CN1493549A - 一种高效绿色生物复合颗粒肥料及其生产方法 - Google Patents

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CN1493549A CNA031568718A CN03156871A CN1493549A CN 1493549 A CN1493549 A CN 1493549A CN A031568718 A CNA031568718 A CN A031568718A CN 03156871 A CN03156871 A CN 03156871A CN 1493549 A CN1493549 A CN 1493549A
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明 张
张明
罗旭东
杜永乐
董春青
周贺年
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Abstract

本技术发明涉及一种采用生物工程技术，选用多株菌经复活、分离、纯化、诱变高活性菌种制作生物固氮菌、有机磷细菌、钾细菌、放线菌植物刺激素以及农作物生长因子与有机物、无机物及微量元素经特殊工艺生产无公害高效生物复合颗粒肥料。该技术有效地利用了城市垃圾或农副产品下角料或动物粪便或蚯蚓粪作为生物肥的有机质原料，使废物得到了有效的利用，变废为宝。同时，节省了无机肥原料，改善了环境的污染。通过生物菌肥、有机肥、无机肥三者有机的结合，达到了互相协同与互补并增效的作用，以充分利用生物菌肥分解有机肥、无机肥的特殊功效和刺激农作物生长的作用，使农作物充分利用各种养料的有效成分，以达到农作物增产和节约肥料以及改善土质养分、改善农产品的营养结构。该技术产品可广泛应用于绿色农业、生态农业、绿色食品以及环保农业施肥。

Description

一种高效绿色生物复合颗粒肥料及其生产方法
本发明涉及一种高效生物复合颗粒肥料及其生产方法，属于一种采用生物固氮菌、磷细菌、钾细菌、植物刺激素、以及农作物生长因子与有机物、无机物及微量元素经特殊工艺生产无公害高效生物复合颗粒肥料。
现有技术中有多篇专利文件公开了种种利用生物菌肥生产复合肥料的生产方法，其中最接近的对比文献为：
公开号1139653A公开了利用草炭和无机物微量元素等制备绿色高效有机生物复合肥，其缺点是：一是菌种名称和菌肥制作工艺没有公开；二是选用无机原料配方和品种不明确。
公开号1254696A公开了利用生物固氮菌、磷细菌、钾细菌等生物复合肥与有机物、无机物、微量元素等配合生产生物复合肥，其缺点是：一是菌种没有完全公开；二是没有提出实施例，在生产和制造中很难实现。
公开号1062893A公开了利用生物菌肥与无机物配合生产一种有机生物复合肥，其缺点是：一是生物菌肥的名称和编号没有公开，按照公开的文件很难制作生物菌肥；二是工艺没有完全公开。
本发明的目的在于克服现有技术工艺设计和配方不足，提供一种高效生物复合颗粒肥料及其生产方法，该方法采用以有机原料、生物菌肥、无机物等配合，特别是利用城市垃圾有机质、农副产品下角料及各种饼、动物副产物(皮、毛、骨)等，可有效的实现废物的综合利用，变废为宝。
本技术发明的高效绿色生物复合肥及其生产方法，包括以下几个步骤：
第一，菌种的复活、分离、纯化、诱变；
第二，生物菌剂和菌肥培养基的制作及发酵工艺；
第三，有机肥的准备与制作；
第四，无机肥的准备与配方；
第五，微量元素的准备与配方：
第六，高效生物复合颗粒肥料配方及制备方法：
高效绿色生物复合颗粒肥料配方：
1)AS1.824或AS1.492Azotbacter uinelandii维涅兰德固氮菌和AS1.223或AS1.217Bacillus megaterium举大芽孢杆菌和AS4.891或AS4.1007 Steptomyces miroftauus细黄链霉菌；或
AS1.824或AS1.492 Azotbacter uinelandii维涅兰德固氮菌和AS1.910或AS1.231Bacillus mucilaginous胶冻样芽孢杆菌和AS1.867或AS1.220 Pseudomonas fturescens荧光假单胞菌菌肥与有机生物肥配入量为：20-60
2)无机原料的配入量为：20-40
氮、磷、钾含量配合比为：3-6∶2-6∶2-5
尿素含量为46.6％，加入(质量份)为：4-12份；
磷含量为14％，加入量(质量份)为14-40；
氯化钾含量为58％，加入量(质量份)为：6-20份；
(3)微量元素配入量(质量份)为：2-8份：其配合比例为：
①硫酸镁0.4-1.2，②硫酸铜0.2-0.4，③硼酸0.04-0.12、④硫酸锌0.12-0.20，⑤硫酸锰0.18-0.25，⑥钼酸铵0.003-0.012，⑦黄腐酸盐0.12-0.22，⑧稀土0.02-0.08
4)制造混合造粒：
先将有机肥和腐植酸磷肥加入混合机中或者加入粉煤灰，再加入生物菌肥搅拌均匀，尔后加入无机物混合均匀，将混合好的复合肥混料通过输送机输送到造粒机造粒，气流干燥或低温烘干，即成为高效有机生物全元复合颗粒肥料：
