方案中，本发明提供了一种减轻或预防哺乳动物中与炎症的急性期应答相关的冠状动脉并发症的方法，其中所述的冠状动脉并发症是动脉粥样硬化的一种症状。该方法包括用本文所述的一种或多种多肽对具有急性期应答或处于急性期应答风险中的哺乳动物给药。给药可以通过如口服给药，鼻给药，直肠给药，腹膜内注射和血管内注射，皮下注射，经皮肤给药，肌肉注射等等途径进行。在某些实施方案中，多肽通过与相同多肽的全L-型组合给药。在某些实施方案中，多肽作为在药学上可接受的赋形剂中的单位制剂形式提供。急性期应答可能是与复发性炎症疾病相关的炎症应答。在某些实施方案中，急性期应答与包括但不局限于麻风病，结核病，全身性红斑狼疮，风湿性多肌痛，结节性多动脉炎(polyarteritisnodosa)，硬皮病，特发性肺纤维化，慢性梗阻肺病，阿尔茨海默病和艾滋病(AIDS)，风湿性多肌病，结节性多动脉炎，硬皮病(scleroderma)，特发性肺纤维化，慢性梗阻肺病，阿尔茨海默病，艾滋病，冠状动脉钙化，钙化性主动脉瓣狭窄，骨质疏松症和类风湿性关节炎的疾病相关。在某些实施方案中，急性期应答是与如细菌感染，病毒感染，真菌感染，器官移植，伤口，种植修复体，寄生虫感染，脓毒症，内毒素性休克综合征以及生物膜形成疾病相关的炎症应答。

本发明还提供了一种减轻或预防哺乳动物中与炎症的急性期应答相关的冠状动脉并发症(coronary complication)的方法。其中冠状动脉并发症为动脉粥样硬化症状。该方法包括检测哺乳动物(如人)中指示急性期应答或急性期应答显著风险的急性期蛋白质(APP)水平；用本文所述的多肽对显示出指示急性期应答的急性期蛋白质(APP)水平的哺乳动物进行给药。急性期蛋白质(APP)可以为阳性APR如血清淀粉样蛋白A，C-反应性蛋白，血清淀粉样蛋白P成分，C2补体蛋白，C3补体蛋白，C4补体蛋白，C5补体蛋白，C9补体蛋白，B补体蛋白，C1抑制剂，C4结合蛋白，纤维蛋白原，Von Willebrand因子，α1-抗胰蛋白酶，α1-抗胰凝乳蛋白酶，抗血纤维蛋白酶，肝素辅因子II，纤溶酶原活化因子抑制剂I，触珠蛋白，血友病细菌(haemopexin)，血浆铜蓝蛋白，超氧化锰歧化酶，α1-酸糖蛋白，血加氧酶，甘露糖结合蛋白，白细胞蛋白I，脂蛋白(a)以及脂多糖结合蛋白和/或阴性APR如包括白蛋白，前清蛋白，运铁蛋白，apoAI，apoAII，α2-HS糖蛋白，间-α胰蛋白酶(trypsin)抑制剂，富含组氨酸糖蛋白。

定义(注释)

术语“分离”，“纯化”或“生物学上纯化的”，当涉及一种分离的多肽时，指基本上或本质上没有在其天然状态中发现通常带有的成分的物质。至于术语核苷酸和/或多肽也可指没有在天然状态下通常侧接其的序列的核苷酸或多肽。化学合成多肽是“分离的”，因为它们在天然状态下不存在(如在血液，血清等)。在某些实施方案中，术语“分离的”指自然界没有的多肽。

术语“多肽”，“肽”和“蛋白质”在本文中可互换使用，是指氨基酸残基的多聚体。该术语适用于其中一个或多个氨基酸残基是相应于天然存在的氨基酸的人工化学类似物的氨基酸多聚体，以及天然存在的氨基酸的多聚体。

术语“两亲性螺旋肽”指含有至少一个两亲性螺旋(两亲性螺旋结构域)的肽。本发明的某些两亲性螺旋肽可能含有两个或多个(如3，4，5个等)两亲性螺旋。

术语“A类两亲性螺旋”指带正电荷的残基位于极性-非极性界面，负电荷的残基位于极性表面的中心形成产生极性和非极性表面分离的α-螺旋的蛋白质结构(参见如Segrest et al.(1990)Proteins：Structure，Function，andGenetics 8：103-117)。

“载脂蛋白J”(apo J)已知有很多种名称，包括丛生蛋白(clusterin)，TRPM2，GP80和SP40，40(Fritz(1995)Pp 112 In：Clusterin：Role in VertebrateDevelopment，Function，and Adaptation(Harmony JAK Ed.)，R.G.Landes，Georgetown，TX，)。它最初被描述为一种异二聚糖蛋白和培养的大鼠塞尔托利(Sertoli)细胞分泌性蛋白的组分(Kissinger et al.(1982)Biol Reprod；27：233240)。翻译产物为一种单链前体蛋白，其经过细胞内剪切成二硫键(disulfide-linked)连接的34kDa的α亚基和47kDa的β亚基(Collard andGriswold(187)Biochem.，26：3297-3303)。它与细胞损伤，脂质转运，编程性细胞死亡有关，而且它可能也涉及由于细胞损伤或死亡而导致的细胞残骸的清除。丛生蛋白已经显示能与多种高亲和性分子包括脂质，肽和蛋白质和疏水探针1-苯胺基-8-萘磺酸盐结合(Bailey et al.(2001)Bioc7lem.，40：11828-11840)。

由于G类两亲性螺旋是在球状蛋白中发现的，因此称为G类。该类两亲性螺旋的特征是，它的正电荷和负电荷残基随机分布于带有狭窄的非极性表面的极性表面。由于该狭窄的非极性表面，这类两亲性螺旋不能很容易地与磷脂结合(见Segrest et al.(1990)Proteins：Structure，Function，andGenetics.8：103-117；also see Erratum(199 )Proteins：Structure，Function andGenetics，9：79)。几种可交换载脂蛋白的特性与G两亲性螺旋相似但不完全相同。与G类两亲性螺旋相似的是，其它类的正和负电荷残基随机分别于极性表面。但是，相较于G类两亲性螺旋有一个狭窄的非极性表面，这类有一个大的非极性表面使其能容易地与磷脂结合，而且该类称为G^*以区分于G类两亲性螺旋(见Segrest etal.(1992)J.Lipid Res.，33：141-166；also seeAnantharamaiah et al.(1993)Pp.109-142 In：The Amphipatlzic Helix，Epand，R.M.Ed CRC Press，Boca Raton，Florida)。Jones等已经描述了用于鉴定和对两亲性螺旋结构域进行分类的计算机程序((1992)J.Lipid Res.33：287-296)，其包括但不限于螺旋轮(wheel)程序(WHEEL or WHEEL/SNORKEL)，螺旋网程序(HELNET，HELNET/SNORKEL，HELNET/Angle)，螺旋轮加法程序(propram for addition of helical wheel)(COMBO or COMBO/SNORKEL)，螺旋网加法程序(COMNET，COMNET/SNORKEL，COMBO/SELECT，COMBO/NET)，共同(consensus)车轮程序(CONSENSUS，CONSENSUS/SNORKEL)，等等。

术语“改善”当用于“改善动脉粥样硬化的一种或多种症状”时，指减少，预防或消除动脉粥样硬化和/或相关病变特征性的一种或多种症状。这种减少包括，但不限于氧化磷脂的减少或消除，动脉粥样硬化空斑形成和破裂的减少，临床事件如心脏病发作，心绞痛或中风的减少，高血压缓解，炎症蛋白生物合成的减少，血浆胆固醇的降低，等等。

术语“对映体氨基酸”是指能以至少两种形式存在的氨基酸，而且所述的两种形式互为不能重叠的镜像。大多数的氨基酸(除甘氨酸外)是对映体，而且以所谓的L-型(L-氨基酸)或D-型(D-氨基酸)存在。大多数的天然存在的氨基酸是“L”氨基酸。术语“D氨基酸”和“L氨基酸”用于指氨基酸的绝对构型，而不是平面偏振光具体的旋转方向。本文的用法与本领域技术人员的标准用法一致。这里的氨基酸命名使用标准的1-字母或3-字母密码，如按Industrial Property Information and Documentation手册中的标准ST.25命名。

术语“保护基团”指一种化学基团，当连接到氨基酸的官能团(如侧链，α氨基基团，α羧基基团等)上时，封闭或屏蔽了该官能团的特性。优选的氨基末端保护基团包括，但不限于乙酰基或氨基基团。其它氨基末端保护基团包括，但不限于脂肪酸中的烷基链，丙烯基，甲酰基及其它。优选的羧基末端保护基团包括，但不限于形成酰胺或酯类的基团。

短语“保护磷脂不被氧化剂氧化”，指化合物降低磷脂与氧化剂(如过氧化氢，13-(S)-HPODE，15-(S)-HPETE，HPODE，HPETE，HODE，HETE等)接触时的磷脂氧化速率(或产生的氧化磷脂的量)的能力。

术语“低密度脂蛋白”或“LDL”按照本领域的技术人员的通常用法定义。通常，LDL指当通过超速离心进行分离时，其密度范围为d＝1.019到d＝1.063的脂质-蛋白质复合物。

术语“高密度脂蛋白”或“HDL”按照本领域的技术人员的通常用法定义。通常，HDL指当通过超速离心进行分离时，其密度范围为d＝1.063到d＝1.21脂质-蛋白质复合物。

术语“I组HDL”指使氧化型脂类(如在低密度脂蛋白中的)还原或防止氧化型脂类被氧化剂氧化的高密度脂蛋白或其成分(如apo A-I，对氧磷酶，血小板活化因子乙酰基水解酶等等)。

术语“II组HDL”指保护脂类不被氧化或在修复(例如，还原)氧化型脂类中的活性降低或无活性的HDL。

术语“HDL成分”是指包含高密度脂蛋白(HDL)的成分(例如分子)。对能保护脂类不被氧化或被修复(例如，使氧化型脂类还原)的HDL进行的分析也包括对表现所述活性的HDL成分(例如，apo A-I，对氧磷酶，血小板活化因子乙酰基水解酶等)进行的分析。

术语“人apo A-I肽”是指全长人apo A-I肽或其含有A型两亲性螺旋的片段或结构域。

本文使用的“单核细胞反应”是指具有与动脉粥样硬化斑形成相关的“炎症应答”特征的单核细胞活性。单细胞反应的特征在于单核细胞附着到血管壁的细胞上(例如，血管内皮的细胞)，和/或趋化进入内皮下空间，和/或单核细胞分化成巨噬细胞。

术语“没有改变(absence of change)”当指氧化型磷脂的量时，是指没有可检测到的改变，更优选的是没有统计学上显著的改变(例如(至少以85％，优选至少以90％，更优选至少以95％，最优选至少以98％或99％的可信度水平)。没有可检测到的改变也可指这样的检测，其中氧化磷脂水平改变，但不比缺乏本文所述的蛋白质或参照其它阳性或阴性对照时更大。

本文使用下列缩写：PAPC：L-α-1-棕榈酰-2-花生四烯酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱；POVPC：1-棕榈酰-2-(5-氧代戊酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱；PGPC：1-棕榈酰-2-戊二酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱；PEIPC：1-棕榈酰-2-(5，6-环氧前列腺烷E2)-sn-甘油-3-磷酸胆碱；ChC18：2：胆固醇亚油酸酯；ChC18：2-OOH：胆固醇亚油酸酯氢过氧化物；DMPC：1，2-双十四烷酰-rac-甘油-3-磷酸胆碱；PON：对氧磷酶；HPF：标准化高能场；PAPC：L-α-1-棕榈酰-2-花生四烯酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱；BL/6：C57BL/6J；C3H：C3H/HeJ。

术语“保守取代”用于蛋白质或肽时，是指基本上不改变分子的活性(特异性(例如，对脂蛋白而言))或结合亲和力(例如对脂类或脂蛋白而言)的氨基酸取代。典型的保守氨基酸取代涉及一个氨基酸被具有相似化学特性(例如，电荷或疏水性)的另一氨基酸取代。下面6组中每组所含氨基酸互为典型的保守取代：1)丙氨酸(A)，丝氨酸(S)，苏氨酸(T)；2)天冬氨酸(D)，谷氨酸(E)；3)天冬酰胺(N)，谷氨酰胺(Q)；4)精氨酸(R)，赖氨酸(K)；5)异亮氨酸(I)，亮氨酸(L)，甲硫氨酸(M)，缬氨酸(V)；和6)苯丙氨酸(F)，酪氨酸(Y)，色氨酸(W)。

本文中涉及两个或多个核酸或多肽序列的术语“相同”或“同一性”百分数，是指当使用下列一种序列比较算法或通过肉眼观察测量进行最大对应的比较和排列时，两个或多个序列或亚序列是相同的或具有特定百分数的氨基酸残基或核苷酸是相同的。对于本发明的肽，序列同一性在该肽的全长上测定。

对于序列比较，一般以一个序列充当参照序列，将待测序列与它进行比较。当使用序列比较算法时，将待测和参照序列输入计算机，如果需要，可指定亚序列坐标，并指定序列算法程序参数。然后序列比较算法按照指定的程序参数计算待测序列相对于参照序列的序列同一性百分数。

通过，例如Smith & Waterman，Adv.Appl.Macla.2：482(1981)的局部同源性算法，Needleman & Wunsch，J.Mol.Biol.48：443(1970)的同源性序列对比算法，Pearson & Lipman(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85：2444的相似性检索方法，这些算法的计算机化操作(GAP，BESTFIT，FASTA，andTFASTA，Wisconsin遗传性软件包，Genetics Computer Group，575 ScienceDr.，Madison，WI)，或通过肉眼检查(通常可参见Ausubel etal.，出处同上)可进行比较时的最佳序列对比。

一个有用的算法的例子是PILEUP。PILEUP使用渐进的，逐对的序列对比实现一组相关序列的多序列对比以显示其亲缘关系和序列同一性百分数。它也绘制了显示聚类亲缘关系的树或树状图用于实现序列对比。PILEUP使用Feng & Doolittle(1987)J.Mol.Evol.35：351-360的渐进式序列对比方法的简化形式。所用的方法相似于Higgins & Sharp(1989)CABIOS 5：151-153所述的方法。该程序可对比多达300个序列，每个序列最大长度为5,000个核苷酸或氨基酸。多序列对比方法以逐对对比两个最相似的序列开始，产生两个对比序列的簇(cluster)。然后将该簇与下一个最相关的序列或对比序列簇进行对比。通过两个单序列的逐对对比的简单延伸而对比两个序列簇。通过一系列渐进式逐对的对比实现最终的序列对比。通过指定具体序列和其序列比较区域的氨基酸或核苷酸坐标和通过指定程序参数进行该程序。例如，使用下列参数：默认空位加权(default gap weight)(3.00)，默认空位长度加权(default gap length weight)(0.10)，和加权的末端间隔可比较参照序列与其它待测序列以测定序列相同性百分数关系。

