CN1335133A - 预防或治疗乳腺癌的组合物和方法 - Google Patents

Abstract

本发明是预防、最小化或逆转乳腺癌发生或生长的组合物。该组合物含有一种选择性雌激素受体调节剂和至少一种异黄酮的组合。本发明还涉及一种预防、最小化或逆转乳腺癌发生或生长的方法,其中将一种选择性雌激素受体调节剂与至少一种异黄酮联合施用于已患乳腺癌或易患乳腺癌的妇女。所述选择性雌激素受体调节剂和所述异黄酮如说明书中所定义。

Description

预防或治疗乳腺癌的组合物和方法

本发明涉及一种含有选择性雌激素受体调节剂和至少一种异黄酮的组合物以及一种治疗乳腺癌同时抑制选择性雌激素受体调节剂引发的促子宫作用的方法。

乳腺癌是导致西方妇女癌症死亡的一种主要原因，预计在不久的将来，乳腺癌也将成为导致东方，例如日本妇女癌症死亡的主要原因。美国癌症协会估计每9名妇女中将有1名妇女面临该疾病的生命威胁，对于约四分之一的该病患者来说，该病是致命性的。

他莫昔芬(附图1)，一种合成的非甾类选择性雌激素受体调节剂，已被有效地用于治疗乳腺癌达二十多年。在美国和英国，他莫昔芬是最广泛的处方抗肿瘤药之一，并且是患雌激素受体转移阳性疾病的绝经前后妇女的初始激素治疗药之一。另外，辅助治疗研究表明，在他莫昔芬治疗的妇女中对侧的初期乳腺癌明显减小，这表明他莫昔芬可用于乳腺癌的预防。

他莫昔芬具有组织特异性的雌激素和抗雌激素作用。雌激素，一种卵巢激素，它通过诱导雌激素受体介导乳腺和子宫内膜细胞的分化频率增高而增加乳腺癌和子宫内膜癌的危险性。细胞分化在人癌症生成的复杂过程中是必需的，因为分化本身增加了遗传错误-尤其是例如肿瘤抑制基因失活的遗传错误的危险性。

他莫昔芬在乳腺组织中具有抗雌激素作用。乳腺组织中他莫昔芬的抗雌激素作用是他莫昔芬抑制乳腺癌细胞增殖的一种主要机制。他莫昔芬与雌激素竞争结合胞浆雌激素受体(“ER”)，随后他莫昔芬/ER复合物抑制肿瘤细胞中内源性雌激素的许多活动。内源性雌激素与ER结合促进细胞活动，例如雌激素/ER介导的基因转录、DNA合成、癌细胞生长，和增加自分泌多肽，例如α-转化生长因子、表皮生长因子、类胰岛素生长因子-II和其它与细胞增殖有关的生长因子。通过他莫昔芬对雌激素与ER结合的竞争性抑制降低或阻止了该癌生长引发的细胞活动。作为乳腺组织中他莫昔芬的抗雌激素活性的结果，他莫昔芬预防了乳腺癌细胞的细胞循环从早期G₁阶段转变为中期G₁阶段，对乳腺癌细胞表现出了细胞抑制作用。据显示，他莫昔芬对结节阴性和结节阳性的妇女均表现出降低远程乳腺癌的转移以及这类癌症的局部区域复发。

但是，当内源性雌激素水平较低时，他莫昔芬对子宫组织具有雌激素作用，这种情况发生在绝经后妇女和卵巢切除的妇女中。在绝经后妇女和卵巢切除的妇女中，由于他莫昔芬的雌激素作用，子宫表皮细胞的厚度明显增加，导致子宫肥大。他莫昔芬还引起明显的子宫嗜曙红细胞增多。这些作用与子宫内膜癌有关，长期使用他莫昔芬与子宫内膜癌的危险性增高有关，该危险性比不使用他莫昔芬的妇女高出五倍。因此，长期使用他莫昔芬预防乳腺癌和治疗乳腺癌具有明显相关的危险性。

曾努力开发新的选择性雌激素受体调节剂(“SERMS”)，它们以类似于他莫昔芬在乳腺组织中的作用机制起作用，但避免了由他莫昔芬在子宫组织中的雌激素作用引起的危险。几个这些SERMS是三苯基亚乙基他莫昔芬类似物。如附图2所示，屈洛昔芬(droloxifene)是其中3′-羟基苯基取代了他莫昔芬的苯基部分的他莫昔芬类似物。屈洛昔芬列雌激素受体的结合性亲和力是他莫昔芬的十倍，据显示，它在乳腺组织中还具有抗雌激素活性并在晚期乳腺癌的治疗中有效，而且它在子宫组织中的雌激素作用低于他莫昔芬。＂屈洛昔芬，一种新的雌激素拮抗剂/激动剂，在卵巢切除的大鼠中预防骨损失＂，Ke等人，《内分泌科学》(Endocrinology)，136：2435-2441(1995)。

