CN1331533C - 心肌肥大性心脏病治疗用药物组合物 - Google Patents

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Abstract

提供基于作为心功能不全、缺血性心脏病和心律不齐等心脏病发病原因的心肌肥大的心脏病治疗用药物组合物。为达到此目的，提供以结合作为NP受体的GC-A、促进cGMP产生的物质为有效成分的心肌肥大性心脏病治疗用药物组合物。作为有效成分的具体例子，钠利尿肽例如有心房钠利尿肽、脑钠利尿肽。

Description

心肌肥大性心脏病治疗用药物组合物
技术范围
本发明涉及以作用于作为钠利尿肽(NP)受体的鸟苷酸环化酶A(GC-A)、促进环鸟苷酸(cGMP)产生的物质为有效成分的心肌肥大性心脏病治疗用药物组合物。
背景技术
当发生因高血压和心脏瓣膜疾病所致的心室负荷增大、或心肌梗塞、心肌炎和心肌疾病等引起的心肌细胞自身障碍时，心室为保持心输出量，主要发生心肌细胞肥大的形态改变，即所谓心肌肥大。这种心肌肥大在一定程度上是对于心肌细胞障碍和机械负荷的适应现象，但是持续过重负荷使心肌过度肥大时，收缩机能和扩张机能发生缺陷，心输出量降低，甚至导致慢性心功能不全，以至于容易陷入缺血状态发生致死性的心率不齐。心肌肥大的程度被作为决定心脏病预后的因素之一来考虑，根据以弗拉门哥斯塔丁(フラミンガムスタティ-)为代表的大规模普查，发现如果具有心肌肥大则心功能不全、冠心病和心肌梗塞等缺血性心脏病、心律不齐等的发病率上升2.5～3倍(山崎 力、矢崎义雄，心不全，p37-45，筱山重威编，医药杂志社，1997)。所以，抑制过度心肌肥大形成、或使心肌肥大消退的药物应能够有效防止含慢性心功能不全的心脏病的发病进程。
作为慢性心功能不全的治疗方法，以前以改善心脏收缩力、增大心输出量为目的主要应用强心药。然而，强心药只显示了急性的自觉症状改善、运动耐量改善的效果，在作为慢性心功能不全治疗最终目标的生命预后改善，即延长生命方面没有效果，甚至得到预后变差的结果(Packer et al.，N.Engl.J.Med.，Vol.325，p1468，1991)。
另一方面，心肌肥大的发生和发展涉及儿茶酚胺、血管紧张素II、醛固酮、エンドセリン、加压素等神经体液因子，阻断这些因子产生或信号传递系统的药物的开发、临床应用正在进行。但是，机体内心肌肥大的发生机制与这些因子的多个有关，只对单一因子有拮抗作用是不够的。例如，作为血管紧张素II生成酶的血管紧张素转化酶(ACE)的阻断剂能抑制动物模型中心肌肥大的发病进程(Brilla et al.，Circulation，Vol.83，p1771，1991)，临床上给予慢性心功能不全患者时，也可观察到心肌肥大消退、生命予后延长(The Save Investigation，N.Engl.J.Med.，Vol.327，p678，1992)，但还不能说其效果是很好的。
实际上，即使进行最先进的治疗，慢性心功能不全发病后5年内的死亡率现在仍达50％。最近有报道说エンドセリン拮抗剂(Ito et al.，Circulation，Vol.89，p2198，1994)和加压素拮抗剂(Tomura et al，Circulation，Vol.94(Supple.I-264)，1996)在动物模型中能抑制心肌肥大的形成，但人们更希望有基于新机制的抑制心肌肥大的心脏病治疗药物。
发明的公开
所以，本发明的目的在于提供可有效防止与慢性心功能不全等心脏病发病进展有关的心肌肥大的药物组合物，更详细地说，就是提供以结合作为钠利尿肽(NP)受体的鸟苷酸环化酶A(GC-A)、促进环鸟苷酸(cGMP)产生的物质为有效成分的心肌肥大性心脏病治疗用药物组合物。
附图的简单说明
图1表示在主动脉狭窄所致大鼠心肌肥大模型中，狭窄形成后给予ANP0.1μg/kg/分或5％葡萄糖1周时的Sham组、对照组和ANP给予组的尿排泄量(A)、和尿中钠排泄量(B)的经时变化。△表示Sham组(n＝19)，▲表示对照组(n＝20)，●表示ANP组(n＝12)。此外各值表示为平均值±标准差。