适合于测定序列同一性和序列相似性百分数的算法的另一个例子是BLAST算法，它在Altschul等(1990)J.Mol.Biol.215：403-410中描述。进行BLAST分析的软件可通过国家生物技术信息中心(http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/)公开获得。该算法包括通过鉴定查询序列中的短字串长度W首先鉴定高记分序列对(HSPs)，当与数据库序列中相同长度的字串进行序列对比时，它符合或满足一些正值的阈值得分T。T称为邻近字串得分阈值(Altschul等，出处同上)。这些起始的邻近字串命中(hit)充当起动搜索发现包含它们的更长HSP的种子(seed)。然后字串命中沿各序列的两个方向延伸到可增加累积的序列对比得分的尽可能远处。对于核苷酸序列，使用参数M(匹配残基对的奖分；通常＞0)和N(错配残基的罚分；通常＜0)计算累积得分。对于氨基酸序列，使用记分矩阵计算累积得分。当：累积序列对比得分从其最大达到值下降至定量X；由于累积一个或多个记负分的残基对比导致累积记分趋于零或以下；或者到达任一序列的末端时停止在各个方向上的字串命中(word hits)延伸。BLAST算法参数W，T和X决定了序列对比的灵敏度和速度。BLASTN程序(对于核苷酸序列)使用的默认字串长度(W)为11，期望值(E)为10，M＝5，N＝-4，且比较两条链。对于氨基酸序列，BLASTP程序使用的默认字串长度(W)为3，期望值(E)为10，以及BLOSUM62记分矩阵(参见Henikoff & Henikoff(1989)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：10915)。

除了计算序列同一性百分数外，BLAST算法也进行两个序列之间的相似性的统计学分析(参见，例如，Karlin & Altschul(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA，90：5873-5787)。以BLAST算法进行的一种相似性测量是最小总概率(P(N))，它提供了概率的指标，其中两个核苷酸或氨基酸序列之间的匹配随机出现。例如，在待测核酸与参照核酸的比较中如果最小总概率小于大约0.1，更优选小于大约0.01，且最优选小于大约0.001，那么认为核酸与参照序列相似。

附图说明

图1显示了在共同培养实验中，D4F(Navab，etal.(2002)Circulation，105：290-292)和由D氨基酸组成的apoJ肽336对防止LDL-诱导的单核细胞趋化活性的影响。数据为在4份培养物的9个高倍视野被转移的单核细胞的数量的平均+/-SD。(D-J336＝Ac-LLEQLNEQFNWVSRLANLTQGE-NH2，SEQID NO：1)。

图2说明了通过用D-J336与D-4F比较对动脉壁细胞进行预处理以防止LDL诱导的单核细胞趋化活性。数据为在4份培养物的9个高倍视野被转移的单核细胞的数量的平均+/-SD。

图3说明了在LDL受体裸小鼠中apoJ肽模拟物对HDL保护能力的影响。数值为在4个检测孔的每个中9个高倍视野(high power field)被转移的单核细胞的数量的平均+/-SD。

图4说明了通过对来自口服肽的apoE裸小鼠的HDL防止了LDL诱导的单核细胞趋化活性。数值为在4个检测孔中每个中9个高倍视野被转移的单核细胞的数量的平均+/-SD。星号表示与没有肽的mHDL相比差异显著(p＜0.05)。

图5说明口服apoA-1肽模拟物与apoJ肽对LDL对氧化的敏感性的影响。数值为在4个检测孔的每个中9个高倍视野被转移的单核细胞的数量的平均+/-SD。星号表示与没有肽的LDL相比差异显著(p＜0.05)。

图6说明了口服apoA-1肽模拟物与apoJ肽对HDL保护能力的影响。数值为在4个检测孔的每个中9个高倍视野被转移的单核细胞的数量的平均+/-SD。星号表示与没有肽的mHDL相比差异显著(p＜0.05)。

图7说明了口服apoA-1肽模拟物与apoJ肽对血浆对氧磷酶活性的影响。数值为来自4个血浆等份的读数的平均+/-SD。星号表示与没有肽的对照血浆相比差异显著(p＜0.05)。

图8显示了apoE-/-小鼠口服G^*肽对HDL保护能力的影响。数值为来自4个血浆等份的读数的平均+/-SD。星号表示与没有肽的对照血浆相比差异显著(p＜0.05)。

图9显示了ApoE-/-小鼠口服G^*肽，146-156对HDL保护能力的影响。

发明详述

1、动脉粥样硬化症状的减轻

本发明涉及的令人惊奇的发现，在肽的极性表面具有分散的(例如随机分布，偶然分布等等)电荷残基的两亲性螺旋肽类似物具有抗炎特性，而且能改善动脉粥样硬化或炎症应答的其它特征性疾病(如类风湿性关节炎，狼疮红斑，结节性多动脉炎，骨质疏松症)的症状。本发明肽优选通常模拟载脂蛋白J(apo J)的两亲性螺旋结构域。

在某些优选实施方案中，肽是在肽的极性表面具有分散的电荷残基(正和/或负电荷残基)，而且具有大的非极性表面(称为球状蛋白样，G^*)两亲性螺旋结构域的两亲性螺旋肽类似物。这种两亲性螺旋G^*结构域是apoJ和某些其它载脂蛋白(例如，apo AI，apo AIV，apo E，apo CII，apo CIII，等等，但不包括apo A-II或apo C-I)特征性的。本发明肽优选长度范围从大约10到大约100个氨基酸，更优选长度从约10到约60或80个氨基酸，最优选从约10，15或20个氨基酸到约40或50个氨基酸。在某些实施方案中，肽的长度范围从约10到约40个氨基酸。本发明的某些肽尤其优选显示与apoJ或其片断具有大于约40％，优选大于约50％或60％，更优选大于约70％或80％，最优选大于约90％或95％序列同一性(长度范围从约10到约40个氨基酸，例如与研究的肽同样的长度)。

本发明的一个令人惊奇的发现是，这种肽尤其当含有一种或多种D型氨基酸时保留了相应的L型肽的生物学活性。此外，这些肽甚至经过口服传递时仍显示体内活性。肽血清半寿期提高，且具有减轻或预防/抑制动脉粥样硬化的一种或多种症状的能力。

我们发现正常的HDL抑制适度氧化的LDL形成中的3个步骤。在这些研究中(参见，例如WO 02/15923)，我们证实用apo A-I或apo A-I模拟肽(37pA)体外处理人LDL，从包括HPODE和HPETE的LDL中去掉了播种(seeding)分子。这些播种分子对于人动脉壁细胞的共培养物能氧化LDL，以及对于LDL诱导动脉壁细胞产生单核细胞趋化活性是必需的。我们也证实了将apo A-I注射进小鼠或输入人体后，从小鼠或人类志愿者分离的LDL对于人动脉壁细胞的氧化有抗性且在动脉壁细胞共培养物中不能诱导单核细胞趋化性活性。

没有结合特定的理论，我们相信本发明肽的作用方式与PCT公开WO02/15923中所描述的apo A-I模拟物的活性相似。尤其，我们相信本发明是通过增强HDL的抗炎特性部分的起作用。尤其，我们认为本发明的肽结合LDL中对LDL的氧化必需的播种分子，然后把播种分子运离最终被分泌的地方。

我们已经发现模拟载脂蛋白J的两亲性螺旋结构域的肽在保护LDL不被动脉壁细胞氧化，和减少由于人动脉壁细胞对LDL的氧化而致的LDL诱导的单核细胞趋化活性方面尤其有效。Apo J具有称为球状蛋白样或G^*两亲性螺旋结构域的大的非极性表面。G类两亲性螺旋是在球状蛋白中发现的，因此，命名为G类。该类两亲性螺旋的特征是，正或负电荷残基随机/偶然分布在带有狭窄的非极性表面的极性表面。由于该狭窄的非极性表面，该类两亲性螺旋不能很容易地与磷脂结合(参见Segrest等(1990)Proteins：Structure，Function，and Genetics.8：103-117；还参见Erratum(1991)Proteins：Structure，Function and Genetics，9：79)。几种可交换载脂蛋白具有与G两亲性螺旋相似但不相同的特性。与G类两亲性螺旋类似，其它类也具有随机分布在极性表面的正和负电荷残基。但是，与具有狭窄非极性表面的G类两亲性螺旋相反，该类具有一个使其能容易地与磷脂结合的大的非极性表面，该类被称为G^*以使它能从G类两亲性螺旋中区别开来(参见Segrest等(1992)J.Lipid Res.，33：141-166；也参见Anantharamaiah等(1993)Pp.109-142 In The Amphipathic Helix，Epand，R.M.Ed.，CRC Press，Boca Raton，Florida)。

本发明的一个令人惊奇的发现是，在用动脉壁细胞进行的预培养中，使人动脉壁细胞不能氧化LDL所需要的本发明的两亲性螺旋肽实际上低于所需要的apo A-I模拟肽如D4F。

我们证实，由D氨基酸合成的apo A-I模拟肽的口服给药，极大的降低了小鼠的动脉粥样硬化，独立于血浆或HDL胆固醇浓度的改变。与apoA-I模拟物的作用相似，我们认为模拟了由D氨基酸合成的apo J的两亲性螺旋结构域的合成肽，能通过口服或其它途径包括注射给药，而且将改善动脉粥样硬化和其它慢性炎症疾病状况。

本发明的肽可能包括所有的L型氨基酸。但是，发明者认为含有一种或多种D型氨基酸，优选所有的D型氨基酸(所有的对映体氨基酸都是D型的)的肽，通过口服给药能提供更有效的传递，而且在循环中更稳定。肽尤其优选在一个或两个末端被封闭(例如，用N-末端乙酰化和C-末端酰胺化)。

本发明肽的保护功能在实施例1中举例说明。对防止由于人动脉壁细胞导致的LDL诱导的单核趋化活性所必需的该新类型肽的体外浓度比apoA-I模拟物(D4F)所需要的浓度低10到25倍(图1中比较了DJ336与D4F)。类似地，在预培养中本发明的肽在由动脉壁细胞抑制LDL氧化效力方面高10-25倍(图2中比较DJ336与D4F)。如图3所示，当DJ335通过口腔给予LDL受体裸小鼠时，在给予HIL更多的保护以防止LDL诱导的单核细胞趋化活性上DJ335与D4F基本上同样有效。

图4证实了当被添加到饮用水中时，本发明的肽(DJ336)在增强apo E裸小鼠中的HDL保护能力上与D4F同样有效。图5证实了，当添加到饮用水中时，通过诱导单核细胞趋化性活性测定，本发明的肽DJ336在给予来自apo E裸小鼠的LDL对被人动脉壁细胞氧化的抗性方面比D4F稍更有效。图6证实了，当添加到饮用水中时，通过单核细胞趋化性活性的产生测定，在导致HDL抑制磷脂PAPC被人体动脉壁细胞共培养物中的氧化HPODE所氧化方面，DJ336和D4F一样有效(see Navab et al.(2001)J.LipidRes.42：1308-1317 for an explanation of the test system)。图7证实了，当添加到饮用水中时，在增强apo E裸小鼠的对氧磷酶活性上，DJ336至少与D4F同样有效。

由于已经怀疑许多炎症疾病至少部分是由氧化脂类介导的，我们认为本发明在改善已知或怀疑是由于氧化脂类的形成而致的疾病中也是有效的。这些疾病包括，但不局限于，类风湿性关节炎，狼疮红斑，结节性多动脉炎，骨质疏松症。

没有结合特定的理论，我们认为用本发明的一种或多种肽给药(如注射)将改善A型流感的体征和症状。此外，该肽将显著降低巨噬细胞流入到动脉壁中。这在降低流感和其它病毒感染之后心脏病发作和中风的高发生率中是很有用的。因此，本发明的肽能用于改善流感和多种其它的病毒疾病的体征和症状，并能降低经常在这些病毒疾病之后的心脏病发作和中风的发病率。

考虑到上述的问题，在一个实施方案中，本发明提供了改善和/或预防动脉粥样硬化和/或与炎症应答有关的(特征性的)病变的一种或多种症状的方法。该方法典型的包括用本发明的一种或多种肽(或该肽的模拟物)对生物体，优选哺乳动物，更优选人类给药。该肽可按如本文所述，按照包括，但不限于注射，栓剂，鼻腔喷雾，定时释放移植物，皮服贴剂，等等的很多标准方法中的任何一种给药。在一个特别优选的实施方案中，肽通过口服给药(例如，作为糖浆，胶囊或片剂)。

该方法包括用本发明的单个多肽给药，或两个或多个不同的多肽给药。多肽可以单体或二聚体，寡聚体或多聚体的形式提供。在某些实施方式中，多聚体形式包括缔合的单体(例如，通过离子键或疏水键连接)，而某些其它的多聚体形式包括共价连接的单体(直接连接或通过接头连接)。

尽管本发明对于在人体中的用途进行了描述，但是它也适用于动物，例如兽医用途。因此，优选的生物体包括，但不限于人类，非人类的灵长类，犬，马，猫，猪，有蹄类动物，largomorph，等等。

本发明的方法不局限于表现出动脉粥样硬化(例如，高血压，空斑形成和破裂，减少临床事件如心脏病发作，心绞痛，或中风，高水平的血浆胆固醇，高水平的低密度脂蛋白，高水平的极低密度脂蛋白，或炎症蛋白，等等)的一种或多种症状的人类或非人类的动物，而且可用于预防性情况。因此，可用本发明的肽(或其模拟物)对生物体给药以预防动脉粥样硬化的一种或多种症状的发生/形成。在这种情况下尤其优选的受试者是表现出动脉粥样硬化的一种或多种风险因素(如家族病史，高血压，肥胖症，高酒精消耗，吸烟，高血胆固醇，高血甘油酸三酯，提高的血LDL，VLDL，IDL或低HDL，糖尿病，或糖尿病的家族病史，高血脂，心脏病，心绞痛或中风等)的受试者。

除了本发明的抑制肽动脉粥样硬化的肽的使用方法之外，本发明还提供了肽本身，配制成特别是用于口服传递的药品的肽，以及用于治疗和/或预防动脉粥样硬化的一种或多种症状的试剂盒。

II.与极性类症应答相关的动脉粥样硬化症状的减轻

本发明的抑制动脉粥样硬化的肽也用于许多其它情况。具体地说，我们观察到心血管并发症(例如，动脉粥样硬化，中风等等)经常与急性期炎症应答相伴或在其之后。该急性状态的炎症应答经常与复发性炎症疾病(例如，麻风病，肺结核，全身性红斑狼疮和类风湿性关节炎)，病毒感染(例如，流感)，细菌感染，真菌感染，器官移植，伤口或其它外伤，移植修复，生物膜等等相关。

本发明的令人惊奇的发现是用本文所述的一种或多种肽给药，可减少或防止在急性期反应期间或之后氧化磷脂的形成，从而减轻或消除与该状况相关的心血管并发症。

因此，例如，我们证实了流感感染的后果是HDL中对氧磷酶和血小板活化的乙酰水解酶活性减少。没有结合特定的理论，我们相信，作为这些HDL酶活性损失的结果以及作为急性期反应期间前体氧化剂蛋白与HDL的缔合结果，HDL不再能够预防LDL氧化且不再能够防止LDL-诱导产生内皮细胞的单核细胞趋化性活性。

我们观察到在用A型流感病毒感染后，每天注射低剂量的本发明多肽(例如，给小鼠20微克)的受试者中，对氧磷酶水平不但没有下降，而且不产生超过背景的有生物学活性的氧化磷脂(参见，WO 02/15923，PCT/US01/26497)。

