CN1331744A - 编码油菜酰基转移酶的基因和其应用 - Google Patents

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M·德尔塞尼
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P·格尔切
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Abstract

本发明涉及一种编码油菜溶血磷脂酸酰基转移酶的核酸序列。所述序列特别可用于转化植物以调节植物产生的甘油三脂的脂肪酸含量。

Description

编码油菜酰基转移酶的基因和其应用
本发明涉及编码酰基转移酶之基因的鉴定和克隆及其用途。
在植物中，甘油脂(糖脂，磷脂和三酰基甘油酯)组成脂的主要部分。它们共同的前体是sn-1，2-二酰甘油-3-磷酸，或磷脂酸(PA)，由脂肪酸在甘油-3-磷酸(G3P)的sn-1和sn-2位酯化得到。SN-甘油-3-磷酸酰基转移酶(GPAT)(E.C.2.3.1.15)催化G3Psn-1位酰化形成sn-1-酰基甘油-3-磷酸，或溶血磷脂酸(LPA)。LPA随后作为1-酰基-sn-甘油-3-磷酸酰基转移酶或溶血磷脂酸酰基转移酶(LPAAT)(E.C.2.3.1.51)的底物，酰化甘油的sn-2位。在三酰基甘油酯(其构成大部分贮藏油脂)的合成中，第三种酶，sn-1，2-二酰甘油酰基转移酶或二酰甘油酰基转移酶(DAGAT)，参与催化sn-3位的酰化。
植物油脂现应用于非常广泛的领域中，从食品到化学工业，人们希望植物产生特别适于设想用途的油脂。基于此目的，已尝试特别修饰甘油脂的脂肪酸组成，尤其是三酰基甘油酯。
例如，对于油菜(Brassica napus)，有最低可能芥子酸含量的植物用于食用油，另一方面，希望产生工业用油的植物中具有高含量的芥子酸。
甘油脂的脂肪酸组成主要依赖于：第一，植物产生的脂肪酸的质和量的分布，其次，酰基转移酶对于这些脂肪酸的底物特异性。为控制该组成，已提出分别或共同作用于这两个因子，即通过介入：
--脂肪酸的生物合成水平，以促进或相反地抑制一种或多种特异脂肪酸的产生，可选择诱导新脂肪酸的合成。
--G3P的酰化水平，以按所需方式修饰其特异性。
对于油菜，当前最富含芥子酸的品种可产生芥子酸占总脂肪酸含量达50-60％的油。分析这些品种种子中的三酰基甘油酯，显示该酸几乎全部在sn-1和sn-3位，这种选择性分布归因于油菜LPAAT的底物特异性，该酶排斥长链脂肪酸(＞C20)，这限制了油菜种子三酰基甘油酯的芥子酸含量，理论最高点为总脂肪酸的66％。
为了避开这种限制，在一种高芥子酸含量的油菜品种的种子中表达了能够在sn-2位掺入芥子酸的Limnanthes alba LPAAT的基因。尽管这种转基因油菜在菜籽三酰基甘油酯中可有效地观察到sn-2位芥子酸的掺入，但这种掺入维持在低水平，另外，在这些三酰基甘油酯中掺入的芥子酸总量不比未转基因的对照植物多[Lassner等，植物生理学[Plant Physiol.109：1389-1394，(1995)]。
除可能芥子酸的产量有限外，这种结果可能是由于外源性Limnanthes的LPAAT特异性差，除芥子酸外，还掺入油酸，还存在油菜的外源性LPAAT活性和内源性LPAAT活性的竞争，这需要抑制以便提高芥子酸的掺入。
至今，关于油菜中负责LPAAT活性的酶只有少量的资料。实际上，LPAAT是膜结合酶，难以以活性形式纯化。
椰子LPAAT是例外[Knutzon等，植物生理学109：999-1006，(1995)]，已从胚乳膜中纯化得到，随后已通过cDNA文库的筛选分离得到基因，已确定的植物LPAAT已大部分通过分子遗传学技术得到定性。它们是玉米LPAAT[Brown等，植物分子生物学(Plant MolBiol)，26：211-223，(1994)]，和Limnanthes LPAATs[Brown等，植物分子生物学，29：267-278，(1995)；Hanke等，欧洲生化杂志(Eur.J.Biochem.232：806-810，(1995)]。
为了能使sn-2位酰化的控制得到改善，发明人已进行油菜中参与LPAAT活性之酶的鉴定工作。
他们已从Brassica napus成功分离到一DNA序列，其编码功能性的质体LPAAT，该LPAAT此文以后命名为BAT2(Brassica酰基转移酶2)。
包含编码BAT2序列的核酸序列示于序列表中SEQ ID NO：1下，推导的多肽序列示于SEQ ID NO：2下。
序列SEQ ID NO：1中存在可组成潜在翻译起始位点的2个ATG密码子；从序列SEQ ID NO：2的第16位甲硫氨酸残基起始的344个氨基酸的多肽对于LPAAT活性是足够的。
应用pSORT程序分析BAT2的氨基酸序列，提示有一包含于序列SEQID NO：2的95 N-末端氨基酸中的信号序列，该信号序列参与引导BAT2 LPPAT到质体膜中。
活性成熟蛋白的序列包括在279C-末端氨基酸中。
利用BLASTX2程序(Gi sh等，自然遗传学(Nat.Genet)31：266-272，(1994))比较BAT2序列和以前已知的LPAAT肽序列，当进行全序列比较时显示了非常小的同源性(最大20％一致性)。
