CN1570110A - 水稻稻米糊化温度主效控制基因alk及其应用 - Google Patents

水稻稻米糊化温度主效控制基因alk及其应用 Download PDF

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李家洋
钱前
高振宇
周奕华
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Abstract

本发明提供了一种控制水稻稻米糊化温度的主效基因,该基因的核苷酸序列选自:(1)编码SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的核苷酸序列;(2)与(1)中的核苷酸序列能够在严谨条件下杂交,并同时编码具有控制水稻稻米糊化温度的功能的核苷酸序列。本发明还提供了一种控制水稻稻米糊化温度的蛋白质、含有本发明的基因的植物表达载体、和一种培育植物的方法,该方法可使植物淀粉的主要储藏器官的糊化温度发生变化,包括用含有本发明的基因的表达载体转化植物细胞;和将转化的植物细胞培育成植株的步骤。

Description

水稻稻米糊化温度主效控制基因ALK及其应用
技术领域:
本发明涉及一种控制水稻稻米糊化温度的主效基因,以及该基因编码的蛋白质。本发明还涉及一种含有本发明的控制水稻稻米糊化温度的转基因植物表达载体和利用该表达载体培育植物的方法,该方法可使植物淀粉的主要储藏器官的糊化温度发生变化。
背景技术:
糊化温度是农作物,尤其是水稻稻米的重要蒸煮品质。而糊化温度又与淀粉粒中支链淀粉结构直接有关。支链淀粉支链的非还原端指向颗粒表面呈放射状排列,形成晶体层和无定形层交替排列的9nm的周期性半晶体结构[1]。晶体层由同一分支簇内相邻的A链或B链间形成双螺旋结构紧密排列而成;无定形层主要包括松散分支点[2]。分支簇内精细结构的变化会导致物种间、品种间和组织间淀粉理化特性的变化。而植物支链淀粉的生物合成是一个非常复杂的代谢过程,涉及到可溶性淀粉合酶、淀粉分支酶和淀粉脱支酶等。因此,糊化温度可能与淀粉代谢途径中的某些关键酶相关。对水稻不同糊化温度品种(包括突变体)的研究便是揭示与该性状相关的支链淀粉生物合成机理和相关基因的有效途径。
首先,从表型上描述水稻稻米糊化温度,早在20世纪60年代就用碱解反应来间接测定。生物化学研究发现糊化特性与淀粉粒相对结晶度有关(γ=+0.73)[3],而淀粉粒结晶度又与支链淀粉结构紧密相关,因此该性状与支链淀粉的合成有关。分子标记遗传定位研究表明控制糊化温度至少有三个等位基因,其中2号染色体1个,6号染色体2个[4,5]。日本科学家最近发现支链淀粉链长性状的遗传分离模式与淀粉粒的理化特性完全一致,控制该性状的基因命名为ACL,而ALK和ACL二基因定位在染色体同一位点[6]。但至今未见克隆相关基因的报道。
由于糊化温度是支链淀粉结构特性的反映,因此参与支链淀粉生物合成的酶,如可溶性淀粉合酶、淀粉分支酶[7]和淀粉脱支酶[8]的表达或活性的改变都将引起糊化温度不同程度的变化。
近年来对豌豆和衣藻突变体[9,10]的研究发现支链淀粉晶体构建中SSSII是必需的。它负责合成支链淀粉分支簇的主要成分——中等长度的葡聚糖,在支链淀粉分支簇内短链(A+B1链)延伸、B2和B3链合成中起明显作用,从而影响淀粉粒的形态和淀粉的晶体模式。
水稻的糊化温度作为评价和改善蒸煮和食味品质的重要指标,近年来多有报道,但仅限于表型、生化及遗传定位等方面。本发明便是利用糊化温度差异大的品种配制的群体和图位克隆技术首先克隆了ALK基因,该基因编码一种可溶性淀粉合酶SSSII,分子生物学和生物化学研究表明该基因控制水稻胚乳支链淀粉的结构。同时我们已通过基因功能互补实验鉴定了该基因的功能。
发明内容:
针对上述研究背景,本发明的一个目的是提供一种控制水稻糊化温度的主效基因。
本发明的另一个目的是提供一种由本发明的控制水稻稻米糊化温度的基因所编码的蛋白质。
本发明的再一个目的是提供一种含有本发明的控制水稻稻米糊化温度的转基因植物表达载体。
本发明的又一个目的是提供一种培育植物的方法,该方法可使植物淀粉的主要储藏器官的糊化温度发生变化。
本发明提供了一种控制水稻稻米糊化温度的主效基因,该基因的核苷酸序列选自:
(1)编码SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的核苷酸序列;
(2)与(1)中的核苷酸序列能够在严谨条件下杂交,并同时编码具有控制水稻稻米糊化温度的功能的核苷酸序列。
严谨杂交条件是指,将杂交膜置于预杂交液(0.25mol/L磷酸钠缓冲液,pH7.2,7%SDS)中,65℃预杂交30min;弃预杂交液,加入杂交液(0.25mol/L磷酸钠缓冲液,pH7.2,7%SDS,同位素标记的核苷酸片段),65℃杂交12hr;弃杂交液,加入洗膜液I(20mmol/L磷酸钠缓冲液,pH7.2,5%SDS),65℃洗膜2次,每次30min;加入洗膜液II(20mmol/L磷酸钠缓冲液,pH7.2,1%SDS),65℃洗膜30min。
本发明的控制水稻稻米糊化温度的主效基因优选具有如图6和SEQ IDNO:1所示的DNA序列。
本发明还提供了一种由上述核苷酸序列编码的蛋白质。该蛋白质优选具有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。本发明中的SEQ ID NO:2和图7所示的蛋白质属于可溶性淀粉合酶II家族。ALK与玉米SSIIa同源性为69.8%,该酶可能编码一种可溶性淀粉合酶,直接参与支链淀粉生物合成。
