CN1646138B - 对g2a受体特异性的激动剂配体的制药用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及对G2A受体特异性的激动剂配体的新治疗用途。更具体而言，本发明涉及治疗受试者中与嗜中性粒细胞聚集和活性过度和/或过量释放IL-8或者微生物感染相关的疾病或病症的方法，包括向该受试者施用LPC(溶血磷脂酰胆碱)、SPC(鞘磷脂酰胆碱)或其衍生物。根据本发明对G2A受体特异性的激动剂配体以及包含所述配体的药物或治疗组合物可有效地用于治疗与嗜中性粒细胞聚集和活性过度和/或过量释放IL-8相关的疾病或病症，特别是炎性疾病和与缺血-再灌注损伤相关的疾病以及微生物感染。

Description

对G2A受体特异性的激动剂配体的制药用途
发明领域
本发明涉及对G2A受体特异性的激动剂配体的新治疗用途，更具体地涉及治疗受试者中与嗜中性粒细胞聚集和活性过度和/或过量释放IL-8相关的疾病或病症或者感染性疾病的方法，包括向该受试者施用LPC(溶血磷脂酰胆碱)、SPC(鞘磷脂酰胆碱)或其衍生物。
发明背景
炎症是在体内发生的对抗致病原、外来物质和组织损伤的一种重要的防御反应。炎症伴随着全身症状如发热、虚弱、食欲丧失和寒战，或者局部症状如发红、肿胀、疼痛和功能障碍。炎症根据其持续时间分为急性炎症、亚急性炎症和慢性炎症。急性炎症反应发生于血管中并大多由嗜中性粒细胞介导。特别是在化脓性炎症的情况下，观察到嗜中性粒细胞显著增加。慢性炎症持续数周或数月。其不同于急性炎症，在于组织的损伤和恢复同时发生(Robbins Pathological Basis of Disease，R.S.Cotran，V.Kumar，和S.L.Robbins，W.B.Saunders Co.，p.75，1989)。尽管慢性炎症可能直接来自于急性炎症，它通常由引起延长超敏反应的持续感染(例如结核、梅毒、真菌感染)、暴露于持续的内毒素(例如增多的血浆脂质)或外毒素(例如二氧化硅、石棉、沥青、手术缝线)或者对抗自身组织的自身免疫反应(例如风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、多发性硬化、牛皮癣)所导致，并且其可由此引发随时间进行的不知不觉加剧的发作。因此，慢性炎症包括众多医学症状，如风湿性关节炎、再狭窄、牛皮癣、多中心硬化、手术粘连、结核病和慢性炎性肺病(例如哮喘、尘肺、慢性阻塞性肺病、肺纤维化)。亚急性炎症指介于急性和慢性炎症之间的炎症。
作为主要的炎性疾病，有鼻炎和鼻窦炎，如感染性鼻炎、过敏性鼻炎、慢性鼻炎、急性鼻窦炎和慢性鼻窦炎；中耳炎，如急性化脓性中耳炎和慢性化脓性中耳炎；肺炎，如细菌性肺炎、支气管肺炎、大叶性肺炎、军团菌肺炎和病毒性肺炎；急性或慢性胃炎；肠炎，如感染性肠结肠炎、局限性回肠炎、特发性溃疡性结肠炎和伪膜性结肠炎；和关节炎，如化脓性关节炎、结核性关节炎、退化性关节炎和类风湿性关节炎。此外，还有脓毒症，其在早期伴随着极度的全身炎症反应。这种脓毒症是由宿主对抗革兰氏阴性细菌等的内毒素的过度反应所导致的。在现有技术中，为了治疗脓毒症，使用了抗生素和类固醇制剂，但其作用弱，因而宿主由于败血症所致的死亡率仍然很高。
过度炎症还引起周围组织的永久性损伤，急性呼吸窘迫综合征(ARDS)被认为是由过度炎症引起的组织损伤所导致的典型炎性疾病之一。ARDS是由于肺水肿而引起的急性缺氧性呼吸衰竭，其由肺泡毛细血管屏障通透性增高引起。它被认为是急性肺损伤(ALI)中最严重的情况。导致患者发生ARDS危险的临床症状是多种多样的，例如外伤、出血或败血症，而由于这些症状过度的全身炎症反应导致ARDS。即使进行治疗，如对缺氧的治疗、气管内插管、机械通气等，ARDS所致的死亡率仍达50-70％。已知循环的炎性细胞，特别是嗜中性粒细胞，在急性肺损伤例如肺水肿、炎症反应等的引发和发展中具有重要作用(Abraham等人，Am.J.Physiol.，279，L1137-L1145，2000)。几位科学家证实，嗜中性粒细胞广泛聚集在ARDS患者的肺中(Weinacker & Vaszar，Annu.Rev.Med.，52：221-37，2001)。这些嗜中性粒细胞，一旦被激活，放出蛋白酶包括基质金属蛋白酶和其它引起肺损伤的介质。因此，如果抑制嗜中性粒细胞在肺中聚集，则由急性肺损伤所致的ARDS可得以治疗。
多器官功能障碍综合征(MODS)是一种由脓毒症等的并发症所导致的疾病。作为MODS的实例，可包括有急性肝衰竭、急性肾衰竭、肺衰竭、胃肠出血等。为了治疗MODS，使用了抗生素和类固醇制剂，但是其作用弱。
同时，嗜中性粒细胞(也称为多形核白细胞(PMN))是吞噬细胞，其在宿主防御机制中具有重要作用，并且占在体内循环的白细胞的大约60％。嗜中性粒细胞的膜具有对造血生长因子如GM-CSF(粒细胞巨噬细胞集落刺激因子)、G-CSF(粒细胞集落刺激因子)等的受体，参与与调理素和趋化因子的受体相关的信号转导的G蛋白，与Na+、K+、Ca2+等的离子交换相关的离子通道，酶和磷脂。而且，在嗜中性粒细胞的表面，还存在对抗IgG抗体的Fc受体如CD16和CD32以及对C3补体蛋白的受体如CR1和CR3。因此，与其结合的抗原可容易地被识别并除去。在嗜中性粒细胞的颗粒内，有与杀菌作用相关的防御素如过氧化物酶、乳铁蛋白、白细胞粘附受体和碱性磷酸酶，以及破坏感染因子或参与炎症反应进行的杀菌/通透性增加蛋白(BPI)。除此之外，嗜中性粒细胞还表达细胞粘附蛋白如CDIIa/CD18(LFA-1)、选择素等，其在嗜中性粒细胞在炎症反应中的移动中起重要作用。
