CN1440814A

CN1440814A - 特异性爱滋病病毒rna降解剂及其制备方法

Info

Publication number: CN1440814A
Application number: CN 02138685
Authority: CN
Inventors: 张辰宇
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2002-11-28
Filing date: 2002-11-28
Publication date: 2003-09-10

Abstract

本发明涉及一种特异性爱滋病病毒RNA降解剂，其特征是用特异性启动子和爱滋病病毒的基因片断，组成爱滋病病毒SiRNA构建，该构建在艾滋病病毒感染的T细胞内表达后，特异性启动子即能启动爱滋病病毒的基因片断转录，产生爱滋病病毒SiRNA，特异性降解爱滋病病毒RNA。本发明无毒副作用，无耐药性，能特异性直接杀死爱滋病病毒，可根治爱滋病。治疗时一个疗程即可，治疗费用低廉。

Description

特异性爱滋病病毒RNA降解剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种用于治疗爱滋病的药物及其制备方法，具体说是一种特异性爱滋病病毒RNA降解剂及其制备方法。

背景技术

自1981年美国诊断出首例艾滋病以来，全世界已有6000万人感染了艾滋病病毒，其中三分之一已经死亡。1985年，中国发现第一例艾滋病病毒感染者。到2001年底，全国累计报告发现HIV感染者30736人，其中艾滋病病人1594人，684人已经死亡，报告发现的感染病例数比2000年增加了至少40％。艾滋病对人类的生存已构成严重威胁，因此，彻底根治爱滋病已成为科学家们孜孜以求的目标。

现有的抗艾滋病药物及疗法艾滋病经历了四个阶段：

第一阶段开发出来的药物主要有AZT、DDI、DDC以及D4T等。这些药物能够抑制病毒的繁殖、扩散，但不能消除病毒，已被病毒破坏的细胞也无法逆转。AZT被发现它可能破坏服用者的骨髓，并引起肺部并发症、严重贫血等副作用，病毒也很快产生变异和抗药性。

第二阶段开发出来的药品通过破坏艾滋病病毒生存所必需的蛋白酶来杀死病毒，它们产生疗效的时间较长，不象AZT等药物因病人服药后体内的病毒很快变异而失效。这一时期的代表性药品有诺威尔、克瑞克斯万、英维若斯等。

第三阶段的是发现药物混合疗法即所谓的“鸡尾酒”疗法可阻止艾滋病病毒的繁殖。这种疗法是将蛋白酶抑制剂和其他多种抗病毒药物混合，它可使血液和免疫系统中的艾滋病毒数量大为减少，从而延长病毒携带者的生命。但这一方法的缺陷是，残留的病毒会潜伏在患者体内，并可能继续繁殖。

第四阶段是2002年7月，美国和瑞士两家公司宣布研制出抗艾滋病新药T-20。T-20能够阻止艾滋病病毒进入机体免疫细胞，并能增加免疫细胞的生长。但是，其疗效还需要更广泛的检验。

上述抗艾滋病药物及疗法的局限性及不足为：

1)能特异性地直接杀死艾滋病病毒，所以不能根治；

2)药物自身有毒副作用；

3)治疗费用昂贵。

发明内容

本发明要解决的技术问题就是现有技术不能直接杀死爱滋病病毒且治疗药物自身有毒副作用和治疗费用昂贵的问题。

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

用特异性启动子和爱滋病病毒的基因片断，组成爱滋病病毒SiRNA构建。该构建在艾滋病病毒感染的T细胞内表达后，特异性启动子即能启动爱滋病病毒的基因片断转录，产生爱滋病病毒SiRNA，特异性降解爱滋病病毒RNA，从而杀死爱滋病病毒。

本发明具有如下优点：

1)特异性直接杀死爱滋病病毒，可根治爱滋病；

2)无毒副作用，无耐药性；

3)一个疗程即可，治疗费用低廉。

具体实施方式

具体实施方式一，特异性爱滋病病毒RNA降解剂-1：

用特异性启动子和爱滋病病毒的基因片断，组成爱滋病病毒SiRNA构建：

1)特异性启动子：U6或H1；

2)爱滋病病毒的基因片断：

5’ 3’

AG1

GCGGGGGACAATTAGATAG

AG2

CTATCTAATTGTCCCCCGC

AN1

GTGGTCAAAACATAGTATG

AN2

CATACTATGTTTTGACCAC

将特异性启动子和爱滋病病毒的基因片断采用普通克隆方法结合后生成的质粒转到大肠杆菌上，大量繁殖带质粒的大肠杆菌，再用通用的方法从大肠杆菌中分离精制该质粒DNA，该精制的质粒DNA就是特异性爱滋病病毒RNA降解剂-1。

该降解剂-1包含下列结构：

1)(AG)