1、本发明还提供了一种含有本发明的控制水稻稻米糊化温度的主效基因的植物表达载体。这种表达载体可以是如图4所示的(pCAMBIA1300-ALK和pCAMBIA-Ubi’Anti-Alk),该载体可以表达由上述核酸序列编码的多肽。
2、本发明还提供了一种培育植物的方法,该方法可使植物淀粉的主要储藏器官的糊化温度发生变化,包括用本发明的表达载体转化植物细胞;和将转化的植物细胞培育成植株的步骤。
附图说明
下面结合附图对理解本发明作进一步的详细描述,但并非对本发明作限定。
图1表示图位克隆所用亲本和F2群体中糊化温度的表型鉴定。两亲本双科早和C堡及F2代植株所结种子的碱消试验。随机取20粒成熟种子去壳后置于6cm培养皿(20粒/皿),加入2%(W/V)KOH(5ml/皿),加盖置于30℃恒温培养36小时。双科早和C堡分别作为正、负对照。
图2示ALK在水稻第6染色体上的初步定位图。
图3表示ALK基因的精细定位及物理定位。
图4示转化所用载体图谱。
图5表示功能互补实验T0代转基因水稻所结种子的表型。T0-3,T0-5为转正义ALK基因T0代植株所结种子;Anti-T0-1,Anti-T0-3为转反义ALK基因T0代植株所结种子。
图6示ALK基因的DNA序列(籼稻双科早)。
图7示ALK基因编码的氨基酸序列(籼稻双科早)。
具体实施方式
实施例1:
1、水稻材料
水稻(Oryza sativa ssp.)高糊化温度籼稻品种“双科早”和低糊化温度粳稻品种“C堡”。
2、分析和定位群体
纯合的籼稻品种“双科早”和粳稻品种“C堡”进行杂交,F1代自交后共得到7068个F2个体,并从中选出1,352个个体作为定位群体。在苗期每株取2克左右的嫩叶,用来提取DNA。
3、通过SSR,STS,和CAPS标记定位ALK基因
采用改进的CTAB方法从水稻叶片中提取用于基因定位的基因组DNA。取大约100mg水稻叶片,经液氮冷冻,在直径5cm的小研钵中磨成粉状,转移到1.5ml离心管里提取DNA,获得的DNA沉淀溶解于100μl超纯水中。每一个SSR、STS或CAPS反应用1μl DNA样品。
在ALK基因的初步定位阶段,对由10个F2个体组成的混合池进行SSR分析,发现ALK基因与第6号染色体RM50和RM527标记连锁,并定位于二标记间。在此基础上,我们设计了PCR引物分别以两个亲本的基因组DNA为模板进行PCR扩增,将ALK初步定位在SSR标记M4741和M4785之间。
为了将ALK定位在一个PAC克隆上,我们用已公布的水稻品种Nipponbare的PAC文库( http://rgp.dna.affrc.go.jp)序列构建了ALK位点附近的contig,设计PCR引物分别以两个亲本的基因组DNA为模板进行PCR扩增。两个亲本的PCR产物分别用100多种不同的限制酶消化,经2%琼脂糖凝胶电泳分离和溴化乙啶(EB)染色,检测酶切产物的多态性。以此发展了CAPS标记,并用于群体精细定位,最终将其定位在一个BAC克隆AP003509上。
4、ALK基因的精细定位
根据公布的PAC克隆AP003509的序列( http://rgp.dna.affrc.go.jp),发展了1个SSR标记和1个CAPS标记,最后通过连锁分析将ALK定位在SSR标记b与CAPS标记d之间9.1kb的范围之内。
5、ALK部分cDNA序列的获得与功能的预测
首先对9.1kb的全长基因组序列用GENSCAN软件( http://genes.mit.edu/GENSCAN.html)预测可能的编码区(ORF),发现其间只有一个不完整的开放阅读框;扩大序列范围预测,并将基因产物用blastX软件预测( http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST)。用DNAStar软件(Lasergene)MegAlign程序中的ClustalW方法进行蛋白质序列比较和进化树分析。同时又设计一对引物AlkF(5’-GCACTCCTGCCTGTTTATCTGAAG-3’)(SEQ ID NO:3)和AlkR(5’-CCTTGTACTTGCGGTACGTC-3’)(SEQ ID NO:4)以籼稻“双科早”总RNA为模板进行RT-PCR反应并测序,得到了ALK基因的部分cDNA序列。在上述研究的基础上推测该基因可能编码一种可溶性淀粉合酶II,与玉米SSSIIa极其相似。
6、不同品种间ALK基因序列的比较
通过PCR技术扩增包括亲本“双科早”和“C堡”、“明恢63”、“窄叶青”、“宁夏早粳”、“春江06”、“台中本地1号”、“日本晴”、“杨稻6号”、“龙特甫”10个品种的ALK基因,通过比较不同水稻品种间ALK的DNA序列,并结合其糊化温度的表型,表明碱基替换是造成糊化温度改变的遗传基础。
实施例2
1、ALK全长基因序列的克隆
根据籼稻双科早ALK基因的序列设计引物,分三个区段进行高保真PCR扩增并测序,挑选序列完全正确的克隆、利用共有的AgeI位点和KpnI位点将它们连接成一个6.86kb片段,该片段包含起始密码子ATG上游的1,766个碱基和终止密码子TGA后的677个碱基的全长序列。
2、植物转化载体的构建
ALK正义转化载体的构建。将克隆到的全长ALK基因插入到双元载体pCAMBIA1300(澳大利亚CAMBIA公司)中,获得了用于转化的质粒pCAMBIA1300-Alk(图4A)。