在本发明中，生物复合菌肥采用农副产品下角料或牲畜粪便或城市垃圾有机物作为生物菌肥的培养基，并加入少量的磷肥作为生物的促长剂，较好的解决了既能满足生物菌的生长又能较好的处理环境污染问题，使生物菌肥在复合肥料中起到了协同作用。其中，巨大芽孢杆菌有机磷细菌能把土壤中无效态的有机磷或无机磷分解成有效磷的细菌；胶冻样芽孢杆菌细菌肥料，它能把矿物中的钾分解出来，又能从坚硬的磷灰中取得磷素营养，还能从空气中固定氮素，同时能增强作物抗病能力；维涅兰德固氮菌能把空气中不能被农作物利用的氮气转化成被农作物吸收的氮素养料；细黄链霉菌能提高土壤或肥料中有效养料的含量，能把某些原来植物不能利用的(或利用很低的)氮磷化合物转化为有效性养料，增加土壤氮素，提高土壤肥力，具有抗病虫害的作用，该菌剂分泌的抗菌素，对数十种植物的真菌和细菌的生长，表现出有抑制作用，该菌剂分泌产生的刺激素，对农作物具有刺激植物细胞分裂及其纵横生长，叶绿素变浓，可促进各种农作物生根、发芽，增加分枝；荧光假单胞菌菌肥，能分解无效态的无机磷为有效磷；无机肥蛋、磷、钾和微量元素对农作物具有速效性，它们以各种方式参与作物的生命活动，起着植物细胞中结构成分和新陈代谢活性化合物的作用：微量元素在植物生长中具有专一的生理作用，在植物的整个生长过程中它们互相依赖，互相制约，处于一种互补平衡状态：其中，硼在农作物体中参与碳水化合物的运输和转化，促进蛋白质的合成，调节水分吸收和养分平衡以及氧化还原过程；锌能提高籽实产量和籽粒重量，提高作物的抗寒性和耐盐性；钼能参与豆科植物固蛋，能增加植物中维生物C的含量，能促使作物合成蛋白质；锰在植物生长过程中对糖酵解中的某些酶有活化作用，也是异柠檬酸脱氢酶、合成酶、硝酸还原酶等成分的活化剂，锰参与氮的转化和氧化还原过程，促进糖类、淀粉的水解和转移；铜能提高叶绿素的稳定性，可预防叶绿素不至于过早的被破坏，促进农作物光合作用，同时，铜也是某些氧化酶，如细胞色素、多酚氧化酶、抗坏血酸氧化酶以及乳酸酶等的组成成分，铜能够提高植物的吸收强度，增加植物中维生素A和C的含量；铁是许多酶的成分，铁对核酸的新陈代谢起重大作用，同时，铁对农作物的光合作用和氮代谢等方面也有良好的功能；稀土能促进农作物的生长；有机肥可以充分利用农副产物下角料和城市垃圾有机物，降低肥料成本，并可为生物菌在复合肥料吸收中的生存起到保护和提供营养的载体。
本发明的高效绿色生物复合颗粒肥料及其生产方法，具有以下优点及效果：
1)采用农作物副产物、城市垃圾有机质、动物粪便以及皮毛下角料，增加了土地的有机质和蛋白的含量，降低了土地的板结，为生物菌肥的生长提供了良好的培养物质和养料；
2)采用解磷、解钾细菌肥料，提高了对有机和无机物磷的吸收转化，起到了相互协同作用；
3)采用生物菌肥、有机质、无机肥料、微量元素的配合，提高了肥效，减少了无机肥的利用，节约了原料，降低了成本；
4)有效的利用农作物副产物和动物粪便及城市垃圾有机质，使废物变废为宝，同时，改善了环境，其经济效益和社会效益相当显著；
5)富含生物活性物质及生长因子，对农作物具有刺激增长、防病虫害的作用。
本技术发明设计的各项技术指标符合国家有关标准，经大田试验，均取得了良好的效果。
本技术设计采用城市垃圾有机物、农作物产品的副产物、动物粪便、无机物、微量元素等设计制作的高效生物复合颗粒肥料，与无机混合肥相比，价格降低了15-25％，肥效提高了8-20％。
本技术发明中应用了以下几个生物菌肥和有机质、微量元素，其中，生物菌种是从中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心购进并经复活、分离、纯化、诱变，选取高活性菌株作为生产菌种；无机肥料氮、磷、钾以及微量元素，需从市场购买；有机质需从有关部门收取或收购，经发酵和烘干处理。
下面分为几个步骤分别介绍本技术发明包括菌种的复活、分离、纯化、诱变；生物菌剂和菌肥培养基的制作及发酵工艺；有机肥的准备与制作；无机肥的准备与配方；微量元素的准备与配方；高效生物复合颗粒肥料配方及制备方法：
1.其中生物复合菌肥的菌种为：
(1)AS1.824或AS1.492Azotobacter uinelandii维涅兰德固氮菌：(2)AS1.223或AS1.217Bacillus megateriumh举大芽孢杆菌：(3)AS1.910或AS1.231 Bacillusmucilaginous胶冻样芽孢杆菌：(4)AS1.867或AS1.220Pseudomonas fturescens荧光假单胞菌：(5)AS4.891或AS4.1007Steptomyces miroftauus细黄链霉菌；
2.菌种的复活、分离、纯化、诱变：
1)按以上菌种的要求制作斜面和倒平板培养基；
2)培养基在1.5公斤/平方厘米灭菌30分钟；
3)取一支预诱变的斜面或安瓶管，在无菌操作下把菌种接入斜面试管进行多次培养复活、培养皿划线分离、再多次斜面试管培养，最后选取活性高、生长旺盛的菌种作为诱变菌株；
4)诱变
(1)菌悬液的制备
取以上任一种纯化好的斜面菌种一支，在无菌在无菌操作下用10ml无菌生理盐水将菌
苔洗下，并倒入剩有玻璃珠的锥形瓶中，混合振荡10分钟，以打碎菌块，离心(3000/分钟)5-10分钟，弃去上清液，将菌体用无菌生理盐水洗涤两次，加入10ml无菌生理盐水制成菌悬液，调整菌液浓度为108；
(2)平板制作
