CN1308002C - 三七总皂苷与曲扎芪苷的复方制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明是一种具有对血液循环、内分泌和肝脏及一些并发症具有医疗或保健价值的天然有效成分复方产品——三七总皂苷和曲扎芪苷的复方制剂及其制备方法。属药品、保健品领域。本发明复方制剂中本质含有25%～75%三七总皂苷有效成份，25%～75%曲扎芪苷(3＇-羟基白藜芦醇，4＇-O-β-D吡喃葡萄糖苷)有效成份，将其有效成分(或功能因子)进行超细化处理，其粒径为0.001～200μm；每一次的剂(用)量为含有效成分(或功能因子)50～200mg。

Description

三七总皂苷与曲扎芪苷的复方制剂及其制备方法

技术领域：本发明是一种具有对血液循环、内分泌和肝脏及一些并发症具有医疗或保健价值的天然有效成分复方产品——三七总皂苷和曲扎芪苷的复方制剂及其制备方法。属药品、保健品领域。

背景技术：血液是人体新陈代谢的载体，血液具有运输、保持内环境的相对稳定、及防御功能。血液出现问题，将会直接影响其功能的发挥。血液不断地在全身的血管中循环，血液与血管相互影响。因此，心血管系统的疾病，轻则影响人的新陈代谢，加快人体衰老；重则发生心肌梗塞、脑卒中等危重疾病。血糖和血脂往往相拌相生，共同对身体的循环系统造成损害。糖尿病是内分泌代谢性疾病，以高血糖作为其共同的主要指标。因对胰岛素敏感性降低、引起糖、蛋白质、脂肪三大物质和继发的水、电解质代谢紊乱。临床上出现烦渴、多尿、多饮、多食、疲乏、消瘦等表现。由于糖分解代谢障碍，引起能量低供应不足，使机体不得不动用脂肪甚至蛋白质来提供能量，脂肪、蛋白质分解不完全便产生大量如酮体之类的毒性中间代谢产物，随之引起各种急、慢性并发症。糖尿病作为一种终身性疾病，除了出现代谢紊乱症群外，其严重还在于其引发的各种并发症，如主动脉、冠状动脉、大脑动脉、肾动脉和肢体外周动脉等大、中动脉粥样硬化，糖尿病性肾病，视网膜、神经、皮肤病变，感染等。这些并发症是造成患者丧失劳动力、致残、致死的主要因素，其死亡率已排在肿瘤及心血管病之后，位居第三。目前全球已诊断的2型糖尿病达1.3亿人，我国已超过4000万人；21世纪2型糖尿病将在中国、印度等发展中国家流行，到2025年，全球糖尿病患者将突破3亿，我国糖尿病患者总数接近1亿，成为世界上糖尿病患者人数仅次于印度的第二大国。所以，糖尿病作为一种严重的非传染性慢性疾病，已成为世界各国关注的重大公共卫生问题。1991年6月27日，国际糖尿病联盟和世界卫生组织共同确定每年11月14日为“世界糖尿病日”，在全球范围内对糖尿病的防治进行广泛和宣传，说明该疾病对人类的危害的严重性和广泛性。高血脂是当今对人类健康造成危害最大，也是当今医药市场上销售最好的药物。

三七[panax Notogrnseng(Burk)F·H·Chen]又名参三七、田七、南方人参，是五加科人参属植物，其根、叶、花等均具有药用价值，主要含有三七总皂苷及其它物质。根据研究资料证实三七总皂苷能有效改善血液循环的血流动力学，降低血液粘度，降低血脂等为现在常用药物。芪类化合物白藜芦醇研究证实其对多种心脑缺血、血栓形成等血液循环障碍性疾病有较好的治疗作用。芪类化合物是近年研究开发较多，基础研究工作已在多领域展开，其中以白藜芦醇研究较为透彻，但亦因其含量低价格高难于实际应用。其他芪类化合物异土大黄苷(又称大黄降脂素)也有应用。3′-羟基白藜芦醇，4′-O-β-D吡喃葡萄糖苷(曲扎芪苷)是从民族药曲扎中分离提取出来的芪类化合物。曲扎在民间内服仅用于胃肠炎。芪类化合物已有较多的专利申请。三七总皂苷是活血化淤的药物，已有药物成品。尚未见该两种有效成分的复方研究报道。经研究发现该两种有效成分复方后，复方具有较好的调节血糖、调节血脂、保肝、改善血流动力学、抗氧化等综合作用，对糖尿病人、尤其是对拌有高脂血症的糖尿病人及其并发症将具有更好的作用。本品经过科学研究发现，三七总皂苷能改善血流动力学、改善血液质量、调节血糖、提高SOD酶的活性、防止血管炎症的发生，曲扎芪苷活血化淤、清除血管内自由基、抑制血小板激活因子、降血脂、降血糖等作用。三七总皂苷和曲扎芪苷虽然对心脑血管疾病等有一定的疗效，但其综合疗效有待提高、成本有待降低。两者互用可以互相协同，共同调节血液功能、治疗或改善因血液系统或心脑血管变化、内分泌失调等而引起的疾病或功能失调。