ALK反义转化载体的构建。用籼稻双科早的总RNA为模板,通过RT-PCR扩增得到0.94kb片段,将其反向插入pCAMBIA-Ubi载体(澳大利亚CAMBIA公司)中,构建反义基因转化载体pCAMBIA-Ubi’Anti-Alk(图4B)。这两个质粒通过电击转化的方法转入农杆菌(AgroBacteriumtumefaciens)株系EHA105(澳大利亚CAMBIA公司)中,以用于后面的水稻转化。
实施例3
水稻的遗传转化实验及结果
1、转化受体材料
粳稻:C堡、春江06籼稻:双科早、明恢63
2、农杆菌菌株及目的基因
农杆菌菌株:EHA105
目的基因:Alk(正义基因),Anti-Alk(反义基因)
3、培养基:水稻组织培养常用的培养基
4、水稻愈伤组织诱导和继代培养
将粳稻“C堡”和籼稻“双科早”的幼胚脱壳灭菌,接种到诱导愈伤组织的培养基中。培养3周后,从盾片处生长出愈伤组织,挑选生长旺盛,颜色浅黄,比较松散的胚性愈伤组织,用作转化的受体。
5、农杆菌浸染和水稻转化
分别用正义基因表达载体pCAMBIA1300-Alk转化C堡和春江06;反义基因转化载体pCAMBIA-Ubi’Anti-Alk转化双科早和明恢63。用含有上述双元质粒载体的EHA105菌株侵染水稻愈伤组织,在黑暗处25℃培养3天后,在含有50mg/L潮霉素的选择培养基上筛选抗性愈伤组织和转基因植株。
6、转基因植株鉴定
将潮霉素抗性植株在阴凉处炼苗,几天后移栽到水田,结实后取T0代种子进行糊化温度表型鉴定。转正义ALK基因的T0代所结种子T0-3,T0-5不溶,说明由于正义ALK基因的导入与表达造成C堡和春江06稻米原本低的糊化温度明显升高;而转反义ALK基因的T0代所结种子Anti-T0-1,Anti-T0-3溶解,说明由于反义ALK基因的导入与表达造成双科早、明恢63稻米原本高的糊化温度明显降低。证明所克隆的ALK基因确为调控水稻稻米糊化温度的主效基因。
参考文献:
1.Calvert P.Nature,1997,389:338-339
2.Jenkins PJ,Cameron RE,Donald AM.Starch,1993,45:417-420
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<213>水稻
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(2412)
<223>
<400>1
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gaa ttg ccg gag cac tac ctg gat cac ttc aag ctg tac gac ccc gtc     1536
Glu Leu Pro Glu His Tyr Leu Asp His Phe Lys Leu Tyr Asp Pro Val
            500                 505                 510
ggc ggc gag cac gcc aac atc ttc ggc gcg ggc ctg aag atg gcg gac     1584
Gly Gly Glu His Ala Asn Ile Phe Gly Ala Gly Leu Lys Met Ala Asp
        515                 520                 525
cgg gtg gtg acc gtg agc ccc ggc tac ctc tgg gag ctg aag acg acg     1632
Arg Val Val Thr Val Ser Pro Gly Tyr Leu Trp Glu Leu Lys Thr Thr
    530                 535                 540
gag ggc ggc tgg ggc ctc cac gac atc ata cgg gag aac gac tgg aag     1680
Glu Gly Gly Trp Gly Leu His Asp Ile Ile Arg Glu Asn Asp Trp Lys
545                 550                 555                 560
atg aac ggc atc gtg aac ggc atc gac tac cgg gag tgg aac ccg gag     1728
Met Asn Gly Ile Val Asn Gly Ile Asp Tyr Arg Glu Trp Asn Pro Glu
                565                 570                 575
gtg gac gtg cac ctg cag tcc gac ggc tac gcc aac tac acc gtg gcc     1776
Val Asp Val His Leu Gln Ser Asp Gly Tyr Ala Asn Tyr Thr Val Ala
            580                 585                 590
tcg ctg gac tcc ggc aag ccg cgg tgc aag gcg gcg ctg cag cgc gag     1824
