CN1315455C

CN1315455C - 牙齿的漂白

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Publication number: CN1315455C
Application number: CNB961970294A
Authority: CN
Inventors: D·阿斯林; R·苏奇亚; A·嘉法; S·F·史密斯
Original assignee: Novozymes AS; Colgate Palmolive Co
Current assignee: Colgate Palmolive Co
Priority date: 1995-08-18
Filing date: 1996-08-19
Publication date: 2007-05-16
Anticipated expiration: 2016-08-19
Also published as: CN1196674A; CA2229715C; CA2229715A1; EP0844864A1; JP2000506490A; AU6732696A; AU724729B2; US6379653B1; WO1997006775A1; US5989526A

Abstract

本发明的目的是提供用于漂白牙齿的安全产品。含有至少一种氧化还原酶的口腔用组合物在没有过氧化物存在或仅有非常少的过氧化物存在下达到所述的目的。本发明还涉及含有本发明口腔用组合物的口腔护理产品，漂白牙齿的方法，使用所述的口腔护理产品的方法和氧化还原酶在氧化牙齿污迹中的应用。

Description

牙齿的漂白

发明领域

本发明涉及用于漂白牙齿的不含有过氧化物或仅含有非常少的过氧化物的口腔用组合物，涉及含有本发明口腔用组合物的口腔护理产品，漂白牙齿的方法，使用所述的口腔护理产品的方法和过氧化物酶在氧化牙齿污迹中的应用。

发明背景

大多数人希望有满口迷人的白色牙齿，因为当微笑时牙齿组成了整个人脸画面的重要部分。与此相反严重污染的牙齿是不健康的并且在某些情况下甚至是讨厌的“外表”。

许多年来，齿冠或托牙被看作为用于避免例如由于年龄的增长牙齿变黄，由于在儿童期间长期摄取抗菌素四环素而污染牙齿，或由于饮用咖啡，吸食/咀食烟草等等导致的牙齿黄棕色到黑色的污迹的唯一的工具。

即使用于漂白牙齿的技术已经已知了许多年，直到最近牙齿的漂白从未广泛地使用。

首先公开的牙齿的漂白技术使用了草酸作为漂白剂并且由Chaple在1877年报道。此后不久，由Harlan在1884年首先报道了过氧化物用作为漂白剂。即使从那以后已经建议了大量的漂白剂，今天过氧化物仍是被广泛地使用的药剂。

牙齿的结构

哺乳动物的牙齿主要由四个重要构成成份组成，分别称为“牙骨质”，“牙髓”，“牙本质”，和“牙釉质”。

“牙骨质”是形成牙齿根部的外表面的骨状物组织。“牙髓”由含有动脉，静脉和淋巴的敏感性组织和神经组织组成。“牙本质”位于牙髓的周围，形成了牙齿的主要部分。牙本质是密集的骨状物钙质组织。在牙齿的外侧，有一层坚硬的带孔层，它是由羟磷灰石无机晶体组成的，具有天然的不透明的白色或灰白色。该外侧带孔层被称为“牙釉质”。

牙齿的污染

牙齿的污染可以由各种各样的内在的和/或外来的影响造成。通常可将污迹划分为两种主要类型：

1)外来的污迹和2)内在的污迹。

1)外来的污迹

外来的污迹主要是通过口每天摄取物质例如食品和饮料和/或使用烟草产品等等引起的。这些物质趋向于吸附到牙釉质的羟磷灰石结构上，从而污染牙齿和/或降低牙齿的白色。

经过几年的时期后，外来的污迹可以穿过牙釉质层并且逐渐变成内部污染。

2)内在污迹

内在污迹是用于已经穿过牙齿的结构的污迹(即牙齿基质内的污迹)的术语。所述污迹是由如上所述原因引起的或由包括血液剂和某些药物的药剂引起的，或是由于牙髓坏死或发育异常引起的。

例如，来自身体的降解产物可能引起污染。已经发现在牙齿牙釉质发育期间，由于长期生病过量摄取四环素或氟化物导致降解产物释放到牙本质小管引起某种程度的污染。所述污染的严重程度取决于药物摄取的时间和持久性。

此外，牙髓坏死导致出血性污染并且是血液降解的结果。如果由例如蛋白质的骨疡降解引起牙髓坏死，牙齿变成棕灰色。

对于损伤性的牙髓死亡的情况，牙齿变成棕黄色。据认为这样的污染是由进入牙本质小管的红血细胞的溶血引起的。

牙齿的漂白

在进行牙齿漂白之前，对污迹的类型进行分类是重要的，因为不同类型的污迹需要不同的途径和/或漂白剂。

通过用含有磨料和表面活性剂的清洁剂有规律地强烈地机械刷牙去除某些在牙齿的表面或亚表面上出现的外来污迹。但是，不是所有的外来污迹都可以采用这条途径去除的，并且需要抑制非酶促褐变反应的漂白剂。

内在污迹定位于牙齿基质并且通过强烈地机械刷牙不能去除或阻止。所述污迹的去除需要能够穿过牙齿结构的漂白剂。过氧化氢是所述漂白剂的一个例子，可用于外来和内在的污迹。

过氧化氢可用于许多类型的污迹例如残留于牙本质的污迹例如由四环素引起的污迹。

已知盐酸能够去除由氟中毒引起的污迹但是不认为盐酸是漂白剂，因为它溶解牙齿的表面。

但是所述试剂的应用可导致严重的牙齿损伤或至少产生口腔刺激作用。因此，所述试剂由于安全原因，不适合私人消费者“家用”和仅应该由专业人员小心地使用。

漂白技术

通常漂白技术划分为两种主要类型：

a)非生命的漂白技术，和

b)生命的漂白技术

a)非生命的漂白技术

非生命的漂白技术得到最有效的结果，但是也具有最大的损伤可能性。非生命的漂白技术使用了过硼酸钠和35％过氧化氢作为活性成份。

b)生命的漂白技术

用于生命的漂白技术的产品可划分为三个主要组：a)“办公1室内使用”的漂白产品，b)牙医处方上的家用漂白产品，和c)不需处方可以出售的漂白试剂盒。

对于涉及牙齿漂白产品和技术的类型的进一步信息，可参见Van B.Haywood，(1992)，Periodontology and Restorative Dentistry，P.142-149。

