CN1414007A - 一种利用胶带获取人体dna的方法 - Google Patents
一种利用胶带获取人体dna的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1414007A CN1414007A CN 01134233 CN01134233A CN1414007A CN 1414007 A CN1414007 A CN 1414007A CN 01134233 CN01134233 CN 01134233 CN 01134233 A CN01134233 A CN 01134233A CN 1414007 A CN1414007 A CN 1414007A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- adhesive tape
- dna
- epithelial cell
- chelex
- suspension
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 44
- 239000002390 adhesive tape Substances 0.000 title claims abstract description 36
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 claims description 16
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 14
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 238000009835 boiling Methods 0.000 claims description 10
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 claims description 10
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 7
- 208000028782 Hereditary disease Diseases 0.000 claims description 6
- 208000024556 Mendelian disease Diseases 0.000 claims description 6
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 6
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims description 6
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 3
- 239000000645 desinfectant Substances 0.000 claims description 2
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 claims description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 claims description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 claims description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 claims 1
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 claims 1
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 abstract description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 43
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 17
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 14
- 230000009182 swimming Effects 0.000 description 12
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 10
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 9
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 9
- 206010013801 Duchenne Muscular Dystrophy Diseases 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- 210000003811 finger Anatomy 0.000 description 5
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 5
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 4
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 4
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 4
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920000715 Mucilage Polymers 0.000 description 3
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 3
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 238000012252 genetic analysis Methods 0.000 description 3