Ser Leu Asp Ser Gly Lys Pro Arg Cys Lys Ala Ala Leu Gln Arg Glu
        595                 600                 605
ctg ggg ctg gag gtg cgc gac gac gtg ccg ctg atc ggg ttc atc ggg     1872
Leu Gly Leu Glu Val Arg Asp Asp Val Pro Leu Ile Gly Phe Ile Gly
    610                 615                 620
cgg ctc gac ggg cag aaa ggg gtg gac atc atc ggc gac gcg atg ccg     1920
Arg Leu Asp Gly Gln Lys Gly Val Asp Ile Ile Gly Asp Ala Met Pro
625                 630                 635                 640
tgg atc gcc ggg cag gac gtg cag ctg gtg ctg ctg ggc tcc ggc cgc     1968
Trp Ile Ala Gly Gln Asp Val Gln Leu Val Leu Leu Gly Ser Gly Arg
                645                 650                 655
cgc gac ctg gag gtg atg ctg cag cgg ttc gag gcg cag cac aac agc     2016
Arg Asp Leu Glu Val Met Leu Gln Arg Phe Glu Ala Gln His Asn Ser
            660                 665                 670
aag gtg cgc ggg tgg gtg ggg ttc tcg gtg aag atg gcg cac cgg atc     2064
Lys Val Arg Gly Trp Val Gly Phe Ser Val Lys Met Ala His Arg Ile
        675                 680                 685
acg gcg ggc gcc gac gtg ctg gtc atg ccg tcg cgg ttc gag ccg tgc     2112
Thr Ala Gly Ala Asp Val Leu Val Met Pro Ser Arg Phe Glu Pro Cys
    690                 695                 700
ggc ctc aac cag ctc tac gcc atg gcg tac ggc acc gtc ccc gtc gtg     2160
Gly Leu Asn Gln Leu Tyr Ala Met Ala Tyr Gly Thr Val Pro Val Val
705                 710                 715                 720
cac gcc gtc ggc ggg ctg agg gac acc gtg tcg gcg ttc gac ccg ttc     2208
His Ala Val Gly Gly Leu Arg Asp Thr Val Ser Ala Phe Asp Pro Phe
                725                 730                 735
gag gac acc ggc ctc ggg tgg acg ttc gac cgc gcc gag ccg cac aag     2256
Glu Asp Thr Gly Leu Gly Trp Thr Phe Asp Arg Ala Glu Pro His Lys
            740                 745                 750
ctc atc gag gcg ctc ggc cac tgc ctc gag acg tac cgc aag tac aag     2304
Leu Ile Glu Ala Leu Gly His Cys Leu Glu Thr Tyr Arg Lys Tyr Lys
        755                 760                 765
gag agc tgg agg ggg ctc cag gtg cgc ggc atg tcg cag gac ctc agc     2352
Glu Ser Trp Arg Gly Leu Gln Val Arg Gly Met Ser Gln Asp Leu Ser
     770                775                 780
tgg gac cac gcc gcc gag ctc tac gag gag gtc ctt gtc aag gcc aag     2400
Trp Asp His Ala Ala Glu Leu Tyr Glu Glu Val Leu Val Lys Ala Lys
