CN1308229A - 平衡透析装置 - Google Patents
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Abstract
本发明的平衡透析装置由2n个透析池和n个透析膜(高分子膜、生物膜,或其他透析材料,如皮肤)组成,结构简单。本装置用于研究蛋白结合,测定化学或生物物质(如药物、农药、兽药、日化产品等)的蛋白结合:测定其对不同蛋白组成的结合差异;测定血浆中结合浓度与游离浓度的比例;以及在外用制剂或混合物研究中测定不同制剂在不同透析材料下的进行体外透过速率测定,以获得最佳制剂处方和工艺。
Description
本发明涉及一种新的平衡透析装置，其可用于蛋白结合实验，如测定物质的蛋白结合；测定物质对不同蛋白组成的结合差异；测定血浆中物质与蛋白结合浓度与游离浓度的比例，及在外用制剂或混合物研究中测定不同制剂或混合物在不同透析材料下的体外透过速率测定，以获得最佳制剂配比和工艺。
常规的平衡透析装置是透析袋形式，但透析袋在使用中通常有下列缺陷：(1)透析袋内实验样品液和透析袋外透析液不能定容，影响测定结果的一致性；(2)透析袋结扎不严，产生漏液，影响测定结果的可靠性；(3)透析袋不能多次采样，平衡透析的终点难以确定；(4)仅能进行蛋白结合实验，测定物质的蛋白结合率。因此开发克服上述缺陷的新的平衡透析装置是十分必要的。
本发明的目的是开发新的平衡透析装置。
经研究，发明人现已发现一种新的平衡透析装置，该装置由2n个透析池和夹在透析池之间的透析膜组成，其中n=1-10的整数。本发明的平衡透析装置克服了用透析袋透析时不能定容及漏液的缺点，且可进行多个样品的同时透析测定。测定血浆中结合浓度和游离浓度的比例，所得的透析结果有优良的可靠性和重现性，本发明基于上述发现得以完全。
本发明因此涉及一种新的平衡透析装置，该装置由2n个透析池和n个透析膜组成，其中n为1-10的整数。
更具体讲，本发明的平衡装置是n个由两个透析池和一个透析膜组成的单元透析装置组成，其中透析膜位于两个透析池之间，n为1-10的整数。
根据本发明，本发明平衡透析装置中的透析池用有机玻璃加工而成。本发明中透析膜选自高分子膜如纤维素膜或聚酰胺膜，生物膜或皮肤，透析膜的膜孔径小于0.05μm或能透过分子量小于10,000道尔顿的物质。
根据本发明，本发明透析装置的透析器池上方还可有一垂直的加样或采样孔。
根据本发明的一个优选实施方案，本发明的平衡透析装置由两个透析池和一片透析膜(或其他透析材料，如皮肤)组成，两池上方各有一垂直的加样和采样孔。
附图说明
图1表示例如由两个透析池和一个透析膜组成的本发明平衡透析装置的立体结构图，图2为例如由两个透析池和一个透析膜组成的本发明平衡透析装置的侧视图，图3为例如由两个透析池和一个透析膜组成的本发明平衡透析装置的俯透视图和图4为透析池的平面图。
根据本发明，本发明装置中的每个透析池体积为1-20ml。
本发明中所用术语“物质”指化合物，药物，提取物，混合物或含有化合物或混合物作为活性成分的制剂。
下面的实施例用于进一步说明本发明，但不意味着对本发明的任何限制。
实施例1．蛋白结合率测定
实验装置：本发明图1所示的平衡透析装置。
实验材料：
透析膜：纤维素膜，透过物质分子量不大于10000道尔顿(10KPa)。
磷酸盐缓冲液：pH7.2的1/15摩尔/升浓度的磷酸盐缓冲液。
人血浆蛋白液：人血浆蛋白溶液用1/15摩尔/升浓度的磷酸盐缓冲液配制，含精制的人血浆蛋白1％。
药物溶液：莫索尼定用人血浆蛋白溶液配制，三种浓度分别为100，500和1000ng/mL。
方法：透析膜以1/15摩尔/升浓度的磷酸盐缓冲液浸泡处理24小时，用蒸馏水洗净备用。将处理过的透析膜固定于A、B两透析池之间。A、B两透析池的容积为10ml。A池加入含药物的蛋白溶液，B池加入1/15摩尔/升浓度的磷酸盐缓冲液。然后放置于4℃的冰箱内，静置透析48小时，待平衡后测定B池的药物浓度，用下式计算其药物蛋白结合率：
PBR=[CT-CF/CT]×100％，
式中CT为加入到透析池A中的测定物质的总量，CT=Ct×Va，CF为所测定的游离物质总量，CF=Cf×(Va+Vb)，Va和Vb分别为透析池A和B的容积。Ct为测定前透析池A中待测物质浓度，Cf是所测定测试物质的游离浓度，为平衡后透析池A或B中游离物质的浓度，
测定结果如下：
| 加入药物的浓度 | 游离药物浓度 | 结合率 | 平均结合率 |
| 100ng/ml | 38ng/ml | 23.3％ | 24.6％ |
| 500 | 193 | 22.7％ | |
| 1000 | 358 | 27.9％ |
实施例2．霜剂的透过速率的测定
实验装置：附图图1所示的本发明平衡透析装置，
透析膜：纤维素膜，透过物质分子量不大于10000道尔顿(10KPa)。
磷酸盐缓冲液：pH7.2的1/15摩尔/升浓度的磷酸盐缓冲液。
霜剂：乙氧苯柳胺霜剂，含药物量为5％。
方法：
将待测定的上述霜剂填满图1所示透析装置的容积为10ml的透析池A，按实施例1方法所述处理过的透析膜复盖于该池上，然后放置透析池B，在四角螺孔中插入螺栓，并用螺母固定透析池和透析膜。透析池B加入新准备的pH7.2的1/15摩尔/升浓度的磷酸盐缓冲液10mL。然后将此装置置于25℃温室内，于放置后1,2,4,6,8,12小时采样10μL用液相色谱法测定透析池B中的游离物质浓度。结果如下：
| 时间 | 小时(hr) | 1 | 2 | 4 | 6 | 8 | 12 |
| 游离药物浓度 | (μg/mL) | 12.5 | 27.8 | 62.4 | 96.3 | 121.6 | 145.8 |
然后，可以以时间(h)为横坐标，游离浓度为纵坐标，绘制成浓度-时间曲线，经回归计算出透析速率常数，以确定物质的透析速度。
Claims (9)
1．一种平衡透析装置，其是由2n个透析池和n个透析膜组成，其中n为1-10的整数。
2．一种平衡透析装置，其是由n个由两个透析池和一个透析膜组成的单元透析装置组成，其中透析膜位于两个透析池之间，n为1-10的整数。
3．权利要求1或2的平衡透析装置，其中每个透析池上方还带有一垂直的加样或采样孔。
4．权利要求1或2的平衡透析装置，其中每个透析池体积为1-20ml。
5．权利要求1或2的平衡透析装置，其中透析膜选自高分子膜，生物膜或皮肤。
6．权利要求1或2的平衡透析装置用于测定物质的蛋白结合。
7．权利要求1或2的平衡透析装置用于测定物质对不同蛋白的结合。
8．权利要求1或2的平衡透析装置用于测定血浆中物质与蛋白结合浓度与游离浓度的比例。
9．权利要求1或2的平衡透析装置用于测定不同制剂或混合物在不同透析材料下的体外透析率。
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