CN1624105A - 一株酵母菌及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一株酵母菌及其应用。其目的是提供一株能对染料高效脱色的酵母菌株Pseudozyma rugulosa Y－48 CGMCC No.1188，利用该菌株对染料进行脱色的方法。酵母菌株Pseudozyma rugulosa Y－48 CGMCC No.1188是一株具有极高活力，对染料脱色能力极强的菌株，其培养方法简单，生长速度快，不易变异，可以用作研究酵母对染料脱色机制的模式菌株，更重要的是可以直接用于染料的脱色。该菌株具有在染料废水处理的工业化应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及环境生物技术领域中一株酵母菌及其应用。
背景技术
随着现代工业的发展，环境中异生物质的种类和数量急剧增加，对环境造成了极大的污染。为了减少这类物质的危害，除了对它们采用常规的物理和化学方法处理而外，采用新的、对环境友好的生物技术处理方法越来越具有吸引力。酵母菌是一种单细胞真菌类微生物，它既具有单细胞细菌生长快、易于操作的特点，又能象丝状真菌那样抵御不良的生长环境，因此，它适合运用于环境治理。目前它在环境领域的应用包括处理味精废水、油料废水生产饲料蛋白，处理造纸废水生产燃料酒精等。然而，它在染料废水的治理和运用还很少见，其中的一个重要原因是缺乏确实有效能对染料脱色的酵母菌株。
发明创造内容
本发明的目的是提供一株能对染料高效脱色的酵母菌株。
本发明所提供的对染料高效脱色的酵母菌株是Pseudozyma rugulosa Y-48，该菌株已于2004年07月13日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.1188。
该菌株从北京市海淀区的垃圾土壤中，采用富集培养、平板稀释法分离得到。其中，富集和分离培养基为葡萄糖2％、(NH4)2SO40.5％、KH2PO40.1％、MgSO4·7H2O0.05％，pH5.0，琼脂2％，液体培养基不加琼脂，溶剂为水。置于温箱，28℃培养。
在显微镜下观察，该菌株的细胞为腊肠形至纺锤形，一端芽殖，大小为(7.2-14.4)×(2.4-3.6)μm。在液体培养基里，该菌形成沉淀。在固体培养基里，该菌菌落米黄色，奶酪状，表面皱褶，不反光，边缘刻蚀状，并且有真菌丝产生。好氧。其26SrDNA具有序列表中序列1的核苷酸序列。
可按下述方法培养上述酵母菌株Pseudozyma rugulosa Y-48 CGMCC No.1188：用接种环挑取菌体接到斜面上，在25-30℃下，斜面培养基上生长1-3天，再挑取斜面菌种接入液体培养基，在25-30℃下，培养1-3天，经离心可获得该菌株的菌体。所述培养基组成为葡萄糖2％、蛋白胨2％、酵母粉1％，pH自然，琼脂2％，液体培养基不加琼脂，溶剂为水。
本发明的另一个目的是提供一种对染料脱色的方法。
本发明所提供的对染料脱色的方法，是利用Pseudozyma rugulosa Y-48 CGMCCNo.1188对染料进行原位脱色。
Pseudozyma rugulosa Y-48 CGMCC No.1188对染料的脱色方法为原位脱色，即酵母菌的培养与其对染料的脱色同步。
为了提高脱色效率，所述染料的浓度可为50-1000mg/L；利用Pseudozymarugulosa Y-48 CGMCC No.1188对染料进行脱色的脱色培养基包括下述质量百分比浓度的成分：葡萄糖1％，KH2PO40.1％，(NH4)2SO40.1％，MgSO40.05％，酵母粉0.02％，pH4-9，溶剂为水。
培养温度为28℃，培养时间为24-48h。
上述百分比浓度均为质量百分比浓度。
该菌株能对多种类型的染料脱色，特别是对硫化染料，三苯甲烷染料，蒽醌染料、活性偶氮染料以及还未公布化学结构的新型染料-依加仑蓝的脱色尤其有效。
实验证明在24h内，Pseudozyma rugulosa Y-48 CGMCC No.1188对活性偶氮染料如200mg/L活性艳红K-2BP，200mg/L酸性媒介黄GG，200mg/L弱酸艳红B，200mg/L活性黑KN-B和200mg/L活性红M-3BE的脱色率高于94％；对三苯甲烷染料(50mg/L)如媒介漂蓝B的脱色率能达到89.4％；对蒽醌染料(50mg/L)如活性艳蓝X-BR和媒介红S-80的脱色率分别能达到85.4％和22.3％；对硫化染料(50mg/L)如活性翠蓝KN-G的脱色率能达到66.6％；对结构未发表的染料(50mg/L)-依加仑蓝FBL脱色率能达到75.9％。