对于正常成人而言，嗜中性粒细胞的产生量为0.85-1.6×109细胞/kg/天。在产生和在骨髓中分化约14天之后，它们进入外周血并在其中循环大约6小时。然后它们穿透进入组织并在组织中存活数天之后死亡或丧失于粘膜。嗜中性粒细胞具有短的半衰期，约为6-10小时，并且它们通过凋亡而在巨噬细胞中被除去。嗜中性粒细胞凋亡自发地或受到外部刺激而发生。作为外部刺激的典型实例，可以提及Fas途径。Fas是一种类似于TNF受体的物质，其存在于嗜中性粒细胞的表面，并且一旦其受到Fas配体的刺激，就在细胞中经由FADD途径诱导凋亡。已知caspase在这种途径中具有重要作用。已知嗜中性粒细胞凋亡可受到多种炎症介质的延迟或抑制。某些报道提出，在ARDS中观察到的嗜中性粒细胞凋亡的延迟(抑制)是由于GM-CSF。但是，对于延迟嗜中性粒细胞的凋亡的胞内转导途径知之甚少。也就是说，在几种炎性疾病中，多种炎症介质抑制生理性和主动发生的嗜中性粒细胞凋亡，因此，过多嗜中性粒细胞聚集引起发生持续的炎症反应，导致对周围组织的损伤。作为炎症介质，已知有G-CSF，GM-CSF，IFN-γ，IL-2，IL-6等，其是内源性因子；以及LPS(脂多糖)，其来源于体外。
近来，众多有关LPC(溶血磷脂酰胆碱)和SPC(鞘磷脂酰胆碱)(其具有已知为脂质递质的LPA(溶血磷脂酰酸)或SIP(鞘氨醇1-磷酸)和与其结合的胆碱)的研究正在进行之中。已知LPC和SPC具有重要作用，其功能不仅作为细胞膜生物合成的中间体(与LPA和SIP一起)，而且还作为信号转导分子(Fukushima，N.等人，Annu.Rev.Pharmacol.Toxicol.，41：507-534，2001)。它们与其受体结合并通过数种信号转导作用诱导多种细胞反应如细胞增殖、分化、运动、细胞死亡等(Lynch，K.R.等人，Trends Pharmacol.Sci.，20(12)：473-475，1999)。它们所结合的受体是一种被分类为G蛋白偶联受体的受体。自从OGR-1(孤儿G蛋白偶联受体1)第一次被发现作为SPC的受体(Xu，Y等人，Nat.Cell.Biol.，2(5)：264-267，2000)起，进行了有关鉴定具有类似于OGR-1的结构的GPR4-和G2A受体的配体的研究。结果鉴定出GPR4识别SPC和LPC作为其配体，并且GPR4通过SPC和LPC促进细胞增殖，而OGR-1通过SPC抑制细胞增殖(Zhu，K.等人，J.Biol.Chem.，276(44)：41325-41335，2001)。此外，报道了G2A对LPC具有高亲和性，但是其对SPC的亲和性低(Kabarowski，J.H.等人，Science，293(5530)：702-705，2001)。G2A大多发现于淋巴细胞中，并且其表达受应激和延长的促有丝分裂信号上调。据报道，在不具有G2A受体的敲除小鼠中，引起了自身免疫病(Le，L.Q.等人，Immunity，14(5)：561-571，2001)。
因此，在继续进行研究以寻找治疗炎性疾病的新治疗剂的过程中，本发明人确定，对存在于嗜中性粒细胞中的G2A受体特异性的激动剂配体阻断炎症介质对嗜中性粒细胞凋亡的抑制以及嗜中性粒细胞和单核细胞中IL-8(白介素-8)的释放，并对炎性疾病特别是与嗜中性粒细胞活性过度和过量释放IL-8相关的炎性疾病或者与微生物感染有关的疾病表现出优异的治疗效果，因而完成了本发明。
发明详述
因此，本发明的目的是提供使用对G2A受体特异性的激动剂配体在细胞、组织或体内诱导嗜中性粒细胞凋亡的方法。
本发明的另一个目的是提供使用对G2A受体特异性的激动剂配体在细胞、组织或体内抑制IL-8过量释放的方法。
本发明的其它目的是提供使用对G2A受体特异性的激动剂配体增加嗜中性粒细胞的杀菌活性的方法。
本发明的还一个目的是提供使用对G2A受体特异性的激动剂配体治疗与抑制嗜中性粒细胞凋亡或过量释放IL-8相关的疾病或病症的方法。
此外，本发明的另一个目的是提供包含对G2A受体特异性的激动剂配体作为活性成分的药物或治疗组合物。
本发明的又一个目的是提供对G2A受体特异性的激动剂配体的新治疗用途。
为了实现上述目的，本发明提供了在细胞、组织或体内诱导嗜中性粒细胞凋亡的方法，包括以有效诱导嗜中性粒细胞凋亡的量向细胞、组织或体内施用对G2A受体特异性的激动剂配体。
为了实现本发明的另一个目的，本发明提供了在细胞、组织或体内抑制IL-8释放的方法，包括以有效抑制IL-8释放的量向细胞、组织或体内施用对G2A受体特异性的激动剂配体。
为了实现本发明的另一个目的，本发明提供了在细胞、组织或体内增加嗜中性粒细胞的杀菌活性的方法，包括以有效增加嗜中性粒细胞的杀菌活性的量向细胞、组织或体内施用对G2A受体特异性的激动剂配体。
为了实现本发明的另一个目的，本发明提供了治疗或预防受试者中与抑制嗜中性粒细胞凋亡或过量释放IL-8相关的疾病或病症的方法，包括向该受试者施用对G2A受体特异性的激动剂配体。
为了实现本发明的另一个目的，本发明提供了用于诱导嗜中性粒细胞凋亡或抑制IL-8释放的药物组合物，其包含对G2A受体特异性的激动剂配体作为活性成分。
为了实现本发明的另一个目的，本发明提供了用于治疗或预防与抑制嗜中性粒细胞凋亡或过量释放IL-8相关的疾病或病症的组合物，其包含对G2A受体特异性的激动剂配体作为活性成分。
此外，为了实现本发明的另一个目的，本发明提供了对G2A受体特异性的激动剂配体在制备用于在细胞、组织或体内诱导嗜中性粒细胞凋亡或抑制IL-8释放的药物组合物中的用途。
为了实现本发明的另一个目的，本发明提供了对G2A受体特异性的激动剂配体在制备用于治疗与抑制嗜中性粒细胞凋亡或过量释放IL-8相关的疾病或病症的药剂中的用途。