在序列的特定区域，发现了较高的同源性。图1显示了BAT2的序列187-302和具有最大同源性的几个LPAAT序列的对齐比较。观察到的最显著值是与：
---酿酒酵母SLC1基因的产物(P33333)[Nagiac等，生化杂志(J.Biol.Chem.)，268：22145-22163，(1993)]：在对齐的204氨基酸中显示32％相同和51％的相当；
---Limnanthes种子的微粒体LPAAT(Q42870)[Hanke等，欧洲生化杂志(Eur.J.Biochem.232：806-810，(1995)；Lassner等，植物生理学，109：1389-1394，(1995)；Brown等，植物分子生物学(Plant Mol Biol)，29：267-278，(1995))：在对齐的182个氨基酸中显示30％相同和54％的相当；
---椰子胚乳LPAAT(Q42670)[Knutzon等，植物生理学109：999-1006，(1995)]：在229个对齐的氨基酸中显示31％相同和47％的相当；
---假拟的Synechocystis LPAAT(P74498)：在对齐的143个氨基酸中显示30％相同和55％的相当；
---大肠杆菌plsC蛋白(p26647)：在对齐的115个氨基酸中显示31％相同和50％的相当。
本发明的主题是一种核酸片段，其包含：
a)编码一种植物LPAAT的序列，其肽序列显示与序列SEQ IDNO：2至少20％、优选至少30％、有利的至少50％到95％相同；和/或
b)与上述a)的编码序列互补的序列。
根据本发明的一个优选实施方案，所述的编码序列编码序列SEQID NO：2的多肽。
本发明还包括20bp以上、优选30bp以上的片段，它是上述定义的编码序列的片段，或在严谨条件下能与所述序列特异性杂交。这特别包括编码多肽SEQ ID NO：2之任何序列或其互补序列的片段，但由编码下面肽序列(单字母密码)的寡核苷酸或与所述寡核苷酸互补的片段组成的片段除外：
FPEGTRS；
PFKKGA；
它们是以前已知序列的LPAAT共有的。
本发明的核酸片段特别可用作引物和/或探针，以从油菜或其它植物中检测和克隆编码质体LPAAT的序列，和从油菜或其它物种中、特别是十字花科植物中检测和克隆编码在质体以外的细胞区室、特别是在内质网中表达的LPAAT的序列。
利用32P标记的BAT2 cDNA作为杂交探针，通过在严谨条件下进行Southern转移和RFLP分析，显示在油菜基因组和A.thaliana基因组中有至少两个同源拷贝的BAT2基因，暗示该基因是包含4个成员的多基因家族的一部分。
本发明的主题还在于：
---在合适载体中插入至少一个本发明核酸片段得到的重组载体；有利的，它们是表达载体，其中本发明的核酸片段插入到在想要表达所述片段的宿主细胞中具有功能的调节序列(如启动子和/或终止子)的转录控制之下。
---用本发明的至少一个核酸片段转化的原核或真核的宿主细胞，和多细胞组织，特别是植物细胞和植物。
本发明还包括重组LPAAT，或重组LPAAT的片段，其由本发明核酸片段带有的编码所述LPAAT或片段的序列在宿主细胞中表达得到。本发明的重组LPAAT或其片段，例如可以用于产生抗-LPAAT抗体，后者在检测和克隆其它LPAAT中用于筛选cDNA表达文库。
本发明的核酸片段可以有利的以有义或反义方向用于产生转基因植物，特别是从油菜或其它产油植物产生，以调节转化植物中的LPAAT活性，和作用于该植物产生的油脂的脂肪酸组成，特别是三酰基甘油酯的脂肪酸组成。
本发明还包括用这种方法产生的转基因植物。
这些植物可以用植物转基因的传统技术产生，它们本身是已知的。根据希望的用途，可将本发明的核酸序列置于一诱导型启动子或组成型启动子、遍在启动子或组织特异性启动子的控制下。这些植物还可以含有其它转基因，优选是从参与油脂生物合成之基因得到的转基因。
可能特别产生：
---表达至少一种编码功能性LPAAT的本发明序列的转基因植物，所述序列代替或替换一个或多个内源性LPAAT的序列，或添加在这些内源性序列上；
---以反义方向表达至少一种本发明序列的转基因植物，以抑制同源内源性LPAAT的表达而提高其它内源性或外源性LPAAT的活性。
例如：
---为产生高芥子酸含量的转基因油菜植物，用编码优先在sn-2位掺入芥子酸之LPAAT的DNA序列，例如Limnanthes albaLPAAT[Lassner等，(1995)，上文提及的发表文献]，和反义方向的本发明核酸序列共转化油菜植物，以至少部分抑制内源性LPAAT的产生，其与外源性Limnanthes的LPAAT活性竞争；
---为增加种子中总三酰基甘油酯的含量，油菜植物可以用本发明编码质体LPAAT但缺失质体引导序列的DNA序列转化；
---为增加饱和脂肪酸含量，特别棕榈酸含量，油菜植物可以用本发明编码质体LPAAT但缺失其叶绿体引导序列的DNA序列和用编码ACP-硫酯酶的一个或多个基因共转化，后者优先利用棕榈酰-ACP作为底物。
本发明通过下面进一步的描述可以更清楚地理解，下文是用于说明编码Brassica napus BAT2 LPAAT基因之鉴定和克隆的非限制性实施例。
实施例1：油菜LPAAT的cDNA的分离和定性