本发明的酵母菌株Pseudozyma rugulosa Y-48 CGMCC No.1188是一株具有极高活力，对染料脱色能力极强的菌株，其培养方法简单，生长速度快，不易变异，可以用作研究酵母对染料脱色机制的模式菌株，更重要的是可以直接用于染料的脱色。该菌株具有在染料废水处理的工业化应用前景。
具体实施方式
下述实施例中所有百分比浓度均为质量百分比浓度。下述所有培养基中的溶剂均为水。
实施例1、Pseudozyma rugulosa Y-48 CGMCC No.1188菌体的培养
用接种环挑取酵母菌株Pseudozyma rugulosa Y-48 CGMCC No.1188接到斜面(葡萄糖2％、蛋白胨2％、酵母粉1％，pH自然，琼脂2％)上，在温度设置为28℃的培养箱里，培养1-3天，出现白色的菌体。然后，用接种环从斜面上挑取生长良好的菌体接到装有培养液(葡萄糖2％、蛋白胨2％、酵母粉1％，pH自然)的三角瓶中，在温度设置为28℃、转速为200rpm的摇床上培养1-3天，所得菌体离心(9000rpm)10min，菌体用无菌生理盐水(0.8％)和无菌水洗涤，再离心，反复2-3次，即可获得白色无污染的Pseudozyma rugulosa Y-48 CGMCC No.1188酵母细胞。
上述培养基和培养液均在121℃、0.1MPa下灭菌20min。
实施例2、Pseudozyma rugulosa Y-48 CGMCC No.1188对活性偶氮染料的脱色
所述活性偶氮染料为活性艳红K-2BP、酸性媒介黄GG、弱酸艳红B、活性黑KN-B或活性红M-3BE。
按照实施例1的方法，用液体培养基(葡萄糖1％，KH2PO40.1％，(NH4)2SO40.1％，MgSO40.05％，酵母粉0.02％，pH自然)将酵母菌株Pseudozyma rugulosa Y-48 CGMCCNo.1188培养至对数期，按10％(v/v)的接种量转接到活性偶氮染料脱色培养基(葡萄糖1％，KH2PO40.1％，(NH4)2SO40.1％，MgSO40.05％，酵母粉0.02％，活性偶氮染料200mg/L或50mg/L，pH自然)里，在摇床上培养，每个50ml的三角瓶里装脱色液体培养基20ml，摇床转速200rpm，28℃培养24h。用移液器取4ml培养液，加入到离心管中，9000rpm离心10min，取上清液在分光光度计上测定在染料最大吸收波长处的OD值，并以不接酵母菌的染料培养基为对照，计算脱色率，以表示对染料的脱色能力。脱色率(％)＝(A-B)/A×100(A-脱色前，脱色培养基的OD值，B-脱色后，脱色培养基的OD值)。实验结果表明200mg/L活性艳红K-2BP经过与Pseudozyma rugulosa Y-48 CGMCC No.1188的同步培养，脱色率为99％；200mg/L酸性媒介黄GG的脱色率为98％；200mg/L弱酸艳红B为94％；200mg/L活性黑KN-B为96％；200mg/L活性红M-3BE为96％。
上述培养基和培养液均在121℃、0.1MPa下灭菌20min。
活性艳红K-2BP的结构式如(式I)所示。
(式I)
活性黑KN-B的结构式如(式II)所示。
(式II)
实施例3、Pseudozyma rugulosa Y-48 CGMCC No.1188对媒介漂蓝B的脱色
按照实施例2的方法，将酵母菌株Pseudozyma rugulosa Y-48 CGMCC No.1188在媒介漂蓝B脱色培养基(葡萄糖1％，KH2PO40.1％，(NH4)2SO40.1％，MgSO40.05％，酵母粉0.02％，媒介漂蓝B(式III)50mg/L，pH自然)里培养24h，实验结果表明该菌株对50mg/L媒介漂蓝B的脱色率为89.4％。
(式III)
实施例4、Pseudozyma rugulosa Y-48 CGMCC No.1188对蒽醌染料的脱色