将以上预诱变菌种的培养基和培养皿及其它所用器具全部灭菌，培养基取出后降温到60℃左右倒平板，凝固后待用；
(3)诱变处理
①诱变处理采用紫外线灯照射(15w灯管)
②预热：正式诱变照射前先开启紫外线灯10-20分钟；
③取制备好的菌悬液用移液器或移液管移入6厘米无菌培养皿中，加入微量的抗菌素链霉素使之和匀，放入无菌磁力棒并置磁力搅拌器上，开动磁力搅拌器，打开培养皿盖，打开红灯(关闭其它照明灯)，紫外线灯管30厘米照射(视菌钟不同)1-3分钟；
④稀释涂平板
在红灯下分别取未照射的菌悬液(作为对照)和照射过的菌悬液各0.5毫升，进行稀释，一般取106-109稀释度的菌液0.2毫升涂于平皿培养基上，每个稀释度涂3个培养皿，用无菌玻璃棒涂匀平板，注意，在每个培养皿背后要标明处理时间、稀释度、组号。28-30℃恒温下培养24-72小时(培养皿用黑布包上)。挑选生长旺盛、活性高的菌株接入试管斜面培养基中进行培养，如此反复诱变、分离、筛选，直至从试管或培养皿中筛选出无杂菌、活力强的有效菌种，然后接入斜面试管中作为生产菌种或做成真空冷冻干燥安瓶管常期保存。
3.菌剂培养基的制作及发酵：
1)AS1.824或AS1.492Azotbacter uinelandii维涅兰德固氮菌种和菌剂的制作：
(1)斜面菌种培养基的制作：磷酸二氢钾kh2PO40.02-0.025克，磷酸氢二钾k2hpO40.08-0.085克，硫酸镁Mgso4.7h2o0.020-0.025克，硫酸钙CaSO4.2h2o0.01-0.015克，氯化铁feCl3微量，钼酸钠NaM0O4.2h2O微量，酵母提取物0.050-0.10克，甘露醇2-2.5克，琼脂1.5-2克，蒸馏水100-150毫升，ph值7.2；
(2)二级菌剂固体培养基(质量份)为：磷酸二氢钾kh2PO40.01-0.02克，磷酸氢二钾k2hpO40 0.04-0.08克，硫酸镁Mgso4.7h2o0.01-0.02克，硫酸钙CaSO4.2h2o0.005-0.01克，酵母提取物0.001-0.05克，甘露醇0.2-2克，淀粉1-2克，棉子饼40-60克，肥土40-80克，过磷酸钙0.5-1.5份，草炭或草木灰或粉煤灰3-6，用生石灰调节ph值7-7.5左右；
(3)培养基灭菌、接种及培养方法为：
①培养基灭菌：将以上斜面培养基、二级菌剂固体培养基培养料混合均匀，斜面培养基装入试管内，其余二级培养基放入罐头瓶或三角瓶内或布袋内，口部或上部用棉花或多层纱布或牛皮纸塞盖，将培养基放入或置入灭菌锅中，以1.5公斤/平方厘米压力灭菌30分钟；
②培养基接种及培养方法为：待培养基降温到40℃以下温度时，按无菌操作试管斜面培养基接入母菌种或活化安瓶干冻管菌种，二级培养基接入斜面或三角瓶菌种，温度控制在25-28℃左右，发酵时间一般控制在48-72小时，菌剂经镜检合格后即可作为菌肥的生产菌剂。
2)AS1.223或AS1.217 BaciLLus megaterium巨大芽孢杆菌菌肥的制作：
(1)斜面菌种的制作：蛋白胨0.5-1.5克，牛肉提取物0.1-0.5克，氯化钠0.1-0.9克，琼脂1.5克，蒸馏水100毫升，ph值7.0；
(2)二级菌种固体培养基(质量份)为：蛋白胨0.2-0.6，牛肉提取物0.1-0.3，氯化钠0.1-0.3，米糠(麦夫或棉子饼)20-60，农作物秸杆粉20-40，肥土20-40，过磷酸钙0.5-1.5份，草炭或草木灰或粉煤灰3-6，用生石灰调节ph值7-7.5左右；
(3)培养基灭菌、接种及培养方法为：
①培养基灭菌：将以上斜面培养基、二级菌剂固体培养基培养料混合均匀，斜面培养基装入试管内，其余二级培养基放入罐头瓶或三角瓶或布袋内，口部或上部用棉花或多层纱布或牛皮纸塞盖，将培养基放入或置入灭菌锅中，以1.5公斤/平方厘米压力灭菌30分钟；
②培养基接种及培养方法为：待培养基降温到40℃以下温度时，按无菌操作试管斜面培养基接入母菌种或活化安瓶干冻管菌种，二级培养基接入斜面或三角瓶菌种，温度控制在25-28℃左右，发酵时间一般控制在48-72小时，菌剂经镜检合格后即可作为菌肥的生产菌剂。
3)AS1.910或AS1.231 BaciLLus muciLaginosus胶冻样芽孢杆菌种菌剂的制作：
(1)斜面菌种的制作：磷酸二氢钾kh2po40.02-0.04克，磷酸氢二钾k2hpO40.04-0.10克，硫酸镁MgSO4.7h2o0.01`-0.02克，硫酸钙Ca4.SO42h2o0.005-0.012克，氯化铁feCl3微量，钼酸纳Na2MoO4.2h2o微量，酵母提取物0.05克，甘露醇2克，琼脂1.5克，蒸馏水100毫升，ph值7.2；
(2)二级菌种固体培养基(质量份)为：磷酸二氢钾kh2po40.01-0.02克，磷酸氢二钾k2hpO40.04-0.10克，硫酸镁MgSO4.7h2o0.01-0.02克，硫酸钙CaSO4.2h2o0.005-0.015克，米糠(麦麸或棉子饼)20-60，农作物秸杆粉20-40，肥土20-40，过磷酸钙0.5-1.5份，草炭或草木灰或粉煤灰3-6，用生石灰调节ph值7-7.5左右；
(3)培养基灭菌、接种及培养方法为：
