CN1349094A - 残留有机磷、氨基甲酸酯农药速测方法及速测器 - Google Patents

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Abstract

本发明是一种残留有机磷、氨基甲酸酯农药速测方法及速测器,该方法通过被测水样和不含农药普通水样对底物(酯类化合物)水解,以酶作为催化剂,对比检测两种水解后的底物或水解产物以显色方法判断酶是否被农药抑制,而使其催化活性丧失或降低,以此测定农药残留量。速测器由塑料反应管、塑料取样管、隔离柱、封口胶组成,塑料反应管内装有酶与缓冲剂和内装显色剂的玻璃毛细管,塑料取样管内装有内装底物溶液的玻璃毛细管、棉花。

Description

残留有机磷、氨基甲酸酯农药速测方法及速测器
本发明属于残留农药速测技术领域，主要适用于蔬菜水果，农产品残留有机磷、氨基甲酸酯农药的测定。
蔬菜、水果以及其它农作物，多年来使用农药杀虫十分普遍，造成这些农产品的农药残留相当严重，故时有人畜中毒事故发生，因而迫切需要简便迅速检测农药残留的方法与工具。近年来，国内这方面的研究已经起步，市场上出现了有机磷农药速测灵、农药速测卡等产品。这两种对农药残留的检测方法虽在所在地进行了大力推广，但仍有一些明显的不足与缺陷：价格偏高，每次检测得需2～3元；检测时间较长，每次约15～20分钟；检测准确性较差，无标准对照；产品稳定性不好，尤其在高温潮湿情况下易失效；灵敏度偏低，对甲胺磷一般仅在3PPM以上。
本发明的目的就是提供一种成本低、检测准、速度快、操作简便的残留有机磷、氨基甲酸酯农药速测方法及速测器。
本发明的残留有机磷、氨基甲酸酯农药速测方法为酶抑制法，通过被测水样和不含农药普通水样对底物(酯类化合物)水解，以酶作为催化剂，对比检测两种水解后的底物或水解产物以显色方法判断酶是否被农药抑制，而使其催化活性丧失或降低，以此测定农药残留量。
本发明的原理是：有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂都是动物体内的胆碱酯酶(由蛋白质大分子组成的生物催化剂，催化神经传递介质胆碱酯的水解反应)的强烈抑制剂，它抑制胆碱酯酶，使神经传递介质胆碱酯不能水解而大量积累，从而造成人或动物中毒。利用上述杀虫剂的这一共性来检测其残留的方法，即酶抑制法。具体原理如下式：当上述反应的催化剂胆碱酯酶被杀虫剂抑制后，该反应不能进行。由于这种酶不仅能催化水解胆碱酯，而且也能催化水解很多酯类化合物(这些化合物称为底物)。因此，酶法的基本原理在于：当酶被上述两类杀虫剂抑制后，对底物的催化活性丧失或降低，通过检测底物或水解产物，即可检测有无上述农药残留及其含量。本发明采用乙酸-α-萘酚酯作底物，固兰B盐(3，3’-二甲氧基二苯基双氯化重氮盐)作显色剂，检测具体原理：当没有上述杀虫剂存在时，反应进行故溶液显紫红色；当有上述杀虫剂存在时，反应不能或仅部分进行，故溶液无色或很浅的紫红色，经与标准对照，即可进行残留量测定。
本发明采用的试剂与用量如下：酶采用市售之冷冻干燥的鸭血清酶，每管(次)用量30～40μg，底物乙酸-α-萘酯，试剂中常含微量α-萘酚，故使用前应进行重结晶，由于该底物难溶于水，故选用了一种既能溶解底物又对酶无显著抑制且与水完全互溶的1，4一二氧六环溶剂。底物浓度8mg/ml，每次用量0.02ml。显色剂固兰B盐，每次用量0.05mg。为对其用量进行控制，采用了一种固体稀释剂，该稀释剂对反应无任何影响，本身为惰性，不改变反应液PH值，不吸潮，不变色，这就是100～120目的石英砂。它与显色剂用量之比为400∶1。
酶催化水解底物，必须在适合的PH环境进行，一般PH在7～8之间，本发明所用底物及鸭酶之最佳PH为7.2～7.5控制PH之缓冲剂为磷酸盐体系，简化配制方法是：按NaH2PO4·2H2O∶Na2HPO4·12H2O＝1∶8，称取AR级试剂，研细混匀，再按50.1mg/ml加蒸馏水溶解即得。缓冲剂用量0.3ml，若用固体试剂则为15mg。
一种残留有机磷、氨基甲酸酯农药速测器，其特征在于它由塑料反应管、塑料取样管、隔离柱、封口胶组成，塑料反应管内装有酶与缓冲剂和内装显色剂的玻璃毛细管，塑料取样管内装有内装底物溶液的玻璃毛细管、棉花。
附图说明：
附图1为本发明一种残留有机磷、氨基甲酸酯农药速测器的结构示意图。
图中1表示缓冲剂，2表示塑料反应管，3表示内装显色剂的玻璃毛细管，4表示隔离柱，5表示塑料取样管，6表示内装底物溶液的玻璃毛细管，7表示棉花，8表示封口胶。
实施例一
取内装30～40μg之冷冻干燥鸭酶及15mg缓冲剂的试管两支，分别滴加含上述杀虫剂水样(样品管)或普通水(或蒸馏水，空白管)0.3ml。摇动试管，使内容物溶解，并计时4～5分钟。然后加乙酸-α-萘酯底物的1，4一二氧六环溶液0.02ml，摇匀，反应3分钟。再加固兰B盐显色剂混合物20mg。用力摇匀试管内容物半分钟，观察两管溶液颜色。若两管颜色一样，均显深紫红色，说明样品中不含上述杀虫剂；若样品管颜色浅或无色，说明样品中含有上述农药，颜色越浅，含量越高。
实施例二
取如图1所示的速测器两支，用小刀切掉尖嘴，分别用手指捏扁塑料反应管2，将塑料取样管5头部伸入含上述杀虫剂水样和普通水中，松开手指吸取水样。将水样用力甩至塑料反应管2，摇动使内装的酶及缓冲剂溶解并开始计时，抑制4～5分钟，然后用手指折断底物毛细管6，用力将底物溶液甩至塑料反应管2再计时，反应3分钟后，用手指折断显色剂毛细管3。用力摇动塑料反应管约半分钟，观察溶液颜色。若溶液均呈深紫红色，说明样品中无上述农药；若样品管颜色浅或无色，说明样品中含有上述农药，且颜色越浅含量越高。
本发明具有成本低、检测准、速度快、操作简便等优点。