为寻找编码LPAAT的基因，通过大肠杆菌菌株JC201 plsC基因突变的异源互补来筛选未成熟油菜胚cDNA文库[Coleman，生化杂志，265：17215-17221，(1990)]。该点突变赋予JC201突变体一种热敏感性表型，这是由于高温下plsC基因编码的LPAAT失活。这些突变体在30℃生长良好，37℃难以生长，42-44℃一点不生长。
对于筛选，利用“ExASSIST”试剂盒(Stratagene)，从未成熟油菜胚cDNA文库取2×106克隆并克隆进载体λZAPII(Stratagene)构建得到噬菌粒文库。
用这些噬菌粒通过电穿孔转化细菌，接着在加有氨苄青霉素和IPTG(异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷)的LB琼脂上培养。选择42℃生长的细菌。利用PCR分析42℃生长克隆的质粒DNA以确定插入片段的长度。经过3轮转化和选择，大约85％的克隆含有约1.2kb的插入片段。这些克隆中4个的插入片段末端测序是相同的。对这些克隆中的一个，命名为pBAT2，进行完全测序。
实施例2：BAT2的核苷酸序列和推导的肽序列。
pBAT2克隆的cDNA含有一1155bp的序列和其后的18残基的poly(A)尾。该序列有一单一开放读码框架，对应一351氨基酸的多肽，其代表一融合蛋白，含有pBAT2序列的344个氨基酸和从克隆载体中来的部分β-半乳糖苷酶序列。序列表中SEQ：ID NO：1下所附序列还含有部分基因组序列(序列SEQ：ID NO：1的1到79核苷酸)，位于pBAT2cDNA序列的上游。
序列SEQ ID NO：1有2个可组成潜在翻译起始位点的ATG密码子；如果使用第一个(序列SEQ ID NO：1的58位)，序列SEQ ID NO：1的翻译产物是一359个氨基酸的多肽，其理论分子量和pI分别为39.6kDa和约9.8；该多肽描述于所附序列表中SEQ：ID NO：2下。若翻译起始发生于第二个ATG密码子(序列SEQ ID NO：1的103位)，翻译产物是一344个氨基酸的多肽，理论分子量是37.9kDa。
利用pSORT程序分析BAT2氨基酸序列，提示有约80到95个残基的信号肽。该潜在的信号序列富含丝氨酸、丙氨酸、缬氨酸和碱性氨基酸，这是叶绿体膜引导序列的特征。
多肽序列的分析还显示有两个潜在的跨膜区，分别位于124到140位氨基酸和219到235位氨基酸之间。
各种LPAAT的保守序列(FPEGTRS和PEKKGA)分别位于序列SEQ IDNO：2的273-279和286-291位；对应于保守序列NHXXXXD(在所有迄今已知的膜结合酰基转移酶中保守)的序列位于序列SEQ ID NO：2的202-208位。
实施例3：pBAT2 cDNA插入片段所编码蛋白的酶活性
为证实pBAT2插入片段编码的蛋白具有有效的LPAAT活性，对该蛋白在LPA的sn-2位掺入油酸或棕榈酸的能力进行检测。
用pBAT2转化的大肠杆菌菌株JC201、作为对照的未转化的或用缺少BAT2 cDNA插入片段的载体(pBSK)转化的大肠杆菌菌株JC201，在30℃培养直到达到光密度0.5。
IPTG诱导后在30℃培养3小时，将细菌溶解并分离，在膜粗抽提物中在油酰-CoA(1-14C)或棕榈酰-CoA(1-14C)存在下，根据Cao等(植物生理学，9：1199-1206，(1990))的操作方法测量LPAAT的比活性。
结果显示在下表I中，给出了用形成的磷脂酸pmol/mg蛋白/小时表示的比活性。
                          表I
    培养物                      底物
    油酰-CoA(1-14C)     棕榈酰-CoA(1-14C)
    JC201      1.86      3.74
   JC201+pBSK      1.65      1.59
   JC201+pBAT2      5.8      11.06
pBAT2转化培养物的膜抽提物显示LPAAT活性高于未转化或用载体pBSK转化培养物的膜抽提物，说明LPAAT活性通过pBAT2插入片段的翻译产物得到了有效的修复。
实施例4：BAT2的细胞定位
BAT2序列分析给出的质体定位通过检测分离的豌豆叶绿体输入BAT2的能力得到证实。
基于此目的，pBAT2克隆的cDNA利用T3 RNA聚合酶体外转录；转录物在32S-标记的甲硫氨酸存在下在小麦胚芽无细胞系统中翻译。得到约40kDa的翻译产物。该产物与分离的豌豆叶绿体孵育。孵育后，根据Brock等[植物分子生物学23(4)，717，(1993)]描述的操作方法，用蛋白酶处理叶绿体并分开组分，电泳分析各种组分来寻找32S-标记的产物。
该分析的结果显示BAT2翻译产物输入进豌豆叶绿体并被裂解成32kDa的蛋白(它决大部分定位于膜组分中)和一8kDa的信号肽。
这些结果证实BAT2蛋白确实和信号肽一起合成，信号肽的功能是运输蛋白到叶绿体的膜。前体具有约40kDa的表观分子量，信号肽具有约8kDa的表观分子量。
实施例5：BAT2基因表达的定位
在B.napus和A.thaliana的各种器官中研究BAT2基因的表达。
