CN1321635C - 用于偏头痛治疗的5－ht5受体的结合配偶体 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及5-HT5受体的结合配偶体，用于鉴别和表征所述结合配偶体的方法，特别是筛选方法，以及含有所述结合配偶体的药物组合物及其在治疗脑血管疾病如偏头痛中的应用。

Description

用于偏头痛治疗的5-HT5受体的结合配偶体
本发明涉及5-HT5受体的结合配偶体(Bindungspartner)、此类结合配偶体的鉴定和表征方法、含有它们的药物组合物及其在脑血管疾病如偏头痛中的应用。
至少有七种不同的受体种类介导多种多样的、与神经递质血清素(5-羟色胺，缩写为5-HT)的参与有关的生理活性。根据国际公认的分类，它们被称作5-HT1、5-HT2、5-HT3、5-HT4、5-HT5、5-HT6和5-HT7。而且这些受体种类中的多数包括可以进一步分化的受体类型。因此，5-HT1类受体包括可以分化为至少5个亚型的受体，它们被称作5-HT1A、5-HT1B、5-HT1C、5-HT1D和5-HT1E(Boess F.G.和martin I.L.，Neuropharmacology 33：275-317(1994))。
5-HT5类受体首先是由Plassat等在The EMBO Journal  Vol.11No.13，pp.4779-4786(1992)中公开。5-HT1A和5-HT5B受体也分别被鉴定出来(Erl ander等Proc.natl.Acad.Sci.USA90：3452-3456(1993))。5-HT5和其他5-HT受体之间仅仅存在较小的序列同源性。这些受体的药理学特性明显不同。利用分子生物学技术，5-HT5的定位可能是在嗅球、海马体、皮质、脑室、胼胝体和小脑中。通过免疫组织化学法的方式，可以显示出5-HT5主要表达在星形胶质细胞(Carson等，GLIA 17：317-326(1996))。星形胶质细胞直接和血脑屏障的脑毛细管的基底膜相邻。异常的星形胶质细胞内皮结构伴发着血脑屏障的丧失。星形胶质细胞的准确意义还不清楚。它们似乎执行转运任务和联络功能。在多种病理性脑病变和神经精神障碍中观察到，反应性星形胶质细胞和反应性神经胶质增生有关。由于脑损伤，它们改变了其形态。蛋白质表达模式改变且产生生长因子。有关培养星状胶质细胞的体外研究已经能够监测5-HT5受体介导的反应。因此人们一方面推测，它们参与疾病后脑部的恢复过程，但另一方面也不排除它们牵涉损伤的产生，或者甚至强化损伤。
偏头痛是影响大部分人群的CNS疾病。在多数情况中，表现为反反复复发作的头痛，据粗略估计，有8百万人受到影响，即3-5％的儿童，7％的男性和14％的女性。虽然可以通过遗传诱因传播，但病因似乎较复杂(Diener H.C.等Arzneimitteltherapis 15：387-394(1997))。
有两种假说占优势。早已知道的血管理论提出的一种病因是内部和外部脑血管系统的扩张进程。神经学理论是基于血管活性神经递质自血管轴突、由某些支配脑组织的神经节的刺激所致的分泌，所述血管活性神经递质主要为神经肽，例如P物质和神经激肽，其引起炎性反应，由此导致疼痛。
目前，偏头痛的治疗还没有治本的疗法(Kausaltherapie)。目前采用两种不同的治疗方法，第一种方法，预防偏头痛发作复发的预防性方法，和第二种抑制发作期间急性症状的症状疗法。偏头痛特异活性化合物如Sanmigran、Nocerton、Desernil和Vidor，但也有其他适应症常用的活性化合物，例如β阻断剂、止吐作用的化合物如Sibelium、抗抑郁药如Laroxyl或抗癫痫活性化合物如Depakin，用于预防性地给药。在急性疗法中，可以施用镇痛剂，如Aspirin、对乙酰氨基酚或Optalidon，非甾类抗炎剂如Cebutid、Voltaren、Brufen、Ponstyl、Profenid、Apranx和Naproxin镇痛和抗炎；麦角生物碱，如麦角胺，二氢麦角胺，它们可以诱发血管收缩；或曲坦(triptan)类物质，例如舒马普坦、Naramig和AscoTop，其对5-HT5受体具有高亲和力。后者物质起激动剂和阻断血管扩张的作用。
然而，上述活性化合物不最适合于偏头痛的治疗。非阿片类镇痛剂具有副作用。由于强烈的外周血管收缩作用，麦角生物碱的复杂作用机理引起副作用，如高血压和坏疽。属于曲坦类的化合物也不完全令人满意(Pfaffenrath V.Münh.med.Wschr.625-626(1998))。
舒马普坦(Imigran)，一种最有效且最常用来抗急性偏头痛发作的活性化合物，由于其高亲水性而无法通过血脑屏障。在28％的患者中，这种活性化合物无效，并且50-100mg的口服剂量相当高。已知的禁忌证为冠状血管痉挛、高血压、肾和肝脏机能紊乱。
迄今为止，对5-HT1受体具有选择性亲和力的化合物业已被考虑应用于偏头痛的治疗(Goadsby P.J.，CNS Drugs 10：271-286(1998)；Saxena P.R.，Exp.Opin.Invest.Drugs 581-593(1996))。譬如，舒马普坦被视为一种对5-HT1D受体非常有选择性的配体，这就是为何该专业领域致力于优化这些结合特性和血管收缩作用介导的疗法的原因。同样适用于5-HT1B和5-HT1F受体配体。因此，开发了一系列的活性化合物，然而这些化合物也无法补救上述问题。