本发明的目的旨在提供一种本质由含有三七总皂苷和曲扎芪苷有效成分组成的复方制剂产品。

发明内容：复方制剂本质含有25％~75％三七总皂苷有效成份，25％~75％曲扎芪苷(3′-羟基白藜芦醇，4′-O-β-D吡喃葡萄糖苷)有效成份。复方制剂加药用辅料或食用辅料制成药品可接收(或食品可接收)的各种制剂形式。每一次的剂(用)量为有效成分(或功能因子)50～200mg。一般早晚用一次即可。为了提高药物活性、降低药物用量，做口服制剂时可将有效成分(活功能因子)进行超细化处理，其粒径0.001～200μm)。

该复方制剂的软胶囊产品，其溶剂基质为精炼米糠油、红花油、亚油酸、α-亚麻酸、γ-亚麻酸、多不饱和脂肪酸、小麦胚芽油、月见草油、紫苏油、沙棘油、亚麻籽油、深海鱼油、二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸、玉米油、葡萄籽油、沙蒿子油、核桃油、大豆油、花生油等植物食用或药用油中的一种或几种组成。该复方制刘的片剂和胶囊剂产品，辅料选用纤维素及其衍生物、聚甘露糖及其衍生物、车前子胶、木糖醇、山梨糖醇、乳糖醇、甘露醇、淀粉等食用或药用口服制剂辅料中的一种或几种组成。该复方的注射剂产品，其特征是辅料为甘露糖、甘露醇、木糖醇、山梨糖醇、乳糖醇、氯化钠、磷酸钠等难于被糖尿病人消化利用的供注射用的药用辅料或食用辅料。

该复方制剂的微囊剂产品，微囊的囊材可选用明胶、阿拉白胶、海藻酸盐、蛋白类、植物油、淀粉及其衍生物、羧甲基纤维素盐(SCMC)、邻苯二甲酸醋酸纤维素(CAP)、乙基纤维素(EC)、甲基纤维素(MC)、羟丙甲纤维素(HPMC)、聚酯、聚乙二醇(PEG)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚乙烯醇(PVA)、聚酰胺、聚乳酸中的一种或几种。

另外该复方制剂的口服制剂产品，为使产品达到人性化设计的目的可使用红花黄色素、红花红色素、胡萝卜素、番茄红素、叶黄素、叶绿素、苋菜红、亮黑等允许的药用或食用色素中的一种或几种；另外该复方的口服制剂产品，为使产品达到人性化设计的目的也可使用柠檬香、桔子香、香兰素、薄荷脑、麝香酮等允许的药用或食用香料中的一种或几种。

该复方制剂的软胶囊产品加工工序为：将复方药用气流粉碎或球磨粉碎等超细化处理，达到粒径小于200μm，将超细化的复方药加入溶剂基质中，充分搅拌、溶解、过滤、脱气，送至填充机上方的罐内，待用；同时准备好软胶囊充填机上方保温明胶罐中的胶皮用的明胶溶液，待用；在1万级、21℃～25℃、RH％：39～41％的条件下，开动旋转模压机压丸，把制成的软胶囊洗净，在28±2℃下干燥19～27小时，分装、包装即得成品。

该复方制剂的粉针剂产品加工过程为：在1万级的条件下，将合格的药物和辅料一起溶于注射用水中，经脱色等处理后，加入注射用水稀释至所需体积。过滤，滤液经过滤纸及0.4μm的滤膜粗滤等处理后，在100级的条件下，用0.2μm以下的滤膜过滤。精滤液送入分装机，按每支1~2ml分装，盖上带槽的盖子，送入冷冻真空干燥机，快速冷至~-40℃，2~3小时，逐步缓慢升温至~40℃(约需10小时)。塞紧盖子，取出制品，扎盖、包装、检验、合格的药用粉针成品。