最通常使用的“办公室内使用”技术之一将30％的过氧化氢与加热和光处理一起使用以加速氧化反应(即去除污迹)。

利用“牙医处方上的家用”漂白产品的另一种方法涉及10％脲过氧化物的使用。将牙齿在含有漂白剂的口腔托盘中漂白，所述托盘置于病人的牙齿上。

用于漂白牙齿的不需处方可以出售的漂白试剂盒包括例如含有3％-6％过氧化氢的牙膏和漱口液并且被直接出售给消费者，不需要牙医的处方。

对现有技术的评述

上面提到的大多数现有技术方法/技术涉及由于损伤牙齿和/或口腔组织的危险，其浓度对私人消费者“家用”不安全的过氧化物和/或其它试剂的使用。

此外，过氧化氢的有效浓度超过了某些国家的允许的限度。

含有低浓度漂白剂例如过氧化氢的产品被认为具有慢的漂白效果。

因此，需要提供对牙齿安全的漂白组合物，所述组合物不含有有害浓度的过氧化氢和/或其它有害药剂。所述牙齿漂白组合物可用作为由私人消费者“家用”的常规口腔护理产品的成份。

发明概述

本发明的目的是提供安全的漂白牙齿的产品，仅含有非常低浓度的过氧化物和/或其它有害的漂白剂。

本发明人惊奇地发现含有至少一种氧化还原酶的牙齿漂白组合物具有良好的漂白效果，没有引起高浓度的过氧化物和其它药剂使用带来的问题。

因此，在第一方面本发明的目的是提供漂白牙齿的口腔用组合物，它含有至少一种氧化还原酶，例如漆酶或相关的酶，和/或氧化酶和/或过氧化物酶。

本发明的第二方面涉及口腔护理产品，含有用于漂白牙齿的本发明的口腔用组合物。

本发明也涉及用于漂白污染的或有污迹的牙齿的方法，和在口腔使用口腔用组合物或口腔护理产品的方法。

最后本发明涉及氧化还原酶用于牙齿的生命的和非生命的漂白。

发明详述

本发明的目的是提供安全的牙齿护理产品，仅含有非常低浓度的过氧化物和/或其它有害的漂白剂。

在本发明的一个实施方案中，甚至可以从该组合物中完全去除过氧化物和/或其它相同的试剂。

在本发明的说明书中，术语牙齿的“漂白”是与术语牙齿的“增白”或“增亮”相同的。

术语例如过氧化物的“低浓度”是指0％(没有过氧化物存在)到约1％过氧化物的浓度，是基于最后口腔组合物或口腔护理产品的重量计算得到的。

与本发明相关所提到的所有浓度是以重量百分数计算的。

本发明的安全的口腔用组合物和口腔护理产品含有0％-0.5％的过氧化物，例如低于约0.3％，可以是约0.1％的过氧化物。优选的是过氧化物的浓度是0％-1％。

将会明白即使获得本发明的牙齿漂白效果需要低于1％的过氧化物，但是加入的过氧化物的浓度为高于最后的口腔用组合物或口腔护理产品的重量的1％，例如3％或6％，甚至10％。

然而，如果过氧化物以较高的浓度存在，则损坏口腔组织。再者，在所述浓度下可以灭活污迹氧化酶。

使用含有本发明的口腔用组合物的口腔护理产品有助于牙齿的漂白。例如本发明的牙膏形式或漱口液形式的口腔护理产品可以作为每天在家清洁牙齿和/或漱口的自然部分对牙齿进行漂白。

本发明人惊奇地发现通过加入能够氧化牙齿污迹的酶或酶系统提供了安全的牙齿漂白组合物。

在第一方面本发明涉及用于漂白牙齿的口腔用组合物，它含有至少一种氧化还原酶组的酶作为活性漂白成份。

氧化还原酶(即根据生化和分子生物学(IUBMB)国际联盟的建议(1992)将该酶划分为酶分类号E.C.1(氧化还原酶))是催化氧化还原反应的酶。

在氧化还原酶组内，优选的酶是通过作用于受体氧(O₂)和/或过氧化物催化底物(电子或氢供体)的氧化。所述酶包括划分到包括氧化酶，包含于E.C.1.10.3的漆酶和相关酶和包含于E.C.1.11的过氧化物酶的酶，所述氧化酶包括E.C.1.1.3，E.C.1.2.3，E.C.1.3.3，E.C.1.4.3，E.C.1.5.3，E.C.1.7.3，E.C.1.8.3，E.C.1.9.3。