785                 790                 795                 800
tac caa tgg tga                                                     2412
Tyr Gln Trp
<210>2
<211>803
<212>PRT
<213>水稻
<400>2
Met Ser Ser Ala Val Val Ala Ser Ser Thr Thr Phe Leu Val Ala Leu
1               5                   10                  15
Ala Ser Ser Ala Ser Arg Gly Gly Pro Arg Arg Gly Arg Val Val Gly
            20                  25                  30
Val Ala Ala Pro Pro Ala Leu Leu Tyr Asp Gly Arg Ala Gly Arg Leu
        35                  40                  45
Ala Leu Arg Ala Pro Pro Pro Pro Arg Pro Arg Pro Arg Arg Arg Asp
    50                  55                  60
Ala Gly Val Val Arg Arg Ala Asp Asp Gly Glu Asn Glu Ala Ala Val
65                  70                  75                  80
Glu Arg Ala Gly Glu Asp Asp Glu Glu Glu Glu Glu Phe Ser Ser Gly
                85                  90                  95
Ala Trp Gln Pro Pro Arg Ser Arg Arg Gly Gly Val Gly Lys Val Leu
            100                 105                 110
Lys Arg Arg Gly Thr Val Pro Pro Val Gly Arg Tyr Gly Ser Gly Gly
        115                 120                 125
Asp Ala Ala Arg Val Arg Gly Ala Ala Ala Pro Ala Pro Ala Pro Thr
    130                 135                 140
Gln Asp Ala Ala Ser Ser Lys Asn Gly Ala Leu Leu Ser Gly Arg Asp
145                 150                 155                 160
Asp Asp Thr Pro Ala Ser Arg Asn Gly Ser Val Val Thr Gly Ala Asp
                165                 170                 175
Lys Pro Ala Ala Ala Thr Pro Pro Val Thr Ile Thr Lys Leu Pro Ala
            180                 185                 190
Pro Asp Ser Pro Val Ile Leu Pro Ser Val Asp Lys Pro Gln Pro Glu
        195                 200                 205
Phe Val Ile Pro Asp Ala Thr Ala Pro Ala Pro Pro Pro Pro Gly Ser
    210                 215                 220
Asn Pro Arg Ser Ser Ala Pro Leu Pro Lys Pro Asp Asn Ser Glu Phe
225                 230                 235                 240
Ala Glu Asp Lys Ser Ala Lys Val Val Glu Ser Ala Pro Lys Pro Lys
                245                  250                255
Ala Thr Arg Ser Ser Pro Ile Pro Ala Val Glu Glu Glu Thr Trp Asp
            260                 265                 270
Phe Lys Lys Tyr Phe Asp Leu Asn Glu Pro Asp Ala Ala Glu Asp Gly