该复方制剂的微囊加工工序为：为现有技术(一)凝聚法、(二)溶剂-非溶剂法、(三)复乳包囊法界、(四)面缩聚法、(五)辐射化学法、(六)喷雾干燥法、(七)喷雾冻结法、(八)空气悬浮法中的任何一种。

3′-羟基白藜芦醇，4′-O-β-D吡喃葡萄糖苷(曲扎芪苷)的分离提取：药材曲扎粗粉，用7、6、6倍量的95％乙醇分别回流提取3次，浓缩回收乙醇至无醇味，加入2倍量无盐水，用4、3、3倍量溶剂汽油提取分离(除去酯溶性大的成分)，水溶液部分用硅藻土简单脱色、喷雾干燥(进口温度85~100℃为出口温度为60~75℃)即得有效成分70％以上的产品。用硅胶柱分离，洗脱剂用甲醇∶氯仿＝3∶7洗脱，收接所需成分部分，浓缩、结晶、分离、干燥、收藏。

制备时不做成水溶液时的口服制剂用原料可用气流粉碎或球磨粉碎等超细化处理成粒径0.001～200μm的超细粉。

本发明三七总皂苷与曲扎芪苷复方制剂产品具有组方精练、质量易控制，其超细化原料使药物具有溶出快、生物利用度好的优点，本复方制剂具有调节血糖及糖尿病并发症、调节血脂、保肝、改善血流动力学、抗氧化等与上述功能有关的治疗或保健作用，本方案采用超细化和微囊化原料用于口服制剂，除增加其比表面积外，易与肠壁接触，加快人体的吸收，尽显特殊的药物功效。

具体实施方式：

实施例1  处方(1000粒)：

复方(曲扎芪苷∶三七总皂苷＝1∶1)(超细粉)    50g

红花油                                      300g

按技术方案实施即得每粒含药物50mg的软胶囊成品。

实施例2、处方(1000粒)：

复方(曲扎芪苷∶三七总皂苷＝2∶1)(超细粉)    100g

PEG-400                                     500g

按技术方案实施即得每粒含药物100mg的软胶囊成品。

实施例3、处方(1000粒)：

复方(曲扎芪苷∶三七总皂苷＝1∶2)(超细粉)    100g

α-亚麻酸                                   500g

按技术方案实施即得每粒含药物100mg的软胶囊成品。

实施例4、处方(1000粒)：

复方(曲扎芪苷∶三七总皂苷＝1∶3)(超细粉)    100g

月见草油                                    500g

羟苯乙酯                                    2g

香兰素                                      1g

按技术方案实施即得具有香味的每粒含药物100mg的软胶囊成品。

胶皮用苋菜红和亮黑调制成紫红色则可得紫红色的软胶囊。

实施例5  单凝聚法制备复方微囊

配方：曲扎芪苷                            50g

三七总皂苷                                100g

明胶                                      2000g

制备工艺：在10万级的条件下，将明胶溶成60000ml的明胶溶液，加入曲扎芪苷和三七总皂苷，搅拌均匀，用10％的醋酸调pH3.5~3.8，将反应器置于50℃水浴中保温搅拌45分钟。滴加硫酸钠溶液(稀释液)，在显微镜下观察至聚成囊为止，立即倒入搅拌着的稀释液中，待胶凝沉降后，倾去上清液，用稀释液洗涤2~3次，除去未凝聚的囊材。最后再将微囊混悬于适量稀释液中，加入37％甲醛溶液2000~3000ml，搅拌，滴加氢氧化钠调节pH至8~9，低温放置过夜，过滤，用水洗涤至无甲醛味，低温干燥即得。

实施例6  复凝聚法制备复方微囊剂

配方：曲扎芪苷                            80g

三七总皂苷                                80g

明胶                                      3000g

阿拉伯胶                                  4000g

制备工艺：在10万级的条件下，取适量阿拉伯胶与药物制成初乳，以3％阿拉白胶溶液100000ml稀释初乳成为O/W乳剂。另将明胶溶成100000ml的明胶溶液，用10％氢氧化钠调节pH至8，将两液反应器置于50℃水浴中保温搅拌45分钟。用10％醋酸液调节混合液至pH4.05，继续搅拌5分钟，以两倍体积的水稀释，放冷至28℃左右，然后转移到冰水浴中迅速冷却至10℃以下，加入37％甲醛溶2000~3000ml，搅拌，滴加氢氧化钠调节pH至7~8，继续搅拌3~4小时，低温放置过夜，过滤，用水洗涤至无甲醛味，低温干燥即得。