对于作用于受体氧(O₂)的酶的情况，所述氧可以是由空气提供的分子氧。

如果向口腔用组合物或口腔护理产品加入过氧化物，例如过氧化氢或产生过氧化氢的化合物例如过硼酸盐和过碳酸盐，则以上面介绍的浓度加入。

通过利用下文的“材料和方法”章节中描述的方法分析酶或酶系统达到上述氧化牙齿污迹的目的的能力。

根据本发明，具体涉及三种类型的氧化还原酶：

a)漆酶或相关酶，它作用于分子氧，并产生水(H₂O)不需要过氧化物(例如过氧化氢)，

b)氧化酶，作用于分子氧(O₂)，产生过氧化氢(H₂O₂)，和

c)过氧化物酶，作用于过氧化物(例如H₂O₂)，产生水(H₂O)。

根据本发明也涉及包括三种类型酶的组合的酶系统。该酶系统可以例如由漆酶和氧化酶；漆酶和过氧化物酶；漆酶和氧化酶和过氧化物酶；或氧化酶和过氧化物酶组成。

优选的是下文提到的酶，尤其是重组和/或基本上纯化的酶。

在本发明中，“漆酶和相关酶”包括由酶分类号为E.C.1.10.3.2(漆酶)包括的酶和由分类号为E.C.1.10.3.1包括的儿茶酚氧化酶，由酶分类号为E.C.1.3.3.5包括的胆红素氧化酶和由酶分类号为E.C.1.14.99.1包括的一苯酚一氧酶。

优选的是，所使用的漆酶来源于多孔菌的菌株，特别是Polyporuspinsitus或变色多孔菌的菌株，或毁丝菌例如M.thermophila的菌株或丝核菌的菌株，特别是Rhizoctonia praticola或茄属丝核菌的菌株，或Rhus的菌株，特别是Rhus vernicifera的菌株。

在本发明的特定的实施方案中，氧化还原酶是漆酶，例如多孔菌漆酶，尤其是描述于WO96/00290(Novo Nordisk Biotec，Inc.)Polyporuspinsitus漆酶(也称作为Trametes villosa漆酶)或毁丝菌的漆酶，尤其是描述于WO95/33836(Novo Nordisk Biotec，Inc.)的M.thermophila漆酶。

此外，漆酶可以是Scytalidium的漆酶，例如描述于WO95/33837(NovoNordisk Biotec，Inc.)的S.thermophilium漆酶或Pyricularia的漆酶，例如可以从SIGMA购买商品名为SIGMA No.L5510的Pyricularia oryzae的漆酶，或Coprinus的漆酶，例如C.cinereus漆酶，尤其是C.cinereusIFO 30116漆酶，或丝核菌漆酶，例如茄属丝核菌漆酶，尤其是描述于WO95/07988(Novo Nordisk A/S)的中性的茄属丝核菌，它的最适pH在6.0-8.5的范围。

漆酶也可以来源于真菌例如金钱菌，层孔菌，香菇，侧耳菌，曲霉，链胞菌，Podospora，射脉菌例如辐射射脉菌(WO92/01046)，革盖菌，例如毛革盖菌(JP 2-238885)或葡萄孢。

优选的是胆红素氧化酶来源于漆斑菌的菌株，例如疣孢漆斑菌。

尤其是涉及酶分类号E.C.1.11(氧化还原酶)的过氧化物酶组内的过氧化物酶(1.11.1.7)。

本发明的过氧化物酶来源于植物(例如辣根过氧化物酶)或微生物包括真菌和细菌例如Coprinus的菌株，例如Coprinus cinereus或Coprinusmacrorhizus，或细菌例如芽孢杆菌例如短小芽孢杆菌。

在本发明的另一个实施方案中，氧化还原酶是过氧化物酶，例如Coprinus过氧化物酶，例如Coprinus cinereus过氧化物酶，例如描述于WO95/10602(Novo Nordisk A/S)的C.cinereus IFO 8371或其变异体，它们在过氧化氢存在下是非常稳定的，或来源于弯孢菌的菌株的卤代过氧化物酶，例如C.verrruculosa卤代过氧化物酶，尤其是C.verrruculosa CBS147.63。

所涉及的氧化酶包括葡萄糖氧化酶(E.C.1.1.3.4)，己糖氧化酶(E.C.1.1.3.5)，L-氨基酸氧化酶(E.C.1.4.3.2)，木糖醇氧化酶，半乳糖氧化酶(E.C.1.1.3.9)，吡喃糖氧化酶(E.C.1.1.3.10)，醇氧化酶(E.C.1.1.3.13)。

如果使用L-氨基酸氧化酶，它来源于木霉，例如Trichodermaharzianum，例如描述于WO94/25574(Novo Nordisk A/S)的L-氨基酸氧化酶或绿色木霉。

合适的葡萄糖氧化酶来源于曲霉，例如黑曲霉的菌株或来源于枝孢的菌株例如尖孢枝孢，尤其是描述于WO95/29996(Novo Nordisk A/S)的尖孢枝孢CBS 163。

来源于红海海藻Chondrus crispus(通常已知为角叉菜)的己糖氧化酶(Sullivan和Ikawa，(1973)，Biochim.Biophys.Acts，309，第11-22页；Ikawa，(1982)，酶学方法，89，碳水化合物代谢部分D，145-149)氧化广谱的碳水化合物，例如D-葡萄糖，D-半乳糖，麦芽糖，纤维二糖，乳糖，D-葡萄糖6-磷酸酯，D-甘露糖，2-脱氧-D-葡萄糖，2-脱氧-D-半乳糖，D-果糖，D-葡糖醛酸，和D-木糖。

红海海藻Iridophycus flaccidum也产生易于提取的己糖氧化酶，它氧化几种不同的一和二糖(Bean和Hassid，(1956)，生物化学杂志，218，第425页；Rand等人(1972年，食品科学杂志37，第698-710页)。