附图2所示的托瑞米芬(toremifene)是带有4-氯取代基的他莫昔芬类似物。托瑞米芬对于乳腺组织的药理学作用与他莫昔芬非常相似，被用作高效抗雌激素。在高剂量时，托瑞米芬还显示出溶细胞抗肿瘤作用，该作用与其抗雌激素性无关，但高剂量的他莫昔芬不产生这种作用。托瑞米芬和他莫昔芬在绝经后妇女中的抗雌激素作用，Homesley等人.，AM.J.Clin.Onc.，16(2)：117-122(1993)。

附图2所示的4-碘他莫昔芬(4-iodotamoxifen)是以4′-碘苯基取代基代替了他莫昔芬的苯基取代基的另一个他莫昔芬类似物。他莫昔芬4′-苯基位置的碘化减弱了雌激素活性，模仿了他莫昔芬代谢物4′-羟基他莫昔芬的高抗雌激素活性，同时通过阻断快速代谢的4′-羟基他莫昔芬代谢物的形成使该化合物在体内具有较长的作用时间。治疗乳腺癌的抗雌激素他莫昔芬的新类似物，1-吡咯烷基-4-碘他莫昔芬和4-碘他莫昔芬，Chander等人.，Cancer Research.51：5851-5858(November 1，1991)；艾多昔芬：对转移性乳腺癌患者的I期研究的报告，Coombes等人，Cancer Research，55：1070-1074(March 1，1995)。据显示，4-碘他莫昔芬在子宫组织中的雌激素激动活性比他莫昔芬要弱，因此，当长期给药时，基本上不可能引起子宫内膜癌。

附图2所示的艾多昔芬(idoxifene)，也称为1-吡咯烷基-4-碘他莫昔芬，是另一种他莫昔芬类似物，是4′-碘他莫昔芬类似物的代表。艾多昔芬与4′-碘他莫昔芬具有相同的通式结构，不同的是1-吡咯烷基代替了4′-碘他莫昔芬的N，N-二甲氨基部分。1-吡咯烷基对N，N-二甲氨基的取代通过抑制该化合物经由肝脏代谢为desmethyl代谢物同时抑制潜在毒性甲醛的释放而降低了可能的毒副作用。艾多昔芬与ER的亲和力比他莫昔芬高2.5-5倍，对MCF-7乳腺癌细胞生长的抑制效果比他莫昔芬高1.5倍。艾多昔芬与他莫昔芬和4′-碘他莫昔芬相比还具有较小的促子宫雌激素作用，仅在数十倍高的剂量下才产生与他莫昔芬相当的促子宫作用。治疗乳腺癌的抗雌激素他莫昔芬的新类似物，1-吡咯烷基-4-碘他莫昔芬和4-碘他莫昔芬，Chander等人.，Cancer Research，51：5851-5858(November 1，1991)；艾多昔芬：对转移性乳腺癌患者的I期研究的报告，Coombes等人，Cancer Research，55：1070-1074(March 1，1995)。

非他莫昔芬类似物的其它SERMS对预防或最小化乳腺癌的发生也显示出效果。雷洛昔芬(Raloxifene)(附图3)，一种苯并噻吩衍生物，对雌二醇与ER的结合表现出较强的抗雌激素抑制作用并明显抑制从人乳房组织得到的MCF-7细胞的雌激素依赖性增殖。不象他莫昔芬和其类似物，雷洛昔芬在子宫组织中表现出抗雌激素作用，因此几乎完全阻断了对雌激素及他莫昔芬的促子宫反应。选择性雌激素受体调节剂，Kauffman & Bryant，DN&P，8(9)531-539(November，1995)。

理想的是利用这些SERMS来开发新的组合物，它们可用于增强SERMS的预防或最小化乳腺癌发生的作用，同时减弱它们的促子宫活性(如果有的话)。

一方面，本发明是一种预防或最小化乳腺癌的发生或生长的组合物。该组合物含有一种选择性雌激素受体调节剂和至少一种异黄酮组合物，所述选择性雌激素受体调节剂选自至少一种雷洛昔芬、屈洛昔芬、托瑞米芬、4-碘他莫昔芬和艾多昔芬，所述异黄酮选自染料木素、黄豆苷原、鸡豆黄素A、芒柄花黄素或它们各自的天然存在的糖苷或糖苷结合物。

另一方面，本发明是一种预防或最小化人类乳腺癌发生或生长的方法。将选择性雌激素受体调节剂和一种异黄酮联合施用于人类以预防或最小化乳腺癌的发生和生长。所述选择性雌激素受体调节剂选自至少一种雷洛昔芬、屈洛昔芬、托瑞米芬、4-碘他莫昔芬和艾多昔芬。所述异黄酮选自至少一种染料木素、黄豆苷原、鸡豆黄素A、芒柄花黄素或它们各自的天然存在的糖苷或糖苷结合物。