实施例7  溶剂-非溶剂法制备复方微囊剂，

配方：曲扎芪苷                        100g

三七总皂苷                            60g

醋酸纤维素丁酯                        5000g

丁酮                                  100000g

制备工艺：在10万级的条件下，将醋酸纤维素溶入丁酯，超细化的药物加入其中，把盛有反应液的反应器置于55℃水浴中加温搅拌45分钟。在搅拌情况下将非溶剂异丙醚缓慢加入，当发生凝聚相分离时即将混悬的芯材包成微囊。慢慢冷至室温，用离心法分离微囊，异丙醚洗涤，真空干燥即得所需的微囊。

实施例8  复乳包囊法制备复方微囊剂

配方：曲扎芪苷                        100g

三七总皂苷                            60g

乙基纤微素                            2000g

阿拉伯胶                              2500g

制备工艺：在10万级的条件下，将乙基纤微素溶入醋酸乙酯50000ml，在加入药物超细粉，得有机相(含适量邻苯二甲酸二正丁酯作增塑剂)。以5％阿拉白胶溶液50000ml，滴加分散在上述有机相中，形成W/O型乳剂。并进一步形成复乳。过滤，低温干燥即得微囊直径在50μm以下，多数为10μm左右。该微囊的内外层是阿拉伯胶膜，中间层是乙基纤微素膜。

实施例9  界面缩聚法制备复方微囊剂

配方：曲扎芪苷                        100g

三七总皂苷                            60g

羟乙基淀粉                            2000g

邻苯二甲酰氯                          100g

制备工艺：在10万级的条件下，将超细化的药物溶于30000ml的氯仿/环己烷中，加入Span85 1500g，滴加入20000ml羟乙基淀粉溶于的pH9.8的缓冲液中，乳化成W/O型乳状液。加入邻苯二甲酰氯搅拌30分钟，

进行交联反应，加环己烷稀释，离心、微囊分别用Tween-80的95％乙醇溶液、95％乙醇及水洗涤。抽干、低温干燥即得微囊。

实施例10  辐射化学法制备复方微囊剂

配方：曲扎芪苷                        70g

三七总皂苷                            90g

PVA                                   6000g

硬脂酸钙                              1000g

制备工艺：在10万级的条件下，将超细化的药物溶于40000ml的液体石蜡油中，将PVA溶入60000ml的水中，加入1000g硬脂酸钙作乳化剂，搅拌30分钟，形成W/O的乳剂，通入氮气，用⁶⁰Co辐射，剂量为10⁵伦琴/h，总剂量为3×10⁶~5×10⁸伦琴。将辐射后的乳浊液取出，超速离心破乳，倾去析出的液状石蜡，用乙醚和乙醇洗涤，抽干、真空低温干燥即得粉末状的微囊。

实施例11  喷雾干燥法制备复方微囊剂

配方：曲扎芪苷                        50g

三七总皂苷                            100g

乙基纤维素                            4000g

羟丙甲纤维素                          500g

制备工艺：在10万级的条件下，将超细化的药物溶于60000ml的乙基纤维素和羟丙甲纤维素的异丙醇溶液中，选择进口温度在80℃~100℃，出口温度在50℃~75℃。经喷雾干燥即得微囊。该微囊可直接压成片剂。

实施例12  喷雾冻结法制备复方微囊剂

配方：曲扎芪苷                        50g

三七总皂苷                            100g

聚异丁基丙烯酸酯                      7000g

硬脂酸                                适量

制备工艺：在10万级的条件下，将上述样品溶于30000ml的50％的乙醇和醋酸乙酯的溶液中，将此溶液喷射于高速搅拌的冰水之中，形成微囊自水中析出，抽干，低温干燥即得微囊。

实施例13  空气悬浮法制备复方微囊剂

配方：曲扎芪苷                        100g

三七总皂苷                            100g

乙基纤维素                            4000g

制备工艺：在10万级的条件下，将药物粉碎成直径为0.3~0.6mm作心材。置流化床中，用囊材溶液(将乙基纤维素，加60L二氯甲烷及适量环己烷至400L溶解，液温为20℃)沸腾包衣即得微囊。

实施例14  有香味的复方微囊剂

配方：曲扎芪苷                        100g

三七总皂苷                            100g

乙基纤维素                            4000g

PVA                                   1000g

桔子香料                              适量

制备工艺：在10万级的条件下，将药物和桔子香料溶于80000ml的乙基纤维素和PVA的异丙醇溶液中，选择进口温度在70℃~85℃，出口温度在45℃~60℃。经喷雾干燥即得有桔子香味的复方的微囊。该微囊可直接压成片剂。