①培养基灭菌：将以上斜面培养基、二级菌剂固体培养基培养料混合均匀，斜面培养基装入试管内，其余二级培养基放入罐头瓶或三角瓶或布袋内，口部或上部用棉花或多层纱布或牛皮纸塞盖，将培养基放入或置入灭菌锅中，以1.5公斤/平方厘米压力灭菌30分钟；
②培养基接种及培养方法为：待培养基降温到40℃以下温度时，按无菌操作试管斜面培养基接入母菌种或活化安瓶干冻管菌种，二级培养基接入斜面或三角瓶菌种，温度控制在25-28℃左右，发酵时间一般控制在48-72小时，菌剂经镜检合格后即可作为菌肥的生产菌剂。
4)AS1.867或AS1.220 Pseudomonas fturescens荧光假单胞菌种和菌剂的制作：
(1)斜面菌种的制作：蛋白胨1克，牛肉提取物0.3克，氯化钠0.5克，琼脂1.5克，蒸馏水100毫升，ph值7.0；
(2)二级菌种固体培养基(质量份)为：蛋白胨0.2-0.6，牛肉提取物0.1-0.3，氯化钠0.1-0.3，米糠(麦麸或棉子饼)20-60，农作物秸杆粉20-40，肥土20-40，过磷酸钙0.5-1.5份，草炭或草木灰或粉煤灰3-6，用生石灰调节ph值7-7.5左右；
(3)培养基灭菌、接种及培养方法为：
①培养基灭菌：将以上斜面培养基、二级菌剂固体培养基培养料混合均匀，斜面培养基装入试管内，其余二级培养基放入罐头瓶或三角瓶内或布袋内，口部或上部用棉花或多层纱布或牛皮纸塞盖，将培养基放入或置入灭菌锅中，以1.5公斤/平方厘米压力灭菌30分钟；
②培养基接种及培养方法为：待培养基降温到40℃以下温度时，按无菌操作试管斜面培养基接入母菌种或活化安瓶干冻管菌种，二级培养基接入斜面或三角瓶菌种，温度控制在25-28℃左右，发酵时间一般控制在48-72小时，菌剂经镜检合格后即可做为菌肥的生产菌剂。
5)AS4.891或AS4.1007 Steptomyces miroftauus细黄链霉菌菌肥的制作：
(1)斜面菌种培养基的制作：可溶性淀粉2克，碳酸钙KNO31克，磷酸氢二钾k2hpO40.05克，氯化钠NaCI0.05克，硫酸铁FeSO4.7H2O0.001克，琼脂1.5克，蒸馏水100毫升，ph值7.2-7.4；
(2)二级菌剂培养基的配方和制作：磷酸氢二钾k2hpO40.05克，硫酸镁MgSO4.7H2O0.05克，碳酸钙KNO30.5克，豆饼粉20-40份，肥土50-80份，秸秆粉25-50，过磷酸钙0.5-1.5份，草炭或草木灰或粉煤灰3-6，用生石灰调节ph值7-7.5左右；培养基灭菌、接种及培养方法为：
(3)培养基灭菌接种及培养方法为：
①培养基灭菌：
将以上斜面培养基、二级菌剂固体培养基培养料混合均匀，斜面培养基装入试管内，其余二级培养基放入罐头瓶或三角瓶内袋或布内，口部或上部用棉花或多层纱布或牛皮纸塞盖，将培养基放入或置入灭菌锅中，以1.5公斤/平方厘米压力灭菌30分钟；
②培养基接种及培养方法为：
待培养基降温到40℃以下温度时，按无菌操作试管斜面培养基接入母菌种或活化安瓶干冻管菌种，二级培养基接入斜面或三角瓶菌种，温度控制在25-28℃左右，发酵时间一般控制在48-72小时，菌剂经镜检合格后即可作为菌肥的生产菌剂。
4.菌肥和培养基的制作及发酵：
其中菌肥的配伍为：
AS1.824或AS1.492 Azotbacter uinelandii维涅兰德固氮菌和AS1.223或AS1.217BaciLLus megaterium举大芽孢杆菌和AS4.891或AS4.1007 Steptomyces miroftauus细黄链霉菌；或
AS1.824或AS1.492Azotbacter uinelandii维涅兰德固氮菌和AS1.910或AS1.231BaciLLus muciLaginosus胶冻样芽孢杆菌和AS1.867或AS1.220 Pseudomonas fturescens荧光假单胞菌：
(1)AS1.824或AS1.492 Azotbacter uinelandii维涅兰德固氮菌和AS1.223或AS1.217BaciLLus megaterium举大芽孢杆菌和AS4.891或AS4.1007Steptomyces miroftauus细黄链霉菌生物菌肥的培养基、灭菌、接种、发酵为：
磷酸氢二钾k2hpO40.01-0.05份，磷酸二氢钾kh2po40.01-0.02份，硫酸镁MgSO4.7H2O0.01-0.05份，豆饼2-5份，农作物秸秆粉3-8份，麦麸2-5份，过磷酸钙0.5-1.5份，粉煤灰或草炭5-10份，肥土或有机质50-73份，用石灰调整ph值为7.5-8，将湿度调整到30-40％左右，常压灭菌2-3小时或高压灭菌30分钟，待物料降温到40℃左右时，接入2级菌剂，接入量为1-10％，搅拌均匀后置入发酵机或发酵架或发酵池或发酵盘内，浅层(20厘米)或深层通风发酵，控制料温30℃左右，不要翻动，培养3-5天，即可为优质菌肥；
(2)AS1.824或AS1.492Azotbacter uinelandii维涅兰德固氮菌和AS1.910或AS1.231BaciLLus muciLaginosus胶冻样芽孢杆菌和AS1.867Pseudomonas fturescens荧光假单胞菌菌肥的培养基、灭菌、接种、发酵为：