图2表示在腹部大动静脉分流所致大鼠心功能不全模型中，手术2周后给予ANP0.1μg/kg/分或5％葡萄糖2周时的Sham组、对照组和ANP给予组的右心房重量/体重比(A)、左心房重量/体重比(B)、右心室重量/体重比(C)、左心室重量/体重比(D)。各值表示为平均值±标准差。此外，*和**分别表示与Sham组之间具有p＜0.05、0.01的明显差别，#和##分别表示与对照组之间具有p＜0.05、0.01的明显差别。明显差别以ANOVA的方差分析法进行判定。
图3表示在与图2的相同条件下，实验结束时Sham组、对照组和ANP给予组的肺重量/体重比(A)、红细胞压积值(B)。各值表示为6例的平均值±标准差。*和**分别表示与Sham组之间具有p＜0.05、0.01的明显差别，#和##分别表示与对照组之间具有p＜0.05、0.01的明显差别。明显差别以ANOVA的方差分析法进行判定。
发明实施的形式
本发明涉及以作用于作为钠利尿肽(NP)受体的鸟苷酸环化酶A(GC-A)、促进环鸟苷酸(cGMP)产生的物质为有效成分的心肌肥大性心脏病治疗用药物组合物。作为心肌肥大性心脏病的具体例子，有心功能不全(例如慢性心功能不全)、缺血性心脏病(例如心肌梗塞、冠心病)和心律不齐等。
作为本发明药物组合物有效成分使用的物质，是具有通过作为NP受体的GC-A介导促进cGMP产生的特性的物质，没有什么特殊的限定。为了得到具有该特性的物质，可以将候选物质加入发现有GC-A的细胞或组织(例如血管内皮细胞、血管平滑肌细胞、肾上腺皮质球状层细胞和强制具有GC-A的细胞、或主动脉、肺动脉、肾小球、肾上腺皮质等)中，进行孵育后，在cGMP分解酶磷酸二酯酶的阻断剂存在下，把(1)测定细胞内cGMP浓度发现可使该活性上升的物质、或(2)测定具有GC-A的细胞或组织的膜部分的鸟苷酸环化酶活性发现能使该活性上升的物质认为是具此活性的物质。还有，上述测定方法可以用已知的方法，例如可以用Minamitake，Y.et al，Biochem，Biophys.Res.Commun.，172，971-978(1990)，Furuya，M.，etal.Biochem.Biophys.Res.Commun.，170，201-208(1990)，Furuya，M.，et al.Biochem.Biophys.Res.Commun.，177，927-931(1991)、日高寿范等，日本药理杂志，101，309-325(1993)等记载的方法。作为具有上述特性的物质，优选钠利尿肽(NP)，更优选心房钠利尿肽(ANP)和脑钠利尿肽(BNP)等。
作为ANP，可以用28个氨基酸构成的人α-hANP(Kangawa etal.，Biochem.Biophys.Res.Commun.，Vol.11，p131，1984)(序列号：1)和α-rANP(Kangawa et al.，Biochem.Biophys.Res.Commun.，Vol.121，p585，1984)(序列号：2)，但作为本发明中有效成分的肽，可以是具ANP环状结构(形成基于半胱氨酸的二硫键)和连接着环状结构的具有C末端的肽。作为该肽例如有具α-hANP的7-28位氨基酸残基的肽(序列号：3)。作为ANP特别优选人的α-hANP。
此外，作为BNP，可以使用例如由32个氨基酸构成的人BNP(Sudoh et al.，Biochem.Biophys.Res.Commun.，Vol.159，p1420，1989)(序列号：4)。
基于上述物质(例如α-hANP)的氨基酸序列，研究者可以根据适当的已知方法，对该序列的氨基酸残基进行缺失、置换、添加、插入等修饰，这些肽中只要是能作用于ANP受体GC-A、促进cGMP产生的肽都可以使用。
此外，该肽可以用纯粹天然分离精制的、化学合成法或转基因法制造的任一种。作为这些肽，除了上述的以外，还有蛙ANP(序列号：5)、猪ANP(序列号：6)、大鼠ANP(序列号：7)、鸡ANP(序列号：8)等。
还有，本发明药物组合物的有效成分物质可以以无机酸，例如盐酸、硫酸、磷酸，或有机酸，例如甲酸、乙酸、丙酸、琥珀酸、柠檬酸等的酸加成盐的形式应用。也可以是钠、钾、锂、钙等金属盐和有机碱形成的盐的形式。此外，本发明的药物组合物可以是其有效成分物质的游离形式，也可是医药上允许的盐。