令人惊奇的发现是，本文中所述类型的肽在哺乳动物中与WO 02/15923中所述的apo-I模拟物所起的作用相似。考虑到这个发现，认为可用本发明的肽对在流感感染和可产生急性期炎症应答的其它事件(例如，由于病毒感染，细菌感染，外伤，移植，多种自身免疫疾病等等)期间已知具有冠状动脉疾病的患者给药(例如，口服或注射)，因此，我们可以通过短期处理防止与产生这种炎症状况的病变相关的心脏病和中风的发病率增加。

因此，在某些实施方案中，本发明包含用本发明的一种或多种肽对处于急性炎症应答风险中或正经受急性炎症应答，和/或处于动脉粥样硬化的症状的风险中或正经受动脉粥样硬化的症状的受试者给药。

例如，可用本发明的多肽对具有冠状动脉疾病或处于该疾病风险中的人在流感季节预防性给药。患有复发性炎症疾病，例如类风湿性关节炎，各种自身免疫疾病等的人(或动物)可用本发明的多肽进行治疗以减轻或防止动脉粥样硬化或中风的形成。患有外伤，例如，急性损伤，组织移植等的人(或动物)可用本发明的多肽进行治疗以减轻动脉粥样硬化或中风的形成。

在某些情况下，该方法需要诊断急性炎症应答的发生或其风险。急性炎症应答一般涉及肝脏中代谢和基因调控的改变。它是一个动态的体内平衡过程，除了免疫，心血管和中枢神经系统外，它涉及身体的所有主要系统。正常情况下，急性期反应仅持续几天；然而，在慢性或复发性炎症的情况中，急性期反应的一些症状异常持续可引起与该疾病相伴的潜在(underlying)组织损伤，且也可导致其它并发症，例如心血管疾病或蛋白质沉积疾病如淀粉样变性。

急性期反应的一个重要方面是肝脏生物合成模式的根本性改变。在正常情况下，肝脏以稳定状态的浓度合成特征性范围的血浆蛋白。这些蛋白质中许多具有重要功能，且在炎症刺激后在急性期反应期间需要更高血浆水平的这些急性期反应物(APRs)或急性期蛋白(APPs)。尽管大多数APRs通过肝细胞合成，但是有些通过包括单核细胞，内皮细胞，成纤维细胞和脂肪细胞的其它细胞类型产生。大多数APRs被诱导到超过正常水平的50％和几倍之间。相反，主要APRs可增加到超过正常水平的1000-倍。这组蛋白包括血清淀粉样蛋白A(SAA)和任一种人体C-反应性蛋白(CPR)或其在小鼠中的同系物，血清淀粉样蛋白P成分(SAP)。所谓的阴性APRs在急性期反应期间的血浆浓度减少以便允许肝脏合成诱导型APRs的能力增加。

在某些实施方案中，急性期反应，或其风险通过测量一种或多种APRs来评估。测量该标志物是本领域的技术人员所熟知的，且存在提供该测量的商业公司(例如，Cardiotech Services，Louisville，KY可测量AGP)。

III.与冠状动脉钙化和骨质疏松相关的症状和状况的减轻

我们还鉴定了氧化脂类是冠状动脉钙化和骨质疏松症的原因。而且，没有结合具体的理论，我们认为在钙化性动脉狭窄的发病机理中涉及相同的机制。

因此，在某些实施方案中，本发明包含使用本发明所述肽以抑制或预防诸如风湿性多肌痛，结节性多动脉炎，硬皮病，自发性肺纤维变性，慢性阻塞性肺疾病，阿尔茨海默氏病，AIDS，冠状动脉钙化，钙化性主动脉狭窄，骨质疏松症等疾病的症状。

IV.优选的肽及其制备

优选的肽

本发明的发现是，模拟apo J的两亲性螺旋结构域的肽能减轻动脉粥样硬化和/或炎症应答的其它特征性病变的一种或多种症状。载脂蛋白J具有称为球状蛋白样或G^*两亲性螺旋结构域的大的非极性表面。G类两亲性螺旋是在球状蛋白中发现的，因此命名为G类。该类两亲性螺旋的特征在于正电荷残基和负电荷残基随机分布在带有狭窄的非极性表面的极性表面。由于该狭窄非极性表面，使这类两亲性螺旋不容易与磷脂结合。G^*类两亲性螺旋具有与G类两亲性螺旋相似但不完全相同的特征。与G类两亲性螺旋类似，G^*类肽具有随机分布于极性表面的正和负电荷残基。但是，与具有狭窄的非极性表面的G类两亲性螺旋相反的是，G^*类具有使该类能容易的结合磷脂的大的非极性表面，而且该类称为G^*以使其从G类两亲性螺旋中区分开来。

本发明的与apo J的G^*两亲性螺旋结构域相关的各种合适的肽如表1所示。

表1.优选用于本发明的与apo J的g^*两亲性螺旋结构域相关的肽

氨基酸序列 SEQ ID NO

LLEQLNEQFNWVSRLANLTQGE 1LLEQLNEQFNWVSRLANL 2NELQEMSNQGSKYVNKEIQNAVNGV 3IQNAVNGVKQIKTLIEKTNEE 4RKTLLSNLEEAKKKKEDALNETRESETKLKEL 5PGVCNETMMALWEECK 6PCLKQTCMKFYARVCR 7ECKPCLKQTCMKFYARVCR 8LVGRQLEEFL 9MNGDRIDSLLEN 10QQTHMLDVMQD 11FSRASSIIDELFQD 12PFLEMIHEAQQAMDI 13PTEFIREGDDD 14RMKDQCDKCREILSV 15PSQAKLRRELDESLQVAERLTRKYNELLKSYQ 16LLEQLNEQFNWVSRLANLTEGE 17DQYYLRVTTVA 18PSGVTEVVVKLFDS 19PKFMETVAEKALQEYRKKHRE 20

但是本发明的肽并不限于apo J的G^*变异体。一般来讲，基本上来自任何其它蛋白优选apo蛋白的G^*结构域也是合适的。这种蛋白具体的适合性可以使用保护活性(例如保护LDL不被氧化，等等)检测很容易地测定，如在实施方案中所述的。一些尤其优选的蛋白包括包括但不局限于apo AI，apo AIV，apo E，apoCII，apo CIII等蛋白的G^*两亲性螺旋结构域或其变异体(例如保守性取代等等)。

某些优选的与除apo J外的载脂蛋白的G^*两亲性螺旋结构域相关的肽如表2所示。

表2.用于本发明的与除apo J外的载脂蛋白的G^*两亲性螺旋结构域相关的肽

氨基酸序列 SEQ ID NO

WDRVKDLATVYVDVLKDSGRDYVSQF 21(与apoAI的8-33区相关)VATVMWDYFSQLSNNAKEAVEHLQK 22(与AIV的7-31区相关)RWELALGRFWDYLRWVQTLSEQVQEEL 23(与apoE的25-51区相关)LSSQVTQELRALMDETMKELKELKAYKSELEEQLT 24(与apoE的52-83区相关)ARLSKELQAAQARLGADMEDVCGRLV 25(与apoE的91-116区相关)VRLASHLRKLRKRLLRDADDLQKRLA 26(与apoE的135-160区相关)PLVEDMQRQWAGLVEKVQA 27(apoE.27的267到285)MSTYTGIFTDQVLSVLK 28(与apocII的60到76区相关)LLSFMQGYMKHATKTAKDALSS 29(与apocII的8-29区相关)

虽然表1和表2中所列的各种肽没有保护基团，但是在某些实施方案中(例如尤其是通过口服给药的)，它们带有一个或两个保护基团，更优选末端保护基团。因此，例如，在某些实施方案中，本文所述的任何一种肽可以带有，例如，一个保护氨基末端的乙酰基和/或一个保护羧基末端的酰胺基。这种“双重保护肽”的一个例子是Ac-L-L-E-Q-L-N-E-Q-F-N-W-V-S-R-L-A-N-L-T-Q-G-E-NH2(SEQ ID NO：1带有封闭基团)，这些保护基团中的任何一个或者两个可以被消除和/或被本文中所述的另一个保护基团取代。在尤其优选的实施方案中，肽包含一个或多个本文中所述的D-型氨基酸(右旋优于左旋)。在某些实施方案中，至少两个对映体氨基酸，更优选至少4个对映体氨基酸，最优选至少8或10个对映体氨基酸是“D”型氨基酸。在某些实施方案中，本文中所述肽的每个氨基酸(例如每个对映体氨基酸)都是D-型氨基酸。

还应该注意到表1和2中所列的肽并非完全包括的。使用本文提供的教导，可按常规产生其它的合适的肽(例如，通过保守的或半保守的取代(例如D被E取代)，延长，缺失等等)。因此，例如，一个实施方案利用SEQ IDNos：1-29鉴定的肽中的任意一个或多个的截短形式。

更长的肽也是合适的。这种更长的肽可全部形成G或G^*类两亲性螺旋，或者G类两亲性螺旋(或helix)能形成肽的一个或多个结构域。另外，本发明包含肽的多聚体形式。因此，例如表1或2中所示的肽可偶联在一起(用一个或多个插入的氨基酸直接或者通过接头(例如，碳接头，或一个或多个氨基酸)偶联)。合适的接头包括，但不局限于脯氨酸(-Pro-)，Gly₄Ser₃(SEQ IDNO：30)，等等。因此，根据本发明的一个举例性的多聚体肽为(D-J336)-p-(D-J336)(也即Ac-L-L-E-Q-L-N-E-Q-F-N-W-V-S-R-L-A-N-L-T-Q-G-E- P-L-L-E-Q-L-N-E-Q-F-N-W-V-S-R-L-A-N-L-T-Q-G-E-NH2，SEQ ID NO：31)。

本发明还包括使用包含一个或多个G或G^*类两亲性螺旋结构域与一个或多个A类两亲性螺旋的“杂合”肽。合适的A类两亲性螺旋肽如PCT公开WO 02/15923所述。因此，举例，一种“杂合”肽为(D-J336)-Pro-(4F)(即Ac-L-L-E-Q-L-N-E-Q-F-N-W-V-S-R-L-A-N-L-T-Q-G-E- P-D-W-F-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F-NH2，SEQ ID NO：32)，等等。如上面所指出的，本发明的多肽优选包括一个或多个D氨基酸，更优选每个氨基酸都是本文所述的D氨基酸，和/或一个或两个末端都被保护。优选至少50％的对映体氨基酸是“D”型的，更优选至少80％的对映体氨基酸是“D”型的，最优选至少90％或甚至所有的对映体氨基酸都是“D”型氨基酸。

本发明的一个令人惊奇的发现是，当本发明的两亲性螺旋肽(例如，如图3，4，5，6，7，8和9所示)掺入D氨基酸时，甚至当口服给药时它们仍保留其活性。另外，这种口服给药导致相当有效的吸收和显著的血清半寿期，从而提供了减轻动脉粥样硬化和/或炎症应答的其它特征性病变的一种或多种症状的有效方法。

使用本文提供的教导，技术人员可按常规修饰所示的两亲性螺旋肽以产生本发明的其它合适的apo J变异体和/或两亲性G螺旋肽。例如，可对已有的氨基酸做出常规保守的或半保守的取代(例如，E取代D)。使用Palgunachari et al.(1996)Arteriosclerosis，Thrombosis，& Vascular Biology 16：328-338所述的计算方法可推测各种取代对所得肽的脂亲和力的影响。在保留该类螺旋结构的前提下，该肽可被加长或缩短。另外，可进行取代使所得的肽更类似于受试者物种内源性产生的肽。

可使用计算方法进行设计和/或评估新的肽。鉴定和对两亲性螺旋进行分类的计算机程序是本领域技术人员熟知的，而且Jones et al.(1992)J.LipidRes.33：287-296)也描述了很多。这种程序包括，但不限于螺旋轮程序(WHEEL或WHEEL/SNORKEL)，螺旋网程序(HELNET，HELNET/SNORKEL，HELNET/Angle)，螺旋车轮加法程序(COMBO或COMBO/SNORKEL)，螺旋网加法程序(COMNET，COMNET/SNORKEL，COMBO/SELECT，COMBO/NET)，共同车轮程序(CONSENSUS，CONSENSUS/SNORKEL)，等等。

但是，在优选的实施方案中，本发明的肽利用天然存在的氨基酸或天然存在的氨基酸的D型形式，但是也包括用非天然存在的氨基酸(例如，甲硫氨酸亚砜，甲硫氨酸甲基锍，正亮氨酸，ε-氨基己酸，4-氨基丁酸，四氢异喹啉-3-羧酸，8-氨基辛酸，4-氨基丁酸，Lys(N(ε)-三氟乙酰)，α-氨基异丁酸，等等)取代。

除了本文所述的G^*类两亲性螺旋肽外，本文还包括肽模拟物。肽类似物在制药工业中常用作具有类似于模板肽的特性的非肽类药品。这些类型的非肽类化合物称为“肽模拟物”或“模拟肽”(Fauchere(1986)Adv.Drug Res.15：29；Veber and Freidinger(1985)TINS p.392；and Evans et al.(1987)J.Med.Chem.30：1229)，而且通常借助于计算机化的分子模拟形成。可使用结构上相似于治疗上有用的肽的肽模拟物产生相当的治疗或预防效果。

一般来说，肽模拟物在结构上相似于示例多肽(例如，表1所示的SEQID NO：1)，但具有一个或多个肽键被选自由-CH₂NH-，-CH₂S-，-CH₂-CH₂-，-CH＝CH-(顺式或反式)，-COCH₂-，-CH(OH)CH₂-，-CH₂SO-等组成的组中键按本领域已知的方法取代，该方法在下列参考文献中进一步描述：Spatola(1983)p.267 in Chemistry and Biochemistry of Amino Acids，Peptides，andProteins，B.Weinstein，eds.，Marcel Dekker，New York，；Spatola(1983)VegaData 1(3)Peptide Backbone Modifications.(general review)；Morley(1980)Trends Pharm Sci pp.463-468(general review)；Hudson et al.(1979)Int J PeptProt Res 14：177-185(-CH₂NH-，CH₂CH₂-)；Spatola et al.(1986)Life Sci 38：1243-1249(-CH₂-S)；Hann，(1982)J Chem Soc PerkinTrans 1307-314(-CH-CH-，顺式和反式)；Almquist etal.(1980)J Med Chem.23：1392-1398(-COCH₂-)；Jennings-White et al.(1982)Tetrahedron Lett.23：2533(-COCH₂-)；Szelke et al.，European Appln.EP 45665(1982)CA：97：39405(1982)(-CH(OH)CH₂-)；Holladay et al.(1983)Tetrahedron Lett 24：4401-4404(-C(OH)CH₂-)；和Hruby(1982)Life Sci.，31：189-199(-CH₂-S-))。

特别优选的非肽键是-CH₂NH-。该肽模拟物相对于多肽的实施方案具有明显的优势，包括，例如：生产更经济，化学稳定性更高，药理学特性增强(半寿期，吸收，效力，功效，等)，抗原性降低等。

另外，通过本领域已知的方法(Rizo and Gieraseh(1992)Ann.Rev.Biochem.61：387)；例如，通过添加能形成分子内二硫键以环化该肽的内部半胱氨酸残基可产生包含共有序列或基本上相同的共有序列变异的本文所述肽的循环取代或束缚肽(包括环化肽)。