因此，本发明的一个目的是偏头痛，优选急性偏头痛样脑血管疾病的治疗，该治疗具有足够的功效和轻微的副作用。
令人惊奇地，现已发现对5-HT5受体具有相对较高结合亲和力的物质可以提供所需效果。
因此，本发明涉及5-HT5受体的选择性结合配偶体，其对5-HT5受体的结合亲和力大于一种或多种非5-HT5的5-HT受体。
术语“5-HT5受体的结合配偶体”是指结合5-HT5受体的物质，并且因此也可以称作5-HT5受体配体。
或者包括金属络合物类配位键。除了上述可逆性分子相互作用以外，结合配偶体和受体之间也可以是不可逆性相互作用，例如共价键。
选择性理解为是指优先结合5-HT5受体的结合配偶体的性质。
因此，结合配偶体对5-HT5受体具有结合亲和力，这种结合亲和力高于对一种或多种除5-HT5之外的5-HT受体，即特别是上述5-HT受体种类5-HT1、5-HT2、5-HT3、5-HT4、5-HT6和5-HT7的受体。如果一种结合配偶体对5-HT5受体的结合亲和力大于对于5-HT5之外的5-HT受体，则对于5-HT5之外的5-HT受体来说，该结合配偶体对5-HT5受体具有选择性的结合。特定的结合配偶体是那些对5-HT5受体的结合亲和力大于至少一种且特别是全部5-HT1受体，尤其是5-HT1D和/或5-HT1B受体的那些结合配偶体。对5-HT5受体的结合亲和力大于除5-HT5之外的所有5-HT受体的结合配偶体构成本发明另一特殊种类的结合配偶体。
决定上述选择性的是，一方面对5-HT5受体的结合亲和力和另一方面对除5-HT5以外的一种或多种5-HT受体结合亲和力足够不同。按照亲和力的比优选亲合力的差异适宜至少2、更适宜至少5、特别适宜至少10、优选至少20、特别优选至少50和特别是至少100。
按照一种实施方案，本发明的结合配偶体竞争地抑制参比结合配偶体如5-HT(5-羟色胺)或5-CT(5-甲酰氨色胺)对5-HT5受体的结合。
竞争性抑制理解为是指本发明的结合配偶体与参比结合配偶体，目前情况中例如是5-HT或5-CT，对受体的竞争，即一种结合配偶体的结合阻止了其他结合配偶体的结合。
按照另一实施方案，本发明的结合配偶体非竞争性地抑制参比结合配偶体如5-HT(5-羟色胺)或5-CT(5-甲酰氨色胺)对5-HT5受体的结合。
非竞争性抑制是指本发明的结合配偶体通过与受体结合调控参比结合配偶体，在本文中例如是5-HT或5-CT的结合，特别是降低其结合亲和力。
至少在竞争性抑制的情况中，即在可逆性结合的情况中，主要通过用另一种结合配偶体抑制一种结合配偶体，这种抑制随着一种结合配偶体的结合亲和力的降低或另一种结合配偶体对受体的结合亲和力的提高而增加。因此，有利的是，本发明可用的结合配偶体对5-HT5受体具有高结合亲和力。这样的结合亲和力能够一方面有效抑制5-HT5受体的天然结合配偶体，例如血清素(5-羟色胺、5-HT)自身，其中可用于本发明的结合配偶体在使特定量的这种结合配偶体与5-HT5受体结合时所必需的浓度随着结合亲合力的增大而降低。对于医学应用，优选的结合配偶体具有高结合亲和力使它们可以在有效医疗过程中作为活性化合物以合理量给药。本发明的结合配偶体优选以约0.01至100mg/kg体重且特别是约0.1至15mg/kg体重的日剂量非肠道给药，和1-30mg/kg体重的日剂量口服给药。
上述竞争试验提供了表达结合亲和力的一种可能性，利用这些试验可以测定出本发明结合配偶体在受体结合位点替代半数的另一种参比结合配偶体的体外浓度(IC50值)。因此，5-CT对5-HT5受体的结合的竞争性抑制也可以用来评估本发明优选的结合配偶体的效果，其具有的半数最大抑制常数IC50于10-7M，优选小于10-8M和特别是小于10-9M。
本发明结合配偶体的结合亲和力也可以用抑制常数Ki来表示，其一般同样利用体外竞争性试验测定。对于5-HT5受体的结合，本发明的结合配偶体优选具有小于10-8M、更优选小于10-9M和特别优选小于10-10M的Ki值。本发明化合物的Ki值是在例如1·10-7M至7·10-7M的范围内或在1·10-8M至1·10-7M内。
按照另一实施方案，本发明的结合配偶体以上述有利的结合亲和力，相对于一种或多种除5-HT5之外的5-HT受体选择地结合到5-HT5受体上。
按照另一实施方案，本发明的结合配偶体以上述有利的结合亲和力，相对于除5-HT5之外的所有5-HT受体选择地结合到5-HT5受体上。
结合配偶体特别适宜的是与通过神经胶质细胞、特别是星状胶质细胞表达的5-HT5受体结合的那些具有上述亲和力和选择性的结合配偶体。
按照本发明，人受体变体对于本发明所用的结合配偶体是适宜的靶标。
本发明结合配偶体与5-HT5受体的结合和效应器功能连接。结合配偶体可以起激动或拮抗和部分激动和/或部分拮抗作用。
按照本发明激动剂被视为是完全或部分模拟5-HT对5-HT5受体的活性的化合物。
按照本发明拮抗剂被视为是阻断5-HT对5-HT5受体的激动活性的化合物。
按照本发明的一个具体实施方案，5-HT5激动剂作为结合配偶体提供。术语“5-HT5激动剂”是指引起部分至完全激动作用的结合配偶体。按本发明对-HT5受体起部分激动作用的结合配偶体具有足够的激动活性，从而能够在有效医疗过程中以合理量给药。在该实施方案中，优选的结合配偶体是具有至少50％激动作用的那些结合配偶体。特别优选的结合配偶体是具有至少80％激动作用的那些结合配偶体，特别是具有基本上完全拮抗作用(Emax)的那些结合配偶体。