本发明的物质或其药理学上允许的盐优选和周知的药理学上允许的载体、赋形剂、稀释剂等进行混合，按药物的一般给药方法，即经口给药方法、或者静脉内给予、肌内给予或皮下给予等非经口给药方法进行给药。
有效成分为肽时，因为经口给药会在消化道内分解，一般的给药方法无效，可以用在消化道内不易分解的制剂，例如用将作为活性成分的肽包裹在脂质体中的微囊剂进行经口给药。此外，也可用从直肠、鼻内、舌下等消化道以外的粘膜吸收的给药方法。这种情况下可以以栓剂、鼻喷雾剂、舌下含片等形式给药。
本发明药物组合物的给药量因疾病种类、患者年龄、体重、症状程度和给药途径等的不同而不同，但一般来说可在0.1μg/kg～100mg/kg的范围内给予，优选在0.5μg/kg～5mg/kg的范围内给予。
ANP是心脏分泌的、对水电解质代谢和血压的调节有重要作用的肽激素。ANP的受体具有膜结合型鸟苷酸环化酶的结构，被称为GC-A或NPR-A。即ANP与GC-A结合，使细胞内的cGMP上升，从而发挥利尿、血管扩张等生理作用。
已知在人和动物模型中，重度心肌肥大和心功能不全伴有血中ANP浓度上升。此外，ANP在正常心脏中由心房合成，而在心肌肥大时心室产生的ANP明显增加。这种病情发展中所伴随的ANP产生增加可认为是机体为保护自身而对心功能不全产生的一种代偿性机制。事实上，对心功能不全患者短时间(1～24小时)给予ANP可产生血管扩张作用和利尿作用，使心脏的前后负荷降低、血流动力学改善。
但是，目前还没有阐明ANP对心肌肥大到底有什么作用。一方面，Cao等报道ANP在体外能阻断培养心脏成纤维细胞的DNA合成(Caoet al，Hypertension，Vol.25，p227，1995)，但至于ANP对占心室最大容量(约70％)、在心肌肥大中起主要作用的心肌细胞的作用还没有进行研究。
更进一步，有报道表明在容量负荷诱发的心肌肥大模型中，与机体内ANP的代谢分解有关的中性内肽酶(NEP，EC 3.4.24.11)的阻断剂显示出利尿作用和轻度的心肌肥大抑制作用，但此时血中ANP并没有明显的上升，此外，因为除了ANP外NEP还与舒缓激肽等其它肽激素的代谢有关，所以不能明确利尿作用和心肌肥大抑制作用是否是基于ANP分解的抑制，即是否反映了ANP的作用(Willenbrock et al.，Hypertension，Vol.27，p1259，1996)。
如上所述，现在不能判断给予ANP是否能抑制心肌肥大的发病或使心肌肥大消退。
因此，本发明者们用压力负荷所致心肌肥大模型，以下述方法研究ANP持续给予对心肌肥大发病的预防效果和消退效果。
此外，心肌肥大与高血压所致的压力负荷增加、瓣膜疾病所致的容量负荷增加等种种因素有关。所以为了明确ANP对心肌肥大的抑制效果，除了上述高血压性的压力负荷型心肌肥大模型外，还以下述方法作成为容量负荷型心肌肥大模型的大鼠腹部动静脉分流模型，研究ANP对心肌肥大的抑制效果。还有，本模型的慢性心功能不全的主要症状之一是肺充血，因而还就ANP对肺充血的减轻效果进行研究。
A.用压力负荷型心肌肥大模型的心肌肥大发生预防效果和消退效果的实验方法
1.制造压力负荷所致大鼠心肌肥大模型的方法
实验动物用Sprague-Dawley系的9周龄雄性大鼠。将大鼠用戊巴比妥钠(40mg/kg)腹腔给药麻醉后，以腹卧位固定。开腹后露出腹部大动脉，剥离左右肾动脉间的部分。用21G注射针插入大动脉，在左右肾动脉间将其和大动脉一起用线结扎，然后拔出注射针，形成大动脉狭窄。在本模型中，这样的腹部大动脉狭窄使收缩压上升，心脏的后负荷增加，左心室产生肥大。假手术〔Sham-operation(Sham)〕组只进行腹部大动脉的剥离。
2.ANP的给药方法
在腹腔内给予戊巴比妥钠(40mg/kg)使其麻醉，将大鼠颈部切开，往右颈静脉中插入硅导管，在背部固定后，将导管连接上微量注入泵。人型ANP(α-hANP)用5％葡萄糖溶解后，以0.1μg/kg/分的速度静脉内持续给予。对照组和Sham组以2.5μl/分的速度静脉内持续给予5％葡萄糖。
3.评价方法