Claims (4)

1、一种残留有机磷、氨基甲酸酯农药速测方法，其特征在于该方法为酶抑制法，通过用被测水样和不含农药普通水样对底物(酯类化合物)水解，以酶作为催化剂，对比检测两种水解后的底物或水解产物以显色方法判断酶是否被农药抑制，而使其催化活性丧失或降低，以此测定农药残留量。
2、根据权利要求1所述的残留有机磷、氨基甲酸酯农药速测方法，其特征在于所述酶为鸭酶，底物为乙酸-α-萘酯，底物溶剂为1，4一二氧六环，显色剂为固兰B盐(3，3’-二甲氧基二苯基双氯化重氮盐)，固兰B盐稀释剂为100～120两石英砂，缓冲剂为磷酸盐体系。
3、根据权利要求2所述的残留有机磷、氨基甲酸酯农药速测方法，其特征在于所述各试剂每次(管)用量或浓度为：鸭酶30～40μg，底物乙酸-α-萘酯8mg/ml之1，4一二氧六环溶液0.02ml，固兰B盐显色剂及100～120目石英砂混合物(1∶400)20mg，磷酸盐体系缓冲盐简易配制方法：研细混匀1∶8AR级NaH2PO4·2H2O和Na2HPO4·12H2O，按50.1mg/ml加蒸馏水而成，用量0.3ml/次(或15mg/次)。
4、一种残留有机磷、氨基甲酸酯农药速测器，其特征在于它由塑料反应管(2)、塑料取样管(5)、隔离柱(4)、封口胶(8)组成，塑料反应管(2)内装有酶与缓冲剂(1)和内装显色剂的玻璃毛细管(3)，塑料取样管内装有内装底物溶液的玻璃毛细管(6)、棉花(7)。
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