按照本发明的一个具体实施方案，可以利用这样的结合配偶体，其至少与h5-HT5-转染CHO细胞的5-HT5受体的结合能够引起对与膜键合G蛋白结合的GTP的刺激，引起细胞内该水平的激动剂诱导性变化，引起磷脂酶G活性的诱导和/或cAMP产生的激动剂诱导性变化。就细胞内钙水平改变来说，引起细胞内钙水平增高的结合配偶体的应用是本发明的一个具体实施方案。
这个实施方案还包括在已知脑血管疾病、特别是偏头痛的动物模型中起作用，和/或在脑部区域中产生某些体内作用的结合配偶体，特别是脑内基因组反应，例如转录因子如c-fos、c-jun、zif268或异型Homer基因的表达(Brakeman P.R.等，Nature 386：284-288(1997))。
优选的结合配偶体是那些对上述与其效应器功能有关的5-HT5受体也具有选择性的结合配偶体。
按照一种实施方案，5-HT5结合配偶体为低分子量，通常为合成化合物。
根据另一实施方案，本发明的5-HT5结合配偶体是5-HT5-特异性抗体。它们可以是多克隆抗血清、单克隆抗体、抗体片段(如F(ab)、Fc等)、嵌合或重组抗体。上述抗体可以通过已知方式制备。所用免疫原可以是5-HT5受体本身或抗原，通常用和常规载体蛋白偶联的片段。
按照另一实施方案，本发明的5-HT5结合配偶体是对5-HT5受体具有足够亲和力的aptamer，即核酸类物质，通常为低聚核苷酸。
测定本发明结合配偶体对5-HT5受体的结合亲和力的试验原则上是已知的。这可以通过，例如评价试验物质对参比结合配偶体和5-HT5受体的结合的竞争性抑制作用进行测定。合适的参比结合配偶体是5-HT5受体(如5-HT或5-CT或LSD)的已知配体。这些参比结合配偶体可方便地标记，以便利用标准方法可以分析测得其与5-HT受体的结合。放射性和光学标记是优选的。按照本发明，在有关5-HT5受体的结合研究中，采用5-CT或LSD，特别是[3H]-LSD的形式。结合亲和力可以表示为半数最大抑制常数IC50或抑制常数Ki。这种方法优选用于初级筛选。优选采用SPA或闪烁平板(flashPlate)技术。
对试验结合配偶体的结合作用也可以直接在5-HT受体上测定。表示结合亲和力的抑制常数Ki可以通过例如量热法，即通过测量释放的结合能测定。
为了测定选择性，以同样方式测试试验结合配偶体对其他5-HT受体的结合亲和力-任选采用各受体的特异性配体-并且比较所得的值。
借助于已知的功能试验可以定性或定量地测定体外或体内效应器功能。
激动活性的评价可以基于所有由于5-HT和5-HT5受体的结合引起的效应。按照本发明优选评价GTP和G蛋白的结合对细胞内钙水平、对磷脂酶C活性和/或cAMP产生的作用。这些方法优选用于二级筛选。因此，也适宜采用SPA或闪烁平板技术。
利用GTP的不可水解类似物如[35S]GTPγS可以研究GTP和G蛋白的结合，其结合可以利用放射学方法测定。这种研究方法优选在具有5-HT5受体的膜上进行。
为了测量细胞内钙的水平，可以采用适当的钙探针，通常为钙螯合剂，例如荧光化合物，如Fura2-乙酰基甲酯或Fluo-3-AM。这个试验适宜在具有5-HT5受体的细胞培养物中、特别是在个体细胞中进行。
通过催化反应的方式，例如肌醇的掺杂，可以测定磷脂酶C的活性，出于检测目的，优选放射性标记为[3H]-肌醇，或通过PPIP2转化为IP3的反应，其中PPIP2也适宜放射性标记成为[32P]PIP2。这些研究适宜在具有5-HT5受体的个体细胞中进行。
cAMP产生可以借助于cAMP结合蛋白测定。该研究适宜在具有5-HT5受体的个体细胞中进行。
如果需要，也测定效应器功能，即本发明结合配偶体对其他5-HT受体的活性。这适宜用来测定对5-HT5和其他5-HT受体的结合亲和力，即特别是选择性。
因此，本发明也涉及本发明结合配偶体的鉴定和表征方法。这些方法和其他类似的适用方法可以成为体外筛选过程的基础，利用上述方法可以从大量的不同化合物中筛选出似乎在未来用途中可能最有希望的化合物。例如，可以利用组合化学来建立含有无数潜在活性化合物的大型物质库。可以从组合物质库自动筛选出具有预期活性的物质。优选排列在微孔滴定板上的各试验的有效分析可以利用自动筛选机。因此，本发明也涉及筛选方法，即初级和二级筛选方法，其中有效采用至少一种下列方法。如果利用多种方法，可以不同时或同时对被试验物质的相同样品或不同样品进行分析。
完成此类处理的一种特别有效的技术是闪烁接近测定法，简称为SPA，这种技术在活性化合物筛选的领域中业已被公认。开展这项技术的试剂盒和组件可以商购获得，譬如由Amersham PharmaciaBiotech得到。原则上说，是将溶解的或膜键合的受体固定在含有闪烁剂的小荧光微球上。譬如，如果放射性配体结合在固定受体上，激发闪烁剂发光，因为闪烁剂和放射性配体之间在空间上是接近的。
进行此类处理的另一种特别有效的技术是活性化合物筛选的领域中已知的FlashPlate技术。开展这项技术的试剂盒和组件可以商购获得，例如由NENLife Scienoe Products得到。这种技术的原理是基于微量滴定平板(96孔或384孔)，孔用闪烁剂涂层。
上述方法是所属领域技术人员已知的。
本发明的第一种方法用于测定结合配偶体对5-HT5受体的亲和力和/或选择性。鉴于此目的，令结合配偶体和5-HT5受体接触并且测定结合亲和力。