肽的制备

本发明中所用的肽使用标准化学合成技术化学合成，特别是如果肽不包含“D”氨基酸残基，则通过重组表达。在某些实施方案中，甚至含有“D”氨基酸残基的肽也通过重组表达。如果多肽是重组表达的，可在给生物体以唯一D型形式提供一种或多种氨基酸的环境中培养宿主生物(例如，细菌，植物，真菌细胞，等)。然后在该系统中重组表达的肽掺入到那些D氨基酸中。

在优选的实施方案中，以任意的本领域的技术人员已知的许多液相或固相肽合成技术化学合成该肽。固相合成是化学合成本发明的多肽的优选方法，其中序列的C-末端氨基酸附着到不溶性支持物上，随后在序列上依次添加剩下的氨基酸。固相合成技术是本领域的技术人员所熟知的且其描述参见，例如，Barany and Merrifield(1963)Solid-Phase Peptide Synthesis；pp.3-284 in The Peptides：Analysis，Synthesis，Biology.Vol.2：Special Methods inPeptide Synthesis，Part A.；Merrifield et al.(1963)J.Am.Chem.Soc.，85：2149-2156，and Stewart et al.(1984)Solid Phase Peptide synthesis，第二版，Pierce Chem.Co.，Rockford，Ill。

在最优选的实施方案中，使用二苯甲基胺树脂(benzhyderylamine resin)(Beckman Bioproducts，0.59mmol NH2/g树脂)作为固相支持物通过固相肽合成程序合成该肽。COOH末端氨基酸(例如t-丁基羰基-Phe)通过4-(甲氧基)苯乙酰基附着到固相支持物上。它是比常规的苯甲基酯键更稳定的键，但是仍然可通过氢化作用完成的肽。使用甲酸作为氢供体的传递氢化可用于该目的。用于肽合成和合成肽的分析的详细方案在附上Anantharamaiah等(1985)J.Biol.Chem.，260(16)：10248-10255的小型增刊中描述。

应注意到在肽的化学合成中，特别是包含D氨基酸的肽，合成通常产生除了所需全长产物外的许多截短的肽。纯化过程(例如，HPLC)一般导致损失大量的全长产物。

本发明的发现是，在D型肽(例如D-4)的合成中，为了防止在纯化最长形式中的损失，可以透析并使用混合物，从而消除了最后的HPLC纯化。该混合物损失大约50％效价的高纯度产物(例如，每份重量的蛋白质产物)，但是该混合物含有大约6倍以上的肽且因此有更大的总活性。

D-型氨基酸

通过在化学合成中简单地使用D-型衍生氨基酸残基在肽的一个或多个位置掺入D-氨基酸。用于固相肽合成的D型残基可从许多供应商(参见，例如，Advanced Chem Tech，Louisville；Nova Biochem，San Diego；Sigma，StLouis；Bachem California Inc.，Torrance，等)以商业途径获得。D-型氨基酸可在所需肽的任何位置掺入。因此，例如，在一个实施方案中，肽可包含单个D-氨基酸，而在其它实施方案中，肽包含至少2个，一般至少3个，更常见至少4个，最常见至少5个，优选至少6个，更优选至少7个，最优选至少8个D氨基酸。在特别优选的实施方案中，基本上每隔(对映体)一个氨基酸是D-型氨基酸。在某些实施方案中，至少90％，优选至少90％，更优选至少95％的对映体氨基酸是D-型氨基酸。在一个尤其优选的实施方案中，基本上每个对映体氨基酸都是D-氨基酸。

保护基团

在某些实施方案中，组成型氨基酸合/或末端氨基酸上的一个或多个R-基团用保护基团封闭。没有结合具体的理论，本发明的发现是本发明的试验肽的封闭，特别是氨基和/或羧基末端的封闭极大地改进了口服传递且显著提高了血清半寿期。

许多保护基团适用于该目的。该基团包括，但不局限于乙酰基，酰胺基，和具有乙酰基的烷基，而且烷基尤其优选用于N-末端保护，酰胺基优选用于羧基末端保护。在某些特别优选的实施方案中，保护基团包括，但不限于诸如在脂肪酸中的烷基链，丙烯基，甲酰基，等等。特别优选的羧基保护基团包括酰胺，酯和醚形成的保护基团。在一个优选的实施方案中，乙酰基用于保护氨基末端，酰胺基用于保护羧基末端。这些封闭基团增强了肽形成螺旋的倾向。某些特别优选的保护基团包括各种长度的烷基基团，例如，具有通式：CH₃-(CH₂)n-CO-的基团，其中n范围是从大约1到大约20，优选从大约1到大约16或18，更优选从大约3到大约13，最优选从大约3到大约10。

在某些特别优选的实施方案中，保护基团包括，但不限于诸如在脂肪酸中的烷基链，丙烯基，甲酰基，等等。特别优选的羧基保护基团包括酰胺，酯，和醚形成的保护基团。在一个优选的实施方案中，乙酰基用于保护氨基末端，酰胺基用于保护羧基末端。这些封闭基团增强了肽形成螺旋的倾向。某些特别优选的保护基团包括各种长度的烷基基团，例如，具有通式：CH₃-(CH₂)n-CO-的基团，其中n范围是从大约3到大约20，优选从大约3到大约16，更优选从大约3到大约13，最优选从约3到约10。

其它保护基团包括，但不限于Fmoc，t-丁氧基羰基(t-BOC)，9-芴乙酰基(fluoreneacetyl)，1-芴羧基(fluorenecarboxylic)，9-芴羧基，9-芴酮-1-羧基，苄氧羰基，呫吨基(Xan)，三苯甲基(Trt)，4-甲基三苯甲基(Mtt)，4-甲氧基三苯甲基(Mmt)，4-甲氧基-2，3，6-三甲基-苯磺酰(Mtr)，1，3，5-三甲基苯-2-磺酰(Mts)，4，4-二甲氧基二苯甲基(Mbh)，甲苯磺酰基(Tos)，2，2，5，7，8-五甲基苯并二氢吡喃-6-磺酰(Pmc)，4-甲苄基(MeBzl)，4-甲氧基苄基(MeOBzl)，苄氧基(BzlO)，苄基(Bzl)，苯甲酰基(Bz)，3-硝基-2-吡啶磺酰基(Npys)，1-(4，4-二甲基(dimentyl)-2，6-二偶氮亚环己基)乙基(Dde)，2，6-二氯苄基(2，6-DiCl-Bzl)，2-氯苄氧基羰基(2-Cl-Z)，2-溴苄氧基羰基(2-Br-Z)，苄氧基甲基(Bom)，环己氧基(cHxO)，t-丁氧基甲基(Bum)，t-丁氧基(tBuO)，t-丁基(tBu)，乙酰基(Ac)，和三氟乙酰基(TFA)。

保护/封闭基团是技术人员所熟知的，类似于将该基团偶联到包含本发明的肽合适残基上的方法(参见，例如Greene et al.，(1991)Protective Groupsin Organic Synthesis，第二版，John Wiley & Sons，Inc.Somerset，N.J.)。在一个优选的实施方案中，例如，合成期间当肽在树脂上使用醋酸酐实现乙酰化。通过选择合适的合成树脂可实现酰胺保护。在该实施方案中本文所述肽合成期间，使用rihk酰胺树脂。合成完成后，在诸如Asp和Glu的酸性双官能氨基酸和碱性氨基酸Lys上的半永久性保护基团和Tyr的羟基都同时被去掉。使用酸处理从该树脂释放的肽表现出n-末端被乙酰基保护，羧基被NH₂保护，同时去掉了所有其它保护基团。

V.增强肽吸收

本发明令人惊奇的发现还有，当所有L氨基酸肽(例如具有本发明的肽的序列的不同形式)与D-型(即本发明的肽)结合给药时，D-型肽的吸收增加。因此，在某些实施方案中，本发明包含在本发明的方法中使用D-型和L-型肽的组合。D-型肽和L-型肽可具有不同的氨基酸序列，但是，在优选的实施方案中，它们都具有本文所述肽的氨基酸序列，在更优选的实施方案中，它们具有相同的氨基酸序列。

本发明的发现还有，本发明的A两亲性螺旋肽的多联体在减轻动脉粥样硬化的一种或多种症状中也是有效的。包含多联体的单体可直接偶联在一起或由接头连接。在某些实施方案中，接头是氨基酸接头(例如，脯氨酸)，或肽接头(例如Gly₄Ser₃，SEQ ID NO：30)。在某些实施方案中，多联体是2聚体，更优选3聚体，甚至更优选4聚体，最优选5聚体，8聚体或10聚体。如上面所显示的，多聚体可包含与PCT公开号WO 02/15923中所述的apoA-I变体缔合的本文所述的G^*相关两亲性螺旋。

VI.药物制剂

为了实现本发明的方法，可用本发明的一种或多种肽或肽模拟物对，例如，诊断为具有动脉粥样硬化的一种或多种症状，或处于动脉粥样硬化风险中的个体进行给药。肽或肽模拟物可以“天然”形式，或者如果需要，以盐，酯，酰胺，前药，衍生物等的形式给药，前提是该盐，酯，酰胺，前药或衍生物是药理学上合适的，即在该方法中有效。活性试剂的盐，酯，酰胺，前药和其它衍生物可使用合成有机化学领域的技术人员已知的标准方法制备，该方法由，例如March(1992)Advanced Organic Chemistry；Reactions，Mechanisms and Structure，4th Ed.N.Y.Wiley-Interscience描述。

例如，使用一般涉及合适的酸反应的常规方法从游离碱制备酸加成盐。一般来说，该药品的碱性形式溶于诸如甲醇或乙醇的极性有机溶剂中并向其中加入酸。所得的盐可沉淀或者可通过加入极性较低的溶剂从溶液中制备出来。制备酸加成盐的合适的酸包括有机酸，例如乙酸，丙酸，乙醇酸，丙酮酸，草酸，苹果酸，丙二酸，琥珀酸，马来酸，延胡索酸，酒石酸，柠檬酸，苯甲酸，肉桂酸，杏仁酸(mandelic acid)，甲磺酸，乙磺酸，对-甲苯磺酸，水杨酸等，以及无机酸，例如，盐酸，氢溴酸，硫酸，硝酸，磷酸等。通过用合适的碱处理可将酸加成盐转变成游离碱。特别优选的本文的活性试剂的酸加成盐是卤化盐，例如可使用盐酸或氢溴酸制备的卤化盐。相反，肽或模拟物的碱性盐的制备可使用诸如氢氧化钠，氢氧化钾，氢氧化铵，氢氧化钙，三甲铵等的药学上可接受的碱以相似的方式制备。特别优选的碱性盐包括诸如钠盐的碱金属盐，和铜盐。

酯的制备一般涉及可能存在于药品分子结构内的羟基和/或羧基基团的功能的发挥。酯一般是游离醇基团的酰基取代衍生物，即来自通式为RCOOH的羧酸的半分子，其中R是烷基，优选是低级烷基。如果需要，通过使用常规氢解或水解程序可将酯恢复成游离酸。

使用本领域的技术人员已知的或在相关文献中所述的技术也可制备酰胺和前药。例如，使用合适的胺反应物可从酯制备酰胺，或者它们可通过与氨水或低级烷基胺反应从酸酐或酰基氯制备。前药一般通过半分子的共价连接制备，该连接产生在被个体的代谢系统修饰前无治疗活性的化合物。

本文鉴定的肽或模拟物可用于肠胃外，体表，口服，鼻(或者吸入形式)，直肠，或局部给药，例如通过气溶胶或者经过皮肤给药，用于预防和/或治疗动脉粥样硬化和/或其症状。药用组合物可根据给药方法以各种单位剂量形式给药。合适的单位剂量形式包括，但不局限于粉剂，片剂，丸剂，胶囊，锭剂，栓剂，贴剂，鼻腔喷雾剂，注射剂，植入的持久释放剂，脂复合物等。

本发明的肽和/或肽模拟物一般与药学上可接受的载体(赋形剂)组合以形成药物学组合物。药学上可接受的载体可含有用于例如，稳定该组合物或增加或减少活性试剂的吸收的一种或多种生理学上可接受的化合物。生理学上可接受的化合物包括，例如碳水化合物，诸如葡萄糖，蔗糖，或葡聚糖，诸如抗坏血酸或谷胱甘肽的抗氧化剂，鳌合剂，低分子量蛋白，诸如脂类的保护和吸收增强剂，减少活性试剂清除或水解的成分，或赋形剂或其它稳定剂和/或缓冲液。

其它生理学上可接受的化合物包括湿润剂，乳化剂，分散剂或对于防止微生物生长或作用特别有用的保存剂。各种保存剂(preservative)是熟知的，包括例如，苯酚和抗坏血酸。本领域的技术人员可预料到包括生理学上可接受的化合物的药学上可接受载体的选择取决于，例如，活性试剂的给药途径和活性试剂的具体生理-生化特性。

赋形剂优选是无菌的，而且一般不含不期望的杂质。这些组合物可通过常规的熟知灭菌技术进行灭菌。

在治疗应用中，将本发明的组合物以足以治愈或至少部分防止或阻止该疾病和/或其并发症的量，对患有动脉粥样硬化的一种和多种症状或有动脉粥样硬化风险的患者给药。足以实现该目的的量定义为“治疗有效量”。对该用途有效的量取决于该疾病的严重性和患者的总体健康状态。组合物的单次或多次给药可依赖于患者需要和耐受的剂量和频率进行给药。在任何情况中，组合物应提供足够量的本发明的制剂的活性剂以有效治疗患者(改善一种或多种症状)。

肽或模拟物的浓度可大范围变化，且可以主要根据液体体积，粘度，体重等按选定的和患者需要的具体给药方式作出选择。然而，选定的浓度一般提供范围从大约0.1或1mg/kg/天到大约50mg/kg/天且有时更高。典型的剂量范围从大约3mg/kg/天到大约3.5mg/kg/天，优选从大约3.5mg/kg/天到大约7.2mg/kg/天，更优选从大约7.2mg/kg/天到大约11.0mg/kg/天，且最优选从大约11.0mg/kg/天到大约15.0mg/kg/天。在某些优选的实施方案中，剂量范围从大约10mg/kg/天到大约50mg/kg/天。在某些实施方案中，剂量范围从大约20mg到大约50mg，每天口服两次。可预料到该剂量可变化以优化对特定受试者和受试者群体的治疗方案。

在某些优选的实施方案中，本发明的肽或肽模拟物可按照本领域的技术人员熟知的标准方法口服，(例如，经过片剂)或者作为注射剂给药。在其它的优选实施方案中，该肽也可以使用常规经皮肤的药物传递系统，即经皮肤的“贴剂”通过皮肤传递，其中活性剂一般包含在用作药物传递装置以固定在皮肤上的层状结构内。在该结构中，药物组合物一般包含在上面衬背层(backing layer)下面的一层，或“储存库(reservoir)”中。可预料到本文中的术语“储存库”是指最终可传递到皮肤表面的“活性成分”的总量。因此，例如，“储存库”可包括粘连在贴剂衬背层上，或者在本领域的技术人员已知的任一种不同的基质制剂上的活性成分。贴剂可含有单个储存库，或者可含有多个储存库。