利用对应于BAT2编码序列的探针通过Northern转移对茎、根、叶、花、发育中的种子(28DAP(授粉后天数))和干种子进行研究。
在检测的B.napus和A.thaliana每一种组织中，可观察到与探针杂交的B.napus约1.3kb的转录物，A.thaliana约1kb的转录物。杂交信号的强度在所有组织中相似，包括含非叶绿体质体的非光合作用组织。另外成熟中的杂交信号显示BAT2信使在种子的成熟过程中保持稳定。
                    序列表<110> INSTITUT NATIONAL DE LA RECHERCHE AGRONOMIQUE
  CENTRE NATIONAL DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE
  UNIVERSITE PIERRE ET MARIE CURIE
  UNIVERSITE VICTOR SEGALEN BORDEAUX II
  RENARD，Michel
  ROSCOE，Thomas James
  DELSENY，Michel
  BOURGIS，Fabienne
  BARRET，Pierre
  GUERCHE，Philippe<120>编码油菜酰基转移酶的基因和其应用<130>MJPcb539/79<140><141><150>FR9814470<151>1998-11-18<160>2<170>PatentIn Ver.2.1<210>1<211>1253<212>DNA<213>Brassica napus<220><221>CDS<222>(58)..(1134)<400>1taaaaacagc agagaaaaga gtcaagagat aaaagcaatg aagatggaga gataagc    57atg agc aaa tct cac gga cga tgt ttt agc tcg cga gat tcc gcc atg   105Met Ser Lys Ser His Gly Arg Cys Phe Ser Ser Arg Asp Ser Ala Met1               5                  10                  15gat gtc gct tct gct cgg ggg gtc tcc tca cat cct cca tat tat agc   153Asp Val Ala Ser Ala Arg Gly Val Ser Ser His Pro Pro Tyr Tyr Ser
         20                  25                  30aaa ccc att tgt tca tca cag tca tcg ttg att cgg att ccg atc agt   201Lys Pro Ile Cys Ser Ser Gln Ser Ser Leu Ile Arg Ile Pro Ile Ser
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        180                 185                 190tca gac act cct tgt gta tac gtt tcg aac cac caa agc ttt ctg gat   681Ser ASp Thr Pro Cys Val Tyr Val Ser Asn His Gln Ser Phe Leu Asp
    195                 200                 205ata tac aca ctt ctc agc ctt ggc caa agc tat aag ttc atc agc aag   729Ile Tyr Thr Leu Leu Ser Leu Gly Gln Ser Tyr Lys Phe Ile Ser Lys
210                 215                 220aca ggg ata ttc gtt att cct gtc atc ggt tgg gct atg tcc atg atg   777Thr Gly Ile Phe Val Ile Pro Val Ile Gly Trp Ala Met Ser Met Met225                 230                 235                 240ggg gtt gtt ccc ttg aag agg atg gac cca aga agc caa gtg gat tgc   825Gly Val Val Pro Leu Lys Arg Met Asp Pro Arg Ser Gln Val Asp Cys
            245                 250                 255tta aaa cgc tgc atg gaa cta gtg aag aag gga gct tcc gtc ttt ttc   873Leu Lys Arg Cys Met Glu Leu Val Lys Lys Gly Ala Ser Val Phe Phe