本发明的另一种方法涉及结合配偶体对5-HT5受体的活性，即激动、部分激动、拮抗和/或部分拮抗作用的测定。鉴于此目的，令结合配偶体和5-HT5受体接触并且评价这种结合所产生的作用。
按照一种优选实施方案，通过用上述的[3H]-5-CT或[3H]-LSD竞争试验测定其对5-HT5受体的结合亲和力对结合配偶体进行初级筛选。随后，通过和上面相同的方式，特别是有关GTP结合和/或细胞内钙水平，通过评估其效应器功能对那些抑制常数IC50等于或小于10-6M的结合配偶体进行二级筛选。最后，通过按照基本上和上面相同的方式-但任选利用对各受体具有特异性的配体测定其对其他5-HT受体的结合亲和力可对由这种方式选择出的结合配偶体进行反向筛选来测定选择性。例如，5-HT1A受体的结合研究可以采用[3H]-8-羟基二丙基氨基四氢萘([3H]-8-DPAT)，而5-HT1B和5-HT1D受体可以用[3H]-5-CT研究。
5-HT5受体适宜以细胞体系的形式使用，即使用携带5-HT5受体的膜、细胞、细胞集落、组织或器官。此类的细胞体系天生可以表达5-HT5受体，但也可以通过遗传操作如转染诱导它们表达5-HT5。在本发明的优选实施方案有关h5-HT5的内容中，Rees S.等FEBSLetters 335：242-246(1994)所述编码序列可以特别用作这种形式(登记号X81411)。人神经胶质瘤细胞系是优选的具有5-HT5受体的天然细胞系。在h5-HT5-转染异源细胞系中，优选稳定表达h5-HT5基因的那些。可以提及的例如是，h5-HT5-转染CHO细胞，h5-HT5-转染人肾细胞，特别是h5-HT5-转染HEK293细胞，或h5-HT5-C-6神经胶质瘤细胞。
为了测定本发明结合配偶体的选择性、亲和力和活性，也可以利用脑组织切片和由脑部获得的天然膜。如果采用放射性标记，组织切片的评估优选通过放射自显影法进行。
本发明用于偏头痛治疗的结合配偶体的功效优选在基于机理产生的偏头痛的动物模型上测定。
譬如，可以测定由本发明结合配偶体诱发的蛋白质外渗。这种分析可以采用已知方式进行，例如利用荧光染色法(Johnson K.W.&Phebus L.A.(1998)J.Neurosci.Methods 81：19-24)或同位素标记白蛋白(Petty M.A.等，(1997)Eur.J.Pharmacol.336：127-136)。对此，用试验化合物并且用[125I]-白蛋白或荧光染料连续处理动物。随后电刺激三叉神经节。测定蓄积在硬脑膜中的荧光的放射性。由刺激三叉神经节引起的蛋白质外渗中可以证明本发明结合配偶体的抗偏头痛活性。
另一模型是基于颈动脉血流的分布。这个试验也是已知试验(Saxena P.R.等，(1998)Eur.J.Pharmacol.351：329-339)。对此，将放射性微球注射到颈动脉内。稳定阶段后，用试验化合物处理动物，在微量-β-计数器中测定脑中蓄积的放射性。
硝酸甘油诱发的c-fos基因表达和易位的测量也适用。对此，用硝酸甘油和试验化合物处理动物。利用就地杂交和免疫组织化学测定c-fos基因的表达和核内蛋白的易位(Garcia-Ladona F.J.等，(1994)Mol.Brain Res.21：75-84；Garcia-Ladona F.J.等，(1997)J.Neurosci.Res 50：50-61)。
另一种模型由Fernandes de Lima V.M.等(1993)Brain Res.614：445-51(Retinal Spreading Depression)和Kawahara N.等(1999)Exp.Neurol.108：27-36(Cortical Spreading Depression)提出。
在治疗内容中，按照本发明的5-HT5结合配偶体的应用包括一种方法。在这种方法中，有效量的一种或多种5-HT5结合配偶体，通常根据制药和兽医实践配制，给予被处理个体，优选哺乳动物，特别是人、可食用性动物或宠物。所述治疗是否合适和按什么方式进行，皆应取决于个体情况和接受的医学评价(诊断)，涉及出现的征候、症状和/或机能障碍，危险性将恶化为某些征候、症状和/或机能障碍以及其他因素。
通常，通过每天给药一次或反复给药进行上述治疗，如果适宜可以和其他活性化合物或含有活性化合物的制剂合用或代替它们，从而给被治疗个体施用约0.001g至10g，优选约0.001g至约1g的日剂量。
本发明也涉及治疗个体、优选哺乳动物、特别是人、可食用性动物或宠物的药剂的制备。本发明的结合配偶体常常以药物组合物的形式给药，所述药物组合物含有可药用赋形剂和至少一种本发明的结合配偶体，并且如果需要含有其他活性化合物。这些组合物可以通过例如口服、直肠、经皮、皮下、静脉内、肌肉内或鼻内途径给药。
适用的药物组合物实例是固体药剂，如粉末剂(Pulver)，药粉(Puder)、颗粒剂、片剂、软锭剂、小药囊、囊剂(Cachets)、糖衣药丸、胶囊(如硬和软明胶胶囊)、栓剂或阴道药物形式；半固体药物形式，如软膏、霜剂、水凝胶、糊剂或贴剂；和液体药物形式，例如溶液、乳液，特别是水包油乳液、混悬液，如洗剂、注射和输注制剂、滴眼液和滴耳液。植入给药装置也可以用来施用本发明的结合配偶体。此外，还可以利用脂质体、微球或聚合物骨架。
在组合物的制备中，本发明的结合配偶体常常和赋形剂混合或用赋形剂稀释。赋形剂可以是用作活性化合物的载体或介质的固体、半固体或液体材料。