在一个实施方案中，储存库包含用于在药物传递期间将系统粘贴到皮肤上的可药用接触粘连材料的聚合体基质。合适的皮肤接触粘连材料的例子包括，但不局限于，聚乙烯，聚硅氧烷，聚异丁烯，聚丙烯酸酯，聚氨酯等。另外，包含药物的储存库与皮肤接触粘合剂作为分开的不同层存在，且粘合剂在储存库下面，在这种情况下，储存库可以是上述的聚合体基质，或者可以是液态或水凝胶储存库，或者可采用一些其它形式。用作该装置的上表面的这些层中的衬背层优选用作“贴剂”的主要结构元件且赋予该装置更大的弹性。选择用于衬背层的材料优选对于活性剂和存在的任意其它物质基本上不渗透。

用于体表药物传递的其它优选的制剂包括，但不局限于，软膏和乳膏。软膏是半固态制品，一般以凡士林(petroleum)或其它石油衍生物为基础。含有选定活性剂的乳膏一般是粘性液体或半固态乳剂，通常是水包油或油包水型。乳膏基质一般是可水洗的且含有油相，乳化剂和水相。油相有时也称为“内部”相，一般由凡士林和诸如鲸蜡基或硬脂酰基醇的脂肪醇组成；尽管不是必然的，但水相通常在体积上超过油相，且一般含有湿润剂。乳膏制剂中的乳化剂一般是非离子的，阴离子的，阳离子的或两性表面活性剂。正如本领域的技术人员可预料到的，使用的特定软膏或乳膏是提供最佳药物传递的基质。与其它载体或媒介物一样，软膏基质应是惰性的，稳定的，无刺激的和不致敏的。

不同于一般的肽制剂，含有D-型氨基酸的本发明的肽甚至可以通过口服给药，不需防止被胃酸等蛋白水解，尽管如此，在某些实施方案中，通过使用保护性赋形剂可增强肽传递。通过用导致其抗酸性和酶水解的成分络合该多肽，或者通过在诸如脂质体的适当抗性载体中包装该多肽一般可实现这点。保护用于口服传递的多肽的方法是本领域熟知的(参见，例如，美国专利5,391,377描述的用于口服传递治疗剂的脂类组合物)。

通过使用持续释放蛋白质的“包装”系统可维持血清半寿期的升高。这种持续释放系统是本领域的技术人员熟知的。在一个优选的实施方案中，用于蛋白质和肽的ProLease可生物降解的微球体传递系统(Tracy(1998)Bioteclmol.Prog.14：108；Johnson等(1996)，Nature Med.2：795；Herbert et al.(1998)，Pharmaceut.Res.15，357)，是由在聚合体基质中含有蛋白质的可生物降解的聚合体微球体组成的干粉，它可作为含有或不含其它试剂的干燥制剂混合。

ProLease微球体的构建方法被特别设计成达到较高的蛋白包装效率，同时维持蛋白质的完整性。该方法由下列步骤组成(i)通过喷雾冻干含稳定赋形剂药品溶液从大量蛋白质制备冻干的蛋白质颗粒，(ii)制备药物聚合体悬液随后通过超声波处理或匀浆减少药品颗粒大小，(iii)通过雾化进液氮产生冷冻的药物聚合体微球体，(iv)用乙醇提取聚合体溶剂，和(v)过滤并真空干燥以产生最终的干粉产物。所得的粉末含有固体形式的蛋白质，它是均匀的且稳固分散在多孔聚合体颗粒内。该方法中最常用的聚合体，即poly(lactide-co-glycolide)(PLG)，是生物相容性的和可生物降解的。

包装可在低温(例如，-40℃)下完成。包装期间，蛋白质维持不含水的固态，从而最小化水诱导的蛋白质构象变化，防止包含水作为反应物的蛋白质降解反应，避免出现使蛋白质遭受变性的有机-水界面。一个优选的方法使用的溶剂对于大多数蛋白质是不溶的，因此产生较高的包装效率(例如，大于95％)。

在另一个实施方案中，溶液中的一种或多种成分作为“浓缩液”供应，例如在易于稀释的贮存容器(例如，预定的容积)中，或在易于加入一定体积水的可溶性胶囊中。

上述制剂和给药方法是说明性的而不是限制性的。可预料到使用本文提供的教导可容易地设计其它合适的制剂和给药方式。

VII.基于脂类的制剂

在某些实施方案中，本发明的肽与一种和多种脂类结合给药。脂类可作为防止和/或增强肽的运输/吸收的赋形剂进行配制或者它们可分开给药。

没有结合具体理论，本发明的发现是用某些磷脂给药(例如，口服给药)可显著增加HDL/LDL比率。另外，相信某些中等长度的磷脂通过不同于在一般脂类运输中涉及的方法进行运输。因此，某些中等长度的磷脂与本发明的肽共同给药提供了许多优势：它们防止磷脂消化或水解，它们增强了肽的吸收，且它们提高了HDL/LDL比率。

脂类可形成包装本发明的多肽的脂质体和/或它们可与该多肽络合/混合和/或它们可与本发明的多肽共价连接。制备脂质体和包装试剂的方法是本领域的技术人员熟知的(参见，例如，Martin and Papahadjopoulos(1982)J.Biol.Chem.，257：286-288；Papahadjopoulos等(1991)Proc.Natl.Acad.Sci.USA，88：11460-11464；Huang et al.(1992)Cancer Res.，52：6774-6781；Lasic等(1992)FEBS Lett.，312：255-258.，等等)。

用于这些方法的优选磷脂具有在sn-1和sn-2位置有从大约4个碳到大约24个碳范围的脂肪酸。在某些优选的实施方案中，脂肪酸是饱和的。在其它优选的实施方案中，脂肪酸可以是不饱和的。表3中列出了各种优选的脂肪酸。

表3.用于D多肽给药的优选磷脂的sn-1和sn-2位置中优选的脂肪酸

碳编号	俗名	IUPAC名称
碳编号	俗名	IUPAC名称	3:0	丙酰基	Trianoic
4:0	丁酰基	Tetranoic	3:0	丙酰基	Trianoic
4:0	丁酰基	Tetranoic	5:0	戊酰基	Pentanoic
6:0	己酰基	Hexanoic	5:0	戊酰基	Pentanoic
6:0	己酰基	Hexanoic	7:0	庚酰基	Heptanoic
8:0	辛酰基	Octanoic	7:0	庚酰基	Heptanoic
8:0	辛酰基	Octanoic	9:0	壬酰基	Nonanoic
10:0	癸酰基	Decanoic	9:0	壬酰基	Nonanoic
10:0	癸酰基	Decanoic	11:0	十一烷酰基	Undecanoic
12:0	月桂酰基	Dodecanoic	11:0	十一烷酰基	Undecanoic
12:0	月桂酰基	Dodecanoic	13:0	十三烷酰基	Tridecanoic

14:0	肉豆蔻酰基	Tetradecanoic
14:0	肉豆蔻酰基	Tetradecanoic	15:0	十五烷酰基	Pentadecanoic
16:0	棕榈酰基	Hexadecanoic	15:0	十五烷酰基	Pentadecanoic
16:0	棕榈酰基	Hexadecanoic	17:0	十七烷酰基	Heptadecanoic
18:0	硬脂酰基	Octadecanoic	17:0	十七烷酰基	Heptadecanoic
18:0	硬脂酰基	Octadecanoic	19:0	十九烷酰基	Nonadecanoic
20:0	花生四烯酰	Eicosanoic	19:0	十九烷酰基	Nonadecanoic
20:0	花生四烯酰	Eicosanoic	21:0	Heniecosanoyl	Heniecosanoic
22:0	二十二烷酰基	Docosanoic	21:0	Heniecosanoyl	Heniecosanoic
22:0	二十二烷酰基	Docosanoic	23:0	Trucisanoyl	Trocosanoic
24:0	二十四烷酰基	Tetracosanoic	23:0	Trucisanoyl	Trocosanoic
24:0	二十四烷酰基	Tetracosanoic	14:1	肉豆蔻脑酰基(Myristoleoyl)(9-顺式)
14:1	Myristelaidoyl(9-反式)		14:1	肉豆蔻脑酰基(Myristoleoyl)(9-顺式)
14:1	Myristelaidoyl(9-反式)		16:1	棕榈油酰基(Palmitoleoyl)(9-顺式)
16:1	Palmitelaidoyl(9-反式)		16:1	棕榈油酰基(Palmitoleoyl)(9-顺式)

在这些位置中的脂肪酸可以相同或不同。特别优选的磷脂在sn-3位置具有磷脂胆碱。

VIII.其它药理学活性剂

其它药理学活性剂可与基本活性剂，例如本发明的肽一起传递。在一个实施方案中，该试剂包括，但不局限于减小动脉粥样硬化事件和/或其并发症的风险的试剂。该试剂包括，但不局限于β阻断剂，β阻断剂与thiazide利尿剂的组合，抑制素，阿司匹林，ace抑制剂，ace受体抑制剂(ARBs)，等等。

合适的β阻断剂包括，但不局限于心脏选择性(选择性β1阻断剂)，例如，醋丁洛尔(alebutolol)(Sectral^TM)，氨酰心安(atenolol)(Tenormin^TM)，倍他洛尔(betaxolol)(Kerlone^TM)，比索洛尔(bisoprolol)(Zebeta^TM)，美托洛尔(metoprolol)(Lopressor^TM)，等等。合适的非选择性阻断剂(同等地阻断β1和β2)包括，但不局限于卡替洛尔(carteolol)(Cartrol^TM)，纳多洛尔(nadolol)(Corgard^TM)，喷布洛尔(penbutolol)(Levatol^TM)，吲哚洛尔(pindolol)(Visken^TM)，普萘洛尔(propranolol)(Inderal^TM)，噻吗洛尔(timolol)(Blockadren^TM)，拉贝洛尔(labetalol)(Normodyne^TM，Trandate^TM)，等等。

合适的β阻断剂thiazide利尿剂组合包括，但不局限于Lopressor HCT，ZIAC，Tenoretic，Corzide，Timolide，Inderal LA 40/25，Inderide，Normozide，等等。

合适的抑制素包括，但不局限于pravastatin(Pravachol/Bristol-MyersSquibb)，simvastatin(Zocor/Merck)，lovastatin(Mevacor/Merck)，等等。

合适的ace抑制剂包括，但不局限于captopril(例如，Capotent^TM bySquibb)，benazepril(例如，Lotensin^TM by Novartis)，enalapril(例如，Vasotec^TMby Merck)，fosinopril(例如，Monopril^TM by Bristol-Myers)，lisinopril(例如，Prinivil^TM by Merck or Zestril^TM by Astra-Zeneca)，quinapril(例如，Accupril^TM by Parke-Davis)，ramipril(例如，Altace^TM by Hoechst MarionRoussel，King Pharmaceuticals)，imidapril，perindopril erbumine(例如，Acon^TMby Rhone-Polenc Rorer)，trandolapril(例如，Mavik^TM by KnollPharmaceutical)，等等。合适的ARBS(Ace受体阻断剂)包括但不局限于losartan(例如，Cozaar^TM by Merck)，irbesartan(例如，Avapro^TM by Sanofi)，candesartan(例如，Atacand^TM by Astra Merck)，valsartan(例如，Diovan^TM byNovartis)，等等。

IX.改善动脉粥样硬化的一种或多种症状的试剂盒

在另一个实施方案中，本发明提供了用于改善动脉粥样硬化的一种或多种症状或用于预防性治疗具有动脉粥样硬化风险的受试者(人或动物)的试剂盒。该试剂盒优选包括含有本发明的一个或多个肽或肽模拟物的容器。肽或肽模拟物可以单位剂量制剂(例如，栓剂，片剂，胶囊，贴剂，等)供应和/或任选与一种或多种药学上可接受的赋形剂组合。

该试剂盒任选还包含用于治疗心脏病和/或动脉粥样硬化的一种或多种其它试剂。该试剂包括，但不局限于，β阻断剂，血管舒张剂，阿司匹林，抑制素，ace抑制剂或ace受体抑制剂(ARBs)等，例如，如上所述。

另外，该试剂盒任选包括为实施该方法或使用本发明的“治疗剂”或“预防剂”提供指导(即，方案)的标签和/或说明性材料。优选的说明性材料可描述本发明的一种或多种多肽减轻动脉粥样硬化的一种或多种症状和/或在有动脉粥样硬化风险的个体中防止一种或多种该症状的发作或增强的用途。说明性材料也可任选教导优选的剂量/治疗方案，计数指示等。

尽管说明性材料一般包含书面的或打印的材料，但是它们不限于这些。本发明还包含能储存这些说明并将它们传达给最终用户的任何介质。该介质包括，但不限于电子储存媒体(例如，磁盘，磁带，盒式贮存器，芯片)，光学媒体(例如，CD ROM)，等等。该媒体可包括提供该说明性材料的因特网网址。

实施例

下面的实施例用于举例说明，但不是用于限制所要求保护的发明。

实施例1

使用Apo J相关肽减轻动脉粥样硬化的症状

防止LDL诱导的单核细胞的趋化活性

图1举例比较了D-4F(circulation 2002；105：290-292)与由D氨基酸(D-J336，Ac-L-L-E-Q-L-N-E-Q-F-N-W-V-S-R-L-A-N-L-T-Q-G-E-NH2，SEQ IDNO：1)组成的apo J肽在体外的共培养中防止LDL诱导的单核细胞趋化活性的作用。只用培养基(无添加物)培养人主动脉内皮细胞，用对照人LDL(200μg蛋白质/ml)或对照人LDL+对照人HDL(350μg蛋白质/ml)培养。D-J336或D-4F以指定的浓度范围加上对照人LDL(200μg蛋白质/ml)被添加到其它培养孔中。随后进行过夜培养，上清液用于检测单核细胞的趋化活性。如图1所示，防止由于人动脉壁细胞而致的LDL-诱导的单核细胞趋化活性的apo-J变异体肽的体外浓度比D-4F肽所要求的浓度低10到25倍。

用D-J336预处理动脉壁细胞来防止LDL-诱导的单核细胞趋化活性

图2举例比较了在预培养中，D-4F与D-J336防止LDL诱导单核细胞趋化活性的作用。人主动脉内皮细胞用D-J336或D-4F以D-J336浓度为4，2和1μg/ml或D-4F浓度为100，50，25和12.5μg/ml预培养6小时。冲洗培养物并用培养基单独培养(无添加物)，或用对照人LDL(200μg蛋白质/ml)，或与对照人LDL+对照人HDL(350μg蛋白质/ml)培养作为检测对照。用肽预处理的孔接受200μg蛋白质/ml的对照人LDL。接着进行过夜培养，上清液用于检测单核细胞的趋化活性。