实验结束时，将大鼠用戊巴比妥钠(40mg/kg)腹腔给药麻醉后，从左颈动脉插入聚乙烯导管，通过压力换能器介导测定血压和心率。在这之后，为了测定血浆中α-hANP和rat ANP的浓度以及ANP的细胞内信号传递的第二信使cGMP的浓度，用含1/10容量1％(w/v)EDTA·2Na和5000KIU/ml抑肽酶的注射器从颈动脉采集血液2ml。血液直接在4℃下离心分离，所得血浆在-80℃下保存。血浆中α-hANP、rat ANP和cGMP分别用抗α-hANP兔血清、抗rat ANP兔血清和抗琥珀酰化cGMP单克隆抗体以放射免疫法进行测定。还有，采血后用过量的戊巴比妥钠静脉注射处死大鼠，测定体重后，摘出心脏，分离左心室和右心室，分别测定重量。将左心室重量对体重的比率作为心肌肥大的指标。
B.用容量负荷型心肌肥大模型的心肌肥大抑制效果和肺充血减轻效果的实验方法
1.制造容量负荷所致大鼠心肌肥大模型的方法
实验动物用Sprague-Dawley系的9周龄雄性大鼠。将大鼠用戊巴比妥钠(40mg/kg)腹腔给药麻醉后，以腹卧位固定。开腹后，露出腹部大动静脉，在大动脉的肾动脉分支处和大腿动脉分支处分别用血管夹停止血流。在止血部位往大动脉中插入18G注射针，向大静脉内贯通，作成动静脉分流。拔出注射针，动脉部的伤口用手术用粘合剂塞住，取下血管夹。确认在短路部位静脉内流入动脉血后，闭合腹部。在本模型中，象这样腹部大动静脉短路的形成会使静脉压上升，心脏的前负荷增大，按右心房、右心室、左心房、左心室的顺序负荷逐渐增大，产生心肌肥大。更进一步，因静脉系统的顺应性降低使血液潴留，肺部发生充血。假手术〔Sham-operation(Sham)〕组只进行腹部大动静脉的剥离。
2.ANP的给药方法
以和压力负荷型肥大模型的场合相同方法给予。
3.评价方法
实验结束时，将大鼠用戊巴比妥钠(40mg/kg)腹腔给药麻醉后，从左颈动脉和左颈静脉插入聚乙烯导管，分别测定血压、心率和右心房压。在这之后，为了测定血浆中α-hANP和rat ANP的浓度，用含1/10容量1％(w/v)EDTA·2Na和5000KIU/ml抑肽酶的注射器从颈动脉采集血液2ml。血液直接在4℃下离心分离，所得血浆在-80℃下保存。血浆中α-hANP和rat ANP的浓度分别用抗α-hANP兔血清和抗rat ANP兔血清以放射免疫法进行测定。此外，采集动脉血入血沉管，离心分离后测定血沉值。还有，采血后用过量的戊巴比妥钠静脉注射处死大鼠，测定体重后，摘出心脏，分离右心房、左心房、右心室、左心室和肺，分别测定重量。将各部分心重量和肺重量对体重的比率作为心肌肥大和肺充血的指标。
实施例
下面就实施例对本发明进行更具体的说明。
实施例1.ANP对心肌肥大发病预防效果的研究
本发明者们首先就ANP对心肌肥大发病的预防效果进行研究。大鼠进行腹部大动脉狭窄手术或假手术后从颈静脉插入硅导管，以α-hANP0.1μg/kg/分、或5％葡萄糖2.5μl/分的速度1周内静脉内持续给药。1周后在麻醉下测定大鼠的血流动力学状态，采血后处死，测定心脏重量。结果如表1所示。
表1：ANP1周持续给药对腹部大动脉狭窄大鼠体重、心脏重量、血压和心率的影响
组     动物数   体重(g)   收缩压(mmHg)   心率(次/分)   左心室重量(mg)   左心室重量/体重(mg/g)   右心室重量(mg)   右心室重量/体重(mg/g)
Sham     19   282±2   146±3   450±7   565±10   2.01±0.03   154±3   0.54±0.01
对照     20   269±4   188±5**   470±10   628±12**   2.34±0.07**   149±4   0.56±0.02
ANP     12   283±3   188±8**   465±7   592±10   2.09±0.04#   147±4   0.52±0.02
Sham组进行假手术，对照组和ANP组进行腹部大动脉狭窄手术，对Sham组和对照组给以5％葡萄糖2.5μl/分、对ANP组给以α-hANP0.1μg/kg/分，在手术后1周内持续静脉内给药。
各值表示为平均值±标准差。
*，**：p＜0.05或0.01，以ANOVA的方差分析法判定与Sham组之间的显著差异。