适用的赋形剂包括，例如乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露糖醇、淀粉类、阿拉伯树胶、磷酸钙、藻酸盐、黄芪胶、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、糖浆和甲基纤维素。此外，制剂可以含有可药用的载体或常规助剂，例如润滑剂，如牛油、硬脂酸镁和矿物油；湿润剂；乳化和助悬剂；防腐剂，如羟基苯甲酸甲酯和其丙酯；抗炎剂；抗刺激剂；螯合剂；包衣助剂；乳液稳定剂；成膜剂；胶凝剂；异味掩蔽剂；矫味剂；树脂；水胶体；溶剂；增溶剂；中和剂；渗透促进剂；颜料；季铵类化合物；再脂化和多脂化剂；软膏、霜剂或油基质；聚硅氧烷衍生物；涂布辅剂；稳定剂；灭菌剂；栓剂基质；片剂助剂，如粘合剂、填充剂、润滑剂、崩解剂或包衣剂；发酵剂；干燥剂；混浊剂；增稠剂；蜡；增塑剂；白油。有关实施方案是以专业知识为基础，例如，如Fiedler，H.P.，Lexikon derHilfsstoffe für Pharmazie，Kosmetik und angrenzendeGebiete(药学、化妆品和有关领域的赋形剂大全)，第4版，Aulenorf：ECV-Editio-Kantor-Verlag，1996所述。
本发明也涉及5-HT5受体的结合配偶体、特别是本发明结合配偶体的上述特定和优选实施方案在治疗偏头痛脑血管疾病中的应用，尤其是在偏头痛的治疗和其他血管相关性头痛的治疗中的应用，特别是在偏头痛类的发作性头痛的治疗中的应用。这些疾病包括：具有或不具有伴发性神经机能障碍的简单和典型偏头痛的疾病；真性和非典型偏头痛；和此类疾病的更具体病症，例如联合偏头痛(称作偏头痛替代症)、消化性偏头痛、眼型偏头痛、眼肌麻痹性偏头痛、偏头痛红(rouge)，也称作簇型头痛(霍顿氏病)和颈性偏头痛。治疗应理解为既是指预防疗法，特别是对发作复发的预防，如间隔治疗，也是急性症状情况中的治疗，特别是在头痛阶段。成功的治疗可以减轻症状的强度，特别是头痛，减轻神经机能性疾病的强度，如视觉、感官、运动障碍和语言障碍，恶心和干呕，和/或减少发作次数。优选将结合配偶体应用于偏头痛的急性治疗。本发明还特别涉及所述结合配偶体在上述5-HT5受体形成和/或过程参与其中的疾病治疗中的应用，即在由5-HT5受体活性调控的疾病的治疗中的应用。
术语“疾病”在本发明中是指通常被视作病理症状且本身可以以某些征候、症状和/或机能障碍的形式表现的异常。本发明所述的治疗可以针对所述异常或病理症状的单个障碍，但许多原因彼此相互关联的异常可能集中产生征候，即症状，这些症状也可以按照本发明治疗。
治疗在本发明含义中不但包括治疗急性或慢性征候、症状和/或机能障碍，而且包括预防性治疗(预防)，特别是预防复发或阶段性预防。治疗可以从症状上实施，譬如抑制症状。治疗可以是短期治疗，中期治疗，或也可以是长期治疗，譬如在维持治疗中。
偏头痛治疗中可以采用的结合配偶体可以和具有比非5-HT5的特定受体更低、基本上相同或更高的亲和力的5-HT5结合。
因此，本发明所用的5-HT5受体的结合配偶体特别包括那些其对5-HT5受体的亲和力比对5-HT1受体、特别是5-HT1B和/或5-HT1D的亲和力高以使其适合用于本发明的结合配偶体。这不一定是以相对更加有选择地结合5-HT5受体为条件，而那些选择性结合5-HT5受体的配偶体是本发明的一种具体实施方案。
譬如，可以利用对5-HT5受体和5-HT1受体，特别是5-HT1B和/或5-HT1D同时具有高亲和力的结合配偶体。高亲和力在此处是指Ki值一般在1·10-9M～1·10-6M。按照一个具体实施方案，在该高亲和力范围中，可利用的结合配偶体对于5-HT类受体具有一种结合特性，该特性的标志在于对于5-HT5受体的结合亲和力和该范围的其他结合亲和力相比基本上相同或略微小。优选系数等于或小于10。
按照本发明的另一实施方案，采用前述选择性5-HT5结合配偶体。
根据本发明的一个具体实施方案，采用的结合配偶体至少与h5-HT5-转染CHO细胞的5-HT5受体的结合，引起膜键合G蛋白结合的GTP的激动剂诱导性刺激发生变化，导致细胞内钙水平的改变，使磷脂酶C活性的激动剂诱导性感应改变和/或使cAMP产生发生变化。就改变细胞内钙水平来说，应用结合配偶体提高细胞内钙水平是本发明的一个具体实施方案。
本发明通过下列实施例的方式更加详细地说明，但不对本发明构成限定。
参比实施例1
h5-HT5受体表达的HEK293细胞和CHO细胞
按照已知方式利用3’-5’-RT-PCR法(RACE体系，BoehringerMannheim)从人类组织中分离出人5-HT5受体的编码基因。随后，将该基因序列插入携带新霉素耐受基因的质粒(pcDAN3；Invitrogen，德国)中并且在大肠杆菌中按照制造商的说明进行放大。将所得的质粒标本和Lipofectamin(Gibco life-Sciences，德国)混合，在培养皿(2.5cm)中用这种转染混合物的薄层培养HEK293细胞。随后用含新霉素的培养基更换转染混合物。进一步在DMEM-F12培养基中培养存活的细胞，该培养基中补充有10％胎牛血清、2mM谷酰胺和抗生素(90mg的链霉素、90mg的亲免素)。在5％CO2、95％空气湿度和37℃下令细胞生长至融合。
按照类似方法获得h5-HT5受体表达的CHO细胞。
参比实施例2
细胞膜的制备