实施例15  复方微囊剂药用制剂的制备(1000粒)

配方：实施例10所得复方微囊               100g

乳糖                                     15g

淀粉                                     120g

糊精                                     60g

PEG-2000                                 5g

制备工艺：照口服制剂制备通用方法，将上述处方量的原辅料进行制粒、整粒、干燥、压片或装胶囊即可得含复方微囊的片剂或胶囊剂。

实施例16  复方粉针剂的制备(1000支)

配方：曲扎芪苷                           40g

三七总皂苷                               60g

甘露醇                                   100g

制备工艺：在1万级的条件下，将药物和辅料加入注射用水1800ml中，并注意使其完全溶解，调节等渗，补加注射用水至2000ml。过滤，滤液经过滤纸及0.4μm的滤膜粗滤等处理后，在100级的条件下，用0.2μm以下的滤膜过滤。精滤液送入分装机，按每支2ml分装，盖上带槽的盖子，送入冷冻真空干燥机，快速冷至~-40℃，2~3小时，逐步缓慢升温至~40℃(约需10小时)。塞紧盖子，取出制品，扎盖、包装、检验、合格、的成品。可制得1000支复方药用粉针成品。

实施例18  复方药用粉针剂的制备(1000支)

配方：实施例8所得复方微囊(微囊＜10μm)    200g

甘露醇                                    190g

葡萄糖                                    50g

制备工艺：在100级的条件下，在注射用水3800ml中，加入甘露醇、葡萄糖，再加入药物微囊，补加注射用水至5000ml。在100级的条件下，过滤。精滤液送入分装机，按每支5ml分装，盖上带槽的盖子，送入冷冻真空干燥机，快速冷至~-35℃，2~3小时，逐步缓慢升温至~40℃(约需11小时)。塞紧盖子，取出制品，扎盖、包装、检验得合格的成品。可制得1000支复方微囊剂药用粉针成品。

功效：

一、活血化瘀作用

1 实验材料

1.1 药品与试剂

采用实施例3的复方软胶囊，内为黄色乳液，每粒含内容物0.6g，实验样品采用软胶囊药液，每ml重约为0.98g。试验时，将其用0.5％CMC-N_a配成0.06g/ml、0.03g/ml、0.015g/ml及0.0075g/ml浓度，为防止析出，现配现用。灯盏花素片，昆明制药股份有限公司生产；复方丹参片、阿斯匹林肠溶片，昆明友谊药厂；盐酸肾上腺素注射液，北京市永康药业有限公司。角叉菜胶(Type 1，C1013)，Sigma公司；ADP-2N_a，进口分装，上海奥博生化试剂公司，批号2001024；TT、PT、APTT及FIB测定试剂盒，四川迈克科技有限责任公司，批号020926、030108、021016、030120。

1.2 实验动物

雄性SD大鼠，清洁级，购自于昆明医学院动物房，合格证号：滇实动证第2001034号。昆明种小鼠，普通级，雌雄各半，由中国科学院昆明动物研究所动物房提供，合格证号：云动管9710号。

1.3 仪器

MCVS-2010型脑血管病检测系统，重庆天海医疗设备有限公司；C2000-4型高性能磁珠法四通道血凝仪及LBY-NS型四通道血小板聚集仪，北京普利生集团；LDZ-0.8医用离心机，北京医用离心机厂。

1.4 统计方法

正态分布数据用t检验，偏态分布数据用秩和(u)检验。

2 方法与结果

2.1 对大鼠血液粘度的影响

雄性SD大鼠60只，体重320～360g，随机分为5组，每组12只。正常对照组给予0.5％CMC-N_a10ml/kg，阳性对照给予灯盏花素片40mg/kg，复方分别给予0.15、0.3、0.6g/kg。各组动物按剂量每日灌胃给药一次，连续6天，给药容积均为10ml/kg。于末次给药后1h，腹腔注射40mg/kg戊巴比妥钠麻醉动物，颈动脉取血，用2.7％EDTA抗凝，全血与抗凝剂体积之比为9∶1。部份抗凝血用于测定全血粘度，部份以2000rpm离心后分离血浆测定血浆粘度。

实验结果表明：大鼠给予复方0.15、0.3、0.6g/kg，可显著降低200-30S^-1切变率下的全血粘度和全血还原粘度，并能明显缩短红细胞电泳时间，但对红细胞压积和血浆粘度无明显影响，其作用强度有剂量依赖性。