己糖氧化酶的广谱底物有利于牙齿的漂白，因为在口腔中存在的可用底物(即碳水化合物)的总量显著大于具有多个特定催化特性的相关酶。

牙齿漂白酶的另一个相关组是木糖醇氧化酶(例如参见JP 80892242)，在氧存在下它氧化木糖醇，D-山梨醇，D-半乳糖醇，D-甘露醇和D-阿拉伯糖醇。木糖醇氧化酶可从链霉菌的菌株(例如链霉菌IKD472，FERM P-14339)获得，它具有最适pH为7.5，在pH 5.5-10.5，温度高达65℃是稳定的；具有非常适合于口腔护理组合物和产品的特性。再者，底物木糖醇不是生踽的(即在口腔中不降解为造成牙洞的化合物)。

利用作用于不是生踽的底物的酶是有利的(即不立即被降解为生踽的底物例如蔗糖，葡萄糖，果糖，麦芽糖等等)。

所述底物的例子包括氨基酸，醇，糖醇，例如木糖醇，山梨醇等等。

因此，在优选的实施方案中，口腔护理组合物包括一种或多种上述酶和不生踽的底物。

使用在通常的口腔pH，即pH5.0-9.0，优选的是pH 6.0-8.5，尤其是pH 6.4-7.5时基本上有活性的酶。

在本文中术语“基本上有活性的”酶是指该酶具有的相对活性(在相同条件下在最适pH时为100％)高于30％，较好的是50％，甚至高于70％，例如80％，和最好高达在最适pH下的约100％的活性。

对于使用漆酶和过氧化物酶的情况，通过直接氧化牙齿污迹或借助于介体能够获得漂白效果。

氧化酶原位(即在口腔中)产生过氧化物(H₂O₂)。

当使用漆酶和/或过氧化物酶，或氧化酶和过氧化物酶时不需要过氧化物存在，而仅使用过氧化物酶便需要加入低浓度的过氧化物。但是，根据本发明也涉及当使用漆酶或氧化酶时加入低浓度的过氧化物。

将会明白本发明的优点是在任何时候口腔中都不存在其浓度会损害口腔的过氧化物。

由于过氧化氢浓度低或不存在过氧化氢，本发明的组合物和产品可以被私人消费者和专家(即牙医等等)安全使用，不用任何预防。

在本发明的优选的实施方案中，本发明的口腔组合物或口腔护理产品包括氧化还原介体(有时称作为加强剂或加速剂)，它是能够增强本发明的氧化还原酶活性的药剂。

介体可以是任何已知的介体。所述介体的例子是下列化合物：2，2’-连氮基-双(3-乙基-苯并噻唑啉-6-磺酸酯)(ABTS)；6-羟基-2-萘甲酸；7-甲氧基-2-萘酚；7-氨基-2-萘磺酸；5-氨基-2-萘磺酸；1，5-二氨基萘；7-羟基-1，2-萘并咪唑；10-甲基吩噻嗪；10-吩噻嗪丙酸(PPT)；N-羟基琥珀酰亚胺-10-吩噻嗪-丙酸酯；联苯胺；3，3-二甲基联苯胺；3，3-二甲氧基联苯胺；3，3’，5，5’-四甲基联苯胺；4’-羟基-4-二苯基羧酸；4-氨基-4’-甲氧基芪；4，4’-二氨基芪-2，2’-二磺酸；4，4’-二氨基二苯胺；2，7-二氨基芴；4，4’-二羟基-联苯；三苯胺；10-乙基-4-吩噻嗪羧酸；10-乙基吩噻嗪；10-丙基吩噻嗪；10-异丙基吩噻嗪；甲基-10-吩噻嗪丙酸酯；10-苯基吩噻嗪；10-烯丙基吩噻嗪；10-吩_嗪丙酸(POP)；10-(3-(4-甲基-1-哌嗪)丙基)吩噻嗪；10-(2-吡咯烷乙基)吩噻嗪；10-甲基吩恶嗪；亚氨基芪；2-(对-氨基苯基)-6-甲基吩噻嗪-7-磺酸；N-苯亚甲基-4-二苯胺；5-氨基-2-萘磺酸；7-甲氧基-2-萘酚；4，4’-二羟基二苯酮；N-(4-(二甲基氨基)苯亚甲基)-对-茴香胺；3-甲基-2-苯并噻唑啉酮(4-(二甲基氨基)-苯亚甲基)腙；2-乙酰基-10-甲基吩噻嗪；10-(2-羟基乙基)吩噻嗪；10-(2-羟基乙基)吩噻嗪；10-(3-羟基苯基)吩噻嗪；4，4’-二甲氧基-N-甲基-二苯胺；香子兰醛吖嗪。

为了漂白牙齿本发明的口腔用组合物中需要的氧化还原酶的量取决于所使用的特定的化合物，但是通常为最后组合物重量的0.0001％-20％，优选的是约0.001％-约10％，和最优选的是从约0.01％-约5％的范围。

在制备口腔用组合物时，由于安全的原因可加入基本上纯化的酶制剂形式的氧化还原酶。但是，从技术的角度考虑可以使用纯度较低的氧化还原酶制剂。

口腔用组合物可以掺入到用于生命的和/或非生命的牙齿漂白技术中。适用于有生命的牙齿漂白的，具有漂白牙齿的主要目的的产品的例子包括通常由训练过的专家使用的办公室用漂白牙齿的产品和/或所谓的“牙医处方上的家用”产品。

本发明尤其涉及的是“不需处方可以出售的”产品，它包括牙齿漂白试剂盒和常规的口腔护理产品。

常规的口腔护理产品是例如牙膏，凝胶，漱口液或托牙清洁剂的产品，通常主要是靶击骨疡，噬菌斑和/或牙垢。但是几年来消费者市场已经可以获得也靶击牙齿污迹的口腔护理产品(经常称作为牙齿增白剂)。但是，这些产品使用其它的漂白/增白原理。