在此所用方法基本上按照由细胞制备细胞膜的已知方法(Findlay J.B.C.&Evans W.H.，Biological membranes，PracticalApproach(1987))。由培养瓶的表面仔细地刮擦下按照参比实施例1培养的细胞并且以180xg在DMEM-F12培养基中离心10分钟。将所得细胞沉淀重新悬浮在含有5mM EDTA、5mM EGTA、0.1mM PMSF和3mM苯甲脒的5mM Tris HCl缓冲液中。该细胞混悬液在UltraturraxR(15,000rpm)中匀浆并且在1000xg和4℃下离心1分钟。将沉淀重新悬浮在缓冲液A中，并且按照上述方法匀浆和离心。收集由上述两步获得的上清液，在40,000xg和4℃下离心20分钟。将沉淀在缓冲液A中重新悬浮并匀浆(1X15s)。膜混悬液在40,000xg和4℃下离心20分钟。令所得沉淀重新悬浮在含有10％甘油和1％牛血清白蛋白的缓冲液A中。冷冻试样并且保存在-80℃下直至使用。
参比实施例3
[3H]-5-CT的饱和结合的动力学
方法基本上已知(Ress S.等  FEBS Letters 335：242-246(1994))。按照参比实施例2所得的膜(200μl)以600μl的总体积在含有1mM EDTA的100mM tris HCl(pH：7.7；缓冲液B)中培养，同时提高[3H]5-CT(96Ci/mmol)的浓度，加入10μM美赛西平用于测定特异性结合，同时在测定总结合时不加入美赛西平。混合物在30℃下培养90分钟。随后，利用SkatronR过滤系统并内嵌0.3％聚乙烯亚胺的GF/B滤纸过滤样品。4℃下用9ml的缓冲液B洗涤滤纸。利用5mL的Ultima-Gold(Parkard)通过液体闪烁计数测定残留在滤纸上的放射性。
参比实施例4
[3H]-5-CT的结合竞争
有关结合竞争的试验基本上按照已知试验(Rees等，1994)进行。在2nM[3H]-5-CT的存在下、以600μl的总体积在缓冲液B中培养实施例2所得的膜(200μl)，同时提高所选化合物的浓度。30℃下培养75分钟后，4℃下经内嵌0.3％聚乙烯亚胺的GF/B滤纸过滤含缓冲液B的样品。滤纸用9mL的缓冲液B洗涤。按照参比实施例3所述方法测定滤纸上残留的放射性。总结合被定义为不加入其他化合物时观察到的放射性配体的结合。非特异性结合是10μM美赛西平存在下观察到的[3H]-5-CT的结合。也可以采用类似的体系，通常采用微量滴定板，获得高样品通量和二级筛选。
通过非线性回归分析并且由线性图利用SigmaPlot软件(JandelScientific，德国)测定[3H]-5-CT结合的饱和参数。建立竞争曲线，其中放射性结合表示为总结合的百分比。利用非线性回归分析的方式测定半数最大抑制常数IC50和Hiil系数(nH)。
b)利用FlashPlate技术通过HTS鉴别h5-HT5受体配体
由BioSignal Inc.(加拿大)可以获得用h5-HT5膜涂层的96孔FlashPlate。[3H]-LSD在Tris HCl缓冲液中稀释到适当浓度，该缓冲液中含有10mM MgCl2、0.5mM EDTA和0.5％的BSA。将放射性配体溶液加入孔内(25mL)，孔内含有试验化合物或不含有试验化合物。室温下将平板保温180分钟，用微量β计数器(Wallac)测定放射性信号。利用美赛西平测定非特异性结合。[3H]-LSD具有12nM的亲和力。随着试验化合物的结合亲和力增高，[3H]-LSD的放射性信号减弱。
参比实施例5
[35S]GTPγS结合的激动剂诱导性刺激的测定
[35S]GTPγS结合试验是已知试验。该试验按照Hilf，G.和Jakobs，K.H.以前所述方法(Eur.J.Mol.Pharmacol.225：245-252(1992))进行。测定活性化合物诱导的[35S]GTPγS结合HEK293细胞膜的变化，该HEK293细胞用h5-HT5受体基因稳定转染(参见参比实施例1和2)。用含有6.75mM MgCl2、150mM NaCl、1mM DTT、1mM EDTA、10μMGDP和[35S]GTPγS的50mM三乙醇胺HCl缓冲液(pH：7.5)培养细胞膜(12μg)。在加入或不加入试验活性化合物和30℃下培养60分钟后，试验混合物(100μl)快速经GF-B滤纸、利用SkatronR过滤装置过滤。滤纸迅速用含有100mM NaCl和5mM MgCl2的50mM tris HCl缓冲液(9ml；pH：7.5；4℃)洗涤。通过闪烁光谱测定法、利用Ultima Gold闪烁液测定滤纸上残留的放射性。可以采用获得高通量和二级筛选的类似系统，例如应用微量滴定平板。
活性化合物的活性表示为在活性化合物不存在下测定的基础结合的百分比。利用非线性回归分析的软件(Sigmaplot，JandelScientific，德国)、按照通用公式E＝(L*Emax)/(L+EC50)绘出曲线，其中E是效价，L是配体浓度，Emax是最大效价和EC50是诱发半数最大效价时的浓度。
参比实施例6
细胞内钙水平的激动剂诱导性变化的测定
方法已知(Kao J.P.Y.，Methods in Cell Biology 40：155-181(1994))。如参比实施例1所述，h5-HT5受体表达HEK293细胞在培养瓶中生长。在它们融合之前小心地刮下细胞。通过在室温下用Fura2-乙酰基甲酯(Sigma)培养用Fura2标记细胞。细胞在180xg下离心10分钟并重新悬浮在不含有血清的DMEM-F12培养基中，在37℃、5％CO2和95％大气湿度下培养45分钟。