如图2所示，Apo J变异体肽在体外防止LDL被动脉壁细胞氧化的效力要高10-25倍。

Apo J肽模拟物对裸小鼠中LDL受体HDL保护能力的作用

D-4F命名为F，或由D氨基酸组成的apo J肽(D-J336，命名为J)以每ml饮用水0.25或0.5mg被添加到LDL受体裸小鼠(每组4个)的饮用水中。24-或48-hrs后，收集小鼠的血液，分离它们的HDL，并检测其防止LDL诱导的单核细胞趋化活性的能力。检测对照包括，没有接受脂蛋白(没有添加)的培养孔，或只有对照人LDL(命名为LDL，200μg胆固醇/ml)，或对照LDL+对照人HDL(命名为+HDL，350μg胆固醇)。为了测试小鼠的HDL，对照LDL与小鼠HDL(+F HDL或+J HDL)一起添加到动脉壁细胞培养物中。小鼠HDL分别以100μg胆固醇/ml添加。在用D-4F或D-J336处理之后，100μg/ml的小鼠HDL与350μg/ml的对照人HDL，在防止对照LDL诱导动脉壁细胞产生单核细胞趋化活性上的作用是相同的。D-J336肽相对于D-4F在体外和体内所要求的相对剂量之间的这种差异的原因可能是与这两个肽在水中的溶解度，我们认为当测定要达到同等的溶解度时，D-J肽在体内的活性比在体外要高得多。

来自口服肽的apoE裸小鼠的HDL防止LDL-诱导的单核细胞趋化活性

图4说明了口服apo A-1肽模拟物和apoJ肽对HDL保护能力的影响。对ApoE裸小鼠(每组4只)给予每ml引用水中50，30，20，10，5μg的D-4F(命名为F)或每ml饮用水中50，30或20μg的apoJ肽(命名为J)。24hrs后收集血液，通过FPLC对血浆进行分级分离，分别收集含LDL的级分(命名为mLDL或鼠LDL)和含有HDL的级分(命名为mHDL)，并通过检测LDL-诱导的单核细胞趋化活性测定了HDL防止LDL氧化的保护能力。为了检测对照，培养孔不添加脂蛋白(不添加)，只有mLDL(浓度为200μg胆固醇/ml)，或mLDL+标准的正常人HDL(命名为Cont.h HDL，浓度为350μg HDL胆固醇/ml)。

为了检测鼠HDL，mLDL与鼠HDL一起(+F mHDL或+J mHDL)被添加到动脉壁细胞培养物中。来自在其饮用水中没有添加任何肽的小鼠的HDL被命名为无肽mHDL。鼠HDL以100μg胆固醇/ml的浓度使用。在接受D-4F或D-J336后，100μg/ml的鼠HDL与350μg/ml的正常人HDL活性相当。如图4所示，当添加到饮用水中时，D-J肽与D-4F在增强apo E裸小鼠的HDL保护能力方面同样有效。

获自口服肽的apoE裸(null)小鼠的LDL诱导单核细胞趋化活性的能力

图5说明了口服apo A-1肽模拟物和apoJ肽对LDL对氧化的易感性的影响。在ApoE裸小鼠(每组4只)的饮用水中给予了每ml饮用水中50，30，20，10，5μg D-4F(命名为F)或每ml饮用水中50，30或20μg apo J肽(D-J336由D氨基酸组成，命名为J)。24hrs后收集图4所示的小鼠的血液，通过FPLC对血浆进行分级分离，收集含LDL的级分(对于鼠LDL命名为mLDL)，并通过检测诱导的单核细胞趋化活性测定了LDL对氧化的敏感性。为了检测对照，培养孔不添加脂蛋白(不添加)，只有mLDL(浓度为200μg胆固醇/ml)，或mLDL+标准的正常人HDL(命名为Cont.h HDL，浓度为350μg HDL/ml)。

来自接受D-4F(F mLDL)的小鼠或那些接受apoJ肽(J mLDL)的小鼠的鼠LDL，mLDL被添加到动脉壁细胞培养物中。来自在它们的饮用水中没有添加肽的小鼠的LDL被命名为无肽LDL。

如图5所示，当添加到饮用水中时，通过测定诱导的单核细胞的趋化活性，在给予来自apoE裸小鼠的LDL对被人动脉壁细胞氧化的抗性方面，D-J336稍微比D-4F更加有效。

防止磷脂氧化和获自口服apoE裸小鼠的HDL诱导的单核细胞趋化活性

图6说明了，口服apoA-1肽模拟物和apoJ肽对HDL保护能力的影响。对ApoE裸小鼠(每组4只)给予每ml引用水中50，30，20，10，5μg的D-4F(命名为F)或每ml饮用水中50，30或20μg的apoJ肽(D-J336由D氨基酸组成，命名为J)。24hrs后收集血液，通过FPLC对血浆进行分级分离，收集含HDL的级分(命名为mHDL)，并通过检测诱导的单核细胞趋化活性测定了HDL防止PAPC氧化的保护能力。为了检测对照，培养孔不添加脂蛋白(不添加)，20μg/ml的磷脂PAPC+HPODE，1.0μg/ml，或PAPC+HPODE加上标准的正常人HDL(浓度为350μg HDL/ml，并命名为+Cont.h HDL)。

为了检测鼠HDL，PAPC+HPODE与鼠HDL一起(+F mHDL或+J mHDL)被添加到动脉壁细胞培养物中。来自在其饮用水中没有添加任何肽的小鼠的HDL被命名为“无肽mHDL”。鼠HDL的使用浓度为100μg胆固醇/ml。

如图6所示的数据表明，当添加到饮用水中时，通过测定单核细胞趋化活性的产生，在引起HDL抑制磷脂PAPC被人动脉壁细胞共培养物中的氧化型HPODE氧化方面，D-J336与D-4F同样有效。

口服apo A-1肽模拟物和apoJ肽对小鼠中血桨对氧磷酶活性的作用

图7显示了，口服apo A-1肽模拟物和apoJ肽对小鼠中血浆对氧磷酶活性的影响。对ApoE裸小鼠(每组4只)给予每ml引用水中50，10，5或0μg的D-4F(命名为F)或每ml饮用水中50，10或5μg的apoJ肽(D-J336由D氨基酸组成，命名为J)。24hrs后收集血液，并检测血浆的PON1活性。这些数据显示，当添加到饮用水中时，在增强apoE裸小鼠的对氧磷酶活性上，D-J336至少与D-4F同样有效。

实施例2

口服G ^* 肽增强ApoE缺陷小鼠的HDL保护能力

用具有以下氨基酸序列的G^*肽处理雌性的4个月apoE缺陷小鼠：肽113-122＝Ac-L V GRQLEEFL-NH2(SEQ ID NO.9)，肽336-357＝Ac-L L EQ L N E Q F N W V S R L A N L T Q G E-NH2(SEQ ID NO.17)，以及肽377-390＝Ac-P S G V T E V V V K L F D S-NH2(SEQ ID NO.19)。

每只小鼠通过胃管接受200μg肽。4小时后获得血液，分离血浆，对脂蛋白进行分级分离，并检测HDL(浓度为25μg/ml)防止人动脉壁细胞培养物中LDL被氧化的保护能力。数据显示于图8，在小鼠中肽提供了显著的HDL保护能力。

在另一个实验中，用序列为Ac-QQ T H M L D V M Q D-NH2.(SEQ IDNO：11)的11个氨基酸的G^*肽146-156处理雌性的4个月apoE缺陷小鼠(每组n＝4)。小鼠在其饮用水中以指定浓度接受肽(见图9)。18个小时后，收集血液，分离血浆，对脂蛋白进行分级分离，并检测HDL(浓度为50μg胆固醇/ml)防止人动脉壁细胞培养物中的PAPC(浓度为25μg/ml)+HPODE(浓度为1.0μg/ml)被氧化的保护能力。检测对照包括不添加，PAPC+HPODE和PAPC+HPODE加上对照HDL(命名为+HDL)。数据为在3份培养物的9个高倍视野被转移的单核细胞的数量的平均+/-SD。星号表示在p＜0.05对于对照水的水平(0μg/ml)上显著性。

可以理解的是，本文中所述的实施例和实施方案仅用于说明的目的，在其教导下本领域的技术人员可以提出各种修改和改变，它们应包含在本申请实质精神和范围以及所附权利要求书的范围内。本文引证的所用出版物，专利和专利申请以其整体作为参考文献在此引用以用于所有目的。

序列表

<110>加利福尼亚大学董事会(THE REGENTS OF THE UNIVERSITY OF CALIFORNIA)

<120>用于改善动脉粥样硬化的G类多肽

<130>407T-301100PC

<140>PCT/US03/09988

<141>2003-04-01

<150>US 10/120,508

<151>2002-04-05

<160>32

<170>PatentIn version 3.3

<210>1

<211>22

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的D肽.

<400>1

Leu Leu Glu Gln Leu Asn Glu Gln Phe Asn Trp Val Ser Arg Leu Ala

1 5 10 15

Asn Leu Thr G1u Gly Glu

20

<210>2

<211>18

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的D肽.

<400>2

Leu Leu Glu Gln Leu Asn Glu Gln Phe Asn Trp Val Ser Arg Leu Ala

1 5 10 15

Asn Leu

<210>3

<211>25

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的D肽.

<400>3

Asn Glu Leu Gln Glu Met Ser Asn Gln Gly Ser Lys Tyr Val Asn Lys

1 5 10 15

Glu Ile Gln Asn Ala Val Asn Gly Val

20 25

<210>4

<211>21

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的D肽.

<400>4

Ile Gln Asn Ala Val Asn Gly Val Lys Gln Ile Lys Thr Leu Ile Glu

1 5 10 15

Lys Thr Asn Glu Glu

20

<210>5

<211>32

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的D肽.

<400>5

Arg Lys Thr Leu Leu Ser Asn Leu Glu Glu Ala Lys Lys Lys Lys Glu

1 5 10 15

Asp Ala Leu Asn Glu Thr Arg Glu Ser Glu Thr Lys Leu Lys Glu Leu

20 25 30

<210>6

<211>16

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的D肽.

<400>6

Pro Gly Val Cys Asn Glu Thr Met Met Ala Leu Trp Glu Glu Cys Lys

1 5 10 15

<210>7

<211>16

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的D肽.

<400>7

Pro Cys Leu Lys Gln Thr Cys Met Lys Phe Tyr Ala Arg Val Cys Arg

1 5 10 15

<210>8

<211>19

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的D肽.

<400>8

Glu Cys Lys Pro Cys Leu Lys Gln Thr Cys Met Lys Phe Tyr Ala Arg

1 5 10 15

Val Cys Arg

<210>9

<211>10

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的D肽.

<400>9

Leu Val Gly Arg Gln Leu Glu Glu Phe Leu

1 5 10

<210>10

<211>12

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的D肽.

<400>10

Met Asn Gly Asp Arg Ile Asp Ser Leu Leu Glu Asn

1 5 10

<210>11

<211>11

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的D肽.

<400>11

Gln Gln Thr His Met Leu Asp Val Met Gln Asp

1 5 10

<210>12

<211>14

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的D肽.

<400>12

Phe Ser Arg Ala Ser Ser Ile Ile Asp Glu Leu Phe Gln Asp

1 5 10

<210>13

<211>15

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的D肽.

<400>13

Pro Phe Leu Glu Met Ile His Glu Ala Gln Gln Ala Met Asp Ile

1 5 10 15

<210>14

<211>11

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的D肽.

<400>14

Pro Thr Glu Phe Ile Arg Glu Gly Asp Asp Asp

1 5 10

<210>15

<211>15

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的D肽.

<400>15

Arg Met Lys Asp Gln Cys Asp Lys Cys Arg Glu Ile Leu Ser Val

1 5 10 15

<210>16

<211>32

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的D肽.

<400>16

Pro Ser Gln Ala Lys Leu Arg Arg Glu Leu Asp Glu Ser Leu Gln Val

1 5 10 15

Ala Glu Arg Leu Thr Arg Lys Tyr Asn Glu Leu Leu Lys Ser Tyr Gln

20 25 30

<210>17

<211>22

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的D肽.

<400>17

Leu Leu Glu Gln Leu Asn Glu Gln Phe Asn Trp Val Ser Arg Leu Ala

1 5 10 15

Asn Leu Thr Gln Gly Glu

20

<210>18

<211>11

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的D肽.

<400>18

Asp Gln Tyr Tyr Leu Arg Val Thr Thr Val Ala

1 5 10

<210>19

<211>14

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的D肽.

<400>19

Pro Ser Gly Val Thr Glu Val Val Val Lys Leu Phe Asp Ser

1 5 10

<210>20

<211>21

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的D肽.

<400>20

Pro Lys Phe Met Glu Thr Val Ala Glu Lys Ala Leu Gln Glu Tyr Arg

1 5 10 15

Lys Lys His Arg Glu

20

<210>21

<211>26

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的D肽.

<400>21

Trp Asp Arg Val Lys Asp Leu Ala Thr Val Tyr Val Asp Val Leu Lys

1 5 10 15

Asp Ser Gly Arg Asp Tyr Val Ser Gln Phe

20 25

<210>22

<211>25

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的D肽.

<400>22

Val Ala Thr Val Met Trp Asp Tyr Phe Ser Gln Leu Ser Asn Asn Ala

1 5 10 15

Lys Glu Ala Val Glu His Leu Gln Lys

20 25

<210>23

<211>27

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的D肽.

<400>23

Arg Trp Glu Leu A1a Leu Gly Arg Phe Trp Asp Tyr Leu Arg Trp Val

1 5 10 15

Gln Thr Leu Ser Glu Gln Val Gln Glu Glu Leu

20 25

<210>24

<211>35

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的D肽.

<400>24

Leu Ser Ser Gln Val Thr Gln Glu Leu Arg Ala Leu Met Asp Glu Thr

1 5 10 15

Met Lys Glu Leu Lys Glu Leu Lys Ala Tyr Lys Ser Glu Leu Glu Glu

20 25 30

Gln Leu Thr

35

<210>25

<211>26

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的D肽.

<400>25

Ala Arg Leu Ser Lys Glu Leu Gln Ala Ala Gln Ala Arg Leu Gly Ala

1 5 10 15

Asp Met Glu Asp Val Cys Gly Arg Leu Val

20 25

<210>26

<211>26

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的D肽.

<400>26

Val Arg Leu Ala Ser His Leu Arg Lys Leu Arg Lys Arg Leu Leu Arg

1 5 10 15

Asp Ala Asp Asp Leu Gln Lys Arg Leu Ala

20 25

<210>27

<211>19

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的D肽.

<400>27

Pro Leu Val Glu Asp Met Gln Arg Gln Trp Ala Gly Leu Val Glu Lys

1 5 10 15

Val Gln Ala

<210>28

<211>17

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的D肽.

<400>28

Met Ser Thr Tyr Thr Gly Ile Phe Thr Asp Gln Val Leu Ser Val Leu

1 5 10 15

Lys

<210>29

<211>22

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的D肽.

<400>29

Leu Leu Ser Phe Met Gln Gly Tyr Met Lys His Ala Thr Lys Thr Ala

1 5 10 15

Lys Asp Ala Leu Ser Ser

20

<210>30

<211>7

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的肽接头

<400>30

Gly Gly Gly Gly Ser Ser Ser

1 5

<210>31

<211>45

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的D肽

<220>

<221>misc_feature

<223>氨基末端被酰化，羧基末端被酰胺化

<400>31

Leu Leu Glu Gln Leu Asn Glu Gln Phe Asn Trp Val Ser Arg Leu Ala

1 5 10 15

Asn Leu Thr Glu Gly Glu Pro Leu Leu Glu Gln Leu Asn Glu Gln Phe

20 25 30

Asn Trp Val Ser Arg Leu Ala Asn Leu Thr Glu Gly Glu

35 40 45

<210>32

<211>41

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的D肽.