#：p＜0.05，以ANOVA的方差分析法判定与对照组之间的显著差异。
如表1所示，在大动脉狭窄手术和药物给予开始1周后，Sham组、对照组和ANP给药组之间的体重和心率未见明显的差别。对照组因大动脉狭窄所致的血管阻力增大，与Sham组对比可见明显的收缩压上升，ANP给药未观察到对血压变化的影响。另一方面，对照组和Sham组相比可见左心室重量明显增加、作为心肌肥大指标的左心室重量/体重比(mg/g)从2.01±0.03到2.34±0.07的明显增大，但ANP给药组中左心室重量的增加较小，左心室重量/体重比(mg/g)为2.09±0.04，和对照组相比明显减小。右心室重量/体重比各组间没有差异。
ANP给药组给药第7天的血浆中α-hANP浓度为502±72pg/ml(约0.17nM)。此外，关于ANP的细胞内信号传递的第二信使cGMP的血浆浓度，ANP给药组为5.3±0.4pmole/ml，与Sham组和对照组(分别为2.0±0.3，和3.4±0.5pmole/ml)相比显示出更高的值，可确认这是持续静脉内给予ANP的结果。
此外，关于血浆中内源性大鼠ANP浓度，对应Sham组的83±8pg/ml，对照组的139±19pg/ml是明显上升，这说明是对大动脉狭窄所致心脏负荷的代偿性内源性ANP分泌增加。
另一方面，ANP给药组的内源性大鼠ANP浓度为113±10pg/ml，显示出低值倾向，这是心肌肥大的形成被抑制的反映。
此外，在本实验中α-hANP给药开始后将大鼠放入代谢笼中饲养，收集24小时的尿量，测定尿量和尿中钠的排泄量。如图1所示，给药期间的尿量和尿中Na排泄量和各组间没有明显差别，对于本模型ANP给药没有观察到利尿作用。
如上所述，ANP1周持续静脉内给药显示出对心肌肥大形成的抑制作用。因为此时对体重和右心室重量没有影响，所以认为ANP的作用是对受负荷的左心室特异性的，而不是对全身代谢障碍和细胞毒性产生作用。此外，因为对本模型在此次的用药量(0.1μg/kg/min)下没有观察到ANP的利尿和降压作用，所以认为ANP是直接作用于心脏，抑制心肌肥大的发病。
实施例2.ANP对心肌肥大消退效果的研究
按实施例1所示的方法，产生心肌肥大后持续给予ANP，研究具有心肌肥大消退效果的可能性。
大鼠进行腹部大动脉狭窄手术或假手术后放置15周，使心肌肥大达稳定状态后，从颈静脉插入硅导管，以α-hANP0.1μg/kg/分、或5％葡萄糖2.5μl/分的速度3周静脉内持续给药。给药开始3周后在麻醉下测定大鼠的血流动力学状态，采血后处死，测定心脏重量。表2表示Sham组、对照组和ANP给药组在给药结束时心脏重量和血流动力学状态的测定值。
表2：ANP3周持续给药对腹部大动脉狭窄手术15周后的大鼠体重、心脏重量、血压和心率的影响
组     动物数  体重(g)   收缩压(mmHg)   心率(次/分)     左心室重量(mg)   左心室重量/体重(mg/g)   右心室重量(mg)   右心室重量/体重(mg/g)
Sham     9  523±11   136±8   380±16     938±15   1.80±0.04   217±6   0.42±0.02
对照     9  492±10   214±8**   428±14**     1171±25**   2.38±0.05**   214±6   0.44±0.01
ANP     12  502±9   205±8**   451±9**     1056±20**，##   2.11±0.06**，##   220±4   0.44±0.01
Sham-组进行假手术，对照组和ANP组进行腹部大动脉狭窄手术，对Sham组和对照组给以5％葡萄糖2.5μl/分、对ANP组给以α-hANP0.1μg/kg/分，在手术15周后3周内持续静脉内给药。
各值表示为平均值±标准差。
*，**：p＜0.05或0.01，以ANOVA的方差分析法判定与Sham组之间的显著差异。
##：p＜0.01，以ANOVA的方差分析法判定与对照组之间的显著差异。
如表2所示，各组的体重没有明显的差别。对照组因大动脉狭窄所致的血管阻力增大，与Sham组相比可见明显的收缩压上升，ANP给药组和对照组一样血压上升，未观察到ANP对血压的影响。对照组和ANP给药组的心率和Sham组相比明显增加。