附图1描绘了他莫昔芬的分子结构式。附图2描绘了选择性雌激素受体调节剂屈洛昔芬、托瑞米芬、4′-碘他莫昔芬和艾多昔芬的分子结构式。附图3描绘了选挥性雌激素受体调节剂雷洛昔芬的分子结构式。附图4描绘了染料木素、黄豆苷原、鸡豆黄素A和芒柄花黄素的分子结构式。附图5描绘了染料木素和黄豆苷原的天然存在的糖苷的分子结构式。

本文采用的术语“ER”是指“雌激素受体”。术语“乳腺癌”是指源于乳腺细胞的任何癌症，包括转移形式和局部形式的乳腺癌(结节阴性和结节阳性的)，以及ER阳性和ER阴性形式的乳腺癌。术语“促子宫作用”是指子宫表皮细胞的增殖，它通常是妇女服用选择性雌激素受体调节剂的副作用，据显示它与子宫内膜的发生癌直接有关。本文采用的“Mal”表示丙二酰并且“Ac”表示“乙酰基”。术语“最小化”或其相关术语包括完全或部分抑制特定的生物作用(从采用该术语的上下文可清楚地知道)。当“异黄酮”被定义为至少一种选自异黄酮组的异黄酮时，术语“异黄酮”可以指一种或多种异黄酮。“SERM”是指选择性雌激素受体调节剂和其生理可接受的盐(但不是他莫昔芬)，它是一种在一种或多种所需的靶组织(如乳腺组织和子宫组织)中产生雌激素拮抗剂作用的化合物，同时在其它非靶组织中产生雌激素激动剂作用或产生微小的激动剂作用。

本发明是基于下列发现完成的：联合使用选择的SERM和某些异黄酮来治疗或预防已患有或有患乳腺癌倾向的妇女的乳腺癌，并且异黄酮将增强SERM诱导的预防、最小化或逆转乳腺癌的发生或生长，以及预防或最小化与一些SERM相关的促子宫作用。在本发明组合物和方法中可用的SERM是屈洛昔芬、托瑞米芬、4′-碘他莫昔芬、艾多昔芬和雷洛昔芬。本发明组合物和方法可用的异黄酮是染料木素、黄豆苷原、黄豆黄素、鸡豆黄素A、芒柄花黄素、其天然产生的糖苷及其天然存在的糖苷结合物，参见附图4和5。原料

用于本发明组合物和方法中的选择性雌激素受体调节剂化合物可按照已知方法化学合成，它们包括各种化合物的盐形式。雷洛昔芬，6-羟基-2-(4-羟基苯基)-3-[4-(2-哌啶子基乙氧基)苯甲酰基]苯并[b]噻吩(附图3)和其生理可接受的盐可按照美国专利4418068和4133814中描述的组合方法制备，这两篇文献在此引作参考。屈洛昔芬，E-1-[4′-(2-二甲氨基乙氧基]苯基]-1-(3′-羟基苯基)-2-苯基-1-丁烯(附图2)和其生理可接受的盐可按照美国专利5047431中描述的方法制备，该文献在此引作参考。托瑞米芬，4-氯-1，2-二苯基-1-{4-[2-(N，N-二甲氨基)乙氧基]苯基}-1-丁烯(附图2)和其生理可接受的盐可按照美国专利4696949中描述的方法制备，该文献在此引作参考。4′-碘他莫昔芬，E-1-{4-[2-(二甲氨基)乙氧基]苯基}-1-(4-碘苯基)-2-苯基-1-丁烯(附图2)和其生理可接受的盐可按照下列文献描述的组合方法制备：由1-(对烷氧基苯基)-1，2-二苯基丁烷-1-醇脱水的立体选择性烯烃合成：合成他莫昔芬的应用，McCague，J.Chem.Soc.Perkin Trans.，1：1011-1015(1987)；和他莫昔芬的衍生物。抗雌激素性对4位取代基的依赖性，McCague等人，，J.Med.Chem.，32(12)：2527-2533(1989)，这些文献在此均引作参考。艾多昔芬，E-1-(4-碘苯基)-1-[4-(2-吡咯烷子基乙氧基)苯基]-2-苯基-1-丁烯(附图2)，可根据上述提供4′-碘他莫昔芬生产方法的参考文献描述的组合方法进行制备。

本发明的组合物和方法中使用的异黄酮是天然存在的物质，它们发现于植物，例如豆类、三叶草和野葛的根(葛根)中。这些异黄酮化合物的常见豆类来源包括大豆、鸡豆和各种其他种类的豆类和豌豆类。这些异黄酮化合物的三叶草来源包括红三叶草和地下三叶草。大豆是特别优选的异黄酮化合物(除大豆中不存在的鸡豆黄素A外)来源。

