CN1556413A - 一种用于肿瘤早期诊断的组织芯片及制备器具 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种组织芯片。发明挑选具有完整临床资料和病理特征的常见恶性肿瘤肺癌，鼻咽癌，食管癌，胃癌，大肠癌，肝癌，乳腺癌，宫颈癌等的石蜡组织标本，癌前病变和相应正常组织标本进行切片、染色、标记定位，设计点阵列模具纸贴于受体蜡块表面引导受体孔制作，用简单实用的打孔针与组织穿刺针制备组织芯条石蜡块；本发明是包括癌组织，癌前病变和相应正常组织的组织芯片产品。通过原位杂交和免疫组化检测相关基因mRNA和蛋白在组织芯片的表达，经验证与常规检测的结果一致，且细胞形态清楚，均匀一致，无组织点脱落。该芯片中每一标本均有相应临床与病理资料，可用于检测各种目的基因在大样本量，多种类型癌组织中的表达差异，为筛选肿瘤早期诊断和预测预后分子标志物提供高通量工具。

Description

一种用于肿瘤早期诊断的组织芯片及制备器具
技术领域：
本发明涉及组织检测用的生物制品，具体涉及一种组织芯片。
背景技术：
组织芯片又称组织微阵列(Tissue chip，Tissue Microarray TMA，)是许多供体组织以微阵列方式重新排列在受体蜡块上，对受体蜡块切片并转移至载玻片上，这种可包括数百个组织的切片能用于各种原位表达研究。组织芯片常利用组织微阵列仪进行供体蜡块组织的穿刺和受体蜡块受体孔的制作。目前市场上有肿瘤组织芯片、正常组织芯片、单一或复合型组织芯片等，但不能用于高通量筛选恶性肿瘤早期诊断和预测预后分子标志物。因此，迫切需要制作一种可用于检测各种目的基因在大样本量，多种类型癌组织中的表达差异的组织芯片，以解决当前组织芯片存在的问题。
发明内容：
本发明旨在研制一种新型的组织芯片，以解决当前组织芯片存在的不能用于高通量筛选恶性肿瘤早期诊断和预测预后分子标志物的问题。
本发明是通过以下技术方案实现的。
用于肿瘤早期诊断和预测预后分子标志物筛选的组织芯片的制作包括标本制备、受体石蜡块的制作、组织芯片石蜡块与组织芯片切片的制作。标本的制备要挑选具有完整临床和病理特征资料的常见恶性肿瘤的石蜡组织标本、癌前病变与相应正常组织的石蜡组织标本；受体石蜡块的制作要按制作组织芯片密度和组织芯条直径的大小，用相应规格的点阵列的模具纸贴于受体蜡块表面；组织芯片石蜡块的制作是将穿刺针从每一个标本中穿取组织，从该穿刺针的内芯推出圆形石蜡组织芯条并移入相应受体石蜡孔中。制作组织芯片切片所用的穿刺针是一种有圆形锋利前端的腰椎穿刺针，穿刺针的内芯长于穿刺针1.0cm左右，受体石蜡块打孔用的打孔针的外径与穿刺针内芯大小一致，打孔针与组织穿刺针杆包被便于持针操作和限制穿刺深度的外套。
下面结合附图进一步详述本发明。
附图说明：
图1为打孔针示意图；其中：1、打孔针管  2、打孔针外套
图2为穿刺针及针芯示意图；其中：3、穿刺针针管  4、穿刺针外套  5、针芯
图3为448点阵的模型纸；
图4为穿刺的组织芯条；
图5为448个组织点阵的受体蜡块；
图6为448个组织点阵的HE切片；
图7为HE染色4×鼻咽癌组织芯片细胞形态图；
图8为免疫组化，P53+4×鼻咽癌组织芯片细胞形态图；
图9为原位杂交，BRD7+4×鼻咽癌组织芯片细胞形态图。
本发明的组织芯片是包括癌组织、癌前病变组织和相应正常组织的新型组织芯片产品。该芯片中每一标本均有相应的临床和病理资料，该芯片的具体制作方法为：(1)标本制备和目的组织HE染色切片定位：分别从组织标本库中挑选具有完整临床和病理特征资料的肺癌，鼻咽癌，食管癌，胃癌，大肠癌，肝癌，乳腺癌，宫颈癌等常见恶性肿瘤的石蜡组织标本各300例，癌前病变200例和相应正常组织100例，常规脱水、石蜡包埋、切片，HE染色，显微镜下证实组织正确性，然后在显微镜下对切片中目的组织部位进行标记定位。(2)受体石蜡块的制作：依据制作组织芯片密度和组织芯条直径的大小，利用相应规格点阵列的模具纸(图3)贴于受体蜡块表面来引导受体孔制作，防止打孔时引起受体蜡块孔周围石蜡崩溃，受体蜡块在打孔前放置于37℃预热30min。(3)组织芯片石蜡块的制作：利用HE切片标识具有代表性的组织区域来定位供体石蜡块上的穿刺部位；穿刺针从每一个标本中穿取组织，用与该穿刺针配套的内芯推出圆形石蜡组织芯条(图4)并移入相应受体石蜡孔中。待全部受体孔填满组织后，受体蜡块置于37℃，30min，用载玻片轻压蜡块供体组织面，使全部供体组织在同一平面。