一方面，关于左心室重量和作为心肌肥大指标的左心室重量/体重比(mg/g)，对照组(2.36±0.05)和ANP给药组(2.11±0.06)与Sham组(1.80±0.04)相比明显增加，可见产生心肌肥大，但ANP给药组和对照组相比显示出明显的低值，说明心肌肥大减轻。右心室重量/体重比各组间没有差异，说明ANP的减轻心脏重量的作用是对肥大的左心室特异性的。
还有，手术15周后即给药开始时的左心室重量，Sham组为937±23mg、对照组为1199±28mg(各n＝3)，对照组和Sham组相比有显著的心脏重量增加，即可以确定心肌肥大的形成。因为此时的心脏重量和给药结束时(18周后)没有差异[Sham组为938±15mg，对照组为1171±25mg(各n＝9)]，说明在手术15周后压力负荷所致的心肌肥大形成并达到稳定状态、在给药期间(手术后15～18周)心肌肥大也没有进一步发展。所以，从手术15周后因ANP给药所致的左心室重量/体重比的降低说明了ANP具有使已形成的心肌肥大消退的作用。
此时，关于内源性大鼠ANP浓度，对应于Sham组的70±5pg/ml，对照组为126±9pg/ml，有明显上升，ANP给药组则有降低倾向(105±18pg)。此外，ANP给药组在给药结束时的血浆中α-hANP浓度为426±53Pg/ml(约0.14nM)。
如上所述，ANP显示出防止心肌肥大产生、使已发病的心肌肥大消退的作用。
实施例3.ANP对心肌肥大和肺充血减轻效果的研究
大鼠进行腹部大动静脉分流形成术或假手术2周后，以α-hANP0.1μg/kg/分、或5％葡萄糖2.5μl/分的速度2周内持续给药，研究ANP对心肌肥大和肺充血的作用。表3表示Sham组、对照组和ANP给药组在给药结束时体重和血流动力学状态的测定值。
表3：ANP2周持续给药对腹部大动静脉分流手术2周后的大鼠体重、血压、心率和右心房压的影响
  组     动物数     体重(g)     收缩压(mmHg)     心率(次/分)     右心房压(mmHg)
  Sham     6     375±10     148±7     434±21     7.3±0.5
  对照     6     373±12     145±6     436±18     13.6±2.6**
  ANP     6     369±9     143±4     460±14     12.6±0.7*
Sham组进行假手术，对照组和ANP组进行腹部大动静脉分流手术，对Sham组和对照组给以5％葡萄糖2.5μl/分、对ANP组给以α-hANP0.1μg/kg/分，在手术2周后2周内持续静脉内给药。各
值表示为平均值±标准差。
*，**：p＜0.05或0.01，以ANOVA的方差分析法判定与Sham组之间的显著差异。
如表3所示，各组的体重没有明显的差别。各组间平均血压和心率也没有差异。对照组因动静脉分流所致的容量负荷增大，与Sham组相比可见明显的右心房压上升。ANP给药组和对照组一样右心房压上升，未观察到ANP对血流动力学状态的影响。
此外，作为心肌肥大指标的右心房、左心房、右心室和左心室重量的体重比(mg/g)如图2所示。在所有部位中，与Sham组相比，对照组的值明显增加，形成显著的心肌肥大。另一方面，ANP给药组和对照组相比，右心房、右心室、左心房重量、左心室重量/体重比的任一个均明显降低，心肌肥大的形成被抑制。
还有，作为肺充血指标的肺重量/体重比(mg/g)和血沉值(％)如图3所示。在肺重量/体重比方面，对照组和Sham组相比显示出明显的高值[Sham组为4.02±0.13，对照组为4.81±0.17]，但ANP组降低到与Sham组同程度的值(4.06±0.25)，说明ANP有减轻肺充血的作用。在血沉值方面，与Sham组相比，对照组显示出较低值，说明血液量增加，即出现全身性的充血倾向，ANP组此值有改善。