异黄酮化合物可从天然存在异黄酮的植物来源分离，或者可通过本领域已知的方法合成制得。例如黄豆苷原可按照Wong公开的方法(J.Sci.Food Agr.，Vol.13，p.304(1962))从红三叶草中分离或者可按照Ganguly和Sarre给出的方法(Chem.& Ind.(London)，p.201(1970))从霉菌Micromonospora halophytica中分离，这两篇文献在本文中均引作参考。黄豆苷原可通过下列已知方法合成制备：Baker等(J.Chem.Soc.，p.274(1933))，Wesley等(Ber.Vol.66，p.685(1933))，Mahal等(J.Chem.Soc，p.1769(1934))，Baker等(J.Chem.Soc.，p.1852(1953))，或Farkas(Ber.Vol.90，p.2940(1957))，这些文献在本文均引作参考。异黄酮苷黄豆苷可通过Farkas等的方法(Ber.Bol.92，p.819(1959))合成制备，该文献在本文引作参考。黄豆苷原异黄酮苷结合物6′-O-Mal黄豆苷和6′-O-Ac黄豆苷可通过黄豆苷分别与丙二酸酐和乙酸酐的常规皂化制得。

染料木素可通过下列文献方法合成制备：Baker等(J.Chem.Soc.，p.3115(1928))；Narasimhachari等(J.Sci.Ind.Res.，Vol.12，P.287(1953))；Yoder等(Proc.Iowa Acad.Sci.，Vol.61，p.271(1954))；和Zemplen等(Acta.Chim.Acad.Sci. Hung.，Vol.19，p.277(1959))，这些文献在本文均引作参考。异黄酮苷染料木苷可通过Zemplen等的方法(Ber.，Vol.76B，p.1110(1943))合成制备，该文献在本文引作参考。染料木素的异黄酮苷结合物、6′-O-Mal染料木苷、6′-O-Ac染料木苷可通过染料木苷分别与丙二酸酐和乙酸酐的常规皂化制得。

鸡豆黄素A可通过Baker等的方法(Nature 169：706(1952))合成制备，该文献在本文引作参考。鸡豆黄素A也可从红三叶草中通过Pope等的方法(Chem.& Ind.(London)p.1092(1953))分离，该文献在本文引作参考。芒柄花黄素可通过Wessely等(Ber.66：685(1933))和Kagel等(Tetrahedron Letters，p.593(1962))公开的方法合成制备，这两篇文献在本文引作参考。芒柄花黄素也可从大豆肉通过Walz的方法(Ann.489：118(1931))分离或者可从三叶草属中通过Bradbury等的方法(J.Chem.Soc.，p.3447(1951))分离，这两篇文献在本文均引作参考。

用于本发明组合物和方法中的异黄酮优选从其中天然存在异黄酮的植物原料中提取。分离异黄酮化合物的优选方法是用醇，优选甲醇或乙醇；或者水溶液，优选碱性水溶液提取植物原料，以从植物原料中提取出异黄酮。优选在提取异黄酮化合物前将植物原料粉碎，以最大限度地从植物原料中回收异黄酮化合物。可通过常规的分离手段，例如反相高效液相色谱(HPLC)将异黄酮化合物从提取物中分离出来。

在一个优选方案中，异黄酮化合物染料木素、染料木苷、6′-O-Mal染料木苷、6′-O-Ac染料木苷、黄豆苷原、黄豆苷、6′-O-Mal黄豆苷、6′-O-Ac黄豆苷、黄豆黄素、glycitin和6′-O-Mal glycitin可从大豆原料，优选市售的大豆原料中分离。可从中分离异黄酮化合物的大豆原料包括：大豆、去皮大豆、大豆粗粉、大豆面、大豆碎粒、大豆薄片(全脂和脱脂的)、大豆子叶、大豆蛋白浓缩物、大豆乳清、大豆乳清蛋白和大豆蛋白分离物。在一个方案中，用低分子量有机萃取剂，优选乙醇、乙酸乙酯、丙酮或乙醚，更优选乙醇或甲醇的水溶液从大豆、去皮大豆、大豆粗粉、大豆面、大豆碎粒、大豆薄片、大豆蛋白浓缩物、大豆乳清蛋白或大豆蛋白分离物，优选大豆粗粉、大豆面、大豆碎粒或大豆薄片中萃取异黄酮。最优选的萃取剂具有约为大豆蛋白等电点的pH(约pH4-pH5)，以最小化萃取剂萃取的大豆蛋白的量。

将含有异黄酮的萃取剂与不溶性大豆原料分离形成富含异黄酮的萃取物。如果需要，可通过除去溶剂浓缩萃取液回收富含异黄酮的物质，从而得到固态的富含异黄酮的物质。

在一个更优选的方案中，可进一步将异黄酮化合物与萃取物中的其他可溶性大豆物质分离纯化，方法是通过将萃取物与吸附萃取物中异黄酮的物质接触，用使异黄酮特异性地从吸附材料上洗脱下来的溶剂从吸附材料上洗脱被吸附了的异黄酮。

在一个优选的方案中，通过常规反相HPLC分离将异黄酮与萃取物中的杂质分离。从大豆原料中萃取异黄酮并将萃取物与不溶性大豆原料分离后，将萃取液过滤以除去可能堵塞HPLC柱的不溶性物质。用特定的吸附剂释放物质填充常规市售的HPLC柱制备HPLC柱，该吸附剂物质将以特异性方式可释放性地结合萃取物中的异黄酮和杂质。吸附剂物质可以是任何反相HPLC填料，但优选的填料通过负荷容量、分离效率和成本标准进行选择。一种优选的填充材料是购自Eka Nobel，Nobel Industries，Sweden的Kromasil C18 16μm 100埃微珠。