对本发明将进行详细描述。
根据本发明对G2A受体特异性的激动剂配体包括LPC(溶血磷脂酰胆碱)、SPC(鞘磷脂酰胆碱)及其衍生物。
在此所用的LPC由下式I代表：
Figure G038088991D00061
其中R1是C4-30烷基或具有一个或多个双键的C4-30链烯基。优选地，LPC不限于但可选自1-硬脂酰基(18:0)溶血磷脂酰胆碱(L-α-溶血磷脂酰胆碱硬脂酰基；溶血卵磷脂硬脂酰基)、1-油酰基(18:1)溶血磷脂酰胆碱(L-α-溶血磷脂酰胆碱油酰基；溶血卵磷脂油酰基)、1-肉豆蔻酰基(14:0)溶血磷脂酰胆碱(L-α-溶血磷脂酰胆碱肉豆蔻酰基)和1-棕榈酰基(16:0)溶血磷脂酰胆碱(L-α-溶血磷脂酰胆碱棕榈酰基；溶血卵磷脂棕榈酰基；DL-α-溶血磷脂酰胆碱棕榈酰基)。
另外，在此所用的SPC由下式II代表：
在上式II的SPC中，在鞘氨醇部分中末端碳的数目可以从4到30。
此外，在本发明中，可以使用LPC或SPC的衍生物。优选地，它们可以为下式III代表的LPC的醚衍生物：
Figure G038088991D00071
其中R2是C4-30的烷基或具有一个或多个双键的C4-30链烯基。更优选地，它们不限于但可选自L-α-溶血磷脂酰胆碱-γ-O-链烷-1-烯基(溶血磷脂酰胆碱)、L-α-溶血磷脂酰胆碱-γ-O-烷基(溶血-血小板活化因子)、DL-α-溶血磷脂酰胆碱-γ-O-十六烷基(rac-溶血-血小板活化因子)和L-α-溶血磷脂酰胆碱-γ-O-十六烷基(溶血-血小板活化因子；溶血-PAF-C16)。
LPC、SPC及其衍生物可容易地购得。
具体而言，它们可购自Sigma Chemical Co.(USA)。此外，它们可分离自动物，还可根据现有技术中熟知的合成方法制备。LPC、SPC及其衍生物是哺乳动物中的内源性物质，因此其安全性已得到证实。
根据本发明对G2A受体特异性的激动剂配体主要显示出两种活性。第一，它们不显示体外直接抗菌作用但具有阻断受抑制的嗜中性粒细胞凋亡以及嗜中性粒细胞和单核细胞中IL-8释放的体内功能。因此，它们可有效用于治疗或预防与嗜中性粒细胞凋亡的抑制和/或过量释放IL-8相关的疾病或病症。
第二，根据本发明对G2A受体特异性的激动剂配体通过增加其杀菌能力能使嗜中性粒细胞更容易地杀死致病原。在这方面，根据本发明的激动剂配体可称为一种新型的抗菌剂，因为它们对致病原不显示直接的杀伤作用但能使嗜中性粒细胞更容易地消除致病原。因此，根据本发明的激动剂配体可用作对与微生物感染相关的多种疾病的治疗剂或治疗添加剂。
包含根据本发明对G2A受体特异性的激动剂配体的药物组合物或者治疗或预防组合物还可包含可药用载体，例如用于口服给药或胃肠外给药的载体。用于口服给药的载体可包括乳糖、淀粉、纤维素衍生物、硬脂酸镁、硬脂酸以及诸如此类。对于口服给药，根据本发明对G2A受体特异性的激动剂配体可以与赋形剂混合以摄入型片剂、含片、糖锭、胶囊、酏剂、悬剂、糖浆、薄片等的形式使用。另外，用于胃肠外给药的载体可包括水、合适的油、盐水、水溶性葡萄糖和糖醇等，并还可包括稳定剂或防腐剂。作为合适的稳定剂，有抗氧化剂如抗坏血酸、亚硫酸钠或亚硫酸氢钠。作为合适的防腐剂，有苯扎氯铵、对羟基苯甲酸甲酯或丙酯和氯丁醇。对于其它可药用载体，可以查询以下文献：Remington′s Pharmaceutical Sciences，第19版，Mack PublishingCompany，Easton，PA，1995。
根据本发明的药物组合物或治疗组合物可配制成多种胃肠外或口服剂型。胃肠外给药的典型剂型是用于注射的剂型，优选等渗水溶液或悬液。注射用剂型可使用合适的分散剂、润湿剂或悬浮剂按照现有技术中已知的方法制备。例如，将每种成分溶于盐水或缓冲液中，然后可配制成注射用剂型。另外，口服给药的典型剂型是片剂、胶囊等，除活性成分之外，其可包含稀释剂(例如乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纤维素和/或甘油)或润滑剂(例如二氧化硅、滑石、硬脂酸及其镁或钙盐和/或丙二醇)。此外，片剂还可包含粘合剂如硅酸镁铝、淀粉糊、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮。如果必要，它们还可包含崩解剂或泡腾混合物如淀粉、琼脂、藻酸或其钠盐，和/或吸收剂、着色剂、调味剂和增甜剂。这种剂型可通过常规混合、制粒或包衣方法制备。
本发明的药物组合物或治疗组合物可包含添加剂如抗菌剂、水化物或乳化加速剂、用于调节渗透压的盐和/或助剂如缓冲剂和其它治疗上有用的物质。其可根据常规方法制备为制剂。
作为本发明的药物组合物或治疗组合物的活性成分的对G2A受体特异性的激动剂配体可经由胃肠外或口服途径以0.01-100mg/kg(体重)的量每天一次或数次施用于哺乳动物包括人类。施用量的范围可根据年龄、体重、健康状况、性别、疾病程度、饮食、给药时间、排泄速率、给药途径等而合适地变化。本发明的药物组合物或治疗组合物不限于特别的剂量、给药途径和给药方法，只要其保留发明效果。而且，根据本发明对G2A受体特异性的激动剂配体可与通常用于炎症疾病的抗生素或炎症治疗剂一起共同给药(当应用于炎性疾病时)，和与包含先前的抗生素的多种抗菌剂一起共同给药(当应用于治疗与微生物感染相关的疾病时)。