U6启动子+

5′ 3′

GCGGGGGACAATTAGATAGTTCAAGAGACTATCTAATTGTCCCCCGCTTTTTT

(SENSE)

5′ 3′

AATTAAAAAAGCGGGGGACAATTAGATAGTCTCTTGAACTATCTAATTGTCCCCCGCGGCC

(ANTISENSE)

或，

2)(AN)

U6启动子+

5′ 3′

GTGGTCAAAACATAGTATGTTCAAGAGACATACTATGTTTTGACCACTTTTTT

(SENSE)

5′ 3′

AATTAAAAAAGTGGTCAAAACATAGTATGTCTCTTGAACATACTATGTTTTGACCACGGCC

(ANTISENSE)

用正常基因治疗的方法将该降解剂-2注射到爱滋病患者体内，该构建在艾滋病病毒感染的T细胞内表达后，特异性启动子即能启动爱滋病病毒的基因片断转录，产生爱滋病病毒SiRNA，特异性降解爱滋病病毒RNA，从而杀死爱滋病病毒。

具体实施方式二，特异性爱滋病病毒RNA降解剂-2：

降解剂-2的制备过程的前3步与具体实施方式一完全相同，第4步是将生成的特异性爱滋病病毒RNA降解剂-1(爱滋病病毒SiRNA构建：U6或H1+爱滋病病毒的基因片断)转到AAV质粒中，用AAV感染293细胞株，其细胞培养上清液即为AAV-U6/H1-HIV SiRNA，此为特异性爱滋病病毒RNA降解剂-2，其有效成份是包含有特异性爱滋病病毒RNA降解剂-1结构的AAV。

Claims

1、特异性爱滋病病毒RNA降解剂，其特征是用特异性启动子和爱滋病病毒的基因片断，组成爱滋病病毒SiRNA构建，该构建在艾滋病病毒感染的T细胞内表达后，特异性启动子即能启动爱滋病病毒的基因片断转录，产生爱滋病病毒SiRNA，特异性降解爱滋病病毒RNA。

2、根据权利要求1所述的特异性爱滋病病毒RNA降解剂，其特征是在BSKS vector中，包含有下列结构：

1)(AG)

U6启动子+

5′ 3′

GCGGGGGACAATTAGATAGTTCAAGAGACTATCTAATTGTCCCCCGCTTTTTT

(SENSE)

5′ 3′

AATTAAAAAAGCGGGGGACAATTAGATAGTCTCTTGAACTATCTAATTGTCCCCCGCGGCC

(ANTISENSE)

或，

2)(AN)

U6启动子+

5′ 3′

GTGGTCAAAACATAGTATGTTCAAGAGACATACTATGTTTTGACCACTTTTTT

(SENSE)

5′ 3′

AATTAAAAAAGTGGTCAAAACATAGTATGTCTCTTGAACATACTATGTTTTGACCACGGCC

(ANTISENSE)

3、根据权利要求2所述的特异性爱滋病病毒RNA降解剂，其特征是它是包含有权利要求2所述的特异性爱滋病病毒RNA降解剂结构的AAV。

4、权利要求2所述特异性爱滋病病毒RNA降解剂的制备方法，其特征在于它包括下列步骤

1)特异性启动子：U6或H1；

2)滋病病毒的基因片断：

5’ 3’

AG1

GCGGGGGACAATTAGATAG

AG2

CTATCTAATTGTCCCCCGC

AN1

GTGGTCAAAACATAGTATG

AN2

CATACTATGTTTTGACCAC

3)将异性启动子和爱滋病病毒的基因片断采用普通克隆方法结合后生成的质粒转到大肠杆菌上，大量繁殖带质粒的大肠杆菌，再用通用的方法从大肠杆菌中分离精制该质粒DNA，该精制的质粒DNA就是特异性爱滋病病毒RNA降解剂。

5、权利要求3所述的特异性爱滋病病毒RNA降解剂的制备方法，其特征是它包括下列步骤：

1)特异性启动子：U6或H1；

2)爱滋病病毒的基因片断：

5’ 3’

AG1

GCGGGGGACAATTAGATAG

AG2

CTATCTAATTGTCCCCCGC

AN1

GTGGTCAAAACATAGTATG

AN2

CATACTATGTTTTGACCAC

3)将异性启动子和爱滋病病毒的基因片断采用普通克隆方法结合后生成的质粒转到大肠杆菌上，大量繁殖带质粒的大肠杆菌，再用通用的方法从大肠杆菌中分离精制该质粒DNA；

4)将分离出的上述精制的质粒DNA用常规方法转到AAV质粒中，用AAV感染293细胞株，取其细胞培养上清液即AAV-U6/H1-HIV SiRNA，此为特异性爱滋病病毒RNA降解剂。