用荧光显微镜测定细胞内钙水平，该显微镜安装有合适的滤光交换系统(Olympus/Hammamatsu)。用ArgusR软件测定荧光比(340nm/380nm)。短时间观察不加入活性化合物的各细胞的细胞内钙水平，在加入试验活性化合物后30分钟再进行观察。另外可以采用获得高通量和二级筛选的类似系统，如微量滴定平板的使用。
类似地，在HTS中可以评估细胞内Ca2+水平的调节。因比，将h5-HT5受体表达CHO细胞在96孔平板(30,0000-80,000个细胞/孔)中培养过夜。用含有1mM Fluo-3-AM、10％Pluronic acid和2.5mM丙磺舒的HEPES缓冲液标记和洗涤细胞1小时。向各孔中加入试验化合物。为了测定钙水平，利用荧光测定操作平板读数器(FluorometricImaging Plate Readerl；FLIPR)读取荧光强度。
参比实施例7
激动剂诱导的磷脂酶C活性的测定
方法基本已知(Garcia-Ladona F.J.等，Neuroreport 4：691-694(1993))。细胞和0.125μM[3H]肌醇培养24小时。除去培养基中的未掺杂[3H]肌醇并且用含有10mM LiCl的Krebs-Henseleit缓冲液更换。培养10分钟后，加入被试验活性化合物。45分钟后，用蒸馏水更换刺激培养基来终止该反应。如果采用组织样本，可利用类似的方法(Garcia-Ladona等，1993)。冷冻细胞且保存在-80℃下。用已知的色谱方法测定[3H]肌醇单磷酸酯的产生。类似方法也可以采用组织小棱镜(miniprism)。按照参比实施例2所述，以类似方式通过制备膜级分，并且用[32P]PIP2和活性化合物培养，可以测定磷脂酶C的刺激作用。在这种情况中，可以测试出IP3的产生。也可以优化已知方法以便利用基于微量滴定平板的系统。商购获得的原料可以进一步扩展到用于高通量试验和进行二级筛选。
参比实施例8
cAMP生产中激动剂诱导性变化的测定
该方法基本已知(Strada S.S.等，Methods inNeurotransmission receptor analysis：89-110(1990))。细胞在不含有血清和抗生素的培养基中培养10分钟。15分钟将培养基加热到95℃从而终止反应。冷冻细胞样本且保存在-80℃下。利用市售试剂盒、采用cAMP结合蛋白测定cAMP水平。可以优化已知方法以使用基于微量滴定平板的系统。商购获得的原料可以进一步扩展到用于高通量试验和进行二级筛选。
参比实施例9
组织制备
活性化合物给药(口服、腹膜内、静脉内或脑室内)后90分钟，将试验动物断头。由头盖骨迅速取出整个大脑，干冰冷冻并且保存在-80℃下。在-20℃的低温恒温器中得到大鼠脑切片(15μm)，涂布在明胶涂层的载玻片上并且保存在-30℃下直至使用。
实施例1
按照参比实施例3所述，测定[3H]-5-CT对5-HT5受体的结合亲和力。图1表示结合的[3H]-5-CT对[3H]-5-CT浓度的依赖关系。测定出离解常数Kd＝0.570。根据克隆细胞系，受体结合密度(B)在900-28,000fmol/mg蛋白质的范围内变化。
实施例2
按照参比实施例4，通过[3H]-5-CT结合竞争的方式测定5-羟色胺能化合物的结合亲和力。得到下列IC50值：
化合物     IC50[M]
R(+)-8-OH-DPAT     6.75·10-7
美赛西平     6.2·10-10
二氢麦角胺     1.79·10-8
舒马普坦     7.6·10-6
美西麦角     1.48·10-7
R(+)-麦角乙脲     8.2·10-9
丁螺环酮     失活
在另一试验系列中，还测定下列化合物的抑制常数Ki(Ki＝IC50/(1+C/Kd))，其中C是[3H]-5-CT的浓度并且按照实施例1)测定了Kd：
化合物     Ki[M]
R(+)-8-OH-DPAT     1.25·10-7
5-CT     1.44·10-9
二氢麦角胺     4.05·10-9
舒马普坦     8.12·10-7
美西麦角     1.54·10-8
实施例3
按照参比实施例3所述，研究活性化合物诱导的GTP和G蛋白的结合。显然5-HT5受体和HEK293细胞中的G蛋白偶联。典型的5-羟色胺能激动剂5-HT和5-CT诱导[35S]GTPγS和对细胞膜的结合比基础值提高了约40％(参见图2)。5-HT5受体需要GDP用于和G蛋白偶联，这种偶联是由激动剂介导的(参见图3A)。5-HT效应是剂量依赖性的(参见图4)，并且EC50为2.6μM。
实施例4
按照参比实施例6研究活性化合物对细胞内钙水平的诱导效应。用R(+)麦角乙脲刺激5-HT5受体在HEK293细胞中引起细胞内Ca2+水平增高(参见图5)。

Claims (13)

1.一种鉴别用于治疗偏头痛性脑血管疾病的化合物的体外筛选方法，其中包括测定化合物对5-HT5受体的亲和力并且挑选出那些对5-HT5受体的结合亲和力比对5-HT1D受体的结合亲和力至少高10倍的那些5-HT5受体结合配偶体。
2.权利要求1的方法，其中挑选出其对5-HT5受体的结合亲和力比对5-HT1D受体的结合亲和力至少高20倍的那些化合物。
3.权利要求1的方法，其中挑选出其对5-HT5受体的结合亲和力比对5-HT1D受体的结合亲和力至少高50倍的那些化合物。