根据本发明对G2A受体特异性的激动剂配体可有效地用于治疗与由于抑制凋亡而致的嗜中性粒细胞聚集和嗜中性粒细胞活性过度和/或过量释放IL-8相关的疾病或病症，特别是炎性疾病。本发明的激动剂配体可应用的炎性疾病包括与抑制嗜中性粒细胞凋亡和嗜中性粒细胞活性过度和/或过量释放IL-8相关的所有的急性或慢性炎性疾病及其并发症。“慢性炎症”指由于过度的嗜中性粒细胞聚集和活性过度以及过量释放IL-8而诱导组织损伤或诱导持续炎症的所有疾病及其并发症。具体而言，本发明的激动剂配体可应用的炎性疾病不限于但包括炎性肠病如局限性回肠炎和溃疡性结肠炎、腹膜炎、骨髓炎、蜂窝织炎、脑膜炎、脑炎、胰腺炎、外伤诱导的休克、支气管哮喘、过敏性鼻炎、囊性纤维化、脑卒中、急性支气管炎、慢性支气管炎、急性细支气管炎、慢性细支气管炎、骨关节炎、痛风、脊椎关节病、强直性脊柱炎、瑞特氏综合征、牛皮癣关节病、肠病性脊柱炎、青少年关节病、青少年强直性脊柱炎、反应性关节病、感染性关节炎、感染后关节炎、淋病性关节炎、结核性关节炎、病毒性关节炎、真菌性关节炎、梅毒性关节炎、莱姆病、与“血管炎综合征”相关的关节炎、结节性多动脉炎、过敏性血管炎、韦格纳肉芽肿、风湿性多肌痛、巨细胞动脉炎、钙结晶沉积关节病、假痛风、非关节风湿病、滑囊炎、腱鞘炎、上髁炎(网球肘)、神经病性关节病(charcot关节)、关节积血(hemarthrosic)、Henoch-Schonlein紫癜、肥大性骨关节病、多中心性网状组织细胞瘤、脊柱侧凸、血色素沉着病、镰状红细胞性贫血、其它血红蛋白病、高脂蛋白血症、低丙种球蛋白血症、家族性地中海热、Gerhardt病、系统性红斑狼疮、复发热、牛皮癣、多发性硬化、脓毒症(败血症)、败血症性休克、急性呼吸窘迫综合征、多器官功能障碍综合征、慢性阻塞性肺病、风湿性关节炎、急性肺损伤、支气管肺发育异常等等。
此外，据报道，在患有缺血-再灌注损伤的患者中，嗜中性粒细胞过度聚集。也就是说，当血流紊乱发生时，几乎所有的器官和组织包括心脏、脑、肾、肝等由于再灌注均经受组织损伤。已知嗜中性粒细胞在该过程中有重要作用(Jordan等人，Cardiovasc.Res.，43，860-78，1999)。因此，本发明的激动剂配体可应用于治疗缺血-再灌注损伤包括缺血性脑疾病、缺血性心脏疾病、缺血性肾疾病、缺血性肝疾病、缺血性肠疾病、由于移植中的血流紊乱而致的器官损伤等以及炎性疾病。
此外，本发明提供了对G2A受体特异性的激动剂配体的治疗用途。具体而言，本发明提供了对G2A受体特异性的激动剂配体用于制备在细胞、组织或体内恢复嗜中性粒细胞受抑制的凋亡、抑制IL-8释放或增加嗜中性粒细胞的杀菌活性的药物组合物的用途。除LPC(式I)、SPC(式II)或其衍生物优选LPC的醚衍生物(式III)以外药物组合物还可包含可药用载体。可药用载体的实例如上所列。本发明的药物组合物可口服或胃肠外给药，口服或胃肠外给药的实例如上提及。另外，本发明提供了对G2A受体特异性的激动剂配体用于制备治疗与抑制嗜中性粒细胞凋亡和嗜中性粒细胞活性过度和/或过量释放IL-8相关的疾病或病症的药剂的用途。本发明的激动剂配体可应用的疾病或病症的实例如上所列。
附图简要说明
图1显示1-硬脂酰基LPC对抗由外源性炎症介质(LPS；A)或内源性炎症介质(GM-CSF、G-CSF和IFN-γ；B)诱导的嗜中性粒细胞凋亡抑制的抑制作用
图2显示1-硬脂酰基LPC对抗嗜中性粒细胞(A)和单核细胞(B)中LPS诱导的IL-8过量释放的抑制作用。
图3显示使用从嗜中性粒细胞分离的RNA作为模板和对G2A或GPR4受体特异性的引物获得的RT-PCR结果。
RT(+)：RT-PCR用逆转录酶进行。
RT(-)：RT-PCR不用逆转录酶进行(对照组)
图4显示SPC对抗由LPS诱导的嗜中性粒细胞凋亡抑制的抑制作用。
图5显示1-硬脂酰基LPC在大肠杆菌诱导的败血症模型中的作用。
A：在施用LPC后小鼠随时间的存活率
B：给予LPC后24小时小鼠中腹膜内大肠杆菌细胞的数目
图6显示1-硬脂酰基LPC在CLP诱导的败血症模型中的作用。
A：分别在CLP手术后2小时和14小时施用LPC时小鼠中腹膜内大肠杆菌细胞的数目
B：在CLP手术后2小时，以12小时的间隔施用4次LPC时，小鼠随时间的存活率
C：在CLP手术后10小时，以12小时的间隔施用4次LPC时，小鼠随时间的存活率
图7显示1-肉豆蔻酰基LPC(14:0LPC)和1-油酰基LPC(18:1LPC)在CLP诱导的败血症模型中的作用。
图8显示SPC在CLP诱导的败血症模型中的作用。
图9显示在局部LPS诱导的急性肺损伤模型(A)、全身LPS诱导的急性肺损伤模型(B)和CLP诱导的脓毒症所致的急性肺损伤模型(C)中，1-硬脂酰基LPC对抗急性呼吸窘迫综合征的作用。
图10显示在CLP诱导的脓毒症模型中1-硬脂酰基LPC对抗多器官功能障碍综合征的作用。
图11显示在细菌诱导的脓毒症模型中1-硬脂酰基LPC有关嗜中性粒细胞杀菌活性的作用。
实施本发明的最佳模式
本发明将通过以下实施例进行更为详细的描述。
但是，下面所示的实施例仅仅提供用于例示本发明；本发明的范围不应理解为限于此。
在以下实施例中，有关固体/固体混合物、液体/液体和液体/固体的百分比分别基于重量/重量、体积/体积和重量/体积，除非另外指明，所有反应在室温下进行。
实施例1
LPC对抗炎症介质的抗嗜中性粒细胞凋亡的抑制作用
<1-1>嗜中性粒细胞的分离
根据Szucs，S.等人(J.Immunol.Methods，167：245-251，1994)的方法使用不连续percoll梯度从健康成人中分离嗜中性粒细胞。首先从肝素化全血中分离血浆，并通过葡聚糖沉降耗尽红细胞。此后，将白细胞分层于密度为1.077和1.094的percoll梯度(Pharmacia，Sweden)上。从percoll梯度界面回收分离的嗜中性粒细胞层，然后用HBSS(Hank’s平衡盐溶液，Sigma Chemical Co.，USA)洗。将剩余的沉淀重悬于补充10％FBS(胎牛血清)和2mM庆大霉素的RPMI 1640培养基。检查用Wright-Giemsa(Sigma Chemical Co.，USA)染色的cytospin，结果观察到重悬溶液含有95％或更多的嗜中性粒细胞。另外，使用台盼蓝染料排除方法检查的结果观察到98％或更多的嗜中性粒细胞。