磷酸二氢钾kh2po40.01-0.02份，磷酸氢二钾k2hpO40.04-0.02克，硫酸镁Mgso4.7h2o0.01-0.02份，豆饼5份，农作物秸杆粉8份，麦麸5份，过磷酸钙1份，粉煤灰或草炭8份，肥土或有机质73份，用石灰调整ph值为7.5-8，将湿度调整到30-40％左右，常压灭菌2-3小时或高压灭菌30分钟，待物料降温到40度左右时，接入2级菌剂，接入量为1-10％，搅拌均匀后置入发酵机或发酵架或发酵池或发酵盘内，浅层(20厘米)或深层通风发酵，控制料温30度左右，不要翻动，培养3-5天，即可为优质菌肥；
5.有机肥的准备与制作：
(1)腐植酸类肥料准备与制作：
①将风化煤或泥炭或草炭60-100份准备好；
②称取20份稀硫酸比重1.28左右，与适量的水混合；
③把风化煤或泥炭或草炭与稀硫酸和水的混合物混合，搅拌均匀，酸化处理24-48小时；
④把酸化处理后的风化煤或泥炭或草炭与15-30份磷矿粉或磷肥混合搅拌均匀，堆置反应5-6天，即为腐植酸类磷肥。
(2)有机质原料肥(包括城市垃圾或动物粪便及皮毛下角料或农副产品下角料及各种饼料)：
①城市垃圾经磁选分级处理后剩余下的残渣，经堆置自然发酵8-15天以上，再经过10-30目筛子，过滤物为有机质和腐殖质，烘干或晒干后即为良好的有机肥料；
②动物粪便中加入部分草粉或锯沫或风化煤土，经5-10天自然发酵或加入生物有机磷细菌肥料三级菌种发酵3-5天，烘干或晒干后即为良好的有机肥料；
③动物皮毛下角料粉碎过10-30目筛子，加入生物固氮菌肥料菌剂和有机磷细菌肥料或二级菌剂发酵4-6天，烘干或晒干后即为良好的有机蛋白肥料。
6.无机肥的准备与配方：
氮、磷、钾含量配合比为：3-8∶2-6∶1-5
①尿素含量为46.6％，加入(质量份)为：5-19份；
②磷含量为14％，加入量(质量份)为20-50；
③氯化钾含量为58％，加入量(质量份)为：6-14份。
7.微量元素的准备与制作：
微量元素配入量(质量份)为：2-8份，其配合比例为：
①硫酸镁0.5-2.5、②碳酸钙0.5-2.5、③硼酸0.05-0.15、④硫酸锌0.15-0.25、⑤硫酸锰0.25-0.35、⑥钼酸铵0.005-0.015、⑦硫酸铜0.5-0.15、⑧黄腐酸盐0.15-0.25、⑨稀土0.04-0.095；
8.复合肥的配方与工艺：
(1)AS1.824或AS1.492 Azotbacter uinelandii维涅兰德固氮菌和AS1.223或AS1.217BaciLLus megaterium举大芽孢杆菌和AS4.891或AS4.1007 Steptomyces miroftauus细黄链霉菌；或
AS1.824或AS1.492Azotbacter uinelandii维涅兰德固氮菌和AS1.910或AS1.231Bacillus mucilaginous胶冻样芽孢杆菌和AS1.867或AS1.220 Pseudomonas fturescens荧光假单胞菌菌肥和有机配入量(质量份)为：20-60
(2)无机原料的配入量(质量份)为：30-60
氮、磷、钾含量配合比为：3-8∶2-6∶1-5
①尿素含量为46.6％，加入(质量份)为：5-19份；
②磷含量为14％，加入量(质量份)为20-50；
③氯化钾含量为58％，加入量(质量份)为：6-14份。
(3)微量元素配入量(质量份)为：2-8份，其配合比例为：
①硫酸镁0.4-1.2，②硫酸铜0.2-0.4，③硼酸0.04-0.12、④硫酸锌0.12-0.20，⑤硫酸锰0.18-0.25，⑥钼酸铵0.003-0.012，⑦黄腐酸盐0.12-0.22，⑧稀土0.02-0.08
9.高效生物复合颗粒肥料及其生产方法实例
1)实例1：
(1)生物菌肥的配伍和配入量为：56份
其中：AS1.824Azotbacter uinelandii维涅兰德固氮菌20(份)和AS1.223 Bacillusmegaterium举大芽孢杆菌20份)和AS4.891Steptomyces miroftauus细黄链霉菌16(份)：
(2)无机原料的配入量(质量份)为40
氮、磷、钾含量配合比为：4.6∶3∶4.4
①尿素含量为46.6％，加入(质量份)为：10；
②磷含量为14％，加入量(质量份)为22；
③氯化钾含量为58％，加入量(质量份)为：8
(3)微量元素配入量(质量份)为：4份：其配合比例为：
①硫酸镁1，②碳酸钙1.47，③硼酸0.1，④硫酸锌0.2，⑤硫酸锰0.3，⑥钼酸铵0.01，⑦硫酸铜0.8，⑧黄腐酸盐0.02，⑨稀土0.1；
2)实例2：
(1)生物菌肥的配伍和配入量为37(份)
AS1.824Azotbacter uinelandii维涅兰德固氮菌(质量份)10和AS1.910 Bacillusmucilaginous胶冻样芽孢杆菌(质量份)20和AS1.867Pseudomonas fturescens荧光假单胞菌菌肥配入量(质量份)为17：
(2)无机原料的配入量(质量份)为：59
氮、磷、钾含量配合比为：6∶5∶4
①尿素含量为46.6％，加入(质量份)为：13；
②磷含量为14％，加入量(质量份)为36；
③氯化钾含量为58％，加入量(质量份)为：10
(3)微量元素配入量(质量份)为：4份：其配合比例为：
①硫酸镁1，②碳酸钙1.47，③硼酸0.1，④硫酸锌0.2，⑤硫酸锰0.3，⑥钼酸铵0.01，⑦硫酸铜0.8，⑧黄腐酸盐0.02，⑨稀土0.1；