2.2 对大鼠血凝及血小板聚集的影响

雄性SD大鼠75只，295～360g，随机分为5组，每组15只。剂量分组及给药方法同前。于末次给药后1h，腹腔注射戊巴比妥钠40mg/kg麻醉后，颈动脉插管取血，用3.8％枸椽酸钠抗凝，全血与抗凝剂体积之比为9∶1。1000rpm离心5min制备富血小板血浆(PRP)，3500rpm离心10min制备贫血小板血浆(PPP)。按比浊法测定ADP-2N_a诱导的血小板聚集率，ADP的终浓度为6mol/l；按试剂盒方法分别测定TT、PT、APTT及FIB。

实验结果表明：复方能明显延长TT及APTT时间，作用呈剂量依赖关系；对由ADP诱导的血小板聚集，高剂量组具有明显抑制作用，而中低剂量组仅有作用趋势。

2.3 对小鼠实验性微循环障碍的影响

取18.5～24.5g小鼠60只，雌雄各半，按性别和体重随机分为6组，每组10只。实验室温度保持在25±1℃。各组动物每日按剂量灌胃给药一次，连续3天。末次给药后30分钟，以10％乌拉坦0.15ml/10g体重腹腔注射麻醉动物，固定耳廓，置于放大240倍的微循环显微仪下，以合适的毛细血管(动、静脉平行，为第三级分支)为观察对象，按0.1mg/kg的剂量给小鼠腹腔注射盐酸肾上腺素造成实验性微循环障碍，分别采集造型前、造型后5、10、15及20分时的图象，测定以下四个指标：①血液流态(流态分5级：停滞为0分；粒流为1分；粒线流为2分；线粒流为3分；线流为4分)；②微动脉管径(A₃)；③微静脉管径(V₃)；④毛细血管网计数。观察并记录各项指标的变化情况，以各组给药前后的变化值进行组间u检验。

实验结果表明，复方能明显增加盐酸肾上腺素所致实验性微循环障碍小鼠的微动脉及微静脉管径，表明其具有明显改善微循环的作用。

2.4 对小鼠体内血栓形成的影响

20～22g昆明种小鼠70只，雌雄各半，按性别和体重随机分为7组：复方0.15、0.3、0.6g/kg三剂量组；阳性对照阿斯匹林100mg/kg组；灯盏花素片60mg/kg组；复方丹参1.0g/kg组；空白对照组；每组10只。各组均按20ml/kg容积灌胃给药，每日一次，连续8天。第5日灌胃后30分钟，各组小鼠均背部皮下注射1％角叉菜胶40mg/kg，72h后，观察尾部血栓形成，测定尾部全长及血栓形成长度，用尾部血栓形成长度除以总长计算得出血栓形成长度的百分数。结果见下表

二、降血糖作用

1 实验材料

1.1 药品与试剂

采用实施例4的软胶囊，每粒含内容物0.64g，实验样品采用灌装胶囊原液。试验时，用0.5％CMC-N_a将其配成0.06g/ml、0.03g/ml、0.015g/ml及0.0075g/ml浓度，为防止析出，现配现用。消渴丸、盐酸肾上腺素注射液、葡萄糖、四氧嘧啶市购产品。血糖、总胆固醇及甘油三脂测定试剂盒，糖化血清蛋白测定试剂盒。

1.2 动物

组别	剂量(/kg)	动物数(只)	血栓长度百分数(X±SD％)
				0.5％CMC-Na	20ml	10	37.34±24.18
阿斯匹林	100mg	10	2.56±4.14**
				灯盏花素片	60mg	10	5.51±6.46**
复方丹参片	1.0g	10	6.58±9.99
				复方	0.15g	10	10.11±6.34**
	0.3g	10	5.05±7.45**
				0.6g	10	2.55±4.59**

与空白对照组相比：*P＜0.05，**P＜0.01

实验结果表明：复方和各阳性对照组对角叉菜胶诱发的小鼠尾部血栓形成有显著抑制作用。且实施例的复方具有很好的量效关系。

实验动物采用普通级昆明种小鼠，来源于中国科学院昆明动物研究所动物房，合格证号：云动管9712号。

1.3 仪器

721分光光度计，上海第三分析仪器厂；LDZ-0.8医用离心机，北京医用离心机厂。

2 方法与结果

2.1 对正常小鼠血糖的影响

选18～20g小鼠50只，雌雄各半，按性别和体重随机均分为5组：对照组；消渴丸2.5g/kg组；实施例4组0.3、0.6、1.2g/kg三剂量组。各组小鼠每日上午空腹按剂量分别灌胃给药1次，对照组给予0.5％CMC-N_a 20ml/kg，连续7天。末次给药后禁食12小时，于第8日晨眼眶静脉取血，分离血清，用葡萄糖氧化酶法^[1]测定空腹血糖值，t检验比较组间差异的显著性。结果见下表。