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 3
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 3
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 3
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 2
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 description 2
- 102100023361 SAP domain-containing ribonucleoprotein Human genes 0.000 description 2
- 101710139423 THO complex subunit 1 Proteins 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 230000004087 circulation Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 210000005224 forefinger Anatomy 0.000 description 2
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 208000016361 genetic disease Diseases 0.000 description 2
- 238000009413 insulation Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000019901 Anxiety disease Diseases 0.000 description 1
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 description 1
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 1
- 208000001840 Dandruff Diseases 0.000 description 1
- 102000001039 Dystrophin Human genes 0.000 description 1
- 108010069091 Dystrophin Proteins 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 1
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 1
- 206010040844 Skin exfoliation Diseases 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 1
- 210000001766 X chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 239000012790 adhesive layer Substances 0.000 description 1
- 210000004381 amniotic fluid Anatomy 0.000 description 1
- 230000036506 anxiety Effects 0.000 description 1
- 230000037444 atrophy Effects 0.000 description 1
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 238000013016 damping Methods 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000035618 desquamation Effects 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000012224 gene deletion Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 210000004209 hair Anatomy 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 206010025482 malaise Diseases 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 210000000663 muscle cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 210000000282 nail Anatomy 0.000 description 1
- 210000004681 ovum Anatomy 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 description 1
- 230000035807 sensation Effects 0.000 description 1
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 210000000515 tooth Anatomy 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及分子生物学领域，具体公开了一种利用胶带直接或间接地获取人体上皮细胞，然后提取高质量DNA的方法，本发明不需要使用蛋白酶K，无论在体表纹印的提取上还是DNA抽提方法上都更加快捷、简单和可靠。本发明适用于法医学、遗传学、亲子鉴定等个体鉴定以及遗传特征包括遗传病的筛选、鉴定和确定。
Description
技术领域
本发明涉及分子生物学领域，具体地讲，本发明涉及人体DNA的制备方法及其用途。
发明背景