<1-2>LPC对抗外源性炎症介质的抗嗜中性粒细胞凋亡的抑制作用
将在以上实施例<1-1>中分离的1×105嗜中性粒细胞培养于添加含有10％FBS的RPMI 1640培养基的96孔板中。此后，分别用15μM和30μM浓度的1-硬脂酰基溶血磷脂酰胆碱(Sigma Chemical Co.，USA)处理它们。1小时后，用1μg/ml LPS(Sigma Chemical Co.)处理它们。24小时后，从平板中除去培养基，并将剩余的细胞用PBS(磷酸盐缓冲盐水)缓冲液于4℃洗2次。将粘附于平板底部的细胞全部刮下并置于1.5ml eppendorf管中。然后，将其于2500rpm离心5分钟，并除去上清。再将0.1ml的4℃PBS缓冲液加入沉淀，然后用吸移管充分混合。向25μl的细胞悬液中加入2μl其中混合了100μg/ml丫啶橙(AcOr)和100μg/ml溴乙啶(EtBr)的AcOr/EtBr染料溶液。然后，在荧光显微镜下观察嗜中性粒细胞，计算凋亡细胞/总细胞的百分比。结果如图1A所示，LPS所减少的嗜中性粒细胞凋亡的百分比以被1-硬脂酰基LPC以浓度依赖性方式增加。因此，可以看出LPC有效地阻断了抑制嗜中性粒细胞凋亡的外源性炎症介质的作用。
<1-3>LPC对抗内源性炎症介质的抗嗜中性粒细胞凋亡的抑制作用
试验按照实施例<1-2>中所用的相同方法进行，除外分别用100ng/ml GM-CSF(Sigma Chemical Co.)、100ng/ml G-CSF(SigmaChemical Co.)和100ng/ml IFN-γ(Sigma Chemical Co.)代替LPS来处理实施例<1-1>中分离的嗜中性粒细胞。结果如图1B所示，内源性炎症介质所减少的嗜中性粒细胞凋亡的百分比被1-硬脂酰基LPC以浓度依赖性方式增加。因此可以看出，LPC有效地阻断内源性炎症介质以及外源性炎症介质对嗜中性粒细胞凋亡的抑制作用。
实施例2
LPC对抗IL-8(一种炎症诱导性细胞因子)释放的抑制作用
研究LPC有关IL-8释放的作用，IL-8是嗜中性粒细胞和血单核细胞中一种重要的炎症诱导性细胞因子，其在炎性疾病的发病机制中被认真考虑。
<2-1>嗜中性粒细胞的分离
如以上实施例<1-1>中所述，按照Szucs，S.等人(J.Immunol.Methods，167：245-251，1994)的方法分离嗜中性粒细胞。
<2-2>单核细胞的分离
从健康人收集外周血，置于肝素化管中，然后与1×PBS缓冲液充分混合。然后，将其分层于Ficoll-Hypaque溶液(密度1.077，SigmaChemical Co.，USA)中，随后以2500rpm于4℃离心25分钟。小心回收介于Ficoll层和血浆层之间的单核细胞层后，向其中加入1×PBS缓冲液并充分混合。然后再次以2500rpm于4℃离心25分钟。将这种离心操作重复2次，直至耗尽红细胞。此后，将沉淀于37℃在FBS中培养15分钟，并以2500rpm离心10分钟。然后再次向沉淀中加入1×PBS缓冲液。将分离的细胞分层于percoll溶液(密度1.066)中，然后以2500rpm于4℃离心30分钟。在从分离的层中仅仅回收单核细胞层后，向其中加入1×PBS缓冲液。将其以2500rpm离心15分钟。在重复离心2或3次后，将分离的单核细胞接种到含有10％FBS的RPMI 1640培养基中，在5％CO2温箱中于37℃培养。
<2-3>IL-8的测定
将在以上实施例<2-1>和<2-2>中分离的嗜中性粒细胞和单核细胞分别以1×105细胞/孔/0.2ml培养在加入含有10％FBS的RPMI 1640培养基的96孔板中。分别用15μM和30μM浓度的1-硬脂酰基LPC处理它们。1小时后，用1μg/ml LPS处理它们。3小时后，收集上清并置于eppendorf管中。然后使用ELISA试剂盒(Biosource，USA)测定IL-8的水平。结果如图2所示，在嗜中性粒细胞(A；人PMN)和单核细胞(B；人PBMC)中被LPS所增加的IL-8释放的水平以浓度依赖性方式受到LPC的抑制。
实施例3
搜寻存在于嗜中性粒细胞中的LPC特异性受体
迄今为止，已知G2A和GPR4是LPC特异性结合的受体(Zhu，K.等人，J.Biol.Chem.，276(44)：41325-41335，2001；Kabarowski，J.H.等人，Science，293(5530)：702-705，2001)。特别是，Rikitake等人报道了G2A存在于单核细胞中作为LPC受体的事实(Rikitake等人，Arterioscler Thromb Vasc Bio.1，22：2049-53，2002)。但是，在嗜中性粒细胞中，情况还不了解。因此，本发明人研究了LPC特异性受体是否在嗜中性粒细胞中。