组别	剂量(/kg)	动物数(只)	血糖浓度(X±SD，mmol·L-1)
				0.5％CMC-Na	20ml	10	8.45±1.58
消渴丸	2.5g	10	6.34±1.12*
				实施例4	0.3g	10	8.47±1.14
	0.6g	10	8.47±1.66
				1.2g	10	7.68±1.75

与对照组相比，^*P＜0.01

实验结果表明，实施例4三个剂量连续灌服7天，对正常小鼠血糖水平无明显影响。

2.2 对小鼠葡萄糖性高血糖的影响

选20～22g小鼠77只，雌雄兼用，按性别和体重随机分为7组，每组11只：空白组、模型组、消渴丸组及实施例4剂量组。各组动物于每日上午空腹灌胃给药一次，对照组给予0.5％CMC-N_a20ml/kg，连续8天。末次给药前禁食12小时，末次后30分钟，除空白对照组腹腔注射生理盐水20ml/kg外，其余各组均腹腔注射12.5％葡萄糖溶液20ml/kg，30min后取血测定血糖浓度。结果见下表。

组别	剂量(/kg)	动物数(只)	血糖浓度(X±SD，mmol·L-1)
				0.5％CMC-Na	20ml	11	9.87±2.17*
模型	20ml	11	30.19±6.88
				消渴丸	2.5g	11	18.56±8.02*
实施例4	0.15g	11	24.51±12.03
					0.3g	11	21.99±6.03*
0.6g	11	19.98±4.90*
			1.2g		11	18.96±3.75*

与模型组相比，^*P＜0.01

实验结果表明，实施例4：0.3、0.6、1.2g/kg连续口服8天，对葡萄糖所致小鼠血糖升高有显著降低作用：0.15g/kg仅有作用趋势。

2.3 对小鼠肾上腺素性高血糖的影响

选20～22g小鼠84只，雌雄各半，按性别和体重随机分为7组，每组12只。剂量分组及给药方法同前。末次给药前禁食12小时。末次给药后30分钟，除空白对照组腹腔注射生理盐水20ml/kg外，其余各组均腹腔注射盐酸肾上腺素0.2mg/kg。30分钟后取血，分离血清测定血糖值。结果见下表。

组别	剂量(/kg)	动物数(只)	血糖浓度(X±SD，mmol·L-1)
				0.5％CMC-Na	20ml	12	5.57±1.48**
模型	20ml	12	12.01±1.81
				消渴丸	2.5g	12	9.56±2.28**
实施例4	0.15g	12	9.84±1.76**
					0.3g	12	9.37±2.39**
0.6g	12	9.55±2.70*
			1.2g		12	10.45±2.27

与模型组相比：^**P＜0.01；^*P＜0.05

实验结果表明，实施例4：0.15、0.3、0.6g/kg连续口服8天，可明显对抗小鼠肾上腺素性高血糖，但大剂量组只有降糖趋势而无统计学差异。

2.4 对四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖、血脂及糖化血清蛋白的影响

取22～24g小鼠84只，雌雄各半，按性别和体重随机分为6组，每组14只：空白、模型、消渴丸及实施例4三个剂量组。各组动物禁食不禁水24h后，分别按剂量灌胃给药，30分钟后，除正常对照组腹腔注射生理盐水20ml/kg外，其余各组均以200mg/kg的剂量腹腔注射四氧嘧啶的生理盐水溶液。造型后每日晨空腹灌胃一次，连续21天。末次给药前禁食12h，给药后30分钟眼眶静脉取血，分离血清，按试剂盒方法测定血糖、总胆固醇、甘油三脂及糖化血清蛋白浓度。

实验结果表明：实施例4各剂量组均对四氧嘧啶糖尿病小鼠模型血糖、甘油三脂及糖化血清蛋白有不同程度的降低作用，但对血清总胆固醇无明显影响。

三、超细化和微囊化原料的优点

超细化原料使药物具有溶出快、生物利用度好的优点。苷类化合物均存在生物利用度普遍不好的缺点。研究表明它们组合后，尤其是进行微囊化后均比普通的单一成分的口服制剂具有较好的生物利用度，与普通片剂相比，本品的生物利用度可提高20-46％，较高的药物活性和靶向性，能达到延释的作用，并能改变药物对胃肠道刺激等不良反应。本方案采用超细化和微囊化原料用于口服制剂，除增加其比表面积外，易与肠壁接触，加快人体的吸收，尽显特殊的药物功效。