每个人携有的遗传物质DNA千差万别，DNA多态性足以在大量人群中分辨个体。DNA分型技术是从人的遗传本质上进行的个体分辨，其精确度远较其他方法高。
现代亲子鉴定和法医学鉴定多以短串联重复序列(STR)作为遗传学标记。短串联重复序列(STR)广泛分布于人的23对染色体上，是由2-7个重复序列的碱基所组成的一百至数百碱基对长的DNA片段，在人群中具有高度的多态性；利用聚合酶链式反应(PCR)技术可以大量、迅速和特异地扩增目标DNA。极微量的样品经PCR扩增后也可被检测，且结果可完全符合法医学的要求。
近年来，可在DNA或基因水平上诊断越来越多的遗传病。以Duchenne型肌营养不良为例进行说明。Duchenne型肌营养不良是一组原发于肌肉的遗传性变性疾病，发病率为1/3500活产男婴，主要临床特征为受累的骨骼肌肉进行性无力和萎缩。现代分子遗传学研究证明，Duchenne型肌营养不良是由X染色体短臂上Xp21-Xp223序列的基因缺陷所致，该段基因控制着肌细胞膜的骨架成份抗肌萎缩蛋白(dystrophine)的合成，这个基因非常庞大，约2.4Mb，含有79个外显子，78个内含子，如此巨大的基因一旦发生基因缺失突变或点突变，都会严重影响编码蛋白的合成。研究表明绝大部分的Duchenne型肌营养不良是由于缺失突变所致，这些缺失突变有两个高发区，一个在基因的5′端1-7外显子区域，另一个在基因的3′端45-55外显子区域。利用PCR技术可以直接检测到这些缺失突变，从而对缺失型患者或带有基因缺陷者进行诊断。
对每一个人而言，DNA终其一生基本不变，而且除精子、卵子外人体各处组织的DNA大都雷同，所以DNA样品可以取自：血液、精液、唾液、尿液、头发、牙齿、指甲、骨头、口腔上皮细胞、羊水、甚至皮屑。但是，目前采集人体DNA的几种方法均有不足之处。
例如，采血是法医学鉴定和疾病诊断常规的取样方法，但采血过程复杂，限制繁多。例如，采集血样者必须是专业医务人士，如医生或护士；被采样者有不舒服或疼痛的感觉甚至恐惧心理；被采样者如有疾病，如肝炎、艾滋病或其他传染病，那么从业者便有在血样处理过程中被感染之虞。此外，基于年龄、健康、宗教、法律或其他原因，血样可能难以得到。
发明内容
本发明在于提供一种简便有效的获取人体DNA的方法，以及进一步地进行个体鉴定或遗传特征分析或遗传疾病的筛查。本发明还包括将胶带用于直接或间接获取上皮细胞和/或其碎片的用途。
本发明人发现在人指接触固体表面或按指纹时有少量的表皮细胞脱落，可成为DNA的来源。指纹是法医学鉴定中最常采集的物证，以指纹作为DNA的来源不失为一个简单有效的方法。因此使用胶带直接或间接获得指纹或身体其它部位的纹印，籍此获得上皮细胞，然后从中抽取人体DNA很具实际意义和应用价值。采得的DNA可以用于个体鉴别和遗传特征包括遗传病的筛选、鉴定和确定。本发明的方法包括如下步骤：
(a)用胶带直接或间接地粘取人体的上皮细胞；
(b)在Chelex-100悬浮液中于55℃-65℃，优选56℃-60℃保温2小时至过夜，例如保温4小时，6小时或12小时；
(c)沸水浴6-10分钟，优选7-8分钟；
(d)以每分钟3000-13000转，优选6000-13000转的速度离心3-5分钟，取上清液备用。
本发明使用胶带直接或间接地获取人体上皮细胞，从中成功地抽提人体DNA并进行DNA分型，用于遗传学、法医学、亲子鉴定等个体鉴定以及遗传特征包括遗传病的筛选、鉴定和确定。
附图的简要说明：
图1为实施例1的STR图谱。其中左图为某志愿者指纹样品结果，右图为该志愿者血液样品结果；
图2为实施例2的STR图谱。其中左图为某志愿者指纹样品结果，右图为该志愿者血液样品结果；
图3为实施例3的电泳图谱。图3A所示为某志愿者唾液样品经外显子3、外显子43、外显子48和外显子51这四对外显子引物扩增后的电泳结果；图3B为该志愿者指纹样品电泳结果，泳道M为分子量对照，泳道N为PCR阴性对照，泳道1为外显子3扩增产物，泳道2为外显子43扩增产物，泳道3为外显子48扩增产物，泳道4为外显子51扩增产物，PCR所用引物如表一所示。
具体实施方式
本发明的方法包括如下步骤：
(a)用胶带直接或间接地粘取人体的上皮细胞；
(b)在Chelex-100悬浮液中于55℃-65℃，优选56℃-60℃保温2小时至过夜，例如保温4小时，6小时或12小时；
(c)沸水浴6-10分钟，优选7-8分钟；
(d)以每分钟3000-13000转，优选6000-13000转的速度离心3-5分钟，取上清液备用。
本发明的方法还优选包括：
用事先清洗并消毒的剪切工具如剪刀将粘有上皮细胞的胶带剪碎。
本发明的方法还优选包括：
在步骤(b)加入Chelex-100悬浮液之后，在温浴之前以每分钟100-3000，优选2000次的频率振荡10-20秒。
本发明的方法还优选包括：
在步骤(b)温浴完成之后以每分钟100-3000，优选2000次的频率振荡10-20秒。
本发明的方法还优选包括：
在步骤(c)沸水浴完成之后以每分钟100-3000，优选2000次的频率振荡10-20秒。
上述Chelex-100悬浮液优选为新鲜配制的2-10％，优选4-8％，更优选5％的Chelex-100悬浮液，其用量为50-500微升，优选100-300微升，更优选200微升。
本发明的方法中，所述上皮细胞可来自手指、手掌、脚趾、脚掌或身体的其它部位。
本发明的方法中，所述上皮细胞优选是将测试者的指肚部分直接压在胶带的粘性面上而获得的或利用胶带粘取遗留在物体表面上的指纹而获得的。
本发明的方法中对所用的胶带的基质没有任何限制，它可以是塑料的或纸质的，可以是透明或非透明的。
本发明的上下文所述的上皮细胞包括上皮细胞的碎片。
直接获得指纹的方法：将手指的指肚部分或身体的其它部位如手掌、脚趾、脚掌等直接用力按压在胶带的粘胶面上，留下指纹或其它部位的纹印。
间接获得指纹的方法：利用胶带的粘胶层将遗留在物体，如光滑的木头、玻璃以及不锈钢表面的指纹或其它身体部位的纹印取下。
以下以粘有指纹的胶带为例描述本发明优选的提取DNA的过程，以及利用所获得的DNA通过PCR扩增来诊断Duchenne肌营养不良症。
将粘有指纹部分的胶带用事先清洗并经高压蒸气灭菌和紫外线消毒的医用剪刀剪碎，移入离心管；加入100-300微升4-8％的Chelex-100(Bio-Rad，UAS)悬浮液，以每分钟100-3000次的频率振荡10-20秒；56-60℃保温2小时至过夜；再以每分钟100-3000次的频率振荡10-20秒；然后沸水浴8-10分钟，完成之后以每分钟100-3000次的频率振荡10-20秒；最后以每分钟6000-13000转的速度离心3-5分钟，将上清液移入新的离心管内保存于-20℃冰箱备用。DNA指纹图谱的建立