首先，根据在以上实施例<1-1>中的相同方法从人血中分离嗜中性粒细胞。然后使用TRIZOL试剂(GibcoBRL，USA)从分离的嗜中性粒细胞中分离RNA。分别采用对G2A特异性的引物(SEQ ID NO：1和SEQ IDNO：2)和对GPR4特异性的引物(SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4)进行RT-PCR。有待用各引物扩增的G2A和GPR4的大小分别为409bp和247bp。PCR条件如下：40个循环的94℃ 2分钟，60℃ 1.5分钟和72℃ 2分钟。作为对照，不用逆转录酶(RT)进行RT-PCR。结果作为图3，与对照组相比，G2A的表达水平显著增加。另一方面，GPR4的表达水平显示出与对照组没有差异。在对照组中观察到的各受体的表达被认为是由于在RNA分离过程中DNA未完全去除的事实所致。从这些试验结果，认为LPC确实具有抗凋亡的抑制功能并通过作用于G2A受体而抑制IL-8的释放。
实施例4
SPC对抗炎症介质的抗嗜中性粒细胞凋亡的抑制作用
为了检查已知为G2A受体的另一种激动剂配体的SPC是否确实具有与LPC相同的功能，根据在以上实施例<1-2>中所用的相同方法进行试验，除外使用SPC(Sigma-Aldrich Co.)代替LPC。结果如图4所示。如图4所示，LPS所减少的嗜中性粒细胞凋亡的百分比被SPC以浓度依赖性方式增加。因此，可以看出，另一种对G2A受体特异性的配体-SPC具有与LPC相同的功能。
参照实施例1
制备败血症模型
<1-1>直接诱导的脓毒症模型：细菌诱导的脓毒症模型&LPS诱导的脓毒症模型
a)细菌诱导的脓毒症模型
对ICR小鼠(25-30g体重；MJ Ltd.)腹膜内注射悬浮在0.5ml PBS(磷酸盐缓冲盐水)中的活的108细胞/ml大肠杆菌(DH5a)以引起腹膜炎，从而诱导脓毒症。
b)LPS诱导的脓毒症模型
对ICR小鼠(25-30g体重；MJ Ltd.)腹膜内注射1mg/kg量的LPS(诱导自大肠杆菌055：B5)从而诱导脓毒症。
<1-2>间接诱导的脓毒症模型：CLP诱导的脓毒症模型
在用戊巴比妥麻醉了ICR小鼠(25-30g体重；MJ Ltd.)之后，以1cm的长度切开小鼠的右腹部以暴露其盲肠，并结扎回盲瓣以下的部位。然后，在用21号针头在盲肠上创建4-6个穿刺孔之后，再次缝合腹部以引起腹膜炎，从而诱导脓毒症。
参照实施例2
测定髓过氧化物酶在肺组织中的活性
根据Goldblum等人(J.Appl.physiol.59：1978，1985)和Parey等人(J.Immunol.160：1007，1998)的方法测定肺组织中髓过氧化物酶(MPO)-一种嗜中性粒细胞的指示物-的活性。首先，处死小鼠并获得肺组织。将组织在磷酸钾缓冲液中匀浆，并离心以获得沉淀。将这些沉淀在含有0.5％十六烷基三甲基溴化铵(HTAB)的磷酸钾缓冲液中超声处理，并于60℃温育120分钟。离心后，获得上清。将0.02ml上清与含有0.167mg/ml邻联茴香胺二盐酸盐和0.0005％过氧化氢的磷酸钾缓冲溶液(0.18ml)混合。相应地，在460nm的波长测定混合物的吸光度。
参照实施例3
测定腹膜内大肠杆菌的数目
在暴露了小鼠的腹膜腔后，用无菌盐水(2ml)洗。将所得溶液用HBSS(Sigma Chemical Co.，USA)以1/1000的比例稀释，然后将10μl的各稀释溶液铺于胰胨大豆琼脂(BBL，Becton Dickinson Co.，USA)平板上。于37℃过夜温育之后，测定菌落形成单位(CFU)。
实施例5
1-硬脂酰基LPC在细菌诱导的脓毒症模型中的治疗作用
将根据参照实施例<1-1>细菌诱导的败血症模型的14只ICR小鼠分成每组7只小鼠的两组。分别在腹膜内注射大肠杆菌后2和14小时，对7只小鼠以10mg/kg的量通过皮下注射施用溶解在不含脂肪酸的1％BSA(牛血清白蛋白)溶液中的1-硬脂酰基LPC(Sigma Chemical Co.，USA)(试验组)。对剩余的7只小鼠以相同的方式施用与上面相同量的不含脂肪酸的1％BSA溶液来代替LPC(对照组)。相应地，检查随时间过去在试验组和对照组中小鼠的存活率。另外，按照参照实施例3中所述的方法，测定在腹膜内注射后24小时腹膜内大肠杆菌细胞的数目。计算平均值并呈现于图5中。如图5A和5B所示，在施用LPC的试验组小鼠中，由败血症所致的死亡率得到显著抑制(p＜0.05)，腹膜内大肠杆菌细胞的数目也显著减少(p＜0.01)。
实施例6
1-硬脂酰基LPC在CLP诱导的脓毒症模型中的治疗作用
<6-1>在分别于CLP手术后2和10小时施用LPC的情况下
将根据参照实施例<1-2>CLP诱导的败血症模型的14只ICR小鼠分成每组7只小鼠的两组。分别在CLP手术后2和14小时，对7只小鼠以10mg/kg的量通过皮下注射施用溶解在不含脂肪酸的1％BSA溶液中的1-硬脂酰基LPC(Sigma Chemical Co.，USA)(试验组)。对剩余的7只小鼠以相同的方式施用与上面相同量的不含脂肪酸的1％BSA溶液(对照组)。在CLP手术后24小时按照参照实施例3测定试验组和对照组ICR小鼠中腹膜内大肠杆菌细胞的数目。计算平均值并呈现于图6A中。如图6A所示，可以看出在施用LPC的试验组小鼠中，腹膜内大肠杆菌细胞的数目显著减少(p＜0.01)。
<6-2>在于CLP手术后2小时以12小时的间隔施用4次LPC的情况下
将根据参照实施例<1-2>CLP诱导的脓毒症模型的40只ICR小鼠分成每组10只小鼠的4组。在CLP手术后2小时，以12小时的间隔4次分别以5、10和20mg/kg的量对每10只小鼠腹膜内施用溶解在不含脂肪酸的1％BSA溶液中的1-硬脂酰基LPC(Sigma Chemical Co.，USA)(试验组-1、-2和-3)。对剩余的10只ICR小鼠仅仅施用不含脂肪酸的1％BSA溶液(对照组)。然后，研究随时间过去在试验组和对照组中小鼠的存活率。结果如图6B中所示。如图6B所示，在施用LPC的试验组中小鼠的存活率比对照组的小鼠高得多。