按照实施例2的方法，将酵母菌株Pseudozyma rugulosa Y-48 CGMCC No.1188在活性艳蓝X-BR或媒介红S-80脱色培养基(葡萄糖1％，KH2PO40.1％，(NH4)2SO40.1％，MgSO40.05％，酵母粉0.02％，活性艳蓝X-BR(式IV)或媒介红S-8050mg/L，pH自然)里培养24h，实验结果表明该菌株对50mg/L活性艳蓝X-BR的脱色率为85.4％；对50mg/L媒介红S-80的脱色率为22.3％。
(式IV)
实施例5、Pseudozyma rugulosa Y-48 CGMCC No.1188对活性翠蓝KN-G的脱色
按照实施例2的方法，将酵母菌株Pseudozyma rugulosa Y-48 CGMCC No.1188在活性翠蓝KN-G脱色培养基(葡萄糖1％，KH2PO40.1％，(NH4)2SO40.1％，MgSO40.05％，酵母粉0.02％，活性翠蓝KN-G50mg/L，pH自然)里培养24h，实验结果表明该菌株对50mg/L活性翠蓝KN-G的脱色率为66.6％。
实施例6、Pseudozyma rugulosa Y-48 CGMCC No.1188对依加仑蓝FBL的脱色
按照实施例2的方法，将酵母菌株Pseudozyma rugulosa Y-48 CGMCC No.1188在-依加仑蓝FBL 200％脱色培养基(葡萄糖1％，KH2PO40.1％，(NH4)2SO40.1％，MgSO40.05％，酵母粉0.02％，依加仑蓝FBL50mg/L，pH自然)里培养24h，实验结果表明该菌株对50mg/L依加仑蓝FBL的脱色率为75.9％。
序列表
<160>1
<210>1
<211>587
<212>DNA
<213>Pseudozyma rugulosa
<400>1
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Claims (10)
1、酵母菌株Pseudozyma rugulosa Y-48 CGMCC No.1188。
2、一种对染料脱色的方法，是利用Pseudozyma rugulosa Y-48 CGMCC No.1188对染料进行原位脱色。
3、根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述染料的浓度为50-1000mg/L。
4、根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于：所述Pseudozyma rugulosa Y-48CGMCC No.1188对染料进行脱色的脱色培养基包括下述质量百分比浓度的成分：葡萄糖1％，KH2PO4 0.1％，(NH4)2SO4 0.1％，MgSO4 0.05％，酵母粉0.02％，pH4-9，溶剂为水。
5、根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于：所述Pseudozyma rugulosa Y-48CGMCC No.1188的培养温度为28℃，培养时间为24-48h。
6、根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于：所述染料包括硫化染料，三苯甲烷染料，蒽醌染料，活性偶氮染料以及依加仑蓝。
7、根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述活性偶氮染料为活性艳红K-2BP，酸性媒介黄GG，弱酸艳红B，活性黑KN-B和活性红M-3BE。
8、根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述三苯甲烷染料为媒介漂蓝B。
9、根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述蒽醌染料为活性艳蓝X-BR和媒介红S-80。
10、根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述硫化染料为活性翠蓝KN-G；所述依加仑蓝为依加仑蓝FBL。
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
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Granted publication date: 20060816 Termination date: 20121105 |