按本发明的方法获取DNA之后，以PE公司的AmpF1 STR试剂盒进行扩增，扩增产物使用ABI PRISM310 Genetic Analyzer分析后产生DNA指纹图谱。
另外，为进行遗传分析或遗传疾病的筛选目的，在如上按本发明方法获取DNA之后，还可如下进行PCR扩增。例如，针对Duchenne肌营养不良，可如下进行扩增：
在Duchenne型肌营养不良突变高发区选择四对引物扩增缺失热点的四个外显子(Beggs，A.H.et al(1990)Detection of 98％ofDMD/BMD gene deletions by polymerase chain reaction.Hum Genet.86：45-48)，该PCR扩增所用引物如下表所示。其中一对位于基因的5′端，另三对位于基因的3′端，分别为外显子3、外显子43、外显子48和外显子51，扩增产物长度分别为410bp、357bp、506bp和388bp。扩增后对扩增产物进行凝胶电泳分析，以进行疾病的筛查和诊断。
| 外显子 | 引物序列 | 产物长度 |
| 3 | TCATCCATCATCTTCGGCAGATTAA | 410 |
| CAGGCGGTAGAGTATGCCAAATGAAAATCA | ||
| 43 | GAACATGTCAAAGTCACTGGACTTCATGG | 357 |
| ATATATGTGTTACCTACCCTTGTCGGTCC | ||
| 48 | TTGAATACATTGGTTAAATCCCAACATG | 506 |
| CCTGAATAAAGTCTTCCTTACCACAC | ||
| 51 | GAAATTGGCTCTTTAGCTTGTGTTTC | 388 |
| GGAGAGTAAAGTGATTGGTGGAAAATC |
本发明克服了现有方法的不足，无论在指纹提取方法上还是DNA抽提方法上都更加简便。提取身体表面所得纹印不必使用特殊的专用胶带。以指纹为例，只需要指肚部分的指纹已足够，不需要提取整个手掌纹。同时DNA提取也更加简单，不需要使用蛋白酶K，整个过程更快捷简单可靠。
本发明方法所获得的DNA适用于遗传学分析、法医学鉴定、亲子鉴定等个体鉴定以及遗传特征包括遗传病的筛选、鉴定和确定。
以下以具体实施实例描述本发明。实施例1：利用胶带直接获得指纹
一志愿者将其食指的指肚用力按压在透明胶带的粘胶面上，将粘有指纹部分的胶带用事先清洗并经高压蒸气灭菌和紫外线消毒的医用剪刀剪碎，移入1.5毫升的离心管；加入200微升新鲜配制的5％的Chelex-100(Bio-Rad，USA)悬浮液，以每分钟2000次的频率高速振荡15秒；56℃保温过夜；再以每分钟2000次的频率高速振荡15秒，然后沸水浴10分钟，再以每分钟2000次的频率高速振荡15秒；最后以每分钟13000转的速度离心3分钟，将上清液移入新的离心管内保存于冰箱备用。按上述方法从该透明胶带上提取DNA后，取3微升按照制造商的说明使用PE公司的AmpF1 STR试剂盒进行PCR扩增，扩增产物用ABI PRISM 310 Genetic Analyzer分析后得到DNA指纹图谱，该志愿者的STR图谱为，男性，THO1：7/9，TPOX：8/11，CSF1PO：10/10，D3S1358：17/17，vWA：17/18，FGA：24/24，D5S818：9/13，D13S317：8/8；D7S820：10/11；该结果与取该志愿者血液而测定的结果完全一致(参见图1)。实施例2：利用胶带间接获得指纹
利用胶带获得一志愿者留在木质桌面上的三枚指纹，将粘有指纹部分的胶带用事先清洗并经高压蒸气灭菌和紫外线消毒的医用剪刀剪碎，移入1.5微升的离心管；加入200微升新鲜配制的5％的Chelex-100(Bio-Rad，USA)悬浮液，以每分钟2000次的频率高速振荡15秒；56℃保温过夜；再以每分钟2000次的频率高速振荡15秒，然后沸水浴10分钟，再以每分钟2000次的频率高速振荡15秒；最后以每分钟13,000转的速度离心3分钟，将上清液移入新的离心管内保存于冰箱备用。按上述方法从该透明胶带上提取DNA后，取3微升按照制造商的说明使用PE公司的AmpF1 STR试剂盒进行PCR扩增。扩增产物使用ABI PRISM 310 Genetic Analyzer分析后得到DNA指纹图谱，该志愿者的STR图谱为，男性，THO1：8/9，TPOX：8/11，CSF1PO：10/12，D3S1358：14/16，vWA：16/18，FGA：18/21，D5S818：11/12，D13S317：10/10；D7S820：8/11；该结果与取该志愿者血液而测定的结果完全一致(参见图2)。实施例3：疾病基因的检测
一志愿者将其食指的指肚用力按压在透明胶带的粘胶面上，将粘有指纹部分的胶带用事先清洗并经高压蒸气灭菌和紫外线消毒的医用剪刀剪碎，移入1.5毫升的离心管；加入200微升新鲜配制的5％的Chelex-100(Bio-Rad，USA)悬浮液，以每分钟2000次的频率高速振荡15秒；56℃保温过夜；再以每分钟2000次的频率高速振荡15秒，然后沸水浴10分钟，再以每分钟2000次的频率高速振荡15秒；最后以每分钟13,000转的速度离心3分钟，将上清液移入新的离心管内保存于冰箱备用。按上述方法从该透明胶带上提取DNA后，取5微升DNA分别加入PCR缓冲液(100mM Tris HCl pH8.3，500mM KCl)3.75微升，25mM MgCl2 2微升，10mM dNTPs 2微升，DMSO 1.25微升，水8.75微升，PCR引物2微升以及Taq聚合酶0.25微升(5U/微升)，PCR反应体积为25微升，反应条件为95℃ 3分钟，然后30个循环为94℃ 1分钟，60℃ 1分钟和72℃ 2-4分钟(延伸时间每10个循环增加1分钟)，最后72℃延伸反应5分钟结束。扩增产物经过2％的凝胶电泳和溴乙锭染色，结果见图3。图3B中泳道M为分子量对照，泳道N为PCR阴性对照，泳道1为外显子3扩增产物，泳道2为外显子43扩增产物，泳道3为外显子48扩增产物，泳道4为外显子51扩增产物，该结果与取该志愿者唾液而测定的结果(图3A)完全一致。
虽然本发明的实施例以指纹为例进行描述，本领域的技术人员在阅读本发明书之后，即可从用胶带粘取被测试者身体其它部位如手掌、脚趾、脚掌或身体其它表面纹印中提取DNA，用于遗传学分析、法医学鉴定、亲子鉴定等个体鉴定以及遗传特征包括遗传病的筛选、鉴定和确定，这一点是显而易见的。