使过滤后的萃取液通过填充HPLC柱直至柱上的所有结合位点都被异黄酮完全饱和，这可通过从柱中流出液中的异黄酮出现进行检测。然后溶剂洗脱该HPLC柱进行分离。在一个优选的方案中，洗脱液是一种极性溶剂，例如乙醇、甲醇、乙酸乙酯或乙腈，优选是醇含量为约30％-约90％，最优选约50％的醇水溶液，最优选的醇是乙醇。

分开收集柱洗脱液中的异黄酮化合物和杂质。按照常规HPLC和分析化学手段区分洗脱的异黄酮馏分和其他洗脱馏分。在一个优选的方案中，分开收集含配基异黄酮的洗脱馏分，因为据信配基异黄酮是特别有效的酪氨酸激酶抑制剂和抗血管生成剂，它抑制乳腺癌的发生和继续。在配基异黄酮物质中，从柱上首先洗脱含黄豆苷原的馏分，然后是黄豆黄素馏分，再后是极性更强的染料木素。

可从柱下收集洗脱液中的异黄酮馏分，并通过蒸发除去挥发性溶剂(如，乙醇)。如果蒸发除去了所有的溶剂，可直接回收异黄酮化合物，或者可通过淬冷残留的溶剂(如，水)使异黄酮结晶，然后离心或过滤分离结晶异黄酮和残留溶剂。

在一个特别优选的方案中，大豆异黄酮苷和异黄酮苷结合物-6′-O-Mal染料木苷、6′-O-Ac染料木苷、6′-O-Mal黄豆苷、6′-O-Ac黄豆苷、6′-O-Mal glycitin、染料木苷、黄豆苷和glycitin-可如下转化为其相应的配基异黄酮形式-染料木素、黄豆苷原和黄豆黄素。异黄酮苷结合物和异黄酮苷向配基异黄酮的转化可在从中萃取异黄酮之前的底物中进行，或者可在与不溶性物质分离后的富含异黄酮的萃取物中进行。该配基异黄酮是本发明组合物和方法中的特别理想的，因为据信它们在抑制血管生成和酪氨酸激酶活性中具有特别的活性。

异黄酮苷结合物6″-O-Mal染料木苷、6″-O-Ac染料木苷、6″-O-Mal黄豆苷、6″-O-Ac黄豆苷和6″-O-Mal glycitin可如下转化为其相应的苷染料木苷、黄豆苷和glycitin：形成具有约pH6-约pH13，优选约pH9-约pH11的含异黄酮的底物的碱性水溶液，并在约2℃-约121℃，优选在约25℃-约75℃将该碱性水溶液处理足以发生转化的一段时间，优选约30分钟-约5小时，更优选约30分钟-约1.5小时。异黄酮苷染料木苷、黄豆苷和glycitin可如下转化为其相应的配基形式染料木素、黄豆苷原和黄豆黄素：将异黄酮苷与可裂解1，4-β苷键的酶，优选市售的β-糖苷酶、α-半乳糖苷酶或β-半乳糖苷酶、果胶酶、乳糖酶、葡糖淀粉酶在酶具有活性的pH，一般是在约pH3-约pH9下于约25℃-约75℃，更优选约45℃-约65℃下接触足以发生转化的一段时间，一般是约1小时-约24小时，优选约1小时-约3小时。

配基异黄酮可采用常规分离方法从植物底物中分离。例如，可用低分子量醇从底物中分离配基异黄酮。可通过常规重结晶方法或HPLC从萃取物中分离配基异黄酮。在一个特别优选的方案中，用于本发明方法的组合物中的从大豆底物中分离的异黄酮组分包含至少40％的染料木素、至少15％的黄豆苷原和至少1％的黄豆黄素。在另一个特别优选的本发明方案中，用于本发明方法的组合物中的从大豆底物中分离的异黄酮组分含有至少85％的染料木素、至少5％的黄豆苷原和至少0.5％的黄豆黄素。在另一个优选方案中，各种异黄酮是以纯净形式分离回收的。

用于本发明组合物中的数种异黄酮化合物有市售，购得后可配入本发明的组合物或者用于本发明的方法中。例如，染料木素、黄豆苷原和黄豆黄素有市售，它们可购自例如Indofine Chemical Company Inc.，P.O.Box 473，Somerville，New Jersey 08876，并且鸡豆黄素A可购自Aldrich Chemical Company，Inc.，940West Saint Paul Avenue，Milwaukee，Wisconsin 53233。方法