4.权利要求1-3任一项的方法，其中挑选出其与5-HT5受体结合的Ki值小于10-8M的那些化合物。
5.权利要求1-3任一项的方法，其中为了测定结合亲和力，使测试化合物与具有5-HT5受体的细胞体系接触。
6.权利要求5中的方法，其中采用人类神经胶质瘤细胞系或h5-HT5-转染的异源细胞系。
7.权利要求6的方法，其中采用h5-HT5-转染的CHO细胞、h5-HT5-转染的人类肾细胞，或h5-HT5-转染的C-6神经胶质瘤细胞。
8.至少一种5-HT5受体的结合配偶体在制备治疗偏头痛性脑血管疾病的药物中的应用，所述结合配偶体对5-HT5受体的结合亲和力比对5-HT1D受体的结合亲和力至少高10倍。
9.权利要求8的应用，其中结合配偶体对5-HT5受体的结合亲和力比其对5-HT1D受体的结合亲和力高至少20倍。
10.权利要求8的应用，其中结合配偶体对5-HT5受体的结合亲和力比其对5-HT1D受体的结合亲和力高至少50倍。
11.权利要求8的应用，其中结合配偶体结合5-HT5受体的Ki值小于10-8M。
12.权利要求8-11任一项的应用，其中所述偏头痛性脑血管疾病是偏头痛。
13.权利要求12的应用，该应用用于偏头痛的急性治疗。
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Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE102004008141A1 (de) 2004-02-19 2005-09-01 Abbott Gmbh & Co. Kg Guanidinverbindungen und ihre Verwendung als Bindungspartner für 5-HT5-Rezeptoren
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Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB2105192A (en) * 1981-08-27 1983-03-23 Shaun R Coughlin Composition for use in treating atherosclerosis
WO1994001555A1 (fr) * 1992-07-01 1994-01-20 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Polypeptides ayant une activite de recepteur serotoninergique (5ht5a), acides nucleiques codant pour ces polypeptides et utilisations
WO1994018319A1 (fr) * 1993-02-09 1994-08-18 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale Nouveaux polypeptides ayant une activite de recepteur serotoninergique, acides nucleiques codant pour ces polypeptides et utilisations

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5360735A (en) * 1992-01-08 1994-11-01 Synaptic Pharmaceutical Corporation DNA encoding a human 5-HT1F receptor, vectors, and host cells

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB2105192A (en) * 1981-08-27 1983-03-23 Shaun R Coughlin Composition for use in treating atherosclerosis
WO1994001555A1 (fr) * 1992-07-01 1994-01-20 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Polypeptides ayant une activite de recepteur serotoninergique (5ht5a), acides nucleiques codant pour ces polypeptides et utilisations
WO1994018319A1 (fr) * 1993-02-09 1994-08-18 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale Nouveaux polypeptides ayant une activite de recepteur serotoninergique, acides nucleiques codant pour ces polypeptides et utilisations

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