        260                 265                 270ttc cca gag gga acg agg agt aag gat ggt cgg tta ggt cct ttc aag   921Phe Pro Glu Gly Thr Arg Ser Lys Asp Gly Arg Leu Gly Pro Phe Lys
    275                 280                 285aaa ggg gct ttt acg ata gca gct aag aca gga gtt cca gtg gtg cca   969Lys Gly Ala Phe Thr Ile Ala Ala Lys Thr Gly Val Pro Val Val Pro
290                 295                 300ata acg ctg atg gga aca ggg aag atc atg ccg acg ggt agt gaa ggt   1017Ile Thr Leu Met Gly Thr Gly Lys Ile Met Pro Thr Gly Ser Glu Gly305                 310                 315                 320ata ctg aat cat ggg gat gtg aga gtg atc atc cac aag ccg ata tat   1065Ile Leu Asn His Gly Asp Val Arg Val Ile Ile His Lys Pro Ile Tyr
            325                 330                 335gga agc aaa gct gat gtt ctt tgc gaa gag gcg aga aac aag ata gct   1113Gly Ser Lys Ala Asp Val Leu Cys Glu Glu Ala Arg Asn Lys Ile Ala
        340                 345                 350gaa tct atg aat ctc ttg agt tgaaacgttt gttttttaag cagtgtctct      1164Glu Ser Met ASn Leu Leu Ser
    355atgaacaatg agaaggctaa accattttta catgtcagtt ttattgttta aaataaaatt 1224taggcttttc aaaaaaaaaa aaaaaaaad                                   1253<210> 2<211> 359<212> PRT<213> Brassica napus<400> 2Met Ser Lys Ser His Gly Arg Cys Phe Ser Ser Arg Asp Ser Ala Met1               5                  10                  15Asp Val Ala Ser Ala Arg Gly Val Ser Ser His Pro Pro Tyr Tyr Ser
         20                  25                  30Lys Pro Ile Cys Ser Ser Gln Ser Ser Leu Ile Arg Ile Pro Ile Ser
     35                  40                  45Lys Gly Cys Cys Phe Ala Arg Ser Ser Asn Leu Ile Thr Ser Leu His
 50                  55                  60Ala Ala Ser Arg Gly Val Thr Arg Arg Thr Ser Gly Val Gln Trp Cys65                  70                  75                  80Tyr Arg Ser Ile Arg Phe Asp Pro Phe Lys Val Ash Asp Lys Asn Ser
             85                  90                  95Arg Thr Val Thr Val Arg Ser Asp Leu Ser Gly Ala Ala Thr Pro Glu
        100                 105                 110Ser Thr Tyr Pro Glu Pro Glu Ile Lys Leu Ser Ser Arg Leu Arg Gly
    115                 120                 125Ile Cys Phe Cys Leu Val Ala Gly Ile Ser Ala Ile Val Leu Ile Val