在上述“发明背景”章节中进一步描述了上面介绍的产品类型。

本发明的口腔用组合物或口腔护理产品包括至少一种其它的酶活性，包括蛋白酶，和/或突变酶和/或葡聚糖酶和/或脂酶和/或淀粉酶和/或抗微生物多肽或酶的活性。

在本发明的优选的实施方案中，口腔用组合物或口腔护理产品包括氧化还原酶和葡聚糖酶和/或突变酶。

本发明的口腔用组合物优选的是用于具有任何合适的物理形式(即粉剂，膏剂，凝胶，液体，油膏，片剂等等)的常规的口腔护理产品。

在一个实施方案中，口腔用组合物或口腔护理产品是在没有空气的包装盒中的一室制的产品，含有氧化还原酶或酶系统，尤其是漆酶，氧化还原介体剂(例如ABTS或PPT)和通常用于所述口腔用组合物或口腔护理产品中的其它成份。

在另一个实施方案中，口腔用组合物或口腔护理产品是含有氧化酶和相应的底物的一室制的产品，具有有限量的水或非含水的洗牙水。

即使氧化还原介体的存在是有利的，因为它可以改善牙齿的漂白作用，但是也不是强制性的。

本发明也涉及二室制的口腔用组合物和口腔护理产品，其中将氧化还原酶(例如漆酶)和氧化还原介体在导入到口腔中之前立即混合。

本发明的“口腔护理产品”的定义为可用于在人和动物的嘴中保持和/或改善口腔卫生，和/或预防或治疗牙齿疾病的产品。

所述口腔护理产品的例子包括牙膏，牙用乳剂，凝胶或牙粉，洗牙液，漱口液，牙齿清洁剂，刷牙前或后的冲洗制剂，口香糖，锭剂和糖果。

牙膏和牙齿凝胶通常包括磨料，泡沫剂，香料，湿润剂，结合剂，增稠剂，甜味剂和水。

包括去斑液的漱口液通常包括水/醇溶液，香味剂，湿润剂，甜味剂，泡沫剂和着色剂。

本发明所述的磨料包括氧化铝和其水合物，例如三水合α氧化铝，三硅酸镁，碳酸镁，碳酸氢钠(“烤制用苏打”)，高岭土，硅铝酸盐，例如钙化的硅酸铝和硅酸铝，碳酸钙，硅酸锆，也包括粉状的塑料，例如聚氯乙烯，聚酰胺，聚甲基异丁烯酸酯，聚苯乙烯，苯酚-甲醛树脂，蜜胺-甲醛树脂，脲-甲醛树脂，环氧树脂，粉状的聚乙烯，硅石干凝胶，水凝胶和气凝胶等等。合适的磨料剂也可以是焦磷酸钙，水不溶性碱性偏磷酸盐，磷酸二钙和/或其二水合物，正磷酸二钙，磷酸三钙，颗粒状的羟磷灰石等等。使用这些物质的混合物也是可以的。

取决于口腔护理产品，磨料产品可以是以0-70％的重量，优选的是1％-70％的重量存在。对于牙膏，通常磨料的含量是在占最后牙膏产品的重量的10％-70％的范围内。

利用湿润剂防止例如牙膏丧失水份。用于本发明的口腔护理产品的合适的湿润剂包括下列化合物和其混合物：甘油，多元醇，山梨醇，聚乙二醇(PEG)，丙二醇，1，3-丙二醇，1，4-丁二醇，氢化的部分水解的多糖等等。通常湿润剂占牙膏重量的0％-80％，优选的是5-70％。

合适的增稠剂和粘合剂的例子是硅石，淀粉，黄蓍胶，合成生物聚合胶，角叉菜提取物，藻酸盐，果胶，纤维素衍生物例如羟乙基纤维素，羧甲基纤维素钠和羟丙基纤维素，丙烯酸和其盐，聚乙烯吡咯烷酮，它们可以帮助洗牙水产品稳定。增稠剂可以以最终产品重量的0.1％-20％存在于牙膏和凝胶中，而粘合剂以最终产品重量的0.01％-10％存在。

作为泡沫剂，可以使用阴离子，阳离子和非离子的两性和/或两亲性的表面活性剂。它们可以以最终产品重量的0％-15％，优选的是0.1％-13％，更优选的是0.25％-10％的水平存在。

表面活性剂仅在它们对存在的酶没有失活作用时是合适的。表面活性剂包括脂肪醇硫酸酯，磺化单酸甘油酯或具有10-20个碳原子的脂肪酸，脂肪酸-白蛋白缩合产物，脂肪酸酰胺和牛磺酸的盐和/或羟乙磺酸的脂肪酸酯的盐。

合适的甜味剂包括糖精和/或其它合适的甜味剂。

通常香料例如留兰香和薄荷以低剂量存在，例如0.01％-约5％的重量，尤其是0.1％-5％的重量。

通常以获得可流动形式的牙膏的量，即最终产品重量的40％-70％加入水。

此外，也可以包括水溶性的抗菌剂例如二葡萄糖酸洗必泰，海克替啶，阿来西定，季铵抗菌化合物和水溶性来源的某些金属离子例如锌，铜，银和亚锡(例如氯化锌，铜，和亚锡，硝酸银)。