在本模型中此次用药量(0.1μg/kg/分)下，ANP对血压、右心房压没有影响，说明ANP直接作用于心脏，抑制心肌肥大的发病。此时，关于内源性大鼠ANP浓度，对应于Sham组的43±11pg/ml，对照组为854±265pg/ml，有显著上升，ANP给药组则显著降低(419±202pg/ml)。此结果与分流手术所致心肌肥大的形成、和ANP给药对心肌肥大的抑制相对应。此外，ANP给药组在给药结束时的血浆中α-hANP浓度为329±113pg/ml(约0.11nM)。
还有，手术2周后即给药开始时，与Sham组相比对照组的右心房重量/体重比可见增加(Sham组为0.10±0.01(n＝6)、对照组为0.13±0.004(n＝8))，但左心房、右心室、左心室、肺重量/体重比等两组间没有差异，血浆中大鼠ANP浓度则显示上升倾向(Sham组为34±3pg/ml(n＝6)，对照组为47±8pg/ml(n＝8))。如上所述，可认为腹部大动静脉分流手术2周后几乎没有发病，从2周后到4周后病情发展。所以，从手术2周后到4周后ANP给药显示出对心肌肥大和肺充血的抑制。
如上所述，ANP不仅能抑制压力负荷所致高血压性左心室肥大，也能抑制容量负荷所致的心肌肥大，此外，它不仅能有效减轻心肌肥大的发病、也能减轻肺充血。
产业上的利用可能性
根据本发明，以作用于作为钠利尿肽受体的GC-A、促进cGMP产生的物质为有效成分的组合物被证明可以有效预防与慢性心功能不全等心脏病的发病进展有关的心肌肥大。特别是在将ANP作为有效成分使用时，对于压力负荷型心肌肥大，ANP不仅能抑制心肌肥大的形成过程，也显示出使心肌肥大消退的效果，说明用于已发生心肌肥大的患者可有治疗效果，在临床上会很有用。
此外，对于容量负荷心肌肥大模型，ANP也显示出心肌肥大抑制作用，甚至它还显示出减轻肺充血的作用，所以它用于具有慢性心功能不全的主要症状、即作为引起呼吸困难原因的肺充血的患者时也会有效。更进一步，ANP在对血压、心率、尿量没有影响的用量就显示出肺充血的抑制作用，所以可认为其在血流动力学方面的副作用较小，能够安全使用。
综上所述，ANP能够改善高血压和瓣膜疾病、或心肌梗塞等引起的心肌肥大，甚至能够明显改善作为心功能不全的结果而发生的肺充血。心肌肥大本身是缺血性心脏病、心律不齐和慢性心功能不全的独立危险因子，特别是慢性心功能不全为死亡率高、预后不良的疾病。所以，在目前对改善心肌肥大、减轻心脏负荷有效的新药有很高需求的现状下，本发明的心肌肥大性心脏病治疗用药物组合物非常有用。
              序列表
序列号：1
序列长度：28
序列类型：氨基酸
拓扑学：直链
序列种类：肽
序列
Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly Gly Arg Met Asp Arg Ile Gly
  1               5                  10                  15
Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser Phe Arg Tyr
             20                  25
序列号：2
序列长度：28
序列类型：氨基酸
拓扑学：直链
序列种类：肽
序列
Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly Gly Arg Ile Asp Arg Ile Gly
  1               5                  10                  15
Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser Phe Arg Tyr
             20                  25
序列号：3
序列长度：22
序列类型：氨基酸
拓扑学：直链
序列种类：肽
序列
Cys Phe Gly Gly Arg Met Asp Arg Ile Gly Ala Gln Ser Gly Leu Gly
  1               5                  10                  15
Cys Asn Ser Phe Arg Tyr