10.混合与造粒
制造混合造粒：
先将有机肥和腐植酸磷肥加入混合机中或者加入粉煤灰，再加入生物菌肥搅拌均匀，尔后加入无机物混合均匀，将混合好的复合肥混料通过输送机输送到造粒机造粒；或者先把无机肥与有机肥先混合造粒，然后再与生物菌肥共同造粒。气流干燥或低温烘干即成为高效生物复合颗粒肥料。

Claims (8)

1.一种高效绿色生物复合颗粒肥料及其生产方法，包括菌种和菌剂培养基的制作及发酵；菌种的复活、分离、纯化、诱变；菌肥培养基的制作及发酵；有机肥的准备与制作；无机肥的准备与配方；微量元素的准备与制作；复合肥的配方与工艺；
其中生物复合菌肥的菌种为：
(1)AS1.824或AS1.492Azotobacter uinelandii维涅兰德固氮菌：(2)AS1.223或AS1.217Bacillus megateriumh举大芽孢杆菌：(3)AS1.910或AS1.231 Bacillusmucilaginous胶冻样芽孢杆菌：(4)AS1.867或AS1.220Pseudomonas fturescens荧光假单胞菌：(5)AS4.891或AS4.1007Steptomyces miroftauus细黄链霉菌；
2.根据权利要求1所述的一种高效绿色生物复合颗粒肥料及其生产方法，其特征在于上述生物菌种的复活、分离、纯化、诱变为：
1)按以上菌种的要求制作斜面和倒平板培养基；
2)培养基在1.5公斤/平方厘米灭菌30分钟；
3)取一支预诱变的斜面或安瓶管，在无菌操作下把菌种接入斜面试管进行多次培养复活、培养皿划线分离、再多次斜面试管培养，最后选取活性高、生长旺盛的菌种作为诱变菌株；
4)诱变
(1)菌悬液的制备
取以上任一种纯化好的斜面菌种一支，在无菌操作下用10ml无菌生理盐水将菌苔洗下，并倒入剩有玻璃珠的锥形瓶中，混合振荡10分钟，以打碎菌块，离心(3000/分钟)5-10分钟，弃去上清液，将菌体用无菌生理盐水洗涤两次，加入10ml无菌生理盐水制成菌悬液，调整菌液浓度为108；
(2)平板制作
将以上预诱变菌种的培养基和培养皿及其它所用器具全部灭菌，培养基取出后降温到60℃左右倒平板，凝固后待用；
(3)诱变处理
①诱变处理采用紫外线灯照射(15w灯管)
②预热：正式诱变照射前先开启紫外线灯10-20分钟；
③取制备好的菌悬液用移液器或移液管移入6厘米无菌培养皿中，加入微量的抗菌素链霉素使之和匀，放入无菌磁力棒并置磁力搅拌器上，开动磁力搅拌器，打开培养皿盖，打开红灯(关闭其它照明灯)，紫外线灯管30厘米照射(视菌钟不同)1-3分钟；
④稀释涂平板
在红灯下分别取未照射的菌悬液(作为对照)和照射过的菌悬液各0.5毫升，进行稀释，一般取106-109稀释度的菌液0.2毫升涂于平皿培养基上，每个稀释度涂3个培养皿，用无菌玻璃棒涂匀平板，注意，在每个培养皿背后要标明处理时间、稀释度、组号。28-30℃恒温下培养24-72小时(培养皿用黑布包上)挑选生长旺盛、活性高的菌株接入试管斜面培养基中进行培养，如此反复诱变、分离、筛选，直至从试管或培养皿中筛选出无杂菌、活力强的有效菌种，然后接入斜面试管中作为生产菌种或做成真空冷冻干燥安瓶管常期保存；
3.根据权利要求1所述的一种高效绿色生物复合颗粒肥料及其生产方法，其特征在于上述生物菌种和菌剂培养基的制作及发酵工艺为：
1)AS1.824或AS1.492Azotbacter uinelandii维涅兰德固氮菌种和菌剂的制作：
(1)斜面菌种培养基的制作：磷酸二氢钾kh2PO40.02-0.025克，磷酸氢二钾k2hpO40.08-0.085克，硫酸镁Mgso4.7h2o0.020-0.025克，硫酸钙CaSO4.2h2o0.01-0.015克，氯化铁feCl3微量，钼酸钠NaM0O4.2h2O微量，酵母提取物0.050-0.10克，甘露醇2-2.5克，琼脂1.5-2克，蒸馏水100-150毫升，ph值7.2左右；
(2)二级菌剂固体培养基(质量份)为：磷酸二氢钾kh2PO40.01-0.02克，磷酸氢二钾k2hpO4O0.04-0.08克，硫酸镁Mgso4.7h2o0.01-0.02克，硫酸钙CaSO4.2h2o0.005-0.01克，酵母提取物0.001-0.05克，甘露醇0.2-2克，淀粉1-2克，棉子饼40-60克，肥土40-80克，过磷酸钙0.5-1.5份，草炭或草木灰或粉煤灰3-6，用生石灰调节ph值7-7.5左右；
(3)培养基灭菌、接种及培养方法为：
①培养基灭菌：将以上斜面培养基、二级菌剂固体培养基培养料混合均匀，斜面培养基装入试管内，其余二级培养基放入罐头瓶或三角瓶内或布袋内，口部或上部用棉花或多层纱布或牛皮纸塞盖，将培养基放入或置入灭菌锅中，以1.5公斤/平方厘米压力灭菌30分钟；
②培养基接种及培养方法为：待培养基降温到40℃以下温度时，按无菌操作试管斜面培养基接入母菌种或活化安瓶干冻管菌种，二级培养基接入斜面或三角瓶菌种，温度控制在25-28℃左右，发酵时间一般控制在48-72小时，菌剂经镜检合格后即可作为菌肥的生产菌剂；
2)AS1.223或AS1.217 Bacillus megaterium巨大芽孢杆菌种或菌剂的制作：