本发明还涉及加入抗结石剂，抗噬菌斑剂，用作为氟来源的化合物，染料/着色剂，防腐剂，维生素，pH调节剂，抗骨疡剂，脱敏剂等等。

由本发明的口腔用组合物生产的牙膏例如可以包括下列组分(占最终牙膏组合物重量的％)：

磨料 10-70％

湿润剂 0-80％

增稠剂 0.1-20％

粘合剂 0.01-10％

甜味剂 0.1％-5％

泡沫剂 0-15％

漂白酶 0.0001％-20％

其它酶 0-20％

过氧化物 0-1％

漱口液

由本发明的口腔用组合物生产的漱口液通常可包括下列组分(占最终牙膏组合物重量的％)：

0-20％湿润剂

0-2％表面活性剂

0-5％酶

0-20％乙醇

0-2％其它成份(例如香料，甜味剂，活性成份例如

氟化物)

0-70％水

可以在漱口液中加入合适的缓冲液进行缓冲例如加入pH为6-7.5的柠檬酸钠或磷酸钠。

漱口液可以是非稀释形式的(即必须是在使用之前稀释)。

制造方法

可以利用口腔用产品领域内常规的方法制造本发明的口腔护理组合物和产品。

最后本发明涉及使用本发明的口腔护理产品的方法，其中

(a)口腔中导入口腔护理产品，

(b)与牙齿和/或牙床接触一段时间，

(c)从口腔中去除，和

(d)选择性地用液体洗涤。

如果所使用的口腔护理产品是固体到可流动形式，优选的是利用牙刷等等将口腔护理产品与牙床和/或牙齿接触。对液体口腔护理产品形式，通过漱口完成接触。

步骤(b)的接触时间是选择性的。但是通常口腔护理产品与牙床和/或牙齿接触的时间在30秒-15分钟之间便足够获得所需的结果。

在使用之后，可以以合适的方式从口腔去除口腔护理产品，例如通过吐唾液。选择性地，用液体例如自来水漱口。

方法和材料

材料：

酶：

Myceliophthora thermophila的漆酶(从Novo Nordisk A/S购买)。

黑曲霉的葡萄糖氧化酶(从Novo Nordisk A/S购买)。

来源于Trichoderma harzianum的L-氨基酸氧化酶(从Novo NordiskA/S购买)。

牙齿：

通过用Minolta CR-221色度计进行颜色测定选择有污迹的牙齿进行漂白试验。将牙齿冷藏存储于水中，直到使用。

溶液

污染液A：(外来污迹)

澄清的唾液^* 10毫升

茶^** 10毫升

咖啡^*** 10毫升

牛奶 10毫升

^*采用下列步骤制备澄清的唾液：

-咀嚼保护膜和收集唾液，

-离心和收集上清液

^**将50毫升的沸水倾倒至Lipton^TM黄色标记茶袋上面，保留10分钟。

^***纯咖啡

污染液B：(外来污迹)

100毫升高压灭菌的TSB(胰酶解胨培养液)

0.35克的即溶咖啡粉(Nescafe^TM，经典的)

0.25克胃粘蛋白

茶提取物^*

含有24小时好气生长的藤黄微球菌DSM 20030T培养物(在37℃，营养琼脂平板生长2天)的3.25毫升TSB培养液。

^*40毫升沸水倾倒至一袋Lipton^TM黄色标记茶袋中的茶上，保持2分钟。用灭菌膜(0.45μ)过滤15毫升上清液。

污染液C：(外来污迹)

溶于磷酸缓冲液，pH7.0的2.5％BSA 10毫升

0.1M的磷酸缓冲液，pH7.0 2.5毫升

0.2％的二葡萄糖酸洗必泰 25毫升

30％的核糖 12.5毫升

在37℃保温

设备：

色度计210(Minolta)

方法：

羟磷灰石片剂的制备

通过以约5900千克(13000Lbs)的压力将250毫克的羟磷灰石在片剂模具中压缩5分钟制备羟磷灰石片剂。然后在600℃将片剂烧结4小时，最后用无菌去离子水水合。

羟磷灰石片剂的灭菌

在180℃将HA片剂灭菌2小时，用灭菌的去离子水水合，置于Nunc试管(10毫升体积)的盖中。

牛牙齿的污染：

通过在37℃将牛牙齿浸于污染液A中，直到牙齿表面变成棕色从而污染所述的牙齿。

用薄膜污染HA片剂

将HA片剂浸于置于Nunc试管中的2毫升的污染液B中，在37℃，以10秒的间隔，以大约30°角旋转5秒钟。每隔24小时更换污染液。将HA片剂保温3天。

牙齿颜色的评估

定量的牙齿颜色的评估。

在酶处理之前和之后，在色度计210上检测牙齿和羟磷灰石片剂的颜色。色度计有3毫米直径的环状孔口，用于测定小区域的光学特性。色度计在颜色测定的CIE系统中提供了光学参数L^*，a^*和b^*的值。ΔL^*是处理之前和之后L^*的差异，它与整个亮度或暗度的变化有关。用下面的公式计算ΔE^*获得总的颜色差异。ΔL^*的高阳性值表示亮度。

E^{\cdot} = \sqrt{Δ L^{\cdot 2} + Δ a^{\cdot 2} + Δ b^{\cdot 2}}

应在牙齿在去离子水中显著保温(室温下至少15分钟)之后测定牙齿的颜色。用纸巾轻轻擦去牙齿表面的水并且测定颜色。

L^*：“0”＝黑色和“100”＝白色

漆酶活性(LACU)的测定

在好气条件下氧化丁香醛连氮而测定漆酶活性。在530纳米用分光光度计测定产生的紫色。分析的条件是19微摩尔的丁香醛连氮，23.2毫摩尔乙酸缓冲液，pH5.5，30℃，1分钟的反应时间。

1漆酶单位(LACU)是在这些条件下每分钟催化1.0微摩尔丁香醛连氮转化的酶的量。

过氧化物酶活性单位(POXU)的测定

测定以POXU/毫升表示的的过氧化物酶活性。1 POXU(过氧化物酶单位)定义为在存在1毫摩尔过氧化氢，pH7.0，40℃温度下氧化2，2’-连氮基双[3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸酯]的系统中每分钟催化1微摩尔过氧化氢转化的酶的量。

