CN1381729A - 色带递减式免疫层析法半定量检测毒品/药物的方法及试纸 - Google Patents
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Abstract
一种色带递减式免疫层析法半定量检测毒品/药物的方法,该方法在于利用被检液中毒品/药物和包被在有色纳米颗粒(如胶体金)表面的毒品/药物与精确定量呈横带状点定于层析膜上的相应单克隆抗体发生竞争性结合,根据显示于层析膜上的色带数量,以确定被检液中毒品/药物的含量。利用上述方法制备的色带递减式吗啡半定量检测试纸,具有结构简单、检测精度较高、成本低的优点。本发明在毒品检测领域和药物监测方面有广泛的应用前景。
Description
本发明公开了一种色带递减式免疫层析法半定量检测毒品/药物的方法及试纸。
将免疫层析一步法用于毒品检测是二十世纪90年代初由美国学者实现的，这种方法具有样品不需预处理，简便快速，适宜现场检测等特点，一经问世，即得到广泛应用，至今在全球的毒品检测工作中发挥着重要的作用，产品也由最初只能检测吗啡，现已发展到能检测近10种毒品和药物。但该法只能定性，不能定量；且其质量控制系统为另一套抗原抗体，不能真实反映检测系统的反应情况。针对上述技术的不足，作者曾于1998年11月10日向中国专利局提交了《单克隆抗体免疫层析一步法半定量检测吗啡的方法及试纸》的发明专利申请(申请号98112724.X)，初审合格，并在第16卷，第28期发明专利公报上公布。该专利的特征是随着被检液中吗啡含量的增加，层析膜上显示的色带亦随之增多，即色带递增反应模式，从而实现半定量检测(定量能大致推算吸毒者在受检前最后一次吸毒的时间或吸毒量，有利于掌握案情或采取相应的治疗措施)，并使检测系统具有质量控制功能。同时，该项发明由于采用色带递增反应模式，因此，点定于层析膜上的吗啡单克隆抗体的量较大，导致制备成本偏高。
本发明的目的在于克服上述发明之不足，提供一种制备成本较低，特异性强，灵敏度高，结构简单，操作使用方便，检测系统具有质量控制的功能，能初步定量的色带递减反应模式免疫层析一步法半定量检测毒品/药物的方法及试纸。
本发明的主要目的是这样实现的：主要是改变反应模式，即由原发明的色带递增反应模式转变为色带递减反应模式。被检测液中毒品/药物和包被在有色纳米颗粒(如胶体金)表面的毒品/药物与精确定量呈横带状点定于层析膜上的相应单克隆抗体发生竞争性结合，根据显示于层析膜上的色带数量，以确定被检液中毒品/药物的含量，色带数量越少，被检液中毒品/药物含量越高。
本发明的另一目的是这样实现的：色带递减式免疫层析一步法半定量吗啡检测试纸由带状点定吗啡单克隆抗体层析膜，吗啡包被胶体金，底板、吸水纸组成，层析膜粘于底板上，胶体金处于底板一端并与层析膜接触，层析膜两端连接吸水纸。
本发明的实施例简述如下：
一、层析膜点样
将一定浓度的吗啡单克隆抗体精确定量，以一定间距呈横带状点定于层析膜上，供装配试纸用。
二、吗啡包被胶体金的制备
取1％氯金酸1ml用双蒸水稀释至100ml，在还原剂的作用下制成胶体金，用吗啡合成抗原对胶体金进行包被，纯化后定量滴注于玻璃纤维上冷冻干燥备用。
三、将第一步所得层析膜粘于一底板上，将第二步所得胶体金设置于底板一端并与层析膜接触，层析膜两端连接吸水纸。
四、试纸的应用
1、对阴性标本的检测：将3滴被检液(尿液)滴入加样孔，平放5分钟观察结果，有4条红色带为阴性，且不管色带深浅如何。
2、阳性标本的检测：将3滴被检液(尿液)滴入加样孔，平放5分钟观察结果。与说明书图样比较，第一带不显红色，后3条带呈红色为阳性(≥0.3微克/ml)；第一、二带不显红色，后2条带显红色为1.0微克/ml；第一、二、三带不显红色，仅第四带显红色为≥100微克/毫升。
3、交叉反应：试纸与海洛因和可待因有交叉反应，强度与吗啡相似；与美沙酮、纳洛酮、丁丙诺啡、度冷丁、二氢埃托啡、芬太尼、地芬诺酯、可卡因、苯丙胺、甲基苯丙胺、东莨菪碱、麻黄碱、氟哌啶醇、氯丙嗪、强痛定、异丙嗪、苯巴比妥纳、安定、洛非西安、安眠酮、去痛片、可乐定、安坦、咖啡因、咳必清、阿普唑仑、氯氮平均无交叉反应。
4、主要技术指标
1、特异性：仅对吗啡类物质发生反应；
2、灵敏度：0.3微克吗啡/毫升标本；
3、半定量范围：≥0.3微克～＞100微克/毫升；
4、快速：5分钟观察结果；
5、简便：经过简单培训即可操作；
6、使用时不受环境因素影响。
五、试纸反应原理
冻干胶体金上包被有吗啡抗原，层析膜上固定有4条带状吗啡单克隆抗体，被检液滴入后，溶解吗啡包被胶体金并推动其在层析膜上泳动，当被检液中无吗啡时，包被在胶体金上的吗啡首先与第一条带上的吗啡单克隆抗体结合而显红色带，由于吗啡单克隆抗体是一定量的，多余的吗啡包被胶体金继续向前泳动，与第二条吗啡单克隆抗体结合显红色带，同理，直到第四条带显红色，故阴性显4条红色带。当被检液中有吗啡存在时，被检液中的吗啡就会和包被在胶体金上的吗啡竞争性地与吗啡单抗结合，由于被检液中游离的吗啡分子小，空间位阻小，与单抗结合的速度较包被在胶体金上的吗啡为快，从而使包被在胶体金上的吗啡与吗啡单抗的结合受阻而不显色带。被检液中吗啡含量越高，显示色带越少，因而能对吗啡进行半定量检测。本发明由于采用色带递减反应模式，可有效减少点定于层析膜上的吗啡单克隆抗体的量，从而，有效降低本发明——半定量吗啡检测试纸的生产成本，降低被检者的经济负担。
综上所述，本发明——色带递减式免疫层析法半定量检测毒品/药物的方法具有科学性、新颖性，应用该方法制备的吗啡检测试纸具有很强的实用性。本发明在毒品检测领域和药物监测方面有广泛的应用前景。
Claims (2)
1、一种色带递减式免疫层析法半定量检测毒品/药物的方法，其特征在于被检液中毒品/药物和包被在有色纳米颗粒(如胶体金)表面的毒品/药物与精确定量呈横带状点定于层析膜上的相应单克隆抗体发生竞争性结合，根据显示于层析膜上的色带数量，以确定被检液中毒品/药物的含量，色带数量越少，被检液中毒品/药物含量越高。
2、一种色带递减式免疫层析法半定量检测吗啡的试纸，其特征在于：将精确点定数条带状吗啡单克隆抗体的层析膜粘于底板上，吗啡包被的胶体金设置于底板的一端并与层析膜接触，层析膜两端连接吸水纸。
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