<220>

<221>misc_feature

<223>氨基末端被酰化，羧基末端被酰胺化

<400>32

Leu Leu Glu Gln Leu Asn Glu Gln Phe Asn Trp Val Ser Arg Leu Ala

1 5 10 15

Asn Leu Thr Glu Gly Glu Pro Asp Trp Phe Lys Ala Phe Tyr Asp Lys

20 25 30

Val Ala Glu Lys Phe Lys Glu Ala Phe

35 40

Claims

1.一种改善动脉粥样硬化或与炎症应答相关的其它疾病症状的分离的多肽，所述的多肽含有在肽的极性表面具有带电荷残基并具有宽的非极性表面的两亲性螺旋多肽。

2.权利要求1的多肽，其中所述肽的长度至少为10个氨基酸。

3.权利要求2的多肽，其中所述肽的长度为大约40个或更少的肽。

4.权利要求2的多肽，其中所述肽包含G^*两亲性螺旋。

5.权利要求4的多肽，其中所述肽显示与apoJ有大于约50％的序列同一性。

6.权利要求2的多肽，其中所述肽保护磷脂以防止被氧化剂所氧化。

7.权利要求2的多肽，其中所述肽包含选自下列序列的氨基酸：LLEQLNEQFNWVSRLANLTQGE，(SEQ ID NO：1)，LLEQLNEQFNWVSRLANL，(SEQ ID NO：2)，NELQEMSNQGSKYVNKEIQNAVNGV，(SEQ ID NO：3)，IQNAVNGVKQIKTLIEKTNEE，(SEQ ID NO：4)，RKTLLSNLEEAKKKKEDALNETRESETKLKEL，(SEQ ID NO：5)，PGVCNETMMALWEECK，(SEQ ID NO：6)，PCLKQTCMKFYARVCR，(SEQID NO：7)，ECKPCLKQTCMKFYARVCR，(SEQ ID NO：8)，LVGRQLEEFL，(SEQ ID NO：9)，MNGDRIDSLLEN，(SEQ ID NO：10)，QQTHMLDVMQD，(SEQ ID NO：11)，FSRASSIIDELFQD，(SEQ ID NO：12)，PFLEMIHEAQQAMDI，(SEQ ID NO：13)，PTEFIREGDDD，(SEQ ID NO：14)，RMKDQCDKCREILSV，(SEQ ID NO：15)，PSQAKLRRELDESLQVAERLTRKYNELLKSYQ，(SEQ ID NO：16)，LLEQLNEQFNWVSRLANLTEGE(SEQ ID NO：17)，DQYYLRVTTVA，(SEQID NO：18)，PSGVTEVVVKLFDS，(SEQ ID NO：19)，PKFMETVAEKALQEYRKKHRE，(SEQ ID NO：20)，WDRVKDLATVYVDVLKDSGRDYVSQF(SEQ ID NO：21)，VATVMWDYFSQLSNNAKEAVEHLQK(SEQ ID NO：22)，RWELALGRFWDYLRWVQTLSEQVQEEL(SEQID NO：23)，LSSQVTQELRALMDETMKELKELKAYKSELEEQLT(SEQ ID NO：24)，ARLSKELQAAQARLGADMEDVCGRLV(SEQ ID NO：25)，VRLASHLRKLRKRLLRDADDLQKRLA(SEQID NO：26)，PLVEDMQRQWAGLVEKVQA(SEQ ID NO：27)，MSTYTGIFTDQVLSVLK(SEQ ID NO：28)，或LLSFMQGYMKHATKTAKDALSS(SEQ ID NO：29)。

8.权利要求7的肽，其中所述肽是两个或更多个所述氨基酸序列的多联体。

9.权利要求2的多肽，其中所述肽还含有保护基团。

10.权利要求2的多肽，其中所述肽还包含偶联到氨基或羧基末端的保护基团。

11.权利要求9的多肽，其中所述的保护基团是选自下面的基团：乙酰基，酰胺，3到20个碳原子的烷基，Fmoc，t-boc，9-芴乙酰基，1-芴羧基，9-芴羧基，9-芴酮-1-羧基，苄氧羰基，呫吨基(Xan)，三苯甲基(Trt)，4-甲基三苯甲基(Mtt)，4-甲氧基三苯甲基(Mmt)，4-甲氧基-2，3，6-三甲基-苯磺酰(Mtr)，1，3，5-三甲基苯-2-磺酰(Mts)，4，4-二甲氧基二苯甲基(Mbh)，甲苯磺酰基(Tos)，2，2，5，7，8-五甲基苯并二氢吡喃-6-磺酰(Pmc)，4-甲苄基(MeBzl)，4-甲氧基苄基(MeOBzl)，苄氧基(BzlO)，苄基(Bzl)，苯甲酰基(Bz)，3-硝基-2-吡啶磺酰基(Npys)，1-(4，4-dimentyl-2，6-二偶氮亚环己基)乙基(Dde)，2，6-二氯苄基(2，6-DiCl-Bzl)，2-氯苄氧基羰基(2-Cl-Z)，2-溴苄氧基羰基(2-Br-Z)，苄氧基甲基(Bom)，t-丁氧基羰基(Boc)，环己氧基(cHxO)，t-丁氧基甲基(Bum)，t-丁氧基(tBuO)，t-丁基(tBu)，乙酰基(Ac)，苯甲酰基，苄酯基，丙基，丁基，戊基，己基或三氟乙酰基(TFA)。

12.权利要求9的多肽，其中所述肽包含偶联到氨基末端的保护基团，而且所述的氨基末端保护基团是选自苯甲酰基，乙酰基，丙烯基，苄酯基，丙基，丁基，戊基，己基或3到20个碳原子的烷基的保护基团。

13.权利要求9的多肽，其中所述肽包含偶联到羧基末端的保护基团，而且所述的羧基末端保护基团为酰胺基。

14.权利要求9的多肽，其中所述肽还包含偶联到氨基末端的第一保护基团，其中所述的保护基团是选自苯甲酰基，乙酰基，丙烯基，苄酯基，丙基，丁基，戊基，己基或3到20个碳原子的烷基的保护基团；和偶联到羧基末端的第二保护基团，其中所述的羧基保护基团是酰胺基。

15.权利要求2的多肽，其中所述肽包含偶联到氨基末端的第一保护基团和偶联到羧基末端的第二保护基团。

16.权利要求2的多肽，其中所述肽包含位于氨基末端的Ac基团。

17.权利要求2的多肽，其中所述肽包含位于羧基末端的-NH₂基团。

18.权利要求2的多肽，其中所述肽包含位于氨基末端的Ac基团和位于羧基末端的-NH₂基团。

19.权利要求7的多肽，其中所述肽包含位于氨基末端的Ac基团。

20.权利要求7的多肽，其中所述肽包含位于羧基末端的-NH₂基团。

21.权利要求7的多肽，其中所述肽包含位于氨基末端的Ac基团和位于羧基末端的-NH₂基团。

22.权利要求2的多肽，其中所述肽包含“D”氨基酸。

23.权利要求2的多肽，其中所述肽包含多数的“D”氨基酸。

24.权利要求2的多肽，其中含有所述肽的所有对映体氨基酸都是“D”氨基酸。

25.权利要求2的多肽，其中所述肽与药学上可接受的赋形剂混合。

26.权利要求2的多肽，其中所述肽与适于口服给药哺乳动物的药学上可接受的赋形剂混合。

27.权利要求6的多肽，其中所述的氧化剂选自过氧化氢，13(S)-HPODE，15(S)-HPETE，HPODE，HPETE，HODE或HETE。

28.权利要求6的多肽，其中所述的磷脂选自1-棕榈酰-2-花生四烯酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(PAPC)，1-硬脂酰-2-花生四烯酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(SAPC)，1-硬脂酰-2-花生四烯酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(SAPE)。

29.权利要求1的多肽，其中所述多肽与磷脂偶联。

30.权利要求29的多肽，其中所述多肽与磷脂共价偶联。

31.权利要求29的多肽，其中所述多肽与含有溶血磷脂酰胆碱的磷脂共价偶联。

32.权利要求29的多肽，其中所述多肽与选自丙酰基，丁酰基，戊酰基，己酰基，庚酰基，辛酰基，壬酰基，癸酰基，十一烷酰基，月桂酰基，十三烷酰基，肉豆蔻酰基，十五烷酰基，棕榈酰基，十七烷酰基，硬脂酰基，十九烷酰基，花生四烯酰，Heniecosanoyl，二十二烷酰基，Trucisanoyl，二十四烷酰基，肉豆蔻脑酰基(9-顺式)，Myristelaidoyl(9-反式)，棕榈油酰基(9-顺式)，Palmitelaidoyl(9-反式)的磷脂共价偶联。

33.权利要求32的多肽，其中所述的多肽共价偶联到所述磷脂的sn-1或sn-2位置。

34.一种适合于口服给药改善动脉粥样硬化症状的组合物，其中所述的组合物包含的肽在该肽的极性表面具有带电荷残基而且具有宽的非极性表面的两亲性螺旋，其中所述肽含有D氨基酸，而且所述肽在氨基末端和羧基末端被封闭。

35.权利要求34的组合物，其中所述肽长度至少为10个氨基酸。

36.权利要求35的组合物，其中所述肽的长度为大约40个或更少的肽。

37.权利要求35的组合物，其中所述肽含有G^*两亲性螺旋。

38.权利要求37的组合物，其中所述肽与apoJ显示大于约50％的序列同一性。

39.权利要求35的组合物，其中所述肽保护磷脂以防止被氧化剂所氧化。

40.权利要求35的组合物，其中所述肽包含选自下列的氨基酸序列：LLEQLNEQFNWVSRLANLTQGE，(SEQ ID NO：1)，LLEQLNEQFNWVSRLANL，(SEQ ID NO：2)，NELQEMSNQGSKYVNKEIQNAVNGV，(SEQ ID NO：3)，IQNAVNGVKQIKTLIEKTNEE，(SEQ ID NO：4)，RKTLLSNLEEAKKKKEDALNETRESETKLKEL，(SEQ ID NO：5)，PGVCNETMMALWEECK，(SEQ ID NO：6)，PCLKQTCMKFYARVCR，(SEQID NO：7)，ECKPCLKQTCMKFYARVCR，(SEQ ID NO：8)，LVGRQLEEFL，(SEQ ID NO：9)，MNGDRIDSLLEN，(SEQ ID NO：10)，QQTHMLDVMQD，(SEQ ID NO：11)，FSRASSIIDELFQD，(SEQ ID NO：12)，PFLEMIHEAQQAMDI，(SEQ ID NO：13)，PTEFIREGDDD，(SEQ ID NO：14)，RMKDQCDKCREILSV，(SEQ ID NO：15)，PSQAKLRRELDESLQVAERLTRKYNELLKSYQ，(SEQ ID NO：16)，LLEQLNEQFNWVSRLANLTEGE(SEQ ID NO：17)，DQYYLRVTTVA，(SEQID NO：18)，PSGVTEVVVKLFDS，(SEQ ID NO：19)，PKFMETVAEKALQEYRKKHRE，(SEQ ID NO：20)，WDRVKDLATVYVDVLKDSGRDYVSQF(SEQ ID NO：21)，VATVMWDYFSQLSNNAKEAVEHLQK(SEQ ID NO：22)，RWELALGRFWDYLRWVQTLSEQVQEEL(SEQ ID NO：23)，LSSQVTQELRALMDETMKELKELKAYKSELEEQLT(SEQ ID NO：24)，ARLSKELQAAQARLGADMEDVCGRLV(SEQ ID NO：25)，VRLASHLRKLRKRLLRDADDLQKRLA(SEQID NO：26)，PLVEDMQRQWAGLVEKVQA(SEQ ID NO：27)，MSTYTGIFTDQVLSVLK(SEQ ID NO：28)，或LLSFMQGYMKHATKTAKDALSS(SEQ ID NO：29)。

41.权利要求35的组合物，其中所述的第一保护基团和第二保护基团独立的选自下列基团：乙酰基，酰胺，3到20个碳原子的烷基，Fmoc，t-boc，9-芴乙酰基，1-芴羧基，9-芴羧基，9-芴酮-1-羧基，苄氧羰基，呫吨基(Xan)，三苯甲基(Trt)，4-甲基三苯甲基(Mtt)，4-甲氧基三苯甲基(Mmt)，4-甲氧基-2，3，6-三甲基-苯磺酰(Mtr)，1，3，5-三甲基苯-2-磺酰(Mts)，4，4-二甲氧基二苯甲基(Mbh)，甲苯磺酰基(Tos)，2，2，5，7，8-五甲基苯并二氢吡喃-6-磺酰(Pmc)，4-甲苄基(MeBzl)，4-甲氧基苄基(MeOBzl)，苄氧基(BzlO)，苄基(Bzl)，苯甲酰基(Bz)，3-硝基-2-吡啶磺酰基(Npys)，1-(4，4-dimentyl-2，6-二偶氮亚环己基)乙基(Dde)，2，6-二氯苄基(2，6-DiCl-Bzl)，2-氯苄氧基羰基(2-Cl-Z)，2-溴苄氧基羰基(2-Br-Z)，苄氧基甲基(Bom)，t-丁氧基羰基(Boc)，环己氧基(cHxO)，t-丁氧基甲基(Bum)，t-丁氧基(tBuO)，t-丁基(tBu)，乙酰基(Ac)，苯甲酰基，苄酯基，丙基，丁基，戊基，己基或三氟乙酰基(TFA)。

42.权利要求35的组合物，其中所述的第一保护基团是乙酰基。

43.权利要求35的组合物，其中所述的第二保护基团是酰胺。

44.权利要求35的组合物，其中含有所述肽的对映体氨基酸超过一半是D氨基酸。

45.权利要求35的组合物，其中含有所述肽的所有对映体氨基酸都是D氨基酸。

46.权利要求35的组合物，其中所述组合物还含有药学上可接受的赋形剂。

47.权利要求46的组合物，其中所述的赋形剂是适合于口服给药的赋形剂。

48.权利要求46的组合物，其中所述的赋形剂是适合于注射的赋形剂。

49.一种药物组合物，所述的组合物含有包含于药学上可接受的赋形剂中的权利要求1的多肽。

50.权利要求49的组合物，其中所述的组合物含有单位剂量制剂。

51.权利要求35的组合物，其中所述的多肽与磷脂偶联。

52.权利要求51的组合物，其中所述多肽与磷脂共价偶联。

53.权利要求51的组合物，其中所述多肽与含有溶血磷脂酰胆碱的磷脂共价偶联。

54.权利要求51的组合物，其中所述的多肽与选自丙酰基，丁酰基，戊酰基，己酰基，庚酰基，辛酰基，壬酰基，癸酰基，十一烷酰基，月桂酰基，十三烷酰基，肉豆蔻酰基，十五烷酰基，棕榈酰基，十七烷酰基，硬脂酰基，十九烷酰基，花生四烯酰，Heniecosanoyl，二十二烷酰基，Trucisanoyl，二十四烷酰基，肉豆蔻脑酰基(9-顺式)，Myristelaidoyl(9-反式)，棕榈油酰基(9-顺式)，Palmitelaidoyl(9-反式)的磷脂共价偶联。