(4)组织芯片切片的制作：用轮转式切片机上先对组织芯片石蜡块粗切修片，待所有受体组织点阵均在一个平面后，利用石蜡胶带转移辅助系统对受体石蜡块切片，厚度为5μm的胶带组织切片粘贴于粘附基质的载玻片上，紫外灯下交联1min，胶带溶解液溶解并剥离胶带，即可常规脱蜡水化，如需长期保存，切片快速浸入溶化石蜡中，使切片表面重新履盖薄层石蜡，处理完毕的切片可在-20℃长期贮存备用。(5)制作组织芯片切片的打孔针和组织穿刺针是利用不同规格的腰椎穿刺针进行改造而成，截去腰椎穿刺针尖端侧切面，处理成圆形锋利前端的组织穿刺针(图2)；打孔针(1)的外径与穿刺针内芯(5)大小一致，打孔针和组织穿刺针杆包被外套(2、4)便于持针操作和限制穿刺深度，组织穿刺针的内芯(5)长于穿刺针(3)1.0cm左右。
组织芯片实际应用的质量评估：原位杂交和免疫组化检测相关基因mRNA和蛋白在组织芯片中的表达，与常规检测方法检测组织标本的结果一致，且无组织芯片点脱落现象，细胞形态清楚，均匀一致。这种组织芯片与常规的组织芯片一样，能与组织化学，免疫组织化学，原位杂交，原位PCR，原位RT-PCR和cDNA芯片等技术相结合，用于基因功能研究。此外，这种具有完整临床与病理资料的新型高通量恶性肿瘤组织芯片能大规模，快速地在原位组织中检测相关目的基因DNA扩增，mRNA表达丰度和蛋白质表达水平与临床病理特征的关系，真正地为筛选肿瘤早期诊断和预后预测的分子标志物提供一种新型高通量工具。
具体实施方式：
实施例：鼻咽癌组织芯片及其制作
(1)标本制备和目的组织HE染色切片定位：分别从组织标本库中挑选具有完整临床和病理特征资料的鼻咽癌石蜡组织标本250例，癌前病变150例和相应正常鼻咽组织48例，常规脱水、石蜡包埋、切片，HE染色，显微镜下证实组织正确性，显微镜下对切片中目的组织进行标记定位。(2)受体石蜡块的制作：制作组织直径为1.0mm大小，包括鼻咽癌，癌前病变和正常鼻咽组织共448标本的组织芯片，利用448个组织点阵列的模具纸(图3)贴于受体蜡块表面来引导受体孔制作，防止打孔时引起受体蜡块孔周围石蜡崩溃，受体蜡块在打孔前放置于37℃预热30min。(3)组织芯片石蜡块的制作：利用HE切片标识具有代表性的组织区域来定位供体石蜡块上的穿刺部位；穿刺针从每一个标本中穿取组织，用与穿刺针配套的内芯推出圆形石蜡组织芯条(图4)并移入相应受体蜡块孔中。待全部受体孔填满组织后，受体蜡块置于37℃，30min，用载玻片轻压蜡块供体组织面使全部供体组织在同一平面。(4)组织芯片切片的制作：用轮转式切片机上先对组织芯片石蜡块粗切修片，待所有受体组织点阵均在一个平面后，利用石蜡胶带转移辅助系统对受体石蜡块切片，厚度为5μm的胶带组织切片粘贴于粘附基质的载玻片上，紫外灯下交联1min，胶带溶解液溶解并剥离胶带，即可常规脱蜡水化，如需长期保存，切片快速浸入溶化石蜡中，使切片表面重新履盖薄层石蜡，处理完毕的切片可在-20℃长期贮存备用。(5)打孔针和组织穿刺针的制备：打孔针(外径1mm)和组织穿刺针(内径1mm)是利用不同规格腰椎穿刺针改造而成，打孔针外径与穿刺针内芯一致，截去穿刺针尖端侧切面，处理成圆形锋利的前端；打孔针和组织穿刺针杆包被外套便于持针操作和限制穿刺深度，组织穿刺针的内芯长于穿刺针1.0cm左右。(6)鼻咽癌组织芯片实际应用的质量评估：原位杂交和免疫组化检测BRD7基因mRNA和P53蛋白在组织芯片中的表达，与常规检测方法检测组织标本的结果一致，且无组织芯片点脱落现象，细胞形态清楚(图7-9)。

Claims (2)

1、一种用于肿瘤早期诊断和预测预后分子标志物筛选的组织芯片，该芯片的制作包括标本制备、受体石蜡块的制作、组织芯片石蜡块与组织芯片切片的制作，其特征在于：
(1)标本的制备要挑选具有完整临床和病理特征资料的常见恶性肿瘤的石蜡组织标本、癌前病变与相应正常组织的石蜡组织标本；
(2)受体石蜡块的制作：按制作组织芯片密度和组织芯条直径的大小，用相应规格的点阵列的模具纸贴于受体蜡块表面；
(3)组织芯片石蜡块的制作：穿刺针从每一个标本中穿取组织，从该穿刺针的内芯推出圆形石蜡组织芯条并移入相应受体石蜡孔中。
2、一种按权利要求1所述的制作组织芯片的器具，其特征在于：制作组织芯片石蜡块所用的穿刺针是一种有圆形锋利前端的腰椎穿刺针，穿刺针的内芯(5)长于穿刺针(3)1.0cm左右，受体石蜡块打孔用的打孔针(1)的外径与穿刺针内芯(5)大小一致，打孔针与组织穿刺针杆包被便于持针操作和限制穿刺深度的外套(2、4)。
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