        275                 280                 285
Asp Asp Asp Asp Asp Trp Ala Asp Ser Asp Ala Ser Asp Ser Glu Ile
    290                 295                 300
Asp Gln Asp Asp Asp Ser Gly Pro Leu Ala Gly Glu Asn Val Met Asn
305                310                  315                 320
Val Ile Val Val Ala Ala Glu Cys Gly Leu Gly Asp Val Ala Gly Ala
                325                 330                 335
Leu Pro Lys Ala Leu Ala Arg Arg Gly His Arg Val Met Val Val Val
            340                 345                 350
Pro Arg Tyr Gly Asp Tyr Ala Glu Ala Gln Asp Val Gly Ile Arg Lys
        355                 360                 365
Tyr Tyr Lys Ala Ala Gly Gln Asp Leu Glu Val Lys Tyr Phe His Ala
    370                 375                 380
Phe Ile Asp Gly Val Asp Phe Val Phe Ile Asp Ala Pro Leu Phe Arg
385                 390                 395                 400
His Arg Gln Asp Asp Ile Tyr Gly Gly Asn Arg Gln Glu Ile Met Lys
                405                 410                 415
Arg Met Ile Leu Phe Cys Lys Ala Ala Val Glu Val Pro Trp His Val
            420                 425                 430
Pro Cys Gly Gly Val Pro Tyr Gly Asp Gly Asn Leu Val Phe Leu Ala
        435                 440                 445
Asn Asp Trp His Thr Ala Leu Leu Pro Val Tyr Leu Lys Ala Tyr Tyr
    450                 455                 460
Arg Asp Asn Gly Met Met Gln Tyr Thr Arg Ser Val Leu Val Ile His
465                 470                 475                 480
Asn Ile Ala Tyr Gln Gly Arg Gly Pro Val Asp Glu Phe Pro Tyr Met
                485                 490                 495
Glu Leu Pro Glu His Tyr Leu Asp His Phe Lys Leu Tyr Asp Pro Val
            500                 505                 510
Gly Gly Glu His Ala Asn Ile Phe Gly Ala Gly Leu Lys Met Ala Asp
        515                 520                 525
Arg Val Val Thr Val Ser Pro Gly Tyr Leu Trp Glu Leu Lys Thr Thr
    530                 535                 540
Glu Gly Gly Trp Gly Leu His Asp Ile Ile Arg Glu Asn Asp Trp Lys
545                 550                 555                 560
Met Asn Gly Ile Val Asn Gly Ile Asp Tyr Arg Glu Trp Asn Pro Glu
                565                 570                 575
Val Asp Val His Leu Gln Ser Asp Gly Tyr Ala Asn Tyr Thr Val Ala
            580                 585                 590