本发明不受上述具体文字描述的限制，本发明可在权利要求书所概括的精神和实质的范围内做各种变形和改变。这些变形和改变均在本发明的范围之内。
序列表<110>香港中文大学<120>一种利用胶带获取人体DNA的方法<130>SPI010824-09<160>8<170>PatentIn version 3.1<210>1<211>25<212>DNA<213>人工序列<220><223>PCR引物<400>1tcatccatca tcttcggcag attaa 25<210>2<211>30<212>DNA<213>人工序列<220><223>PCR引物<400>2caggcggtag agtatgccaa atgaaaatca 30<210>3<211>29<212>DNA<213>人工序列<220><223>PCR引物<400>3gaacatgtca aagtcactgg acttcatgg 29<210>4<211>29<212>DNA<213>人工序列<220><223>PCR引物<400>4atatatgtgt tacctaccct tgtcggtcc 29<210>5<211>28<212>DNA<213>人工序列<220><223>PCR引物<400>5ttgaatacat tggttaaatc ccaacatg 28<210>6<211>26<212>DNA<213>人工序列<220><223>PCR引物<400>6cctgaataaa gtcttcctta ccacac 26<210>7<211>26<212>DNA<213>人工序列<220><223>PCR引物<400>7gaaattggct ctttagcttg tgtttc 26<210>8<211>27<212>DNA<213>人工序列<220><223>PCR引物<400>8ggagagtaaa gtgattggtg gaaaatc 27
Claims (15)
1.一种提取DNA的方法，该方法包括下列步骤：
(a)利用胶带粘取人体上皮细胞；
(b)将胶带在2-10％Chelex-100悬浮液中于55℃-65℃保温2小时至过夜；
(c)沸水浴6-10分钟；
(d)以每分钟3000-13000转的速度离心3-5分钟，取上清液备用。
2.根据权利要求1所述的方法，还包括：在加入Chelex-100悬浮液之前用事先清洗并消毒的剪切割工具将粘有指纹部分的胶带破碎。
3.根据权利要求1所述的方法，还包括：在步骤(c)沸水浴之前以每分钟100-3000次的频率振荡10-20秒。
4.根据权利要求1所述的方法，还包括：在步骤(d)沸水浴之后以每分钟100-3000次的频率震荡10-20秒。
5.根据权利要求1-4所述的方法，其中所用的Chelex-100悬浮液为新鲜配制，用量为50-500微升。
6.根据权利要求1-5所述的方法，其中步骤(b)为将胶带在4-8％的Chelex-100悬浮液中于55℃-60℃保温2小时至过夜。
7.根据权利要求6所述的方法，其中步骤(b)为将胶带在5％的Chelex-100悬浮液中于55℃-60℃保温2小时至过夜。
8.根据权利要求1所述的方法，其中所述的上皮细胞来自手指、手掌、脚趾、脚掌或身体表面的其他部位。
9.根据权利要求1所述的方法，其中所述的上皮细胞由测试者的手指、手掌、脚趾、脚掌或身体表面的其他部位直接按压在胶带上而获得。
10.根据权利要求9所述的方法，其中所述的上皮细胞由测试者的指肚部分直接按压在胶带上而获得。
11.根据权利要求1所述的方法，其中所述的上皮细胞是使用胶带粘取遗留在物体表面上的手指、手掌、脚趾、脚掌或身体表面其他部位的纹印而获得。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述的上皮细胞是利用胶带粘取遗留在物体表面的指纹而获得。
13.根据权利要求1所述的方法，其中胶带的基质是塑料的或纸质的，透明的或非透明的。
14.一种胶带的用途，利用所述胶带直接或间接获取被测试者的上皮细胞和/或细胞碎片。
15.根据权利要求1-14中任何一项方法获得的DNA的用途，用于个体鉴定或遗传特征分析或遗传病的筛选、鉴定和确定。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 01134233 CN1257179C (zh) | 2001-10-26 | 2001-10-26 | 一种利用胶带获取人体dna的方法 |
| HK03107311A HK1054946A1 (en) | 2001-10-26 | 2003-10-13 | A non-invasive method of isolation of human dna |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 01134233 CN1257179C (zh) | 2001-10-26 | 2001-10-26 | 一种利用胶带获取人体dna的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1414007A true CN1414007A (zh) | 2003-04-30 |
| CN1257179C CN1257179C (zh) | 2006-05-24 |
Family
ID=4672348
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 01134233 Expired - Fee Related CN1257179C (zh) | 2001-10-26 | 2001-10-26 | 一种利用胶带获取人体dna的方法 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN1257179C (zh) |
| HK (1) | HK1054946A1 (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN100365013C (zh) * | 2006-03-21 | 2008-01-30 | 西安交通大学 | 一种古代人类遗存物质dna的提取方法 |