<6-3>在于CLP手术后10小时以12小时的间隔4次施用LPC的情况下
为了研究LPC是否在已发生败血症的情况下具有治疗作用，将根据参照实施例<1-2>CLP诱导的脓毒症模型的20只ICR小鼠分为两组。在CLP手术后10小时，以12小时的间隔4次对试验组的10只小鼠以10mg/kg的量腹膜内施用溶解在不含脂肪酸的1％BSA溶液中的1-硬脂酰基LPC(Sigma Chemical Co.，USA)。向对照组的剩余10只小鼠仅仅施用不含脂肪酸的1％BSA溶液。此后，随时间研究试验组和对照组中ICR小鼠的存活率。结果显示于图6C中。如图6C所示，即使当进一步发生败血症时，LPC仍显示出优异的治疗作用。
实施例7
在CLP诱导的脓毒症模型中1-油酰基-LPC和1-肉豆蔻酰基-LPC的治疗作用
为了研究具有除1-硬脂酰基以外的其他取代基(R1)的LPC是否对败血症具有作用，根据实施例<6-2>中所用的相同方法以10mg/kg的量腹膜内施用具有1-油酰基或1-肉豆蔻酰基的LPC。结果如图7所示，1-油酰基LPC和1-肉豆蔻酰基LPC均对脓毒症显示出优异的治疗作用。
比较实施例
LPC的体外抗菌活性
将1-硬脂酰基LPC(Sigma Chemical Col.，USA)分别以12、60和300mM的浓度加入LB培养基，将其倾至60mm培养皿并硬化(试验组-1、-2和-3)。采用每组4个培养皿。对于对照组，仅将LB培养基倾至4个60mm培养皿并硬化。用无菌盐水洗根据实施例<6-2>小鼠的腹膜腔。将所得溶液用HBSS以1/100的比例稀释，然后将10μl稀释溶液铺在每组的培养基上。随后，在维持在37℃的细菌温箱中温育12小时后，肉眼测定菌落形成单位(CFU)。结果总结在下表1中。
[表1]
LPC的体外抗菌活性
  对照组   实验组1   实验组2   实验组3
  LPC浓度   0μM   12μM   60μM   300μM
  CFU   498±189   661±285   639±304   611±281
如上表1所示，LPC似乎没有对抗大肠杆菌的体外直接抗菌作用。
实施例8
SPC在CLP诱导的脓毒症模型中的作用
在CLP手术后2小时，对CLP诱导的脓毒症模型小鼠分别以3mg/kg和30mg/kg的剂量以12小时的间隔4次皮下注射SPC代替1-硬脂酰基LPC。研究小鼠的存活率。结果如图8所示，可以看出象LPC一样，SPC在30mg/kg的剂量有效地抑制由CLP脓毒症所致的死亡率。
实施例9
LPC对抗急性呼吸窘迫综合征的治疗作用
<9-1>LPS诱导的急性肺损伤(ALI)模型
对小鼠气管内施用LPS以引起直接急性肺损伤，从而诱导急性呼吸窘迫综合征。
将35只ICR小鼠(25-30g体重；MJ Ltd.)分成每组7只小鼠的5组(假手术组(sham group)，试验组-1、-2、-3和对照组)。将每组的小鼠用戊巴比妥麻醉，以1cm的长度切开它们的皮肤以暴露其支气管。对假手术组的小鼠气管内施用PBS(50)溶液然后缝合，而对试验组和对照组的ICR小鼠直接气管内施用LPS(6/50，在PBS缓冲液中)然后缝合。在此之后，在施用LPS后2和14小时，分别对试验组-1、-2和-3中的ICR小鼠以5、10和20mg/kg的量皮下施用溶解在不含脂肪酸的1％BSA溶液中的1-硬脂酰基LPC(Sigma Chemical Co.，USA)。另一方面，向对照组中的ICR小鼠以相同的方式施用相同量的不含脂肪酸的1％BSA溶液代替LPC。在施用LPS后24小时，如参照实施例2所述测定每组的ICR小鼠的肺组织中的MPO-嗜中性粒细胞的一种指示物-的活性，平均值呈现在图9A中。如图9A中所示，当气管内施用LPS时，MPO的活性显著增加(p＜0.001)。在试验组的ICR小鼠中，与对照组的小鼠相比，MPO的活性以浓度依赖性方式被抑制。当将LPC以20mg/kg的量施用于ICR小鼠中时(试验组-3)，获得最优异的作用(p＜0.01)。
<9-2>全身性LPC诱导的急性肺损伤模型
通过全身施用LPS引起间接的急性肺损伤，从而诱导急性呼吸窘迫综合征。
将根据参照实施例<1-1>b)LPS诱导的败血症模型中的35只ICR小鼠分成每组7只小鼠的5组(假手术组，试验组-1，试验组-2，试验组-3和对照组)。对假手术组中的小鼠腹膜内施用PBS缓冲液(0.5ml/100g体重)代替LPS。在施用LPS后2和14小时，分别对试验组-1、-2和-3中的ICR小鼠以5、10和20mg/kg的量皮下施用溶解在不含脂肪酸的1％BSA溶液中的1-硬脂酰基LPC(Sigma ChemicalCo.，USA)。另一方面，向对照组中的小鼠以相同的方式施用相同量的不含脂肪酸的1％BSA溶液代替LPC。在施用LPS后24小时，如参照实施例2所述测定每组小鼠的肺组织中的MPO-嗜中性粒细胞的一种指示物-的活性，平均值呈现在图9B中。如图9B中所示，当腹膜内施用LPS时，MPO的活性显著增加(p＜0.001)。在试验组的小鼠中，与对照组的小鼠相比，MPO的活性以浓度依赖性方式被抑制。当将LPC以20mg/kg的量施用于ICR小鼠中时(试验组-3)，获得最优异的作用(p<0.01)。
<9-3>CLP诱导的脓毒症所致的急性肺损伤模型
采用CLP诱导的脓毒症模型来引起间接的急性肺损伤，从而诱导急性呼吸窘迫综合征。