            20
序列号：4
序列长度：32
序列类型：氨基酸
拓扑学：直链
序列种类：肽
序列
Ser Pro Lys Met Val Gln Gly Ser Gly Cys Phe Gly Arg Lys Met Asp
  1               5                  10                  15
Arg Ile Ser Ser Ser Ser Gly Leu Gly Cys Lys Val Leu Arg Arg His
             20                  25                  30
序列号：5
序列长度：24
序列类型：氨基酸
拓扑学：直链
序列种类：肽
序列
Ser Ser Asp Cys Phe Gly Ser Arg Ile Asp Arg Ile Gly Ala Gln Ser
  1               5                  10                  15
Gly Met Gly Cys Gly Arg Arg Phe
             20
序列号：6
序列长度：32
序列类型：氨基酸
拓扑学：直链
序列种类：肽
序列
Ser Pro Lys Thr Met Arg Asp Ser Gly Cys Phe Gly Arg Arg Leu Asp
  1               5                  10                  15
ArgIle Gly Ser Leu Ser Gly Leu Gly Cys Asn Val Leu Arg Arg Tyr
            20                  25                  30
序列号：7
序列长度：45
序列类型：氨基酸
拓扑学：直链
序列种类：肽
序列
Ser Gln Asp Ser Ala Phe Arg Ile Gln Glu Arg Leu Arg Asn Ser Lys
  1               5                  10                  15
Met Ala His Ser Ser Ser Cys Phe Gly Gln Lys Ile Asp Arg Ile Gly
             20                  25                  30
Ala Val Ser Arg Leu Gly Cys Asp Gly Leu Arg Leu Phe
         35                  40                  45
序列号：8
序列长度：29
序列类型：氨基酸
拓扑学：直链
序列种类：肽
序列
Met Met Arg Asp Ser Gly Cys Phe Gly Arg Arg Ile Asp Arg Ile Gly
  1               5                  10                  15
Ser Leu Ser Gly Met Gly Cys Asn Gly Ser Arg Lys Asn
             20                  25

Claims (6)

1.钠利尿剂肽在制备药物组合物中的用途，其中所述药物组合物用于治疗产生肺充血的慢性心功能不全，该药物组合物含有降低肺充血的有效量的钠利尿剂肽，所述的量不产生利尿和降压的作用，所述治疗减轻已形成的心肌肥大。
2.权利要求1记载的用途，其中钠利尿肽为心房钠利尿肽。
3.权利要求1记载的用途，其中钠利尿肽为脑钠利尿肽。
4.钠利尿剂肽在制备药物组合物中的用途，其中所述药物组合物通过在心肌肥大形成后消退心肌肥大以及通过减轻肺充血，用于治疗产生肺充血的慢性心功能不全。
5.权利要求4记载的用途，其中钠利尿肽为心房钠利尿肽。
6.权利要求4记载的用途，其中钠利尿肽为脑钠利尿肽。
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