一方面，本发明是一种通过联合施用至少一种SERM和至少一种异黄酮来预防或最小化染料乳腺癌的发生或生长的方法，所述SERM选自雷洛昔芬、屈洛昔芬、托瑞米芬、4-碘他莫昔芬和艾多昔芬，并且所述异黄酮选自染料木素、黄豆苷原、鸡豆黄素A、芒柄花黄素和它们各自的天然存在的糖苷和糖苷结合物。SERM和异黄酮可预防性地联合施用用于预防易患乳腺癌的妇女发生为乳腺癌，或者SERM和异黄酮可联合施用通过预防、最小化或逆转癌症的生长和发生用于治疗乳腺癌。SERM可按照如上所述的本发明方法获得并使用，或者优选呈如下所述的本发明的组合物形式。异黄酮可按照如上所述的本发明方法获得并使用，或者优选呈如下所述的本发明的组合物形式。

SERM与异黄酮可在特定的时间周期内，周期性地，优选每天同时或顺序地联合施用。SERM和异黄酮最优选以下述的本发明组合物形式周期性，优选每日同时联合施用。或者，SERM和异黄酮可作为独立的组分顺序给药。本文的“顺序”是指在特定的时间周期内，例如每天内分别施用所需量的SERM和异黄酮，且并不限于立即连续性地施用SERM和异黄酮。

SERM以足以预防或治疗乳腺癌的发生或生长的量与异黄酮联合施用。无论是预防还是治疗乳腺癌，与异黄酮的联合施用的足以预防或治疗乳腺癌的发生或生长的SERM的量取决于使用的特定的SERM、联合施用的异黄酮的量和活性、施用SERM的患者的大小，如果用于治疗，还取决于癌症的程度。足以预防预先有患乳腺癌倾向的妇女发生为乳腺癌的SERM的量优选为至少每天0.5毫克，更优选为每天约0.5毫克-约100毫克，最优选为每天约5毫克-约50毫克。足以预防、最小化或逆转乳腺癌的发生或生长以治疗该癌症的SERM的量优选为每天至少0.5毫克，更优选为每天约0.5毫克-约500毫克，最优选为约40毫克-约400毫克。SERM可每天给药数次以获得足以预防或治疗乳腺癌的每日量的SERM，但优选分一次或两次施用每日所需量的SERM。

异黄酮以足以预防或治疗乳腺癌的发生或生长的量与SERM联合施用于人。无论是预防还是治疗乳腺癌，与SERM的联合施用的足以预防或治疗乳腺癌发生或生长的异黄酮的量取决于使用的特定的异黄酮、联合施用的SERM的量和活性、患者大小，如果用于治疗，还取决于癌症的程度。足以预防预先有患乳腺癌倾向的妇女发生为乳腺癌的异黄酮的量优选为至少每天1毫克，更优选为每天约10毫克-约200毫克。足以预防、最小化或逆转乳腺癌的发生或生长以治疗该癌症的异黄酮的量优选为每天至少1毫克，更优选为每天约1毫克-约1000毫克，最优选为约50毫克-约500毫克。

本发明的方法中使用的异黄酮通过数种机制预防、最小化或逆转乳腺癌的生长，这些机制与SERM在乳腺组织中的抗雌激素活性结合，增强了各化合物的相对抗乳腺癌活性。首先，异黄酮在乳腺组织中是抗雌激素性的，并通过与细胞的ER结合竞争性抑制雌激素诱导的癌性乳腺细胞的分裂，在该组织中异黄酮/ER复合物抑制癌细胞生长的机制大体与他莫昔芬和SERM相同(如，黄豆苷原阻止细胞周期的G1阶段中细胞的生长，黄豆黄素阻止细胞周期的G2阶段中细胞的生长)。第二，某些异黄酮，尤其是黄豆黄素和鸡豆黄素A，以及黄豆苷原和芒柄花黄素(稍弱)是酪氨酸激酶抑制剂，它们抑制酪氨酸激酶的酶活性。酪氨酸激酶活性对于癌细胞产生细胞分化和生长所需的蛋白是必需的。第三，异黄酮抑制血管生成，由此抑制癌细胞块形成支持癌细胞块所需的发生的血管网，限制细胞块的持续生长。第四，异黄酮通过干扰调节促性腺激素，如雌二醇释放的脑垂体和下丘脑腺体反馈机制降低内源性雌激素水平。当与有效预防或最小化乳腺癌生长的SERM联合施用时，上述联合机制的作用是进一步防止、最小化或逆转了乳腺癌的发生或生长。

在一个特别优选的本发明方法的实施方案中，异黄酮以足以预防或最小化SERM引发的促子宫作用的量与SERM联合施用。虽然本发明中使用的SERM产生的促子宫作用小于他莫昔芬，但在相对高剂量时，除雷洛昔芬外的各种SERM都引发促子宫作用。当雌激素或雌激素激动剂SERM的浓度相对较高时，本发明方法中使用的异黄酮在子宫组织中具有抗雌激素作用。在子宫雌激素激动剂SERM存在下，异黄酮在子宫组织中产生抗雌激素作用的一种机制是通过与子宫细胞ER结合并竞争性地抑制雌激素激动剂SERM与ER的结合。与子宫组织雌激素激动剂SERM不同，异黄酮与子宫细胞ER结合不产生雌激素反应，因此异黄酮预防、抑制或最小化由子宫内皮细胞ER/SERM复合物引起的促子宫作用。异黄酮优选以异黄酮∶SERM的重量∶重量比为约0.25∶1～100∶1，更优选约0.5∶1～20∶1的量与SERM联合施用以预防或最小化促子宫作用。