将根据参照实施例<1-2>CLP诱导的脓毒症模型的20只ICR小鼠分成两组。分别在CLP手术后2和14小时对试验组的10只小鼠以10mg/kg的量通过皮下注射施用溶解在不含脂肪酸的1％BSA溶液中的1-硬脂酰基LPC(Sigma Chemical Co.，USA)。向对照组的剩余10只小鼠仅仅施用不含脂肪酸的1％BSA溶液。同时，用戊巴比妥麻醉10只ICR小鼠(25-30g体重；MJ Ltd.)，以1cm的长度切开其右腹部以暴露其盲肠，然后再次缝合(假手术组)。在CLP手术后即刻和随后4、8和16小时，如参照实施例2所述测定每组小鼠的肺组织中的MPO-嗜中性粒细胞的一种指示物-的活性，呈现在图9C中。如图9C中所示，MPO活性自CLP手术后4小时起增加并维持直到16小时。在试验组的ICR小鼠中，与对照组的小鼠相比，为CLP手术所增加的MPO活性被显著抑制。
实施例10
LPC对抗多器官功能障碍综合征的治疗作用
败血症引起多器官功能障碍综合征作为其并发症，通常肺、肝脏、肾脏等受到损伤。研究LPC对抗作为多器官功能障碍综合征之一的肝脏损伤的作用。将根据参照实施例<1-2>CLP诱导的脓毒症模型的20只ICR小鼠分成两组。分别在CLP手术后2和14小时对试验组的10只小鼠以10mg/kg的量通过皮下注射施用溶解在不含脂肪酸的1％BSA溶液中的1-硬脂酰基LPC(Sigma Chemical Co.，USA)。向对照组的剩余10只小鼠仅仅施用不含脂肪酸的1％BSA溶液。同时，用戊巴比妥麻醉10只ICR小鼠(25-30g体重；MJ Ltd.)，以1cm的长度切开其右腹部以暴露其盲肠，然后再次缝合(假手术组)。在CLP手术后16小时，从每组小鼠取血。按照Reitman-Frankel方法(Witter & Grubbs，ClinChim Acta，13：524-7，1966)测定丙氨酸氨基转移酶(ALT)-一种肝脏毒性的指标-的水平。结果如图10所示，在试验组的ICR小鼠中，与对照组的小鼠相比，为CLP手术所增加的ALT水平被显著抑制。
实施例11
在细菌诱导的脓毒症模型中LPC对嗜中性粒细胞的杀菌活性的作用
为了研究上面实施例5中小鼠中腹膜内大肠杆菌细胞的数目如何由于施用LPC而显著减少的机制，本发明进行了如下试验：从参照实施例<1-1>a)中制备的细菌诱导的败血症模型小鼠取血，并从其中分离嗜中性粒细胞。以106细胞/ml的细胞浓度使分离的嗜中性粒细胞粘附至维持在37℃的细胞温箱中包被聚L赖氨酸(0.01％)的盖玻片1小时。然后，以106细胞/ml的浓度向其中加入大肠杆菌并培养1小时。通过用PBS缓冲液洗盖玻片来除去未被嗜中性粒细胞摄入的大肠杆菌细胞。然后用30μM 1-硬脂酰基LPC处理盖玻片，并再培养1小时。在此阶段，用PBS缓冲液代替LPC处理对照组的盖玻片。随后，在更换新的RPMI-1640培养基后，将其再培养1小时以给出杀死时间。然后，使用Triton X-100(0.05％)破裂嗜中性粒细胞，由此回收大肠杆菌细胞。将回收的大肠杆菌细胞涂布至平板并于维持在37℃的温箱中培养。计数在培养基上生长的大肠杆菌细胞的数目并进行统计学分析。结果如图11所示，在用LPC处理的试验组中，活的大肠杆菌的数目显著减少。这表明LPC通过直接刺激嗜中性粒细胞而增加嗜中性粒细胞的杀菌活性。由此可以看出，LPC在嗜中性粒细胞/单核细胞中阻断受抑制的嗜中性粒细胞凋亡，抑制IL-8的释放，而且还增加嗜中性粒细胞的杀菌活性。
工业实用性
如上所述，在本发明中确证了LPC、SPC及其衍生物-对G2A受体特异性的激动剂配体-可有效地抑制抗嗜中性粒细胞凋亡和IL-8的过量释放。此外还揭示了本发明的激动剂配体可通过增加嗜中性粒细胞的杀菌活性而在微生物感染中有效地消除病原体。因此，根据本发明对G2A受体特异性的激动剂配体以及包含所述配体的药物或治疗组合物可非常有效地用于治疗与嗜中性粒细胞聚集和/或过量释放IL-8有关的疾病或病症，特别是炎性疾病包括脓毒症，或者与微生物感染有关的疾病。
序列表
<110>BioSynergen，Inc.
<120>G2A受体特异的激动剂配体的新的治疗用途
<130>OP03-0045
<160>4
<170>KopatentIn 1.71
<210>1
<211>23
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>G2A受体的正向引物
<400>1
gctcagcagg actcctcaat cag                                   23
<210>2
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>G2A受体的反向引物
<400>2
cggtggttgtcatcttccta                                        20
<210>3
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GPR4受体的正向引物
<400>3
ggcaaccacacgtgggag                                    18
<210>4
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GPR4受体的反向引物
<400>4
tccagttgtcgtggtgcag                                   19

Claims (2)

1.选自1-硬脂酰基溶血磷脂酰胆碱、1-油酰基溶血磷脂酰胆碱和1-肉豆蔻酰基溶血磷脂酰胆碱的溶血磷脂酰胆碱化合物在制备用于治疗或预防脓毒症的药物中的用途。
2.下式II表示的鞘磷脂酰胆碱化合物在制备用于治疗或预防脓毒症的药物中的用途，
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