| CN108498103A (zh) * | 2018-03-30 | 2018-09-07 | 李刚 | 现场指纹及其dna无污染双重提取方法 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8898036B2 (en) | 2007-08-06 | 2014-11-25 | Rosemount Inc. | Process variable transmitter with acceleration sensor |
-
2001
- 2001-10-26 CN CN 01134233 patent/CN1257179C/zh not_active Expired - Fee Related
-
2003
- 2003-10-13 HK HK03107311A patent/HK1054946A1/xx not_active IP Right Cessation
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN100365013C (zh) * | 2006-03-21 | 2008-01-30 | 西安交通大学 | 一种古代人类遗存物质dna的提取方法 |
| CN108498103A (zh) * | 2018-03-30 | 2018-09-07 | 李刚 | 现场指纹及其dna无污染双重提取方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| HK1054946A1 (en) | 2003-12-19 |
| CN1257179C (zh) | 2006-05-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Feuilhade de Chauvin | New diagnostic techniques | |
| Meissner et al. | Estimation of age at death based on quantitation of the 4977-bp deletion of human mitochondrial DNA in skeletal muscle | |
| CN102732520B (zh) | 一种活动性肺结核病特异的血清miRNAs的制备方法 | |
| Paludan et al. | Use of the polymerase chain reaction in quantification of interleukin 8 mRNA in minute epidermal samples | |
| Yao et al. | Mitochondrial DNA mutations in single human blood cells | |
| CN117802221A (zh) | 用于筛查高原头痛易感者的microRNA分子标志物 | |
| CN102732633B (zh) | 人idh基因突变的检测引物和试剂盒 | |
| CN112481373B (zh) | 一种用于孤独症辅助诊断的circRNA检测试剂盒 | |
| CN1414007A (zh) | 一种利用胶带获取人体dna的方法 | |
| US20140378334A1 (en) | Method for quantifying renal markers by assaying urine | |
| Bramanti et al. | Ancient DNA analysis of the delta F508 mutation | |
| Herzog et al. | Challenges and insights in the exploration of the low abundance human ocular surface microbiome | |
| CN117143983A (zh) | 用于评估慢性阻塞性肺疾病患病风险的分子标记及应用 | |
| CN114277124A (zh) | 一种circRNA OGDH作为诊断急性脑梗死及预判半暗带的生物标志物的应用 | |
| CN108424960B (zh) | 一种LncRNA作为深静脉血栓形成诊断标志物的应用 | |
| Anjum et al. | DNA in forensic odontology: An overview | |
| CN113025707A (zh) | 生物标志物在制备诊断湿热困脾型2型糖尿病的产品中的应用、试剂盒 | |
| CN116875721B (zh) | 隐球菌的cfDNA在诊断隐球菌感染中的应用 | |
| WO2021230380A1 (ja) | Ｒｎａ情報のデータ処理方法 | |
| CN117025758B (zh) | 环状rna在制备诊断孤独症的生物标志物中的应用 | |
| CN111445956B (zh) | 一种二代测序平台的基因组数据高效利用方法和装置 | |
| Karagianni et al. | DNA Methylation Studies in Saliva of Patients with Sjögren’s Syndrome | |
| Balayan et al. | Ideal Specimen for Identification in Forensic cases after Hematopoietic Stem Cell Transplantation (HSCT): a review | |
| CN109897897B (zh) | hsa-miR-15b-5p作为分子标志物的应用和试剂盒 | |
| Alsaleh et al. | The impact of chimerism on DNA-based human identification from skin surface cells of post-allogenic hematopoietic stem cell transplantation (HCST) patients |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20060524 Termination date: 20141026 |
|
| EXPY | Termination of patent right or utility model |