葡萄糖氧化酶活性(GODU)的测定

1 GODU定义为在标准条件下每分钟催化1微摩尔过氧化氢形成的酶的量。从Novo Nordisk A/S获得分析方法AF 266。

实施例1

用葡萄糖氧化酶(GOX)漂白外来的牙齿污迹

在37℃将牛牙齿浸于含有茶，咖啡，牛奶和唾液的污染液A中直到牙齿表面变成棕色，如材料和方法章节中描述的。并且用溶液A和B和缓冲液处理，如下文描述。

溶液A

溶液B

缓冲液

	酶	葡萄糖
	酶	葡萄糖		1	没有	没有(缓冲液)	50毫摩尔Britton-Robinson pH6.5
2	葡萄糖氧化酶50 GODU/毫升	500毫摩尔葡萄糖	50毫摩尔Britton-Robinson pH6.0	1	没有	没有(缓冲液)	50毫摩尔Britton-Robinson pH6.5

用Britton-Robinson缓冲液(pH6.5)制备两个样品。

一天之前制备葡萄糖溶液并且保持在4℃。

葡萄糖氧化酶来源于黑曲霉。

在试验之前各种溶液在37℃预保温15分钟。

将两个牙齿置于分别含有5毫升溶液A和5毫升溶液B的试管中，并且在37℃保温60分钟。利用小磁棒搅拌溶液。以这种方式分别用缓冲液和氧化酶+葡萄糖处理两种样品。处理重复3次。

在保温之后，轻轻地冲洗牙齿，并且按照材料和方法章节中的描述测定颜色。

试验结果显示于表1。

表1

	ΔL^*	ΔE^*
	ΔL^*	ΔE^*	缓冲液	-0.15	3.13
25 GODU/毫升葡萄糖氧化酶+250毫摩尔葡萄糖	0.74	1.80	缓冲液	-0.15	3.13

从表1可以看出，葡萄糖氧化酶能够漂白有外来污迹的牙齿。

实施例2

用L-氨基酸氧化酶漂白外来污染的羟磷灰石片剂

根据Stookey的方法外来污染羟磷灰石(HA)片剂(Stookey G.K.等人，“用洗牙水体外去除污迹”，J.Dent.Res.61，p.1236(1982))。

在37℃，以10秒的间隔，将如材料和方法章节中描述的灭菌的HA片剂(模拟人牙釉质的特性)浸于含有茶，咖啡，粘蛋白和藤黄微球菌的污染液B中5秒。将HA片剂保温3天。在污染之后，HA片剂空气干燥，用去离子水洗涤。

用在0.1摩尔柠檬酸钠缓冲液，pH8.5中制备的L-精氨酸溶液保温来自于没有过氧化氢酶活性的Trichoderma harzianum的色谱纯的L-氨基酸氧化酶。

通过在37℃，在0.5毫升总体积中用90往复振荡/分钟保温60分钟用所述L-氨基酸氧化酶溶液处理两种所述的污染的HA片剂。

如材料和方法章节中描述，用色度计测定光学参数L^*，a^*和b^*。

试验结果显示于表2。

表2

	ΔL^*	ΔE^*
	ΔL^*	ΔE^*	缓冲液	-0.17	0.30
6单位/毫升的L-氨基酸氧化酶+100毫摩尔L-精氨酸	1.04	1.07	缓冲液	-0.17	0.30

从表2可以看出，L-氨基酸氧化酶能够漂白有外来污迹的牙齿。

实施例3

用葡萄糖氧化酶漂白外来污染的羟磷灰石片剂

根据Stookey的方法污染羟磷灰石(HA)片剂(Stookey G.K.等人，“用洗牙水体外去除污迹”，J.Dent.Res.61，p.1236(1982))，并且用没有过氧化氢酶活性的黑曲霉的色谱纯的葡萄糖氧化酶处理，用在20毫摩尔Britton-Robinson缓冲液，pH6.0中制备的葡萄糖溶液保温。

通过在39℃，在10毫升总体积中用90往复振荡/分钟保温60分钟用所述L葡萄糖氧化酶处理一个污染的HA片剂。

试验结果显示于表3。

表3

	ΔL^*	ΔE^*
	ΔL^*	ΔE^*	缓冲液	2.18	2.97
500毫摩尔葡萄糖	1.80	1.84	缓冲液	2.18	2.97
500毫摩尔葡萄糖	1.80	1.84	10 GODU/毫升葡萄糖氧化酶+100毫摩尔葡萄糖	3.50	3.73
10 GODU/毫升葡萄糖氧化酶+500毫摩尔葡萄糖	3.62	3.62	10 GODU/毫升葡萄糖氧化酶+100毫摩尔葡萄糖	3.50	3.73
10 GODU/毫升葡萄糖氧化酶+500毫摩尔葡萄糖	3.62	3.62	50 GODU/毫升葡萄糖氧化酶+500毫摩尔葡萄糖	3.90	4.83
100 GODU/毫升葡萄糖氧化酶+500毫摩尔葡萄糖	5.05	5.63	50 GODU/毫升葡萄糖氧化酶+500毫摩尔葡萄糖	3.90	4.83

从表3可以看出，葡萄糖氧化酶能够漂白有外来污迹的牙齿。

实施例4

用漆酶漂白外来和内在的牙齿污迹

在37℃将牛牙齿浸于污染液(外来污迹)过夜，转移到污染液C(内在污迹)中并且在37℃保温直到牙齿表面变成棕色。

	溶液A酶	溶液B介体
	溶液A酶	溶液B介体	1	没有(缓冲液)	没有(缓冲液)
2	0.6 LACU/毫升漆酶	PTT 1000微摩尔	1	没有(缓冲液)	没有(缓冲液)