在一个特别优选的方法的实施方案中，当施用SERM预防或治疗乳腺癌时，异黄酮以足以预防或最小化促子宫作用的量与子宫组织雌激素激动剂SERM的联合施用还可有效预防或最小化发生为子宫内膜癌的危险性。如上所述，由于子宫组织中的雌激素样活性和它们的促子宫作用的结果，他莫昔芬和子宫组织雌激素激动剂SERM增加发生为子宫内膜癌的危险性。异黄酮与子宫组织雌激素激动剂SERM的联合施用通过预防或最小化SERM引发的促子宫作用预防或最小化了发生为子宫内膜癌的危险。组合物

一方面，本发明是一种用于预防或最小化乳腺癌发生或生长的组合物。该组合物包括联合的一种选择性雌激素受体调节剂和至少一种异黄酮，所述选择性雌激素受体调节剂选自雷洛昔芬、屈洛昔芬、托瑞米芬、4-碘他莫昔芬和艾多昔芬，所述异黄酮选自染料木素、黄豆苷原、鸡豆黄素A、芒柄花黄素和它们各自的天然存在的糖苷和糖苷结合物。形成本发明的组合物所需的SERM和异黄酮原料可如上所述获得。该组合物含有占生物活性成分重量的约1％-约99％的SERM和约1％-约99％的异黄酮。

当与异黄酮联合施用时，SERM以足以预防、最小化或逆转妇女乳腺癌发生或生长的量存在于组合物中。SERM在组合物中的存在量优选为至少0.5毫克，更优选为约0.5毫克-约500毫克，最优选为约5毫克-约100毫克。SERM最优选以其自身足以预防、最小化或逆转乳腺癌的发生或生长的量存在于组合物中。

异黄酮在该组合物中的存在量优选为至少1毫克，更优选为约1毫克-约100毫克，最优选为约10毫克-约200毫克。在一个优选的方案中，当将该组合物施用于妇女时，异黄酮以足以增强该组合物中的SERM诱导的预防或最小化乳腺癌的发生或生长的量存在于该组合物中。在一个更优选的方案中，异黄酮以其自身足以预防、最小化或逆转乳腺癌的发生或生长的量存在于组合物中。

在另一个优选的方案中，当将该组合物施用于妇女时，异黄酮以足以预防或最小化该组合物中的SERM引发的促子宫作用的量存在于组合物中。异黄酮应以异黄酮∶SERM的重量比为约0.25∶1～约100∶1，更优选为约0.5∶1～约50∶1和足以预防或最小化该组合物中的SERM引发的促子宫作用的量存在于组合物中。在一个最优选的方案中，当将该组合物施用于妇女时，异黄酮以足以增强该组合物中的SERM诱导的预防或最小化乳腺癌的发生或生长和预防或最小化该组合物中的SERM引发的促子宫作用的量存在于组合物中。

含有SERM和一种异黄酮的本发明组合物可通过常规混合方法进行制备。上述组合物优选包含赋形剂，最优选包含药用赋形剂。含有赋形剂并掺入了SERM和异黄酮的组合物可通过本领域已知的方法制备。例如，SERM和异黄酮可用通和常规载体、粘合剂、稀释剂和赋形剂配制成片剂、胶囊、粉末、混悬剂、非胃肠(包括静脉内、肌内和皮下)给药的溶液以及用于透皮的药贴上的溶液。

用于形成本发明药物组合物的惰性可药用载体包括淀粉、甘露醇、硫酸钙、磷酸二钙、硬脂酸镁、硅衍生物、和/或糖类(例如蔗糖、乳糖和葡萄糖)。粘合剂包括羧甲基纤维素和其他纤维素衍生物、明胶、天然和合成的胶类(包括藻酸盐，如藻酸钠)、聚乙二醇、蜡等。用于本发明的稀释剂包括适宜的油、盐水、糖溶液(例如右旋糖水溶液和葡萄糖水溶液)和甘醇类(如聚乙二醇或聚丙二醇)。其他赋形剂包括润滑剂，例如油酸钠、乙酸钠、硬脂酸钠、氯化钠、苯甲酸钠、滑石和硬脂酸镁等；崩解剂包括琼脂、碳酸钙、碳酸氢钠、淀粉、黄原胶等；吸附性载体是，例如膨润土和高岭土。药物组合物中也可加入着色剂和矫味剂。