(1)斜面菌种的制作：蛋白胨0.5-1.5克，牛肉提取物0.1-0.5克，氯化钠0.1-0.9克，琼脂1.5克，蒸馏水100毫升，ph值7.0；
(2)二级菌种固体培养基(质量份)为：蛋白胨0.2-0.6，牛肉提取物0.1-0.3，氯化钠0.1-0.3，米糠(麦麸或棉子饼)20-60，农作物秸秆粉20-40，肥土20-40，过磷酸钙0.5-1.5份，草炭或草木灰或粉煤灰3-6，用生石灰调节ph值7-7.5左右；
(3)培养基灭菌、接种及培养方法为：
①培养基灭菌：将以上斜面培养基、二级菌剂固体培养基培养料混合均匀，斜面培养基装入试管内，其余二级培养基放入罐头瓶或三角瓶内或布袋内，口部或上部用棉花或多层纱布或牛皮纸塞盖，将培养基放入或置入灭菌锅中，以1.5公斤/平方厘米压力灭菌30分钟；
②培养基接种及培养方法为：待培养基降温到40℃以下温度时，按无菌操作试管斜面培养基接入母菌种或活化安瓶干冻管菌种，二级培养基接入斜面或三角瓶菌种，温度控制在25-28℃左右，发酵时间一般控制在48-72小时，菌剂经镜检合格后即可作为菌肥的生产菌剂；
3)AS1.910或AS1.231 Bacillus mucilaginous胶冻样芽孢杆菌菌剂的制作：
(1)斜面菌种的制作：磷酸二氢钾kh2po40.02-0.04克，磷酸氢二钾k2hpO40.04-0.10克，硫酸镁MgSO4.7h2o0.01`-0.02克，硫酸钙Ca4.SO42h2o0.005-0.012克，氯化铁feCl3微量，钼酸钠Na2MoO4.2h2o微量，酵母提取物0.05克，甘露醇2克，琼脂1.5克，蒸馏水100毫升，ph值7.2；
(2)二级菌种固体培养基(质量份)为：磷酸二氢钾kh2po40.01-0.02克，磷酸氢二钾k2hpO40.04-0.10克，硫酸镁MgSO4.7h2o0.01-0.02克，硫酸钙CaSO4.2h2o0.005-0.015克，米糠(麦麸或棉子饼)20-60，农作物秸秆粉20-40，肥土20-40，过磷酸钙0.5-1.5份，草炭或草木灰或粉煤灰3-6，用生石灰调节ph值7-7.5左右；
(3)培养基灭菌、接种及培养方法为：
①培养基灭菌：将以上斜面培养基、二级菌剂固体培养基培养料混合均匀，斜面培养基装入试管内，其余二级培养基放入罐头瓶或三角瓶内或布袋内，口部或上部用棉花或多层纱布或牛皮纸塞盖，将培养基放入或置入灭菌锅中，以1.5公斤/平方厘米压力灭菌30分钟；
②培养基接种及培养方法为：待培养基降温到40℃以下温度时，按无菌操作试管斜面培养基接入母菌种或活化安瓶干冻管菌种，二级培养基接入斜面或三角瓶菌种，温度控制在25-28℃左右，发酵时间一般控制在48-72小时，菌剂经镜检合格后即可作为菌肥的生产菌剂；
4)AS1.867或AS1.220Pseudomonas fturescens荧光假单胞菌种或菌剂的制作：
(1)斜面菌种的制作：蛋白胨1克，牛肉提取物0.3克，氯化钠0.5克，琼脂1.5克，蒸馏水100毫升，ph值7.0；
(2)二级菌种固体培养基(质量份)为：蛋白胨0.2-0.6，牛肉提取物0.1-0.3，氯化钠0.1-0.3，米糠(麦夫或棉子饼)20-60，农作物秸秆粉20-40，肥土20-40，过磷酸钙0.5-1.5份，草炭或草木灰或粉煤灰3-6，用生石灰调节ph值7-7.5左右；
(3)培养基灭菌、接种及培养方法为：
①培养基灭菌：将以上斜面培养基、二级菌剂固体培养基培养料混合均匀，斜面培养基装入试管内，其余二级培养基放入罐头瓶或三角瓶内或布袋内，口部或上部用棉花或多层纱布或牛皮纸塞盖，将培养基放入或置入灭菌锅中，以1.5公斤/平方厘米压力灭菌30分钟；
②培养基接种及培养方法为：待培养基降温到40℃以下温度时，按无菌操作试管斜面培养基接入母菌种或活化安瓶干冻管菌种，二级培养基接入斜面或三角瓶菌种，温度控制在25-28℃左右，发酵时间一般控制在48-72小时，菌剂经镜检合格后即可作为菌肥的生产菌剂；
5)AS4.891或AS4.1007Steptomyces miroftauus细黄链霉菌菌肥的制作：
(1)斜面菌种培养基的制作：可溶性淀粉2克，碳酸钙KNO31克，磷酸氢二钾k2hpO40.05克，氯化钠NaCI0.05克，硫酸铁FeSO4.7H2O0.001克，琼脂1.5克，蒸馏水100毫升，ph值7.2-7.4；
(2)二级菌剂培养基的制作：磷酸氢二钾k2hpO40.05克，硫酸镁MgSO4.7H2O0.05克，碳酸钙KNO30.5克，豆饼粉20-40份，肥土50-80份，秸秆粉25-50，过磷酸钙0.5-1.5份，草炭或草木灰或粉煤灰3-6，用生石灰调节ph值7-7.5左右；
(3)培养基灭菌、接种及培养方法为：
①培养基灭菌：将以上斜面培养基、二级菌剂固体培养基培养料混合均匀，斜面培养基装入试管内，其余二级培养基放入罐头瓶或三角瓶内或布袋内，口部或上部用棉花或多层纱布或牛皮纸塞盖，将培养基放入或置入灭菌锅中，以1.5公斤/平方厘米压力灭菌30分钟；
②培养基接种及培养方法为：待培养基降温到40℃以下温度时，按无菌操作试管斜面培养基接入母菌种或活化安瓶干冻管菌种，二级培养基接入斜面或三角瓶菌种，温度控制在25-28℃左右，发酵时间一般控制在48-72小时，菌剂经镜检合格后即可作为菌肥的生产菌剂；