所有样品用50毫摩尔Britton-Robinson pH6.5制备

漆酶来源于Myceliophthora thermophila。

在试验之前，在37℃分别将溶液A和B预保温15分钟。

将两个牙齿置于分别含有5毫升溶液A和5毫升溶液B的试管中，并且在37℃保温60分钟。利用小磁棒搅拌样品。以这种方式分别用缓冲液和漆酶+PPT处理两种样品。各个样品的处理重复3次。

试验结果显示于表4。

表4

	ΔL^*	ΔE^*
	ΔL^*	ΔE^*	缓冲液	0.01	1.53
0.3 LACU/毫升的漆酶+500微摩尔PPT	2.67	2.78	缓冲液	0.01	1.53

从表4可以看出，漆酶能够漂白有内在污迹的牙齿。

根据前面公开的内容本领域的技术人员易于明白，在实施本发明时可以进行许多的改变和修饰而不脱离本发明的精神和范围。因此，基于下面的权利要求定义的内容构成了本发明的保护范围。

Claims

1.漆酶或儿茶酚氧化酶或胆红素氧化酶在制备用于漂白牙齿的口腔用组合物中的用途，所述组合物包含至少一种漆酶或儿茶酚氧化酶或胆红素氧化酶。

2.根据权利要求1所述的用途，其中漆酶来自于多孔菌、毁丝菌或小柱孢菌。

3.根据权利要求2所述的用途，其中所述多孔菌为盘斯特斯多孔菌，所述毁丝菌为嗜热毁丝菌，和所述小柱孢菌为嗜热小柱孢菌。

4.根据权利要求1所述的用途，其中口腔用组合物还包括选自氧化酶和过氧化物酶中的至少一种酶。

5.根据权利要求1所述的用途，其中基于口腔用组合物重量计算漆酶以0.0001％-20％的范围存在。

6.根据权利要求4所述的用途，其中基于口腔用组合物重量计算过氧化物酶以0.0001％-20％的范围存在。

7.根据权利要求4所述的用途，其中基于口腔用组合物重量计算氧化酶以0.0001％-20％的范围存在。

8.根据权利要求5至7任一项所述的用途，其中基于口腔用组合物重量计算漆酶或过氧化物酶或氧化酶以0.001％-10％的范围存在。

9.根据权利要求8所述的用途，其中基于口腔用组合物重量计算漆酶或过氧化物酶或氧化酶以0.01％-5％的范围存在。

10.根据权利要求1所述的用途，其中所述口腔用组合物基于最后的口腔用组合物重量计算含有0％-6％的过氧化物。

11.根据权利要求10所述的用途，其中所述口腔用组合物基于最后的口腔用组合物重量计算含有0％-3％的过氧化物。

12.根据权利要求11所述的用途，其中所述口腔用组合物基于最终的口腔用组合物重量计算含有0％-1％的过氧化物。

13.根据权利要求12所述的用途，其中所述口腔用组合物基于最终的口腔用组合物重量计算含有0％-0.5％的过氧化物。

14.根据权利要求13所述的用途，其中所述口腔用组合物基于最终的口腔用组合物重量计算含有0.1％-0.3％的过氧化物。

15.根据权利要求1所述的用途，其中所述组合物包括介体。

16.根据权利要求15所述的用途，其中所述介体为ABTS或PPT。

17.根据权利要求1所述的用途，其中所述一种或多种酶可作用于不是生踽的底物。

18.根据权利要求1所述的用途，其中所述一种或多种酶基本上在pH5.0-9.0时有活性。

19.根据权利要求18所述的用途，其中所述一种或多种酶基本上在pH6.0-8.5时有活性。

20.根据权利要求19所述的用途，其中所述一种或多种酶基本上在pH6.4-7.5时有活性。

21.根据权利要求1的用途，其中所述组合物是一种口腔护理产品。

22.根据权利要求21所述的用途，其中所述口腔护理产品是洗牙水。

23.根据权利要求21所述的用途，其中所述口腔护理产品是牙膏，牙粉，漱口液，预洗涤或牙齿清洁剂。

24.根据权利要求21-23任一项所述的用途，其中所述口腔护理产品包括抗噬菌斑化合物或组合物和/或抗结石剂化合物或组合物。

25.根据权利要求21-23任一项所述的用途，其中所述口腔护理产品包括至少一种选自于下列组的酶：蛋白酶、淀粉酶、葡聚糖酶、突变酶、脂酶和抗微生物多肽。

26.根据权利要求21-23任一项所述的用途，其中所述口腔护理产品包括漆酶和葡聚糖酶和/或突变酶。

27.根据权利要求21-23任一项所述的用途，其中所述口腔护理产品包括氧化酶和葡聚糖酶和/或突变酶。

28.根据权利要求21-23任一项所述的用途，其中所述口腔护理产品包括过氧化物酶和葡聚糖酶和/或突变酶。

29.用于漂白污染的或有污迹的牙齿的非治疗方法，包括a)将牙齿与权利要求1-28任一项所述的口腔用组合物接触。

30.在口腔中使用权利要求1-28任一项所述的口腔用组合物的非治疗方法，其中

(a)口腔中导入口腔用组合物，

(b)与牙齿和/或牙床接触一段时间，

(c)从口腔中去除，和

(d)任选地用液体洗涤。

31.根据权利要求30所述的非治疗方法，其中利用牙刷将牙齿与口腔用组合物接触。