55.一种改善哺乳动物中动脉粥样硬化的症状的方法，所述方法包括用肽或含有在肽的极性表面上具有带电荷残基和具有大的非极性表面的两亲性螺旋的肽的多联体对所述哺乳动物给药。

56.权利要求55的方法，其中所述肽长度至少为10个氨基酸。

57.权利要求56的组合物，其中所述肽的长度为大约40个或更少的肽。

58.权利要求56的组合物，其中所述肽含有G^*两亲性螺旋。

59.权利要求58的组合物，其中所述肽与apoJ显示大于约50％的序列同一性。

60.权利要求56的组合物，其中所述肽保护磷脂以防止被氧化剂所氧化。

61.权利要求56的组合物，其中所述肽包含选自下列的氨基酸序列：LLEQLNEQFNWVSRLANLTQGE，(SEQ ID NO：1)，LLEQLNEQFNWVSRLANL，(SEQ ID NO：2)，NELQEMSNQGSKYVNKEIQNAVNGV，(SEQ ID NO：3)，IQNAVNGVKQIKTLIEKTNEE，(SEQ ID NO：4)，RKTLLSNLEEAKKKKEDALNETRESETKLKEL，(SEQ ID NO：5)，PGVCNETMMALWEECK，(SEQ ID NO：6)，PCLKQTCMKFYARVCR，(SEQ ID NO：7)，ECKPCLKQTCMKFYARVCR，(SEQ ID NO：8)，LVGRQLEEFL，(SEQ ID NO：9)，MNGDRIDSLLEN，(SEQ ID NO：10)，QQTHMLDVMQD，(SEQ ID NO：11)，FSRASSIIDELFQD，(SEQ ID NO：12)，PFLEMIHEAQQAMDI，(SEQ ID NO：13)，PTEFIREGDDD，(SEQ ID NO：14)，RMKDQCDKCREILSV，(SEQ ID NO：15)，PSQAKLRRELDESLQVAERLTRKYNELLKSYQ，(SEQ ID NO：16)，LLEQLNEQFNWVSRLANLTEGE(SEQ ID NO：17)，DQYYLRVTTVA，(SEQID NO：18)，PSGVTEVVVKLFDS，(SEQ ID NO：19)，PKFMETVAEKALQEYRKKHRE，(SEQ ID NO：20)，WDRVKDLATVYVDVLKDSGRDYVSQF(SEQ ID NO：21)，VATVMWDYFSQLSNNAKEAVEHLQK(SEQ ID NO：22)，RWELALGRFWDYLRWVQTLSEQVQEEL(SEQ ID NO：23)，LSSQVTQELRALMDETMKELKELKAYKSELEEQLT(SEQ ID NO：24)，ARLSKELQAAQARLGADMEDVCGRLV(SEQ ID NO：25)，VRLASHLRKLRKRLLRDADDLQKRLA(SEQID NO：26)，PLVEDMQRQWAGLVEKVQA(SEQ ID NO：27)，MSTYTGIFTDQVLSVLK(SEQ ID NO：28)，或LLSFMQGYMKHATKTAKDALSS(SEQ ID NO：29)。

62.权利要求61的方法，其中所述肽是两个或更多个所述氨基酸序列的多联体。

63.权利要求56的方法，其中所述肽还含有保护基团。

64.权利要求56的方法，其中所述肽还含有与氨基或羧基末端偶联的保护基团。

65.权利要求63的方法，其中所述的保护基团选自下列基团：乙酰基，酰胺，3到20个碳原子的烷基，Fmoc，t-boc，9-芴乙酰基，1-芴羧基，9-芴羧基，9-芴酮-1-羧基，苄氧羰基，呫吨基(Xan)，三苯甲基(Trt)，4-甲基三苯甲基(Mtt)，4-甲氧基三苯甲基(Mmt)，4-甲氧基-2，3，6-三甲基-苯磺酰(Mtr)，1，3，5-三甲基苯-2-磺酰(Mts)，4，4-二甲氧基二苯甲基(Mbh)，甲苯磺酰基(Tos)，2，2，5，7，8-五甲基苯并二氢吡喃-6-磺酰(Pmc)，4-甲苄基(MeBzl)，4-甲氧基苄基(MeOBzl)，苄氧基(BzlO)，苄基(Bzl)，苯甲酰基(Bz)，3-硝基-2-吡啶磺酰基(Npys)，1-(4，4-dimentyl-2，6-二偶氮亚环己基)乙基(Dde)，2，6-二氯苄基(2，6-DiCl-Bzl)，2-氯苄氧基羰基(2-Cl-Z)，2-溴苄氧基羰基(2-Br-Z)，苄氧基甲基(Bom)，t-丁氧基羰基(Boc)，环己氧基(cHxO)，t-丁氧基甲基(Bum)t-丁氧基(tBuO)，t-丁基(tBu)，乙酰基(Ac)，苯甲酰基，苄酯基，丙基，丁基，戊基，己基或三氟乙酰基(TFA)。

66.权利要求63的方法，其中所述肽含有与氨基末端偶联的保护基团，而且所述的氨基末端保护基团是选自苯甲酰基，乙酰基，丙烯基，苄酯基，丙基，丁基，戊基，己基或3到20个碳原子的烷基的保护基团。

67.权利要求63的方法，其中所述肽含有与羧基末端偶联的保护基团，而且所述的羧基末端保护基团是酰胺基。

68.权利要求63的方法，其中所述肽还包括：偶联到氨基末端的第一保护基团，其中所述的保护基团是选自苯甲酰基，乙酰基，丙烯基，苄酯基，丙基，丁基，戊基，己基或3到20个碳原子的烷基的保护基团；和偶联到羧基末端的第二保护基团，而且所述的羧基末端保护基团是酰胺基。

69.权利要求56的方法，其中所述肽包含偶联到氨基末端的第一保护基团和偶联到羧基末端的第二保护基团。

70.权利要求56的方法，其中所述肽包含位于氨基末端的Ac基团。

71.权利要求56的方法，其中所述肽含有位于羧基末端的-NH₂。

72.权利要求56的方法，其中所述肽含有位于氨基末端的Ac基团和位于羧基末端的-NH₂。

73.权利要求61的方法，其中所述肽含有位于氨基末端的Ac基团。

74.权利要求61的方法，其中所述肽含有位于羧基末端的-NH₂。

75.权利要求61的方法，其中所述肽含有位于氨基末端的Ac基团和位于羧基末端的-NH₂。

76.权利要求56的方法，其中所述肽含有“D”氨基酸。

77.权利要求56的方法，其中所述肽含有多数的“D”氨基酸。

78.权利要求56的方法，其中含有所述肽的所有对映体氨基酸都是“D”氨基酸。

79.权利要求56的方法，其中所述的多肽与磷脂偶联。

80.权利要求79的方法，其中所述的多肽与磷脂共价偶联。

81.权利要求79的方法，其中所述的多肽与含有溶血磷脂酰胆碱的磷脂共价偶联。

82.权利要求79的方法，其中所述的多肽与选自丙酰基，丁酰基，戊酰基，己酰基，庚酰基，辛酰基，壬酰基，癸酰基，十一烷酰基，月桂酰基，十三烷酰基，肉豆蔻酰基，十五烷酰基，棕榈酰基，十七烷酰基，硬脂酰基，十九烷酰基，花生四烯酰，Heniecosanoyl，二十二烷酰基，Trucisanoyl，二十四烷酰基，肉豆蔻脑酰基(9-顺式)，Myristelaidoyl(9-反式)，棕榈油酰基(9-顺式)，Palmitelaidoyl(9-反式)的磷脂共价偶联。

83.权利要求56的方法，其中所述肽与药学上可接受的赋形剂混合。

84.权利要求56的方法，其中所述肽与适合于对哺乳动物口服给药的药学上可接受的赋形剂混合。

85.权利要求55的方法，其中所述给药包括用所述肽口服给药。

86.权利要求55的方法，其中所述的哺乳动物是诊断为具有动脉粥样硬化的一种或多种症状的哺乳动物。

87.权利要求55的方法，其中所述的生物是诊断为处于动脉粥样硬化风险中的哺乳动物。

88.权利要求55的方法，其中所述的哺乳动物是人。

89.权利要求55的方法，其中所述的哺乳动物是非人的哺乳动物。

90.一种改善炎症应答的特征性疾病的症状的方法，所述的方法包括用肽或含有具有位于肽的极性表面的带电荷残基和具有大的非极性表面的两亲性螺旋的肽的多联体对所述哺乳动物给药。

91.权利要求90的方法，其中所述肽长度至少为10个氨基酸。

92.权利要求91的组合物，其中所述肽的长度为大约40个或更少的肽。

93.权利要求91的组合物，其中所述肽含有G^*两亲性螺旋。

94.权利要求93的组合物，其中所述肽与apoJ显示大于约50％的序列同一性。

95.权利要求91的组合物，其中所述肽保护磷脂以防止被氧化剂所氧化。

96.权利要求91的组合物，其中所述肽包含选自下列的氨基酸序列：LLEQLNEQFNWVSRLANLTQGE，(SEQ ID NO：1)，LLEQLNEQFNWVSRLANL，(SEQ ID NO：2)，NELQEMSNQGSKYVNKEIQNAVNGV，(SEQ ID NO：3)，IQNAVNGVKQIKTLIEKTNEE，(SEQ ID NO：4)，RKTLLSNLEEAKKKKEDALNETRESETKLKEL，(SEQ ID NO：5)，PGVCNETMMALWEECK，(SEQ ID NO：6)，PCLKQTCMKFYARVCR，(SEQ ID NO：7)，ECKPCLKQTCMKFYARVCR，(SEQ ID NO：8)，LVGRQLEEFL，(SEQ ID NO：9)，MNGDRIDSLLEN，(SEQ ID NO：10)，QQTHMLDVMQD，(SEQ ID NO：11)，FSRASSIIDELFQD，(SEQ ID NO：12)，PFLEMIHEAQQAMDI，(SEQ ID NO：13)，PTEFIREGDDD，(SEQ ID NO：14)，RMKDQCDKCREILSV，(SEQ ID NO：15)，PSQAKLRRELDESLQVAERLTRKYNELLKSYQ，(SEQ ID NO：16)，LLEQLNEQFNWVSRLANLTEGE(SEQ ID NO：17)，DQYYLRVTTVA，(SEQID NO：18)，PSGVTEVVVKLFDS，(SEQ ID NO：19)，PKFMETVAEKALQEYRKKHRE，(SEQ ID NO：20)，WDRVKDLATVYVDVLKDSGRDYVSQF(SEQ ID NO：21)，VATVMWDYFSQLSNNAKEAVEHLQK(SEQ ID NO：22)，RWELALGRFWDYLRWVQTLSEQVQEEL(SEQID NO：23)，LSSQVTQELRALMDETMKELKELKAYKSELEEQLT(SEQ ID NO：24)，ARLSKELQAAQARLGADMEDVCGRLV(SEQ ID NO：25)，VRLASHLRKLRKRLLRDADDLQKRLA(SEQID NO：26)，PLVEDMQRQWAGLVEKVQA(SEQ ID NO：27)，MSTYTGIFTDQVLSVLK(SEQ ID NO：28)，或LLSFMQGYMKHATKTAKDALSS(SEQ ID NO：29)。

97.权利要求91的方法，其中所述生物是诊断为具有炎症应答的一种或多种症状的生物。

98.权利要求91的方法，其中所述生物是诊断为处于与炎症应答相关的疾病风险中的生物。

99.权利要求91的方法，其中所述的生物是人。

100.权利要求91的方法，其中所述的生物是非人的哺乳动物。

101.一种改善动脉粥样硬化症状的试剂盒，所述的试剂盒包括含有权利要求1到28的任何一种多肽的容器。

102.权利要求101的试剂盒，其中所述肽与药学上可接受的赋形剂组合。

103.权利要求101的试剂盒，其中所述肽与单位制量制剂中的药学上可接受的赋形剂组合。

104.权利要求103的试剂盒，其中所述的单位剂量制剂用于口服给药。

105.权利要求101的试剂盒，还包含教导使用所述肽改善动脉粥样硬化或炎症应答的特征性疾病的一种或多种症状的说明性材料。

106.一种在哺乳动物中减轻或预防与炎症的急性期应答相关的冠状动脉并发症的方法，其中所述的冠状动脉并发症是动脉粥样硬化的症状，所述方法包括用权利要求1到28的任何一种多肽对具有所述急性期应答，或者处于所述急性期应答的风险中的哺乳动物给药。

107.权利要求106的方法，其中所述的给药是通过选自口服给药，鼻给药，直肠给药，腹膜内注射，和血管内注射，皮下注射，经皮给药或肌肉注射的途径。

108.权利要求106的方法，其中所述的多肽与相同多肽的全L-型组合给药。

109.权利要求106的方法，其中所述的多肽作为在药学上可接受的赋形剂中的单位制剂的形式来提供。

110.权利要求106的方法，其中所述的急性期应答是与复发性炎症疾病相关的炎症应答。

111.权利要求107的方法，其中所述的急性期应答与选自下列疾病的疾病相关：麻风病，结核病，全身性红斑狼疮，风湿性多肌痛，结节性多动脉炎，硬皮病，特发性肺纤维化，慢性梗阻肺病，阿尔茨海默病和AIDS，风湿性多肌病，结节性多动脉炎，硬皮病，特发性肺纤维化，慢性梗阻肺病，阿尔茨海默病，AIDS，冠状钙化，钙化性主动脉瓣狭窄，骨质疏松症或类风湿性关节炎。

112.权利要求106的方法，其中所述的急性期应答是与选自细菌感染，病毒感染，真菌感染，器官移植，伤口，种植修复体，寄生虫感染，脓毒症，内毒素性休克综合征以及生物被膜形成疾病相关的炎症应答。

113.一种在哺乳动物中减轻或防止与炎症的急性期应答相关的冠状动脉并发症的方法，其中所述的冠状动脉并发症是一种动脉粥样硬化症状，所述的方法包括：

检测所述的哺乳动物中指示急性期应答或急性期应答显著风险的急性期蛋白(APP)水平；

用权利要求1到28任一项的多肽对显示出急性期应答的急性期蛋白(APP)水平的哺乳动物给药。

114.权利要求113的方法，其中所述的急性期蛋白(APP)是选自下列的阳性APR：血清淀粉样蛋白A，C-反应蛋白，血清淀粉样蛋白P成分，C2补体蛋白，C3补体蛋白，C4补体蛋白，C5补体蛋白，C9补体蛋白，B补体蛋白，C1抑制剂，C4结合蛋白，纤维蛋白原，von Willebrand因子，α1-抗胰蛋白酶，α1-抗胰凝乳蛋白酶，α2抗血纤维蛋白酶，肝素辅因子II，纤溶酶原活化因子抑制剂I，触珠蛋白，血友病细菌，血浆铜蓝蛋白，超氧化锰歧化酶，α1-酸糖蛋白，血加氧酶，甘露糖结合蛋白，白细胞蛋白I，脂蛋白(a)或脂多糖结合蛋白。

115.权利要求113的方法，其中所述急性期蛋白(APP)是选自下列的阴性APR：白蛋白，前清蛋白，运铁蛋白，apoAI，apoAII，α2-HS糖蛋白，间-α胰蛋白酶抑制剂，富含组氨酸糖蛋白。