4.根据权利要求1或3所述的一种高效绿色生物复合颗粒肥料及其生产方法，其特征在于上述生物菌肥的配伍为：
AS1.824或AS1.492Azotbacter uinelandii维涅兰德固氮菌和AS1.223或AS1.217Bacillus megaterium举大芽孢杆菌和AS4.891或AS4.1007 Steptomyces miroftauus细黄链霉菌；或
AS1.824或AS1.492Azotbacter uinelandii维涅兰德固氮菌和AS1.910或AS1.231Bacillus mucilaginous胶冻样芽孢杆菌和AS1.867或AS1.220Pseudomonas fturescens荧光假单胞菌；
5.根据权利要求1或3或4所述的一种高效绿色生物复合颗粒肥料及其生产方法，其特征在于上述生物菌肥的培养基、灭菌、接种、发酵为：
1)AS1.824或AS1.492Azotbacter uinelandii维涅兰德固氮菌和AS1.223或AS1.217Bacillus megaterium举大芽孢杆菌和AS4.891或AS4.1007 Steptomyces miroftauus细黄链霉菌生物菌肥的培养基、灭菌、接种、发酵为：
磷酸氢二钾k2hpO40.01-0.05份，磷酸二氢钾kh2po40.01-0.02份，硫酸镁MgSO4.7H2O0.0-0.05份，豆饼2-5份，农作物秸秆粉3-8份，麦麸2-5份，过磷酸钙0.5-1.5份，粉煤灰或草炭5-10份，肥土或有机质50-73份，用石灰调整ph值为7.5-8，将湿度调整到30-40％左右，常压灭菌2-3小时或高压灭菌30分钟，待物料降温到40度左右时，接入2级菌剂，接入量为1-10％，搅拌均匀后置入发酵机或发酵架或发酵池或发酵盘内，浅层(20厘米)或深层通风发酵，控制料温30度左右，不要翻动，培养3-5天，即可为优质菌肥；
(2)AS1.824或AS1.492Azotbacter uinelandii维涅兰德固氮菌和AS1.910或AS1.231Bacillus muciLaginosus胶冻样芽孢杆菌和AS1.867或AS1.220Pseudomonas fturescens荧光假单胞菌菌肥的培养基、灭菌、接种、发酵为：
磷酸二氢钾kh2po40.01-0.02份，磷酸氢二钾k2hpO40.04-0.02克，硫酸镁Mgso4.7h2o0.01-0.02份，豆饼5份，农作物秸秆粉8份，麦麸5份，过磷酸钙1份，粉煤灰或草炭8份，肥土或有机质73份，用石灰调整ph值为7.5-8，将湿度调整到30-40％左右，常压灭菌2-3小时或高压灭菌30分钟，待物料降温到40度左右时，接入2级菌剂，接入量为1-10％，搅拌均匀后置入发酵机或发酵架或发酵池或发酵盘内，浅层(20厘米)或深层通风发酵，控制料温30度左右，不要翻动，培养3-5天，即可为优质菌肥：
6.根据权利要求1所述的一种高效绿色生物复合颗粒肥料及其生产方法，其特征在于上述有机肥的准备与制作：
有机肥料包括两类：
(1)腐植酸类肥料准备与制作：
①将风化煤或泥炭或草炭60-100份准备好；
②称取10-30份稀硫酸比重1.28左右，与适量的水混合；
③把风化煤或泥炭或草炭与稀硫酸和水的混合物混合，搅拌均匀，酸化处理24-72小时；
④把酸化处理过的风化煤或泥炭或草炭与15-30份磷矿粉或磷肥混合搅拌均匀，堆置反应5-6天，即为腐植酸类磷肥；
(2)有机质原料肥(包括城市垃圾或动物粪便或皮毛下角料或农副产品下角料及各种饼料)：
①城市垃圾经磁选分级处理后剩余下的残渣，经堆置自然发酵8-15天以上，再经过10-30目筛子，过滤物为有机质和腐植质，烘干或晒干后即为良好的有机肥料；
②动物粪便中加入部分草粉或锯沫或风化煤土，经5-10天自然发酵或加入生物有机磷细菌肥料三级菌剂发酵3-5天，烘干或晒干后即为良好的有机肥料；
③动物皮毛下角料粉碎过10-30目筛子，加入生物固氮菌肥料菌剂和有机磷细菌肥料三级菌剂发酵4-6天，烘干或晒干后即为良好的有机蛋白肥料；
④蚯蚓粪便：
7.根据权利要求1所述的一种高效绿色生物复合颗粒肥料及其生产方法，其特征在于上述无机肥的准备与制作工艺为：
(1)有机生物肥的配入量为：20-60
(2)无机原料的配入量为：20-40
氮、磷、钾含量配合比为：3-5∶2-4∶2-3
①尿素含量为46.6％，加入(质量份)为：4-12份；
②磷含量为14％，加入量(质量份)为14-40；
③氯化钾含量为58％，加入量(质量份)为：6-20份；
(3)微量元素配入量(质量份)为：2-6份，其配合比例为：
①硫酸镁0.4-1.2，②硫酸铜0.2-0.4，③硼酸0.04-0.12、④硫酸锌0.12-0.20，⑤硫酸锰0.18-0.25，⑥钼酸铵0.003-0.012，⑦黄腐酸盐0.12-0.22，⑧稀土0.02-0.08
8.制造混合造粒：
先将有机肥和腐植酸磷肥加入混合机中或者加入粉煤灰，再加入生物菌肥搅拌均匀，尔后加入无机物混合均匀，将混合好的复合肥混料通过输送机输送到造粒机造粒，气流干燥或低温烘干，即成为高效绿色有机生物全元复合颗粒肥料。
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