130                 135                 140Leu Met Ile Ile Gly His Pro Phe Val Leu Leu Phe Asp Arg Tyr Arg145                 150                 155                 160Arg Lys Phe His His Phe Ile Ala Lys Leu Trp Ala Ser Ile Ser Ile
            165                 170                 175Tyr Pro Phe Tyr Lys Thr Asp Ile Gln Gly Leu Glu Asn Leu Pro Ser
        180                 185                 190Ser Asp Thr Pro Cys Val Tyr Val Ser Asn His Gln Ser Phe Leu Asp
    195                 200                 205Ile Tyr Thr Leu Leu Ser Leu Gly Gln Ser Tyr Lys Phe Ile Ser Lys
210                 215                 220Thr Gly Ile Phe Val Ile Pro Val Ile Gly Trp Ala Met Ser Met Met225                 230                 235                 240Gly Val Val Pro Leu Lys Arg Met Asp Pro Arg Ser Gln Val Asp Cys
            245                 250                 255Leu Lys Arg Cys Met Glu Leu Val Lys Lys Gly Ala Ser Val Phe Phe
        260                 265                 270Phe Pro Glu Gly Thr Arg Ser Lys Asp Gly Arg Leu Gly Pro Phe Lys
    275                 280                 285Lys Gly Ala Phe Thr Ile Ala Ala Lys Thr Gly Val Pro Val Val Pro
290                 295                 300Ile Thr Leu Met Gly Thr Gly Lys Ile Met Pro Thr Gly Ser Glu Gly305                 310                 315                 320Ile Leu Asn His Gly Asp Val Arg Val Ile Ile His Lys Pro Ile Tyr
            325                 330                 335Gly Ser Lys Ala Asp Val Leu Cys Glu Glu Ala Arg Asn Lys Ile Ala
        340                 345                 350Glu Ser Met Ash Leu Leu Ser
    355

Claims (12)

1.一种核酸片段，其包含：
a)编码一种植物LPAAT的序列，所述LPAAT的肽序列显示与序列SEQ ID NO：2至少20％的相同；和/或
b)与上述编码序列a)互补的序列。
2.如权利要求1要求的核酸片段，其特征在于所述编码序列编码序列SEQ ID NO：2的多肽。
3.一种20bp以上的核酸片段，其在严谨条件下能与权利要求1或2所定义的编码序列特异性杂交，但由编码下文肽序列之一的寡核苷酸或其互补序列组成的片段除外：
FPEGTRS；
PFKKGA。
4.含有如权利要求1到3任何一项所述核酸片段的重组载体。
5.用至少一个如权利要求1到3任何一项所述核酸片段转化的细胞。
6.如权利要求5要求的转化细胞，其特征在于它是植物细胞。
7.用至少一个如权利要求1到3任何一项所述核酸片段转化的转基因植物。
8.如权利要求1到3任何一项所述核酸片段用于在植物中调节LPAAT活性的用途。
9.如权利要求5要求的用途，其特征在于所述植物是油菜。
10.如权利要求8或9要求的用途，其特征在于所述核酸片段以反义方向使用。
11.如权利要求10要求的用途，其特征在于所述核酸片段用于表达功能性的LPAAT。
12.如权利要求10要求的用途，其特征在于所述的LPAAT缺失了质体引导序列。
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