Ser Leu Asp Ser Gly Lys Pro Arg Cys Lys Ala Ala Leu Gln Arg Glu
        595                 600                 605
Leu Gly Leu Glu Val Arg Asp Asp Val Pro Leu Ile Gly Phe Ile Gly
    610                 615                 620
Arg Leu Asp Gly Gln Lys Gly Val Asp Ile Ile Gly Asp Ala Met Pro
625                 630                 635                 640
Trp Ile Ala Gly Gln Asp Val Gln Leu Val Leu Leu Gly Ser Gly Arg
                645                 650                 655
Arg Asp Leu Glu Val Met Leu Gln Arg Phe Glu Ala Gln His Asn Ser
            660                 665                 670
Lys Val Arg Gly Trp Val Gly Phe Ser Val Lys Met Ala His Arg Ile
        675                 680                 685
Thr Ala Gly Ala Asp Val Leu Val Met Pro Ser Arg Phe Glu Pro Cys
    690                 695                 700
Gly Leu Asn Gln Leu Tyr Ala Met Ala Tyr Gly Thr Val Pro Val Val
705                 710                 715                 720
His Ala Val Gly Gly Leu Arg Asp Thr Val Ser Ala Phe Asp Pro Phe
                725                 730                 735
Glu Asp Thr Gly Leu Gly Trp Thr Phe Asp Arg Ala Glu Pro His Lys
            740                 745                 750
Leu Ile Glu Ala Leu Gly His Cys Leu Glu Thr Tyr Arg Lys Tyr Lys
        755                 760                 765
Glu Ser Trp Arg Gly Leu Gln Val Arg Gly Met Ser Gln Asp Leu Ser
    770                 775                 780
Trp Asp His Ala Ala Glu Leu Tyr Glu Glu Val Leu Val Lys Ala Lys
785                 790                 795                 800
Tyr Gln Trp
<210>3
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
<400>3
gcactcctgc ctgtttatct gaag                                          24
<210>4
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<400>4
ccttgtactt gcggtacgtc                                               20

Claims (7)

1.一种控制水稻稻米糊化温度的主效基因,该基因的核苷酸序列选自:
(1)编码SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的核苷酸序列;
(2)与(1)中的核苷酸序列能够在严谨条件下杂交,并同时编码具有控制水稻稻米糊化温度的功能的核苷酸序列。
2.按照权利要求1所述的基因,它具有SEQ ID NO:1所示的DNA序列。
3.一种由权利要求1所述的核苷酸序列编码的蛋白质。
4.按照权利要求3所述的蛋白质,它具有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。
5.一种含有权利要求1或2所述的控制水稻稻米糊化温度的基因的植物表达载体。
6.按照权利要求5所述的表达载体,该表达载体是pCAMBIA1300-ALK或pCAMBIA-Ubi’Anti-Alk。
7.一种培育淀粉的糊化温度发生变化的植株的方法,包括用权利要求5所述的表达载体转化植物细胞;和将转化的植物细胞培育成植株的步骤。
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