四、试用结果

1、对62例冠心病患者随机分组，进行治疗前后观察对比。组间对照实验，结果表明服用实施例15制得的样品治疗冠心病效果显著，总有效率达88.4％，与对照组复方丹参胶囊相比，具有显著性差异。此外，本品还可以降低血清总胆固醇、甘油三脂，降低血液黏度，改善微循环。

2、32例患有肝炎的病人，用实施例3制得的软胶囊，每日3次，每次1粒，口服使用30天后，患者自觉症状有明显的改善，经医院检验化验结果表明患者的血象、肝功能均有很好的转变。

Claims (10)

1、三七总皂苷与曲扎芪苷复方制剂，其特征在于复方制剂中本质含有25％~75％三七总皂苷有效成份，25％~75％曲扎芪苷3’-羟基白藜芦醇，4’-O-β-D吡喃葡萄糖苷有效成份。

2、根据权利要求1所述的三七总皂苷与曲扎芪苷复方制剂，其特征是将其有效成分或功能因子进行超细化处理，其粒径为0.001～200μm。

3、根据权利要求1或2所述的三七总皂苷与曲扎芪苷复方制剂，其特征是每一次的剂用量为含有效成分或功能因子为50～200mg。

4、根据权利要求1或2所述三七总皂苷与曲扎芪苷复方制剂，其特征曲扎芪苷3’-羟基白藜芦醇，4’-O-β-D吡喃葡萄糖苷的制备方法是药材曲扎粗粉，用7、6、6倍量的95％乙醇分别回流提取3次，浓缩回收乙醇至无醇味，加入2倍量无盐水，用4、3、3倍量溶剂汽油提取分离，除去酯溶性大的成分，水溶液部分用硅藻土简单脱色、喷雾干燥，其进口温度85~100℃，出口温度为60~75℃，即得有效成分70％以上的曲扎芪苷，再用硅胶柱分离，洗脱剂用甲醇∶氯仿＝3∶7洗脱，收接所需成分部分，经浓缩、结晶、分离后，得干燥曲扎芪苷粉。

5、根据权利要求1或2所述的三七总皂苷与曲扎芪苷复方制剂，其特征是复方制剂使用药用辅料或食用辅料，制成药品可接受或食品可接受的制剂形式。

6、根据权利要求5所述三七总皂苷与曲扎芪苷复方制剂，其特征在于复方制剂为软胶囊，溶剂基质为精炼米糠油、红花油、亚油酸、α-亚麻酸、γ-亚麻酸、多不饱和脂肪酸、小麦胚芽油、月见草油、紫苏油、沙棘油、亚麻籽油、深海鱼油、二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸、玉米油、葡萄籽油、沙蒿子油、核桃油、大豆油、花生油植物食用或药用油中的一种或几种组成。

7、根据权利要求5所述三七总皂苷与曲扎芪苷复方制剂，其特征是复方制剂为片剂或胶囊剂，辅料为纤维素、聚甘露糖、车前子胶、木糖醇、山梨糖醇、乳糖醇、甘露醇、淀粉食用或药用口服制剂辅料中的一种或几种组成。

8、根据权利要求5所述三七总皂苷与曲扎芪苷复方制剂，其特征是复方制剂为注射剂，辅料选自甘露糖、甘露醇、木糖醇、山梨糖醇、乳糖醇、氯化钠、磷酸钠难于被糖尿病人消化利用的供注射用的药用辅料或食用辅料。

9、根据权利要求5所述三七总皂苷与曲扎芪苷复方制剂，其特征是复方制剂为微囊剂，所述微囊的囊材为明胶、阿拉伯胶、海藻酸盐、蛋白类、植物油、淀粉、羧甲基纤维素盐、邻苯二甲酸醋酸纤维素、乙基纤维素、甲基纤维素、羟丙甲纤维素、聚酯、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚酰胺、聚乳酸中的一种或几种。

10、根据权利要求5所述三七总皂苷与曲扎芪苷复方制剂，其特征是复方制剂为口服制剂，使用红花黄色素、红花红色素、胡萝卜素、番茄红素、叶黄素、叶绿素、苋菜红、亮黑药用或食用色素中的一种或几种，或者使用柠檬香、桔子香、香兰素、薄荷脑、麝香酮药用或食用香料中的一种或几种。