下列非限定性制剂例说明了本发明的药物组合物。制剂例

下列制剂1-4说明了包括SERM和异黄酮的药物制剂。制剂例1

明胶胶囊

用下列成分制备硬明胶胶囊：SERM 0.5-100毫克/枚；异黄酮0.1-1000毫克/枚；淀粉，NF 0-600毫克/枚；可流动淀粉粉末0-600毫克/枚；聚硅氧烷流体350厘沲0-20毫克/枚。将各成分混合，过筛后，填充到胶囊中。制剂例2

片剂

用下列成分制备片剂：SERM 0.5-100毫克/片；异黄酮0.1-1000毫克/片；微晶纤维素20-300毫克/片；淀粉0-50毫克/片；硬脂酸镁或硬脂酸0-15毫克/片；二氧化硅，烟雾的，0-400毫克/片；二氧化硅，胶态的，0-1毫克/片；和乳糖0-100毫克/片。将各分混合并压制成片。制剂例3

混悬剂

用下列成分制备混悬剂：SERM 0.5-100毫克/5毫升；异黄酮0.1-1000毫克/5毫升；羧甲基纤维素钠50-700毫克/5毫升；苯甲酸钠0-10毫克/5毫升；纯水5毫升；按需的矫味剂和着色剂。制剂例4

非经胃肠溶液

如下制备非经胃肠组合物：将1.5％(重量)的活性成分(SERM和异黄酮的重量/重量比为10∶1～10∶1)在10％(体积)的丙二醇和水的溶液中搅拌。用氯化钠使其等渗并灭菌。

上面的描述旨在说明，而非限制本发明。其他方案均在权利要求书的范围内。

Claims (23)

1、一种预防、最小化或逆转乳腺癌发生或生长的组合物，含有一种选择性雌激素受体调节剂和至少一种异黄酮的组合，所述选择性雌激素受体调节剂选自雷洛昔芬、屈洛昔芬、托瑞米芬、4-碘他莫昔芬和艾多昔芬中的至少一种，所述异黄酮选自染料木素、黄豆苷原、鸡豆黄素A、芒柄花黄素和它们各自的天然存在的糖苷和糖苷结合物。

2、权利要求1的组合物，其中所述SERM以施用该化合物于所述人时足以预防、最小化或逆转乳腺癌的发生或生长的量存在。

3、权利要求1的组合物，其中所述组合物中存在约0.5毫克-约500毫克的SERM。

4、权利要求3的组合物，其中所述组合物中存在约5毫克-约100毫克的SERM。

5、权利要求1的组合物，其中所述的异黄酮以施用该组合物于人时足以增强所述SERM提供的预防或最小化乳腺癌发生或生长的量存在。

6、权利要求1的组合物，其中所述组合物中存在约1毫克-约1000毫克的所述异黄酮。

7、权利要求1的组合物，其中所述组合物中存在约10毫克-约200毫克的所述异黄酮。

8、权利要求1的组合物，其中所述组合物含有占生物活性成分重量约1％-约99％的SERM，并且所述组合物含有占生物活性成分重量约1％-约99％的异黄酮。

9、权利要求1的组合物，还含有赋形剂。

10、权利要求9的组合物，其中所述SERM、所述异黄酮和所述赋形剂结合为一种药物制剂。

11、一种预防、最小化或逆转人类乳腺癌发生或生长的方法，包括给人联合施用一种选择性雌激素受体调节剂和一种异黄酮，所述选择性雌激素受体调节剂选自雷洛昔芬、屈洛昔芬、托瑞米芬、4-碘他莫昔芬和艾多昔芬中的至少一种，所述异黄酮选自染料木素、黄豆苷原、鸡豆黄素A、芒柄花黄素和它们各自的天然存在的糖苷和糖苷结合物中的至少一种。

12、权利要求11的方法，其中所述SERM和所述异黄酮的联合施用是同时进行的。

13、权利要求11的方法，其中所述SERM和所述异黄酮的联合施用是顺序进行的。

14、权利要求11的方法，其中给所述人每天施用约0.5毫克-约500毫克的所述SERM。

15、权利要求14的方法，其中给所述人每天施用约5毫克-约100毫克的所述SERM。

16、权利要求11的方法，其中给所述人每天施用约1毫克-约1000毫克的所述异黄酮。

17、权利要求16的方法，其中给所述人每天施用约10毫克-约200毫克的所述异黄酮。

18、权利要求11的方法，其中所述SERM以足以预防、最小化或逆转乳腺癌发生或生长的量施用于所述人。

19、权利要求11的方法，其中所述异黄酮以足以增强所述SERM提供的预防、最小化或逆转乳腺癌发生或生长的量施用于所述人。

20、利要求11的方法，其中所述异黄酮以足以预防或最小化SERM引发的促子宫作用的量施用于所述人。

21、权利要求20的方法，其中所述异黄酮施用于所述人以预防或最小化子宫内膜癌的发生。

22、权利要求11的方法，其中所述SERM和所述异黄酮以一种药物制剂形式施用。

23、权利要求22的方法，其中所所述药物制剂是片剂、胶囊、粉末、悬浮剂或溶液。

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